CN105777754B - 吡咯并嘧啶化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药物化学领域，具体涉及如式I所示的吡咯并嘧啶化合物、其立体异构体、其药学上可接受的盐。本发明还涉及制备如式I所示的吡咯并嘧啶化合物的方法、药物组合物、以及该化合物在治疗两面神激酶介导的疾病中的用途。

Description

吡咯并嘧啶化合物
技术领域
本发明涉及如式I所示的吡咯并嘧啶化合物、其立体异构体、其药学上可接受的盐。本发明还涉及制备如式I所示的吡咯并嘧啶化合物的方法、药物组合物、以及该化合物在治疗两面神激酶介导的疾病中的用途。
背景技术
蛋白激酶(Protein kinases，PK)又称蛋白质磷酸化酶(Proteinphosphakinase)，是一类催化蛋白质磷酸化反应的酶。蛋白激酶通过催化蛋白的磷酸化从而发挥其生理学功能，包括细胞生长、存活和分化、器官形成和形态变化、新血管的生成、组织修复和再生。除了正常生理功能外，许多蛋白激酶在人类的疾病(例如癌症)中起着重要的作用。蛋白激酶的一个亚组致癌蛋白激酶在失调时可引起肿瘤的形成和生长，并进一步导致肿瘤转移和发展。迄今，致癌蛋白激酶是癌症疾病治疗最重要的靶标之一。
蛋白激酶可分为受体型和非受体型。非受体型酪氨酸激酶(PTK)的亚家族中包括两面神激酶(JAK)，对于非受体型酪氨酸激酶的详细情况可参见Bolen JB.Nonreceptortyrosine protein kinases.Oncogene.1993,8(8):2025-31。
两面神激酶(Janus kinase，JAK)是一类非受体型酪氨酸激酶(PTK)，其存在于细胞内，通过JAK-STAT通路传导细胞因子刺激信号。JAK-STAT通路将细胞外的化学信号经细胞膜传导入位于细胞核内DNA上的基因启动子上，最终影响细胞中DNA转录与活性水平发生改变。JAK-STAT通路由三个主要部分组成：1)受体；2)两面神激酶(JAK)和3)信号转导和转录激活蛋白(STAT)。所述受体可由干扰素、白细胞介素、生长因子或其它化学信使激活，激活导致JAK自身磷酸化；接下来STAT蛋白与磷酸化受体结合，使得STAT被JAK磷酸化；然后磷酸化STAT蛋白从受体上分离、二聚并易位到细胞核中，以结合到特异性DNA位点并改变转录(Scott,M.J.,C.J.Godshall et al.(2002).“Jaks,STATs,Cytokines,and Sepsis”ClinDiagn Lab Immunol 9(6):1153-9)。
JAK家族在涉及免疫应答的细胞增殖和功能性细胞因子依赖性调节中产生作用。目前，有四种已知的哺乳动物JAK家族成员：JAK1、JAK2、JAK3和TYK2(Tyrosine kinase 2)。JAK蛋白的大小范围在120-140kDa，其包含7个保守的JAK同源性(JH)结构域；其中之一为功能性催化激酶结构域，而另一个为假性激酶(pseudokinase)结构域，其有效地发挥调节功能和/或作为STAT的停靠位点起作用(Scott,Godshall et al.2002，supra)。
目前，两面神激酶或相关激酶的抑制剂已有报道，例如参见WO9965909、US20040198737、WO2004099204、WO2004099205、WO200142246、WO200472063、WO9962908、WO2007070514等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种如式Ⅰ所示的化合物、其立体异构体、其药学上可接受的盐：
其中，
R1和R2各自独立地选自H、卤素、氰基、C1～8烷基、-NR7R8、-NH-C1～6亚烷基-NR9R10、-NHCO-C1～6亚烷基-NR9R10、-NH-C1～6亚烷基-CO-NR9R10、-NHCO-C1～6亚烷基-COO-C1～6烷基、-NH-C3～6亚环烷基-CO-NR9R10、-NH-C2～6亚烯基-CONR9R10、-NH-C1～6亚烷基-氰基、-NHCO-NH-R11、-CONR12R13或-CONH-C1～6亚烷基-NR12R13，所述C1～8烷基任选被羟基、卤素或氨基取代，条件是R1和R2不同时为H；
所述R7和R8各自独立地选自H、C1～6烷基、C1～6烷基酰基或C1～6烷基磺酰基；或者R7与R8与所连N原子一起形成5元或6元杂环基，所述5元或6元杂环基任选被氧代取代；
所述R9和R10各自独立地选自H、羟基或C1～6烷基；或者R9与R10与所连N原子一起形成5或6元的杂环基；
所述R11选自任选被C1～4烷基取代的5元或6元杂芳基；
所述R12和R13各自独立地选自H、C1～6烷基、C1～6烷基酰基或C1～6烷基磺酰基；或者R12与R13与所连N原子一起形成5元或6元杂环基，所述5元或6元杂环基任选被氧代取代；
R3选自H或卤素；
R4选自氰基或-CONH2；
R5和R6各自独立地选自H、羟基或卤素。
在一些优选的实施方式中，R1和R2各自独立地选自H、卤素、氰基、C1～6烷基、-NR7R8、-NH-C1～4亚烷基-NR9R10、-NHCO-C1～4亚烷基-NR9R10、-NH-C1～4亚烷基-CO-NR9R10、-NHCO-C1～4亚烷基-COO-C1～4烷基、-NH-C3～5亚环烷基-CO-NR9R10、-NH-C2～4亚烯基-CONR9R10、-NH-C1～4亚烷基-氰基、-NHCO-NH-R11、-CONR12R13或-CONH-C1～4亚烷基-NR12R13，所述C1～6烷基任选被羟基、卤素或氨基取代，条件是R1和R2不同时为H。
在一些优选的实施方式中，所述R7和R8各自独立地选自H、C1～4烷基、C1～4烷基酰基或C1～4烷基磺酰基；或者R7与R8与所连N原子一起形成选自下述的杂环基：
在一些优选的实施方式中，所述R9和R10各自独立地选自H、羟基或C1～4烷基；或者R9与R10与所连N原子一起形成四氢吡咯基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基或噁唑烷基。
在一些优选的实施方式中，所述R11选自下述的杂芳基：
在一些优选的实施方式中，所述R12和R13各自独立地选自H、C1～4烷基、C1～4烷基酰基或C1～4烷基磺酰基；或者R12与R13与所连N原子一起形成选自下述的杂环基：
在一些较优选的实施方式中，R1和R2各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、氰基、甲基、乙基、丙基、丁基、-NR7R8、-NH-亚甲基-NR9R10、-NH-亚乙基-NR9R10、-NH-亚丙基-NR9R10、-NHCO-亚甲基-NR9R10、-NHCO-亚乙基-NR9R10、-NHCO-亚丙基-NR9R10、-NH-亚甲基-CO-NR9R10、-NH-亚乙基-CO-NR9R10、-NH-亚丙基-CO-NR9R10、-NHCO-亚甲基-COO-甲基、-NHCO-亚甲基-COO-乙基、-NHCO-亚甲基-COO-丙基、-NHCO-亚乙基-COO-甲基、-NHCO-亚乙基-COO-乙基、-NHCO-亚乙基-COO-丙基、-NHCO-亚丙基-COO-甲基、-NHCO-亚丙基-COO-乙基、-NHCO-亚丙基-COO-丙基、-NH-亚环丙基-CO-NR9R10、-NH-亚环丁基-CO-NR9R10、-NH-亚环戊基-CO-NR9R10、-NH-亚乙烯基-CONR9R10、-NH-亚丙烯基-CONR9R10、-NH-亚烯丙基-CONR9R10、-NH-亚甲基-氰基、-NH-亚乙基-氰基、-NH-亚丙基-氰基、-NHCO-NH-R11、-CONR12R13、-CONH-亚甲基-NR12R13、-CONH-亚乙基-NR12R13或-CONH-亚丙基-NR12R13，所述甲基、乙基、丙基、丁基任选地被一个或多个选自羟基、F、Cl、Br、I、甲氨基、乙基氨基、丙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基或甲基乙基氨基的基团取代，条件是R1和R2不同时为H。
在一些较优选的实施方式中，所述R7和R8各自独立地选自H、甲基、乙基、丙基、甲酰基、乙酰基、丙酰基、甲磺酰基、乙磺酰基或丙磺酰基；或者R7与R8与所连N原子一起形成选自下述的杂环基：
在一些较优选的实施方式中，所述R9和R10各自独立地选自H、羟基、甲基、乙基或丙基；或者R9与R10与所连N原子一起形成哌啶基、吗啉基或哌嗪基。
在一些较优选的实施方式中，所述R11选自下述的杂芳基：
在一些较优选的实施方式中，所述R12和R13各自独立地选自H、甲基、乙基、丙基、甲酰基、乙酰基、丙酰基、甲磺酰基、乙磺酰基、丙磺酰基；或者R12与R13与所连N原子一起形成选自下述的杂环基：
在一些更优选的实施方式中，R1和R2各自独立地选自H、Br、氰基、甲基、-NR7R8、-NH-亚乙基-NR9R10、-NHCO-亚甲基-NR9R10、-NH-亚甲基-CO-NR9R10、-NH-亚乙基-CO-NR9R10、-NHCO-亚乙基-COO-乙基、-NH-亚环丁基-CO-NR9R10、-NH-亚烯丙基-CONR9R10、-NH-亚乙基-氰基、-NHCO-NH-R11、-CONR12R13或-CONH-亚乙基-NR12R13，所述甲基任选地被羟基、F或甲氨基的基团取代，条件是R1和R2不同时为H。
在一些更优选的实施方式中，所述R7和R8各自独立地选自H、乙基、乙酰基或甲磺酰基；或者R7与R8与所连N原子一起形成
在一些更优选的实施方式中，所述R9和R10各自独立地选自H或羟基；或者R9与R10与所连N原子一起形成吗啉基。
在一些更优选的实施方式中，所述R11选自
在一些更优选的实施方式中，所述R12和R13各自独立地选自H或甲基。
在一些特别优选的实施方式中，R1选自H、Br、氰基、甲基、-NR7R8、-NH-亚乙基-NR9R10、-NHCO-亚甲基-NR9R10、-NH-亚甲基-CO-NR9R10、-NH-亚乙基-CO-NR9R10、-NHCO-亚乙基-COO-乙基、-NH-亚环丁基-CO-NR9R10、-NH-亚烯丙基-CONR9R10、-NH-亚乙基-氰基、-NHCO-NH-R11、-CONR12R13或-CONH-亚乙基-NR12R13，所述甲基任选地被羟基、F或甲氨基的基团取代；所述R7和R8各自独立地选自H、乙基、乙酰基或甲磺酰基；或者R7与R8与所连N原子一起形成所述R9和R10各自独立地选自H或羟基；或者R9与R10与所连N原子一起形成吗啉基；所述R11选自所述R12和R13各自独立地选自H或甲基；R2选自H或-NH2，条件是R1和R2不同时为H。
在一些优选的实施方式中，R3选自H或Br。
在一些优选的实施方式中，R5和R6各自独立地选自H、羟基或F。
在一些特别具体优选的实施方式中，本发明所述的式Ⅰ化合物选自：
在进一步特别优选的实施方式中，本发明所述的式Ⅰ化合物选自：
在一些实施方案中，式Ⅰ化合物的立体异构体特别优选自：
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(CH2CH3)、单取代的(如CH2CH2F)、多取代的(如CHFCH2F、CH2CHF2等)或完全被取代的(CF2CF3)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
本文所用的Cm～n指该部分中具有m～n个碳原子。例如，“C1～8烷基”指该烷基具有1～8个碳原子。
本文中的数字范围，是指给定范围中的各个整数。例如“C1～8”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的即可。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“氰基”指-CN基团。
术语“氧代”指＝O基团。
术语“氨基”指-NH2基团、-NH(C1～6烷基)基团或-N(C1～6烷基)2基团。氨基的具体例子包括但不限于-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC2H5、-N(C2H5)2、-N(C3H7)2、-N(CH3)C2H5等。
术语“烷基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的饱和的脂肪烃基团，其通过单键与分子的其余部分连接。该术语的非限制性实例包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、-CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)3、-C(CH2CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)(CH2CH3)等。术语“C1～8烷基”指具有1～8个碳原子的烷基。术语“C1～6烷基”指具有1～6个碳原子的烷基。术语“C1～4烷基”指具有1～4个碳原子的烷基。所述“烷基”、“C1～8烷基”、“C1～6烷基”或“C1～4烷基”可以是非取代的或是被一个或多个选自羟基、卤素或氨基的取代基取代。
术语“亚烷基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的饱和的脂肪烃基团，其通过两个连接点与分子的其余部分连接。该术语的非限制性实例包括亚甲基(-CH2-)、1,1-亚乙基(-CH(CH3)-)、1,2-亚乙基(-CH2CH2-)、1,1-亚丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-亚丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。术语“C1～6亚烷基”指具有1～6个碳原子的亚烷基。术语“C1～4亚烷基”指具有1-4个碳原子的亚烷基。
术语“亚环烷基”是指饱和的环烷烃，其通过两个连接点与分子的其余部分连接。该术语的非限制性实例包括1,2-亚环丙基1,1-亚环丙基1,3-亚环丁基1,1-亚环丁基1,3-亚环戊基1,3-亚环己基1,4-亚环己基等。术语“C3～6亚环烷基”指具有3～6个碳原子的亚环烷基。术语“C3～5亚环烷基”指具有3～5个碳原子的亚环烷基。
术语“亚烯基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个双键的不饱和脂肪烃基团，其通过两个连接点与分子的其余部分连接。亚烯基的非限制性实例包括但不限于1,2-亚乙烯基(-CH＝CH-)、1,3-亚烯丙基(-CH＝CH-CH2-)、1,4-亚-2-烯丁基(-CH2-CH＝CH-CH2-)等。术语“C2～6亚烯基”指具有2～6个碳原子的亚烯基。术语“C2～4亚烯基”指具有2～4个碳原子的亚烯基。
术语“烷基酰基”是指烷基与-CO-相连而构成的基团，该术语的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等。术语“C1～6烷基酰基”指C1～6烷基与-CO-相连而构成的基团。术语“C1～4烷基酰基”指C1～4烷基与-CO-相连而构成的基团。
术语“烷基磺酰基”是指烷基与-SO2-相连而构成的基团，该术语的非限制性实例包括甲磺酰基、乙磺酰基、丙磺酰基、丁磺酰基等。术语“C1～6烷基磺酰基”指C1～6烷基与-SO2-相连而构成的基团。术语“C1～4烷基磺酰基”指C1～4烷基与-SO2-相连而构成的基团。
术语“杂芳基”是指单环或稠合多环体系，其中含有至少一个选自N、O、S的环原子，其余环原子为C，并且具有至少一个芳香环。杂芳基的非限制性实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、三唑基、三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基等。术语“5元或6元杂芳基”是指具有5～6个环原子的杂芳基。所述“杂芳基”或“5元或6元杂芳基”可以是非取代的或是被一个或多个选自羟基、卤素或C1～4烷基的取代基取代。
术语“杂环基”是指无芳香性的单环、稠合多环、桥环或螺环体系基团，其中部分环原子是选自N、O、S(O)n(其中n为0、1或2)的杂原子，其余环原子为C。这样的环可以是饱和的或不饱和的(例如具有一个或多个双键)，但是不具有完全共轭的π-电子体系。杂环基的非限制性实例包括环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基、吖丁啶基、噁丁环基、噻丁环基、四氢呋喃基、吡咯烷基、噁唑烷基、四氢吡唑基、吡咯啉基、二氢呋喃基、二氢噻吩基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、二氢噻喃基、氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧杂氮杂双环[2.2.1]庚基和氮杂螺[3.3]庚基等。术语“5元或6元杂环基”是指具有5～6个环原子的杂环基。所述“杂环基”或“5元或6元杂环基”可以是非取代的或是被一个或多个选自羟基、卤素、C1～4烷基或氧代的取代基取代。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
作为药学上可接受的盐，例如，可以提及金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。金属盐的非限制性实例包括但不限于碱金属的盐，例如钠盐、钾盐等；碱土金属的盐，例如钙盐、镁盐、钡盐等；铝盐等。与有机碱形成的盐的非限制性实例包括但不限于与三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺、二环己基胺等形成的盐。与无机酸形成的盐的非限制性实例包括但不限于与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的盐。与有机酸形成的盐的非限制性实例包括但不限于与甲酸、乙酸、三氟乙酸、富马酸、草酸、苹果酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸等形成的盐。与碱性氨基酸形成的盐的非限制性实例包括但不限于与精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等形成的盐。与酸性氨基酸形成的盐的非限制性实例包括但不限于与天冬氨酸、谷氨酸等形成的盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。本发明的某些化合物可以以多晶或无定形形式存在。
本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
本文中消旋体、ambiscalemic and scalemic或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr,J.Chem.Ed.1985,62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、Z式和E式异构体、(﹣)-和(﹢)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
可以通过手性拆分、手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的分步结晶法或色谱法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物还包括本文中所述化合物的前药。本文中使用的“前药”是指当给予哺乳动物患者时释放活性母体药物的任何共价结合的载体。可通过常规操作或在体内，按可分解为母体化合物的修饰方式，修饰存在于化合物中的官能团，制备前药。前药包括当给予哺乳动物患者者时，其中例如：羟基、氨基、巯基或羧基与任何基团连接的分解后分别形成游离羟基、氨基、巯基或羧基的化合物。前药的实例包括但不限于本发明化合物中醇的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物，或者胺官能团甲基胺、乙基胺衍生物。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
本领域任何合成路线规划中的一个重要考量因素是为反应性官能团(如本发明中的氨基)选择合适的保护基。对于经过训练的从业者来说，Greene and Wuts的(ProtectiveGroups In Organic Synthesis,Wiley and Sons,1991)是这方面的权威。本发明引用的所有参考文献整体上并入本发明。
可按照本领域中已知的任何合适的方法，监测本文中所述反应。例如，可通过广谱方法例如核磁共振波谱(例如1H或13C)、红外光谱、分光光度测定(例如UV-可见光)或质谱，或通过色谱例如高效液相色谱(HPLC)或薄层层析监测产物形成。
本发明通式I的部分化合物可以由有机合成领域技术人员通过流程1用本领域的标准方法来制备：
如流程1所示，含氨基取代的吡唑核心1-8和1-10可由吡咯并[2,3-b]嘧啶作为起始原料来合成。化合物1-1的氨基可被合适的保护基团(P1)保护，得到的1-2与氰基乙酸乙酯反应生成1-3，脱羧后得到1-4，随后与N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(DMF-DMA)反应生成1-5，与水合肼反应后，环化得到含氨基吡唑的核心化合物1-6，其可进一步与试剂1-11(其中L为离去基团)反应得到化合物1-7，1-7脱去氨基上的保护基得到本发明化合物1-8。化合物1-7与多种侧链连接，得到的化合物1-9经脱保护，得到取代氨基吡唑的本发明化合物。
本发明通式I的部分化合物也可以由有机合成领域技术人员通过流程2用本领域的标准方法来制备：
如流程2所示，含氨基/氨酰基/氰基取代的吡唑的核心2-14、2-9和2-16可由酯基取代的吡唑2-1(P2为保护基团)作为起始原料来合成。化合物2-1与1-2进行Suzuki偶联反应得到化合物2-2，经水解、Curtius重排得到氨基取代的吡唑化合物2-4，脱去吡唑上的保护基得到化合物2-10，进一步与试剂1-11(其中L为离去基团)反应得到化合物2-11,2-11可以经脱保护得到本发明化合物2-12，亦可在氨基上连接侧链后经脱保护得到本发明化合物2-14。化合物2-2脱去保护基、随后与试剂1-11(其中L为离去基团)反应得到化合物2-6，经水解、与胺缩合或者直接与胺反应得到化合物2-8。2-8脱保护得到取代酰胺类本发明化合物2-9，或者酰胺经脱水得氰基2-15，随后脱保护得到本发明化合物2-16。
本发明通式I的部分化合物也可以由有机合成领域技术人员通过流程3用本领域的标准方法来制备：
如流程3所示，含羟基甲基/氟代甲基/二氟甲基/氨基甲基的化合物3-4、3-8、3-13和3-17可由流程2中的化合物2-2来合成。酯基化合物2-2经氢化铝锂还原得到醇3-1，经DAST(二乙氨基三氟化硫)处理得氟代化合物3-5；2-2亦可经DIBAL-H(二异丁基氢化铝)还原得到醛基化合物3-9，3-9可由DAST处理得二氟化合物3-10或通过还原胺化反应得到3-14。所得中间体3-1、3-5、3-10和3-14经脱保护，与1-11(其中L为离去基团)反应，再脱保护得到本发明化合物3-4、3-8、3-13和3-17。
本发明通式I的部分化合物也可以由有机合成领域技术人员通过流程4用本领域的标准方法来制备：
如流程4所示，含卤代基团的化合物4-3可由化合物4-1(亦即流程1中化合物1-7和流程2中化合物2-11)来合成。4-1经重氮化、卤代得化合物4-2，随后脱去氨基上的保护基得到本发明化合物4-3。
本发明的另一个方面在于提供了如式I所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐在制备用于治疗两面神激酶介导的疾病的药物中的用途。
本发明的又一方面提供了一种用于治疗两面神激酶介导的疾病的方法，包括给予患者治疗有效量的如式I所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐。
本发明的实施例化合物具有显著的JAK抑制活性。例如，在本文所述的一种或多种测定中，具有小于1000nM的JAK抑制活性，优选具有小于200nM的JAK抑制活性，更优选具有小于100nM的JAK抑制活性，特别优选具有小于20nM的JAK抑制活性。
与其他JAK抑制剂相比，本发明的一些代表性化合物还具有特别优异的药代动力学性质，作为活性成分时可以较小的剂量给患者施用，从而降低患者的治疗成本。
术语“患者”是指包括哺乳动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。
本文中使用的短语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：
(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症。
(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)。
(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。
本发明的另一个方面在于提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。本发明的药物组合物可以进一步含有一种或多种额外的治疗剂。
作为药物时，可按药物组合物的形式给予本发明化合物。可按药剂领域中熟知的方式制备这些组合物，可通过多种途径给予它们，这取决于是否需要局部或全身治疗和所治疗的区域。可局部(例如，透皮、皮肤、眼和粘膜包括鼻内、阴道和直肠递药)、肺(例如，通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包括通过喷雾器；气管内、鼻内)、口服或肠胃外给药。肠胃外给药包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注；或颅内例如鞘内或脑室内给药。可按单次大剂量形式肠胃外给药，或可通过例如连续灌注泵给药。局部给予的药用组合物和制剂可包括透皮贴剂、软膏、洗剂、霜剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体剂和散剂。常规药物载体、水、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必须的或需要的。包衣避孕套(Coatedcondoms)、手套等也可以是有用的。
本发明还包括含与一种或多种药学上可接受的载体组合的以一种或多种以上本发明化合物为活性成分的药用组合物。在制备本发明的组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合，通过赋形剂稀释或装入例如胶囊、小药囊、纸或其它容器形式的这种载体内。当赋形剂用作稀释剂时，它可以是固体、半固体或液体物质，用作溶媒、载体或活性成分的介质。因此，组合物可以是以下形式：片剂、丸剂、散剂、锭剂、小药囊、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(固体或溶于液体溶媒)；含例如高达10％重量活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉末。
适宜的赋形剂的某些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂还可含有：润滑剂例如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂例如苯甲酸甲酯和苯甲酸羟基丙酯；甜味剂和矫味剂。可通过使用本领域中已知的方法配制本发明组合物，以便在给予患者后提供速释、缓释或延迟释放活性成分的作用。
可按单位剂型配制组合物，每一剂量含约5～1000mg，更通常约100～500mg活性成分。术语“单位剂型”是指物理上分离的适宜作为用于人患者和其它哺乳动物的单一剂量单位，各单位含有与适宜的药物赋形剂混合的经计算可产生所需疗效的预定量的活性物质。
活性化合物的有效剂量的范围可很大，通常按药用有效量给药。但是，可以理解实际给予的化合物的量通常由医师根据相关情况决定，它们包括所治疗的病症、所选择的给药途径、所给予的实际化合物；患者个体的年龄、重量和反应；患者症状的严重程度等。
对于制备固体组合物例如片剂，将主要的活性成分与药物赋形剂混合，形成含本发明化合物的均匀混合物的固体预制剂组合物。当称这些预制剂组合物为均匀时，是指活性成分通常均匀地分布在整个组合物中，致使该组合物可容易地划分为同等有效的单位剂型例如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将该固体预制剂划分为上述类型的含例如约0.1～1000mg本发明活性成分的单位剂型。
可将本发明片剂或丸剂包衣或复合，得到提供长效作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂含内剂量和外剂量组分，后者是前者的被膜形式。可通过肠溶层将两种组分隔离，肠溶层用于在胃中阻止崩解，以使内组分完整通过十二指肠或延迟释放。多种物质可用于此类肠溶层或包衣剂，此类物质包括多种高分子酸和高分子酸与此类物质如虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素的混合物。
其中可掺入本发明化合物和组合物，用于口服或注射给药的液体形式包括水溶液、适当矫味的糖浆剂、水或油混悬液；和用食用油例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油矫味的乳剂；以及酏剂和类似的药用溶媒。
用于吸入或吹入的组合物包括溶于药学上可接受的水或有机溶剂或其混合物的溶液剂和混悬液、散剂。液体或固体组合物可含有如上所述适宜的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，通过口服或鼻呼吸途径给予组合物，实现局部或全身作用。可通过使用惰性气体，使组合物成雾化。可直接由雾化装置吸入雾化溶液，或雾化装置可与面罩帷或间歇正压呼吸机连接。可通过口服或由按适当方式递送制剂的装置通过鼻给予溶液、混悬液或粉末组合物。
给予患者的化合物或组合物的量不固定，取决于给予的药物、给药的目的例如预防或治疗；患者的状态、给药的方式等。在治疗应用时，可给予已患疾病的患者足够治愈或至少部分抑制疾病及其并发症症状的量的组合物。有效剂量应取决于所治疗的疾病状态和主治临床医师的判断，该判断取决于例如疾病的严重程度、患者的年龄、体重和一般状况等因素。
给予患者的组合物可以是上述药用组合物形式。可通过常规灭菌技术或可过滤灭菌，将这些组合物灭菌。可将水溶液包装原样使用，或冻干，给药前，将冻干制剂与无菌水性载体混合。化合物制剂的pH通常为3～11，更优选5～9，最优选7～8。可以理解，使用某些前述赋形剂、载体或稳定剂会导致形成药物盐。
本发明化合物的治疗剂量可根据例如以下而定：治疗的具体用途、给予化合物的方式、患者的健康和状态，以及签处方医师的判断。本发明化合物在药用组合物中的比例或浓度可不固定，取决于多种因素，它们包括剂量、化学特性(例如疏水性)和给药途径。例如可通过含约0.1～10％w/v该化合物的生理缓冲水溶液提供本发明化合物，用于肠胃外给药。某些典型剂量范围为约1μg/kg～约1g/kg体重/日。在某些实施方案中，剂量范围为约0.01mg/kg～约100mg/kg体重/日。剂量很可能取决于此类变量，如疾病或病症的种类和发展程度、具体患者的一般健康状态、所选择的化合物的相对生物学效力、赋形剂制剂及其给药途径。可通过由体外或动物模型试验系统导出的剂量-反应曲线外推，得到有效剂量。
具体实施例
通过具体的实施例更详细地说明本发明。为说明目的提供以下实施例，它们不应以任何方式限制本发明。本领域技术人员应容易认识到，可改变或修改多种非关键性参数，得到基本上相同的结果。按照一种或多种本文中所述的测定，发现以下实施例化合物是JAK抑制剂。
实施例1 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A：3-环戊基丙烯腈
冰浴搅拌下，在盛有1.0M叔丁醇钾(28.0g,250mmol,1.2eq.)的新蒸四氢呋喃溶液中，滴加氰基甲基膦酸二乙酯(44.3g,250.0mmol,1.2eq.)的四氢呋喃溶液。移去冰浴，反应物室温搅拌0.5小时，再在冰浴冷却下滴加环戊烷甲醛(20.0g,204mmol,1.0eq.)。加毕，反应物室温下搅拌过夜，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-环戊基丙烯腈(22.3g，91％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.69(dd,J＝18.8Hz,J＝10.4Hz,0.5H,反式烯烃),6.37(t,J＝10.8Hz,0.5H,顺式烯烃),5.29(d,J＝17.6Hz,0.5H,反式烯烃),5.20(d,J＝10.8Hz,0.5H,顺式烯烃),3.06-2.99(m,0.5H,顺式产物),2.62-2.56(m,0.5H,反式产物),2.04-1.82(m,2H),1.74-1.59(m,4H),1.42-1.26(m,2H)。
步骤B：4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下，在盛有4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(20.0g,130.4mmol,1.0eq.)的干燥DMF溶液中，加入NaH(6.6g,57％含量，156.8mmol,1.2eq)。反应物室温搅拌1小时，再在冰浴冷却下滴加SEMCl(26.1g,156.5mmol,1.2eq.)。加毕，反应物冰浴搅拌1小时，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(33.43g,90.4％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(s,1H),7.39(d,J＝3.6Hz,1H),6.67(d,J＝3.6Hz,1H),5.65(s,2H),3.53(dd,J＝9.2Hz,J＝8.0Hz,2H),0.91(t,J＝8.4Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝284[M+1]+。
步骤C：2-氰基-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙酸乙酯
室温搅拌下，4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(33.5g,118mmol,1.0eq.)加入到氰基乙酸乙酯(40.1g,354.0mmol,3.0eq.)和碳酸钾(33.0g,238mmol,2.0eq.)的混合物中。反应物升温到60℃反应0.5小时，然后升温至130℃反应1.0小时。冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到2-氰基-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙酸乙酯(30.6g,72％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ13.87(brs,1H),8.05(s,1H),7.44(d,J＝4.0Hz,1H),7.20(d,J＝3.6Hz,1H),5.57(s,2H),4.30(dd,J＝14.4Hz,J＝7.2Hz,2H),3.5(t,J＝8.4Hz,2H),1.37(t,J＝7.2Hz,3H),0.92(t,J＝8.4Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝361[M+1]+。
步骤D：2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙腈
室温搅拌下，氯化钠(49.7g,849.0mmol,10.0eq.)加入到2-氰基-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙酸乙酯(30.6g,84.9mmol,1.0eq.)的DMSO和水的混合溶剂中。反应液氮气保护下150℃反应5天。冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙腈(18.4g,75％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(s,1H),7.40(d,J＝3.6Hz,1H),6.80(d,J＝3.6Hz,1H),5.67(s,2H),4.15(s,2H),3.53(t,J＝8.4Hz,2H),0.92(t,8.4Hz,2H),0.01(s,9H)。
m/z＝289[M+1]+。
步骤E：3-(二甲基氨基)-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)丙烯腈
2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙腈(5.3g,18.38mmol,1.0eq.)和DMF-DMA(6.57g,55.14mmol,3.0eq.)加入到含DMF溶液的封管中。反应液140℃下搅拌过夜。冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-(二甲基氨基)-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)丙烯腈(3.35g,53％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(s,1H),8.50(s,1H),7.37(d,J＝3.6Hz,1H),7.27(d,J＝3.6Hz,1H),5.66(s,2H),3.58(t,J＝8.4Hz,2H),3.38(brs,6H),1.04(t,J＝6.8Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝344[M+1]+。
步骤F：4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑
室温搅拌下，水合肼(85％,2.1g,35.6mmol,10.0eq.)加入到3-(二甲基氨基)-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)丙烯腈(1.2g,3.5mmol,1.0eq.)的乙醇溶液中。反应液氮气保护下90℃搅拌过夜。冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡咯(456mg,40％收率)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.20(brs,1H),8.75(s,1H),8.30(brs,1H),7.71(d,J＝3.2Hz,1H),7.11(d,J＝3.6Hz,1H),6.66(brs,2H),5.70(s,2H),3.62(t,J＝8.0Hz,2H),0.93(t,J＝8.0Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝331[M+1]+。
步骤G：3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
3-[5-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
室温搅拌下，3-环戊基丙烯腈(5.176g,42.71mmol,2.52eq.)加入到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑(5.6g,16.95mmol,1.0eq.)的乙腈溶液中，随后加入DBU(5.42g,35.60mmol,2.1eq.)。反应液氮气保护下70℃搅拌过夜。冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(4.49g,59％收率)和3-[5-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(1.60g,21％收率)。
G1:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),8.01(s,1H),7.34(d,J＝3.6Hz,1H),6.68(d,J＝3.6Hz,1H),5.66(brs,4H),4.00(t,J＝2.0Hz,1H),3.53(t,J＝8Hz,2H),3.08(dd,J＝16.8Hz,J＝8.4Hz,1H),2.89(dd,J＝16.8Hz,J＝3.6Hz,1H),2.53(s,1H),1.95-1.93(m,1H),1.74-1.57(m,5H),1.28-1.22(m,2H),0.92(dd,J＝14Hz,J＝8.4Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝452[M+1]+。
G2:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),8.13(s,1H),7.33(d,J＝3.6Hz,1H),6.80(d,J＝3.6Hz,1H),6.12(brs,2H),5.30(s,2H),4.12-4.07(m,1H),3.53(t,J＝8.4Hz,2H),3.14(dd,J＝16.8Hz,J＝9.6Hz,1H),2.90(dd,J＝16.8Hz,J＝4.0Hz,1H),2.60-2.57(m,1H),1.94-1.91(m,1H),1.74-1.54(m,5H),1.34-1.22(m,2H),0.92(t,J＝8.0Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝452[M+1]+。
步骤H：3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
冰浴搅拌下，三氟乙酸(20mL)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(3.395g,7.52mmol,1.0eq.)的二氯甲烷溶液中。反应液氮气保护下室温搅拌过夜。真空浓缩，残余物用二氯甲烷溶解后，真空再次浓缩两遍。浓缩物溶于甲醇中，加入乙二胺(2mL)搅拌过夜，真空浓缩。加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(1.94g,80.0％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.45(s,1H),8.79(s,1H),8.02(s,1H),7.33(dd,J＝3.9Hz,2.4Hz,1H),6.66(dd,J＝3.9Hz,2.4Hz,1H),5.69(brs,2H),3.98-4.03(m,1H),3.08(dd,J＝16.8Hz,8.4Hz,1H),2.88(dd,J＝16.8Hz,3.6Hz,1H),2.49-2.59(m,1H),1.89-1.96(m,1H),1.56-1.74(m,4H),1.21-1.29(m,3H)。
m/z＝322[M+1]+。
实施例2 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙酰胺
通过实施例1中的步骤H的柱层析硅胶柱分离得到实施例2化合物(0.45g,18％收率)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.93(s,1H),8.58(s,1H),8.37(s,1H),7.45-7.47(m,1H),7.27(s,1H),6.88-6.89(m,1H),6.74(s,1H),6.09(s,2H),4.30-4.37(m,1H),2.79(dd,J＝15.2Hz,9.6Hz,1H),2.54(dd,J＝15.2Hz,4.0Hz,1H),2.22-2.31(m,1H),1.69-1.79(m,1H),1.37-1.62(m,4H),1.19-1.32(m,3H)。
m/z＝340[M+1]+。
实施例3 3-[5-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
通过实施例1中的步骤G制备3-[5-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(130mg,0.289mmol)，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例3化合物(14mg,15.1％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.51-10.61(brs,1H),8.70(s,1H),8.16(s,1H),7.33-7.35(m,1H),6.80-6.81(m,1H),6.01-6.35(brs 2H),4.11-4.17(m,1H),3.17(dd,16.8Hz,J＝9.6Hz,1H),2.92(dd,J＝16.8Hz,J＝4.0Hz,1H),2.56-2.64(m,1H),1.90-1.98(m,1H),1.53-1.75(m,4H),1.25-1.35(m,3H)。
m/z＝322[M+1]+。
实施例4 3-[5-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙酰胺
通过实施例1中步骤G制备3-[5-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(130mg,0.289mmol)，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例4化合物(65mg,70％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.94(s,1H),8.60(s,1H),8.16(s,1H),7.46(t,J＝3.2Hz,1H),7.39(s,1H),6.92-6.94(s,1H),6.90(s,2H),6.87(s,1H),4.43-4.48(m,1H),2.86(dd,J＝15.2Hz,10.0Hz,1H),2.65(dd,J＝15.2Hz,3.6Hz,1H),2.35-2.44(m,1H),1.80-1.89(m,1H),1.45-1.73(m,4H),1.23-1.39(m,3H)。
m/z＝340[M+1]+。
实施例5 (3R)-3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
对实施例1步骤H获得的3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈进行制备型HPLC分离(OJ-H柱，20％异丙醇/正己烷，柱温25℃，流速1.0ml/min，保留时间20.30min)，得到(R)-构型化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.37(s,1H),8.79(s,1H),8.02(s,1H),7.32(dd,J＝3.9Hz,2.4Hz,1H),6.68(dd,J＝3.9Hz,2.4Hz,1H),5.69(brs,2H),3.99-4.03(m,1H),3.08(dd,J＝16.8Hz,8.8Hz,1H),2.89(dd,J＝16.8Hz,3.6Hz,1H),2.52-2.58(m,1H),1.90-1.98(m,1H),1.58-1.77(m,4H),1.23-1.33(m,3H)。
m/z＝322[M+1]+。
实施例6 (3S)-3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
对实施例1步骤H获得的3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈进行制备型HPLC分离(OJ-H柱，20％异丙醇/正己烷，柱温25℃，流速1.0ml/min，保留时间17.20min)，得到(S)-构型化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.23(s,1H),8.78(s,1H),8.02(s,1H),7.32(dd,J＝3.9Hz,2.4Hz,1H),6.68(dd,J＝3.9Hz,2.4Hz,1H),5.69(brs,2H),3.98-4.03(m,1H),3.08(dd,J＝16.8Hz,8.8Hz,1H),2.89(dd,J＝17.2Hz,3.6Hz,1H),2.52-2.58(m,1H),1.90-1.95(m,1H),1.58-1.74(m,4H),1.22-1.33(m,3H)。
m/z＝322[M+1]+。
实施例7 3-[3-乙基氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A：3-[3-乙基氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
室温下，碘乙烷(347mg,2.22mmol,2.0eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(500mg,1.11mmol,1.0eq.,由实施例1，步骤G制备)和碳酸钾(460mg,3.33mmol,3.0eq.)的DMF溶液中。反应液氮气保护下70℃搅拌过夜。加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-[3-乙基氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(116mg,22.6％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.77(s,1H),8.01(s,1H),7.32(d,J＝3.6,1H),7.01-7.17(brs,1H),6.67(d,J＝4.0,1H),5.65(s,2H),4.07-4.01(m,1H),3.55-3.51(m,2H),3.46-3.41(m,2H),3.10(dd,J＝16.8Hz,J＝8,1H),2.91(dd,J＝17.2Hz,J＝4,1H),2.62-2.60(m,1H),1.96-1.93(m,1H),1.74-1.55(m,7H),1.35-1.22(m,3H),0.91(t,J＝8.0,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝480[M+1]+。
步骤B：3-[3-乙基氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
用3-[3-乙基氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例7化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.47(s,1H),8.76(s,1H),8.03(s,1H),7.29-7.30(m,1H),7.01-7.17(brs,1H),6.66-6.68(m,1H),4.03-4.08(m,1H),3.44(q,J＝7.2Hz,2H),3.11(dd,J＝16.8Hz,7.6Hz,1H),2.92(dd,J＝16.8Hz,3.6Hz,1H),2.58-2.64(m,1H),1.91-1.99(m,1H),1.59-1.78(m,4H),1.34(t,J＝7.2Hz,3H),1.27-1.32(m,3H)。
m/z＝350[M+1]+。
实施例8 3-环戊基-3-[3-(二乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A：3-环戊基-3-[3-(二乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下，碘乙烷(347mg,2.22mmol,2.0eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(500mg,1.11mmol,1.0eq.,由实施例1，步骤G制备)和碳酸钾(460mg,3.33mmol,3.0eq.)的DMF溶液中。反应液氮气保护下70℃搅拌过夜。加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-[3-乙基氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(2mg,0.4％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.90(s,1H),8.01(s,1H),7.32(s,1H),7.14(s,1H),5.72(s,2H),4.13-4.09(m,1H),3.62(t,J＝8.0,2H),3.25-3.18(m,4H),3.14(dd,J＝16.8Hz,J＝8.0Hz,1H),2.91(dd,J＝16.8Hz,J＝4.0Hz,1H),2.70-2.53(m,1H),2.05-1.95(m,1H),1.82-1.51(m,4H),1.43-1.31(m,3H),1.17-1.11(m,6H),1.04-0.90(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝508[M+1]+。
步骤B：3-环戊基-3-[3-(二乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用3-[3-(二乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例8化合物。
m/z＝378[M+1]+。
实施例9 N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺
步骤A：N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺
零度下，将乙酰氯(17.4mg,0.211mmol,1.0eq.)滴加到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(100mg,0.221mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)的二氯甲烷溶液中。反应液室温搅拌2小时，反应完毕后，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到N-(1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺(90mg,83％收率)。
步骤B：N-(1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺
用N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例9化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.51-11.61(brs,1H),10.21-10.41(brs,1H),8.83(s,1H),8.20(s,1H),7.41(dd,J＝3.2Hz,J＝2.4Hz,1H),6.70(s,1H),4.27-4.39(m,1H),3.11(dd,J＝16.8Hz,J＝7.6Hz,1H),2.97-3.01(m,1H),2.43-2.71(m,4H),1.94-2.01(m,1H),1.56-1.79(m,4H),1.25-1.31(m,3H)。
m/z＝364[M+1]+。
实施例10 N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲基磺酰胺
步骤A：N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲基磺酰胺
零度下，吡啶(30.0mg,0.379mmol,1.7eq.)滴加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(100mg,0.221mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)的二氯甲烷溶液中，紧随其后滴加入甲基磺酰氯(25.0mg,0.211mmol,1.0eq.)。反应液室温搅拌72小时，反应完毕后，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲基磺酰胺(85mg,73％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.20-10.70(brs,1H),8.78(s,1H),8.15(s,1H),7.40(s,1H),6.67(s,1H),5.65(s,2H),4.21-4.18(m,1H),3.53(t,J＝8.0,2H),3.31(s,3H),3.16-3.10(m,1H),2.94(d,J＝8.0Hz,1H),2.62-2.60(m,1H),2.03-1.92(m,1H),1.75-1.58(m,4H),1.32-1.23(m,3H),0.93-0.85(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝530[M+1]+。
步骤B：N-(1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)甲基磺酰胺
用N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲基磺酰胺代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例10化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ12.25(s,1H),10.80(s,1H),8.91(s,1H),8.72(s,1H),7.65(dd,J＝3.2Hz,J＝2.4Hz,1H),7.01(dd,J＝3.6Hz,J＝1.6Hz,1H),4.40-4.46(m,1H),3.32(s,3H),3.24(dd,J＝17.6Hz,J＝9.2Hz,1H),3.18(dd,J＝17.6Hz,J＝4.4Hz,1H),2.40-2.46(m,1H),1.77-1.86(m,1H),1.35-1.63(m,7H)。
m/z＝400[M+1]+。
实施例11 3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A：3-环戊基-3-(3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下，4-(2-氯乙基)吗啉(46mg,0.243mmol,1.1eq.)，碳酸钾(91mg,0.663mmol,3.0eq.)和碘化钾(4mg,0.023mmol,0.1eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(100mg,0.211mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)的乙腈溶液中。反应液90℃微波3个小时。加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(12mg,9.7％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.84(s,1H),8.06(s,1H),7.68-7.43(brs,1H),7.36(d,J＝3.2Hz,1H),6.73(d,J＝3.6Hz,1H),5.71(s,2H),4.12-4.06(m,1H),3.96-3.83(m,4H),3.76-3.65(m,2H),3.63(t,J＝12.4Hz,2H),3.20-3.14(m,1H),2.98-2.92(m,3H),2.89-2.70(m,4H),2.68-2.62(m,1H),2.01-1.98(m,1H),1.80-1.63(m,4H),1.38-1.30(m,3H),0.99-0.91(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝565[M+1]+。
步骤B：3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例11化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.98(s,1H),8.78(s,1H),8.03(s,1H),7.46-7.58(brs,1H),7.34(d,J＝2.0Hz,1H),6.64(d,J＝3.2Hz,1H),4.03-4.08(m,1H),3.77-3.90(m,4H),3.56-3.70(m,2H),3.13(dd,J＝16.8Hz,J＝8.4Hz,1H),2.92(dd,J＝16.8Hz,J＝3.6Hz,1H),2.54-2.79(m,7H),1.92-1.99(m,1H),1.59-1.78(m,4H),1.28-1.32(m,3H)。
m/z＝435[M+1]+。
实施例12 N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-2-吗啉基乙酰胺
步骤A：2-氯-N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺
冰浴搅拌下，2-氯乙酰氯(17mg,0.15mmol,1.1eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(60mg,0.13mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)和三乙胺(20mg,0.20mmol,1.5eq.)的干燥THF溶液中。反应液室温下搅拌15分钟，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，残留物直接用于下步反应。
1H NMR(CDCl3)δ12.78(1H,s),8.86(1H,s),8.25(1H,s),7.45(1H,d,J＝3.6Hz),6.76(1H,d,J＝3.6Hz),5.71(2H,s),4.30-4.39(3H,m),3.57(2H,t,J＝8.4Hz),3.14(1H,dd,J＝17.2Hz,7.2Hz),3.03(1H,dd,J＝17.2Hz,3.6Hz),2.70-2.80(1H,m),1.99-2.06(1H,m),1.55-1.80(4H,m),1.34-1.38(3H,m),0.95(2H,t,J＝8.4Hz),-0.02(9H,s)。
m/z＝528[M+1]+。
步骤B：N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-2-吗啉基乙酰胺
上步所得粗品溶于DMF溶液(5mL)中，加入吗啉(13mg,0.15mmol,1.1eq.)，碳酸钾(37mg,0.27mmol,2.2eq.)和碘化钠(20mg,0.13mmol,1.0eq.)，混合物于100℃下搅拌过夜。冷却至室温，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(97mg)，为黄色固体。
1H NMR(CDCl3)δ12.27(1H,s),8.97(1H,s),8.21(1H,s),7.41(1H,d,J＝3.6Hz),6.73(1H,d,J＝3.6Hz),5.68(2H,s),4.30-4.35(1H,m),3.84-3.89(4H,m),3.57(2H,t,J＝8.4Hz),3.26(2H,s),3.10(1H,dd,J＝17.3Hz,6.9Hz),3.02(1H,dd,J＝17.2Hz,3.6Hz),2.72-2.77(1H,m),2.66-2.70(4H,m),1.97-2.04(1H,m),1.58-1.80(4H,m),1.30-1.34(3H,m),0.93(2H,t,J＝8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z＝579[M+1]+。
步骤C：N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-2-吗啉基乙酰胺
上步所得化合物，参照实施例1中所述的步骤H，反应得到标题化合物(40mg,67％收率)，为白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ12.27(1H,s),9.71(1H,s),8.97(1H,s),8.24(1H,s),7.41(1H,d,J＝3.2Hz),6.74(1H,d,J＝3.2Hz),4.33-4.38(1H,m),3.87-3.90(4H,m),3.28(2H,s),3.11(1H,dd,J＝17.2Hz,6.8Hz),3.02(1H,dd,J＝17.2Hz,4.0Hz),2.69-2.72(5H,m),1.95-2.06(1H,m),1.55-1.81(4H,m),1.28-1.34(3H,m)。
m/z＝449[M+1]+。
实施例13 3-环戊基-3-[3-(3-吗啉基-3-氧代丙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A：3-环戊基-3-[3-(3-吗啉基-3-氧代丙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用侧链3-溴-N-丙酰吗啉代替4-(2-氯乙基)吗啉，参照实施例11中所述的步骤A制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.00(s,1H),7.65-7.58(brs,1H),7.36(d,J＝3.6Hz,1H),6.60(d,J＝4.0Hz,1H),5.65(s,2H),4.02-4.01(m,1H),3.82-3.73(m,2H),3.64-3.59(m,4H),3.55-3.15(m,6H),3.12-3.08(dd,J＝16.8Hz,J＝8.8Hz,1H),2.89-2.72(m,3H),2.62-2.52(m,1H),1.94-1.92(m,1H),1.74-1.57(m,4H),1.33-1.24(m,3H),0.93-0.88(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝593[M+1]+。
步骤B：3-环戊基-3-[3-(3-吗啉基-3-氧代丙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用3-环戊基-3-[3-(3-吗啉基-3-氧代丙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例13化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.59(s,1H),8.74(s,1H),8.14(s,1H),7.31(d,J＝2.8Hz,1H),6.62(d,J＝2.8Hz,1H),4.01-4.06(m,1H),3.75-3.80(m,2H),3.46-3.66(m,8H),3.12(dd,J＝16.8Hz,J＝8.8Hz,1H),2.82-2.91(m,2H),2.71-2.78(m,1H),2.51-2.57(m,1H),1.88-1.96(m,1H),1.54-1.75(m,4H),1.27-1.32(m,3H)。
m/z＝463[M+1]+。
实施例143-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A：乙基-2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸酯
用侧链溴乙酸乙酯代替4-(2-氯乙基)吗啉，参照实施例11中所述的步骤A来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.81(s,1H),8.01(s,1H),7.33(d,J＝3.6Hz,1H),6.67(d,J＝3.6Hz,1H),5.66(s,2H),4.27-4.19(m,4H),4.03-4.01(m,1H),3.53(t,J＝8.4Hz,2H),3.10(dd,J＝16.8Hz,J＝8.4Hz,1H),2.90(dd,J＝16.8Hz,J＝4.0Hz,1H),2.60-2.60(m,1H),1.97-1.90(m,1H),1.72-1.57(m,5H),1.31-1.24(m,5H),0.93-0.89(t,J＝8.4Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝538[M+1]+。
步骤B：2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸
室温下，氢氧化锂一水合物(88mg,2.08mmol,5.0eq.)加入到乙基-2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸酯(223mg,0.415mmol,1.0eq.)的甲醇和水(甲醇/水＝5/1)的溶液，搅拌过夜。反应完毕后，真空下移去溶剂，加水稀释，用2N的稀盐酸调节溶液pH值到1～2，过滤得2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸(170mg,81％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.80(s,1H),8.06(s,1H),7.37(d,J＝3.2Hz,1H),6.68(d,J＝3.2Hz,1H),5.67(s,2H),4.22(d,J＝3.6Hz,2H),4.10-4.03(m,1H),3.53(t,J＝8.0Hz,2H),3.06(dd,J＝8.4Hz,J＝4.0Hz,1H),2.91(dd,J＝16.4Hz,J＝2.8Hz,1H),2.56-2.54(m,1H),1.95-1.91(m,1H),1.72-1.23(m,4H),1.58-1.20(m,3H),0.94-0.89(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝510[M+1]+。
步骤C：3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下，吗啉(10.3mg,0.118mmol,1.2eq.)、HATU(27mg,0.07mmol,0.7eq.)和2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸(50mg,0.098mmol,1.0eq.)溶解在DMF中。反应液搅拌并降温至零度，加入DIEA(19mg,0.147mmol,1.5eq.)。反应液搅拌过夜，反应完毕，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(42mg,74％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.94(s,1H),8.08(s,1H),7.38(d,J＝3.6Hz,1H),6.73(d,J＝3.6Hz,1H),5.72(s,2H),4.30(s,2H),4.12-4.06(m,1H),3.93-3.70(m,6H),3.62-3.57(m,4H),3.14(dd,J＝17.2Hz,J＝8.0Hz,1H),2.96(dd,J＝17.2Hz,J＝7.6Hz,1H),2.63-2.61(m,1H),2.03-1.98(m,1H),1.82-1.63(m,4H),1.38-1.29(m,3H),0.97-0.94(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝579[M+1]+。
步骤D：3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例14化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.21(s,1H),8.80(s,1H),8.02(s,1H),7.27(d,J＝3.2Hz,1H),6.60(d,J＝3.2Hz,1H),4.25(s,2H),4.02-4.07(m,1H),3.64-3.80(m,6H),3.57-3.61(m,2H),3.09(dd,J＝16.8Hz,J＝8.0Hz,1H),2.91(dd,J＝16.8Hz,J＝4.0Hz,1H),2.52-2.63(m,1H),1.94-2.07(m,1H),1.55-1.81(m,4H),1.25-1.32(m,3H)。
m/z＝449[M+1]+。
实施例15 4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-4-氧代丁酸乙酯
步骤A：4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-4-氧代丁酸乙酯
冰浴搅拌下，丁二酸单乙酯酰氯(109mg,0.664mmol,1.2eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(250mg,0.553mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)和N,N-二异丙基乙胺(86mg,0.664mmol,1.2eq.)的二氯甲烷(10mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时，补加N,N-二异丙基乙胺(0.2mL)和丁二酸单乙酯酰氯(0.1mL)，反应过夜，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(237mg,74％收率)。
1H NMR(CDCl3)δ11.63-11.68(1H,brs),8.85(1H,s),8.18(1H,s),7.41(1H,d,J＝3.6Hz),6.72(1H,d,J＝3.6Hz),5.68(2H,s),4.22-4.36(1H,m),4.16(2H,q,J＝7.2Hz),3.55(2H,t,J＝8.4Hz),3.13(1H,dd,J＝17.2Hz,7.6Hz),2.99(1H,dd,J＝17.2Hz,3.6Hz),2.62-2.88(5H,m),1.93-2.01(1H,m),1.60-1.80(4H,m),1.28-1.34(3H,m),1.26(3H,t,J＝7.2Hz),0.93(2H,t,J＝8.4Hz),-0.04(9H,s)。
m/z＝580[M+1]+。
步骤B：4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-4-氧代丁酸乙酯
上步所得化合物(237mg,0.409mmol,1eq.)，溶于乙腈(4mL)和水(0.5mL)，加入LiBF4(383mg,4.09mmol,10eq.)，90℃搅拌过夜，冷却至室温，加入氨水溶液搅拌1小时，加入盐水和乙酸乙酯，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
1H NMR(CDCl3)δ11.65(1H,s),9.78(1H,s),8.80(1H,s),8.23(1H,s),7.38(1H,d,J＝3.6Hz),6.68(1H,d,J＝3.6Hz),4.29-4.36(1H,m),4.25(2H,q,J＝7.2Hz),3.24(1H,dd,J＝17.2Hz,8.0Hz),3.04(1H,dd,J＝17.2Hz,3.6Hz),2.82-2.94(4H,m),2.67-2.76(1H,m),1.97-2.05(1H,m),1.57-1.83(4H,m),1.34(3H,t,J＝7.2Hz),1.28-1.32(3H,m)。
m/z＝450[M+1]+。
实施例16 3-环戊基-3-[3-(丁二酰亚胺-1-基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A：3-环戊基-3-[3-(丁二酰亚胺-1-基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(200mg,0.443mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)和丁二酸酐(88mg,0.879mmol,2.0eq.)溶于1,2-二氯乙烷(10mL)中，回流过夜。真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(103mg,44％收率)。
1H NMR(CDCl3)δ8.70(1H,s),8.31(1H,s),7.37(1H,d,J＝4.0Hz),6.67(1H,d,J＝4.0Hz),5.64(2H,s),4.26-4.32(1H,m),3.50(2H,t,J＝8.4Hz),3.08(1H,dd,J＝17.2Hz,6.8Hz),3.02(1H,dd,J＝17.2Hz,4.8Hz),2.94(4H,s),2.62-2.70(1H,m),1.96-2.05(1H,m),1.59-1.77(4H,m),1.27-1.34(3H,m),0.90(2H,t,J＝8.4Hz),-0.06(9H,s)。
m/z＝534[M+1]+。
步骤B：3-环戊基-3-[3-(丁二酰亚胺-1-基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
上步所得化合物(103mg,0.193mmol,1eq.)，溶于乙腈(4mL)和水(0.5mL)，加入LiBF4(181mg,1.93mmol,10eq.)，90℃搅拌过夜，冷却至室温，加入氨水溶液搅拌1小时，加入盐水和乙酸乙酯，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
1H NMR(CDCl3)δ9.41-9.46(1H,brs),8.69(1H,s),8.34(1H,s),7.32(1H,d,J＝3.2Hz),6.63(1H,d,J＝3.2Hz),4.30-4.35(1H,m),3.11(1H,dd,J＝17.2Hz,7.2Hz),3.04(1H,dd,J＝17.2Hz,4.4Hz),2.96(4H,s),2.61-2.69(1H,m),1.95-2.04(1H,m),1.56-1.78(4H,m),1.28-1.33(3H,m)。
m/z＝404[M+1]+。
实施例17 3-[3-(3-吗啉-4-羰基)环丁胺-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑]-3-环戊基丙腈
步骤A:3-氧代环丁烷甲酸甲酯
向3-氧代环丁烷基羧酸(1g,8.77mmol)的甲醇溶液中,滴加0.2mL浓硫酸，75℃回流，待原料反应完，加碳酸氢钠淬灭反应，除去溶剂，萃取得3-氧代环丁烷甲酸甲酯(1.1g,99％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.22-3.34(m,3H),3.40-3.47(m,2H),3.78(s,3H)。
步骤B:3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]环丁烷羧酸甲酯
冰浴下，向3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(410.0mg,0.91mmol,由实施例1步骤G制备)的1,2-二氯乙烷溶液中加入3-氧代环丁烷甲酸甲酯(117.0mg,0.91mmol)、乙酸(54.6mg,0.91mmol)和氰基硼氢化钠(80.0mmg,1.27mmol)，撤去冰浴常温搅拌过夜，待原料反应完，加入饱和氯化铵淬灭反应，水洗，乙酸乙酯萃取，得标题化合物(172mg,34％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(s,1H),8.00(s,1H),7.36(m,1H),6.93(brs,1H),6.75(s,1H),5.69(s,2H),4.91(d,1H),4.00-4.05(m,1H),3.70(s,3H),3.55(t,J＝8.4Hz,2H),3.00-3.20(m,1H),1.80-2.95(m,8H),1.25-1.80(m,7H),0.91(t,J＝8.0,2H),-0.05(s,9H)。
m/z＝564[M+1]+。
步骤C:3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]环丁烷甲酸
在冰浴下，向3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]环丁烷羧酸甲酯(84mg,0.144mmol)的甲醇溶液中，滴加一水合氢氧化锂(30mmg,0.72mmol)水溶液，常温搅拌过夜，待原料反应完，除去溶剂，水洗，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析得到目标产物(乙酸乙酯：石油醚＝1:1，后用甲醇)，(29mg,37％收率)。
步骤C:3-{3-[3-(吗啉-4-羰基)环丁胺]-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑}-3-环戊基丙腈
冰浴下，向3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]环丁烷甲酸(25mg,0.0455mmol)的DMF溶液中，依次加入吗啉(4.78mg,0.0545mmol)和HBTU(17.3mg,0.0455mmol)，搅拌5min，再向溶液中滴加DIEA(11.8mg,0.091mmol)，常温搅拌，TLC监测至原料反应完，加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，将得到的粗品直接进行下一步。
步骤D:3-[3-(3-(吗啉-4-羰基)环丁胺)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑]-3-环戊基丙腈
将步骤C所得的粗品溶于二氯甲烷中，加入3mL三氟乙酸，常温搅拌过夜，除去溶剂，得黄色油状物质，将其溶于甲醇中，再加入两滴乙二胺，常温搅拌，TLC监测原料反应完，除去溶剂，水洗，乙酸乙酯萃取得目标产物(17mg,两步收率76％)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.53(brs,1H),8.76(s,1H),8.0(s,1H),7.35(brs,1H),7.30(s,1H),6.65(s,1H),4.24-4.34(m,1H),4.00-4.03(m,1H),3.50-3.65(m,6H),3.40-3.43(m,2H),3.05-3.12(m,1H),2.88-2.92(m,2H),2.37-2.72(m,5H),1.90-1.98(m,1H),1.10-1.80(m,7H)。
m/z＝489[M+1]+。
实施例18 3-[3-溴-4-(5-溴-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A：3-[3-溴-4-(5-溴-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
室温下，溴化铜(198mg,0.886mmol,2.0eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(200mg,0.442mmol,1.0eq.,由实施例1，步骤G制备)的乙腈溶液中。反应液氮气保护下60℃搅拌半个小时。向反应液滴加亚硝酸叔丁酯(68mg,0.66mmol,1.5eq.)，在60℃搅拌3个小时。加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-[3-溴-4-(5-溴-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(123mg,54％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.99(s,1H),7.86(s,1H),7.44(s,1H),5.77(s,2H),4.21-4.19(dd,J＝2.4Hz,J＝1.2Hz,1H),3.58(t,J＝8.4Hz,2H),3.16-3.10(m,1H),2.95(dd,J＝16.8Hz,J＝4.0Hz,1H),2.63-2.56(m,1H),2.00-1.90(m,1H),1.71-1.56(m,4H),1.32-1.17(m,3H),0.96-0.86(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝595[M+1]+。
步骤B：3-[3-溴-4-(5-溴-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
用3-[3-溴-4-(5-溴-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例18化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.71-9.73(brs,1H),8.99(s,1H),7.89(s,1H),7.42(s,1H),4.18-4.31(m,1H),3.14(dd,J＝17.2Hz,J＝8.8Hz,1H),2.96(dd,J＝17.2Hz,J＝4.0Hz,1H),2.58-2.64(m,1H),1.90-2.01(m,1H),1.59-1.76(m,4H),1.25-1.32(m,3H)。
m/z＝465[M+1]+。
实施例19 3-[3-溴-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A：3-[3-溴-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
冰浴搅拌下，3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(100mg,0.221mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)加入到2N稀盐酸溶液中，搅拌半个小时；向反应液快速加入大部分亚硝酸钠(61mg,0.884mmol,4.0eq.)水溶液，然后加入其余部分和溴化钠(23mg,0.33mmol,1.5eq.)，反应液在零度下搅拌半个小时。加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-[3-溴-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(9mg,8％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.00(s,1H),8.10(s,1H),7.43(s,1H),6.82(s,1H),5.73(s,2H),4.30-4.18(m,1H),3.61(t,J＝8.4Hz,2H),2.95(dd,J＝17.2Hz,J＝8.4Hz,1H),3.01(dd,J＝16.8Hz,J＝8.0Hz,1H),2.72-2.61(m,1H),2.05-1.99(m,1H),1.82-1.64(m,4H),1.47-1.18(m,3H),1.09-0.76(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝516[M+1]+。
步骤B：3-[3-溴-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
用3-[3-溴-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例19化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.01-10.08(brs,1H),8.95(s,1H),8.04(s,1H),3.38-7.40(m,1H),6.76-6.78(m,1H),4.19-4.25(m,1H),3.12(dd,J＝17.2Hz,J＝8.4Hz,1H),2.97(dd,J＝17.2Hz,J＝4.0Hz,1H),2.57-2.69(m,1H),1.93-2.07(m,1H),1.58-1.79(m,4H),1.28-1.32(m,3H)。
m/z＝386[M+1]+。
实施例20 (E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-羟基-2-丁烯酰胺
步骤A：(E)-甲基-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酯
用侧链4-溴巴豆酸甲酯代替4-(2-氯乙基)吗啉，参照实施例11中所述的步骤A来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.77(s,1H),8.02(s,1H),7.47(t,J＝5.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.16-7.10(m,1H),6.68(s,1H),6.07(d,J＝15.6Hz,1H),5.66(s,2H),4.22(d,J＝9.2Hz,2H),4.04-4.01(m,1H),3.72(s,3H),5.53(t,J＝8.4Hz,2H),3.08(dd,J＝16.8Hz,J＝8.4Hz,1H),2.88(dd,J＝13.2Hz,J＝6.4Hz,1H),2.62-2.48(m,1H),1.97-1.92(m,1H),1.72-1.56(m,4H),1.33-1.21(m,3H),0.92-0.86(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝550[M+1]+。
步骤B：(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酸
室温下，氢氧化锂一水合物(91mg,2.0mmol,5.0eq.)加入到(E)-甲基-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酯(215mg,0.391mmol,1.0eq.)的四氢呋喃和水(四氢呋喃/水＝5/1)的溶液，室温搅拌过夜。反应完毕后，真空下移去溶剂，加水稀释，用2N的稀盐酸调节溶液pH值到1～2，过滤得(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酸(91mg,44％收率)。
步骤C：(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)-2-丁烯酰胺
室温下，O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟基胺(40.0mg,0.34mmol,2.0eq.)、HATU(65mg,0.17mmol,1.0eq.)和(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酸(91mg,0.17mmol,1.0eq.)溶解在DMF中。反应液搅拌并降温至零度，加入DIEA(44mg,0.34mmol,2.0eq.)。反应液搅拌过夜，反应完毕，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(66mg,62％收率)。
m/z＝635[M+1]+。
步骤D：(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-羟基-2-丁烯酰胺
用(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)-2-丁烯酰胺代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例20化合物。
m/z＝421[M+1]+。
实施例21 3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-羟基丙酰胺
步骤A：乙基-3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸酯
用侧链3-溴丙酸乙酯代替4-(2-氯乙基)吗啉，参照实施例11中所述的步骤A来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.00(s,1H),7.40(brs,1H),7.32(d,J＝3.6Hz,1H),6.66(d,J＝4.0Hz,1H),5.65(s,2H),4.19-4.14(m,2H),4.03-3.99(m,1H),3.72(d,J＝6.8Hz,2H),3.52(d,J＝8.0Hz,2H),3.11(dd,J＝16.4Hz,J＝8.0Hz,1H),2.92(dd,J＝16.8Hz,J＝3.6Hz,1H),2.75(t,J＝6.4Hz,2H),2.64-2.53(m,1H),1.98-1.88(m,1H),1.67-1.57(m,5H),1.30-1.22(m,5H),0.91(d,J＝8.0Hz,2H),-0.06(s,9H)。
m/z＝552[M+1]+。
步骤B：3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸
用乙基-3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸酯代替乙基-2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸酯，参照实施例14中所述的步骤B来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),8.04(s,1H),7.9-7.4(brs,1H),7.35(d,J＝4.0Hz,1H),6.68(d,J＝3.6Hz,1H),5.67(s,2H),4.08-4.01(m,1H),3.73(t,J＝6.0Hz,2H),3.53(t,J＝8.4Hz,2H),3.09(dd,J＝17.2Hz,J＝8.8Hz,1H),2.94-2.83(m,3H),2.64-2.56(m,1H),1.96-1.93(m,1H),1.74-1.59(m,4H),1.30-1.23(m,3H),0.91(t,J＝8.4Hz,2H),-0.06(s,9H)。
m/z＝524[M+1]+。
步骤C：N-(苄氧基)-3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酰胺
用3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸代替(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酸，用O-苄基羟胺代替O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟基胺，参照实施例20中所述的步骤C来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.08(brs,1H),8.83(s,1H),8.09(s,1H),8.04(s,1H),7.52(brs,1H),7.42-7.30(m,5H),6.73(d,J＝3.6Hz,1H),5.72(s,2H),4.92(s,2H),4.04-3.99(m,1H),3.78(d,J＝4.8Hz,2H),3.60(t,J＝8.4Hz,2H),3.03-2.95(m,2H),2.67-2.59(m,3H),1.99-1.96(m,1H),1.81-1.64(m,4H),1.50-1.28(m,3H),1.00-0.93(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z＝629[M+1]+。
步骤D：3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-羟基丙酰胺
用N-(苄氧基)-3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酰胺代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，参照实施例1中所述的步骤H脱除SEM，并经脱苄得到实施例21化合物。
m/z＝409[M+1]+。
实施例22 3-[3-(2-氰基乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A：3-[1-(2-氰基-1-环丙基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酰胺
冰浴搅拌下，羰基二咪唑(1.5eq.)加入到3-[1-(2-氰基-1-环丙基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸(1.0eq.,由实施例21步骤B制备)的DMF溶液中，0℃下搅拌0.5小时，随后升至室温搅拌2小时。将氨气导入反应液，鼓泡1小时。加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝523[M+1]+。
步骤B：3-[3-(2-氰基乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
冰浴搅拌下，将3-[1-(2-氰基-1-环丙基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酰胺(1.0eq.)溶于二氯甲烷，加入三乙胺(5eq.)和三氟乙酸酐(2eq.)，反应液升至室温，搅拌过夜。加盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝505[M+1]+。
步骤C：3-[3-(2-氰基乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
上步所得化合物，溶于乙腈(4mL)和水(0.5mL)，加入LiBF4(10eq.)，90℃搅拌过夜，冷却至室温，加入氨水溶液搅拌1小时，加入盐水和乙酸乙酯，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝375[M+1]+。
实施例23 1-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)脲
步骤A：1-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)脲
冰浴搅拌下，氯甲酸三氯甲酯(0.6eq.)滴加到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(1.0eq.,由实施例1步骤G制备)的二氯甲烷溶液中，然后加入三乙胺(1.2eq.)。反应液0℃下搅拌0.5小时，随后分别加入5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-胺(2eq.)和三乙胺(1.2eq.)，搅拌3小时，加水淬灭，二氯甲烷萃取，合并的有机相分别用饱和氯化铵、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝577[M+1]+。
步骤B：1-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)脲
用1-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)脲代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，并参照实施例1中所述的步骤H脱SEM，得到实施例23化合物。
m/z＝447[M+1]+。
实施例24 1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
步骤A：1H-吡唑-3-甲酸乙酯
1H-吡唑-3-甲酸(7.25g,64.7mmol)溶于100mL无水乙醇，加入0.7mL浓硫酸，反应液加热回流过夜。真空浓缩，残余物加入乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠洗涤，乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得1H-吡唑-3-甲酸乙酯(8.35g,92％收率)，为灰白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.4(brs,1H),7.74(d,J＝2.4Hz,1H),6.86(d,J＝2.4Hz,1H),4.42(q,J＝7.2Hz,2H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤B：4-碘-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
室温搅拌下，碘(15.6g,61.5mmol,1.03eq.)加入到1H-吡唑-3-甲酸乙酯(8.35g,59.6mmol,1.0eq.)的乙腈(150mL)溶液中，随后分批加入硝酸铈铵(32.7g,59.6mmol,1.0eq.)，反应液室温搅拌过夜。然后，加入5％NaHSO3溶液淬灭，滤去不溶物，滤饼用水和乙酸乙酯洗涤。滤液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩得4-碘-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(15.0g,95％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.4(brs,1H),7.89(s,1H),4.46(q,J＝7.2Hz,2H),1.46(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤C：4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯和4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
室温搅拌下，对甲氧基苄氯(3.09g,19.7mmol,1.25eq.)加入到4-碘-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(4.2g,15.8mmol,1.0eq.)和碳酸钾(4.37g,31.6mmol,2.0eq.)的乙腈溶液(45mL)中。反应液氮气保护下60℃搅拌过夜。冷却至室温，滤去不溶物，用乙酸乙酯洗涤滤饼，滤液真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(C1，1.94g,32％收率)和4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(C2，2.90g,47％收率)。
C1:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.61(s,1H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.82(d,J＝8.4Hz,2H),5.70(s,2H),4.37(q,J＝7.2Hz,2H),3.77(s,3H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H)。
m/z＝409[M+Na]+。
C2:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(s,1H),7.22(d,J＝8.8Hz,2H),6.90(d,J＝8.4Hz,2H),5.31(s,2H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H),3.81(s,3H),1.43(t,J＝7.2Hz,3H)。
m/z＝409[M+Na]+。
步骤D：1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯
氮气保护下，Pd(dppf)Cl2(146mg,0.2mmol,0.05eq.)加入到4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(1.54g,4.0mmol,1.0eq.)，联硼酸频哪醇酯(1.12g,4.4mmol,1.1eq.)和醋酸钾(1.18g,12.0mmol,3.0eq.)的DMSO(30mL)溶液中，反应物氮气保护下80℃搅拌过夜。冷却至室温后，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩得1.8g 5-(乙氧羰基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基硼酸频哪醇酯粗品。
1.8g 5-(乙氧羰基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基硼酸频哪醇酯粗品(4.0mmol,1.0eq.)溶于50mL DMF，加入4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.25g,4.4mmol,1.1eq.)，磷酸钾(1.7g,8.0mmol,2.0eq.)和Pd(PPh3)2Cl2(140mg,0.2mmol,0.05eq.)。反应物氮气保护下100℃搅拌过夜。冷却至室温后，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，硅胶柱层析分离得标题化合物(1.35g,67％收率)，为浅褐色油状液体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(s,1H),7.92(s,1H),7.34(d,J＝4.0Hz,1H),7.29(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),6.51(d,J＝4.0Hz,1H),5.67(s,4H),4.13(q,J＝7.2Hz,2H),3.78(s,3H),3.54(t,J＝8.4Hz,2H),0.92(m,5H),-0.06(s,9H)。
m/z＝508[M+1]+。
步骤E：1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸
室温搅拌下，氢氧化锂一水合物(84mg,2.0mmol,5.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(204mg,0.40mmol,1.0eq.)的甲醇(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。反应液室温下搅拌2小时，真空浓缩，加入乙酸乙酯和1N氢氧化钠水溶液，有机相用1N氢氧化钠萃取两次，合并的碱液加入1N盐酸调至酸性，酸液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得标题化合物(171mg,89％收率)。
1H NMR(CDCl3)δ8.80(1H,s),8.40(1H,s),7.58(1H,d,J＝3.6Hz),7.43(2H,d,J＝8.8Hz),6.99(1H,d,J＝3.6Hz),6.84(2H,d,J＝8.4Hz),6.02(2H,s),5.72(2H,s),3.77(3H,s),3.56(2H,t,J＝8.4Hz),0.93(2H,t,J＝8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z＝480[M+1]+。
步骤F：1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
冰浴搅拌下，羰基二咪唑(150mg,0.923mmol,1.5eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸(295mg,0.615mmol,1.0eq.)的DMF溶液中，0℃下搅拌10分钟，随后升至室温搅拌1小时。将氨气导入反应液，鼓泡1小时，随后氮气保护下反应过夜。加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(200mg,68％收率)。
1H NMR(CDCl3)δ11.29(1H,s),8.83(1H,s),8.09(1H,s),7.44(1H,d,J＝3.6Hz),7.38(2H,d,J＝8.4Hz),6.86(2H,d,J＝8.4Hz),6.79(1H,d,J＝3.6Hz),5.91(2H,s),5.72(1H,s),5.69(2H,s),3.78(3H,s),3.56(2H,t,J＝8.4Hz),0.93(2H,t,J＝8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z＝479[M+1]+。
步骤G：4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
冰浴搅拌下，硝酸铈铵(687mg,1.25mmol,3.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(200mg,0.418mmol,1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌1.5小时。加盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(79mg,53％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.94(brs,1H),11.40(brs,1H),8.87(s,1H),8.41(s,1H),7.50(d,J＝3.6Hz,1H),6.93(d,J＝3.6Hz,1H),6.00(brs,1H),5.71(s,2H),3.57(t,J＝8.2Hz,2H),0.94(t,J＝8.2Hz,2H),-0.04(s,9H)。
m/z＝359[M+1]+。
步骤H：1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
室温下，1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(70mg,0.46mmol,2.1eq.)加入到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(79mg,0.22mmol,1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(67mg,0.55mmol,2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌3天，加入盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(76mg,72％收率)。
1H NMR(CDCl3)δ10.93(1H,s),8.90(1H,s),8.29(1H,s),7.47(1H,d,J＝3.6Hz),6.78(1H,d,J＝3.6Hz),5.93(1H,s),5.71(2H,s),4.40-4.45(1H,m),3.58(2H,t,J＝8.4Hz),3.17(1H,dd,J＝17.2Hz,7.2Hz),3.06(1H,dd,J＝17.2Hz,3.6Hz),2.75-2.82(1H,m),2.01-2.06(1H,m),1.54-1.82(4H,m),1.32-1.36(3H,m),0.95(2H,t,J＝8.4Hz),-0.02(9H,s)。
m/z＝480[M+1]+。
步骤I：1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
用1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(20mg,0.042mmol)代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，参照实施例1中所述的步骤H脱除SEM，得到实施例24化合物(14mg,96％收率)，为白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ11.21(2H,s),8.89(1H,s),8.34(1H,s),7.45(1H,d,J＝3.6Hz),7.12(1H,s),6.73(1H,d,J＝3.6Hz),4.43-4.47(1H,m),3.17(1H,dd,J＝17.2Hz,7.2Hz),3.05(1H,dd,J＝17.2Hz,4.0Hz),2.72-2.79(1H,m),1.95-2.04(1H,m),1.56-1.80(4H,m),1.29-1.34(3H,m)。
m/z＝350[M+1]+。
实施例25 1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-N-甲基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
参照实施例24所述的方法合成实施例25化合物，不同之处在于在步骤F中用甲胺溶液代替氨水溶液。
1H NMR(CDCl3)δ10.67(1H,s),9.89(1H,s),8.90(1H,s),8.27(1H,s),7.44(1H,d,J＝3.6Hz),6.75(1H,d,J＝3.6Hz),4.42-4.47(1H,m),3.15(1H,dd,J＝17.2Hz,7.2Hz),3.01-3.08(4H,m),2.69-2.81(1H,m),1.99-2.06(1H,m),1.57-1.81(4H,m),1.32-1.35(3H,m)。
m/z＝364[M+1]+。
实施例26 N-(2-氨基乙基)-1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
步骤A：1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
氮气保护下，Pd(dppf)Cl2(95mg,0.13mmol,0.05eq.)加入到4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1.0g,2.6mmol,1.0eq.，由实施例26步骤C制备)，联硼酸频哪醇酯(0.7g,2.8mmol,1.1eq.)和醋酸钾(0.76g,7.8mmol,3.0eq.)的DMSO(30mL)溶液中，反应物氮气保护下80℃搅拌过夜。冷却至室温后，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩得1.2g 3-(乙氧羰基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基硼酸频哪醇酯粗品。
1.2g 3-(乙氧羰基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基硼酸频哪醇酯粗品(2.6mmol,1.0eq.)溶于50mL DMF，加入4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(0.8g,2.8mmol,1.1eq.)，磷酸钾(1.1g,5.2mmol,2.0eq.)和Pd(PPh3)2Cl2(91mg,0.13mmol,0.05eq.)。反应物氮气保护下100℃搅拌过夜。冷却至室温后，加水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，硅胶柱层析分离得标题化合物(960mg,73％收率)，为浅褐色油状液体。
1H NMR(CDCl3)δ8.86(1H,s),8.02(1H,s),7.32(1H,d,J＝3.6Hz),7.30(2H,d,J＝8.4Hz),6.90(2H,d,J＝8.4Hz),6.39(1H,d),5.65(2H,s),5.39(2H,s),4.28(2H,q,J＝7.2Hz),3.81(3H,s),3.54(2H,t,J＝8.4Hz),1.15(3H,t,J＝7.2Hz),0.92(2H,t,J＝8.4Hz),-0.06(9H,s)。
m/z＝508[M+1]+。
步骤B：4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
冰浴搅拌下，硝酸铈铵(1.1g,2.01mmol,3.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(336mg,0.66mmol,1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌1.5小时。加盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(175mg,63％收率)。
1H NMR(CDCl3)δ9.04(1H,s),8.26(1H,s),7.55(1H,d,J＝3.6Hz),6.73(1H,d,J＝3.6Hz),5.73(2H,s),4.34(2H,q,J＝7.2Hz),3.60(2H,t,J＝8.4Hz),1.24(3H,t,J＝7.2Hz),0.95(2H,t,J＝8.4Hz),-0.03(9H,s)。
m/z＝388[M+1]+。
步骤C：1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
室温下，1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(142mg,0.94mmol,2.1eq.)加入到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(173mg,0.446mmol,1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(135mg,1.11mmol,2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈(10mL)溶液中。反应液室温下搅拌过夜，加热到60℃反应5小时。冷却至室温，加入盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(79mg,35％收率)，为灰白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ8.88(1H,s),7.98(1H,s),7.32(1H,d,J＝3.6Hz),6.46(1H,d,J＝3.6Hz),5.65(2H,s),4.27-4.35(1H,m),4.23(2H,q,J＝7.2Hz),3.53(2H,t,J＝8.4Hz),3.11(1H,dd,J＝17.2Hz,7.6Hz),2.97(1H,dd,J＝17.2Hz,4.0Hz),2.58-2.69(1H,m),1.88-1.99(1H,m),1.51-1.74(4H,m),1.22-1.30(3H,m),1.08(3H,t,J＝7.2Hz),0.90(2H,t,J＝8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z＝509[M+1]+。
步骤D：N-(2-氨基乙基)-1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
冰浴搅拌下，三氟乙酸(0.5mL)加入到1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(79mg,0.16mmol)的二氯甲烷溶液中。反应液氮气保护下室温搅拌过夜。真空浓缩，残余物用二氯甲烷溶解后，真空再次浓缩两遍。浓缩物溶于乙醇(5mL)中，加入乙二胺(0.5mL)室温下搅拌0.5小时，60℃下真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到实施例26化合物(57mg,91％收率)，为米黄色固体。
1H NMR(CDCl3)δ11.27(1H,s),10.20(1H,brs),8.79(1H,s),8.23(1H,s),7.32(1H,d,J＝3.6Hz),6.64(1H,d,J＝3.6Hz),4.36-4.42(1H,m),3.57-3.65(2H,m),3.17(1H,dd,J＝17.2Hz,7.2Hz),3.01-3.06(3H,m),2.69-2.74(1H,m),1.95-2.02(1H,m),1.61-1.78(4H,m),1.28-1.33(3H,m)。
m/z＝393[M+1]+。
实施例27 1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲腈
步骤A：1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲腈
冰浴搅拌下，将1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(50mg,0.10mmol,1.0eq.，由实施例24步骤H制备)溶于二氯甲烷(5mL)，加入三乙胺(95mg,0.94mmol,9eq.)和三氟乙酸酐(88mg,0.42mmol,4eq.)，反应液升至室温，搅拌过夜。加盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到64mg标题化合物粗品。
1H NMR(CDCl3)δ8.98(1H,s),8.25(1H,s),7.45(1H,d,J＝3.6Hz),6.81(1H,d,J＝3.6Hz),5.70(2H,s),4.33-4.37(1H,m),3.57(2H,t,J＝8.4Hz),3.11(1H,dd,J＝17.2Hz,8.0Hz),2.98(1H,dd,J＝17.2Hz,4.0Hz),2.60-2.63(1H,m),1.96-2.00(1H,m),1.54-1.71(4H,m),1.23-1.25(3H,m),0.93(2H,t,J＝8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z＝462[M+1]+。
步骤B：1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲腈
用64mg 1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲腈粗品代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，参照实施例1中所述的步骤H脱除SEM，得到实施例27化合物(30mg,87％收率)，为白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ9.40(1H,s),8.97(1H,s),8.25(1H,s),7.43(1H,dd,J＝3.6Hz,2.4Hz),6.80(1H,dd,J＝3.6Hz,2.0Hz),4.31-4.37(1H,m),3.15(1H,dd,J＝17.2Hz,8.4Hz),2.99(1H,dd,J＝17.2Hz,3.6Hz),2.60-2.66(1H,m),1.98-2.05(1H,m),1.59-1.78(4H,m),1.29-1.34(3H,m)。
m/z＝332[M+1]+。
实施例28 3-环戊基-3-[3-(羟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A：[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]甲醇
冰浴氮气保护下，氢化铝锂(50mg,1.32mmol,2.2eq.)分批加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(300mg,0.60mmol,1.0eq.,由实施例24步骤D制备)的干燥四氢呋喃溶液(5mL)中。反应液室温搅拌3小时，冰浴冷却下，先后加入0.05mL水，0.05mL 1M NaOH溶液和0.15mL水。硅藻土滤去沉淀，滤饼用乙酸乙酯洗涤，滤液加入饱和盐水，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩得到标题化合物(250mg,90％收率)，为黄色油状液体。
1H NMR(CDCl3)δ8.87(1H,s),8.18(1H,s),7.47(1H,d,J＝3.6Hz),7.20(2H,d,J＝8.4Hz),6.91(1H,d,J＝3.6Hz),6.87(2H,d,J＝8.4Hz),5.70(2H,s),5.47(2H,s),4.74-4.88(2H,brs),3.78(3H,s),3.55(2H,t,J＝8.4Hz),0.93(2H,t,J＝8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z＝466[M+1]+。
步骤B：[4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲醇
冰浴搅拌下，硝酸铈铵(883mg,1.61mmol,3.0eq.)加入到[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]甲醇(250mg,0.537mmol,1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌7小时。加盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(41mg,22％收率)。
m/z＝346[M+1]+。
步骤C：3-环戊基-3-[3-(羟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下，1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(35mg,0.23mmol,2.0eq.)加入到[4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲醇(40mg,0.12mmol,1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(35mg,0.29mmol,2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌5小时，升温至60℃搅拌过夜。冷却至室温后，加入盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(13mg,24％收率)。
1H NMR(CDCl3)δ8.86(1H,s),8.24(1H,s),7.42(1H,d,J＝3.6Hz),7.10-7.19(1H,brs),6.77(1H,d,J＝3.6Hz),5.69(2H,s),4.80(2H,s),4.20-4.28(1H,m),3.55(2H,t,J＝8.4Hz),3.11(1H,dd,J＝17.2Hz,8.0Hz),2.95(1H,dd,J＝17.2Hz,4.0Hz),2.61-2.69(1H,m),1.93-2.02(1H,m),1.58-1.79(4H,m),1.28-1.33(3H,m),0.93(2H,t,J＝8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z＝467[M+1]+。
步骤D：3-环戊基-3-[3-(羟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
3-环戊基-3-[3-(羟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(13mg,0.028mmol)，溶于乙腈(1mL)和水(1mL)，加入LiBF4(54mg,0.58mmol)，90℃搅拌过夜，冷却至室温，加入氨水溶液搅拌2小时，加入盐水和乙酸乙酯，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(6mg,64％收率)，为灰白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ10.26(1H,s),8.85(1H,s),8.25(1H,s),7.41(1H,d,J＝3.2Hz),6.75(1H,d,J＝3.2Hz),4.81(2H,s),4.21-4.27(1H,m),3.11(1H,dd,J＝17.2Hz,8.0Hz),2.96(1H,dd,J＝17.2Hz,3.6Hz),2.61-2.67(1H,m),1.95-2.04(1H,m),1.57-1.78(4H,m),1.28-1.33(3H,m)。
m/z＝337[M+1]+。
实施例29 3-环戊基-3-[3-(氟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A：4-[5-(氟甲基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下，二乙氨基三氟化硫(54mg,0.34mmol,2.0eq.)加入到[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]甲醇(78mg,0.17mmol,1.0eq.,由实施例28步骤A制备)的干燥四氢呋喃(5mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
1H NMR(CDCl3):δ8.86(1H,s),8.15(1H,s),7.39(1H,d,J＝3.6Hz),7.25(2H,d,J＝8.4Hz),6.88(2H,d,J＝8.4Hz),6.81(1H,d,J＝3.6Hz),6.02(2H,d,J＝48.4Hz),5.68(2H,s),5.48(2H,s),3.80(3H,s),3.55(2H,t,J＝8.4Hz),0.92(2H,t,J＝8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z＝468[M+1]+。
步骤B：4-[3-(氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下，硝酸铈铵(3.0eq.)加入到4-[5-(氟甲基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌7小时。加盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝348[M+1]+。
步骤C：3-环戊基-3-[3-(氟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下，1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(2.0eq.)加入到4-[3-(氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌5小时，升温至60℃搅拌过夜。冷却至室温后，加入盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝469[M+1]+。
步骤D：3-环戊基-3-[3-(氟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
3-环戊基-3-[3-(氟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(1.0eq.)，溶于乙腈(1mL)和水(1mL)，加入LiBF4(10.0eq.)，90℃搅拌过夜，冷却至室温，加入氨水溶液搅拌2小时，加入盐水和乙酸乙酯，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到实施例29化合物。
m/z＝339[M+1]+。
实施例30 3-环戊基-3-[3-(二氟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A：1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲醛
-78℃氮气保护下，二异丁基氢化铝(1.2eq.,1M的甲苯溶液)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(1.0eq.,由实施例26步骤D制备)的干燥甲苯溶液(5mL)中。反应液-78℃下搅拌1小时，加入饱和酒石酸钾钠溶液淬灭，搅拌15分钟，用乙醚萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝464[M+1]+。
步骤B：4-[5-(二氟甲基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下，DAST试剂(二乙氨基三氟化硫，4.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲醛(1.0eq.)的干燥四氢呋喃(5mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝486[M+1]+。
步骤C：4-[3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下，硝酸铈铵(3.0eq.)加入到4-[5-(二氟甲基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌7小时。加盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝366[M+1]+。
步骤D：3-环戊基-3-[3-(二氟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下，1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(2.0eq.)加入到4-[3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌5小时，升温至60℃搅拌过夜。冷却至室温后，加入盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝487[M+1]+。
步骤E：3-环戊基-3-[3-(二氟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
3-环戊基-3-[3-(二氟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(1.0eq.)，溶于乙腈(1mL)和水(1mL)，加入LiBF4(10.0eq.)，90℃搅拌过夜，冷却至室温，加入氨水溶液搅拌2小时，加入盐水和乙酸乙酯，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到实施例30化合物。
m/z＝357[M+1]+。
实施例31 3-环戊基-3-{3-[(甲氨基)甲基]-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基}丙腈
步骤A：1-[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]-N-甲基甲胺
室温下，氰基硼氢化钠(2.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲醛(1.0eq.,由实施例30步骤A制备)、乙酸(1eq.)和乙醛(40％，1.0eq.)的1,2-二氯乙烷溶液中。撤去冰浴室温搅拌过夜，加入饱和氯化铵淬灭反应。用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝479[M+1]+。
步骤B：N-甲基-1-[4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲胺
冰浴搅拌下，硝酸铈铵(3.0eq.)加入到1-[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]-N-甲基甲胺(1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌7小时。加盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝359[M+1]+。
步骤C：3-环戊基-3-{3-[(甲氨基)甲基]-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基}丙腈
室温下，1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(2.0eq.)加入到N-甲基-1-[4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲胺(1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌5小时，升温至60℃搅拌过夜。冷却至室温后，加入盐水和乙酸乙酯稀释，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝480[M+1]+。
步骤D：3-环戊基-3-{3-[(甲氨基)甲基]-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基}丙腈
3-环戊基-3-{3-[(甲氨基)甲基]-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基}丙腈(1.0eq.)，溶于乙腈(1mL)和水(1mL)，加入LiBF4(1.0eq.)，90℃搅拌过夜，冷却至室温，加入氨水溶液搅拌2小时，加入盐水和乙酸乙酯，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到实施例31化合物。
m/z＝350[M+1]+。
实施例32 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3-羟基环戊基)丙腈
步骤A:3-羟基环戊烷羧酸
冰浴下，向3-羰基环戊烷羧酸(3.7g,28.9mmol)的甲醇溶液中分批加入硼氢化钠(1.64g,43.2mmol)，加完常温搅拌，待反应完毕，向反应液中加入1M盐酸溶液，淬灭反应，除去溶剂，得粗品直接进行下一步。
步骤B:3-羟基环戊烷甲酸乙酯
向步骤A中所得粗品的乙醇溶液中，加入1.5mL浓硫酸，90℃反应过夜。待反应完，加入饱和碳酸氢钠淬灭反应，除去乙醇，浓缩物加入水，乙酸乙酯萃取，柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1/5)，得到消旋的3-羟基环戊烷甲酸乙酯(2.27g,50％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.30-4.34(m,1H),4.10-4.18(m,2H),2.82-2.90(m,1H),1.60-2.20(m,7H),1.20-1.29(m,3H)。
步骤C:3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲酸乙酯
向1H-咪唑(1.96g,28.73mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(2.17g,14.37mmol)的DMF溶液中，加入3-羟基环戊烷甲酸乙酯(2.27g,14.37mmol)。混合物搅拌过夜，待原料反应完，用正己烷萃取反应液，萃取物用水洗三次，经硫酸钠干燥，除去溶剂得外消旋的3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲酸乙酯(3.92g,100％)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.10-4.19(m,1H),4.05-4.09(m,2H),2.64-2.68(m,1H),2.00-2.07(m,2H),1.62-1.86(m,4H),1.19-1.23(m,3H),0.82-0.87(m,10H),-0.02-0.06(m,6H)。
步骤D:3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲醛
在-78℃下，向外消旋的3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲酸乙酯(3.92g)的正己烷溶液中，滴加1.2M二异丁基氢化铝的甲苯溶液，反应一小时，待反应完，加入甲醇淬灭反应。饱和碳酸氢钠洗，硫酸钠干燥。柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1:30)，得目标产物(2.34g,65％产率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.64(s,1H),4.29-4.31(m,1H),2.64-2.68(m,1H),1.56-2.13(m,6H),0.82-0.87(m,10H),0.00-0.15(m,6H)。
步骤E:3-[3-(叔丁基二甲硅烷氧基)环戊烷基]丙烯腈
在冰浴下，向叔丁醇钾(246.8mg,2.2mmol)的四氢呋喃溶液中，加入氰甲基磷酸二乙酯(426.0mg,2.4mmol)，撤去冰浴，常温搅拌15min，再重新冷却至0℃，向溶液中逐滴加入3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲醛(458.0mg,2.0mmol)，常温反应1h左右，反应完全，柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1/60),得到目标产物(435mg,87％产率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.50-6.80(m,1H),5.16-5.29(m,1H),4.27-4.33(m,1H),2.64-2.68(m,1H),1.40-2.13(m,6H),0.85-0.89(m,10H),0.00-0.07(m,6H)。
步骤F:3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3-羟基环戊基)丙腈
向3-[3-(叔丁基二甲硅烷氧基)环戊烷基]丙烯腈的乙腈溶液中加入4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑(由实施例1中步骤F制备)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯，混合物在室温下搅拌3天。原料反应完之后，浓缩，柱层析(乙酸乙酯/正己烷＝1/15),然后用含20％三氟乙酸的二氯甲烷处理3h，蒸发并用过量的乙二胺的甲醇溶液处理过夜。再用乙醇/水/浓盐酸(10:4:3体积比)搅拌3h来除去剩余未除尽的TBS基团。柱层析硅胶柱分离得实施例32化合物。
m/z＝338[M+1]+。
实施例33 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3-氟环戊基)丙腈
步骤A:3-氟环戊烷甲酸乙酯
冰浴搅拌下，二乙氨基三氟化硫(2.0eq.)加入到3-羟基环戊烷甲酸乙酯(1.0eq.,由实施例32步骤B制备)的干燥四氢呋喃(5mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
步骤B:3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3-氟环戊基)丙腈
用3-氟环戊烷甲酸乙酯代替3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲酸乙酯，并参照实施例32步骤D-F的方法制备实施例33化合物。
m/z＝340[M+1]+。
实施例34 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3,3-二氟环戊基)丙腈
步骤A：3,3-二氟环戊烷甲酸乙酯
冰浴搅拌下，二乙氨基三氟化硫(4.0eq.)加入到3-羰基环戊烷甲酸乙酯(1.0eq.)的干燥四氢呋喃(5mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
步骤B：3,3-二氟环戊烷甲醛
-78℃氮气保护下，二异丁基氢化铝(1.2eq.,1M的甲苯溶液)加入到3,3-二氟环戊烷甲酸乙酯(1.0eq.)的干燥甲苯溶液(5mL)中。反应液-78℃下搅拌1小时，加入饱和酒石酸钾钠溶液淬灭，搅拌15分钟，用乙醚萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
步骤C：3-(3,3-二氟环戊基)丙烯腈
冰浴搅拌下，在盛有1.0M叔丁醇钾(1.2eq.)的新蒸四氢呋喃溶液中，滴加氰基甲基膦酸二乙酯(1.2eq.)的四氢呋喃溶液。移去冰浴，反应物室温搅拌0.5小时，再在冰浴冷却下滴加3,3-二氟环戊烷甲醛(1.0eq.)。加毕，反应物室温下搅拌过夜，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取两次，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到3-(3,3-二氟环戊基)丙烯腈。
步骤D：3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3,3-二氟环戊基)丙腈
室温搅拌下，3-(3,3-二氟环戊基)丙烯腈(2.52eq.)加入到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑(1.0eq.,由实施例1中步骤F制备)的乙腈溶液中，随后加入DBU(2.1eq.)。反应液氮气保护下70℃搅拌过夜。冷却至室温，加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z＝488[M+1]+。
步骤E：3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3,3-二氟环戊基)丙腈
用3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3,3-二氟环戊基)丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈，参照实施例1中所述的步骤H脱去SEM，得到实施例34化合物。
m/z＝358[M+1]+。
生物活性实验
1.化合物酶学活性(IC50)检测
采取匀相时间分辨荧光(HTRF)方法建立了JAK2(野生型和V617F突变型)的激酶活性检测平台，进行化合物活性的测定。将化合物从1mM开始用100％DMSO进行3倍的梯度稀释(共11个浓度)，每个浓度取4μL加入到96μL的反应缓冲液中(50mM HEPES,pH7.4,10mMMgCl2,1mM EGTA,0.01％Tween-20,0.005％BAS,2mM DTT)混匀，然后取2.5μL加入到384孔板(OptiPlate-384,购买于PerkinElmer)，然后加入5μL的JAK2激酶(购买于Carna)，离心混匀，再加入2.5μL的ATP(终浓度为相应的Km值)与TK peptide(KinEASETM-TK,购买于Cisbio)混合物启动反应(总反应体积为10μL)。将384孔板放于孵育箱中23℃反应120分钟，然后加入5μL的Eu3+cryptate-labled anti-phosphotyrosine antibody(购买于Cisbio)，5μL的Streptavidin-XL-665(KinEASETM-TK,购买于Cisbio)停止反应。在孵育箱中孵育1小时后，在Envision(购买于PerkinElmer)上读取荧光值(320nm激发，检测665nm与620nm的发射光，二者比值为酶活性)。每个化合物分别在11个浓度下测定酶的活性，使用GraFit6.0软件(Erithacus Software)计算数据，得到该化合物的IC50值。
2.化合物细胞增殖活性(IC50)检测
人白血病细胞系HEL(购买于北京翠竹生物科技有限责任公司)在孵箱(37℃，5％CO2)中用1640培养基加10％FBS(胎牛血清)和1％P/S(青霉素/链霉素)进行培养。在化合物的检测中，将HEL细胞以每孔3000个/195μL的浓度铺于96孔板(Corning)中，化合物从10mM开始3倍梯度稀释11个浓度，每个浓度取4μL加入到96μL的1640培养基中稀释成25×化合物，然后取5μL加入到195μL的细胞培养液中(DMSO终浓度为0.1％，v/v)，处理72小时后加入35μL的(购买于Promega)，按照说明书的操作流程在Flex Station3(Molecular Devices)上测定荧光信号，使用GraphPad Prism5.0计算化合物对细胞增殖抑制的IC50值。
根据本文所述的生物学方法对上述制备的所选化合物进行分析，其结果如下：
1.化合物对JAK2激酶野生型(WT)和突变型(V617F)的抑制活性(IC50)
实施例编号 JAK2<sup>WT</sup> IC<sub>50</sub>(nM) JAK2<sup>V617F</sup> IC<sub>50</sub>(nM)
Ruxolitinib <20 <20
1 <20 <20
2 <100 -
3 <20 -
5 <20 -
6 <20 -
7 <20 <20
9 <20 -
10 <20 -
11 <20 -
12 <20 -
13 <20 -
14 <20 -
15 <20 -
16 <100 -
17 <20 -
18 <1000 -
19 <20 -
24 <20 -
25 <20 -
26 <20 -
27 <20 -
28 <20 -
2.部分化合物对人淋巴瘤细胞系HEL(JAK2V617F)的增殖抑制活性(IC50)
由表中数据可见，本发明实施例化合物的酶学和细胞学抑制活性与Ruxolitinib相当。
药代药动实验
雄性/雌性SD大鼠来源于北京维通利华实验动物技术有限公司，Ruxolitinib磷酸盐自制，将大鼠分组，每组3只，分别口服单次灌胃给予待测样品混悬液(5mg/kg或15mg/kg)。动物在实验前禁食过夜，禁食时间从给药前10小时至给药后4小时。给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、和24小时采血。使用小动物麻醉机经异氟烷麻醉后通过眼底静脉丛采取0.3mL全血，放于肝素抗凝管中，样品于4℃、4000rpm离心5min，血浆转移至离心管中，并放于-80℃保存直到分析。血浆中样品使用蛋白质沉淀法萃取，萃取液通过LC/MS/MS分析。
附注：b.文献报道数据
附注：a.自测数据；b.文献报道数据
由PK数据可知，同等剂量下，实施例1和实施例7的AUC和Cmax远高于Ruxolitinib，药代动力学性质显著优于Ruxolitinib。

Claims (2)

1.一种如式Ⅰ所示的化合物、其立体异构体、其药学上可接受的盐：
其中，
R1选自-NR7R8；R2选自H；
R7和R8各自独立地选自H、或C1-6烷基；
R3选自H；
R4选自氰基；
R5和R6选自H。
2.药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物、其立体异构体、其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108368115B (zh) * 2015-12-15 2020-01-03 正大天晴药业集团股份有限公司 吡咯并嘧啶化合物的盐
CN107759600A (zh) 2016-06-16 2018-03-06 正大天晴药业集团股份有限公司 作为jak抑制剂的吡咯并嘧啶化合物的结晶
CN107513069A (zh) * 2016-06-16 2017-12-26 正大天晴药业集团股份有限公司 手性吡咯并嘧啶化合物的制备方法
CN107513067A (zh) * 2016-06-16 2017-12-26 北京赛林泰医药技术有限公司 含有取代环戊基的吡咯并嘧啶化合物
CN109651424B (zh) * 2017-10-11 2021-01-22 新发药业有限公司 一种7-保护基-4-(1-氢-吡唑-4-基)吡咯[2,3-d]嘧啶的合成方法
CN109867675B (zh) * 2017-12-01 2021-01-19 北京普祺医药科技有限公司 一种吡咯并嘧啶衍生的化合物、药物组合物以及其用途
AU2019413421A1 (en) 2018-12-24 2021-08-12 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Treatment use of pyrrolopyrimidine compound, and solid pharmaceutical composition of pyrrolopyrimidine compound
CN114981272A (zh) * 2020-03-09 2022-08-30 正大天晴药业集团股份有限公司 吡咯并嘧啶化合物的治疗噬血细胞综合征的用途
WO2021236139A1 (en) * 2020-05-21 2021-11-25 Concert Pharmaceuticals, Inc. Novel deuterated jak inhibitor and uses thereof
CN114085224A (zh) * 2020-08-25 2022-02-25 北京普祺医药科技有限公司 一种吡咯并嘧啶化合物的制备方法
WO2022268083A1 (zh) * 2021-06-21 2022-12-29 正大天晴药业集团股份有限公司 吡咯并嘧啶化合物及其药物组合物治疗慢性移植物抗宿主病的用途
WO2023179547A1 (zh) * 2022-03-21 2023-09-28 正大天晴药业集团股份有限公司 吡咯并嘧啶化合物治疗中高危骨髓纤维化的用途
WO2024027790A1 (zh) * 2022-08-04 2024-02-08 正大天晴药业集团股份有限公司 吡咯并嘧啶化合物治疗急性移植物抗宿主病的用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101448826A (zh) * 2005-12-13 2009-06-03 因塞特公司 作为两面神激酶抑制剂的杂芳基取代的吡咯并[2,3-b]吡咯和吡咯并[2,3-b]嘧啶
CN102026999A (zh) * 2008-03-11 2011-04-20 因塞特公司 作为jak抑制剂的氮杂环丁烷和环丁烷衍生物
CN105218548A (zh) * 2014-06-09 2016-01-06 上海海和药物研究开发有限公司 一种新型杂环化合物及其制备方法和作为激酶抑制剂的用途

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2008012860A (es) 2006-04-05 2009-01-07 Vertex Pharma Desazapurinas de utilidad como inhibidores de janus cinasas.
CL2009001884A1 (es) 2008-10-02 2010-05-14 Incyte Holdings Corp Uso de 3-ciclopentil-3-[4-(7h-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1h-pirazol-1-il)propanonitrilo, inhibidor de janus quinasa, y uso de una composición que lo comprende para el tratamiento del ojo seco.
PT2486041E (pt) * 2009-10-09 2013-11-14 Incyte Corp Derivados hidroxilo, ceto e glucuronido de 3-(4-(7h-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1h-pirazol-1-il)-3-ciclopentil-propanonitrilo
KR20130094710A (ko) * 2010-04-14 2013-08-26 어레이 바이오파마 인크. Ｊａｋ 키나아제의 억제제로서 5,7-치환된-이미다조［1,2-ｃ］피리미딘
US9089574B2 (en) * 2011-11-30 2015-07-28 Emory University Antiviral JAK inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections
US20130310340A1 (en) * 2012-05-16 2013-11-21 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Method of treating muscular degradation
US20140343034A1 (en) * 2013-04-25 2014-11-20 Japan Tobacco Inc. Skin barrier function improving agent
CN104725380B (zh) * 2013-12-18 2019-06-28 康塞特医药品有限公司 卢索替尼的氘代衍生物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101448826A (zh) * 2005-12-13 2009-06-03 因塞特公司 作为两面神激酶抑制剂的杂芳基取代的吡咯并[2,3-b]吡咯和吡咯并[2,3-b]嘧啶
CN102026999A (zh) * 2008-03-11 2011-04-20 因塞特公司 作为jak抑制剂的氮杂环丁烷和环丁烷衍生物
CN105218548A (zh) * 2014-06-09 2016-01-06 上海海和药物研究开发有限公司 一种新型杂环化合物及其制备方法和作为激酶抑制剂的用途

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