CN106188165B - 一种鼠曲草总黄酮的制备方法 - Google Patents

一种鼠曲草总黄酮的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种鼠曲草总黄酮的制备方法,包括如下步骤:(1)将干燥的鼠曲草粉碎成鼠曲草粉;(2)鼠曲草粉加入浓度为50%~70%的乙醇提取剂,并沉浸30min~60min,然后采取0.5h~1h超声波提取或加热回流提取,再依次经过合并提取液、抽滤、减压浓缩和真空干燥,得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末;(3)将鼠曲草黄酮粗提物固体粉末加入到50%乙醇水溶液中得到混合液,再将混合液依次运用固定相金属离子螯合色谱层析柱分离、纯水洗脱和用1%盐酸‑甲醇洗脱,然后收集通过用1%盐酸‑甲醇洗脱的洗脱液,洗脱液然后依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品。本发明设计合理,操作简单、方便快捷,且高效节能,也更加环保。

Description

一种鼠曲草总黄酮的制备方法
技术领域
本发明涉及天然药物加技术领域,尤其涉及一种鼠曲草总黄酮的制备方法。
背景技术
鼠曲草(Gnaphalium affine D.Don)又名清明草,别名菠菠草、佛耳草、软雀草、软芡、蒿菜、面蒿、清明菜、水萩、无心、无心草、田艾、蓬草、糯米青,为菊科、鼠麹草属植物。《本草拾遗》称“鼠曲草,生平岗熟地,高尺余,叶有白毛,黄花”,已收载于1977年版《中华人民共和国药典》一部中,经究发现,鼠曲草中含较多的黄酮类和二萜类成分,由于黄酮类化合物具有抗氧化、抗过敏、抗炎、抗菌、抗炎、抗突变、抗肿瘤、保肝作用,保护心脑血管系统和抗病毒以及杀虫等广泛的生理活性,且毒性较低,还可以用作食品、化妆品的天然添加剂,如甜味剂、抗氧化剂、食用色素等。常用的总黄酮提取方法有水煎煮法、热回流提取、超声波辅助提取、微波辅助提取等,随后经过大孔吸附树脂等进行进一步富集提取,然而现有的这种提取方式工艺较复杂,流程较长,提取黄酮的效果较差,其次现有技术中要使用有机溶剂,所使用的有机溶剂有甲醇、乙酸乙醇、丙酮等,其有机溶剂用量大、种类多、对环境有较大影响等等。
发明内容
针对现有技术中的不足,本发明提供了一种鼠曲草总黄酮的制备方法,其具有快速高效的提取黄酮,同时所使用的有机溶剂对环境影响较小,有利于环境的保护。
为了实现上述目的,本发明所采取的技术方案是:
一种鼠曲草总黄酮的制备方法,包括如下步骤:
(1)鼠曲草为原料,将干燥的鼠曲草自然阴干后粉碎成鼠曲草粉;
(2)鼠曲草粉加入浓度为50%~70%的乙醇提取剂,并沉浸30min~60min,然后采取0.5h~1h的超声波提取或加热回流提取或冷浸提取,再依次经过合并提取液、抽滤、减压浓缩和真空干燥,最终得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末,所述抽滤后的滤渣重复提取1次,再经过减压浓缩和真空干燥也能够得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末;
(3)将鼠曲草黄酮粗提物固体粉末加入到50%乙醇水溶液中得到混合液,再将混合液依次运用固定相金属离子螯合色谱层析柱分离、纯水洗脱和用1%盐酸-甲醇洗脱,然后收集通过用1%盐酸-甲醇洗脱的洗脱液,洗脱液依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品,收率为18~21%(以生药计),用分光光度法测定总黄酮含量最高可达为85%。
所述步骤(3)中固定相金属离子螯合色谱制备步骤:a,将壳聚糖和聚乙二醇溶于1摩尔每升乙酸水溶液中,所述壳聚糖为2%的去乙酰壳聚糖,所述聚乙二醇为10%聚乙二醇20000,同时加入硅胶,具体的硅胶的粒度为100~200目,然后经过搅拌得到以硅胶为载体的交联壳聚糖;b,以硅胶为载体的交联壳聚糖进行减压和干燥,得到干燥硅胶为载体的交联壳聚糖,干燥硅胶为载体的交联壳聚糖放入到二甲基亚砜液体中,并持续搅拌得到胶状硅胶为载体的交联壳聚糖;c,胶状硅胶为载体的交联壳聚糖中加入氢氧化钠调节PH值为10.0,同时搅拌30分钟,用来去除胶状硅胶为载体的交联壳聚糖中多余的聚乙二醇;d,经过步骤c中去除多余聚乙二醇的胶状硅胶为载体的交联壳聚糖经过过滤沉淀后加入含有0.1摩尔每升氢氧化钠和0.1摩尔每升环氧丙烷的二甲基亚砜溶液,且在60℃中反应8h后形成具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖;e,具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖先用纯水洗净,然后将洗净后的具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖加入到氨水中,且将氨水温度加热到60℃,在60℃下震荡反应4h,再用纯水洗净,最终得到硅胶交联壳聚糖固定相(CTS-SiO2);f,硅胶交联壳聚糖固定相(CTS-SiO2)加入ZnCl2溶液或CuSO4溶液或FeCl3溶液,并用盐酸和氢氧化钠调节PH至5,在常温下通过磁力搅拌器搅拌1h反应得到固定相金属离子螯合色谱填料;g,固定相金属离子螯合色谱填料填装在空色谱柱中,然后用纯水水洗固定相金属离子螯合色谱填料用来去未键和的金属离子,所述金属离子为Zn或Cu或Fe,且Zn或Cu或Fe的浓度均为0.1摩尔每升,最终得到固定相金属离子螯合色谱。
本发明的有益效果:本发明鼠曲草总黄酮的制备是利用固定相金属离子螯合色谱层析出用来实现分离纯化的目的,其总黄酮含量可达80-85%左右,该法具有操作简便、分离效果好、成本低、周期短等优点;本发明所述抽滤后的滤渣重复提取1次,再经过减压浓缩和真空干燥也能够得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末,经过纯水洗脱产生的洗脱液进行收集,通过用1%盐酸-甲醇洗脱收集的洗脱液,然后依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品,从而减少了制备过程中的浪费,更加有利于环保。
附图说明
图1为本发明实施例1的Zn离子螯合色谱制备得鼠曲草总黄酮产品液相色谱图;
图2为本发明实施例1的Cu离子螯合色谱制备得鼠曲草总黄酮产品液相色谱图;
图3为本发明实施例1的Fe离子螯合色谱制备得鼠曲草总黄酮产品液相色谱图;
图4为本发明制备示意图。
具体实施方式
一种鼠曲草总黄酮的制备方法,包括如下步骤:
(1)鼠曲草为原料,将干燥的鼠曲草自然阴干后粉碎成鼠曲草粉;
(2)鼠曲草粉加入浓度为50%~70%的乙醇提取剂,并沉浸30min~60min,然后采取0.5h~1h的超声波提取或加热回流提取或冷浸提取,再依次经过合并提取液、抽滤、减压浓缩和真空干燥,最终得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末,所述抽滤后的滤渣重复提取1次,再经过减压浓缩和真空干燥也能够得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末;
(3)将鼠曲草黄酮粗提物固体粉末加入到50%乙醇水溶液中得到混合液,再将混合液依次运用固定相金属离子螯合色谱层析柱分离、纯水洗脱和用1%盐酸-甲醇洗脱,然后收集通过用1%盐酸-甲醇洗脱的洗脱液,洗脱液依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品,收率为18~21%(以生药计),用分光光度法测定总黄酮含量最高可高达为85%,所述固定相金属离子螯合色谱制备步骤:a,将壳聚糖和聚乙二醇溶于1摩尔每升乙酸水溶液中,所述壳聚糖为2%的去乙酰壳聚糖,所述聚乙二醇为10%聚乙二醇20000,同时加入硅胶,具体的硅胶的粒度为100~200目,然后经过搅拌得到以硅胶为载体的交联壳聚糖;b,以硅胶为载体的交联壳聚糖进行减压和干燥,得到干燥硅胶为载体的交联壳聚糖,干燥硅胶为载体的交联壳聚糖放入到二甲基亚砜液体中,并持续搅拌得到胶状硅胶为载体的交联壳聚糖,通过持续搅拌使得分散更加均匀;c,胶状硅胶为载体的交联壳聚糖中加入氢氧化钠调节PH值为10.0,同时搅拌30分钟,用来去除胶状硅胶为载体的交联壳聚糖中多余的聚乙二醇;d,经过步骤c中去除多余聚乙二醇的胶状硅胶为载体的交联壳聚糖经过过滤沉淀后加入含有0.1摩尔每升氢氧化钠和0.1摩尔每升环氧丙烷的二甲基亚砜溶液,且在60℃中反应8h后形成具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖;e,具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖先用纯水洗净,然后将洗净后的具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖加入到氨水中,且将氨水温度加热到60℃,在60℃下震荡反应4h,再用纯水洗净,最终得到硅胶交联壳聚糖固定相(CTS-SiO2);f,硅胶交联壳聚糖固定相(CTS-SiO2)加入ZnCl2溶液或CuSO4溶液或FeCl3溶液,并用盐酸和氢氧化钠调节PH至5,在常温下通过磁力搅拌器搅拌1h反应得到固定相金属离子螯合色谱填料;g,固定相金属离子螯合色谱填料填装在空色谱柱中,然后用纯水水洗固定相金属离子螯合色谱填料用来去未键和的金属离子,所述金属离子为Zn或Cu或Fe,且Zn或Cu或Fe的浓度均为0.1摩尔每升,最终得到固定相金属离子螯合色谱。
本发明的有益效果:本发明鼠曲草总黄酮的制备是利用固定相金属离子螯合色谱层析柱用来实现分离纯化的目的,其总黄酮含量最高可达80-85%左右,该法具有操作简便、分离效果好、成本低、周期短等优点;本发明所述抽滤后的滤渣重复提取1次,再经过减压浓缩和真空干燥也能够得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末,再将混合液依次运用固定相金属离子螯合色谱层析柱分离、纯水洗脱和用1%盐酸-甲醇洗脱,然后收集通过用1%盐酸-甲醇洗脱的洗脱液,洗脱液依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品,从而减少了制备过程中的浪费,更加有利于环保。
实施例1
如图1所示,1)鼠曲草总黄酮提取:准确称取1kg干燥过的100目鼠曲草粉末,按1∶35的料液比加入一定70%乙醇溶液作提取剂浸润30min左右,置于超声波功率为250W,提取温度为35℃的超声波设备中进行提取,提取时间为60min,提取次数为两次,将两次提取液合并,再经过抽滤、减压浓缩和真空干燥得到156g鼠曲草黄酮粗提物固体粉末;
2)分离纯化:称取鼠曲草黄酮粗提物固体粉末0.1kg,并以1∶6的比例分散于50%的甲醇水溶液,加载于0.5kg的固定相Zn离子色谱中进行分离,再依次用纯水洗脱和用1%盐酸-甲醇洗脱,然后收集通过用1%盐酸-甲醇洗脱的洗脱液,洗脱液依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品,其真空干燥得到纯度为85.2%的鼠曲草黄酮粉末。
实施例2
如图2所示,1)鼠曲草总黄酮提取:准确称取0.5kg干燥过100目鼠曲草粉末,按1∶15的料液比加入一定75%乙醇溶液作提取剂浸润60min左右,加热回流提取时长为60min,提取次数为两次,将两次提取液合并,抽滤,减压浓缩,真空干燥得到103g鼠曲草黄酮粗提物固体粉末;
2)分离纯化:称取鼠曲草黄酮粗提物固体粉末50g,并以1∶6的比例分散于50%的甲醇水溶液中,加载于0.2kg的固定相Cu离子色谱中进行分离,再依次用纯水洗脱和用1%盐酸-甲醇洗脱,然后收集通过用1%盐酸-甲醇洗脱的洗脱液,洗脱液依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品,其真空干燥得到纯度为66.5%的鼠曲草黄酮粉末。
实施例3
如图3所示,1)鼠曲草总黄酮提取:准确称取0.1kg干燥过100目鼠曲草粉末,按1∶15的料液比加入一定75%乙醇溶液作提取剂浸润60min左右,置于超声波功率250W,提取温度为35℃的超声波设备中进行提取,提取时间为60min,提取次数为两次,将两次提取液合并,抽滤,减压浓缩,真空干燥得到14.3g鼠曲草黄酮粗提物固体粉末;
2)分离纯化:称取鼠曲草黄酮粗提物固体粉末10g,并以1∶6的比例分散于50%的乙醇水溶液中,加载于40g的固定相Fe离子色谱中进行分离,再依次用纯水洗脱和用1%盐酸-甲醇洗脱,然后收集通过用1%盐酸-甲醇洗脱的洗脱液,洗脱液依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品,其真空干燥得到纯度为68.6%的鼠曲草黄酮粉末。
如图4所示,本发明在操作过程当中,
(1)鼠曲草为原料,将干燥的鼠曲草自然阴干后粉碎成鼠曲草粉;
(2)鼠曲草粉加入浓度为50%~70%的乙醇提取剂,并沉浸30min~60min,然后采取0.5h~1h的超声波提取或加热回流提取或冷浸提取,再依次经过合并提取液、抽滤、减压浓缩和真空干燥,最终得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末,所述抽滤后的滤渣重复提取1次,再经过减压浓缩和真空干燥也能够得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末;
(3)将鼠曲草黄酮粗提物固体粉末加入到50%乙醇水溶液中得到混合液,再将混合液依次运用固定相金属离子螯合色谱层析柱分离、纯水洗脱和用1%盐酸-甲醇洗脱,然后收集通过用1%盐酸-甲醇洗脱的洗脱液,洗脱液依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品,所述固定相金属离子螯合色谱制备步骤:a,将壳聚糖和聚乙二醇溶于1摩尔每升乙酸水溶液中,所述壳聚糖为2%的去乙酰壳聚糖,所述聚乙二醇为10%聚乙二醇20000,同时加入硅胶,具体的硅胶的粒度为100~200目,然后经过搅拌得到以硅胶为载体的交联壳聚糖,然后加以Zn2+;b,以硅胶为载体的交联壳聚糖进行减压和干燥,得到干燥硅胶为载体的交联壳聚糖,干燥硅胶为载体的交联壳聚糖放入到二甲基亚砜液体中,并持续搅拌得到胶状硅胶为载体的交联壳聚糖,通过持续搅拌使得分散更加均匀;c,胶状硅胶为载体的交联壳聚糖中加入氢氧化钠调节PH值为10.0,同时搅拌30分钟,用来去除胶状硅胶为载体的交联壳聚糖中多余的聚乙二醇;d,经过步骤c中去除多余聚乙二醇的胶状硅胶为载体的交联壳聚糖经过过滤沉淀后加入含有0.1摩尔每升氢氧化钠和0.1摩尔每升环氧丙烷的二甲基亚砜溶液,且在60℃中反应8h后形成具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖;e,具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖先用纯水洗净,然后将洗净后的具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖加入到氨水中,且将氨水温度加热到60℃,在60℃下震荡反应4h,再用纯水洗净,最终得到硅胶交联壳聚糖固定相(CTS-SiO2);f,硅胶交联壳聚糖固定相(CTS-SiO2)加入ZnCl2溶液或CuSO4溶液或FeCl3溶液,并用盐酸和氢氧化钠调节PH至5,在常温下通过磁力搅拌器搅拌1h反应得到固定相金属离子螯合色谱填料;g,固定相金属离子螯合色谱填料填装在空色谱柱中,然后用纯水水洗固定相金属离子螯合色谱填料用来去未键和的金属离子,所述金属离子为Zn或Cu或Fe,且Zn或Cu或Fe的浓度均为0.1摩尔每升,最终得到固定相金属离子螯合色谱,鼠曲草提取物同时经过纯水洗脱产生的洗脱液进行收集聚乙二醇-硅胶,聚乙二醇-硅胶解离洗脱得到鼠曲草总黄酮,收率为18~21%(以生药计),用分光光度法测定总黄酮含量最高可高达为85%。

Claims (5)

1.一种鼠曲草总黄酮的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)鼠曲草为原料,将干燥的鼠曲草自然阴干后粉碎成鼠曲草粉;(2)鼠曲草粉加入浓度为50%~70%的乙醇提取剂,并沉浸30min~60min,然后采取0.5h~1h的超声波提取,再依次经过合并提取液、抽滤、减压浓缩和真空干燥,最终得到鼠曲草黄酮粗提物固体粉末;(3)将鼠曲草黄酮粗提物固体粉末加入到50%乙醇水溶液中得到混合液,再将混合液依次运用固定相金属离子螯合色谱层析柱分离、纯水洗脱和用1%盐酸-甲醇洗脱,然后收集通过用1%盐酸-甲醇洗脱的洗脱液,洗脱液依次通过减压浓缩回收和真空干燥得到鼠曲草黄酮产品,所述固定相金属离子螯合色谱制备步骤:a,将壳聚糖和聚乙二醇溶于乙酸水溶液中,同时加入硅胶,然后经过搅拌得到以硅胶为载体的交联壳聚糖;b,以硅胶为载体的交联壳聚糖进行减压和干燥,得到干燥硅胶为载体的交联壳聚糖,干燥硅胶为载体的交联壳聚糖放入到二甲基亚砜液体中,并持续搅拌得到胶状硅胶为载体的交联壳聚糖;c,胶状硅胶为载体的交联壳聚糖中加入氢氧化钠调节p H值为10.0,同时搅拌30分钟,用来去除胶状硅胶为载体的交联壳聚糖中多余的聚乙二醇;d,经过步骤c中去除多余聚乙二醇的胶状硅胶为载体的交联壳聚糖经过过滤沉淀后加入含有氢氧化钠和环氧丙烷的二甲基亚砜溶液,且在60℃中反应8h后形成具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖;e,具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖先用纯水洗净,然后将洗净后的具有活性环氧基团交联基质的硅胶为载体的交联壳聚糖加入到氨水中,且将氨水温度加热到60℃,在60℃下震荡反应4h,再用纯水洗净,最终得到硅胶交联壳聚糖固定相;f,硅胶交联壳聚糖固定相加入ZnCl2溶液或CuSO4溶液或FeCl3溶液,并用盐酸和氢氧化钠调节p H至5,在常温下通过磁力搅拌器搅拌1h反应得到固定相金属离子螯合色谱填料;g,固定相金属离子螯合色谱填料填装在空色谱柱中,然后用纯水水洗固定相金属离子螯合色谱填料,最终得到固定相金属离子螯合色谱。
2.如权利要求1所述一种鼠曲草总黄酮的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中超声波提取可替换为加热回流提取或冷浸提取。
3.如权利要求1所述一种鼠曲草总黄酮的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中a步骤的加入硅胶的粒度为100~200目。
4.如权利要求1所述一种鼠曲草总黄酮的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中a步骤的壳聚糖为2%的去乙酰壳聚糖。
5.如权利要求1所述一种鼠曲草总黄酮的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中a步骤的聚乙二醇为10%聚乙二醇20000。
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