CN106148271A - 一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法 - Google Patents

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马会明
张红军
周波
任洁
马科
马惠昇
李婷婷
杨静
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Abstract

本发明公开了一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法，包括原料选取、枸杞提取液的制备、菊花提取液的制备、晶状体细胞培养液的制备、晶状体细胞的培养，与现有技术相比，本发明采用不同配比枸杞菊花提取液培养晶状体细胞，提高细胞增殖能力，减少氧化应激，降低细胞凋亡的细胞培养方法，可用于指导养肝明目用药的理论基础，具有推广应用的价值。

Description

一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法
技术领域
本发明涉及一种生物实验方法，尤其涉及一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法。
背景技术
晶状体上皮细胞凋亡是除先天性白内障以外的所有类型白内障形成的细胞学基础。晶状体上皮细胞相当于晶状体的外屏障，对晶状体纤维起一定的保护作用，而且晶状体上皮细胞担负着晶状体的生长、分化和损伤修复，在保持整个晶状体透明性和内环境稳定上起重要作用。已有研究证明晶状体细胞在生长过程中易受到各种可避免或不可避免诱发因素的影响而发生晶状体纤维将不再保持透明，继而发生混浊,形成白内障。晶状体上皮细胞也是糖尿病性白内障最早受累的细胞，当细胞处于高血糖外源性环境的刺激下，晶状体上皮细胞凋亡与增殖失去平衡而发生细胞凋亡，晶状体内环境代谢失衡，最终引起白内障的发生。
白内障手术治疗已日臻完善及广泛应用，但仍然存在一定手术风险，因此寻找一种能治疗及延缓白内障发生发展的药物是眼科一项重要的临床及科学研究。白内障的发生可能与遗传、免疫因素及外伤、福射造成晶状体正常的代谢失衡，发生晶状体的混浊变性。由于其发病的多因性，但大概包括氧化应激、渗透应激、内质网应激等方面，枸杞菊花对晶状体具有抗氧化、清除自由基、抗凋亡等药理活性。但现有技术中，采用枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法尚未见相关报道，因此，需要一种新方法诞生。
发明内容
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的：
本发明包括以下步骤：
步骤一：原料选取：取宁夏枸杞10克，杭白菊5克；
步骤二：枸杞提取液的制备：选取无蛀虫、无霉变的枸杞干果为原料，清洗晾干后，将每粒枸杞干果破碎成两瓣，并置于加热的容器(70℃-90℃)内，之后向加热的容器中加入枸杞干果，重量10倍的水(100ml)进行静置浸泡5-8小时，然后，加热煮沸至容器内水的体积减少一半，之后停止加热，过滤除渣，得到枸杞提取液，备用；
步骤三：菊花提取液的制备：选取菊花原材料，除去杂质后，放入清水中进行振荡清洗3-5min，捞出淋干后，置于菊花原材料重量50倍的95℃水中进行漂烫30min，之后，降温至75-80℃浸泡40min，然后，过滤除渣，得到菊花提取液，备用；
步骤四：晶状体细胞培养液的制备：按照体积比，取2-3份步骤一得到的枸杞提取液和1-2份步骤二得到的菊花提取液进行混合，之后，向混合液中加入干粉细胞培养基12.0g，至混合均匀，在室温环境下进行0.22μm过滤除菌，之后，转至于100ml的培养瓶中用于晶状体细胞的培养；
步骤四：晶状体细胞的培养：用上述制备得到的培养基，添加胎牛血清、谷氨酰胺、丙酮酸钠和青链霉素合剂等，并调整PH值为7.2-7.4，预热备用，解冻晶状体细胞于60cm培养皿预热的培养基中，在饱和湿度、37℃的CO2培养箱中培养过夜至贴壁，次日，换液继续培养，等待细胞观察及检测。
进一步，所述步骤三中，枸杞提取液与菊花提取液的混合配比为2:1；所述步骤三中，适合晶状体细胞的干粉培养基为12.0g的DMEM/F12进口培养基。
本发明的有益效果在于：
本发明是一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法，与现有技术相比，本发明采用不同配比枸杞菊花提取液培养晶状体细胞，提高细胞增殖能力，减少氧化应激，降低细胞凋亡的细胞培养方法，可用于指导养肝明目用药的理论基础，具有推广应用的价值。
具体实施方式
下面对本发明作进一步说明：
本发明包括以下步骤：
步骤一：原料选取：取宁夏枸杞10克，杭白菊5克；
步骤二：枸杞提取液的制备：选取无蛀虫、无霉变的枸杞干果为原料，清洗晾干后，将每粒枸杞干果破碎成两瓣，并置于加热的容器(70℃-90℃)内，之后向加热的容器中加入枸杞干果，重量10倍的水(100ml)进行静置浸泡5-8小时，然后，加热煮沸至容器内水的体积减少一半，之后停止加热，过滤除渣，得到枸杞提取液，备用；
步骤三：菊花提取液的制备：选取菊花原材料，除去杂质后，放入清水中进行振荡清洗3-5min，捞出淋干后，置于菊花原材料重量50倍的95℃水中进行漂烫30min，之后，降温至75-80℃浸泡40min，然后，过滤除渣，得到菊花提取液，备用；
步骤四：晶状体细胞培养液的制备：按照体积比，取2-3份步骤一得到的枸杞提取液和1-2份步骤二得到的菊花提取液进行混合，之后，向混合液中加入干粉细胞培养基12.0g，至混合均匀，在室温环境下进行0.22μm过滤除菌，之后，转至于100ml的培养瓶中用于晶状体细胞的培养；
步骤四：晶状体细胞的培养：用上述制备得到的培养基，添加胎牛血清、谷氨酰胺、丙酮酸钠和青链霉素合剂等，并调整PH值为7.2-7.4，预热备用，解冻晶状体细胞于60cm培养皿预热的培养基中，在饱和湿度、37℃的CO2培养箱中培养过夜至贴壁，次日，换液继续培养，等待细胞观察及检测。
进一步，所述步骤三中，枸杞提取液与菊花提取液的混合配比为2:1；所述步骤三中，适合晶状体细胞的干粉培养基为12.0g的DMEM/F12进口培养基。
实施例1：枸杞10g加100ml超纯水浸提、除渣；菊花5g加50倍超纯水浸提、除渣，将两者混合，按照1:1混合过滤，再加入干粉培养基，待晶状体细胞培养。
实施例2：枸杞10g加100ml超纯水浸提、除渣；菊花5g加50倍超纯水浸提、除渣，将按照体积比为2:1混合，过滤，再加入干粉培养基，待晶状体细胞培养。
实施例3：枸杞10g加100ml超纯水浸提、除渣；菊花5g加50倍超纯水浸提、除渣，将按照体积比为1:2混合，过滤，再加入干粉培养基，待晶状体细胞培养。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (3)

1.一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：原料选取：取宁夏枸杞10克，杭白菊5克；
步骤二：枸杞提取液的制备：选取无蛀虫、无霉变的枸杞干果为原料，清洗晾干后，将每粒枸杞干果破碎成两瓣，并置于加热的容器(70℃-90℃)内，之后向加热的容器中加入枸杞干果，重量10倍的水(100ml)进行静置浸泡5-8小时，然后，加热煮沸至容器内水的体积减少一半，之后停止加热，过滤除渣，得到枸杞提取液，备用；
步骤三：菊花提取液的制备：选取菊花原材料，除去杂质后，放入清水中进行振荡清洗3-5min，捞出淋干后，置于菊花原材料重量50倍的95℃水中进行漂烫30min，之后，降温至75-80℃浸泡40min，然后，过滤除渣，得到菊花提取液，备用；
步骤四：晶状体细胞培养液的制备：按照体积比，取2-3份步骤一得到的枸杞提取液和1-2份步骤二得到的菊花提取液进行混合，之后，向混合液中加入干粉细胞培养基12.0g，至混合均匀，在室温环境下进行0.22μm过滤除菌，之后，转至于100ml的培养瓶中用于晶状体细胞的培养；
步骤四：晶状体细胞的培养：用上述制备得到的培养基，添加胎牛血清、谷氨酰胺、丙酮酸钠和青链霉素合剂等，并调整PH值为7.2-7.4，预热备用，解冻晶状体细胞于60cm培养皿预热的培养基中，在饱和湿度、37℃的CO2培养箱中培养过夜至贴壁，次日，换液继续培养，等待细胞观察及检测。
2.根据权利要求1所述的枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法，其特征在于：所述步骤三中，枸杞提取液与菊花提取液的混合配比为2:1。
3.根据权利要求1所述的枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法，其特征在于：所述步骤三中，适合晶状体细胞的干粉培养基为12.0g的DMEM/F12进口培养基。
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