CN105779388A - 一种脐血间充质干细胞的培养基及其培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种脐血间充质干细胞的培养基及其培养方法。该培养基包括PRP、黄芪多糖和无血清培养基。本发明提供的培养基可显著提高脐血间充质干细胞的增殖效率；在促进细胞增殖的同时，还可维持脐血间充质干细胞的表型和特性；可减少动物血清应用的风险和免疫原性，安全性好。

Description

一种脐血间充质干细胞的培养基及其培养方法
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种脐血间充质干细胞的培养基及其培养方法。
背景技术
间充质干细胞(MSCs)是具有多潜能的成体干细胞，普遍存在于不同组织，主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，可刺激组织生长和修复，增强组织的再生能力。脐带血中存在与骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞相似的细胞群，具有在特定诱导条件下可向多种细胞分化的能力，如向成骨分化和成脂分化。人脐带血间充质干细胞已经在糖尿病、神经疾病、心脏病等动物模型中应用。由于脐带血采集简单、获取成功率高、细菌和病毒感染风险低、免疫原性低等优点，在细胞治疗和组织工程方面具有广泛的应用前景。
将间充质干细胞应用于组织工程需要大量的种子细胞，但脐血来源的间充质干细胞较骨髓来源的少，存在培养成功率低、体内增殖率低等缺点。现在通常采用添加了生长所需因子的无血清培养基、利用胎牛血清或脐带血清作为培养用血清培养脐血间充质干细胞。无血清培养体系虽能保证细胞批次的稳定性，但无法解决异种蛋白内在化问题；胎牛血清则存在异体血清排斥反应，生物危险性高，难以防止人与其他物种间病毒的感染和传播。脐带血清含有多种脐带间充质干细胞生长所需蛋白，如粒细胞刺激因子、单核细胞刺激因子、白细胞介素6及肿瘤坏死因子等，促进造血细胞的增殖、体外生长和扩增。但由于脐带血来源和保存的特殊性，而限制了其应用。有报道利用成人自体血清作为血清替代物培养脐带间充质干细胞；但其培养效率比脐带血清低。
因此，需要提供一种增殖效率高、安全性好的脐血间充质干细胞的培养基及其培养方法。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种脐血间充质干细胞的培养基及其培养方法。该培养基可显著提高增殖效率，且安全性好。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种脐血间充质干细胞的培养基，包括PRP、黄芪多糖和无血清培养基。
PRP(PlateletRichPlasma)是富含血小板、血浆或富含生长因子的血液。PRP技术是指利用自身的血液，提取出富含高浓度血小板和各种自身生长因子的血浆。
黄芪多糖是豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根经提取、浓缩、纯化而成的水溶性杂多糖，淡黄色，粉末细腻，均匀无杂质，具引湿性。黄芪多糖由己糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等组成，可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用。
本发明将PRP、黄芪多糖与无血清培养基组合而成的培养体系可显著提高脐血间充质干细胞增殖的能力。
作为优选，培养基中各组分的用量为：
PRP的体积百分含量为：5％～10％；
黄芪多糖：0.1～1mg/mL；
无血清培养基：补足。
在本发明提供的一些实施例中，培养基中各组分的用量为：
PRP的体积百分含量为：10％；
黄芪多糖：1mg/mL；
无血清培养基：补足。
在本发明提供的另一些实施例中，培养基中各组分的用量为：
PRP的体积百分含量为：8％；
黄芪多糖：0.5mg/mL；
无血清培养基：补足。
在本发明提供的另一些实施例中，培养基中各组分的用量为：
PRP的体积百分含量为：5％；
黄芪多糖：0.1mg/mL；
无血清培养基：补足。
作为优选，无血清培养基为DMEM/F12培养基。
本发明还提供了一种脐血间充质干细胞的培养方法，采用权利要求1至6中任一项培养基培养脐血间充质干细胞。
作为优选，培养的时间为10～12天。
优选地，培养的时间为12天。
在本发明提供的一些实施例中，培养的条件为37℃、5％CO2。
在本发明提供的一些实施例中，培养过程中第5天换液，之后每隔3天换液一次。
本发明提供了一种脐血间充质干细胞的培养基及其培养方法。该培养基包括PRP、黄芪多糖和无血清培养基。本发明至少具有如下优势之一：
1、本发明提供的培养基可显著提高脐血间充质干细胞的增殖效率；
2、本发明利用黄芪多糖培养脐血间充质干细胞，在促进细胞增殖的同时，还可维持脐血间充质干细胞的表型和特性；
3、本发明培养基可减少动物血清应用的风险和免疫原性，安全性好。
附图说明
图1示原代分离的脐血间充质干细胞的形态；
图2示对照组的脐血间充质干细胞的流式检测结果；其中2-1至2-5分别示标准对照中的空白、CD90、CD73、CD45、HLA-DR检测结果；2-6至2-10分别示样品组中的空白、CD90、CD73、CD45、HLA-DR检测结果；
图3示实验组1的脐血间充质干细胞的流式检测结果；其中3-1至3-5分别示标准对照中的空白、CD90、CD73、CD45、HLA-DR检测结果；3-6至3-10分别示样品组中的空白、CD90、CD73、CD45、HLA-DR检测结果；
图4示实验组2的脐血间充质干细胞的流式检测结果；其中4-1至4-5分别示标准对照中的空白、CD90、CD73、CD45、HLA-DR检测结果；4-6至4-10分别示样品组中的空白、CD90、CD73、CD45、HLA-DR检测结果；
图5示实验组3的脐血间充质干细胞的流式检测结果；其中5-1至5-5分别示标准对照中的空白、CD90、CD73、CD45、HLA-DR检测结果；5-6至5-10分别示样品组中的空白、CD90、CD73、CD45、HLA-DR检测结果；
图6示脐血间充质干细胞的成骨分化染色结果。
具体实施方式
本发明公开了一种脐血间充质干细胞的培养基及其培养方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的脐血间充质干细胞的培养基及其培养方法中所用生物材料或试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
(1)实验分组
表1实验分组情况
组别 培养基组成
对照组 DMEM/F12+10％FBS
实验组1 DMEM/F12+10％PRP
实验组2 DMEM/F12+1mg/mL黄芪多糖
实验组3 DMEM/F12+10％PRP+1mg/mL黄芪多糖
(2)成人自体血清制备
抽取正常志愿者外周血于无菌玻璃瓶，置于培养箱静置2h，待血凝块析出后，吸出血清移入离心管，低温1500转离心20min，弃沉淀，获得PRP，分装保存。使用前60℃水浴灭活20min，放4℃冰箱待用。配制如实验分组中的培养基。
(3)脐血间充质干细胞原代分离
用等量PBS与脐血混匀，滴入到等量的淋巴细胞分离液，500g离心20min，小心抽取白膜层细胞，用PBS洗涤离心，将细胞分成4份，分别用对照组、实验组1、实验组2和实验组3的培养基重悬，接种至培养皿培养，5天后换液，之后每隔3天换液，至融合度70％～80％，常规消化传代。
(4)细胞形态观察
在原代培养的第1天、第5天、第8天采用显微镜对细胞进行拍照，并观察细胞生长状态。细胞形态图片见图1。
由图1可以看出，在第一天时，对照组和实验组都有少量细胞贴壁，但是实验组1、实验组2和实验组3贴壁的细胞要比对照组多；在第五天时，细胞开始成团成梭形生长，实验组1、实验组2和实验组3成团率要比对照组高；在第8天时，实验组2、实验组3的细胞汇合度已达到100％，但是对照组和实验组1的汇合度达到80％左右。由细胞形态和生长速度来看，实验组1、实验组2和实验组3的细胞增殖能力更强。
(5)细胞表面标记的鉴定
取四组对数生长期P2代的细胞，吸出培养基后，加入0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA的消化液进行消化，之后用适量血清终止消化1000rpm离心10min，弃上清，用4℃遇冷的PBS洗涤细胞2次后重悬均匀，调整细胞浓度约为105-106个/mL。取2个上样管，每管加入500μL的单细胞悬液，离心后1号管标为标准对照，2号各加入2μLFITC或PE标记的小鼠抗人细胞表面分子CD73、CD90、CD45、HLA-DR抗体工作液。室温，避光，孵育20min；PBS洗两遍，以去除未结合的抗体，500μL1640培养基重悬后，上流式细胞仪鉴定表面标记。流式鉴定图片见图2～5，检测结果见表2。
由图2～5和表2可知，实验组CD73和CD90的阳性表达率高于对照组，实验组CD45和HLA-DR的表达率低于对照组，并且具有显著性差异，说明实验组得到的细胞纯度更高，而实验组3纯度高于实验组2和实验组1，所以脐血浆和黄芪多糖可以很好的维持细胞的干性。
表2流式细胞检测结果一览表
组别 CD90 CD73 CD45 HLA-DR
对照组 92.3％ 93.3％ 2.0％ 0.0％
实验组1 99.5％** 99.6％** 0.1％** 0.1％
实验组2 99.9％** 98.4％** 0.3％ 0.3％
实验组3 100％** 100％** 0.0％** 0.1％
备注：**代表和对照组相比较，p<0.01。
(6)脐血间充质干细胞成骨分化检测
取四组P3代的脐血间充质干细胞，吸出培养基后，加入0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA的消化液进行消化，之后用适量血清终止消化。1200rpm离心5min，脂肪干细胞完全培养基重悬，调整密度为1×104/mL，接种于6孔板中，每孔2mL。当细胞达到80％左右融合时，加入成骨诱导剂(10-8mol/L地塞米松+50μg/mL抗坏血酸+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)，每2～3天换液。培养21天后，分别采用染色和荧光定量PCR检测成骨分化情况：
A、染色分析
部分细胞采用茜素红进行染色，观察形成钙结节的情况。染色结果见图6。
由染色结果可知，培养21天后，对照组、实验组1、实验组2和实验组3的细胞都有部分被染成红色，都具有向成骨分化的潜能，但是实验组3的细胞成骨诱导分化潜能高于实验组2、实验组1和对照组，因此说明脐血浆和黄芪多糖可以很好的维持细胞的诱导分化潜能。
B、荧光定量PCR检测
部分细胞用于抽提RNA，逆转录成cDNA，以此cDNA为模板，以上游引物:TCATAGCCTTACCTGGCATAG、下游引物:TGGACTTCATGGTGAAGGCAG(ALP)；上游引物:TGCTGCTGAAACAAACACAC、下游引物:TGCTTAGATAAATAAGCCACTTTTC(runx2)为引物进行免疫荧光定量PCR，其中beta-actin作为内参，检测成骨细胞标志蛋白ALP、runx2的基因表达量。最后根据根据得到的C(t)值，以诱导前细胞中基因的表达量为参照，计算诱导后细胞中目的基因相对于诱导前的表达量。荧光定量PCR分析结果见表3：
表3荧光定量PCR检测结果
组别 ALP相对表达量 runx2相对表达量
诱导前 1 1
对照组 3.5** 6.9**
实验组1 8.7** 16.9**
实验组2 6.4** 14.8**
实验组3 10.4** 20.9**
备注：**代表和对照组相比较，p<0.01。
由表3中结果可知，培养21天后，对照组、实验组1、实验组2和实验组3的细胞ALP和runx2的基因表达量都有所升高，但是实验组3的细胞ALP和runx2基因表达量明显高于其他三组，因此说明实验组3的细胞成骨诱导分化潜能高于实验组1、实验组2和对照组，因此说明脐血浆和黄芪多糖可以很好的维持细胞的诱导分化潜能。
实施例2
(1)实验分组
表4实验分组情况
组别 培养基组成
对照组 DMEM/F12+10％FBS
实验组1 DMEM/F12+8％PRP
实验组2 DMEM/F12+0.5mg/mL黄芪多糖
实验组3 DMEM/F12+8％PRP+0.5mg/mL黄芪多糖
(2)成人自体血清制备
抽取正常志愿者外周血于无菌玻璃瓶，置于培养箱静置2h，待血凝块析出后，吸出血清移入离心管，低温1500转离心20min，弃沉淀，获得PRP，分装保存。使用前60℃水浴灭活20min，放4℃冰箱待用。配制如实验分组中的培养基。
(3)脐血间充质干细胞原代分离
用等量PBS与脐血混匀，滴入到等量的淋巴细胞分离液，500g离心20min，小心抽取白膜层细胞，用PBS洗涤离心，将细胞分成4份，分别用对照组、实验组1、实验组2和实验组3的培养基重悬，接种至培养皿培养，5天后换液，之后每隔3天换液，至融合度70％～80％，常规消化传代。
(4)细胞形态观察
在原代培养的第1天、第5天、第8天采用显微镜对细胞进行拍照，并观察细胞生长状态。细胞形态图片与图1相似。
可见，在第一天时，对照组和实验组都有少量细胞贴壁，但是实验组1、实验组2和实验组3贴壁的细胞要比对照组多；在第五天时，细胞开始成团成梭形生长，实验组1、实验组2和实验组3成团率要比对照组高；在第8天时，实验组3的细胞汇合度已达到100％，但是对照组和实验组1、实验组2的汇合度达到80％左右。由细胞形态和生长速度来看，实验组3的细胞增殖能力更强。
(5)细胞表面标记的鉴定
取四组对数生长期P2代的细胞，吸出培养基后，加入0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA的消化液进行消化，之后用适量血清终止消化1000rpm离心10min，弃上清，用4℃遇冷的PBS洗涤细胞2次后重悬均匀，调整细胞浓度约为105-106个/mL。取2个上样管，每管加入500μL的单细胞悬液，离心后1号管标为标准对照，2号各加入2μLFITC或PE标记的小鼠抗人细胞表面分子CD73、CD90、CD45、HLA-DR抗体工作液。室温，避光，孵育20min；PBS洗两遍，以去除未结合的抗体，500μL1640培养基重悬后，上流式细胞仪鉴定表面标记。流式鉴定图片与实施例1中图2～5相似，流式检测结果见表5。
由流式检测结果可知，实验组CD73和CD90的阳性表达率高于对照组，实验组CD45和HLA-DR的表达率低于对照组，并且具有显著性差异，说明实验组得到的细胞纯度更高，而实验组3的纯度高于实验组1和实验组2，所以脐血浆和黄芪多糖可以很好的维持细胞的干性。
表5流式细胞检测结果一览表
组别 CD90 CD73 CD45 HLA-DR
对照组 92.3％ 93.3％ 2.0％ 0.0％
实验组1 99.6％** 99.3％** 0.0％** 0.1％
实验组2 99.8％** 98.9％** 0.1％ 0.2％
实验组3 100％** 100％** 0.1％** 0.0％
备注：**代表和对照组相比较，p<0.01。
(6)脐血间充质干细胞成骨分化检测
取四组P3代的脐血间充质干细胞，吸出培养基后，加入0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA的消化液进行消化，之后用适量血清终止消化。1200rpm离心5min，脂肪干细胞完全培养基重悬，调整密度为1×104/mL，接种于6孔板中，每孔2mL。当细胞达到80％左右融合时，加入成骨诱导剂(10-8mol/L地塞米松+50μg/mL抗坏血酸+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)，每2～3天换液。培养21天后，分别采用染色和荧光定量PCR检测成骨分化情况：
A、染色分析
部分细胞采用茜素红进行染色，观察形成钙结节的情况。染色结果与图6相近。
由染色结果可知，培养21天后，对照组、实验组1、实验组2和实验组3的细胞都有部分被染成红色，都具有向成骨分化的潜能，但是实验组3的细胞成骨诱导分化潜能高于实验组1、实验组2和对照组，因此说明脐血浆和黄芪多糖可以很好的维持细胞的诱导分化潜能。
B、荧光定量PCR检测
部分细胞用于抽提RNA，逆转录成cDNA，以此cDNA为模板，以上游引物:TCATAGCCTTACCTGGCATAG、下游引物:TGGACTTCATGGTGAAGGCAG(ALP)；上游引物:TGCTGCTGAAACAAACACAC、下游引物:TGCTTAGATAAATAAGCCACTTTTC(runx2)为引物进行免疫荧光定量PCR，其中beta-actin作为内参，检测成骨细胞标志蛋白ALP、runx2的基因表达量。最后根据根据得到的C(t)值，以诱导前细胞中基因的表达量为参照，计算诱导后细胞中目的基因相对于诱导前的表达量。荧光定量PCR分析结果见表6：
表6荧光定量PCR检测结果
组别 ALP相对表达量 runx2相对表达量
诱导前 1 1
对照组 3.5** 6.9**
实验组1 8.4** 17.2**
实验组2 7.1** 15.3**
实验组3 11.6** 22.1**
备注：**代表和对照组相比较，P<0.01。
由表6中结果可知，培养21天后，对照组、实验组1、实验组2和实验组3的细胞ALP和runx2的基因表达量都有所升高，但是实验组3的细胞ALP和runx2基因表达量明显高于其他三组，因此说明实验组3的细胞成骨诱导分化潜能高于实验组1、实验组2和对照组，因此说明脐血浆和黄芪多糖可以很好的维持细胞的诱导分化潜能。
实施例3
(1)实验分组
表7实验分组情况
组别 培养基组成
对照组 DMEM/F12+10％FBS
实验组1 DMEM/F12+5％PRP
实验组2 DMEM/F12+0.1mg/mL黄芪多糖
实验组3 DMEM/F12+5％PRP+0.1mg/mL黄芪多糖
(2)成人自体血清制备
抽取正常志愿者外周血于无菌玻璃瓶，置于培养箱静置2h，待血凝块析出后，吸出血清移入离心管，低温1500转离心20min，弃沉淀，获得PRP，分装保存。使用前60℃水浴灭活20min，放4℃冰箱待用。配制如实验分组中的培养基。
(3)脐血间充质干细胞原代分离
用等量PBS与脐血混匀，滴入到等量的淋巴细胞分离液，500g离心20min，小心抽取白膜层细胞，用PBS洗涤离心，将细胞分成4份，分别用对照组、实验组1、实验组2和实验组3的培养基重悬，接种至培养皿培养，5天后换液，之后每隔3天换液，至融合度70％～80％，常规消化传代。
(4)细胞形态观察
在原代培养的第1天、第5天、第8天采用显微镜对细胞进行拍照，并观察细胞生长状态。细胞形态图片与图1相似。
可见，在第一天时，对照组和实验组都有少量细胞贴壁，但是实验组1、实验组2和实验组3贴壁的细胞要比对照组多；在第五天时，细胞开始成团成梭形生长，实验组1、实验组2和实验组3成团率要比对照组高；在第8天时，实验组3的细胞汇合度已达到100％，但是对照组和实验组1、实验组2的汇合度达到80％左右。由细胞形态和生长速度来看，实验组3的细胞增殖能力更强。
(5)细胞表面标记的鉴定
取四组对数生长期P2代的细胞，吸出培养基后，加入0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA的消化液进行消化，之后用适量血清终止消化1000rpm离心10min，弃上清，用4℃遇冷的PBS洗涤细胞2次后重悬均匀，调整细胞浓度约为105-106个/mL。取2个上样管，每管加入500μL的单细胞悬液，离心后1号管标为标准对照，2号各加入2μLFITC或PE标记的小鼠抗人细胞表面分子CD73、CD90、CD45、HLA-DR抗体工作液。室温，避光，孵育20min；PBS洗两遍，以去除未结合的抗体，500μL1640培养基重悬后，上流式细胞仪鉴定表面标记。流式鉴定图片与实施例1中图2～5相似，流式检测结果见表8。
由流式检测结果可知，实验组CD73和CD90的阳性表达率高于对照组，实验组CD45和HLA-DR的表达率低于对照组，并且具有显著性差异，说明实验组得到的细胞纯度更高，而实验组3的纯度高于实验组1和实验组2，所以脐血浆和黄芪多糖可以很好的维持细胞的干性。
表8流式细胞检测结果一览表
组别 CD90 CD73 CD45 HLA-DR
对照组 92.3％ 93.3％ 2.0％ 0.0％
实验组1 99.3％** 99.9％** 0.1％** 0.1％
实验组2 99.9％** 98.1％** 0.3％ 0.1％
实验组3 100％** 99.9％** 0.0％** 0.0％
备注：**代表和对照组相比较，p<0.01。
(6)脐血间充质干细胞成骨分化检测
取四组P3代的脐血间充质干细胞，吸出培养基后，加入0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA的消化液进行消化，之后用适量血清终止消化。1200rpm离心5min，脂肪干细胞完全培养基重悬，调整密度为1×104/mL，接种于6孔板中，每孔2mL。当细胞达到80％左右融合时，加入成骨诱导剂(10-8mol/L地塞米松+50μg/mL抗坏血酸+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)，每2～3天换液。培养21天后，分别采用染色和荧光定量PCR检测成骨分化情况：
A、染色分析
部分细胞采用茜素红进行染色，观察形成钙结节的情况。染色结果与图6相近。
由染色结果可知，培养21天后，对照组、实验组1、实验组2和实验组3的细胞都有部分被染成红色，都具有向成骨分化的潜能，但是实验组3的细胞成骨诱导分化潜能高于实验组1、实验组2和对照组，因此说明脐血浆和黄芪多糖可以很好的维持细胞的诱导分化潜能。
B、荧光定量PCR检测
部分细胞用于抽提RNA，逆转录成cDNA，以此cDNA为模板，以上游引物:TCATAGCCTTACCTGGCATAG、下游引物:TGGACTTCATGGTGAAGGCAG(ALP)；上游引物:TGCTGCTGAAACAAACACAC、下游引物:TGCTTAGATAAATAAGCCACTTTTC(runx2)为引物进行免疫荧光定量PCR，其中beta-actin作为内参，检测成骨细胞标志蛋白ALP、runx2的基因表达量。最后根据根据得到的C(t)值，以诱导前细胞中基因的表达量为参照，计算诱导后细胞中目的基因相对于诱导前的表达量。荧光定量PCR分析结果见表9：
表9荧光定量PCR检测结果
组别 ALP相对表达量 runx2相对表达量
诱导前 1 1
对照组 3.5** 6.9**
实验组1 9.0** 18.9**
实验组2 8.1** 16.2**
实验组3 13.6** 24.8**
备注：**代表和对照组相比较，p<0.01。
由表9中结果可知，培养21天后，对照组、实验组1、实验组2和实验组3的细胞ALP和runx2的基因表达量都有所升高，但是实验组3的细胞ALP和runx2基因表达量明显高于其他三组，因此说明实验组3的细胞成骨诱导分化潜能高于实验组1、实验组2和对照组，因此说明脐血浆和黄芪多糖可以很好的维持细胞的诱导分化潜能。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种脐血间充质干细胞的培养基，其特征在于，包括PRP、黄芪多糖和无血清培养基。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基中各组分的用量为：
PRP的体积百分含量为：5％～10％；
黄芪多糖：0.1～1mg/mL；
无血清培养基：补足。
3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述培养基中各组分的用量为：
PRP的体积百分含量为：10％；
黄芪多糖：1mg/mL；
无血清培养基：补足。
4.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述培养基中各组分的用量为：
PRP的体积百分含量为：8％；
黄芪多糖：0.5mg/mL；
无血清培养基：补足。
5.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述培养基中各组分的用量为：
PRP的体积百分含量为：5％；
黄芪多糖：0.1mg/mL；
无血清培养基：补足。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的培养基，其特征在于，所述无血清培养基为DMEM/F12培养基。
7.一种脐血间充质干细胞的培养方法，其特征在于，采用权利要求1至6中任一项所述培养基培养脐血间充质干细胞。
8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述培养的时间为10～12天。
9.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述培养的条件为37℃、5％CO2。
10.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述培养过程中第5天换液，之后每隔3天换液一次。
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