CN104041413B - 一种石斛胚芽茶的生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种石斛胚芽茶的制作方法。该方法首先采用超声波辅助浸提联合膜分离制得石斛寡糖素，然后通过石斛寡糖素协同阶段性光质调节促使石斛种胚快速萌发、分化形成胚芽，最后采用低温烘焙制成石斛胚芽茶。本发明通过石斛寡糖素协同阶段性光质调节促使石斛种胚快速萌发、分化形成胚芽，一方面显著缩短了石斛胚芽的生产周期，另一方面避免了外源激素对人体健康的危害；通过低温烘焙方法制作的胚芽茶，清香宜饮，口感甘甜，食用方便，便于携带和贮藏。

Description

一种石斛胚芽茶的生产方法

技术领域

本发明属于保健饮品领域，具体涉及一种石斛胚芽茶的生产方法。

技术背景

石斛是我国名贵的中草药，属于单子叶兰科草本植物，一颗石斛蒴果里种子数量巨大，约有2～3万粒种子，但其种胚未分化，缺少胚乳。适宜的营养、光照、温度条件下，石斛种胚会逐渐膨大，萌发形成绿色原球茎，继续培养原球茎顶端会突起产生绿色叶原基，不断分化发育成幼叶，最后形成2～3 cm高的石斛胚芽。目前多采用添加外源激素的方法，促使种胚或原球茎膨大、萌发、分化形成胚芽，进一步形成试管苗。如CN 102657083 A的发明提供了一种铁皮石斛苗茶的制备方法中使用了BA及NAA来促使原球茎分化成胚芽。但外源激素的添加，会随着生长的进行，富集到植物机体内，对食用的安全性存在很大的隐患。寻求安全有效的促进石斛种胚快速萌发、分化产生胚芽的方法对解决现有石斛生产周期长、产品安全性差等问题具有重要意义。

胚芽是种子萌发、分化成苗过程中的中间形态，石斛胚芽具有和石斛植株相同的功效，富含多糖，具有抗疲劳、抗衰老、抗氧化、提高免疫力等功效。在胚芽茶的加工过程中，由于胚芽的茎含水量高、多糖含量高、叶片细小、茎粗大、叶茎纤维含量低，所以采用传统的制茶工艺制作胚芽茶时，会产生焦叶、爆斑、叶片和茎干燥不同步、翻动时易结团和产生碎叶末等现象，严重影响胚芽茶的品质。

寡糖又称低聚糖，是指二至十个单糖单位通过糖苷键连接起来，形成直链或支链的一类糖，具有调节植物抗病毒、增产壮苗、促进植物生长发育等作用，在农业方面具有重要的应用。例如使用较多的低聚壳寡糖可作为一种非特异性信号，对许多植物显示出强烈的免疫诱导活性；还可以产生抗病毒的植保素及免疫蛋白，达到抗病毒的目的。根瘤菌中分泌的根瘤寡糖素（又称结瘤因子）是豆科植物与根瘤菌间形成共生关系的重要糖信号分子。研究结果显示，从人参、红花、黑节草中提取的寡糖素添加到培养基中均能影响西洋参和人参愈伤组织的生长和皂苷的形成。不同植物细胞壁多糖具有不同的糖苷键连接方式，造成其结构的复杂性和物种的专一性，因此，细胞壁断裂产生不同的寡糖分子，作为早期细胞激活信号也具有反应的专一性。目前，石斛寡糖素在霍山石斛种子萌发中作为诱导分化产生胚芽的诱导物质，还未见有报道。

发明内容

为了解决现有石斛胚芽生产过程中外源激素的添加、生产周期长、石斛产品结构单一等问题，本发明提供一种石斛胚芽茶的生产方法。

一种石斛胚芽茶的生产方法包括以下操作步骤：

（1）石斛胚芽的制备；将成熟的石斛荚果的种胚接种于培养基A上，在温度25±2℃、每天光照12小时的条件下培养100～120天，得到绿色石斛胚芽；

所述液体培养基A为添加了石斛寡糖素的MS液体培养基；所述石斛寡糖素中寡糖含量不低于70%；

（2）石斛胚芽茶的制作：将绿色石斛胚芽杀青，揉捻成条形，压片，烘焙，即得到石斛胚芽茶；所得胚芽茶色泽淡绿，条形扁平。

一种石斛胚芽茶的生产方法按照下述步骤进行操作：

（1）石斛寡糖素的制备

按1g：10～80 ml的比例将石斛和蒸馏水，超声波辅助浸提1～2 h，得到浸提液；浸提液在6000～10000 r/min、室温条件下离心4～5 min，得到上清液和沉淀A；将沉淀A按上述条件重复浸提一次，收集并合并两次上清液为上清液A，将上清液A在55～65 ℃、真空度-0.07～-0.10 MPa条件下减压浓缩，得到浓缩提取液A；向浓缩提取液A中添加95%乙醇至乙醇体积百分比为80%，室温条件下静置12～24 h，6000～10000 r/min、室温条件下离心4～5 min，得上清液B和沉淀B，取沉淀B溶于蒸馏水中，得到石斛寡糖粗提液；取石斛寡糖粗提液，每毫升石斛寡糖粗提液中加入1×10³ U的木瓜蛋白酶，在55 ℃下、pH 5.7条件下酶解6～8 h，接着在100 ℃灭活3～5 min，得到石斛寡糖酶解液；取石斛寡糖酶解液，通过截留分子量为2.5～5 KDa的超滤膜组件，在压力0.05～0.5 MPa、流速为0.1～5.0 m/s条件下超滤，收集透过液，截留液经1400 W、2450 MHz微波裂解5～6 min，冷却至室温，再次通过上述超滤膜组件，在上述相同条件下超滤，合并两次透过液，得到石斛寡糖酶解透过液；石斛寡糖酶解透过液通过反渗透系统浓缩，得反渗透浓缩液；将反渗透浓缩液进行干燥，得到石斛寡糖素，所述石斛寡糖素中寡糖含量不低于70%；

（2）石斛胚芽的制备

取成熟的石斛荚果，首先用1 g/L的升汞水溶液进行表面浸泡消毒40 min，接着用无菌蒸馏水清洗4～5次，然后切开果实，取出种胚，接种于含培养基A的培养板上，在温度25±2 ℃、不同光质、每天光照12小时的条件下培养100～120天，得到绿色石斛胚芽；

所述液体培养基A为添加10～100 mg/L的石斛寡糖素的MS液体培养基；

所述不同光质为：第1～60天，光照强度为35 μmol／(m²·s)，光能比为红光 : 蓝光 = 2 : 3；从第61天开始，光照强度为50 μmol／(m²·s)，光能比为白光 : 蓝光 = 5 : 1；

（3）石斛胚芽茶的制作

将绿色石斛胚芽在温度为200～300 ℃条件下杀青2～3 min；得到杀青石斛胚芽；取杀青石斛胚芽揉捻并摆成本体条形，压片，接着放入40±2 ℃条件下烘焙8～10 h，即得到石斛胚芽茶；所得胚芽茶色泽淡绿，条形扁平。

所述石斛为霍山石斛或铁皮石斛或铜皮石斛。

本发明通过从石斛中提取的石斛寡糖素促进石斛胚芽的形成，为石斛胚芽茶的生产提供原料，制得的石斛胚芽茶不仅为人们的养生保健提供了新选择，而且有利于石斛胚芽的保存。

本发明的有益技术效果体现在以下方面：

（1）本发明采用石斛寡糖素取代外源激素来促使石斛种胚的萌发、分化及生长，从源头上阻断了外源激素对人体健康的危害；

（2）本发明通过添加石斛寡糖素并结合阶段性调节光质组合的使用，促进种子萌发及生长，将石斛胚芽生产周期从7～8个月缩短到3～4个月；

（3）本发明采用压片、低温烘焙方法制得胚芽茶，可避免碎末茶的出现，同时清香宜饮，口感甘甜，便于贮存和运输。

寡糖含量的测定方法：采用苯酚-硫酸法测定，以无水葡萄糖为参比。

具体实施方式

下面结合具体的实施方式对本发明作进一步地说明。本发明的特点和优点将随着描述而更清楚，但这些示例性的实施例仅仅用来说明本发明，并不对本发明的范围构成任何限制。

实施例1：

一种石斛胚芽茶的生产方法包括以下操作步骤：

步骤一、石斛寡糖素的制备

取1 kg的霍山石斛鲜品，打碎，添加10 L的蒸馏水，在温度30 ℃，超声功率600 W，占空比1﹕0.1的条件下，超声波辅助浸提2 h，经6000 r/min室温条件下离心5 min，得到上清液和沉淀A；将沉淀A按上述条件重复浸提一次，收集并合并两次上清液为上清液A，将上清液A在55 ℃、真空度-0.10 MPa条件下减压浓缩，得到浓缩提取液A；向浓缩提取液A中添加95%乙醇至乙醇体积百分比为80%，室温条件下静置12 h，6000 r/min室温条件下离心5 min，得上清液B和沉淀B，取沉淀B溶于蒸馏水中，得到石斛寡糖粗提液；取石斛寡糖粗提液，每毫升石斛寡糖粗提液加入1×10³ U的木瓜蛋白酶，在55 ℃下、pH 5.7条件下酶解6 h，接着在100 ℃灭活5 min，得石斛寡糖酶解液；取石斛寡糖酶解液，通过截留分子量为5 KDa的超滤膜组件，在压力0.05 MPa，流速0.1m/s下超滤，收集透过液，截留液重复经1400 W、2450 MHz微波裂解5 min，冷却至室温，再次通过超滤膜组件，合并两次透过液，得到石斛寡糖酶解透过液；石斛寡糖酶解透过液通过反渗透系统浓缩，在进膜压力0.5 MPa下，膜通量为1 L/(m²*h)条件下，浓缩至原体积的20%，得反渗透浓缩液。取反渗透浓缩液进行真空冷冻干燥，得到石斛寡糖素，根据苯酚-硫酸法测得寡糖含量为79.1%；

步骤二、石斛胚芽的制备

取成熟的霍山石斛荚果，首先用1 g/L的升汞水溶液进行表面浸泡消毒40 min，接着用无菌蒸馏水清洗5次，然后切开果实，取出种胚，接种于含培养基的培养板上，培养基为添加了10 mg/L的石斛寡糖素的MS液体培养基，在温度25±2 ℃、第1～60天，光照强度35 μmol／(m²·s)，光能比为：红光 : 蓝光 = 2 : 3；第61～120天，光照强度50 μmol／(m²·s)，光能比为：白光 : 蓝光 = 5 : 1、每天光照12小时的条件下培养120天，得到绿色霍山石斛胚芽；

步骤三、石斛胚芽茶的制作：

将300 g霍山石斛胚芽在温度为200 ℃条件下，杀青3 min；将杀青后的胚芽，揉捻并摆成本体条形后压片。将压片后的胚芽放入40±2 ℃温度下，烘8小时后，得胚芽茶16.8 g。所得胚芽茶色泽淡绿，条形扁平，冲泡后茶色青亮透明，入口清香，口感微甜。

实施例2：

一种石斛胚芽茶的生产方法包括以下操作步骤：

步骤一、石斛寡糖素的制备

取0.5 kg的霍山石斛干品，打碎，添加30 L比例的蒸馏水，在温度30 ℃，超声功率600 W，占空比1﹕0.1的条件下，超声波辅助浸提2 h，经6000 r/min室温条件下离心5 min，得到上清液和沉淀A；将沉淀A按上述条件重复浸提一次，收集并合并两次上清液为上清液A，将上清液A在55 ℃、真空度-0.10 MPa条件下减压浓缩，得到浓缩提取液A；向浓缩提取液A中添加95%乙醇至乙醇体积百分比为80%，室温条件下静置12 h，6000 r/min室温条件下离心5 min，得上清液B和沉淀B，取沉淀B溶于蒸馏水中，得到石斛寡糖粗提液；取石斛寡糖粗提液，每毫升石斛寡糖粗提液加入1×10³ U的木瓜蛋白酶，在55 ℃下、pH 5.7条件下酶解6 h，接着在100 ℃灭活5 min，得石斛寡糖酶解液；取石斛寡糖酶解液，通过截留分子量为2.5 KDa的超滤膜组件，在压力0.30 MPa，流速3 m/s下超滤，收集透过液，截留液重复经1400 W、2450 MHz微波裂解5 min，冷却至室温，再次通过超滤膜组件，合并两次透过液，得到石斛寡糖酶解透过液；石斛寡糖酶解透过液通过反渗透系统浓缩，在进膜压力2.5 MPa下，膜通量为7 L/(m²*h)条件下，浓缩至原体积的20%，得反渗透浓缩液。取反渗透浓缩液进行真空干燥，得到石斛寡糖素，根据苯酚-硫酸法测得寡糖含量为80.3%；

步骤二、石斛胚芽的制备

取成熟的霍山石斛荚果，首先用1 g/L的升汞水溶液进行表面浸泡消毒40 min，接着用无菌蒸馏水清洗5次，然后切开果实，取出种胚，接种于含培养基的培养板上，培养基为添加了60 mg/L的石斛寡糖素的MS液体培养基，在温度25±2 ℃、第1～60天，光照强度35 μmol／(m²·s)，光能比为：红光 : 蓝光 = 2 : 3；第61～120天，光照强度50 μmol／(m²·s)，光能比为：白光 : 蓝光 = 5 : 1、每天光照12小时的条件下培养120天，得到绿色霍山石斛胚芽；

步骤三、石斛胚芽茶的制作：

将300 g霍山石斛胚芽在温度为200 ℃条件下，杀青3 min；将杀青后的胚芽，揉捻并摆成本体条形后压片。将压片后的胚芽放入40±2 ℃温度下，烘8小时后，得胚芽茶17.6 g。所得胚芽茶色泽淡绿，条形扁平，冲泡后茶色青亮透明，入口清香，口感微甜。

实施例3：

一种石斛胚芽茶的生产方法包括以下操作步骤：

步骤一、石斛寡糖素的制备

取1 kg的铁皮石斛鲜品，打碎，添加15 L比例的蒸馏水，在温度40 ℃，超声功率700 W，占空比1﹕0.4的条件下，超声波辅助浸提1.5 h，经8000 r/min室温条件下离心4.5 min，得到上清液和沉淀A；将沉淀A按上述条件重复浸提一次，收集并合并两次上清液为上清液A，将上清液A在60 ℃、真空度-0.08 MPa条件下减压浓缩，得到浓缩提取液A；向浓缩提取液A中添加95%乙醇至乙醇体积百分比为80%，室温条件下静置18 h，8000 r/min室温条件下离心4.5 min，得上清液B和沉淀B，取沉淀B溶于蒸馏水中，得到石斛寡糖粗提液；取石斛寡糖粗提液，每毫升石斛寡糖粗提液加入1×10³ U的木瓜蛋白酶，在55 ℃下、pH 5.7条件下酶解7 h，接着在100 ℃灭活4 min，得石斛寡糖酶解液；取石斛寡糖酶解液，通过截留分子量为3.5 KDa的超滤膜组件，在压力0.10 MPa，流速0.5 m/s下超滤，收集透过液，截留液重复经1400 W、2450 MHz微波裂解5.5 min，冷却至室温，再次通过超滤膜组件，合并两次透过液，得到石斛寡糖酶解透过液；石斛寡糖酶解透过液通过反渗透系统浓缩，在进膜压力1.0 MPa下，膜通量为3 L/(m²*h)条件下，浓缩至原体积的15%，得反渗透浓缩液。取反渗透浓缩液进行真空干燥，得到石斛寡糖素，根据苯酚-硫酸法测得寡糖含量为78.6%；

步骤二、石斛胚芽的制备

取成熟的铁皮石斛荚果，首先用1g/L的升汞水溶液进行表面浸泡消毒40 min，接着用无菌蒸馏水清洗5次，然后切开果实，取出种胚，接种于含培养基的培养板上，培养基为添加了30 mg/L的石斛寡糖素的MS液体培养基，在温度25±2 ℃、第1～60天，光照强度35 μmol／(m²·s)，光能比为：红光 : 蓝光 = 2 : 3；第61～110天，光照强度50 μmol／(m²·s)，光能比为：白光 : 蓝光 = 5 : 1、每天光照12小时的条件下培养110天，得到绿色铁皮石斛胚芽；

步骤三、石斛胚芽茶的制作：

将300 g铁皮石斛胚芽在温度为250 ℃条件下，杀青2.5 min；将杀青后的胚芽，揉捻并摆成本体条形后压片。将压片后的胚芽放入40±2 ℃温度下，烘9小时后，得胚芽茶17.0 g。所得胚芽茶色泽淡绿，条形扁平，冲泡后茶色青亮透明，入口清香，口感微甜。

实施例4：

一种石斛胚芽茶的生产方法包括以下操作步骤：

步骤一、石斛寡糖素的制备

取0.5 kg的铁皮石斛干品，打碎，添加35 L比例的蒸馏水，在温度40 ℃，超声功率700 W，占空比1﹕0.4的条件下，超声波辅助浸提1.5 h，经8000 r/min室温条件下离心4.5 min，得到上清液和沉淀A；将沉淀A按上述条件重复浸提一次，收集并合并两次上清液为上清液A，将上清液A在60 ℃、真空度-0.08 MPa条件下减压浓缩，得到浓缩提取液A；向浓缩提取液A中添加95%乙醇至乙醇体积百分比为80%，室温条件下静置18 h，8000 r/min室温条件下离心4.5 min，得上清液B和沉淀B，取沉淀B溶于蒸馏水中，得到石斛寡糖粗提液；取石斛寡糖粗提液，每毫升石斛寡糖粗提液加入1×10³ U的木瓜蛋白酶，在55 ℃下、pH 5.7条件下酶解7 h，接着在100 ℃灭活4 min，得石斛寡糖酶解液；取石斛寡糖酶解液，通过截留分子量为3.5 KDa的超滤膜组件，在压力0.40 MPa，流速4 m/s下超滤，收集透过液，截留液重复经1400 W、2450 MHz微波裂解5.5 min，冷却至室温，再次通过超滤膜组件，合并两次透过液，得到石斛寡糖酶解透过液；石斛寡糖酶解透过液通过反渗透系统浓缩，在进膜压力3.0 MPa下，膜通量为9 L/(m²*h)条件下，浓缩至原体积的15%，得反渗透浓缩液。取反渗透浓缩液进行真空冷冻干燥，得到石斛寡糖素，根据苯酚-硫酸法测得寡糖含量为78.8%；

步骤二、石斛胚芽的制备

取成熟的铁皮石斛荚果，首先用1 g/L的升汞水溶液进行表面浸泡消毒40 min，接着用无菌蒸馏水清洗5次，然后切开果实，取出种胚，接种于含培养基的培养板上，培养基为添加了80 mg/L的石斛寡糖素的MS液体培养基，在温度25±2 ℃、第1～60天，光照强度35 μmol／(m²·s)，光能比为：红光 : 蓝光 = 2 : 3；第61～110天，光照强度50 μmol／(m²·s)，光能比为：白光 : 蓝光 = 5 : 1、每天光照12小时的条件下培养110天，得到绿色铁皮石斛胚芽；

步骤三、石斛胚芽茶的制作：

将300 g铁皮石斛胚芽在温度为250 ℃条件下，杀青2.5 min；将杀青后的胚芽，揉捻并摆成本体条形后压片。将压片后的胚芽放入40±2 ℃温度下，烘9小时后，得胚芽茶17.8 g。所得胚芽茶色泽淡绿，条形扁平，冲泡后茶色青亮透明，入口清香，口感微甜。

实施例5：

一种石斛胚芽茶的生产方法包括以下操作步骤：

步骤一、石斛寡糖素的制备

取1 kg的铜皮石斛鲜品，打碎，添加20 L比例的蒸馏水，在温度50 ℃，超声功率800 W，占空比1﹕0.6的条件下，超声波辅助浸提1 h，经10000 r/min室温条件下离心4 min，得到上清液和沉淀A；将沉淀A按上述条件重复浸提一次，收集并合并两次上清液为上清液A，将上清液A在65 ℃、真空度-0.07 MPa条件下减压浓缩，得到浓缩提取液A；向浓缩提取液A中添加95%乙醇至乙醇体积百分比为80%，室温条件下静置24 h，10000 r/min室温条件下离心4 min，得上清液B和沉淀B，取沉淀B溶于蒸馏水中，得到石斛寡糖粗提液；取石斛寡糖粗提液，每毫升石斛寡糖粗提液加入1×10³ U的木瓜蛋白酶，在55 ℃下、pH 5.7条件下酶解8 h，接着在100 ℃灭活3 min，得石斛寡糖酶解液；取石斛寡糖酶解液，通过截留分子量为2.5 KDa的超滤膜组件，在压力0.20 MPa，流速1.0 m/s下超滤，收集透过液，截留液重复经1400 W、2450 MHz微波裂解6 min，冷却至室温，再次通过超滤膜组件，合并两次透过液，得到石斛寡糖酶解透过液；石斛寡糖酶解透过液通过反渗透系统浓缩，在进膜压力2.0 MPa下，膜通量为5 L/(m²*h)条件下，浓缩至原体积的10%，得反渗透浓缩液。取反渗透浓缩液进行真空冷冻干燥，得到石斛寡糖素，根据苯酚-硫酸法测得寡糖含量为76.7%；

步骤二、石斛胚芽的制备

取成熟的铜皮石斛荚果，首先用1 g/L的升汞水溶液进行表面浸泡消毒40 min，接着用无菌蒸馏水清洗5次，然后切开果实，取出种胚，接种于含培养基的培养板上，培养基为添加了50 mg/L的石斛寡糖素的MS液体培养基，在温度25±2 ℃、第1～60天，光照强度35 μmol／(m²·s)，光能比为：红光 : 蓝光 = 2 : 3；第61～100天，光照强度50 μmol／(m²·s)，光能比为：白光 : 蓝光 = 5 : 1、每天光照12小时的条件下培养100天，得到绿色铜皮石斛胚芽；

步骤三、石斛胚芽茶的制作：

将300 g铜皮石斛胚芽在温度为300 ℃条件下，杀青2 min；将杀青后的胚芽，揉捻并摆成本体条形后压片。将压片后的胚芽放入40±2 ℃温度下，烘9小时后，得胚芽茶17.1 g。所得胚芽茶色泽灰绿，条形扁平，冲泡后茶色青亮透明，入口清香，口感微甜。

实施例6：

一种石斛胚芽茶的生产方法包括以下操作步骤：

步骤一、石斛寡糖素的制备

取0.5 kg的铜皮石斛干品，打碎，添加40 L比例的蒸馏水，在温度50 ℃，超声功率800 W，占空比1﹕0.6的条件下，超声波辅助浸提1 h，经10000 r/min室温条件下离心4 min，得到上清液和沉淀A；将沉淀A按上述条件重复浸提一次，收集并合并两次上清液为上清液A，将上清液A在65 ℃、真空度-0.07 MPa条件下减压浓缩，得到浓缩提取液A；向浓缩提取液A中添加95%乙醇至乙醇体积百分比为80%，室温条件下静置24 h，10000 r/min室温条件下离心4 min，得上清液B和沉淀B，取沉淀B溶于蒸馏水中，得到石斛寡糖粗提液；取石斛寡糖粗提液，每毫升石斛寡糖粗提液加入1×10³ U的木瓜蛋白酶，在55 ℃下、pH 5.7条件下酶解8 h，接着在100 ℃灭活3 min，得石斛寡糖酶解液；取石斛寡糖酶解液，通过截留分子量为5 KDa的超滤膜组件，在压力0.50 MPa，流速5 m/s下超滤，收集透过液，截留液重复经1400 W、2450 MHz微波裂解6 min，冷却至室温，再次通过超滤膜组件，合并两次透过液，得到石斛寡糖酶解透过液；石斛寡糖酶解透过液通过反渗透系统浓缩，在进膜压力4.0 MPa下，膜通量为10 L/(m²*h)条件下，浓缩至原体积的10%，得反渗透浓缩液。取反渗透浓缩液进行真空冷冻干燥，得到石斛寡糖素，根据苯酚-硫酸法测得寡糖含量为77.2%；

步骤二、石斛胚芽的制备

取成熟的铜皮石斛荚果，首先用1 g/L的升汞水溶液进行表面浸泡消毒40 min，接着用无菌蒸馏水清洗5次，然后切开果实，取出种胚，接种于含培养基的培养板上，培养基为添加了100 mg/L的石斛寡糖素的MS液体培养基，在温度25±2 ℃、第1～60天，光照强度35 μmol／(m²·s)，光能比为：红光 : 蓝光 = 2 : 3；第61～100天，光照强度50 μmol／(m²·s)，光能比为：白光 : 蓝光 = 5 : 1、每天光照12小时的条件下培养100天，得到绿色铜皮石斛胚芽；

步骤三、石斛胚芽茶的制作：

将300 g铜皮石斛胚芽在温度为300 ℃条件下，杀青2 min；将杀青后的胚芽，揉捻并摆成本体条形后压片。将压片后的胚芽放入40±2 ℃温度下，烘9小时后，得胚芽茶18.1 g。所得胚芽茶色泽淡绿，条形扁平，冲泡后茶色青亮透明，入口清香，口感微甜。

Claims (4)

1.一种石斛胚芽茶的生产方法，其特征在于包括以下操作步骤：

(1)石斛胚芽的制备；将成熟的石斛荚果的种胚接种于培养基A上，在温度25±2℃、每天光照12小时的条件下培养100～120天，得到绿色石斛胚芽；

所述液体培养基A为添加了石斛寡糖素的MS液体培养基；所述石斛寡糖素中寡糖含量不低于70％；

(2)石斛胚芽茶的制作：将绿色石斛胚芽杀青，揉捻成条形，压片，烘焙，即得到石斛胚芽茶；所得胚芽茶色泽淡绿，条形扁平；

具体制作操作步骤如下：

(1)石斛寡糖素的制备

按1g：10～80ml的比例将石斛和蒸馏水，超声辅助浸提1～2h，得到浸提液；浸提液在6000～10000r/min、室温条件下离心4～5min，得到上清液和沉淀A；将沉淀A按上述条件重复浸提一次，收集并合并两次上清液为上清液A，将上清液A在55～65℃、真空度-0.07～-0.10MPa条件下减压浓缩，得到浓缩提取液A；向浓缩提取液A中添加95％乙醇至乙醇体积百分比为80％，室温条件下静置12～24h，6000～10000r/min、室温条件下离心4～5min，得上清液B和沉淀B，取沉淀B溶于蒸馏水中，得到石斛寡糖粗提液；取石斛寡糖粗提液，每毫升石斛寡糖粗提液中加入1×10³U的木瓜蛋白酶，在55℃下、pH 5.7条件下酶解6～8h，接着在100℃灭活3～5min，得到石斛寡糖酶解液；取石斛寡糖酶解液，通过截留分子量为2.5～5KDa的超滤膜组件，在压力0.05～0.5MPa、流速为0.1～5.0m/s条件下超滤，收集透过液，截留液经1400W、2450MHz微波裂解5～6min，冷却至室温，再次通过上述超滤膜组件，在上述相同条件下超滤，合并两次透过液，得到石斛寡糖酶解透过液；石斛寡糖酶解透过液通过反渗透系统浓缩，得反渗透浓缩液；将反渗透浓缩液进行干燥，得到石斛寡糖素，所述石斛寡糖素中寡糖含量不低于70％；

(2)石斛胚芽的制备

取成熟的石斛荚果，首先用1g/L的升汞水溶液进行表面浸泡消毒40min，接着用无菌蒸馏水清洗4～5次，然后切开果实，取出种胚，接种于含培养基A的培养板上，在温度25±2℃、不同光质、每天光照12小时的条件下培养100～120天，得到绿色石斛胚芽；

所述液体培养基A为添加10～100mg/L的石斛寡糖素的MS液体培养基；

所述不同光质为：第1～60天，光照强度为35μmol/(m²·s)，光能比为红光:蓝光＝2:3；从第61天开始，光照强度为50μmol/(m²·s)，光能比为白光:蓝光＝5:1；

(3)石斛胚芽茶的制作

将绿色石斛胚芽在温度为200～300℃条件下杀青2～3min；得到杀青石斛胚芽；取杀青石斛胚芽揉捻并摆成本体条形，压片，接着放入40±2℃条件下烘焙8～10h，即得到石斛胚芽茶；所得胚芽茶色泽淡绿，条形扁平。

2.根据权利要求1所述的一种石斛胚芽茶的生产方法，其特征在于：所述石斛为霍山石斛或铁皮石斛或铜皮石斛。

3.根据权利要求1所述的一种石斛胚芽茶的生产方法，其特征在于：所述的超声辅助浸提条件为超声温度30～50℃，超声功率600～800W，占空比1：0.1～1：0.6。

4.根据权利要求1所述的一种石斛胚芽茶的生产方法，其特征在于：反渗透浓缩条件为进膜压力0.5～4.0MPa，膜通量为1～10L/(m²·h)，浓缩至体积为原体积的10～20％。