CN1063615A

CN1063615A - 放射性药物制剂，其给药方法及制备方法

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Publication number: CN1063615A
Application number: CN91104343A
Authority: CN
Inventors: 杰姆·西蒙; 约瑟福·R·加里齐; 阿·凯思·佛朗克; 克尼斯·慕克米兰
Original assignee: Dow Chemical Co
Current assignee: Dow Chemical Co
Priority date: 1990-06-18
Filing date: 1991-06-17
Publication date: 1992-08-19
Anticipated expiration: 2006-06-17
Also published as: US5762907A; CA2044812A1; FI912933A0; CA2044812C; IS3717A7; CS184291A3; SA92120343B1; ATE123955T1; JP3636728B2; DK0462787T3; PL290717A1; HU226897B1; PL165699B1; NO302510B1; SK279598B6; KR100219964B1; FI101044B; IL98536A0; RU2095085C1; CN1033143C

Abstract

制备络合物的放射性药物制剂的方法，包括至少一个放射性核素与一个配体或其药用盐络合，特别是钐¹⁵³-乙二胺四亚甲基膦酸，其可以加入二价金属离子，如钙，随后将放射性络合物冷冻，并在给动物注射前解冻。另外一个制备含络合物的放射性制剂的方法包括：至少一个放射性核素与一个配体或其药用盐络合，特别是钐¹⁵³-乙二胺四亚甲基膦酸，其含有二价金属离子，如钙。

Description

本发明涉及放射性药物制剂、其给药方法和制备方法。放射性药物制剂在动物的各种疾病，尤其是癌症的治疗和/或诊断治疗中有多种应用。

骨转移是癌症病人常发生的恶性病变。这些转移性骨损害所引起的疼痛、病理性骨折、常见的神经缺损和被迫的静卧严重地降低了癌症病人的体质。患转移性疾病的人数很多，因为患乳腺、肺或前列腺癌症的病人约有50%最终发生骨转移。肾癌、甲状腺癌、膀胱癌、宫颈癌及其它癌症患者也常发生骨转移，总的说，少于20%的这类病人发生骨转移。转移到骨的癌很少危及生命，发现骨损害后，有时病人可活几年，最初，治疗目标在于减轻疼痛，从而减少对麻醉药的需要并增加活动。显然，希望某些癌症可被治愈。

本发明的制剂中所用的放射性药物以其金属配体络合物的形式制备，特别是以美国专利4，898，724中所述的钐-153-乙二胺四亚甲基膦酸（“¹⁵³Sm-EDTMP”）的形式。¹⁵³Sm-EDTMP，特别是其药物制剂可用来减轻骨痛和钙化肿瘤的治疗。其用途和制备见美国专利4，898，724，加拿大专利1，243，603和公开的欧洲专利申请164，843。放射性药物作为骨髓抑制剂的其它应用见美国专利4，853，209，这些参考文献均记叙了本发明的放射性药物，尤其是¹⁵³Sm-EEDTMP可与适宜的药用载体配制。

当使用放射性药物时，所关心的问题是制剂中有机分子的辐射降解强度，其可改变放射性同位素的生物分布或导致毒副产物。这二者都是不希望存在的。当需要大量放射性时，对于有机分子（如：EDTMP）的辐射损伤强度增大。当使用治疗用放射性核素（如：¹⁵³Sm）时，更容易发生这种降解，其用于释放高辐射剂量。

试图防止辐射作用的一种方法为往制剂中加自由基抑制剂。然而抑制剂或其降解产物可能有毒或干扰放射性药物的生物分布。抑制剂如苄醇的使用在下列文献中讨论：

H.Ikebuchi et al.，Radioisotopes 26（7），451-7（1977;

B.J.Floor et al.，J.Pharm.Sci.74（2），197-200（1985）;

和A.Rego et al.，J.Pharm.Sci.71（11），1219-23（1982）。

放射性药物制剂（见美国专利4，898，724和公开的欧洲专利申请164，843）的另一个关心的问题是使用相对于金属量摩尔过量的配体（如：EDTMO）。当大量金属离子（如：Sm⁺³）注入体内时，则需要更大量的自由的螯合剂（如：EDTMP）也注入体内，过量配体的存在可用来络合血流中的金属离子，否则其可能导致病人的综合症。因此需要制剂含有少量的自由螯合剂。

使用放射性药物另一个关心的问题是注射方式。一般，所有这类放射性药物都是静注给药（I.V.）。当静注时，病人会感到不适，有时很难从病人身上找到适于注射的静脉。

因此，需要放射性药物制剂在使用前辐射作用少，可经多种途径注射，并避免过量的自由（未络合的）的配体。

附图如下述说明辐射作用：

图1表明具有¹⁵³Sm 100mCi/ml比放射性的EDTMP分别在有5%醇（“EtOH”;+）存在下，0.9%苄醇（“BzOH”;◇）存在下，冷冻（△）和对照（

）情况下的辐解作用。

图2表明未抑制的EDTMP在不同的¹⁵³Sm比放射性，

100mCi/ml;+50mCi/ml，30mCi/ml;△30mCi/ml时的辐解作用。

令人惊奇的发现，一种改进的放射性药物制剂，特别是¹⁵³Sm-EDTMP，可降低EDMP的辐解作用而不改变放射性药物的作用。适用于本发明制剂的放射性药物包括至少一个放射性核素与一个配体或其药用盐络合所形成的络合物。

适用的放射性核素例如有钐-153（¹⁵³Sm），钬-166（¹⁶⁶Ho），镱-175（¹⁷⁵Yb），镥-177（¹⁷⁷Lu）钇-90（⁹⁰Y）或钆159（¹⁵⁹Gd）。特别优选的放射性核素为¹⁵³Sm和¹⁶⁶Ho，¹⁵³Sm最优选。

适宜的配体有：乙二胺四亚甲基膦酸（“EDTMP”），二亚乙基三胺五亚甲基膦酸（“DTPMP”），羟乙基乙二胺三亚甲基膦酸（“HEEDTMP”），次氮基三亚甲基膦酸（“NTMP”）三（氨乙基）胺六亚甲基膦酸（“TTHMP”），1-羧乙二胺四亚甲基膦酸（“CEDTMP”），双（氨乙基哌嗪）-四亚甲基膦酸（“AEPTMP”），和1，4，7，10-四氮杂环十二烷基四亚甲基膦酸（“DOTMP”）及其药用盐。特别优选的配体为EDTMP，DTPMP，HEEDTMP，TTHMP，AEPTMP CEDTMP和DOTMP，而EDTMP最优选。本发明特别优选的放射性药物为¹⁵³Sm-EDTMP及其药用盐。

本发明的制剂可含有二价金属离子，每1摩尔不影响放射性药物络合物形成的配体带0.25-5摩尔的二价金属离子，在放射性核素之前加二价金属离子时，制剂不需冷冻，直到加入放射性核素，要求在放射性药物形成和使用之间有一定的时间间隔。

还发现，当使用本发明的放射性药物制剂时，不需要静注（“IV.”）来达到所需的放射性核素的生物分布。进而，当需要或必须时，腹内（“I.P.”），皮下（“S.C.”）或肌内（“I.M.”）注射可提供类似的生物分布。

本发明的含有二价金属的放射性药物制剂可减少进入哺乳类血流中自由（未络合的）配体（如：EDTMP）的量。该二价金属配体络合物减少了血中其它被配体螯合的金属（如：钙）。因此过量配体的毒害作用被减少。但是，二价金属必须不干扰放射性药物络合物（如：¹⁵³Sm-EDTMP）的形成。适宜的二价金属为Fe⁺²和Mn⁺²及碱土金属，如：Mg⁺²，Ca⁺²，Sr⁺²和Ba⁺²。而Ca⁺²最为优选。如此制备的放射性药物制剂，每1摩尔配体需0.25-5摩尔二价金属，特别优选0.5-3摩尔。更优选0.5-1摩尔，更优选0.75-1摩尔，最优选0.9-1摩尔。

有几种方法制备二价金属放射性药物制剂。一种方法（方法A）为制备二价金属制剂，将其加到放射性的金属-配体络合物中。放射性的金属-配体络合物可被冷冻，随后解冻加二价金属，如需要可再冷冻，用前解冻。第二种方法（方法B）为将二价金属加到放射性金属离子溶液中，随后加配体形成络合物，如需要将该制剂冷冻，因为加配体后会发生辐射作用，如果使用前需要贮存一段时间，则需冷冻。第三种方法为将放射性药物（其可是冷冻的，用时解冻）与二价金属离子溶液（如葡糖酸钙）合并给药，几乎同时给病人分别静注。第四种方法也是较优选的方法（方法D）为将二价金属以其氯化物或更优选地以氢氧化物的形式加到配体中，随后调pH值，例如用氢氧化钠（“NaOH”）调，可将溶液冷冻干燥形成二价金属-配体冻干制剂（药包）。放射性金属离子的酸性溶液用来重配药包得到具有所需pH的适用的放射性药物制剂。制备放射性药物制剂的任何方法所关切的间歇是所用的放射性核素的半衰期，（如：¹⁵³Sm t1/2＝约46小时）。所关切的另一问题是放射性核素在含有配体的溶液中的时间长短。放射性核素在含有配体的溶液中的放射活性和时间将决定放射性药物制剂需要冷冻的程度。

在优选方案（方法D）中所制备的药包每1当量的配体有约1当量的二价金属。同时，二价金属-配体溶液可冷冻干燥，当其用核素溶液重组时，与放射性金属离子形成定量的络合物，pH为7-8.5。当使用大剂量的配体时，通常具有更高剂量的放射性核素，则优选二价金属制剂，尤其用于骨髓部分切除术。

因此，含有配体，如EDTMP和二价金属的药包以下列方式冷冻干燥，即将预先定量的放射性核素溶液加到浓度适宜的HCl中（优选约0.001到1N HCl，或更优选约0.01到0.1N盐酸）其将导致定量的放射性核素-配体络合物，如：Sm-EDTMP，所得的pH为7到8.5。对于放射性药物制剂¹⁵³Sm-EDTMP，优选的EDTMP浓度为35mg/ml而优选的Sm浓度为3×10^-4M（如：约278：1EDTMP：Sm）。

本放射性药物制剂，特别是¹⁵³Sm-EDTMP制剂，有或无二价金属存在时，可冷冻以减少配体的辐射作用，用前解冻。可按任意方便的方法进行冷冻，其包括产品的灭菌（如用液氮或干冰），当制剂需要使用时，可以解冻。

本制剂的给药途径可以在I.V.，I.P.，S.O.或I.M.中选择。本放射性药物制剂各种注射途径给药的生物分布结果相似。

目前已发现制备放射性药物，尤其是¹⁵³Sm-EDTMP的改进方法，其减少了配体的辐射作用而不改变放射性药物的作用。适用于本发明该制剂的放射性药物包括含有至少一个放射性核素与一个配体络合形成的络合物，或其药用盐。

适宜的放射性核素例如有钐-153（¹⁵³Sm），-166（¹⁶⁶Ho），镱-175（¹⁷5Yb），镥-177（¹⁷⁷Lu），钇-90（⁹⁰Y）或钆-159（¹⁵⁹Gd）。特别优选的放射性核素为¹⁵³Sm和¹⁶⁶Ho，而¹⁶³Sm最为优选。

适宜的配体例如有乙二胺四亚甲基膦酸（“EDTMP”），二亚乙基三胺五亚甲基膦酸（“DTPMP”），羟乙基乙二胺三亚甲基膦酸（“HEEDTMP”），次氮基三亚甲基膦酸（“NTMP”），三（2-氨乙基）胺-六亚甲基膦酸（“TTHMP”），1-羧乙二胺四亚甲基膦酸（“CEDTMP”），双（氨乙基哌嗪）四亚甲基膦酸（“AEPTMP”），和1，4，7，10-四氮杂环十二烷四亚甲基膦酸（“DOTMP”），及其药用盐。特别优选的配体有：EDTMP，DTPMP，HEEDTMP，TTHMP，AEPTMP，CEDTMP和DOTMP，而EDTMP特别优选。用于本发明的特别优选的放射性药物为¹⁵³Sm-EDTMP及其药用盐。适用的药用盐在美国专利4，898，724中有述，其包括这些碱的酸加成盐，其与所用配体的至少一个酸基形成盐。当以能产生良好药理作用的剂量给动物用药时，将不产生显著的副作用。适宜的碱包括，例如：碱金属和碱土金属氢氧化物，碳酸盐，和碳酸氢盐如氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化钙，碳酸钾，碳酸氢钠，碳酸镁，氨水，伯，仲，叔胺。这些药用盐可通过将酸与适宜的碱接触制备。

定义

Sm＝钐，有或无放射性的所有同位素。（与本发明的其它放射性核素相似）。

¹⁵³Sm＝原子量为153的钐的放射性同位素。（与本发明的其它放射性核素类似）。

EDTMP＝乙二胺四亚甲基膦酸

¹⁵³Sm-EDTMP＝¹⁵³钐-乙二胺四亚甲基膦酸于溶液中的络合物，其含有放射性的和非放射性钐的同位素。

示踪的（splke）＝加0.5到1picoCi¹⁵³SmCl₃或¹⁶⁶HoCl₃溶液作为示踪剂。

放射性药物＝诊断和/或治疗的放射性药物，通常为含有放射性金属离子（如：¹⁵³Sm）在水溶液中与有机配体（如：EDTMP）相接形成的溶液。

药包＝含有固体配体制剂的小瓶，其含有二价金属离子，往其中加放射性金属离子溶液，以形成放射性金属-配体络合物。

X-ml药包＝设计用来盛装X-ml放射性金属离子溶液，以形成放射性核素-配体络合物的药包。

重组＝往药包制剂中加酸性放射性核素溶液，以形成放射性核素-配体络合物。

TBA＝四丁基铵氢氧化物

BzOH＝苄醇

EtOH＝乙醇

%＝百分比

HCl＝盐酸

NaOH＝氢氧化钠

I.V.＝静脉注射

I.P.＝腹内注射

I.M.＝肌内注射

S.C.＝皮下注射

MDP＝亚甲基二膦酸盐

一般实验

用阳离子交换层析分离法测定络合物产率，该方法在美国专利4，898，724中叙述。

HPLC＝高效液相层析;所用的柱为Hamilton^TMPRP-1反相柱，洗脱液为0.1M醋酸钠和0.005M TBA。流速为1ml/min;用放射性检测器和U.V.（紫外）检测器（240nm）偶联检测。

按美国专利4，937，333和公开欧洲专利申请411，941中的方法;制备适用做药物的残品EDTMP。

¹⁵³Sm从University of Missouri，Columbia MO的研究反应器中得到。

Barnstead NANO pure^TM水用作蒸馏水。

Ca（OH）₂为MCB或Aldrich的二水合物，95%纯度。

无特别指出的所有试剂为市售的，可直接使用。

本发明可通过下列实例进一步说明，其目的仅在于为本发明举例。

实例1：方法A，不加钙。

制备3ml的8×10^-2M EDTMP溶液，Sm为3×10^-4M。比放射性为每ml 100mCi的¹⁵³Sm。将三份200μL（样品Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ）的样品置于塑料小瓶中，用干冰-丙酮浴冷冻，塑料小瓶保持在冷冻剂中，另将500μL的样品置于玻璃小瓶中，并加4.3μL的苄醇，得到0.9%（重量/体积）的溶液（样品A）。另外500μL的样品置于玻璃小瓶中，加31.8μL的乙醇，得到5%（重量/体积）的溶液（样品B）。

溶液经高效液相分析，测定降解对时间的函数关系，放射性层析中无-Sm-EDTMP峰出现证实了降解。进行该时间研究时，一只冷冻的塑料小瓶在常温下解冻，对一份样品进行分析，溶液不经冷冻放置2到4小时，对溶液再次分析，其它两个塑料小瓶以类似方式用来在更长的时间间隔时得到数据。

结果表明冷冻样品在60小时之间相应于所需的产品只有一个放射峰。对照（非抑制的样品）和苄醇及乙醇样品表明有几个放射峰。与所需产品不相应的辐射作为重组时间的函数见表1。

表1

辐射降解的抑制（100mCi/ml）

样品时间 %

（小时）降解

对照 0.25 0

对照 1.17 0

对照 4.3 0.4

对照 6.3 0.90

对照 12.25 4.9

对照 24.0 18.3

A 10.2 0.1

A 25.5 2.6

B 9.2 0.5

C 26.2 18.2

Ⅰ 8.25 0

Ⅰ 10.9 0

Ⅱ 22.6 0

Ⅱ 27.0 0

Ⅲ 48.2 O

Ⅲ 70.5 0.1

A＝0.9%BzOH，参比

B＝5%EtoH，参比

Ⅰ＝冷冻，解冻8.25小时，分析，剩余的解冻10.9小时，并分析。

Ⅱ＝冷冻，解冻21小时，在22.6小时和27小时分析。

Ⅲ＝冷冻，解冻48.2小时，分析，再冷冻，再解冻70.5小时并分析。

样品A和B不属于本发明：样品Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ属于本发明。

结果也见图1。

实例A（参比;对照）

按实例1所述方法制备样品，其¹⁵³Sm的比放射性为30，30和50mCi/ml（分别为样品C，D和E）。结果见表A。

这些结果，以及实例1的对照（100mCi/ml）见图2。该图表明辐解降解的速度与放射性核素的比放射性成正比。

表A

非抑制的辐解降解

时间 %

样品（小时）降解

C 0.3 0

C 2.25 0

C 4.47 0

C 6.75 0

C 11.3 0

C 21.25 0.7

C 35.0 1.4

C 53.0 3.1

D 0.17 0

D 2.42 0

D 4.5 0

D 6.6 0

D 10.75 0

D 20.6 0.4

D 33.8 1.2

D 52.83 2.1

E 2.0 0

E 5.25 0

E 7.6 0

E 11.5 0.2

E 25.5 0.7

E 47.0 6.5

实例2：方法A，不加钙

按实例1中所述的方法制备两个溶液，其含有27mCi/mL的¹⁵³Sm，并按与实例1相同的方法冷冻，样品在充有粉末状干冰的容器中贮存，待溶液解冻后取出样品，随后将溶液再次冷冻，用实例1的高效液相层析法分析样品。在冷冻70小时后，除检测到对应于所需产物的辐射峰外，无辐射峰。

实例3：方法A

将3mL的70mg/mL的EDTMP溶液吸到烧杯中，用50%（重量/重量）的NaOH调溶液的pH约为10.26。待溶液置于血清小瓶中后，在真空炉中除去水，得到三个这种小瓶（“EDTMP药包制剂”）。

按上述方法制备的三个6.0mL EDTMP制剂用浓度为3×10^-4的HoCl₃的0.1N HCl溶液使其重组。每个药包用150μL的¹⁶⁶Ho示踪，测每个样品的络合物溶液的pH，发现其为7.6-7.7。往一个样品（样品Ⅳ）中加CaCl₂，得到1∶1摩尔比的Ca∶EDTMP。往另一个样品（样品Ⅴ中加CaCl₂得到2∶1摩尔比的Ca∶EDTMP。第三个样品为对照（不加CaCl₂）。样品Ⅳ，加CaCl₂后，pH为7.06，用50%（重量/重量）NaOH调到pH7.5。样品Ⅴ加CaCl₂后，pH为6.6，用50%（重量/重量）NaOH调到pH7.5。发现三个样品络合百分比均为99%。

将三组三只的Sprague-Dawley大鼠分别静注100μL的对照物，样品Ⅳ和样品Ⅴ。两小时后测定生物分布，结果见表2。

表2

各种组织中的%注射剂量（¹⁶⁶Ho）

组织对照^d样品Ⅳd 样品Ⅴ^d

（1∶1）（1∶1）（2∶1）

骨骼^a53 46 43

肝 0.07 0.05 0.07

肾 0.60 0.30 0.30

脾 0.01 0.01 0.01

肌肉^b0.34 0.34 0.43

血液^c0.08 0.20 0.22

a 股骨的%乘以25所得

b 估计为体重的43%

c 估计为体重的6.5%

d 三只大鼠的平均值。

数据表明三个样品的生物分布相似。

实例4：方法D

通过在pH＝1.97时搅拌下列试剂制备含Ca的药包（Ca-K计）（1∶1摩尔Ca∶EDTMP）

表3

试剂 g mmol mL

水 - - 30

EDTMP

（96%） 2.198 4.84 -

Ca（OH）₂

（95%） 0.3766 4.83 -

随后用0.1N NaOH调pH，在pH＝1.97时，溶液澄清。在pH＝2.8到3时，溶液浑浊。在pH＝约5.8时，溶液澄清。在pH＝约10.5时，溶液澄清。

优选的制备Ca-药包的方法为称出固体Ca（OH）₂和EDTMP置于烧杯中，加水并搅拌至澄清;调到pH＞6。

随后可调到pH9.2，冷冻干燥得到所需的包装形的制剂。往药包中加Sm溶液，形成¹⁵³Sm-EDTMP络合物，其可注射。

实例5：方法D

将实例4的3mL Ca-药包（1∶1mole Ca∶EDTMP）重组制备¹⁵³Sm-EDTMP。该药包用含3×10^-4M Sm的0.1N HCl溶液重组，用¹⁵³Sm示踪，pH调到7.8（样品Ⅵ）。按实例4的改进方法制备¹⁵³Sm- -EDTMP制剂（2∶1 Ca₂EDTMP）。药包用含有3×10^-4M Sm的0.1N HCl溶液重组，用¹⁵³Sm示踪，调到pH7.2（样品（Ⅶ）。另外用不含Ca的6mL药包作为对照，将其用6.0mL的含3×10^-4M Sm的0.1N HCl溶液重组，用¹⁵³Sm示踪，调到pH7.5。络合的Sm（全部钐同位素）的百分比经阳离子交换层析测定为＞99%。

给三只Sprague-Dawley大鼠静脉注射100μL的¹⁵³Sm-EDTMP溶液。大鼠在注射2小时后处死。将组织中放射性计数（用NaI gamma计数器测定）与100μL的标准贮备溶液比较，测定各组织中的活性，结果见表4：

表4

各种组织中%注射剂量（¹⁵³Sm）

组织对照^d样品Ⅵ^d样品Ⅶ^d

（1∶1）（2∶1）

骨骼 44 37 38

肝 0.14 0.15 0.20

肾 0.36 0.48 0.48

脾 0.01 0.01 0.01

肌肉^b0.53 0.60 0.96

血液^c0.21 0.37 0.51

a 为股骨的%乘以25

b 估计为体重的43%

c 估计为体重的6.5%

d 为三只大鼠的平均值

实例6：方法D

将实例4中制备的3mL Ca-药包，用3.0mL的含3×10^-4M Sm Cl₃的0.1M HCl重组。用2mL溶液测pH，用ColorpHast^TMpH试纸测得pH为7.0-8.0。溶液用1-2μL的¹⁵³Sm溶液为示踪剂进行示踪。以同样的方式将对照药包制剂与Na（无Ca，实例3中制备）进行重组。Ca-药包还可重组有48.3mCi/mL的¹⁵³Sm，用干冰冷冻。21天后，冷冻的制剂解冻使用。

给5只Sprague-Dawley大鼠静注100μL的对照制剂溶液，给5只Sprague-Dawley大鼠注射100μL的21天的新解冻Ca-药包。给4只Sprague-Dawley大鼠注射100μL的Ca-药包溶液（用示踪剂¹⁵³Sm）。

大鼠在注射后2小时被处理，将组织中的放射性计数（用NaI gamma计数器测定）与100μL的标准贮备液的计数比较，测定各种组织中的放射活性。几种组织中的剂量见下列表5。

表5

各种组织中的%注射剂量（¹⁵³Sm）

对照^d21天冷冻新鲜示踪的

组织

无Ca Ca-kit^dCa-kit^e

骨骼 53 50 50

肝 0.24 0.21 0.21

肾 0.49 0.41 0.41

脾 0.01 0.01 0.01

肌肉^b1.18 0.92 0.92

血液^c0.16 0.21 0.20

a 为股骨的%乘以25

b 估计为体重的43%

c 估计为体重的6.5%

d 5只大鼠的平均值

e 4只大鼠的平均值

实例7：方法D

往盛有磁力搅拌子的600ml烧杯中，加18.210g（40.126mmol）的EDTMP，2.678g（36.140mmol）的Ca（OH）₂，和400mL水。混合物在室温下搅拌1小时，大部分固体溶解。用50%NaOH溶液缓慢升高pH，连续搅拌至全部固体溶解。当混合物均匀后，用50%NaOH溶液使pH缓慢升到9.2。（溶液在pH3.6变混浊，在pH5.8再变澄清）溶液转到500mL的烧瓶中，加水使成500mL;pH为9.17。溶液用0.45微米的滤器过滤，并分成3，6和18mL的药包。用干冰-丙酮浴将其冷却，随后置于冷冻干燥器中。4天后取出药包，加封，抽真空，贴标签贮存。

将3mL上述的Ca-药包，和对照（Na）药包分别用3mL的含3×10^-4M Sm的0.1M HCl溶液重组，用示踪量的¹⁵³Sm（1到2μL）示踪。用阳离子交换层析测定络合百分比均大于99%。二者的pH＝7到8。三份100μL的每种药包用做标准品。

给五只Sprague-Dawley大鼠（150-200g）静注100μL的重组的Ca-药包，给四只Sprague-Dawley大鼠静注100μL重组的对照药包。2小时后，将大鼠处死，取出组织样本。组织样本和标准样本被计数，并测出生物分布，结果见表6。

表6

各种组织中的%注射剂量（¹⁵³Sm）

Ca-kit 对照Na-kit

组织

%剂量a %剂量b

骨 50 53

肝 0.21 0.24

肾 0.41 0.49

脾 0.01 0.01

肌肉 0.92 1.18

血液 0.02 0.16

尿^c52 51

a 5只大鼠的平均值

b 4只大鼠的平均值

c 文献中得到

两个制剂得到相同的生物分布。

实例8和参比实例B：方法D

当比较Ca-药包和Na-药包时，两种药包均由快速静注给Sprague-Dawley大鼠。Ca-药包的LD₅₀比Na-kit大3.5倍。两个药包均按实例5的方法制备。药包的生物分布结果相似。由于LD₅₀增高，Ca-药包更为安全。

实例9：方法D

将按实例3的方法制备的3mL药包重组，制备¹⁵³Sm-EDTMO制剂。加3mL含¹⁵³Sm的0.1M HCl溶液重组药包。重组的药包含有3×10^-4M的Sm和35mg/mL的EDTMP。

阳离子交换层析测得络合Sm的百分比＞99%。两只Sprague-DawLey大鼠右侧大腿肌注，另外两只大鼠在颈部锁骨上皮下注射。每只大鼠接受100μL的¹⁵³Sm-EDTMP溶液。

注射2小时后，大鼠被处死，比较组织内放射计数（用NaI gamma计数器测定）和100μL标准贮备液的计数，测定各组织的放射活性。各组织中的剂量见表7，与静脉注射剂量比较。

表7

各种组织中%注射剂量（¹⁵³Sm）

S.C.^dI.M.^dI.V.^d

组织

皮下肌肉静脉注射

骨骼^a49 45 50

肝 0.14 0.35 0.14

肾 0.32 0.32 0.36

脾 0.006 0.005 0.001

肌肉^b0.40 0.053 0.22

血液^c0.45 0.35 0.12

a 股骨的%乘以25

b 估计为体重的43%

c 估计为体重的6.5%

d 2只大鼠的平均值

表7中的结果表明，各种给药方式的生物分布相似。

实例10

按实例4的方法制备的5只3mL的EDTMP药包用表8中的溶液重组，测pH。

表8

酸浓度

〔Ca〕〔HCl〕

pH

M M

0.0375 0.087 7.42±0.03

0.060 0.072 7.40±0.06

0.070 0.65 7.39±0.05

溶液含约1mCi/mL的¹⁵³Sm，总Sm浓度为3×10^-4M，各样品的Ca含量见上表，且测得的络合物收率均大于99%。

表8中所述的含Ca酸性溶液用于滴定3.0mL的EDTMP药包，以便研究用于重组的溶液的体积对最终pH的影响。各药包分别加2mL的上述溶液，测pH。往200μL为一份的样品中另外加2.0mL，测pH。结果表明，总共高达3.6mL的溶液可被加到3.0mL的药包中，而pH不低于7.0。

测定加入的Ca对重组的药包制剂渗透性的影响。表8的溶液用来重组3.0mL的EDTMP药包，重组后，测溶液的pH。通过冰点降低法测渗透性。结果见表9。

表9

加入的Ca对溶液重量摩尔浓度的影响

〔Ca〕〔HCl〕 PH 重量摩等渗的

尔浓度 %

O 0.11 7.50 0.491 164

0.0375 0.087 7.40 0.558 186

0.060 0.072 7.35 0.595 198

0.070 0.065 7.35 0.606 202

表9中的数据表明，制备的药包为高渗，往用来重组药包的放射性核素溶液中加Ca，仅轻微增大高渗结果。在讨论制剂对给药途径的影响时，知道只要给药速度足够慢使其在血液中稀释或调节，则静注溶液的渗透压不很重要。〔例如，见P.P.Deluca and J.C.Boylon，“Formulation of Smll volume Parenterals in Pharmaceutical Dosage Forms”，Parenteral medication Vol.1，Pg.140，eds.K.E.Auis，L.Lachman，and H.A.Lieberman，Pub.Marcel Dekker Inc.，N.Y.（1984）〕。

实例11：方法D

为试验给Beagle狗静注后¹⁵³Sm-Na-EDTMP和¹⁵³Sm-（Ca/Na）-EDTMP对心率、脉搏和血清Ca水平的急性影响，进行下列实验。同时测定输注速率。

用630mg EDTMP和414mg NaOH制备¹⁵³Sm-Na-EDTMP，样品Ⅷ，其为冷冻干燥并灭菌的，用灭菌的含Sm 3×10^-4M的0.1M HCl进行重组。

用640mg EDTMP，245mg NaOH和95mg Ca（OH）₂制备¹⁵³Sm-（Ca/Na）-EDTMP，样品Ⅸ，其为冷冻干燥并灭菌的，随后用灭菌的含Sm 3×10^-4M的0.01M HCl重组。

往分别冷冻干燥的EDTMP制剂中加18.0mL的Sm溶液制备注射用的络合物。制剂的最终浓度为35mg/mL的Sm-EDTMP络合物。制剂在制备15分钟之内使用，剩余溶液冷冻进行分析。注射用制剂的分析表明，注射剂为靶浓度。

使用年轻成年雄性Beagle狗，约33周体重8.1-10.9kg。兽医对狗进行全面的检查身体，使适应实验室环境至少30天。用Adenoimmume^TM-7-L（Tech America，Biologics Corp.制造）再次接种，预防温热，腺病毒2型肝炎，副流感和微小病毒。根据供养者在狗身上所刺号码编号，动物按美国实验室动物保护鉴定委员会制定的方法喂养。所用的实验室已经许可。

随机选取一只禁食的雄性狗，用导管头静脉内注射剂量为每公斤体重30mg的样品Ⅷ或样品Ⅸ。注射部位插管前，剪毛用抗菌剂处理。注射速率约为2.0mL/min（70mg/min），注射需要4分钟。

另外两只雄性Beagle狗给相同剂量的样品Ⅷ或Ⅸ，注射尽可能地快，约15mL/min。输注方法同前。这在第一次注射二周后进行，以证实前述关于输注速度的结果。

就在注射前及注射后，以及注射后约5，15，30和45分钟及1，2和4小时时从颈静脉取血样，作血清钙和总蛋白分析。颈腹侧按前述方法剪毛，用抗菌剂处理。在这段时间检查狗的临床反应，在这些时间点记录心率和脉搏。

每只狗进行一项处理，总表看来并不合适。但是，以2.0mL/min速率（70mg/min SM-EDTMP络合物）慢速注射30mg/公斤体重的样品Ⅷ或Ⅸ，并不产生任何临床指征。每种制剂使心率增加7%到10%，但这种结果只能表示犬心率对外界刺激所发生的兴奋反应。虽然血清中总钙量有微小变化，但这种变化很难归于处理所引起的。

当注射速度增加到尽可能快时（约15mL/min），记录各样品的临床指征。接受样品Ⅷ的狗发生不自主性肌肉运动，全部肌肉的初级频细震颤，呼吸加快、并发生哀鸣声，这些反应在注射后20秒时开始持续约2分钟，在注射后约5分钟后正常，同时心率加快50%。血清总钙水平增加，但这种增加相当小，且伴有血清总蛋白量的增加。不可能将总钙的反应归于注射所引起。

虽然接受样品Ⅸ的狗也有临床反应，但不能确定这些是否是非自主性运动，这种运动具有反抗约束的特点。狗活动增加的时间仅持续约30秒，看来注射后约100秒后即恢复正常。心率仅增加13%血清钙水平在注射后增加，但同时伴有的总蛋白量增加使该结果很难解释。

总之，缓慢静注30mg/kg样品Ⅷ或Ⅸ的狗不因注射而产生的反应。当注射快速一次给药时，每个样品都有临床反应。样品Ⅷ比样品Ⅸ的反应明显。

本发明的其它内容在行家们考虑了本说明书或这里所述的发明实例后会很明白的。本说明书和实例仅作为例子。本发明的实际范围和主要内容列于下列权利要求书中。

Claims

1、制备放射性药物制剂的方法，其包括，将放射性核素与配体或其药用盐反应，将络合物冷冻，用前解冻。

2、权利要求1的方法，其中用液氮冰冻。

3、权利要求1的方法，其中冷冻用干冰进行。

4、权利要求1的方法，其中冷冻用丙酮-干冻进行。

5、权利要求1的方法，其中放射性核素为钐-153，钬-166，镱-175，镥-177，钇-90或钆-159。

6、权利要求5的方法，其中放射性核素为钐-153或钬-166。

7、权利要求6的方法，其中放射性核素为钐-153。

8、上述任何权利要求的方法，其中配体为乙二胺四亚甲基膦酸二亚乙基五亚甲基膦酸，羟乙基乙二胺三亚甲基膦酸，次氮基三亚甲基膦酸，三（2-氨乙基）胺六亚甲基膦酸，1-羧乙二胺四亚甲基膦酸，双（氨乙基哌嗪）四亚甲基膦酸，或1，4，7，10-四氮杂环十二烷四亚甲基膦酸，或其药用盐。

9、权利要求8的方法，其中配体为

乙二胺四亚甲基膦酸，二亚乙基三胺五亚甲基膦酸，

羟乙基乙二胺三亚甲基膦酸，三（2-氨乙基）胺六亚甲基膦酸，

1-羧乙二胺四亚甲基膦酸;

双（氨乙基哌嗪）四亚甲基膦酸，或1，4，7，10-四氮杂环十二烷四亚甲基膦酸，或其药用盐。

10、权利要求9的方法，其中配体为

乙二胺四亚甲基膦酸或其药用盐。

11、权利要求10的方法，其中放射性核素为钐-153。

12、权利要求10的方法，其中放射性核素为钬-166。

13、上述任意权利要求中的方法，其中加入二价金属并包括任意下述步骤：

（A）在制剂冷冻前，往权利要求1的放射性金属-配体络合物中加二价金属;或

（B）权利要求1的放射性金属-配体络合物冷冻，随后解冻，加入二价金属;或

（C）将步骤（B）的制剂冷冻，随后解冻;或

（D）往放射性金属离子溶液中加二价金属，随后，往放射性溶液中加配体形成络合物，将络合物冷冻，用前解冻;或

（E）往配体中加二价金属，以其氯化物或氢氧化物的形式，随后用碱调pH，将溶液冷冻干燥，形成二价金属-配体冻干制剂，用含有放射性金属的酸性溶液将制剂重组，将络合物冷冻，用前解冻。

14、制备含有二价金属和与配体络合的放射性核素的放射性药物制剂的方法，其包括任何下列步骤：

（A）往权利要求1到12的任一要求的放射性金属配体络合物中加二价金属;或

（B）往放射性金属离子溶液中加二价金属，随后往放射性溶液中加配体，形成络合物;或

（C）同时给动物分别注射放射性药物制剂和二价金属离子溶液，以合并给药;或

（D）将二价金属以其氯化物或氢氧化物的形式加到配体中，随后用碱调pH;或

（E）将步骤D的溶液冷冻干燥，形成二价金属-配体冻干制剂用含有放射性金属离子的溶液使制剂重组。

15、权利要求14的方法，其中二体金属为Fe⁺²，Mn⁺²或碱土金属离子。

16、权利要求15的方法，其中碱土金属离子为Be⁺²，Mg⁺²，Ca⁺²，Sr⁺²或Ba⁺²。

17、权利要求16的方法，其中碱土离子为Ca⁺²。

18、权利要求14到17的任何方法，其中配体为乙二胺四亚甲基膦酸。

19、权利要求18的方法，其中二价金属与乙二胺四亚甲基膦酸的摩尔比为从0.25-1。

20、权利要求19的方法，其中二价金属与乙二胺四亚甲基膦酸的摩尔比为0.5-1。

21、权利要求20的方法，其中二价金属与乙二胺四亚甲基膦酸的摩尔比为0.75-1。

22、权利要求21的方法，其中二价金属与乙二胺四亚甲基膦酸的摩尔比为0.9-1。

23、权利要求22的方法，其中二价金属为Ca⁺²。

24、权利要求14，其中在步骤E中，酸性溶液为浓度0.001-1N的盐酸。

25、权利要求24的方法，其中酸性溶液为0.01-0.1N的盐酸。

26、权利要求14的方法，其中放射性核素为钐-153，钬-166，镱-175，镥-177，钇-90或-159。

27、权利要求26的方法，其中放射性核素为钐-153或钬-166。

28、权利要求27的方法，其中放射性核素为钐-153。

29、权利要求14到28的任何方法，其中配体为乙二胺四亚甲基膦酸，二亚乙基三胺五亚甲基膦酸，羟乙基乙二胺三亚甲基膦酸，次氮基三亚甲基膦酸，三（2-氨乙基）胺六亚甲基膦酸，1-羧一乙二胺四亚甲基膦酸，双（氨乙基哌嗪）四-亚甲基膦酸，或1，4，7，10-四氮杂环十二烷四亚甲基膦酸，或其药用盐。

30、权利要求29的方法，其中配体为乙二胺四亚甲基膦酸，二亚乙基三胺五亚甲基膦酸，羟乙基乙二胺三亚甲基膦酸，三（2-氨乙基）胺六亚甲基膦酸，1-羧乙二胺四亚甲基膦酸，双（氨乙基哌嗪）四亚甲基膦酸，或1，4，7，10-四氮杂环十二烷四亚甲基膦酸，或其药用盐。

31、权利要求30的方法，其中配体为乙二胺四亚甲基膦酸，或其药用盐。

32、权利要求14的方法，其包括¹⁵³钐-乙二胺四亚甲基膦酸，或其药用盐。

33、权利要求14的方法，其包括¹⁶⁶钬-乙二胺四亚甲基膦酸，或其药用盐。