本申请要求于2014年12月16日向中国国家知识产权局提交的第201410784461.2号中国专利申请的优先权和权益,所述申请公开的内容通过引用整体并入本文中。
具体实施例
通过具体的实施例更详细地说明本发明。为说明目的提供以下实施例,它们不应以任何方式限制本发明。本领域技术人员应容易认识到,可改变或修改多种非关键性参数,得到基本上相同的结果。按照一种或多种本文中所述的测定,发现以下实施例化合物是JAK抑制剂。
实施例1 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A:3-环戊基丙烯腈
冰浴搅拌下,在盛有1.0M叔丁醇钾(28.0g,250mmol,1.2eq.)的新蒸四氢呋喃溶液中,滴加氰基甲基膦酸二乙酯(44.3g,250.0mmol,1.2eq.)的四氢呋喃溶液。移去冰浴,反应物室温搅拌0.5小时,再在冰浴冷却下滴加环戊烷甲醛(20.0g,204mmol,1.0eq.)。加毕,反应物室温下搅拌过夜,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取两次,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-环戊基丙烯腈(22.3g,91%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.69(dd,J=18.8Hz,J=10.4Hz,0.5H,反式烯烃),6.37(t,J=10.8Hz,0.5H,顺式烯烃),5.29(d,J=17.6Hz,0.5H,反式烯烃),5.20(d,J=10.8Hz,0.5H,顺式烯烃),3.06-2.99(m,0.5H,顺式产物),2.62-2.56(m,0.5H,反式产物),2.04-1.82(m,2H),1.74-1.59(m,4H),1.42-1.26(m,2H)。
步骤B:4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下,在盛有4-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(20.0g,130.4mmol,1.0eq.)的干燥DMF溶液中,加入NaH(6.6g,57%含量,156.8mmol,1.2eq)。反应物室温搅拌1小时,再在冰浴冷却下滴加SEMCl(26.1g,156.5mmol,1.2eq.)。加毕,反应物冰浴搅拌1小时,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(33.43g,90.4%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(s,1H),7.39(d,J=3.6Hz,1H),6.67(d,J=3.6Hz,1H),5.65(s,2H),3.53(dd,J=9.2Hz,J=8.0Hz,2H),0.91(t,J=8.4Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z=284[M+1]+。
步骤C:2-氰基-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙酸乙酯
室温搅拌下,4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(33.5g,118mmol,1.0eq.)加入到氰基乙酸乙酯(40.1g,354.0mmol,3.0eq.)和碳酸钾(33.0g,238mmol,2.0eq.)的混合物中。反应物升温到60℃反应0.5小时,然后升温至130℃反应1.0小时。冷却至室温,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到2-氰基-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙酸乙酯(30.6g,72%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ13.87(brs,1H),8.05(s,1H),7.44(d,J=4.0Hz,1H),7.20(d,J=3.6Hz,1H),5.57(s,2H),4.30(dd,J=14.4Hz,J=7.2Hz,2H),3.5(t,J=8.4Hz,2H),1.37(t,J=7.2Hz,3H),0.92(t,J=8.4Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z=361[M+1]+。
步骤D:2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙腈
室温搅拌下,氯化钠(49.7g,849.0mmol,10.0eq.)加入到2-氰基-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙酸乙酯(30.6g,84.9mmol,1.0eq.)的DMSO和水的混合溶剂中。反应液氮气保护下150℃反应5天。冷却至室温,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙腈(18.4g,75%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(s,1H),7.40(d,J=3.6Hz,1H),6.80(d,J=3.6Hz,1H),5.67(s,2H),4.15(s,2H),3.53(t,J=8.4Hz,2H),0.92(t,8.4Hz,2H),0.01(s,9H)。
m/z=289[M+1]+。
步骤E:3-(二甲基氨基)-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)丙烯腈
2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)乙腈(5.3g,18.38mmol,1.0eq.)和DMF-DMA(6.57g,55.14mmol,3.0eq.)加入到含DMF溶液的封管中。反应液140℃下搅拌过夜。冷却至室温,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-(二甲基氨基)-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)丙烯腈(3.35g,53%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(s,1H),8.50(s,1H),7.37(d,J=3.6Hz,1H),7.27(d,J=3.6Hz,1H),5.66(s,2H),3.58(t,J=8.4Hz,2H),3.38(brs,6H),1.04(t,J=6.8Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z=344[M+1]+。
步骤F:4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑
室温搅拌下,水合肼(85%,2.1g,35.6mmol,10.0eq.)加入到3-(二甲基氨基)-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)丙烯腈(1.2g,3.5mmol,1.0eq.)的乙醇溶液中。反应液氮气保护下90℃搅拌过夜。冷却至室温,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡咯(456mg,40%收率)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.20(brs,1H),8.75(s,1H),8.30(brs,1H),7.71(d,J=3.2Hz,1H),7.11(d,J=3.6Hz,1H),6.66(brs,2H),5.70(s,2H),3.62(t,J=8.0Hz,2H),0.93(t,J=8.0Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z=331[M+1]+。
步骤G:3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
3-[5-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
室温搅拌下,3-环戊基丙烯腈(5.176g,42.71mmol,2.52eq.)加入到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑(5.6g,16.95mmol,1.0eq.)的乙腈溶液中,随后加入DBU(5.42g,35.60mmol,2.1eq.)。反应液氮气保护下70℃搅拌过夜。冷却至室温,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(4.49g,59%收率)和3-[5-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(1.60g,21%收率)。
G1:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),8.01(s,1H),7.34(d,J=3.6Hz,1H),6.68(d,J=3.6Hz,1H),5.66(brs,4H),4.00(t,J=2.0Hz,1H),3.53(t,J=8Hz,2H),3.08(dd,J=16.8Hz,J=8.4Hz,1H),2.89(dd,J=16.8Hz,J=3.6Hz,1H),2.53(s,1H),1.95-1.93(m,1H),1.74-1.57(m,5H),1.28-1.22(m,2H),0.92(dd,J=14Hz,J=8.4Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z=452[M+1]+。
G2:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),8.13(s,1H),7.33(d,J=3.6Hz,1H),6.80(d,J=3.6Hz,1H),6.12(brs,2H),5.30(s,2H),4.12-4.07(m,1H),3.53(t,J=8.4Hz,2H),3.14(dd,J=16.8Hz,J=9.6Hz,1H),2.90(dd,J=16.8Hz,J=4.0Hz,1H),2.60-2.57(m,1H),1.94-1.91(m,1H),1.74-1.54(m,5H),1.34-1.22(m,2H),0.92(t,J=8.0Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z=452[M+1]+。
步骤H:3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
冰浴搅拌下,三氟乙酸(20mL)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(3.395g,7.52mmol,1.0eq.)的二氯甲烷溶液中。反应液氮气保护下室温搅拌过夜。真空浓缩,残余物用二氯甲烷溶解后,真空再次浓缩两遍。浓缩物溶于甲醇中,加入乙二胺(2mL)搅拌过夜,真空浓缩。加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(1.94g,80.0%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.45(s,1H),8.79(s,1H),8.02(s,1H),7.33(dd,J=3.9Hz,2.4Hz,1H),6.66(dd,J=3.9Hz,2.4Hz,1H),5.69(brs,2H),3.98-4.03(m,1H),3.08(dd,J=16.8Hz,8.4Hz,1H),2.88(dd,J=16.8Hz,3.6Hz,1H),2.49-2.59(m,1H),1.89-1.96(m,1H),1.56-1.74(m,4H),1.21-1.29(m,3H)。
m/z=322[M+1]+。
实施例2 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙酰胺
通过实施例1中的步骤H的柱层析硅胶柱分离得到实施例2化合物(0.45g,18%收率)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.93(s,1H),8.58(s,1H),8.37(s,1H),7.45-7.47(m,1H),7.27(s,1H),6.88-6.89(m,1H),6.74(s,1H),6.09(s,2H),4.30-4.37(m,1H),2.79(dd,J=15.2Hz,9.6Hz,1H),2.54(dd,J=15.2Hz,4.0Hz,1H),2.22-2.31(m,1H),1.69-1.79(m,1H),1.37-1.62(m,4H),1.19-1.32(m,3H)。
m/z=340[M+1]+。
实施例3 3-[5-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
通过实施例1中的步骤G制备3-[5-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(130mg,0.289mmol),并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例3化合物(14mg,15.1%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.51-10.61(brs,1H),8.70(s,1H),8.16(s,1H),7.33-7.35(m,1H),6.80-6.81(m,1H),6.01-6.35(brs 2H),4.11-4.17(m,1H),3.17(dd,16.8Hz,J=9.6Hz,1H),2.92(dd,J=16.8Hz,J=4.0Hz,1H),2.56-2.64(m,1H),1.90-1.98(m,1H),1.53-1.75(m,4H),1.25-1.35(m,3H)。
m/z=322[M+1]+。
实施例4 3-[5-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙酰胺
通过实施例1中步骤G制备3-[5-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(130mg,0.289mmol),并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例4化合物(65mg,70%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.94(s,1H),8.60(s,1H),8.16(s,1H),7.46(t,J=3.2Hz,1H),7.39(s,1H),6.92-6.94(s,1H),6.90(s,2H),6.87(s,1H),4.43-4.48(m,1H),2.86(dd,J=15.2Hz,10.0Hz,1H),2.65(dd,J=15.2Hz,3.6Hz,1H),2.35-2.44(m,1H),1.80-1.89(m,1H),1.45-1.73(m,4H),1.23-1.39(m,3H)。
m/z=340[M+1]+。
实施例5(3R)-3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
对实施例1步骤H获得的3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈进行制备型HPLC分离(OJ-H柱,20%异丙醇/正己烷,柱温25℃,流速1.0ml/min,保留时间20.30min),得到(R)-构型化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.37(s,1H),8.79(s,1H),8.02(s,1H),7.32(dd,J=3.9Hz,2.4Hz,1H),6.68(dd,J=3.9Hz,2.4Hz,1H),5.69(brs,2H),3.99-4.03(m,1H),3.08(dd,J=16.8Hz,8.8Hz,1H),2.89(dd,J=16.8Hz,3.6Hz,1H),2.52-2.58(m,1H),1.90-1.98(m,1H),1.58-1.77(m,4H),1.23-1.33(m,3H)。
m/z=322[M+1]+。
(3R)-3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈盐酸盐
室温下,浓盐酸(12M,0.52mL,6.223mmol,1.0eq.)滴加入到(3R)-3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(2.0g,6.223mmol,1.0eq.)的乙腈溶液中。反应液60℃搅拌1小时直到溶液澄清,室温下搅拌冷却析出固体。减压浓缩,再加入二氯甲烷,浓缩两次,得深黄色固体粗品2.3g。向粗品中加入乙酸乙酯12mL,60℃加热下搅拌1小时,冷却至室温搅拌,浅黄色絮状固体过滤,乙酸乙酯洗涤,抽干,得浅黄色固体(2.2g,收率99.6%,纯度99.82%,ee值大于99.0%)。
实施例6(3S)-3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
对实施例1步骤H获得的3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈进行制备型HPLC分离(OJ-H柱,20%异丙醇/正己烷,柱温25℃,流速1.0ml/min,保留时间17.20min),得到(S)-构型化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.23(s,1H),8.78(s,1H),8.02(s,1H),7.32(dd,J=3.9Hz,2.4Hz,1H),6.68(dd,J=3.9Hz,2.4Hz,1H),5.69(brs,2H),3.98-4.03(m,1H),3.08(dd,J=16.8Hz,8.8Hz,1H),2.89(dd,J=17.2Hz,3.6Hz,1H),2.52-2.58(m,1H),1.90-1.95(m,1H),1.58-1.74(m,4H),1.22-1.33(m,3H)。
m/z=322[M+1]+。
实施例7 3-[3-乙基氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A:3-[3-乙基氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
室温下,碘乙烷(347mg,2.22mmol,2.0eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(500mg,1.11mmol,1.0eq.,由实施例1,步骤G制备)和碳酸钾(460mg,3.33mmol,3.0eq.)的DMF溶液中。反应液氮气保护下70℃搅拌过夜。加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-[3-乙基氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(116mg,22.6%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.77(s,1H),8.01(s,1H),7.32(d,J=3.6,1H),7.01-7.17(brs,1H),6.67(d,J=4.0,1H),5.65(s,2H),4.07-4.01(m,1H),3.55-3.51(m,2H),3.46-3.41(m,2H),3.10(dd,J=16.8Hz,J=8,1H),2.91(dd,J=17.2Hz,J=4,1H),2.62-2.60(m,1H),1.96-1.93(m,1H),1.74-1.55(m,7H),1.35-1.22(m,3H),0.91(t,J=8.0,2H),0.00(s,9H)。
m/z=480[M+1]+。
步骤B:3-[3-乙基氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
用3-[3-乙基氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例7化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.47(s,1H),8.76(s,1H),8.03(s,1H),7.29-7.30(m,1H),7.01-7.17(brs,1H),6.66-6.68(m,1H),4.03-4.08(m,1H),3.44(q,J=7.2Hz,2H),3.11(dd,J=16.8Hz,7.6Hz,1H),2.92(dd,J=16.8Hz,3.6Hz,1H),2.58-2.64(m,1H),1.91-1.99(m,1H),1.59-1.78(m,4H),1.34(t,J=7.2Hz,3H),1.27-1.32(m,3H)。
m/z=350[M+1]+。
实施例7A(R)-3-[3-乙基氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
对实施例7获得的3-[3-乙基氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈进行制备型HPLC分离(OD-H柱,5%无水乙醇/正己烷,柱温30℃,流速1.0mL/min,保留时间35.32min),得到(R)-构型化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.47(s,1H),8.77(s,1H),8.04(s,1H),7.29-7.30(m,1H),7.03-7.17(brs,1H),6.65-6.67(m,1H),4.04-4.08(m,1H),3.44(q,J=7.2Hz,2H),3.11(dd,J=16.8Hz,7.6Hz,1H),2.92(dd,J=16.8Hz,3.6Hz,1H),2.58-2.64(m,1H),1.91-1.98(m,1H),1.59-1.78(m,4H),1.34(t,J=7.2Hz,3H),1.27-1.32(m,3H)。
m/z=350[M+1]+。
实施例7B(S)-3-[3-乙基氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
对实施例7获得的3-[3-乙基氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈进行制备型HPLC分离(OD-H柱,5%无水乙醇/正己烷,柱温30℃,流速1.0ml/min,保留时间32.13min),得到(S)-构型化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.46(s,1H),8.77(s,1H),8.04(s,1H),7.29-7.30(m,1H),7.02-7.17(brs,1H),6.65-6.67(m,1H),4.03-4.08(m,1H),3.44(q,J=7.2Hz,2H),3.11(dd,J=16.8Hz,7.6Hz,1H),2.92(dd,J=16.8Hz,3.6Hz,1H),2.58-2.63(m,1H),1.91-1.99(m,1H),1.59-1.77(m,4H),1.34(t,J=7.2Hz,3H),1.27-1.32(m,3H)。
m/z=350[M+1]+。
实施例8 3-环戊基-3-[3-(二乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A:3-环戊基-3-[3-(二乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下,碘乙烷(347mg,2.22mmol,2.0eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(500mg,1.11mmol,1.0eq.,由实施例1,步骤G制备)和碳酸钾(460mg,3.33mmol,3.0eq.)的DMF溶液中。反应液氮气保护下70℃搅拌过夜。加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-[3-乙基氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(2mg,0.4%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.90(s,1H),8.01(s,1H),7.32(s,1H),7.14(s,1H),5.72(s,2H),4.13-4.09(m,1H),3.62(t,J=8.0,2H),3.25-3.18(m,4H),3.14(dd,J=16.8Hz,J=8.0Hz,1H),2.91(dd,J=16.8Hz,J=4.0Hz,1H),2.70-2.53(m,1H),2.05-1.95(m,1H),1.82-1.51(m,4H),1.43-1.31(m,3H),1.17-1.11(m,6H),1.04-0.90(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=508[M+1]+。
步骤B:3-环戊基-3-[3-(二乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用3-[3-(二乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例8化合物。
m/z=378[M+1]+。
实施例9 N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺
步骤A:N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺
零度下,将乙酰氯(17.4mg,0.211mmol,1.0eq.)滴加到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(100mg,0.221mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)的二氯甲烷溶液中。反应液室温搅拌2小时,反应完毕后,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到N-(1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺(90mg,83%收率)。
步骤B:N-(1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺
用N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例9化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.51-11.61(brs,1H),10.21-10.41(brs,1H),8.83(s,1H),8.20(s,1H),7.41(dd,J=3.2Hz,J=2.4Hz,1H),6.70(s,1H),4.27-4.39(m,1H),3.11(dd,J=16.8Hz,J=7.6Hz,1H),2.97-3.01(m,1H),2.43-2.71(m,4H),1.94-2.01(m,1H),1.56-1.79(m,4H),1.25-1.31(m,3H)。
m/z=364[M+1]+。
实施例9A N-[1-((R)-2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺
对实施例9获得的N-(1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺进行制备型HPLC分离(OJ-H柱,7%无水乙醇/正己烷,柱温35℃,流速1.0ml/min,保留时间60.6min),得到(R)-构型化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.52-11.61(brs,1H),10.22-10.41(brs,1H),8.83(s,1H),8.20(s,1H),7.41(dd,J=3.2Hz,J=2.4Hz,1H),6.70(s,1H),4.27-4.39(m,1H),3.11(dd,J=16.8Hz,J=7.6Hz,1H),2.97-3.02(m,1H),2.41-2.71(m,4H),1.93-2.01(m,1H),1.56-1.78(m,4H),1.24-1.31(m,3H)。
m/z=364[M+1]+。
实施例9B N-[1-((S)-2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺
对实施例9获得的N-(1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)乙酰胺进行制备型HPLC分离(OJ-H柱,7%无水乙醇/正己烷,柱温35℃,流速1.0ml/min,保留时间55.5min),得到(S)-构型化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.52-11.62(brs,1H),10.22-10.41(brs,1H),8.83(s,1H),8.20(s,1H),7.41(dd,J=3.2Hz,J=2.4Hz,1H),6.70(s,1H),4.27-4.40(m,1H),3.11(dd,J=16.8Hz,J=7.6Hz,1H),2.98-3.04(m,1H),2.41-2.72(m,4H),1.94-2.01(m,1H),1.55-1.79(m,4H),1.24-1.33(m,3H)。
m/z=364[M+1]+。
实施例10 N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲基磺酰胺
步骤A:N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲基磺酰胺
零度下,吡啶(30.0mg,0.379mmol,1.7eq.)滴加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(100mg,0.221mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)的二氯甲烷溶液中,紧随其后滴加入甲基磺酰氯(25.0mg,0.211mmol,1.0eq.)。反应液室温搅拌72小时,反应完毕后,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲基磺酰胺(85mg,73%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.20-10.70(brs,1H),8.78(s,1H),8.15(s,1H),7.40(s,1H),6.67(s,1H),5.65(s,2H),4.21-4.18(m,1H),3.53(t,J=8.0,2H),3.31(s,3H),3.16-3.10(m,1H),2.94(d,J=8.0Hz,1H),2.62-2.60(m,1H),2.03-1.92(m,1H),1.75-1.58(m,4H),1.32-1.23(m,3H),0.93-0.85(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=530[M+1]+。
步骤B:N-(1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)甲基磺酰胺
用N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲基磺酰胺代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例10化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ12.25(s,1H),10.80(s,1H),8.91(s,1H),8.72(s,1H),7.65(dd,J=3.2Hz,J=2.4Hz,1H),7.01(dd,J=3.6Hz,J=1.6Hz,1H),4.40-4.46(m,1H),3.32(s,3H),3.24(dd,J=17.6Hz,J=9.2Hz,1H),3.18(dd,J=17.6Hz,J=4.4Hz,1H),2.40-2.46(m,1H),1.77-1.86(m,1H),1.35-1.63(m,7H)。
m/z=400[M+1]+。
实施例11 3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A:3-环戊基-3-(3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下,4-(2-氯乙基)吗啉(46mg,0.243mmol,1.1eq.),碳酸钾(91mg,0.663mmol,3.0eq.)和碘化钾(4mg,0.023mmol,0.1eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(100mg,0.211mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)的乙腈溶液中。反应液90℃微波3个小时。加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(12mg,9.7%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.84(s,1H),8.06(s,1H),7.68-7.43(brs,1H),7.36(d,J=3.2Hz,1H),6.73(d,J=3.6Hz,1H),5.71(s,2H),4.12-4.06(m,1H),3.96-3.83(m,4H),3.76-3.65(m,2H),3.63(t,J=12.4Hz,2H),3.20-3.14(m,1H),2.98-2.92(m,3H),2.89-2.70(m,4H),2.68-2.62(m,1H),2.01-1.98(m,1H),1.80-1.63(m,4H),1.38-1.30(m,3H),0.99-0.91(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=565[M+1]+。
步骤B:3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基乙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例11化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.98(s,1H),8.78(s,1H),8.03(s,1H),7.46-7.58(brs,1H),7.34(d,J=2.0Hz,1H),6.64(d,J=3.2Hz,1H),4.03-4.08(m,1H),3.77-3.90(m,4H),3.56-3.70(m,2H),3.13(dd,J=16.8Hz,J=8.4Hz,1H),2.92(dd,J=16.8Hz,J=3.6Hz,1H),2.54-2.79(m,7H),1.92-1.99(m,1H),1.59-1.78(m,4H),1.28-1.32(m,3H)。
m/z=435[M+1]+。
实施例12 N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-2-吗啉基乙酰胺
步骤A:2-氯-N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]乙酰胺
冰浴搅拌下,2-氯乙酰氯(17mg,0.15mmol,1.1eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(60mg,0.13mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)和三乙胺(20mg,0.20mmol,1.5eq.)的干燥THF溶液中。反应液室温下搅拌15分钟,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,残留物直接用于下步反应。
1H NMR(CDCl3)δ12.78(1H,s),8.86(1H,s),8.25(1H,s),7.45(1H,d,J=3.6Hz),6.76(1H,d,J=3.6Hz),5.71(2H,s),4.30-4.39(3H,m),3.57(2H,t,J=8.4Hz),3.14(1H,dd,J=17.2Hz,7.2Hz),3.03(1H,dd,J=17.2Hz,3.6Hz),2.70-2.80(1H,m),1.99-2.06(1H,m),1.55-1.80(4H,m),1.34-1.38(3H,m),0.95(2H,t,J=8.4Hz),-0.02(9H,s)。
m/z=528[M+1]+。
步骤B:N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-2-吗啉基乙酰胺
上步所得粗品溶于DMF溶液(5mL)中,加入吗啉(13mg,0.15mmol,1.1eq.),碳酸钾(37mg,0.27mmol,2.2eq.)和碘化钠(20mg,0.13mmol,1.0eq.),混合物于100℃下搅拌过夜。冷却至室温,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(97mg),为黄色固体。
1H NMR(CDCl3)δ12.27(1H,s),8.97(1H,s),8.21(1H,s),7.41(1H,d,J=3.6Hz),6.73(1H,d,J=3.6Hz),5.68(2H,s),4.30-4.35(1H,m),3.84-3.89(4H,m),3.57(2H,t,J=8.4Hz),3.26(2H,s),3.10(1H,dd,J=17.3Hz,6.9Hz),3.02(1H,dd,J=17.2Hz,3.6Hz),2.72-2.77(1H,m),2.66-2.70(4H,m),1.97-2.04(1H,m),1.58-1.80(4H,m),1.30-1.34(3H,m),0.93(2H,t,J=8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z=579[M+1]+。
步骤C:N-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-2-吗啉基乙酰胺
上步所得化合物,参照实施例1中所述的步骤H,反应得到标题化合物(40mg,67%收率),为白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ12.27(1H,s),9.71(1H,s),8.97(1H,s),8.24(1H,s),7.41(1H,d,J=3.2Hz),6.74(1H,d,J=3.2Hz),4.33-4.38(1H,m),3.87-3.90(4H,m),3.28(2H,s),3.11(1H,dd,J=17.2Hz,6.8Hz),3.02(1H,dd,J=17.2Hz,4.0Hz),2.69-2.72(5H,m),1.95-2.06(1H,m),1.55-1.81(4H,m),1.28-1.34(3H,m)。
m/z=449[M+1]+。
实施例13 3-环戊基-3-[3-(3-吗啉基-3-氧代丙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A:3-环戊基-3-[3-(3-吗啉基-3-氧代丙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用侧链3-溴-N-丙酰吗啉代替4-(2-氯乙基)吗啉,参照实施例11中所述的步骤A制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.00(s,1H),7.65-7.58(brs,1H),7.36(d,J=3.6Hz,1H),6.60(d,J=4.0Hz,1H),5.65(s,2H),4.02-4.01(m,1H),3.82-3.73(m,2H),3.64-3.59(m,4H),3.55-3.15(m,6H),3.12-3.08(dd,J=16.8Hz,J=8.8Hz,1H),2.89-2.72(m,3H),2.62-2.52(m,1H),1.94-1.92(m,1H),1.74-1.57(m,4H),1.33-1.24(m,3H),0.93-0.88(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=593[M+1]+。
步骤B:3-环戊基-3-[3-(3-吗啉基-3-氧代丙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用3-环戊基-3-[3-(3-吗啉基-3-氧代丙基氨基)-4-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例13化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.59(s,1H),8.74(s,1H),8.14(s,1H),7.31(d,J=2.8Hz,1H),6.62(d,J=2.8Hz,1H),4.01-4.06(m,1H),3.75-3.80(m,2H),3.46-3.66(m,8H),3.12(dd,J=16.8Hz,J=8.8Hz,1H),2.82-2.91(m,2H),2.71-2.78(m,1H),2.51-2.57(m,1H),1.88-1.96(m,1H),1.54-1.75(m,4H),1.27-1.32(m,3H)。
m/z=463[M+1]+。
实施例14 3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A:乙基-2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸酯
用侧链溴乙酸乙酯代替4-(2-氯乙基)吗啉,参照实施例11中所述的步骤A来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.81(s,1H),8.01(s,1H),7.33(d,J=3.6Hz,1H),6.67(d,J=3.6Hz,1H),5.66(s,2H),4.27-4.19(m,4H),4.03-4.01(m,1H),3.53(t,J=8.4Hz,2H),3.10(dd,J=16.8Hz,J=8.4Hz,1H),2.90(dd,J=16.8Hz,J=4.0Hz,1H),2.60-2.60(m,1H),1.97-1.90(m,1H),1.72-1.57(m,5H),1.31-1.24(m,5H),0.93-0.89(t,J=8.4Hz,2H),0.00(s,9H)。
m/z=538[M+1]+。
步骤B:2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸
室温下,氢氧化锂一水合物(88mg,2.08mmol,5.0eq.)加入到乙基-2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸酯(223mg,0.415mmol,1.0eq.)的甲醇和水(甲醇/水=5/1)的溶液,搅拌过夜。反应完毕后,真空下移去溶剂,加水稀释,用2N的稀盐酸调节溶液pH值到1~2,过滤得2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸(170mg,81%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.80(s,1H),8.06(s,1H),7.37(d,J=3.2Hz,1H),6.68(d,J=3.2Hz,1H),5.67(s,2H),4.22(d,J=3.6Hz,2H),4.10-4.03(m,1H),3.53(t,J=8.0Hz,2H),3.06(dd,J=8.4Hz,J=4.0Hz,1H),2.91(dd,J=16.4Hz,J=2.8Hz,1H),2.56-2.54(m,1H),1.95-1.91(m,1H),1.72-1.23(m,4H),1.58-1.20(m,3H),0.94-0.89(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=510[M+1]+。
步骤C:3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下,吗啉(10.3mg,0.118mmol,1.2eq.)、HATU(27mg,0.07mmol,0.7eq.)和2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸(50mg,0.098mmol,1.0eq.)溶解在DMF中。反应液搅拌并降温至零度,加入DIEA(19mg,0.147mmol,1.5eq.)。反应液搅拌过夜,反应完毕,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(42mg,74%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.94(s,1H),8.08(s,1H),7.38(d,J=3.6Hz,1H),6.73(d,J=3.6Hz,1H),5.72(s,2H),4.30(s,2H),4.12-4.06(m,1H),3.93-3.70(m,6H),3.62-3.57(m,4H),3.14(dd,J=17.2Hz,J=8.0Hz,1H),2.96(dd,J=17.2Hz,J=7.6Hz,1H),2.63-2.61(m,1H),2.03-1.98(m,1H),1.82-1.63(m,4H),1.38-1.29(m,3H),0.97-0.94(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=579[M+1]+。
步骤D:3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
用3-环戊基-3-[3-(2-吗啉基-2-氧代乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例14化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.21(s,1H),8.80(s,1H),8.02(s,1H),7.27(d,J=3.2Hz,1H),6.60(d,J=3.2Hz,1H),4.25(s,2H),4.02-4.07(m,1H),3.64-3.80(m,6H),3.57-3.61(m,2H),3.09(dd,J=16.8Hz,J=8.0Hz,1H),2.91(dd,J=16.8Hz,J=4.0Hz,1H),2.52-2.63(m,1H),1.94-2.07(m,1H),1.55-1.81(m,4H),1.25-1.32(m,3H)。
m/z=449[M+1]+。
实施例15 4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-4-氧代丁酸乙酯
步骤A:4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-4-氧代丁酸乙酯
冰浴搅拌下,丁二酸单乙酯酰氯(109mg,0.664mmol,1.2eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(250mg,0.553mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)和N,N-二异丙基乙胺(86mg,0.664mmol,1.2eq.)的二氯甲烷(10mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时,补加N,N-二异丙基乙胺(0.2mL)和丁二酸单乙酯酰氯(0.1mL),反应过夜,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(237mg,74%收率)。
1H NMR(CDCl3)δ11.63-11.68(1H,brs),8.85(1H,s),8.18(1H,s),7.41(1H,d,J=3.6Hz),6.72(1H,d,J=3.6Hz),5.68(2H,s),4.22-4.36(1H,m),4.16(2H,q,J=7.2Hz),3.55(2H,t,J=8.4Hz),3.13(1H,dd,J=17.2Hz,7.6Hz),2.99(1H,dd,J=17.2Hz,3.6Hz),2.62-2.88(5H,m),1.93-2.01(1H,m),1.60-1.80(4H,m),1.28-1.34(3H,m),1.26(3H,t,J=7.2Hz),0.93(2H,t,J=8.4Hz),-0.04(9H,s)。
m/z=580[M+1]+。
步骤B:4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-4-氧代丁酸乙酯
上步所得化合物(237mg,0.409mmol,1eq.),溶于乙腈(4mL)和水(0.5mL),加入LiBF4(383mg,4.09mmol,10eq.),90℃搅拌过夜,冷却至室温,加入氨水溶液搅拌1小时,加入盐水和乙酸乙酯,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
1H NMR(CDCl3)δ11.65(1H,s),9.78(1H,s),8.80(1H,s),8.23(1H,s),7.38(1H,d,J=3.6Hz),6.68(1H,d,J=3.6Hz),4.29-4.36(1H,m),4.25(2H,q,J=7.2Hz),3.24(1H,dd,J=17.2Hz,8.0Hz),3.04(1H,dd,J=17.2Hz,3.6Hz),2.82-2.94(4H,m),2.67-2.76(1H,m),1.97-2.05(1H,m),1.57-1.83(4H,m),1.34(3H,t,J=7.2Hz),1.28-1.32(3H,m)。
m/z=450[M+1]+。
实施例16 3-环戊基-3-[3-(丁二酰亚胺-1-基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A:3-环戊基-3-[3-(丁二酰亚胺-1-基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(200mg,0.443mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)和丁二酸酐(88mg,0.879mmol,2.0eq.)溶于1,2-二氯乙烷(10mL)中,回流过夜。真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(103mg,44%收率)。
1H NMR(CDCl3)δ8.70(1H,s),8.31(1H,s),7.37(1H,d,J=4.0Hz),6.67(1H,d,J=4.0Hz),5.64(2H,s),4.26-4.32(1H,m),3.50(2H,t,J=8.4Hz),3.08(1H,dd,J=17.2Hz,6.8Hz),3.02(1H,dd,J=17.2Hz,4.8Hz),2.94(4H,s),2.62-2.70(1H,m),1.96-2.05(1H,m),1.59-1.77(4H,m),1.27-1.34(3H,m),0.90(2H,t,J=8.4Hz),-0.06(9H,s)。
m/z=534[M+1]+。
步骤B:3-环戊基-3-[3-(丁二酰亚胺-1-基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
上步所得化合物(103mg,0.193mmol,1eq.),溶于乙腈(4mL)和水(0.5mL),加入LiBF4(181mg,1.93mmol,10eq.),90℃搅拌过夜,冷却至室温,加入氨水溶液搅拌1小时,加入盐水和乙酸乙酯,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
1H NMR(CDCl3)δ9.41-9.46(1H,brs),8.69(1H,s),8.34(1H,s),7.32(1H,d,J=3.2Hz),6.63(1H,d,J=3.2Hz),4.30-4.35(1H,m),3.11(1H,dd,J=17.2Hz,7.2Hz),3.04(1H,dd,J=17.2Hz,4.4Hz),2.96(4H,s),2.61-2.69(1H,m),1.95-2.04(1H,m),1.56-1.78(4H,m),1.28-1.33(3H,m)。
m/z=404[M+1]+。
实施例17 3-[3-(3-吗啉-4-羰基)环丁胺-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑]-3-环戊基丙腈
步骤A:3-氧代环丁烷甲酸甲酯
向3-氧代环丁烷基羧酸(1g,8.77mmol)的甲醇溶液中,滴加0.2mL浓硫酸,75℃回流,待原料反应完,加碳酸氢钠淬灭反应,除去溶剂,萃取得3-氧代环丁烷甲酸甲酯(1.1g,99%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.22-3.34(m,3H),3.40-3.47(m,2H),3.78(s,3H)。
步骤B:3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]环丁烷羧酸甲酯
冰浴下,向3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(410.0mg,0.91mmol,由实施例1步骤G制备)的1,2-二氯乙烷溶液中加入3-氧代环丁烷甲酸甲酯(117.0mg,0.91mmol)、乙酸(54.6mg,0.91mmol)和氰基硼氢化钠(80.0mmg,1.27mmol),撤去冰浴常温搅拌过夜,待原料反应完,加入饱和氯化铵淬灭反应,水洗,乙酸乙酯萃取,得标题化合物(172mg,34%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(s,1H),8.00(s,1H),7.36(m,1H),6.93(brs,1H),6.75(s,1H),5.69(s,2H),4.91(d,1H),4.00-4.05(m,1H),3.70(s,3H),3.55(t,J=8.4Hz,2H),3.00-3.20(m,1H),1.80-2.95(m,8H),1.25-1.80(m,7H),0.91(t,J=8.0,2H),-0.05(s,9H)。
m/z=564[M+1]+。
步骤C:3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]环丁烷甲酸
在冰浴下,向3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]环丁烷羧酸甲酯(84mg,0.144mmol)的甲醇溶液中,滴加一水合氢氧化锂(30mmg,0.72mmol)水溶液,常温搅拌过夜,待原料反应完,除去溶剂,水洗,乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,柱层析得到目标产物(乙酸乙酯:石油醚=1:1,后用甲醇),(29mg,37%收率)。
步骤C:3-{3-[3-(吗啉-4-羰基)环丁胺]-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑}-3-环戊基丙腈
冰浴下,向3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]环丁烷甲酸(25mg,0.0455mmol)的DMF溶液中,依次加入吗啉(4.78mg,0.0545mmol)和HBTU(17.3mg,0.0455mmol),搅拌5min,再向溶液中滴加DIEA(11.8mg,0.091mmol),常温搅拌,TLC监测至原料反应完,加水淬灭反应,乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,将得到的粗品直接进行下一步。
步骤D:3-[3-(3-(吗啉-4-羰基)环丁胺)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑]-3-环戊基丙腈
将步骤C所得的粗品溶于二氯甲烷中,加入3mL三氟乙酸,常温搅拌过夜,除去溶剂,得黄色油状物质,将其溶于甲醇中,再加入两滴乙二胺,常温搅拌,TLC监测原料反应完,除去溶剂,水洗,乙酸乙酯萃取得目标产物(17mg,两步收率76%)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.53(brs,1H),8.76(s,1H),8.0(s,1H),7.35(brs,1H),7.30(s,1H),6.65(s,1H),4.24-4.34(m,1H),4.00-4.03(m,1H),3.50-3.65(m,6H),3.40-3.43(m,2H),3.05-3.12(m,1H),2.88-2.92(m,2H),2.37-2.72(m,5H),1.90-1.98(m,1H),1.10-1.80(m,7H)。
m/z=489[M+1]+。
实施例18 3-[3-溴-4-(5-溴-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A:3-[3-溴-4-(5-溴-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
室温下,溴化铜(198mg,0.886mmol,2.0eq.)加入到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(200mg,0.442mmol,1.0eq.,由实施例1,步骤G制备)的乙腈溶液中。反应液氮气保护下60℃搅拌半个小时。向反应液滴加亚硝酸叔丁酯(68mg,0.66mmol,1.5eq.),在60℃搅拌3个小时。加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-[3-溴-4-(5-溴-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(123mg,54%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.99(s,1H),7.86(s,1H),7.44(s,1H),5.77(s,2H),4.21-4.19(dd,J=2.4Hz,J=1.2Hz,1H),3.58(t,J=8.4Hz,2H),3.16-3.10(m,1H),2.95(dd,J=16.8Hz,J=4.0Hz,1H),2.63-2.56(m,1H),2.00-1.90(m,1H),1.71-1.56(m,4H),1.32-1.17(m,3H),0.96-0.86(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=595[M+1]+。
步骤B:3-[3-溴-4-(5-溴-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
用3-[3-溴-4-(5-溴-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例18化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.71-9.73(brs,1H),8.99(s,1H),7.89(s,1H),7.42(s,1H),4.18-4.31(m,1H),3.14(dd,J=17.2Hz,J=8.8Hz,1H),2.96(dd,J=17.2Hz,J=4.0Hz,1H),2.58-2.64(m,1H),1.90-2.01(m,1H),1.59-1.76(m,4H),1.25-1.32(m,3H)。
m/z=465[M+1]+。
实施例19 3-[3-溴-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A:3-[3-溴-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
冰浴搅拌下,3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(100mg,0.221mmol,1.0eq.,由实施例1步骤G制备)加入到2N稀盐酸溶液中,搅拌半个小时;向反应液快速加入大部分亚硝酸钠(61mg,0.884mmol,4.0eq.)水溶液,然后加入其余部分和溴化钠(23mg,0.33mmol,1.5eq.),反应液在零度下搅拌半个小时。加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-[3-溴-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(9mg,8%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.00(s,1H),8.10(s,1H),7.43(s,1H),6.82(s,1H),5.73(s,2H),4.30-4.18(m,1H),3.61(t,J=8.4Hz,2H),2.95(dd,J=17.2Hz,J=8.4Hz,1H),3.01(dd,J=16.8Hz,J=8.0Hz,1H),2.72-2.61(m,1H),2.05-1.99(m,1H),1.82-1.64(m,4H),1.47-1.18(m,3H),1.09-0.76(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=516[M+1]+。
步骤B:3-[3-溴-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
用3-[3-溴-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例19化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.01-10.08(brs,1H),8.95(s,1H),8.04(s,1H),3.38-7.40(m,1H),6.76-6.78(m,1H),4.19-4.25(m,1H),3.12(dd,J=17.2Hz,J=8.4Hz,1H),2.97(dd,J=17.2Hz,J=4.0Hz,1H),2.57-2.69(m,1H),1.93-2.07(m,1H),1.58-1.79(m,4H),1.28-1.32(m,3H)。
m/z=386[M+1]+。
实施例20(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-羟基-2-丁烯酰胺
步骤A:(E)-甲基-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酯
用侧链4-溴巴豆酸甲酯代替4-(2-氯乙基)吗啉,参照实施例11中所述的步骤A来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.77(s,1H),8.02(s,1H),7.47(t,J=5.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.16-7.10(m,1H),6.68(s,1H),6.07(d,J=15.6Hz,1H),5.66(s,2H),4.22(d,J=9.2Hz,2H),4.04-4.01(m,1H),3.72(s,3H),5.53(t,J=8.4Hz,2H),3.08(dd,J=16.8Hz,J=8.4Hz,1H),2.88(dd,J=13.2Hz,J=6.4Hz,1H),2.62-2.48(m,1H),1.97-1.92(m,1H),1.72-1.56(m,4H),1.33-1.21(m,3H),0.92-0.86(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=550[M+1]+。
步骤B:(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酸
室温下,氢氧化锂一水合物(91mg,2.0mmol,5.0eq.)加入到(E)-甲基-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酯(215mg,0.391mmol,1.0eq.)的四氢呋喃和水(四氢呋喃/水=5/1)的溶液,室温搅拌过夜。反应完毕后,真空下移去溶剂,加水稀释,用2N的稀盐酸调节溶液pH值到1~2,过滤得(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酸(91mg,44%收率)。
步骤C:(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)-2-丁烯酰胺
室温下,O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟基胺(40.0mg,0.34mmol,2.0eq.)、HATU(65mg,0.17mmol,1.0eq.)和(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酸(91mg,0.17mmol,1.0eq.)溶解在DMF中。反应液搅拌并降温至零度,加入DIEA(44mg,0.34mmol,2.0eq.)。反应液搅拌过夜,反应完毕,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(66mg,62%收率)。
m/z=635[M+1]+。
步骤D:(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-羟基-2-丁烯酰胺
用(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)-2-丁烯酰胺代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,并参照实施例1中所述的步骤H来制备实施例20化合物。
m/z=421[M+1]+。
实施例21 3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-羟基丙酰胺
步骤A:乙基-3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸酯
用侧链3-溴丙酸乙酯代替4-(2-氯乙基)吗啉,参照实施例11中所述的步骤A来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.00(s,1H),7.40(brs,1H),7.32(d,J=3.6Hz,1H),6.66(d,J=4.0Hz,1H),5.65(s,2H),4.19-4.14(m,2H),4.03-3.99(m,1H),3.72(d,J=6.8Hz,2H),3.52(d,J=8.0Hz,2H),3.11(dd,J=16.4Hz,J=8.0Hz,1H),2.92(dd,J=16.8Hz,J=3.6Hz,1H),2.75(t,J=6.4Hz,2H),2.64-2.53(m,1H),1.98-1.88(m,1H),1.67-1.57(m,5H),1.30-1.22(m,5H),0.91(d,J=8.0Hz,2H),-0.06(s,9H)。
m/z=552[M+1]+。
步骤B:3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸
用乙基-3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸酯代替乙基-2-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]乙酸酯,参照实施例14中所述的步骤B来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),8.04(s,1H),7.9-7.4(brs,1H),7.35(d,J=4.0Hz,1H),6.68(d,J=3.6Hz,1H),5.67(s,2H),4.08-4.01(m,1H),3.73(t,J=6.0Hz,2H),3.53(t,J=8.4Hz,2H),3.09(dd,J=17.2Hz,J=8.8Hz,1H),2.94-2.83(m,3H),2.64-2.56(m,1H),1.96-1.93(m,1H),1.74-1.59(m,4H),1.30-1.23(m,3H),0.91(t,J=8.4Hz,2H),-0.06(s,9H)。
m/z=524[M+1]+。
步骤C:N-(苄氧基)-3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酰胺
用3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸代替(E)-4-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-2-丁烯酸,用O-苄基羟胺代替O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟基胺,参照实施例20中所述的步骤C来制备该化合物。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.08(brs,1H),8.83(s,1H),8.09(s,1H),8.04(s,1H),7.52(brs,1H),7.42-7.30(m,5H),6.73(d,J=3.6Hz,1H),5.72(s,2H),4.92(s,2H),4.04-3.99(m,1H),3.78(d,J=4.8Hz,2H),3.60(t,J=8.4Hz,2H),3.03-2.95(m,2H),2.67-2.59(m,3H),1.99-1.96(m,1H),1.81-1.64(m,4H),1.50-1.28(m,3H),1.00-0.93(m,2H),0.00(s,9H)。
m/z=629[M+1]+。
步骤D:3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]-N-羟基丙酰胺
用N-(苄氧基)-3-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酰胺代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,参照实施例1中所述的步骤H脱除SEM,并经脱苄得到实施例21化合物。
m/z=409[M+1]+。
实施例22 3-[3-(2-氰基乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
步骤A:3-[1-(2-氰基-1-环丙基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酰胺
冰浴搅拌下,羰基二咪唑(1.5eq.)加入到3-[1-(2-氰基-1-环丙基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酸(1.0eq.,由实施例21步骤B制备)的DMF溶液中,0℃下搅拌0.5小时,随后升至室温搅拌2小时。将氨气导入反应液,鼓泡1小时。加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=523[M+1]+。
步骤B:3-[3-(2-氰基乙基氨基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
冰浴搅拌下,将3-[1-(2-氰基-1-环丙基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基氨基]丙酰胺(1.0eq.)溶于二氯甲烷,加入三乙胺(5eq.)和三氟乙酸酐(2eq.),反应液升至室温,搅拌过夜。加盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=505[M+1]+。
步骤C:3-[3-(2-氰基乙基氨基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈
上步所得化合物,溶于乙腈(4mL)和水(0.5mL),加入LiBF4(10eq.),90℃搅拌过夜,冷却至室温,加入氨水溶液搅拌1小时,加入盐水和乙酸乙酯,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=375[M+1]+。
实施例23 1-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)脲
步骤A:1-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)脲
冰浴搅拌下,氯甲酸三氯甲酯(0.6eq.)滴加到3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(1.0eq.,由实施例1步骤G制备)的二氯甲烷溶液中,然后加入三乙胺(1.2eq.)。反应液0℃下搅拌0.5小时,随后分别加入5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-胺(2eq.)和三乙胺(1.2eq.),搅拌3小时,加水淬灭,二氯甲烷萃取,合并的有机相分别用饱和氯化铵、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=577[M+1]+。
步骤B:1-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)脲
用1-[1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)脲代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,并参照实施例1中所述的步骤H脱SEM,得到实施例23化合物。
m/z=447[M+1]+。
实施例24 1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
步骤A:1H-吡唑-3-甲酸乙酯
1H-吡唑-3-甲酸(7.25g,64.7mmol)溶于100mL无水乙醇,加入0.7mL浓硫酸,反应液加热回流过夜。真空浓缩,残余物加入乙酸乙酯稀释,用饱和碳酸氢钠洗涤,乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,得1H-吡唑-3-甲酸乙酯(8.35g,92%收率),为灰白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.4(brs,1H),7.74(d,J=2.4Hz,1H),6.86(d,J=2.4Hz,1H),4.42(q,J=7.2Hz,2H),1.41(t,J=7.2Hz,3H)。
步骤B:4-碘-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
室温搅拌下,碘(15.6g,61.5mmol,1.03eq.)加入到1H-吡唑-3-甲酸乙酯(8.35g,59.6mmol,1.0eq.)的乙腈(150mL)溶液中,随后分批加入硝酸铈铵(32.7g,59.6mmol,1.0eq.),反应液室温搅拌过夜。然后,加入5%NaHSO3溶液淬灭,滤去不溶物,滤饼用水和乙酸乙酯洗涤。滤液用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用水和盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩得4-碘-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(15.0g,95%收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.4(brs,1H),7.89(s,1H),4.46(q,J=7.2Hz,2H),1.46(t,J=7.2Hz,3H)。
步骤C:4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯和4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
室温搅拌下,对甲氧基苄氯(3.09g,19.7mmol,1.25eq.)加入到4-碘-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(4.2g,15.8mmol,1.0eq.)和碳酸钾(4.37g,31.6mmol,2.0eq.)的乙腈溶液(45mL)中。反应液氮气保护下60℃搅拌过夜。冷却至室温,滤去不溶物,用乙酸乙酯洗涤滤饼,滤液真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(C1,1.94g,32%收率)和4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(C2,2.90g,47%收率)。
C1:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.61(s,1H),7.21(d,J=8.4Hz,2H),6.82(d,J=8.4Hz,2H),5.70(s,2H),4.37(q,J=7.2Hz,2H),3.77(s,3H),1.40(t,J=7.2Hz,3H)。
m/z=409[M+Na]+。
C2:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(s,1H),7.22(d,J=8.8Hz,2H),6.90(d,J=8.4Hz,2H),5.31(s,2H),4.44(q,J=7.2Hz,2H),3.81(s,3H),1.43(t,J=7.2Hz,3H)。
m/z=409[M+Na]+。
步骤D:1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯
氮气保护下,Pd(dppf)Cl2(146mg,0.2mmol,0.05eq.)加入到4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(1.54g,4.0mmol,1.0eq.),联硼酸频哪醇酯(1.12g,4.4mmol,1.1eq.)和醋酸钾(1.18g,12.0mmol,3.0eq.)的DMSO(30mL)溶液中,反应物氮气保护下80℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用水和盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩得1.8g 5-(乙氧羰基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基硼酸频哪醇酯粗品。
1.8g 5-(乙氧羰基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基硼酸频哪醇酯粗品(4.0mmol,1.0eq.)溶于50mL DMF,加入4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.25g,4.4mmol,1.1eq.),磷酸钾(1.7g,8.0mmol,2.0eq.)和Pd(PPh3)2Cl2(140mg,0.2mmol,0.05eq.)。反应物氮气保护下100℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用水和盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,硅胶柱层析分离得标题化合物(1.35g,67%收率),为浅褐色油状液体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(s,1H),7.92(s,1H),7.34(d,J=4.0Hz,1H),7.29(d,J=8.8Hz,2H),6.85(d,J=8.8Hz,2H),6.51(d,J=4.0Hz,1H),5.67(s,4H),4.13(q,J=7.2Hz,2H),3.78(s,3H),3.54(t,J=8.4Hz,2H),0.92(m,5H),-0.06(s,9H)。
m/z=508[M+1]+。
步骤E:1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸
室温搅拌下,氢氧化锂一水合物(84mg,2.0mmol,5.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(204mg,0.40mmol,1.0eq.)的甲醇(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。反应液室温下搅拌2小时,真空浓缩,加入乙酸乙酯和1N氢氧化钠水溶液,有机相用1N氢氧化钠萃取两次,合并的碱液加入1N盐酸调至酸性,酸液用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,得标题化合物(171mg,89%收率)。
1H NMR(CDCl3)δ8.80(1H,s),8.40(1H,s),7.58(1H,d,J=3.6Hz),7.43(2H,d,J=8.8Hz),6.99(1H,d,J=3.6Hz),6.84(2H,d,J=8.4Hz),6.02(2H,s),5.72(2H,s),3.77(3H,s),3.56(2H,t,J=8.4Hz),0.93(2H,t,J=8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z=480[M+1]+。
步骤F:1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
冰浴搅拌下,羰基二咪唑(150mg,0.923mmol,1.5eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸(295mg,0.615mmol,1.0eq.)的DMF溶液中,0℃下搅拌10分钟,随后升至室温搅拌1小时。将氨气导入反应液,鼓泡1小时,随后氮气保护下反应过夜。加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(200mg,68%收率)。
1H NMR(CDCl3)δ11.29(1H,s),8.83(1H,s),8.09(1H,s),7.44(1H,d,J=3.6Hz),7.38(2H,d,J=8.4Hz),6.86(2H,d,J=8.4Hz),6.79(1H,d,J=3.6Hz),5.91(2H,s),5.72(1H,s),5.69(2H,s),3.78(3H,s),3.56(2H,t,J=8.4Hz),0.93(2H,t,J=8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z=479[M+1]+。
步骤G:4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
冰浴搅拌下,硝酸铈铵(687mg,1.25mmol,3.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(200mg,0.418mmol,1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌1.5小时。加盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(79mg,53%收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.94(brs,1H),11.40(brs,1H),8.87(s,1H),8.41(s,1H),7.50(d,J=3.6Hz,1H),6.93(d,J=3.6Hz,1H),6.00(brs,1H),5.71(s,2H),3.57(t,J=8.2Hz,2H),0.94(t,J=8.2Hz,2H),-0.04(s,9H)。
m/z=359[M+1]+。
步骤H:1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
室温下,1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(70mg,0.46mmol,2.1eq.)加入到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(79mg,0.22mmol,1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(67mg,0.55mmol,2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌3天,加入盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(76mg,72%收率)。
1H NMR(CDCl3)δ10.93(1H,s),8.90(1H,s),8.29(1H,s),7.47(1H,d,J=3.6Hz),6.78(1H,d,J=3.6Hz),5.93(1H,s),5.71(2H,s),4.40-4.45(1H,m),3.58(2H,t,J=8.4Hz),3.17(1H,dd,J=17.2Hz,7.2Hz),3.06(1H,dd,J=17.2Hz,3.6Hz),2.75-2.82(1H,m),2.01-2.06(1H,m),1.54-1.82(4H,m),1.32-1.36(3H,m),0.95(2H,t,J=8.4Hz),-0.02(9H,s)。
m/z=480[M+1]+。
步骤I:1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
用1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(20mg,0.042mmol)代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,参照实施例1中所述的步骤H脱除SEM,得到实施例24化合物(14mg,96%收率),为白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ11.21(2H,s),8.89(1H,s),8.34(1H,s),7.45(1H,d,J=3.6Hz),7.12(1H,s),6.73(1H,d,J=3.6Hz),4.43-4.47(1H,m),3.17(1H,dd,J=17.2Hz,7.2Hz),3.05(1H,dd,J=17.2Hz,4.0Hz),2.72-2.79(1H,m),1.95-2.04(1H,m),1.56-1.80(4H,m),1.29-1.34(3H,m)。
m/z=350[M+1]+。
实施例25 1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-N-甲基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
参照实施例24所述的方法合成实施例25化合物,不同之处在于在步骤F中用甲胺溶液代替氨水溶液。
1H NMR(CDCl3)δ10.67(1H,s),9.89(1H,s),8.90(1H,s),8.27(1H,s),7.44(1H,d,J=3.6Hz),6.75(1H,d,J=3.6Hz),4.42-4.47(1H,m),3.15(1H,dd,J=17.2Hz,7.2Hz),3.01-3.08(4H,m),2.69-2.81(1H,m),1.99-2.06(1H,m),1.57-1.81(4H,m),1.32-1.35(3H,m)。
m/z=364[M+1]+。
实施例26 N-(2-氨基乙基)-1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
步骤A:1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
氮气保护下,Pd(dppf)Cl2(95mg,0.13mmol,0.05eq.)加入到4-碘-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1.0g,2.6mmol,1.0eq.,由实施例26步骤C制备),联硼酸频哪醇酯(0.7g,2.8mmol,1.1eq.)和醋酸钾(0.76g,7.8mmol,3.0eq.)的DMSO(30mL)溶液中,反应物氮气保护下80℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用水和盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩得1.2g 3-(乙氧羰基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基硼酸频哪醇酯粗品。
1.2g 3-(乙氧羰基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基硼酸频哪醇酯粗品(2.6mmol,1.0eq.)溶于50mL DMF,加入4-氯-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(0.8g,2.8mmol,1.1eq.),磷酸钾(1.1g,5.2mmol,2.0eq.)和Pd(PPh3)2Cl2(91mg,0.13mmol,0.05eq.)。反应物氮气保护下100℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用水和盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,硅胶柱层析分离得标题化合物(960mg,73%收率),为浅褐色油状液体。
1H NMR(CDCl3)δ8.86(1H,s),8.02(1H,s),7.32(1H,d,J=3.6Hz),7.30(2H,d,J=8.4Hz),6.90(2H,d,J=8.4Hz),6.39(1H,d),5.65(2H,s),5.39(2H,s),4.28(2H,q,J=7.2Hz),3.81(3H,s),3.54(2H,t,J=8.4Hz),1.15(3H,t,J=7.2Hz),0.92(2H,t,J=8.4Hz),-0.06(9H,s)。
m/z=508[M+1]+。
步骤B:4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
冰浴搅拌下,硝酸铈铵(1.1g,2.01mmol,3.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(336mg,0.66mmol,1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌1.5小时。加盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(175mg,63%收率)。
1H NMR(CDCl3)δ9.04(1H,s),8.26(1H,s),7.55(1H,d,J=3.6Hz),6.73(1H,d,J=3.6Hz),5.73(2H,s),4.34(2H,q,J=7.2Hz),3.60(2H,t,J=8.4Hz),1.24(3H,t,J=7.2Hz),0.95(2H,t,J=8.4Hz),-0.03(9H,s)。
m/z=388[M+1]+。
步骤C:1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
室温下,1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(142mg,0.94mmol,2.1eq.)加入到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(173mg,0.446mmol,1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(135mg,1.11mmol,2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈(10mL)溶液中。反应液室温下搅拌过夜,加热到60℃反应5小时。冷却至室温,加入盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(79mg,35%收率),为灰白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ8.88(1H,s),7.98(1H,s),7.32(1H,d,J=3.6Hz),6.46(1H,d,J=3.6Hz),5.65(2H,s),4.27-4.35(1H,m),4.23(2H,q,J=7.2Hz),3.53(2H,t,J=8.4Hz),3.11(1H,dd,J=17.2Hz,7.6Hz),2.97(1H,dd,J=17.2Hz,4.0Hz),2.58-2.69(1H,m),1.88-1.99(1H,m),1.51-1.74(4H,m),1.22-1.30(3H,m),1.08(3H,t,J=7.2Hz),0.90(2H,t,J=8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z=509[M+1]+。
步骤D:N-(2-氨基乙基)-1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
冰浴搅拌下,三氟乙酸(0.5mL)加入到1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(79mg,0.16mmol)的二氯甲烷溶液中。反应液氮气保护下室温搅拌过夜。真空浓缩,残余物用二氯甲烷溶解后,真空再次浓缩两遍。浓缩物溶于乙醇(5mL)中,加入乙二胺(0.5mL)室温下搅拌0.5小时,60℃下真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到实施例26化合物(57mg,91%收率),为米黄色固体。
1H NMR(CDCl3)δ11.27(1H,s),10.20(1H,brs),8.79(1H,s),8.23(1H,s),7.32(1H,d,J=3.6Hz),6.64(1H,d,J=3.6Hz),4.36-4.42(1H,m),3.57-3.65(2H,m),3.17(1H,dd,J=17.2Hz,7.2Hz),3.01-3.06(3H,m),2.69-2.74(1H,m),1.95-2.02(1H,m),1.61-1.78(4H,m),1.28-1.33(3H,m)。
m/z=393[M+1]+。
实施例27 1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲腈
步骤A:1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲腈
冰浴搅拌下,将1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(50mg,0.10mmol,1.0eq.,由实施例24步骤H制备)溶于二氯甲烷(5mL),加入三乙胺(95mg,0.94mmol,9eq.)和三氟乙酸酐(88mg,0.42mmol,4eq.),反应液升至室温,搅拌过夜。加盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,得到64mg标题化合物粗品。
1H NMR(CDCl3)δ8.98(1H,s),8.25(1H,s),7.45(1H,d,J=3.6Hz),6.81(1H,d,J=3.6Hz),5.70(2H,s),4.33-4.37(1H,m),3.57(2H,t,J=8.4Hz),3.11(1H,dd,J=17.2Hz,8.0Hz),2.98(1H,dd,J=17.2Hz,4.0Hz),2.60-2.63(1H,m),1.96-2.00(1H,m),1.54-1.71(4H,m),1.23-1.25(3H,m),0.93(2H,t,J=8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z=462[M+1]+。
步骤B:1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲腈
用64mg 1-(2-氰基-1-环戊基乙基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-甲腈粗品代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,参照实施例1中所述的步骤H脱除SEM,得到实施例27化合物(30mg,87%收率),为白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ9.40(1H,s),8.97(1H,s),8.25(1H,s),7.43(1H,dd,J=3.6Hz,2.4Hz),6.80(1H,dd,J=3.6Hz,2.0Hz),4.31-4.37(1H,m),3.15(1H,dd,J=17.2Hz,8.4Hz),2.99(1H,dd,J=17.2Hz,3.6Hz),2.60-2.66(1H,m),1.98-2.05(1H,m),1.59-1.78(4H,m),1.29-1.34(3H,m)。
m/z=332[M+1]+。
实施例28 3-环戊基-3-[3-(羟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A:[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]甲醇
冰浴氮气保护下,氢化铝锂(50mg,1.32mmol,2.2eq.)分批加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(300mg,0.60mmol,1.0eq.,由实施例24步骤D制备)的干燥四氢呋喃溶液(5mL)中。反应液室温搅拌3小时,冰浴冷却下,先后加入0.05mL水,0.05mL 1M NaOH溶液和0.15mL水。硅藻土滤去沉淀,滤饼用乙酸乙酯洗涤,滤液加入饱和盐水,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩得到标题化合物(250mg,90%收率),为黄色油状液体。
1H NMR(CDCl3)δ8.87(1H,s),8.18(1H,s),7.47(1H,d,J=3.6Hz),7.20(2H,d,J=8.4Hz),6.91(1H,d,J=3.6Hz),6.87(2H,d,J=8.4Hz),5.70(2H,s),5.47(2H,s),4.74-4.88(2H,brs),3.78(3H,s),3.55(2H,t,J=8.4Hz),0.93(2H,t,J=8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z=466[M+1]+。
步骤B:[4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲醇
冰浴搅拌下,硝酸铈铵(883mg,1.61mmol,3.0eq.)加入到[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]甲醇(250mg,0.537mmol,1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌7小时。加盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(41mg,22%收率)。
m/z=346[M+1]+。
步骤C:3-环戊基-3-[3-(羟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下,1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(35mg,0.23mmol,2.0eq.)加入到[4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲醇(40mg,0.12mmol,1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(35mg,0.29mmol,2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌5小时,升温至60℃搅拌过夜。冷却至室温后,加入盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(13mg,24%收率)。
1H NMR(CDCl3)δ8.86(1H,s),8.24(1H,s),7.42(1H,d,J=3.6Hz),7.10-7.19(1H,brs),6.77(1H,d,J=3.6Hz),5.69(2H,s),4.80(2H,s),4.20-4.28(1H,m),3.55(2H,t,J=8.4Hz),3.11(1H,dd,J=17.2Hz,8.0Hz),2.95(1H,dd,J=17.2Hz,4.0Hz),2.61-2.69(1H,m),1.93-2.02(1H,m),1.58-1.79(4H,m),1.28-1.33(3H,m),0.93(2H,t,J=8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z=467[M+1]+。
步骤D:3-环戊基-3-[3-(羟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
3-环戊基-3-[3-(羟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(13mg,0.028mmol),溶于乙腈(1mL)和水(1mL),加入LiBF4(54mg,0.58mmol),90℃搅拌过夜,冷却至室温,加入氨水溶液搅拌2小时,加入盐水和乙酸乙酯,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物(6mg,64%收率),为灰白色固体。
1H NMR(CDCl3)δ10.26(1H,s),8.85(1H,s),8.25(1H,s),7.41(1H,d,J=3.2Hz),6.75(1H,d,J=3.2Hz),4.81(2H,s),4.21-4.27(1H,m),3.11(1H,dd,J=17.2Hz,8.0Hz),2.96(1H,dd,J=17.2Hz,3.6Hz),2.61-2.67(1H,m),1.95-2.04(1H,m),1.57-1.78(4H,m),1.28-1.33(3H,m)。
m/z=337[M+1]+。
实施例29 3-环戊基-3-[3-(氟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A:4-[5-(氟甲基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下,二乙氨基三氟化硫(54mg,0.34mmol,2.0eq.)加入到[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]甲醇(78mg,0.17mmol,1.0eq.,由实施例28步骤A制备)的干燥四氢呋喃(5mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时,加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
1H NMR(CDCl3):δ8.86(1H,s),8.15(1H,s),7.39(1H,d,J=3.6Hz),7.25(2H,d,J=8.4Hz),6.88(2H,d,J=8.4Hz),6.81(1H,d,J=3.6Hz),6.02(2H,d,J=48.4Hz),5.68(2H,s),5.48(2H,s),3.80(3H,s),3.55(2H,t,J=8.4Hz),0.92(2H,t,J=8.4Hz),-0.05(9H,s)。
m/z=468[M+1]+。
步骤B:4-[3-(氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下,硝酸铈铵(3.0eq.)加入到4-[5-(氟甲基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌7小时。加盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=348[M+1]+。
步骤C:3-环戊基-3-[3-(氟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下,1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(2.0eq.)加入到4-[3-(氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌5小时,升温至60℃搅拌过夜。冷却至室温后,加入盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=469[M+1]+。
步骤D:3-环戊基-3-[3-(氟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
3-环戊基-3-[3-(氟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(1.0eq.),溶于乙腈(1mL)和水(1mL),加入LiBF4(10.0eq.),90℃搅拌过夜,冷却至室温,加入氨水溶液搅拌2小时,加入盐水和乙酸乙酯,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到实施例29化合物。
m/z=339[M+1]+。
实施例30 3-环戊基-3-[3-(二氟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
步骤A:1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲醛
-78℃氮气保护下,二异丁基氢化铝(1.2eq.,1M的甲苯溶液)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(1.0eq.,由实施例26步骤D制备)的干燥甲苯溶液(5mL)中。反应液-78℃下搅拌1小时,加入饱和酒石酸钾钠溶液淬灭,搅拌15分钟,用乙醚萃取,合并的有机相用水和盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=464[M+1]+。
步骤B:4-[5-(二氟甲基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下,DAST试剂(二乙氨基三氟化硫,4.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲醛(1.0eq.)的干燥四氢呋喃(5mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时,加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=486[M+1]+。
步骤C:4-[3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶
冰浴搅拌下,硝酸铈铵(3.0eq.)加入到4-[5-(二氟甲基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌7小时。加盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=366[M+1]+。
步骤D:3-环戊基-3-[3-(二氟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
室温下,1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(2.0eq.)加入到4-[3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌5小时,升温至60℃搅拌过夜。冷却至室温后,加入盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=487[M+1]+。
步骤E:3-环戊基-3-[3-(二氟甲基)-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
3-环戊基-3-[3-(二氟甲基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(1.0eq.),溶于乙腈(1mL)和水(1mL),加入LiBF4(10.0eq.),90℃搅拌过夜,冷却至室温,加入氨水溶液搅拌2小时,加入盐水和乙酸乙酯,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到实施例30化合物。
m/z=357[M+1]+。
实施例31 3-环戊基-3-{3-[(甲氨基)甲基]-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基}丙腈
步骤A:1-[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]-N-甲基甲胺
室温下,氰基硼氢化钠(2.0eq.)加入到1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-甲醛(1.0eq.,由实施例30步骤A制备)、乙酸(1eq.)和乙醛(40%,1.0eq.)的1,2-二氯乙烷溶液中。撤去冰浴室温搅拌过夜,加入饱和氯化铵淬灭反应。用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=479[M+1]+。
步骤B:N-甲基-1-[4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲胺
冰浴搅拌下,硝酸铈铵(3.0eq.)加入到1-[1-(4-甲氧苄基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-5-基]-N-甲基甲胺(1.0eq.)的乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)的混合溶剂中。反应液0℃下搅拌7小时。加盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=359[M+1]+。
步骤C:3-环戊基-3-{3-[(甲氨基)甲基]-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基}丙腈
室温下,1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(2.0eq.)加入到N-甲基-1-[4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-3-基]甲胺(1.0eq.)和3-环戊基丙烯腈(2.5eq.,由实施例1步骤A制备)的乙腈溶液中。反应液室温下搅拌5小时,升温至60℃搅拌过夜。冷却至室温后,加入盐水和乙酸乙酯稀释,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=480[M+1]+。
步骤D:3-环戊基-3-{3-[(甲氨基)甲基]-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基}丙腈
3-环戊基-3-{3-[(甲氨基)甲基]-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基}丙腈(1.0eq.),溶于乙腈(1mL)和水(1mL),加入LiBF4(1.0eq.),90℃搅拌过夜,冷却至室温,加入氨水溶液搅拌2小时,加入盐水和乙酸乙酯,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到实施例31化合物。
m/z=350[M+1]+。
实施例32 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3-羟基环戊基)丙腈
步骤A:3-羟基环戊烷羧酸
冰浴下,向3-羰基环戊烷羧酸(3.7g,28.9mmol)的甲醇溶液中分批加入硼氢化钠(1.64g,43.2mmol),加完常温搅拌,待反应完毕,向反应液中加入1M盐酸溶液,淬灭反应,除去溶剂,得粗品直接进行下一步。
步骤B:3-羟基环戊烷甲酸乙酯
向步骤A中所得粗品的乙醇溶液中,加入1.5mL浓硫酸,90℃反应过夜。待反应完,加入饱和碳酸氢钠淬灭反应,除去乙醇,浓缩物加入水,乙酸乙酯萃取,柱层析(乙酸乙酯/石油醚=1/5),得到消旋的3-羟基环戊烷甲酸乙酯(2.27g,50%收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.30-4.34(m,1H),4.10-4.18(m,2H),2.82-2.90(m,1H),1.60-2.20(m,7H),1.20-1.29(m,3H)。
步骤C:3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲酸乙酯
向1H-咪唑(1.96g,28.73mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(2.17g,14.37mmol)的DMF溶液中,加入3-羟基环戊烷甲酸乙酯(2.27g,14.37mmol)。混合物搅拌过夜,待原料反应完,用正己烷萃取反应液,萃取物用水洗三次,经硫酸钠干燥,除去溶剂得外消旋的3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲酸乙酯(3.92g,100%)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.10-4.19(m,1H),4.05-4.09(m,2H),2.64-2.68(m,1H),2.00-2.07(m,2H),1.62-1.86(m,4H),1.19-1.23(m,3H),0.82-0.87(m,10H),-0.02-0.06(m,6H)。
步骤D:3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲醛
在-78℃下,向外消旋的3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲酸乙酯(3.92g)的正己烷溶液中,滴加1.2M二异丁基氢化铝的甲苯溶液,反应一小时,待反应完,加入甲醇淬灭反应。饱和碳酸氢钠洗,硫酸钠干燥。柱层析(乙酸乙酯/石油醚=1:30),得目标产物(2.34g,65%产率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.64(s,1H),4.29-4.31(m,1H),2.64-2.68(m,1H),1.56-2.13(m,6H),0.82-0.87(m,10H),0.00-0.15(m,6H)。
步骤E:3-[3-(叔丁基二甲硅烷氧基)环戊烷基]丙烯腈
在冰浴下,向叔丁醇钾(246.8mg,2.2mmol)的四氢呋喃溶液中,加入氰甲基磷酸二乙酯(426.0mg,2.4mmol),撤去冰浴,常温搅拌15min,再重新冷却至0℃,向溶液中逐滴加入3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲醛(458.0mg,2.0mmol),常温反应1h左右,反应完全,柱层析(乙酸乙酯/石油醚=1/60),得到目标产物(435mg,87%产率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.50-6.80(m,1H),5.16-5.29(m,1H),4.27-4.33(m,1H),2.64-2.68(m,1H),1.40-2.13(m,6H),0.85-0.89(m,10H),0.00-0.07(m,6H)。
步骤F:3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3-羟基环戊基)丙腈
向3-[3-(叔丁基二甲硅烷氧基)环戊烷基]丙烯腈的乙腈溶液中加入4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑(由实施例1中步骤F制备)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯,混合物在室温下搅拌3天。原料反应完之后,浓缩,柱层析(乙酸乙酯/正己烷=1/15),然后用含20%三氟乙酸的二氯甲烷处理3h,蒸发并用过量的乙二胺的甲醇溶液处理过夜。再用乙醇/水/浓盐酸(10:4:3体积比)搅拌3h来除去剩余未除尽的TBS基团。柱层析硅胶柱分离得实施例32化合物。
m/z=338[M+1]+。
实施例33 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3-氟环戊基)丙腈
步骤A:3-氟环戊烷甲酸乙酯
冰浴搅拌下,二乙氨基三氟化硫(2.0eq.)加入到3-羟基环戊烷甲酸乙酯(1.0eq.,由实施例32步骤B制备)的干燥四氢呋喃(5mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时,加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
步骤B:3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3-氟环戊基)丙腈
用3-氟环戊烷甲酸乙酯代替3-叔丁基二甲硅烷氧基环戊烷甲酸乙酯,并参照实施例32步骤D-F的方法制备实施例33化合物。
m/z=340[M+1]+。
实施例34 3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3,3-二氟环戊基)丙腈
步骤A:3,3-二氟环戊烷甲酸乙酯
冰浴搅拌下,二乙氨基三氟化硫(4.0eq.)加入到3-羰基环戊烷甲酸乙酯(1.0eq.)的干燥四氢呋喃(5mL)溶液中。反应液室温下搅拌3小时,加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
步骤B:3,3-二氟环戊烷甲醛
-78℃氮气保护下,二异丁基氢化铝(1.2eq.,1M的甲苯溶液)加入到3,3-二氟环戊烷甲酸乙酯(1.0eq.)的干燥甲苯溶液(5mL)中。反应液-78℃下搅拌1小时,加入饱和酒石酸钾钠溶液淬灭,搅拌15分钟,用乙醚萃取,合并的有机相用水和盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
步骤C:3-(3,3-二氟环戊基)丙烯腈
冰浴搅拌下,在盛有1.0M叔丁醇钾(1.2eq.)的新蒸四氢呋喃溶液中,滴加氰基甲基膦酸二乙酯(1.2eq.)的四氢呋喃溶液。移去冰浴,反应物室温搅拌0.5小时,再在冰浴冷却下滴加3,3-二氟环戊烷甲醛(1.0eq.)。加毕,反应物室温下搅拌过夜,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取两次,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到3-(3,3-二氟环戊基)丙烯腈。
步骤D:3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3,3-二氟环戊基)丙腈
室温搅拌下,3-(3,3-二氟环戊基)丙烯腈(2.52eq.)加入到4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-氨基-1H-吡唑(1.0eq.,由实施例1中步骤F制备)的乙腈溶液中,随后加入DBU(2.1eq.)。反应液氮气保护下70℃搅拌过夜。冷却至室温,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,柱层析硅胶柱分离得到标题化合物。
m/z=488[M+1]+。
步骤E:3-[3-氨基-4-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3,3-二氟环戊基)丙腈
用3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(3,3-二氟环戊基)丙腈代替3-[3-氨基-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈,参照实施例1中所述的步骤H脱去SEM,得到实施例34化合物。
m/z=358[M+1]+。
生物活性实验
1.化合物酶学活性(IC50)检测
采取匀相时间分辨荧光(HTRF)方法建立了JAK2(野生型和V617F突变型)的激酶活性检测平台,进行化合物活性的测定。将化合物从1mM开始用100%DMSO进行3倍的梯度稀释(共11个浓度),每个浓度取4μL加入到96μL的反应缓冲液中(50mM HEPES,pH7.4,10mMMgCl
2,1mM EGTA,0.01%Tween-20,0.005%BAS,2mM DTT)混匀,然后取2.5μL加入到384孔板(OptiPlate-384,购买于PerkinElmer),然后加入5μL的JAK2激酶(购买于Carna),离心混匀,再加入2.5μL的ATP(终浓度为相应的K
m值)与TK peptide(
KinEASE
TM-TK,购买于Cisbio)混合物启动反应(总反应体积为10μL)。将384孔板放于孵育箱中23℃反应120分钟,然后加入5μL的Eu3+cryptate-labled anti-phosphotyrosine antibody(购买于Cisbio),5μL的Streptavidin-XL-665(
KinEASE
TM-TK,购买于Cisbio)停止反应。在孵育箱中孵育1小时后,在Envision(购买于PerkinElmer)上读取荧光值(320nm激发,检测665nm与620nm的发射光,二者比值为酶活性)。每个化合物分别在11个浓度下测定酶的活性,使用GraFit6.0软件(Erithacus Software)计算数据,得到该化合物的IC
50值。
2.化合物细胞增殖活性(IC50)检测
人白血病细胞系HEL(购买于北京翠竹生物科技有限责任公司)在孵箱(37℃,5%CO
2)中用1640培养基加10%FBS(胎牛血清)和1%P/S(青霉素/链霉素)进行培养。在化合物的检测中,将HEL细胞以每孔3000个/195μL的浓度铺于96孔板(Corning)中,化合物从10mM开始3倍梯度稀释11个浓度,每个浓度取4μL加入到96μL的1640培养基中稀释成25×化合物,然后取5μL加入到195μL的细胞培养液中(DMSO终浓度为0.1%,v/v),处理72小时后加入35μL的
(购买于Promega),按照说明书的操作流程在Flex Station3(Molecular Devices)上测定荧光信号,使用GraphPad Prism5.0计算化合物对细胞增殖抑制的IC
50值。
根据本文所述的生物学方法对上述制备的所选化合物进行分析,其结果如下:
1.化合物对JAK2激酶野生型(WT)和突变型(V617F)的抑制活性(IC50)
2.部分化合物对人淋巴瘤细胞系HEL(JAK2V617F)的增殖抑制活性(IC50)
由表中数据可见,本申请实施例化合物的酶学和细胞学抑制活性与Ruxolitinib相当。
3.在小鼠皮下异种移植瘤模型中有效性的测定
SPF级Balb/c裸鼠,雌性,5-6周龄。将无血清培养基混悬的Ba/F3-JAK2V617F细胞悬液0.1mL(含1×107cells,50%MatriGel)皮下注射于每只小鼠右侧面。待平均肿瘤体积达到约500mm3时,处死荷瘤鼠,无菌摘取肿瘤组织,剪成小块,植入Balb/c裸鼠左右两侧皮下,待平均肿瘤体积达到约100mm3时,将各鼠按流水号标记,分别测量其肿瘤大小及体重,按肿瘤体积从小到大随机分组,并适当调整使各组动物的平均体重亦处于同一水平。5组分别为阴性对照组、阳性对照组、低、中及高剂量组,每组5只小鼠,分组当天开始给药,每天给药2次,连续给药14天,期间每周测量肿瘤体积及体重2次。实验结束时处死小鼠,分离脾脏并称重。
试验过程中测量肿瘤最长径(L)和垂直方向的最大横径(W),计算肿瘤体积(V),V(mm3)=L×W2/2。肿瘤生长抑制率TGI(%)=100%×(1-(Tt-T0)/(Vt-V0)),Tt为治疗组每次测量的平均肿瘤体积,T0治疗组分组时的平均肿瘤体积,Vt为对照组每次测量的平均肿瘤体积,V0为对照组分组时的平均肿瘤体积。
结果如下表所示:
由表中数据可见,在Ba/F3-JAK2V617F荷瘤小鼠模型中,测定了实施例5化合物的盐酸盐在动物体内的肿瘤抑制效果,发现其对Ba/F3-JAK2V617F肿瘤生长呈现剂量依赖性的抑制作用,抑瘤效果非常显著。口服每天两次给药实施例5化合物的盐酸盐(100mg/kg)14天之后,对肿瘤生长的抑制率(TGI)达到85.8%,而同等条件下的阳性对照品Ruxolitinib(100mg/kg)对肿瘤生长的抑制率(TGI)仅为64.5%。50mg/kg的实施例5化合物的盐酸盐肿瘤抑制效果也很明显,TGI达到68.4%,与100mg/kg的阳性对照品Ruxolitinib的肿瘤抑制效果相当,说明实施例5化合物的盐酸盐具有非常显著的肿瘤抑制作用且明显优于Ruxolitinib。
药代动力学实验
成年雄性/雌性SD大鼠中药代动力学的测定
雄性/雌性SD大鼠来源于北京维通利华实验动物技术有限公司,Ruxolitinib磷酸盐自制,将大鼠分组,每组3只,分别口服单次灌胃给予待测样品混悬液(5mg/kg或15mg/kg)。动物在实验前禁食过夜,禁食时间从给药前10小时至给药后4小时。给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、和24小时采血。使用小动物麻醉机经异氟烷麻醉后通过眼底静脉丛采取0.3mL全血,放于肝素抗凝管中,样品于4℃、4000rpm离心5min,血浆转移至离心管中,并放于-80℃保存直到分析。血浆中样品使用蛋白质沉淀法萃取,萃取液通过LC/MS/MS分析。
附注:b.数据来自于美国食品药品监督管理局FDA公开的药理学综述。
附注:a.自测数据;b.数据来自于美国食品药品监督管理局FDA公开的药理学综述。
由PK数据可知,同等剂量下,实施例1化合物和实施例7化合物的AUC和Cmax远高于Ruxolitinib,药代动力学性质显著优于Ruxolitinib。
健康成年雌性SD大鼠来源于北京维通利华实验动物技术有限公司,将大鼠分2组,每组3只,分别口服单次灌胃给予待测样品混悬液(30mg/kg)。动物在实验前禁食过夜,禁食时间从给药前10小时至给药后4小时。给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、和24小时采血。使用小动物麻醉机经异氟烷麻醉后通过眼底静脉丛采取0.4mL全血,放于肝素抗凝管中,样品于4℃、4200rpm离心5min,血浆转移至离心管中,并放于-80℃保存直到分析。血浆中样品使用蛋白质沉淀法萃取,萃取液通过LC/MS/MS分析。
附注:a.数据来自于美国食品药品监督管理局FDA公开的药理学综述。
大鼠(30mg/kg PO)的PK显示,实施例5化合物的游离碱和盐酸盐的数据均优于Ruxolitinib。
成年比格犬中药代动力学的测定
研究使用4只健康成年比格犬,来源于北京玛斯生物技术有限公司。研究分为两次:第一次,动物(雌雄各2只)单次静脉注射给药,剂量为5mg/kg;第二次,一周后同一组动物(雌雄各2只)单次灌胃给药,剂量为10mg/kg。灌胃给药的动物在实验前禁食过夜,禁食时间从给药前10小时至给药后4小时。静脉给药组的动物无食物限制。静脉给药组在给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时采血;灌胃给药组在给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时采血。动物通过异氟烷浅麻醉,用玻璃采血管于眼眶静脉丛采血约0.4mL全血,放于肝素抗凝管中,样品于4℃、4200rpm离心5min,血浆转移至离心管中,并放于-80℃保存直到分析。血浆中样品使用蛋白质沉淀法萃取,萃取液通过LC/MS/MS分析。
附注:a.数据来自于美国食品药品监督管理局FDA公开的药理学综述。
狗(10mg/kg PO,5mg/kg IV)的PK显示,实施例5化合物IV给药后Auc与阳性对照Ruxolitinib相当,但口服给药的生物利用度更优(114%vs 57%)。