CN106176281A - 载活性成分的丝素蛋白/ha复合微球冻干粉及制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种载有活性成分的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉,由以下组分组成:丝素蛋白10%~50%,化妆品活性成份10%~20%,透明质酸10%~20%,EDC 5%~13%,冻干保护剂20%~40%,水1%~4%;其中,化妆品活性成份包括美白活性成份和保湿活性成份。本发明还公开了该复合微球冻干粉的制备方法,先将活性成分包裹入丝素蛋白微球,再用透明质酸修饰微球,得到最终载有活性成分的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉。本发明还公开了其应用,本发明复合微球冻干粉可加入化妆品中,起到美白保湿的功效。本发明复合微球冻干粉机械性能好,能延缓化妆品活性成份的缓释,且可提高化妆品活性成份的稳定性,并缩短丝素蛋白微囊冻干粉复溶时间。
Description
技术领域
本发明属于丝素蛋白化妆品技术领域,具体涉及一种载有活性成分的丝素蛋白/HA(透明质酸)复合微球冻干粉,还涉及了该复合微球冻干粉的制备方法和应用。
背景技术
熊果苷、维生素C、果酸等是当今公认比较安全有效的水溶性美白抗衰原料,在不影响细胞增殖的同时,能有效地抑制皮肤中的酪氨酸酶的活性,阻断黑色素的形成,通过自身与酪氨酸酶直接结合,加速黑色素的分解与排泄,从而减少皮肤色素沉积,祛除色斑和雀斑,减缓皮肤的衰老。而且对黑色素细胞不产生毒害性、刺激性、致敏性等副作用,同时还有杀菌、消炎的作用。神经酰胺系为神经鞘糖脂中的一种,是一种水溶性脂质物质,可以改善角质层的保水及屏障功能,解决皮肤干燥、皱纹、粗糙现象,是一种常见的保湿剂。中国专利CN103251515A(申请号:201310156108.5,专利名称:一种皮肤美白组合物,公开号:103251515)报道了一种将熊果苷和白藜芦醇用于皮肤美白组合物中;日本专利CN101583345(申请号:200780040739.3,专利名称:神经酰胺合成促进剂、化妆品、皮肤外用剂、抗老化方法和皱纹改善方法,公开号:101583345)公开了美露香株式会社将神经酰胺合成促进剂作为化妆品和皮肤外用剂中。这些活性成分自身稳定性差,受外界干扰易失活,例如在光及周围环境不合适的条件下容易分解,在空气中也容易氧化,缺少储存的稳定性,因此在化妆品应用中受到了一定的限制。
丝素蛋白壁材与人体肌肤构成相近,和人体皮肤具有极强的亲和力、安全性和良好的生物相容性,蚕丝蛋白中包含18种氨基酸和多种微量元素,都是人体皮肤所需要的重要成分,通过有效补充,能增进皮肤细胞的活力,防止皮肤老化并促进新陈代谢,是提高美白效果的最优秀的天然纤维蛋白。
目前已有一些丝素蛋白微囊技术用于包封化妆品活性成分的报道,由单一的丝素蛋白制备的微囊机械性能较差,包载在微囊中的化妆品活性成分容易突释,虽然丝素蛋白微囊经冻干后可以方便它的储存,但冻干后的丝素蛋白微囊复溶时间较长、易发生聚集,从而导致其稳定性变差。因此,丝素蛋白在化妆品领域的应用还有待进一步研究。
透明质酸(又称玻尿酸、HA)是存在于生物组织中细胞外基质中的一种酸性黏多糖,是由葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖的双糖单位反复交替连接构成的线性大分子黏多糖,具有良好的生物相容性、生物可降解及高黏弹性,具有特殊的保水作用,被称为理想的天然保湿因子,并能与细胞表面某些特异受体专一性结合,其中皮肤中就含有大量的透明质酸。本发明使用透明质酸修饰丝素蛋白微囊,不仅能够提高微囊的保湿效果,还能提高丝素蛋白微囊的机械性能,并缩短丝素蛋白微囊冻干粉复溶时间。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种载有活性成分的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉,其机械性能好,且可提高化妆品活性成份的稳定性,解决了现有包封活性成分的丝素蛋白微囊机械性能较差、易突释、活性成分稳定性较差和其冻干粉复溶时间长的问题。
本发明的第二个目的是提供上述载有活性成分的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉的制备方法。
本发明的第三个目的是提供上述载有活性成分的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉的应用。
本发明所采用的第一个技术方案是,一种载有活性成分的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉,按照质量百分比包括以下组分:丝素蛋白10%~50%,化妆品活性成份10%~20%,透明质酸10%~20%,1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDC)5%~13%,冻干保护剂20%~40%,水1%~4%,以上各组分的质量总和是100%。
其中,化妆品活性成份包括美白活性成份和保湿活性成份,美白活性成份为熊果苷、维生素C或果酸中的一种或几种的任意比例混合物,保湿活性成份为神经酰胺。
优选地,冻干保护剂由质量比为1:1的海藻糖与甘露醇复配而成。
优选地,上述复合微球的粒径小于450nm。
本发明采用的第二个技术方案是,上述载有活性成分的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉的制备方法,包括以下步骤:
步骤1,制备丝素蛋白;
步骤2,制备包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球;
按照质量百分比称取以下各原料组分:丝素蛋白50%~82%,化妆品活性成份20%~46%,以上各原料组分的质量总和是100%;
先将丝素蛋白完全溶解于部分水中,化妆品活性成份完全溶解于剩余水中;然后将溶解化妆品活性成份的溶液加入到丝素蛋白水溶液中,使化妆品活性成份与丝素蛋白混合均匀,得到原料液;在搅拌条件下,将乙醇溶液滴加到原料液中,得到混合溶液;然后将混合溶液冷冻,并转到室温放置后得到悬浮液,将悬浮液离心,收集固体部分,即得到包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球。
步骤3,制备包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉;
按照质量百分比称取以下各原料组分:丝素蛋白10%~50%,化妆品活性成份10%~20%,透明质酸10%~20%,1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDC)5%~13%,冻干保护剂20%~40%,水1%~4%,以上各组分的质量总和是100%。
先把透明质酸配制成透明质酸水溶液,再把包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球分散到透明质酸水溶液中,得到混合溶液;在搅拌条件下,把EDC滴加到混合溶液中,得到混悬液;然后将混悬液离心,收集固体部分,把固体部分分散到水中,超声并过膜,得到复合微球的混悬液;最后把冻干保护剂加入到复合微球混悬液中,搅拌均匀后,进行冷冻干燥,得到包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉。
其中,步骤1中丝素蛋白的制备方法为:首先,按照蚕丝和0.01~0.1mol/L碳酸钠溶液的质量比为1:10~1:5的比例,把蚕丝加入到100℃的碳酸钠溶液中,加热后在90~100℃去离子水中煮30min,将煮好的蚕丝在35℃下真空干燥20min,得到脱胶蚕丝;然后,把脱胶蚕丝加入到三元体系CaCl2:C2H5OH:H2O中,在70~80℃温度下保温2h,然后离心,得到丝素蛋白溶液;最后,将丝素蛋白溶液放入纤维素透析袋中在4℃去离子水中透析7d,透析好的丝素蛋白溶液在-80℃预冻15h后,置于真空度<80mT的冻干机中,-50℃冷冻干燥24h后取出,得到丝素蛋白。
其中,步骤2中乙醇溶液与原料液的体积比为1:4。
优选地,步骤3中透明质酸的分子量为30~50kD;步骤3中,EDC与混合溶液的体积比为1:5。
优选地,丝素蛋白溶液真空冷冻干燥参数为:先置于-80℃预冻15h,再于真空度<80mT,-50℃条件下冷冻干燥24h。
本发明的第三个技术方案是,上述包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉在化妆品中的应用。
制备霜状、乳液状的化妆品时,可将上述包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉直接加入化妆品中;而制备面膜及水剂化妆品时,需要先将包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉用水复溶后再加入化妆品中。
上述包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉在化妆品中的添加量为0.2%~10%。
本发明的有益效果是,(1)本发明使用透明质酸修饰丝素蛋白微囊,从而提高丝素蛋白微囊的机械性能减少突释,并缩短丝素蛋白微囊冻干粉复溶时间。(2)本发明将透明质酸作为一种壁材制备微囊,其微囊本身就具有保湿性能。(3)本发明将化妆品活性成份包载在丝素蛋白和透明质酸中,并制备成纳米级微球,可以有效的提高化妆品活性成份的稳定性,也增大了其透皮吸收性能,皮肤吸收丝素蛋白/透明质酸复合微球后,包载化妆品活性成份的复合微球可以在皮肤中缓慢释放有效成分,达到长期美白保湿等的功效。
附图说明
图1是实施例1的复合微球冻干粉的粒径图;
图2是实施例2的复合微球冻干粉的粒径图;
图3是实施例3的复合微球冻干粉的粒径图;
图4是复合微球冻干粉的缓释图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步的详细说明,但本发明并不限于这些实施方式。
本发明的载有活性成分的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉按照质量百分比包括以下组分:丝素蛋白10%~50%,化妆品活性成份10%~20%,透明质酸10%~20%,1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDC)5%~13%,冻干保护剂20%~40%,水1%~4%,以上各组分的质量总和是100%。其中,化妆品活性成份包括美白活性成份和保湿活性成份,美白活性成份为熊果苷、维生素C或果酸中的一种或几种的任意比例混合物,保湿活性成份为神经酰胺。
优选地,冻干保护剂由质量比为1:1的海藻糖与甘露醇复配而成。
优选地,上述复合微球的粒径小于450nm。
该载有活性成分的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉的制备方法如下:
步骤1,制备丝素蛋白;
丝素蛋白可以通过市场购买得到,也可按照以下方法制备得到:首先,按照蚕丝和0.01~0.1mol/L碳酸钠溶液的质量比为1:10~1:5的比例,把蚕丝加入到100℃的碳酸钠溶液中,加热后在90~100℃去离子水中煮30min,将煮好的蚕丝在35℃下真空干燥20min,得到脱胶蚕丝;然后,把脱胶蚕丝加入到三元体系CaCl2:C2H5OH:H2O(1:2:8)中,在70~80℃温度下保温2h,然后离心,得到丝素蛋白溶液;最后,将丝素蛋白溶液放入纤维素透析袋中在4℃去离子水中透析7d,透析好的丝素蛋白溶液在-80℃预冻15h后,置于真空度<80mT的冻干机中,-50℃冷冻干燥24h后取出,得到丝素蛋白。
步骤2,制备包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球;
按照质量百分比称取以下各原料组分:丝素蛋白50%~82%,化妆品活性成份20%~46%,以上各原料组分的质量总和是100%;
先将丝素蛋白完全溶解于部分水中,化妆品活性成份完全溶解于剩余水中;然后将溶解化妆品活性成份的溶液加入到丝素蛋白水溶液中,使化妆品活性成份与丝素蛋白混合均匀,得到原料液;在400~700rpm搅拌条件下,将乙醇溶液以2.5-3mL/min的速度滴加到原料液中,得到混合溶液;其中,乙醇溶液与原料液的体积比为1:4;然后把混合溶液在-20℃温度下冷冻1~2h,转到室温继续放置2~5h后得到悬浮液,将悬浮液离心,收集固体部分,即得到包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球。
步骤3,制备包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉;
按照质量百分比称取以下各原料组分:丝素蛋白10%~50%,化妆品活性成份10%~20%,透明质酸10%~20%,1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDC)5%~13%,冻干保护剂20%~40%,水1%~4%,以上各组分的质量总和是100%。
先把分子量为30~50kD的透明质酸配制成浓度为1%的透明质酸水溶液;把包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球分散到透明质酸水溶液中,超声使二者混匀,得到混合溶液;在搅拌条件下,把EDC以3-4.5mL/min的速度滴加到混合溶液中,得到混悬液;其中,EDC与混合溶液的体积比为1:5。然后将混悬液离心,收集固体部分,把固体部分分散到水超声并过0.45μm膜,得到复合微球的混悬液;最后把冻干保护剂加入到复合微球混悬液中,搅拌均匀后,先置于-80℃预冻24h,再于真空度<80mT,-50℃条件下冷冻干燥24h,得到包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉。
本发明将化妆品活性成份包载在丝素蛋白和透明质酸中,并制备成纳米级微球,可以有效的提高化妆品活性成份的稳定性,也增大了其透皮吸收性能,皮肤吸收丝素蛋白/透明质酸复合微球后,包载化妆品活性成份的复合微球可以在皮肤中缓慢释放有效成分,达到长期美白保湿等的功效。
本发明的包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉可以添加到化妆品中,起美白保湿功效。
制备霜状、乳液状化妆品时,将本发明复合微球冻干粉直接加入化妆品中;制备面膜及水剂化妆品时,需要先将本发明复合微球冻干粉用水复溶后再加入化妆品中。本发明复合微球冻干粉在化妆品中的添加量为0.2%~10%。
实施例1
本实施例制备了一种包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉,制备方法如下:
步骤1,制备丝素蛋白:
步骤1-1,把30.00g蚕丝加入到100mL 100℃的0.02mol/L碳酸钠溶液中,加热25min后再在95℃去离子水中煮30min,将煮好的蚕丝在35℃下真空干燥20min,得到脱胶蚕丝。
步骤1-2,把脱胶蚕丝加入到三元体系CaCl2:C2H5OH:H2O中,CaCl2、C2H5OH、H2O的摩尔比为1:2:8,在75℃温度下保温2h,然后在离心力1.35×104g下离心9min,得到丝素蛋白溶液。
步骤1-3,将丝素蛋白溶液放入纤维素透析袋中在4℃去离子水中透析7d,透析好的丝素蛋白溶液在-80℃预冻15h后,置于真空度<80mT的冻干机中,-50℃冷冻干燥24h后取出,得到丝素蛋白。
步骤2,制备包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白微球:
步骤2-1,先将3g丝素蛋白溶于水中得到浓度为50mg/mL丝素蛋白水溶液,再把0.6g熊果苷和0.9g神经酰胺溶于30mL蒸馏水后,将其加入到丝素蛋白水溶液中,在300rpm下磁力搅拌5min,使化妆品活性成份与丝素蛋白混合均匀,得到原料液。
步骤2-2,在500rpm磁力搅拌下,把乙醇溶液以55滴/min的速度逐滴加入到含有化妆品活性成份的丝素蛋白溶液中,乙醇溶液与丝素蛋白溶液的体积比为1:4,滴加完室温下继续磁力搅拌6min,得到混合溶液。
步骤2-3,把混合溶液在-20℃温度下冷冻2h,转到室温继续放置3h后得到悬浮液,将悬浮液在6000rpm下离心15min,除去乙醇溶液,收集固体部分,得到包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白微球。
步骤3,制备包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉:
步骤3-1,先把1.5g分子量为40kD粉末状的透明质酸溶解在去离子水中,不停搅拌使之分散均匀,配制成浓度为1%的透明质酸水溶液。
步骤3-2,把包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白微球分散到1%的透明质酸水溶液中,超声5min使其混合均一得到含有丝素蛋白微球的透明质酸混合溶液。
步骤3-3,在800rpm磁力搅拌下,把交联剂1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDC)溶液以3.5mL/min的速度逐滴加入到含有丝素蛋白微球的透明质酸混合溶液中,使丝素蛋白与透明质酸进行交联,EDC添加量与透明质酸和丝素蛋白质量和的比为1:5,滴加完室温下继续磁力搅拌10min,得到含有包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球的混悬液。
步骤3-4,将该混悬液在5000rpm下离心10min,收集固体部分,得到包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球。
步骤3-5,把复合微球分散到30mL蒸馏水中,超声5min,过0.45μm的膜2次,得到含有粒径小于450nm复合微球的混悬液。
步骤3-6,把冻干保护剂加入到制备好的含有复合微球的混悬液中,搅拌均匀后,置于-80℃预冻24h,再进行真空冷冻干燥,得到包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉。
本实施例制得的包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉,其组分按照质量百分比为:丝素蛋白29.70%,熊果苷5.94%,神经酰胺8.91%,透明质酸14.85%,EDC8.91%,冻干保护剂29.70%,蒸馏水1.98%。
对复合微球进行粒径分析,把复合微球冻干粉复溶后测定其粒径,该包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球的粒径为390±80nm,从得到的粒径图1可以得出大部分的微囊粒径为390nm。
本实施例将制备的包载熊果苷和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉添加到霜膏中,使用均质机在19000rpm条件下均质10min后,得到具有持续美白保湿功效的霜膏。
实施例2
本实施例制备了一种包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉,制备方法如下:
步骤1,制备丝素蛋白
步骤1-1,把50.00g蚕丝加入到500mL 100℃的0.1mol/L碳酸钠溶液中,加热30min后再在100℃去离子水中煮30min,将煮好的蚕丝在35℃下真空干燥20min,得到脱胶蚕丝。
步骤1-2,把脱胶蚕丝加入到三元体系CaCl2:C2H5OH:H2O中,CaCl2、C2H5OH、H2O的摩尔比为1:2:8,在80℃温度下保温2h,然后在离心力1.35×104g下离心10min,得到丝素蛋白溶液。
步骤1-3,将丝素蛋白溶液放入纤维素透析袋中在4℃去离子水中透析7d,透析好的丝素蛋白溶液在-80℃预冻15h后,置于真空度<80mT的冻干机中,-50℃冷冻干燥24h后取出,得到丝素蛋白。
步骤2,制备包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白微球:
步骤2-1,先将1g丝素蛋白溶于水中得到浓度为40mg/mL丝素蛋白水溶液,再把0.5g维生素C和0.5g神经酰胺溶于30mL蒸馏水后,将其加入到丝素蛋白水溶液中,在300rpm下磁力搅拌5min,使化妆品活性成份与丝素蛋白混合均匀,得到原料液;
步骤2-2,在400rpm磁力搅拌下,把乙醇溶液以2.5mL/min的速度逐滴加入到含有化妆品活性成份的丝素蛋白溶液中,乙醇溶液与丝素蛋白溶液的体积比为1:4,滴加完室温下继续磁力搅拌2min,得到混合溶液;
步骤2-3,把混合溶液在-20℃温度下冷冻1h,转到室温继续放置2h后得到悬浮液,将悬浮液在6000rpm下离心15min,除去乙醇溶液,收集固体部分,得到包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球;
步骤3,制备包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉:
步骤3-1,先把0.5g分子量为50kD粉末状的透明质酸溶解在去离子水中,不停搅拌使之分散均匀,配制成浓度为0.5%的透明质酸水溶液;
步骤3-2,把包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白微球分散到0.5%的透明质酸水溶液中,超声5min使其混合均一得到含有丝素蛋白微球的透明质酸混合溶液;
步骤3-3,在700rpm磁力搅拌下,把交联剂1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDC)溶液以60滴/min的速度逐滴加入到含有丝素蛋白微球的透明质酸混合溶液中,使丝素蛋白与透明质酸进行交联,EDC添加量与透明质酸和丝素蛋白质量和的比为1:5,滴加完室温下继续磁力搅拌8min,得到含有包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球的混悬液;
步骤3-4,将该混悬液在5000rpm下离心10min,收集固体部分,得到包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球;
步骤3-5,把复合微球分散到30mL蒸馏水中,超声5min,过0.45μm的膜2次,得到含有粒径小于450nm复合微球的混悬液;
步骤3-6,把冻干保护剂加入到制备好的含有复合微球的混悬液中,搅拌均匀后,置于-80℃预冻24h,再进行真空冷冻干燥,得到包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉。
本实施例制得的包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉,其组分按照质量百分比为:丝素蛋白20.20%,维生素C10.10%,神经酰胺10.10%,透明质酸10.10%,EDC 6.06%,冻干保护剂40.40%,蒸馏水3.03%。
对复合微球进行粒径分析,把复合微球冻干粉复溶后测定其粒径,该包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球的粒径为380±100nm,从得到的粒径图2可以得出大部分的微囊粒径为380nm。
本实施例将制备的包载维生素C和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉使用超纯水复溶后添加到爽肤水配方中,得到具有持续美白保湿功效的爽肤水。
实施例3
本实施例制备了一种包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉,制备方法如下:
步骤1,制备丝素蛋白
步骤1-1,把5.00g蚕丝加入到25mL 100℃的0.01mol/L碳酸钠溶液中,加热20min后再在90℃去离子水中煮30min,将煮好的蚕丝在35℃下真空干燥20min,得到脱胶蚕丝。
步骤1-2,把脱胶蚕丝加入到三元体系CaCl2:C2H5OH:H2O中,CaCl2、C2H5OH、H2O的摩尔比为1:2:8,在70℃温度下保温1.5h,然后在离心力1.35×104g下离心8min,得到丝素蛋白溶液。
步骤1-3,将丝素蛋白溶液放入纤维素透析袋中在4℃去离子水中透析7d,透析好的丝素蛋白溶液在-80℃预冻15h后,置于真空度<80mT的冻干机中,-50℃冷冻干燥24h后取出,得到丝素蛋白。
步骤2,制备包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白微球:
步骤2-1,先将5g丝素蛋白溶于水中得到浓度为60mg/mL丝素蛋白水溶液,再把0.67g熊果苷、0.4g果酸和0.6g神经酰胺溶于30mL蒸馏水后,将其加入到丝素蛋白水溶液中,在300rpm下磁力搅拌5min,使化妆品活性成份与丝素蛋白混合均匀,得到原料液;
步骤2-2,在700rpm磁力搅拌下,把乙醇溶液以3mL/min的速度逐滴加入到含有化妆品活性成份的丝素蛋白溶液中,乙醇溶液与丝素蛋白溶液的体积比为1:4,滴加完室温下继续磁力搅拌10min,得到混合溶液;
步骤2-3,把混合溶液在-20℃温度下冷冻1.5h,转到室温继续放置5h后得到悬浮液,将悬浮液在6000rpm下离心15min,除去乙醇溶液,收集固体部分,得到包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白微球;
步骤3,制备包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉:
步骤3-1,先把2.5g分子量为30kD粉末状的透明质酸溶解在去离子水中,不停搅拌使之分散均匀,配制成浓度为2%的透明质酸水溶液;
步骤3-2,把包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白微球分散到2%的透明质酸水溶液中,超声5min使其混合均一得到含有丝素蛋白微球的透明质酸混合溶液;
步骤3-3,在900rpm磁力搅拌下,把交联剂1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDC)溶液以90滴/min的速度逐滴加入到含有丝素蛋白微球的透明质酸混合溶液中,使丝素蛋白与透明质酸进行交联,EDC添加量与透明质酸和丝素蛋白质量和的比为1:5,滴加完室温下继续磁力搅拌15min,得到含有包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球的混悬液;
步骤3-4,将该混悬液在5000rpm下离心10min,收集固体部分,得到包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球;
步骤3-5,把复合微球分散到30mL蒸馏水中,超声5min,过0.45μm的膜2次,得到含有粒径小于450nm复合微球的混悬液;
步骤3-6,把冻干保护剂加入到制备好的含有复合微球的混悬液中,搅拌均匀后,置于-80℃预冻24h,再进行真空冷冻干燥,得到包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉。
本实施例制得的包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉,其组分按照质量百分比为:丝素蛋白34.46%,熊果苷4.62%,果酸2.76%,神经酰胺4.14%,透明质酸17.23%,EDC 10.34%,冻干保护剂23.02%,蒸馏水3.45%。
对复合微球进行粒径分析,把复合微球冻干粉复溶后测定其粒径,该包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球的粒径为410±80nm,从得到的粒径图3可以得出大部分的微囊粒径为410nm。
本实施例将制备的包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉添加到乳液配方中,使用均质机在15000rpm/min条件下均质15min后,得到具有持续美白保湿功效的乳液。
对本发明的冻干粉的各项性能进行检测。
按照实施例3中的步骤1和步骤2的条件进行制备包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白微球,并将微球置于-80℃预冻24h,再进行真空冷冻干燥,得到包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白微球冻干粉。
将包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白微球冻干粉(1#)和丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉(2#)进行体外释放测试。从图4中可以看出使用透明质酸修饰丝素蛋白微球后,可以提高其机械性能,故降低了其突释效应和延长了缓释时间。
将包载熊果苷、果酸和神经酰胺的丝素蛋白微球冻干粉(1#)和丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉(2#)中加入溶媒进行复溶,具体结果见表1。
表1 1#和2#复溶时间比较(n=3)
由结果可知,使用透明质酸修饰丝素蛋白微球后可以缩短其冻干粉的复溶时间。
本发明还对包载了不同化妆品功效成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉进行了功效评价。
受试对象:42位无皮肤敏感史的年龄在25~40岁的女性,测试期间志愿者随机一侧半脸使用测试产品,另外一侧为空白区;
使用方法:先将包载不同化妆品功效成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉进行复溶得到包载不同化妆品功效成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球悬浮液,将2~3滴该悬浮液涂抹到前臂内侧的试验区,每天早晚各使用一次。连续使用8周。
测试时间:从第1天开始,每隔一周进行一次皮肤测试,测试过程由皮肤科医生全程监控。
测试指标:皮肤水分含量测试(Corneometer)、皮肤颜色测试(Chromameter)。
皮肤含水量测试采用德国CK公司CM825型水分测试仪接触式连续测量方式进行。皮肤颜色采用德国CK公司MEXAMETER MX18黑色素测定仪进行测定。黑色素值通过仪器测出,平均测定3次取平均值,测量数值越高,说明皮肤中黑色素含量越高。
产品使用前、产品使用4周和8周后,对两侧脸颊区域进行皮肤水分测试,结果见表2。
表2产品使用前、产品使用4周及8周后皮肤水分统计结果
由表2可见,与初始值相比,使用产品4周后,产品区与空白区水分含量分别显著增加了6.11和1.08;使用产品8周后,产品区水分含量显著增加了11.32,空白区未呈现显著变化。
区域之间比较,产品使用4周和8周后,产品区水分含量均显著性优于空白区。结果表明,在连续使用包载不同化妆品功效成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉后,皮肤的含水量显著性增高,被包载后的具有保湿功效的活性化妆品成份得到了保护。
产品使用前、产品使用4周和8周后,对两侧脸颊区域进行皮肤颜色测试,结果见表3。
表3产品使用前、产品使用4周及8周后皮肤颜色统计结果
由表3可见,与初始值相比,使用产品4周后,产品区L*值显著增加了1.48,ITA°值显著增加了1.77;空白区L*值无显著性增加,ITA°值无显著性增加;使用产品8周后,产品区L*值显著增加了2.80,ITA°值显著增加了2.36;空白区L*值无显著性增加,ITA°值无显著性增加。
区域之间比较,产品使用4周和8周后,产品区L*值和ITA°值均有显著性增加。结果表明,在连续使用包载不同化妆品功效成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉后,皮肤的L*值和ITA°值显著增高,被包载后的具有美白功效的活性化妆品成份得到了保护。
功效实验结果表明皮肤的综合指标均有显著变化,因此,包载不同化妆品功效成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉完全可以保护化妆品功效成份的活性,满足多功能护肤用品的需要。
本发明以上描述只是部分实施例,但是本发明并不局限于上述的具体实施方式。上述的具体实施方式是示意性的,并不是限制性的。凡是采用本发明的材料和方法,在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下,所有具体拓展均属本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种载有活性成分的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉,其特征在于,按照质量百分比包括以下组分:丝素蛋白10%~50%,化妆品活性成份10%~20%,透明质酸10%~20%,EDC5%~13%,冻干保护剂20%~40%,水1%~4%,以上各组分的质量总和是100%;其中,化妆品活性成份包括美白活性成份和保湿活性成份,美白活性成份为熊果苷、维生素C或果酸中的一种或几种的任意比例混合物,保湿活性成份为神经酰胺。
2.根据权利要求1所述的载有活性成分的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉,其特征在于,所述冻干保护剂由质量比为1:1的海藻糖与甘露醇复配而成。
3.根据权利要求1所述的载有活性成分的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉,其特征在于,所述复合微球的粒径小于450nm。
4.一种如权利要求1所述的载有活性成分的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,制备丝素蛋白;
步骤2,制备包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球;
按照质量百分比称取以下各原料组分:丝素蛋白50%~82%,化妆品活性成份20%~46%,以上各原料组分的质量总和是100%;
先将化妆品活性成份溶于蒸馏水后加入到丝素蛋白水溶液中,得到原料液;在搅拌条件下,将乙醇滴加到原料液中,得到混合溶液;然后将混合溶液冷冻,并转到室温放置后得到悬浮液,将悬浮液离心,收集固体部分,即得到包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球;
步骤3,制备包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉;
按照质量百分比称取以下各组分:丝素蛋白10%~50%,化妆品活性成份10%~20%,透明质酸10%~20%,1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺(EDC)5%~13%,冻干保护剂20%~40%,水1%~4%,以上各组分的质量总和是100%;
先把包载化妆品活性成份的丝素蛋白微球分散到透明质酸水溶液中,得到混合溶液;在搅拌条件下,把EDC滴加到混合溶液中,得到混悬液;然后将混悬液离心,收集固体部分,把固体部分分散到水中,超声并过膜,得到复合微球的混悬液;最后把冻干保护剂加入到复合微球混悬液中,进行冷冻干燥,得到包载化妆品活性成份的丝素蛋白/透明质酸复合微球冻干粉。
5.根据权利要求4所述的载有活性成分的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉的制备方法,其特征在于,所述步骤1中丝素蛋白的制备方法为:首先,按照蚕丝和0.01~0.1mol/L碳酸钠溶液的质量比为1:10~1:5的比例,把蚕丝加入到100℃的碳酸钠溶液中,加热后在90~100℃去离子水中煮30min,将煮好的蚕丝在35℃下真空干燥20min,得到脱胶蚕丝;然后,把脱胶蚕丝加入到三元体系CaCl2:C2H5OH:H2O中,在70~80℃温度下保温2h,然后离心,得到丝素蛋白溶液;最后,将丝素蛋白溶液放入纤维素透析管中在4℃去离子水中透析7d,透析好的丝素蛋白溶液在-80℃预冻15h后,置于真空度为<80mT的冻干机中,-50℃冷冻干燥24h后取出,得到丝素蛋白。
6.根据权利要求4所述的载有活性成分的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉的制备方法,其特征在于,步骤2所述乙醇溶液与所述原料液的体积比为1:4。
7.根据权利要求4所述的载有活性成分的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉的制备方法,其特征在于,步骤3所述透明质酸的分子量为30~50kD;步骤3所述EDC与所述混合溶液的体积比为1:5。
8.根据权利要求4所述的载有活性成分的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉的制备方法,其特征在于,步骤3所述冷冻干燥参数具体为:先置于-80℃预冻24h,再在真空度<80mT的冻干机中,在-50℃条件下冷冻干燥24h。
9.一种如权利要求1所述的包载化妆品活性成份的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉在化妆品中的应用,其特征在于,制备霜状及乳液状化妆品时,将所述复合微球冻干粉直接加入化妆品中;制备面膜及水剂化妆品时,先将所述复合微球冻干粉用水复溶后再加入化妆品中。
10.根据权利要求9所述的包载化妆品活性成份的丝素蛋白/HA复合微球冻干粉在化妆品中的应用,其特征在于,所述复合微球冻干粉在化妆品中的添加量为0.2%~10%。
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