PT97996B

PT97996B - Processo para a preparacao de uma formulacao radiofarmaceutica compreendendo pelo menos um radionuclideo

Info

Publication number: PT97996B
Application number: PT97996A
Authority: PT
Inventors: Jaime Simon; Joseph R Garlich; R Keith Frank; Kenneth Mcmillan
Original assignee: Dow Chemical Co
Priority date: 1990-06-18
Filing date: 1991-06-17
Publication date: 1998-11-30
Also published as: AU6455994A; DK0462787T3; JP3636728B2; HU226897B1; BR1101169A; NO912345L; AU7847091A; SA92120343B1; PL165699B1; NZ238547A; JP2002114712A; PL290717A1; IE71023B1; AU665911B2; CN1063615A; HU912011D0; FI101044B; DE69110554D1; IL98536A0; ES2073678T3

Description

Resumo

A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de radiofarmaceutica, de preparação de uma formulação radio-farmaceuticas para complexos compreendendo pelo menos um radionuclideo formando complexo com um ligante, ou seus sais fisiológicamente aceitáveis.especial

153 ^— mente samário-ácido eti lenodiaminatetrameti lenofosfónico, que opcionalmente contém um ião de metal bivalente, por exemTHE DOW CHEMICAL COMPANY “PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA FORMULAÇÃO RADIOFARMACEUTI CA COMPREENDENDO PELO MENOS UM RADIONUCLIDEO

pio cãlcio, e são congeladas, descongeladas, e então administradas por injecção. Alternativamente, as formulações radiofarmaceuticas devem conter o metal bivalente e são congeladas apenas se o tempo antes da administração for suficientemente longa para causar preocupação devido a radiôlise do ligante.

A presente invenção refere-se a formulações para produtos radiofarmaceuticos, seus métodos de administração e processo de preparação. As formulações radiofarmaceuticas tem vãrias aplicações no tratamento terapêutico e/ou diagnóstico de animais para várias doenças, especialmente para câncro.

desenvolvimento de metãstase óssea ê um evento comum e frequentemente catastrófico para um pacien te de câncro. A dor, as fraturas patológicas, as deficiências neurológicas frequentes e a imobilidade forçada causada por estas lesões de metãstase óssea diminuem significativamente a qualidade de vida para o paciente de câncro. A quantidade de pacientes que contraem a doença metâstatica ê grande, visto que aproximadamente 50 por cento de todos os pacientes que contraem carcicoma do seio, pulmão ou próstata irão, eventualmente, desenvolver metãstase óssea. As metástases ósseas são também, frequentemente vistas em pacientes com carcinoma dos rins, tiróide, bexiga, colo do útero, e outros tumores, mas colectivamente, estes representam menos que 20 por cento dos pacientes que desenvolvem metãstase óssea. O câncro metastático ósseo é, raramente, uma ameaça mortal e, ocasionalmente, os pacientes vivem durante anos após a descoberta das lesões ósseas. Inicialmente, os objectivos do tratamento estão foca dos no combate a dor, reduzindo assim a necessidade de medicas ção narcótica e aumentando a mobilidade. E lógico que se espera que alguns dos câncros possam ser curados.

Os produtos radiofarmaceuticos usados nas formulações da presente invenção têm sido preparados como seus complexos ligados a metais, particularmente o agente samârio-153-ãcido etilenodiaminatetrametilenofosfónico (153Sm-EDTMP conforme apresentado na Patente Norte-Americana No.4.898.724.

153

Sm-EDTMP, especialmente como sua formulação farmacêutica, tem uma utilidade para o alívio da dor óssea e para o tratamento de tumores de calcificação, cuja utilidade e preparação foram apresentadas nas Patentes Norte-Americana No.4.898.724,

Patente do Canadá No. 1.243.603, e Pedido Europeu No.164.843.

uso adicionai de produtos radiofarmaceuticos para supressão da medula óssea é apresentado na Patente Norte-Americana No.

4.853.209. Todas estas referências apresentam um uso dos pro dutos radiofarmaceuticos da presente invenção, especialmente 153 o Sm-EDTMP, numa formulação com veículos adequados farmaceuticamente aceitáveis.

Uma preocupação quando se administra qualquer produto radiofarmaceutico é o potencial para degradação radiolítica das moléculas orgânica(s)presentes na formulação, que podem alterar a biodistribuição do radioisótopo ou resultam em sub-produtos tóxicos. Nenhum destes eventos ê desejável. Quando grandes quantidades de radioatividade são necessárias, existe o potencial maior para danos de radisi ção à molécula orgânica (por exemplo, EDTMP). Esta degradação ê mais provável de acontecer quando radionuclideos terapeuticos (por exemplo Sm) são usados, os quais são projectados para emitir doses de alta radiação.

Uma abordagem que tem sido tentada para prevenir a radiólise ê adicionar um inibidor de radical livre para a formulação. Entretanto, o inibidor ou seus produtos de degradação podem ser tóxicos ou interferir com a biodistribuição dos produtos radiofarmaceuticos. 0 uso de um inibidor, tal como álcool benzilico ê discutido por H,Ikebuch et al., Radioisotopes 26 (7), 451-7 ( 1977) ;B. J. Floor et al., d. Pharm.Sci. 74(2),197-200(1985);e A.Rego et al., J. Pharm.Sci. 74(11), 1219-23(1982).

Uma preocupação adicional para formulações radiofarmaceuticas (como mostrado na Patente NorteAmericana No.4.898.724 e Pedido Europeu publicado No.164.843) ê que pode ser usado um excesso molar de ligante (por exemplo EDTMP)comparado com a quantidade de metal, Quando grandes quantidades de iões de metal (por exemplo Sm⁺³ ) são injectadas, uma quantidade muito maior de agente quelante livre (por exemplo EDTMP) ê portanto, também, injectada. 0 excesso de ligante presente pode ser capaz de complexar iões de metal na corrente sanguínea, o que pode levar a complicações para o paciente. E, portanto, desejável ter uma formulação que contenha uma quantidade mínima de agente quelante livre.

Uma outra preocupação quando administrando produtos radiofarmaceuticos é a maneira de injecção. Tipicamente, todos estes produtos radiofarmaceuticos são administrados através de injecções intravenosas (I.V.). 0 paciente pode experimentar algum desconforto com uma injecção I V., e algumas vezes ê difícil encontrar uma veia adequada dis ponível no paciente.

Consequentemente, seria vantajoso ter uma formulação para produtos radiofarmaceuticos que tenha radiôlise mínima antes da utilização, poderia ser injactada de várias maneiras, e evitar ligante livre (ou não complexado) em excesso.

Os desenhos anexos são fornecidos para ilustrar a radiôlise como segue:

Figura 1 mostra a radiôlise de EDTMP com actividade especifica de 100 mCi/ml de Sm na presença de 5 por cento de etanol (EtOH; +), 0,9 por cento de álcool benzilico (”ΒζϋΗ“;φ), congelado (A) e um controle (/).

A Figura 2 mostra a radiôlise de EDTMP como conjuntos não inibidos em actividades especificas diferentes de jqq mCi/ml+ 50 mCi/ml; 30 mCi/ml; 30 mCi/ml.

Surpreendentemente, uma formulação aperfeiçoada para administração de produtos radiofarmaceuticos,

153 especialmente Sm-EDTMP, foi agora descoberta, a qual reduz a radiólise do EDTMP sem alterar o desempenho do produto radiofarmaceutico. Os produtos radiofarmaceuticos adequados para uso nas formulações presentes desta invenção incluem com plexos compreendendo pelo menos um radionuc1ideo complexado com um ligante ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo.

Exemplos de radionuclideos adequados são Samârio-153 (¹⁵³Sm), Hôlmio-156 (¹⁴⁴Ho), Itêrbio-175 (¹⁷⁵Yb), Lutêcio-177 (¹⁷⁷Lu), Itrio-90 (^90Y) ou Gadolínio-159 (¹⁵⁹Gd).

co 1 ZLZL

Radionuclideos especialmente preferidos são Sm e Ho,com 153

Sm sendo o mais preferido.

Exemplos de ligantes adequados são ácido eti lenodiaminatetrametilenofosfónico (EDTMP), ácido di-etilenotriaminapentametilenofosfônico (DTPMP), ácido hidroxieti1 etilenodiaminatrimetilenofosfónico (HEEDTMP), ácido nitrilotrimetilenofosfónico (NTMP), ácido tris(2-aminoeti1)aminahexametilenofosfónico (TTHMP), ácido 1-carboxietilenodiaminatetrametilenofosfônico (CEDTMP), ácido bis (amino-etilpiperazina)-tetrametilenofosfónico (AEPTMP), e ácido 1,4,7,10-tetraazacic1ododecanotetrametilenofosfónico (DOTMP), e sais fisiológicamente aceitáveis dos mesmos.Ligantes especialmente preferidos são EDTMP, DTPMP, HEEDTMP, TTHMP, AEPTMP, CEDTMP e DOTMP, com EDTMP sendo especialmente preferido. Um produto radiofarmaceutico especialmente pre1 53 ferido para uso na presente invenção é Sm-EDTMP e seus sais fisiologicamente aceitáveis.

As formulações presentes podem também conter um ião de metal bivalente de 0,25 a 5 mols de ião de metal bivalente por mol de ligante que não interfira com a formação do complexo radiofarmaceutico. Quando o ião de metal bivalente ê adicionado antes do radionuclideo, a formulação não necessita congelamento atê a adição do radionuclideo ocorrer e então apenas se um tempo significativo passar entre a formação da formulação radiofarmaceutica e seu uso.

Foi também descoberto que injecção intravenosa (I.V.) não ê necessária para obter a biodistribuição desejada de radionuclideos quando usando uma formulação radiofarmaceutica da presente invenção. Ao invés disso, quando desejado ou necessário, injecções intraperitonea1 (I.P.), subcutânea (S.C.) ou intramuscular (I.M.) propor cionam biodistribuições similares.

As presentes formulações radiofarmaceuticas que contém o metal bivalente minimizam a presença de ligante livre (ou não complexada) (por exemplo, EDTMP) a ser introduzida na corrente sanguínea do mamífero. Este complexo metal bivalente-1igante reduz a queiação de outros metais (por exemplo, cálcio) no sangue pelo ligante. Assim, o efeito prejudicial do excesso de ligante é diminuído.Entretanto, os metais bivalentes não devem interferir com a formação do 153 complexo radiofarmaceutico (por exemplo, Sm-EDTMP).Metais bivalentes adequados são Fe e Mn e os metais alcalinos terrosos, por exemplo, Mg+2 , Ca+2, Sr+2 θ Ba+² , com Ca⁺2 sendo o mais preferido. Estas formulações radiofarmaceuticas são preparadas de modo que de 0,26 a 5 mols de metal bivalente estão presentes por mol de ligante, especialmente preferido de 0,5 a 3 mols, preferivelmente, de 0,5 a 1 mol, mais preferivelmente, de 0,75 a 1 mol, e, mais preferivelmente de 0,9 a 1 mol.

Existem várias maneiras para preparar tais formulações radiofarmaceuticas de metal bivalente. Um modo (Método A), ê através da preparação de uma formulação de metal bivalente que é adicionada ao complexo metal radioactivo-ligante. 0 complexo metal radioactivo-1igante pode, opcionalrnente, ter siao congelado, então descongelado para adicionar o metal bivalente e poderia, se desejado, ser congelado novamente e então descongelado antes do uso. Um segundo modo (Método 8), ê através da adição do metal bivalente à solução de ião de metal radioactivo. 0 ligante é então adicionado para formar o complexo, e então esta formulação é congelada, se desejado. Devido a radiólise não ocorrer até o ligante ser adicionado, o congelamento ê usado se o intervale de tempo antes do uso o tornar necessário. 0 terceiro modo ê co-administrar o produto radiofarmaceutico, que pode ter sido congelado e descongelado para uso, com uma solução de ião de metal bivalente, por exemplo, gluconato de cálcio, através de duas injecções I.V. separadas, quase que simultaneamente ao paciente. 0 quarto modo, e o modo preferido (Método D), é adicionar o metal bivalente, como seu cloreto ou mais preferi veimente como seu hidróxido, ao ligante e então ajustar o pH, por exemplo, através da adição de hidróxido de sódio (NaOH) opcionalmente, secar por congelamento a solução para formar uma formulação liofilizada metal bivalente-ligante(conjunto). A solução ácida do ião de metal radioactivo é usada para reconstituir o conjunto e resulta na formulação radiofarmaceutica adequada para uso e no pH desejado. Uma preocupação em qualquer dos métodos para formar a for_mulação é a meia-vida do radio-nuclideo que está sendo usado (por exemplo, Sm t = aproximadamente 46 horas).Uma outra preocupação ê a quantidade de tempo em que o rádio-nuclídeo está em solução com o ligante. A quantidade de actividade e o tempo que o rádio-nuclídeo está na solução com o ligante determinarão se o congelamento da formulação radiofarmaceutica ê desejável.

Foram preparados conjuntos (Kits) contendo uma formulação de ligante de aproximadamente um equivalente de metal bivalente por equivalente de ligante na modalidade preferida (Método D). Também a solução metal bivalente-1igante pode ser seca por congelamento, que, quando reconstituída com uma solução de rádio-nuclídeo, forma um complexo quantitativo com o ião de metal radioactivo e tem um pH de 7 a 8,5. A formulação de metal bivalente é especiaj_ mente preferida quando grandes doses de ligante são usadas, usualmente com as doses mais altas de râdio-nuclídeo, especialmente usada para retirar a medula óssea.

Assim, preferivelmente, os conjuntos contendo o ligante, tal como EDTMP, opcionalmente com o metal bivalente presente, são secos por congelamento de um modo tal que a adição de uma quantidade pré-determinada de solução de rãdio-nuclídeo em uma concentração adequada de HC1 (preferivelmente, de aproximadamente 0,001 a IN HC1, ou, mais prefen velmente, de 0,01 a 0,ld HC1) que resultaria em um rendimento quantitativo de complexo de râdio-nuclídeo-1igante, por exemplo, Sm-EDTMP, e possui um pH resultante entre 7 e 8,5.

153

Para a formulação radiofarmaceutica Sm-EDTMP, a concentração preferida de EDTMP ê 35 mg/ml e a concentração preferida de Sm ê 3 x 10 ~⁴M (isto é, aproximadamente 278:1 EDTMP:Sm).

As formulações radiofarmaceuticas pre153 sentes, especialmente as formulações Sm-EDTMP com ou sem o metal bivalente presente, podem ser congeladas para minimizar a radiólise do ligante, então descongeladas antes do uso. 0 congelamento pode ser executado através de qualquet meio adequado, que mantenha a esterilidade do produto (por exemplo, por azoto líquido ou gelo seco), então, quando for desejado usar a formulação, ela ê deixada descongelar.

A forma de administração das formulações em questão podem ser seleccionadas de I.V., I.P., S.C. ou

I.M. Os resultados de biodístribuição são similares para as formulações radiofarmaceuticas presentes por todas as formas de injecção.

Um método para preparar produtos rádio153

-farmacêuticos, especialmente Sííí-EDTpIP, foi agora descoberto, que reduz a raaiõlise do ligante sem alterar o desempenho do produto radiofarmaceutico. Os produtos radiofarmaceuticos adequados para uso nestas formulações da invenção incluem complexos compreendendo pelo menos um rádio-nuclídeo complexado com um ligante, ou sais fisiológicamente aceitáveis dos mesmos.

Exemplos de rádio-nuclídeos adequados são Samãrio-153 (^³³Sm), Hôlmio-166 (¹, Itêrbio-175 (¹⁷⁵Yb), Lutêcio-177 (¹⁷⁷Lu), Itrio-90 (⁹⁰Y) ou Gadolínio-159 (¹⁵⁹Gd). Rádio-nuclídecs especialmente preferidos são ¹⁵³Sm 144 153 e Ho, com o Sm sendo o mais preferido.

Exemplos de ligantes adequados são ácido etilenodiaminatetrametilenofosfónico (EDTMP), ácido etilenotriaminapentametilenofosfónico (DTPMP), ácido hidroxieti letilenodiaminatrirneti lenofosfónico (HEEDTMP), ácido nitrilotrimetilenofosfónico (NTMP), ácido tris-(2-aminoe til)aminahexametiienofosfónico (TTHMP), ácido 1-carboxietilenodiaminatetrametilenofosfónico (CEDTMP), ácido ois(aminoetilpiperazina)tetraazaciclododecanotetrametilenofosfónico (DOTMP), e sais fisiologicamente aceitáveis dos mesmos.Ligantes especialmente preferidos são EDTMP, DTPMP, HEEDTMP, TTHMP, AEPTMP, CEDTMP e DOTMP, com EDTMP sendo especialmente preferido. Um produto radiofarmaceutico especialmente prefe153 rido para uso na presente invenção ê Sm-EDTMP e seus sais fisiologicamente aceitáveis. Sais fisiologicamente aceitáveis adequados foram definidos na Patente Uorte-Americana 4.893.724 e incluem sais de adição ácida daquelas bases, as quais irão formar um sal com pelo menos um grupo ácido do ligante empregado, e que não irão causar um efeito fisiológico adverso significativo, quando administrado a um animai em dosagens consistentes com boa prática farmacológica. As bases adequadas incluem, por exemplo, hidróxidos, carbonatos,

e bicarbonatos de metal alcalino e de metal alcalino-terroso, tais como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxj. do de cálcio, carbonato de potássio, bicarbonato de sódio, carbonato de magnésio, amónia, aminas primárias, secundárias e terciárias. Estes sais fisiológicamente aceitáveis podem ser preparados através do contato do ácido com a base apropriada .

Definições

Sm = samârio, todos os isótopos, radioactivos ou não. (Similarmente para os outros rádio-nuclídeos da invenção.)

53

Sm = é o isótopo radioactivo do samârio tendo uma massa atómica de 153. (Similarmente para os outros ráaio-nuclídeos da invenção.)

EDTMP = ácido etilenodiaminatetrametilenofosfón ico.

¹⁵^Sm-EDTMP = ^1ô3Samário-ácido etilenodiaminatetrametilenofosfónico, que é um complexo em solução; ele contem ambos isótopos do samârio, radioactivo e não radioactivo.

Adicionada (SPIKED (principal deflexão do traço ocilogrâfico da acção da onda principal)) = adição de 0,5 a 1 picoCi de solução de ¹⁵³SmCl3 ou ¹⁴⁴HoCl3 foram adicionados oomo um rastreador.

Produto radiofarmaceutico = um produto farmacêutico radiactivo para diagnóstico e/ou terapia, geral-12-

mente uma solução contendo um ião de metal radiactivo (por 153 exemplo Sm) ligaao a um ligante orgânico (por exemplo EDTmP)em uma solução aquosa.

Conjunto = um frasco contendo uma formu lação de ligante sólida, opcionaimente contendo um ião de me tal bivalente, ao qual uma solução de ião de metal radioactivo ê adicionada com o objectivo de formar um complexo metal raaioactivo-i igante.

Conjunto X-ml = um conjunto projectado para receber X-ml de solução de ião de metal radioactivo com o objectivo de formar o complexo rádio-nuclídeo-ligante.

Reconstituído = adição de uma solução de râdio-nuclídeo ácida a um conjunto, com o objectivo de formar um complexo rádio-nuclídeo-ligante.

TBA = hidróxido de tetrabutilamónio

BzOH = álcool benzilico

EtOH = etanol % = por cento

HC1 ~ ácido clorídrico

NaOH = hidróxido de sódio

I.V. = injecção intravenosa

I.P. = injecção intraperitoneal

I.M. = injecção intramuscular

S.C. = injecção subcutânea

MOP = difosfcnato de metileno

Experimento Geral método de ssparação cromatográf ica de permuta de catião foi usado para determinar o rendimento do complexo. Este procedimento está descrito na Patente Norte-Americana No.4.898.724.

HPLC = Cromatografia líquida de alto desempenho: a coluna usada era uma Hamilton ^^MPRP-1 de fase reversa, o eluente era 0,1M de acetato de sódio e 0,005M de TBA. A taxa de fluxo era de 1 ml/min.; a detecção foi efectuada com um detector radiométrico e um detector de U.V.

(240 nm) ligados em série.

EDTMP foi preparado em uma forma pura, adequado para uso como um produto farmacêutico através do método descrito na Patente Norte-Americana No. 4.937.333 e Pedido Europeu publicado No.411.941.

153

Sm foi obtido do reator de pesquisa da Universidade de Missouri,Columbia,M0.

Agua Barnstead NANOpure™ foi usada como a água destilada.

Ca(0H>2 foi o dihidrato da MCB ou da Aldrich,95 por cento de pureza.

Todos os reagentes não especificados de outra maneira, foram adquiridos e usados conforme recebidos.

A invenção será esclarecida adicionalmente através do estudo dos exemplos a seguir, que são apenas exemplos da presente invenção.

Exemplo 1: Método A, nenhum cálcio é adicionado

Três ml de uma solução de EDTMP 8 x

4

ΙΟ'^Μ foram preparados, que era 3 x 10- M em Sm. A activida153 de especifica era de 100 mCI de Sm por ml. Três alíquotas de 200 /ul (Amostras I, II e III) foram colocadas em frascos plásticos e congelados usando um banho de gelo seco-acetona. Os frascos plásticos foram mantidos no congelador. Uma outra porção de 500 μΐ foi colocada num frasco de vidro e 4,3 μ 1 de álcool benzilico foram adicionados para resultar numa solução a 0,9 por cento (peso/volume) (Amostra A). Ainda uma porção de 500 μ 1 foi colocada em um frasco de vidro e 31,8 ul de etanol foram adicionados para resultar em uma solução a 5 por cento (peso/volume) (Amostra B).

As soluções foram analisadas por HPLC e a degradação foi monitorada em função do tempo. A degradação era evidente através da não ocorrência de picos de Sm-EDTMP no cromatograma radiomêtrico. Para este estudo de tempo, um frasco de plástico congelado foi deixado descongelar a temperatura ambiente e uma porção foi analisada. A solução foi deixada ficar sem congelamento durante 2 a 4 horas, e a análise na solução foi repetida. Os outros dois frascos plásticos foram usados para obter dados em intervalos de tempo maiores de uma maneira similar.

Os resultados mostraram apenas um pico radiomêtrico correspondendo ao produto desejado para um período maior que 60 horas para as amostras congeladas. 0 controlo (amostra não inibida) e ambas as amostras com álcool benzilico e etanol mostraram vários picos radiomêtricos. A percentagem de radiação que não corresponde ao produto desejado como uma função de tempo a partir da reconstituição ê mostrada no Quadro 1.

QUADRO 1

INIBIÇÃO DE DEGRADAÇÃO RADIOLITICA (100 raCi/ml)

Amostra

Tempo (horas)

Degradação, %

Controle

Contro1e

Controle

A

B

I 1

II

III 111

0,25 '	0
1,17	0
4,3	0,4
6,3	0,9
12,25	4,9
24,0	18,3
10,2	0,1
25,5	2,6
9,2	0,5
26,2	18,2
a,25	0
10,9	0
22,6	0
27,0	0
48,2	0
70,5	0,1

A = 0,9% BzOH, comparativo

B = 5% EtOH, comparativo

I = congelada, descongelada as 8,25 hs. e analisada, deixada descongelada atê 10,9 hs. para análise.

11= congelada, descongelada as 21 hs., analisada as 22,6 hs. e as 27 hs.

111= congelada, descongelada as 48,2 hs,analisada, congelada novamente, então descongelada novamente as 70,5 hs. para análise.

As amostras A e B não são amostras da invenção; as Amostras I, II e III são amostras da invenção.

Os resultados são também mostrados pela Figura 1.

Exemplo A (Comparativo:ControIo)

As amostras foram preparadas através do procedimento descrito no Exemplo 1, excepto que a activi1 co dade especifica do Sm foi 30, 30 e 50 mCi/ml (Amostras C, D, e E, respectivamente). Os resultados são dados no Quadro

A.

Estes resultados, junto com o controle (100 mCi/ml) dos Exemplos 1 são mostrados gráficamente na Figura 2. Este gráfico demonstra que a taxa de degradação radiolítica ê proporcional a actividade especifica do rádio-nuclídeo.

QUADRO A

DEGRADAÇAO RADIOLITICA NAO INIBIDA

Amostra	Tempo (horas)	Degradação, %
C	0,3 <	0
c	2,25	0
C	4,47	0
C	6,75	0
c	11,3 ’	0
c	21,25	0,7
c	35,0	1,4
c	53,0	3,1
D	0,17	0
D	2,42	0
D	4,5	0
D	6,6	0
0	10,75	0
D	20,6	0,4
D	33,8	1,2
D	52,83	2,1
£	2,0	0
E	5,25	0
E	7,6	0
E	11,5	0,2
E	25,5	0,7
E	47,0	6,5

Exemplo 2: Método A, nenhum cálcio é adicionado

Duas soluções foram preparadas conforme descrito no Exemplo 1, excepto que elas continham 27 mCi/ /ml de Sm e foram congeladas da mesma maneira do Exemplo 1. As amostras foram armazenadas num recipiente cheio de gelo seco em pó. As amostras foram retiradas após deixar a solução descongelar, e então a solução foi congelada novamente.

procedimento de HPLC do Exemplo 1 foi usado para analisar as amostras. Nenhum pico radiomêtrico diferente daquele correspondendo ao produto desejado foi detectado após congelamen to durante um periodo de 70 horas.

Exemplo 3; Método A

Três ml de 70 mg/ml de solução de EDTMP foram pipetados num bêquer. 0 pH da solução foi ajustado a aproximadamente 10,26 com 50 por cento (peso/peso) de NaOH. Após colocar a solução em um frasco de soro, a Sgua foi removida numa estufa à vãcuo. Três destes frascos foram preparados (Conjuntos EDTMP).

Três conjuntos EDTMP de 6,0 ml, feitos através do procedimento acima, foram reconstituídos com HoClg a 3 x 10“⁴M em HCL a 0,lN. Cada conjunto foi adicionado de 150 ai 1 de ¹⁴⁴Ho. 0 pH da solução do complexo foi medido para cada amostra e descobriu-se ser de 7,6 a 7,7. Para uma amostra (Amostra IV) foi adicionado CaCl₂ para atingir uma proporção molar de 1:1 de Ca:EDTMP. Para uma outra amostra (Amostra V) foi adicionado CaCl₂ para atingir uma proporção molar de 2:1 de Ca:EDTMP. A terceira amostra era o controlo (sem adição de CaCl2). A amostra IV, com a adição de CaCl2, tinha um pH de 7,06, que foi então ajustado para um

pH de 7,5 com NaOH a 50 por cento (peso/peso). A amostra V, com a adição de CaC^, tinha um pH de 6,6, que foi então ajustado para um pH de 7,5 com NaOH a 50 por cento (peso/pe so). Descobriu-se que a percentagem de complexação é de 99 por cento para todas as três amostras.

A três grupos de 3 ratos Sprague-Dawley foram, a cada um, aplicados via I.V. 100 /ul do Controle, Amostra IV e Amostra V. Apôs duas horas, a biodistribuição estava determinada e os resultados são mostrados no Quadro 2.

QUADRO 2 % DA DOSE INJECTADA (¹⁴⁴Ho) EM VÁRIOS TECIDOS

Tecido	Controle*¹	Amostra IV^a	Amostra V^a
Esqueleto»	53	' ⁴⁶	⁴³
Fígado	0,07	0,05	0,07
Rlna	0,60	0,30	0,30
Baço	0,01	0,01	0,01
Músculos*»	0,34	0,34	0,43
Sangue®	0,08	0,20	0,22

a foi derivado através da multiplicação da % no fémur por 25.

b foi estimado como 43% do peso corporal.

c foi estimado a 6,5% do peso corporal.

d foi a média de 3 ratos.

Os dados indicam que a biodistribuição ê similar para todas as três amostras.

Exemplo 4: Método D

Um conjunto contendo Ca (Conjunto Ca) (1:1 mol de Ca.EDTMP) foi preparado através da agitação dos reagentes a seguir a um pH = 1,97.

QUADRO 3

Reagente	9	mmol	ml
água	-	-	30
EDTMP (96%)	2,198	4,84	-
CaCQH)., (95%)	0,3786	4,83	-

pH foi então ajustado com NaOH Ο,ΙΝ. A um pH = 1,97, a solução era límpida. A um pH =2,8 a 3, a solução ê turva. A um pH = aproximadamente 5,8, a solução era límpida. A um pH = aproximadamente 10,5 a solução era límpida.

método preferido para preparar o conjunto Ca foi pesar o Ca(OH)? sólido e o EDTMP mm béquer, adicionar água e agitar até ficar límpida: ajustar o pH acima de 6.

pH pode então ser ajustado para 9,2 e seca por congelamento para obter a formulação desejada na forma de conjunto. Uma adição de solução de Sm ao conjunto 153 forma o complexo Sm-EDTMP, que então pode ser injectado.

Exemplo 5: Método D

53

A formulação Sm-EDTMP foi preparada através da reconstituição de um conjunto Ca de 3 ml do Exemplo (1:1 mol de Ca:EDTMP). 0 conjunto foi reconstituído usando-se 3 x 10~^M Sm em solução de HC1 a Q,1N, adicionado(SPIKED)

153 de Sm e o pH foi ajustado para 7,8 (Exemplo VI). Uma for153 mulação Sm-EDTMP (2:1 de Ca:EDTMP) foi preparada através de uma modificação do procedimento do Exemplo 4. 0 conjunto foi -4 reconstituído usando-se 3 x 10 M Sm em solução de HC1 a Ο,ΙΝ,

153 adicionado (SPIKED) de Sm e o pH foi ajustado para 7,2 (Amostra VII). Também um conjunto de 6 ml como controlo, sem Ca, foi reconstituído com 6,0 ml de 3 x 10^M Sm em solução de HC1 a O,1N, adicionado (SPIKED) de ^^Sm e o pH foi ajustado para 7,5. A percentagem de Sm (todos os isótopos de Sm) como um complexo, foi determinada por cromatografia de permuta catiónica como sendo K mais 99 por cento.

Em três ratos Sprague-Dawley foram injectados via I.V. 100 Ail de solução de Sm-EDTMP. Os ratos foram mortos 2 horas após a injecção. A quantidade de actividade em vãrios tecidos foi determinada através de comparação da contagem no tecido (medido usando um contador gama Nal) contando-se em volumes de 100 /il padrão, a solução armazenada e o Quadro 4 mostra os resultados:

QUADRO 4 % DA DOSE INJECTADA (¹⁵³Sm) EM VÁRIOS TECIDOS

Tecido	Controlt*	Amostra IV® Ílíl)	Amostra V^cl (2:1?
Esqueleto»*	44	37	38
F(gado	0,14	0,15	0,20
Rins	0,36	0,48	0,48
Baço	0,01	0,01	0,01
Músculos¹»	0,53	0,60	0,96
Sangue®	0,21	0,37	0,51

a foi derivado através da multiplicação da % no femur por 25.

b foi estimado como 43% do peso corporal.

c foi estimado a 6,5% do peso corporal.

d foi a média de 3 ratos.

Exemplo 6: Método D

Um conjunto Ca de 3 ml, conforme prepai rado no Exemplo 4, foi reconstituído com 3,0 ml de 3 x 10’⁴M

SmClg em HC1 a O,1M. Dois ml da solução foram verificados quanto ao pH e descobriu-se que estava entre 7,0 e 8,0 atraTM vês da tira de pH colorpHast A solução foi adicionada (SPIKED) de 1-2 yUl de solução de ¹⁵³Sm como um rastreador.

De uma maneira similar, um conjunto controlo, com Na, (Sem Ca, preparado como no Exemplo 3) foi reconstituído. Também um conjunto Ca reconstituído para conter 48,3 mCi/ml de Sm foi congelado em gelo seco. Após 21 dias a formulação congelada foi descongelada e usada.

Em cinco ratos Sprague-Dawley foram injectados via I.V., solução de 100 ui da formulação de controlo, em cinco ratos Sprague-Dawley foram injectados 100 pl da formulação do conjunto Ca com 21 dias, recentemente descon gelada, e em 4 ratos Sprague-Dawley foram injectados solução de 100 /jI da formulação do conjunto Ca (com o rastreador ^,53Sm).

Os ratos foram mortos 2 horas após a injecção. A quantidade de actividade nos vãrios tecidos foi determinada através da comparação da contagem no tecido (medido usando um contador gama Nal) contando-se em volumes de 100 ai 1 padrão da solução armazenada. A dose em vários tecidos ê mostrada no Quadro 5 abaixo.

QUADRO 5 % DA DOSE INJECTADA (¹⁵³Sm) EM VÁRIOS TECIDOS

Tec1 do	Controle*· Sem Ca	Conjto C*^d 21 dias de congel amto,	Conjto, Ca* Recentemte. Adiclon.
Esqueleto*	53	50	50
Fígado	0,24	0,21	0,21
Rins	0,49	0,41	0,41
Baço	0,01	0,01	0,01
Músculos·»	1,18	0,92	0,92
Sangue·»	0, ÍG	0,21	0,20
foi derivado através da multiplicação da %	no femur poi
foi estimado como 43% do peso corporal.
foi estimado a	6,5% do peso	corporal.
foi a média de	5 ratos.

e foi a média de 4 ratos.

Exemplo 7: Método D

Num béquer de 600 ml, contendo um agitador magnético, foram adicionados 18,210 g (40,126 mmols) de EDTMP, 2,678 g (36,140 mmols) de Ca(OH)₂, e 400 ml de ãgua.

A mistura foi agitada durante uma hora a temperatura ambiente e a maioria dos sólidos foi dissolvida. 0 pH foi vagarosamente aumentado usando uma solução de NaOH a 50 por cento, e a agitação continuou atê que todos os sólidos dissolvessem. Quando a mistura se tornou homogénea, o pH foi vagarosamente aumentado para 9,2 usando uma solução de NaOH a 50 por cento. (A solução tornou-se turva ao pH de 3,6 e tornou-se homogénea novamente a um pH de 5,8). A solução foi transferida a um frasco volumétrico de 500 ml e foi trazida até 500 ml através da adição de ãgua; o pH era 9,17. A solução foi então filtrada através de um filtro de 0,45 micron e colocada em conjuntos múltiplos de 3, 6 e 18 ml. Os conjuntos foram congelados usando um banho de gelo seco-acetona e então colocados numa secadora por congelamento. Após 4 dias, os conjuntos foram removidos, selados, evacuados, rotulados e armazenados.

Um conjunto Ca de 3 ml mencionado acima junto com um conjunto controlo (Na), foram, cada um, reconstituídos usando 3 ml de 3 x 10“⁴M Sm em HC1 a 0,1 M, adiciona do (SPIKED) com quantidades de rastreador de Sm (1 a 2/ul). A percentagem de complexo foi determinada através de cromatografia de permuta catiónica e em cada um foi determinado como sendo de 99 por cento. 0 pH de ambos estava entre 7 e 8. Três alíquotas de 100 μ1 de cada conjunto foram coletadas para serem usadas como padrões.

Em cinco ratos Sprague-Dawley (150 a 200 g) foram injectados via I.V., 100 ul do conjunto Ca reconstituído e em quatro ratos Sprague-Dawley foram injectados 100 /Π do conjunto de controlo reconstituído. Após um período

de'2 horas, os ratos foram sacrificados e amostras de tecido foram colhidas. As amostras de tecido foram contadas junto com os padrões e a biodistribuição foi determinada. Os resultados são mostrados no Quadro 6.

QUADRO 6 % DA DOSE INJECTADA (¹⁵³Sm) EM VÁRIOS TECIDOS

Tecido Conjunto Ca Conj. Centrol© Na

X da dose* % da dose¹¹

ósseo	50	53
Fígado	0,21	0,24
Rins	0,41	0,49
Baço	0,01	0,01
Músculo	0,92	1,18
Sangue	0,02	O,1Ú
Urlna*	52	51

média de 5	ratos
média de 4	ratos
encontrada	no papel na gaiola

As duas formulações aparentam ter bio distribuição equivalentes.

Exemplo 8 e Exemplo Comparativo B:Método D

Quando uma formulação de conjunto Ca foi comparada a uma formulação de conjunto Na, com ambas for mulações administradas a ratos Sprague-Dawley através de injecção I.V., o conjunto Ca tinha um LD5Q de 3,5 vezes maior que 0 conjunto Na. Ambos os conjuntos foram preparados pelo procedimento do Exemplo 5. Os resultados de biodistríbuição dos conjuntos foram similares. Devido ao L%g aumentado, 0 conjunto Ca proporciona um factor de segurança adicional.

Exemplo 9: Método D

CO

Uma formulação Sm-EDTMP foi preparada através da reconstituição de um conjunto de 3 ml preparado através do procedimento do Exemplo 3. 0 conjunto foi reconstituído através da adição de 3 ml de solução Sm em HC1 a O,1M. 0 conjunto reconstituído continha 3 x 10“⁴M de Sm e 35 mg/ml de EDTMP.

A percentagem de Sm como um complexo foi determinada por cromatográfia de permuta catiónica como sendo >99 por cento. Em dois ratos Sprague-Dawley foram injectados, via I.M. na coxa direita, e em mais dois ratos foram injectados via S.C. acima da clâvicula no pescoço. Cada

53 rato recebeu 100 jul de solução de Sm.

Os ratos foram mortos 2 horas após a injecção. A quantidade de actividade em vãrios tecidos foi determinada por comparação das contagens nos tecidos (medida usando um contador gama Nal) contando em volumes de 100 jul padrão da solução armazenada. A dose nos vãrios tecidos ê mostrada no Quadro 7 abaixo e comparada a injecção via I.V. feitas similarmente.

QUADRO 7 % DE DOSE INJECTADA (¹⁵³Sm) EM VÁRIOS TECIDOS

Tecido	S.C.rf	I ,Η.<·	I ,V.*'
Esqueleto»·	49	45	50
Fígado	0,14	0,35	0,14
Rins	0,32	0,32	0,36
Baço	0,006	0,005	0,001
Músculo’»	0,40	0,053	0,22
Sangue»	0,45	0,35	0,12

a Foi derivado através da multiplicação da % no femur por 25.

b Foi estimada como 43% do peso corporal.

c Foi estimada como 6,5% do peso corporal.

d Média de 2 ratos.

Os resultados do Quadro 7 indicam que a biodístribuição ê similar, independente do modo de administração.

Exemplo 10

Cinco conjuntos de 3 ml de EDTMP, preparados pelo processo do exemplo 4, foram reconstituídos com as soluções mostradas no quadro 8 e mediu-se o pH.

QUADRO 8

Concentração ácida

[Ca] M	[HCI] M	PH
0.0375	0.087	7.42 ±0.03
0.060	0.072	7.40 + 0.06
0.070	0.065	7.39 + 0.05

Soluções contendo cerca de 1 mCi/ml

153 -4 de Sm a uma concentração Sm total de 3 x 10 M com Ca sao mostrados no quadro anterior para cada amostra e o rendimento

complexo foi determinado como sendo 99 por cento para cada amostra.

As soluções ácidas contendo cálcio descritas no quadro 8 são utilizadas para titular os conjuntos j EDTMP de 3,0 ml existentes para estudar o efeito do volume da solução utilizada para a reconstituição do pH. Dois ml de cada solução são adicionados a cada conjunto e ê medido o pH. Outros 2,0 ml são adicionados em 200 ml alíquotas com medições de pH tiradas depois de cada adição. Os resultados ) mostraram que para todas as soluções até 3,6 ml podem ser adicionadas a conjuntos de 3,0 ml sem queda do pH abaixo de 7,0.

Foi determinado os efeitos do cálcio adicionado por osmolalidade. As soluções do quadro 8 foram utilizadas para reconstituir conjuntos de EDTMP de 3 ml. Segujn do a reconstituição o YL) da solução foi medido e determinado por osmolalidade, através da queda do ponto de congelamento. Os resultados são mostrados no Quadro 9.

QUADRO 9

EFEITO DA ADIÇÃO DE CÁLCIO EM SOLUÇÃO MOLAL

ICsU	CHC11	pH	,Mol al idade por 1000 g. de solvente	X de Isotôn i coa
O	0,11	7,50	0,491	164
0,0375	0,087	7,40	0,558	186
0,060	0,072	7,35	0,595	198
0,070	0,065	7,35	0,606	202

Os dados do Quadro 9 demonstram que os conjuntos conforme formulados são hipertônicos, e que adicionando Ca as soluções de rádio-nuclídeos usadas para reconstituir os conjuntos, apenas aumenta levemente o resultado hipertônico. Numa discussão sobre a influência da formulação na rota de administração de remédios, é sabido que com soluções intravenosas a isotonicidade se torna menos importante, contanto que a administração seja suficientemente lenta para permitir a diluição ou ajuste no sangue /veja, por exemplo,

P. P. DeLuca e J. C. Boylan, Formulation of Small Volume Parenterals in Pharrnaceutical Dosage Forms, Parenteral Medications, Vol. 1, pag. 140, eds. K. E. Avis,L. Lachman, e H.A. Lieberman, pub. Mareei Dekker Inc., N.Y.(1984)7.

Exemplo 11.Método D

153

Para testar os efeitos agudos de Sm1 c o

-Na-EDTMP e Sm-(Ca/Na)-EDTMP na frequência cardíaca e pulsação e níveis sêricos de cálcio logo apôs a injecção via I.V. em cachorros Beagle, o experimento a seguir foi executado. Os efeitos da taxa de infusão foram também medidos.

¹⁵³Sm-Na-EDTMP, Amostra VIII, foi preparado a partir de 630 mg de EDTMP e 414 mg de NaOH, que foram 1 iofi1izados e esterilizados, e então reconstituídos com Sm estéril, 3 x 10~⁴M em HC1 a O,1M.

¹⁵³Sm-(Ca/Na)-EDTMP, Amostra IX, foi preparado a partir de 630 mg de EDTMP, 245 mg de NaOH e mg de Ca(OH),_>} que foram liofilizados e esterilizados e então reconstituídos com Sm estéril, 3 x 10 em HC1 a 0,01M.

Cada complexo usado para injecção foi preparado através da adição de 18,0 ml de solução de Sm a respectiva formulação de EDTMP liofilizada. A concentração final para a formulação foi 35 mg/ml de complexo Sm-EDTMP.

As formulações foram usadas dentro de 15 minutos da preparação, com a solução restante sendo congelada para análise.A análise das formulações usadas para injecção confirmaram que as injecções estavam nas concentrações desejadas.

Cachorros, jovens , adultos, machos, de aproximadamente 33 semanas de vida e pesando de 8,1 a 10,9Kg foram usados. Foi efectuado um exame físico completo nos cachorros através de um veterinário, e foi deixado que os mesmos se aclimatassem ao ambiente do laboratório durante pe lo menos 30 dias, eles foram revacinados contra cinomose, adenovirus da hepatite tipo 2, parainfluenza e parvovirose,

TM usando Adenoimmune -7-1 (fabricada peia Tech America, Biologics Corp.). Os cachorros foram identificados individualmente através de um número único tatuado na orelha pelo fornecedor. Os cachorros foram mantidos sob os procedimentos estabelecidos pela American Association for the Accreditation of Laboratory Animal Care. 0 laboratório usado para os testes ê reconhecido.

A um cachorro macho em jejum, seleccionado aleatoriamente, foi dada uma dose via I.V. de 30 mg/kg por peso corporal de ambas Amostras VIII ou IX através de catêter inserido na veia cefálica. 0 local da injecção foi raspado e preparado com solução antisséptica antes da cateterização. A injecção foi aplicada na velocidade de aproximadamente 2,0 ml/min (70 mg/min), de modo que a aplicação levou aproximadamente quatro minutos.

A dois cachorros machos Beagle adicionais foram administrados os mesmos níveis de dosagem de ambas as Amostras VIII e IX, tão rãpidamente quanto possível, a apro-33-

ximadamente 15 ml/min. Os métodos de infusões foram como os anteriores. Isto foi feito aproximadamente 2 semanas apôs a primeira injecção, para verificar os resultados relatados anteriormente referente a velocidade de infusão.

Amostras sanguíneas foram obtidas da veia jugular para anãlise de soro de cálcio e proteína total, imediatamente antes da injecção e após o término da injecção e também a aproximadamente 5, 15, 30 e 45 minutos de 1, 2 e 4 horas após a injecção. 0 pescoço ventral foi raspado e preparado com solução antisséptica como acima. 0 cachorro foi moni torado quanto a efeitos clínicos durante este período e a frequência cardíaca e pulsação foram registradas em cada um destes momentos.

Como apenas cachorros individuais compreendem cada um destes regimes de tratamento, quadros resumidos parecem inapropriados. Entretanto, as injecções via I.V. lentas numa velocidade de 2,0 ml/min (70 mg/min.(de complexo Sm-EDTMP) numa dose de 30 mg/kg por peso do corpo de ambas as Amostras VIII ou IX não produziram quaisquer efeitos clínicos. A frequência cardíaca aumentou em 7 a 10 por cento para cada uma das formulações:entretanto, este resultado foi considerado meramente uma consequência do excitamento, visto que a frequên cia cardíaca canina pode variar acentuadamente em resposta a estímulo ambiental. Embora ocorreram modificações mínimas no soro de cálcio total, as modificações são difíceis de atribuir ao tratamento.

Quando a velocidade de injecção foi aumentada para tão rápido quanto possível (aproximadamente 15 ml/min) os sinais clínicos foram notados com cada uma das amostras. Movimentos musculares involuntários, principalmente tremores leves de todos os musculos, com respiração aumentada e gemidos foram notados para o cachorro que recebeu a Amostra VIII.Es-34-

tes efeitos foram primeiramente observados aproximadamente 20 segundos após a aplicação ter sido iniciada, e duraram aproximadamente 2 minutos. 0 cachorro parecia normal aproximadamen te 5 min após a injecção. A frequência cardíaca aumentou em >50 por cento durante este mesmo periodo de tempo. Os níveis sêricos totais de cálcio foram diminuídos durante este periodo;entretanto, esta diminuição foi relativamente pequena e foi acompanhada por modificações similares proteína sêrica total. Foi impossível atribuir quaisquer efeitos definitivos no cálcio total devido a injecção.

Embora o cachorro recebendo a Amostra IX também mostrou sinais clínicos, ê incerto se estes sinais foram movimentos involuntários, pois os movimentos eram carac terísticas de resistência â imobilização, como pareceu ser o caso do cachorro que recebeu a Amostra VIII. 0 periodo de au mento de actividade do cachorro durou apenas aproximadamente 30 segundos e o cachorro parecia normal 100 segundos apôs a injecção. A frequência cardíaca aumentou apenas aproximadamente 13 por cento. Os níveis sêricos de cálcio aumentaram durante o periodo pós-injecção, mas modificações concomitantes na proteína total tornam este resultado difícil de interpretar.

Em resumo, cachorros que receberam 30 mg/kg de ambas as Amostras VIII ou IX através de injecção via I.V. lenta, não apresentaram efeitos atribuíveis à injecção. Quando a injecção foi aplicada rapidamente (em bolo), os sinais clínicos foram notados para cada uma das amostras. Os efeitos foram mais pronunciados na Amostra VIII que na Amostra IX.

Outras modalidades da invenção serão aparentes para técnicos especializados na arte a partir de consideração desta especificação ou prática da invenção apresentadas nesta. Pretende-se que a especificação e exemplos sejam considerados apenas como exemplos, com o verdadeiro âm bito e espirito da invenção sendo indicados através das reivindicações a seguir.

REIVINDICAÇOE S

I^a. - Processo para a preparação de uma formulação radiofarmaceutica caracterizado por se fazer reagir um radionucleotideo com um ligante, ou um sal fisiologicamente aceitâvel;se congelar o complexo; e então se descongelar o complexo antes da utilização.

2^a. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o congelamento ser efectua do usando azoto líquido.

3^a. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o congelamento ser efectua do usando gelo seco.

4^a. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o congelamento ser efectua do usando cetona-gelo seco.

5^a. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o radionucleotideo ser Samãrio-153, HÓlmio-166, Itérbio-175, Lutécio-177, Itrio-90 ou Gadolíneo-159.

6^a. - Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por o radionucleotideo ser Samârio-153 ou Hólmio-166.

7^a. - Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por o radionucleotideo ser Samário-153.

8*. - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por o ligante ser ácido etilenodiaminatetrametilenofosfónico, ãcido dietilenotriaminapentametilenofosfónico, ãcido hidroxietiletilenodiaminatrimetilenofosfónico, ãcido nitrilotrimetilenofosfônico, ãcido tris(2-aminoetil)-aminahexametilenofosfónico, ãci do 1-carboxietilenodiaminatetrametilenofosfónico, ácido bis (aminoetilpiperazina)tetrametilenofosfónico, ou ãcido 1,4,7, 10,tetraazaciclo-dodecanotetrametilenofosfónico, ou seus sais fisiolôgicamente aceitáveis.

9^a. - Processo de acordo com a reivindicação 8 caracterizado por o ligante ser ácido etilenodiaminatetrametilenofosfónico, ácido dietilenotriaminapentametilenofosfónico, ácido hidroxietiletilenodiaminatrimetilenofosfónico, ãcido tris(2-aminoeti1)aminahexametilenofosfónico, ácido

1-carboxietilenodiaminatetrametilenofosfónico, ãcido bis(amino-etilpiperazina)tetrametilenofosfónico, ou ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecanotetrametilenofosfónico, ou seus sais fisiológicamente aceitáveis.

Processo de acordo com a reivindiligante ser ácido etilenodiaminaum seu sal fisiológicamente acei10^a. cação 9 caracterizado por o tetrametilenofosfónico, ou tável.

11^a. - Processo de acordo com a reivindi cação 10 caracterizado por o radionucleotideo ser Samãrio-153

12^a. - Processo de acordo com a reivindi cação 10 caracterizado por o radionucleotideo ser HÓlmio-166.

13^. - Processo de acordo com qual-

Claims

13^. - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores onde um metal bivalen te foi adicionado, caracterizado por compreender qualquer uma das seguintes etapas:

(A) adicionar um metal bivalente a um complexo de metal radioactivo-ligante conforme reivindicado na reivindicação 1 antes de congelar a formulação; ou (B) congelar, e descongelar um complexo de metal radioactivo-ligante conforme reivindicado na reivindicação 1, e então adicionar um metal bivalente; ou (C) congelar, novamente e então descongelar a formulação da Etapa B; ou (D) adicionar um metal bivalente a uma solução de um ião de metal radioactivo, adicionar um ligante para formar o complexo, congelar o complexo, e então descongelar antes da utilização; ou (E) adicionar um metal bivalente, sob a forma de cloreto ou hidróxido, a um ligante, e então ajustar o pH com uma base, secar por congelamento a solução para formar uma formulação liofilizada de metal bivalente-1igante, reconstituindo a formulação usando uma solução ácida contendo o ião de metal radioactivo, congelar o complexo, e então descongelar antes da utilização.

14⁸. - Procesdo para a preparação de uma formulação radiofarmaceutica contendo um metal bivalente e um radionucleotideo na forma de complexo como ligante, caracterizado por compreender qualquer uma das seguintes etapas:

(A) adicionar um metal bivalente a um complexo de metal radioactivo-1igante conforme reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 12; ou (B) adicionar um metal bivalente a uma solução de um ião de metal radioactivo, e então adicionar um ligante à solução radioactva para formar o complexo; ou (C) co-administrar a um animal uma formulação radiofarmaceutica com uma solução de ião de metal bivalente, usando duas injecções separadas a aproximadamente no mesmo momento; ou (D) adicionar um metal bivalente, sob a forma de cloreto ou hidróxido, a um ligante, e então ajustar o pH com uma base; ou (E) secar por congelamento a solução da Etapa (D) para formar uma formulação liofilizada de metal bivalente-ligante, reconstituído a formulação usando uma solução ácida contendo o ião de metal radioactivo.

15^a. - Processo de acordo com a rei+2 vindicação 14 caracterizado por o metal bivalente ser Fe , +2

Mn , ou um ião de metal alcalino terroso.

16^a. - Processo de acordo com a reivindicação 15 caracterizado por o ião de metal alcalino terroso ser Be⁺², Mg⁺², Ca⁺², Sr⁺² ou Ba⁺.

17^a. - Processo de acordo com a reivindicação 16 caracterizado por o ião de metal alcalino terro+2 so ser Ca .

183. _ Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 17 caracterizado por o ligante ser ácido etilenodiaminatetrametilenofosfónico.

19^a. - Processo de acordo com a reivindicação 18 caracterizado por a proporção molar de metal bivalente para ácido etilenodiaminatetrametilenofosfõnico ser de 0,25 para 1.

20^a. - Processo de acordo com a reivindicação 19 caracterizado por a proporção molar de metal bivalente para ácido etilenodiaminatetrametilenofosfônico ser de 0,5 para 1.

21^a. - Processo de acprdo com a reivindicação 20 caracterizado por a proporção molar de metal bivalente para ácido etilenodiaminatetrametilenofosfónico ser de 0,75 para 1.

22^a. - Processo de acordo com a reivin dicação 21 caracterizado por a proporção molar de metal bivalente para ácido etilenodiaminatetrametilenofosfônico ser de 0,9 para 1.

23^a. - Processo de acordo com a reivin +2 dicação 22 caracterizado por o retal bivalente ser Ca .

24^a. - Processo de acordo com a reivin dicação 14, Etapa E, caracterizado por a solução ácida ter uma concentração de ácido clorídrico de 0,001 a IN.

25â. - Processo de acordo com a reivindicação 24, caracterizado por a solução ácida ter uma concentração de ácido clorídrico de 0,01 a IN.

26^a. - Processo de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por o radionucleotideo ser um Samário-153, HÔlmio-166, Itêrbio-175, Lutêcio-177, Itrio-90, ou Gadolíneo-159.

27^a. - Processo de acordo dicação 26 caracterizado por o radionucleotideo -153 ou Hólfflio-166.

com a reivinser Samáriodicação

28^a. - Processo de acordo com a 27 onde se caracteriza por o radionucleotideo reivinser Samãrio-153.

29^a. - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 28, caracterizado por o ligante ser ácido etilenodiaminatetrametilenofosfónico, ácido dietilenotriaminapentametilenofosfónico, ácido hidroxietiletilenodiaminatrimetilenofosfónico, ácido nitrilotrímetilenofosfónico, ácido tris(2-aminoetil)-aminahexametilenofosfónico, ácido 1-carboxietilenodiaminatetrametilenofosfónico, ácido bis(aminoetilpiperazina)tetrametilenofo$fónico, ou ácido 1,4,7,10-tetraazaciclo-dodecanotetrametilenofosfónico, ou seus sais fisiológicamente aceitáveis.

30^a. - Processo de acordo com a reivindicação 29 caracterizado por o ligante ser etilenodiaminatetra^ metilenofosfónico, ácido dietilenotriaminapentametilenofosfónico, ácido hidroxietiletilenodiaminatrimetilenofosfónico, ácido tris(2-aminoeti1)aminahexametilenofosfónico, ácido 1-car boxietilenodiaminatetrametilenofosfónico, ácido bis(amino-etH piperazina)tetrametilenofosfónico, ou ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecanotetrametilenofosfónico, ou seus sais fisiológica-42mente aceitáveis.

31*. - Processo de acordo com a reivindicação 30 caracterizado por o ligante ser ácido etilenodiaminatetrametilenofosfônico, ou seus sais fisiológicamente aceitáveis.

32*. - Processo de acordo com a rei153 vindicação 14 caracterizado por compreender Samário-ácido etilenodiaminatetrametilenofosfónico, ou seus sais fisiolôgicamente aceitáveis.

33^a. - Processo de acordo com a rei 1 fi fi vindicação 14 caracterizado por compreender HÓlmio-âcido etilenodiaminatetrametilenofosfónico, ou seus sais fisiológicamente aceitáveis.

Lisboa, 17 de Junho de 1991 \ '_

J. PEREIRA DA CRUZ

Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR COROON, 10-A 3.»

1200 LJSBOA

FOLHA 1 (2 FOLHAS)

FIG. I

O (horas)