发明内容
本申请一方面提供了式I所示化合物的结晶A:
其特征在于,在X-射线衍射(XRD)图谱中,具有2θ=9.35°、11.93°、16.32°、21.23°、23.13°、25.58°±0.2°的衍射峰;典型地具有2θ=9.35°、11.93°、16.32°、18.82°、20.54°、21.23°、23.13°、25.58°±0.2°的衍射峰;更典型地具有2θ=9.35°、10.93°、11.93°、14.46°、16.32°、18.82°、20.54°、21.23°、21.66°、23.13°、25.58°、26.34°±0.2°的衍射峰;进一步典型地具有2θ=9.35°、10.93°、11.93°、14.46°、16.32°、17.28°、18.82°、19.25°、20.54°、21.23°、21.66°、22.15°、23.13°、24.09°、25.58°、26.34°±0.2°的衍射峰。
在本申请的部分实施方式中,本申请的式I所示化合物的结晶A的X-射线衍射(XRD)图谱中,相对强度最大的峰出现在2θ=11.93°、16.32°或21.23°±0.2°的衍射峰位置;优选地,相对强度最大的峰出现在2θ=11.93°±0.2°的衍射峰位置。
在本申请的部分实施方式中,本申请的式I所示化合物的结晶A的X-射线衍射(XRD)图谱中,相对强度前三位的峰出现在2θ=9.35°、11.93°、16.32°、21.23°、23.13或25.58±0.2°的衍射峰位置。
在本申请的部分实施方式中,本申请的式I所示化合物的结晶A的X-射线衍射峰具有如下特征:
序号 |
2θ±0.2(°) |
相对强度(%) |
序号 |
2θ±0.2(°) |
相对强度(%) |
1 |
9.35 |
43.1 |
11 |
20.54 |
41.6 |
2 |
10.82 |
16.0 |
12 |
21.23 |
75.9 |
3 |
10.93 |
17.0 |
13 |
21.66 |
38.1 |
4 |
11.93 |
100.0 |
14 |
22.15 |
26.9 |
5 |
13.65 |
15.8 |
15 |
23.13 |
55.5 |
6 |
14.46 |
18.6 |
16 |
23.47 |
14.5 |
7 |
16.32 |
58.1 |
17 |
24.09 |
23.5 |
8 |
17.28 |
13.9 |
18 |
25.58 |
54.3 |
9 |
18.82 |
40.9 |
19 |
26.34 |
33.8 |
10 |
19.25 |
22.3 |
20 |
30.02 |
15.8 |
在本申请的部分实施方式中,所述式I所示化合物的结晶A的X-射线衍射图谱如图1所示。
在本申请的部分实施方式中,所述式I所示化合物的结晶A的X-射线衍射图谱如图3所示。
在本申请的部分实施方式中,所述式I所示化合物的结晶A的X-射线衍射图谱如图4所示。
本申请另一方面提供式I所示化合物的结晶A的制备方法,该方法包括以下步骤:
1)使式I所示化合物溶于结晶溶剂中;
2)析晶、过滤、洗涤、干燥。
在本申请的部分实施方式中,制备式I所示化合物的结晶A的结晶溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、乙二醇单甲醚、乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、二氧六环、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、丙酮、1-丁酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、氯仿、水或任意两种以上的混合溶剂;优选乙醇、异丙醚、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、水或任意两种以上的混合溶剂;更优选乙醇、乙醇-乙酸乙酯混合溶剂、乙醇-水混合溶剂、乙醇-异丙醚混合溶剂、丙酮、乙酸乙酯或二氯甲烷。
在本申请的部分实施方式中,制备式I所示化合物的结晶A的结晶溶剂优选乙醇或包含乙醇的混合溶剂;更优选地,所述包含乙醇的混合溶剂中的其他溶剂选自甲醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、乙二醇单甲醚、乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、二氧六环、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、丙酮、1-丁酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、氯仿或水。
在本申请的部分实施方式中,当制备式I所示化合物的结晶A的结晶溶剂选自包含乙醇的混合溶剂时,乙醇的含量(以体积计算)为10%~90%;优选10%、20%、25%、30%、33%、40%、50%、60%、66%、70%、75%、80%或90%。
在本申请的部分实施方式中,当制备式I所示化合物的结晶A的结晶溶剂选自包含乙醇的混合溶剂时,乙醇与其他溶剂比(以体积计算)为9:1~1:9;优选9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8或1:9。
本申请另一方面提供了包括式I所示化合物的结晶A的结晶组合物。在本发明的部分实施方式中,式I所示化合物的结晶A占结晶组合物重量50%以上,较好的是80%以上,更好的是90%以上,最好的是95%以上。
本申请的另一方面提供了包括式I所示化合物的结晶A的药物组合物,该药物组合物中包括有效量式I所示化合物的结晶A、或者包括式I所示化合物的结晶A的结晶组合物,此外,该药物组合物还可以含有或不含有药学上可接受的载体、赋形剂和/或介质。
本申请的另一方面提供了式I所示化合物的结晶A或其结晶组合物或其药物组合物在制备治疗或预防两面神激酶介导的疾病的药物中的用途。
本申请一方面提供了式I所示化合物的结晶B:
其特征在于,在X-射线衍射(XRD)图谱中,具有2θ=8.97°、9.39°、12.90°、17.70°、20.31°、23.63°±0.2°的衍射峰;典型地具有2θ=8.97°、9.39°、12.90°、16.54°、17.70°、19.20°、20.31°、22.78°、23.63°±0.2°的衍射峰;更典型地具有2θ=8.97°、9.39°、11.24°、12.90°、14.56°、16.54°、17.70°、19.20°、20.31°、22.23°、22.78°、23.63°、25.55°±0.2°的衍射峰。
在本申请的部分实施方式中,本申请的式I所示化合物的结晶B的X-射线衍射(XRD)图谱中,相对强度最大的峰出现在2θ=9.39°、17.70°或23.63°±0.2°的衍射峰位置;优选地,相对强度最大的峰出现在2θ=17.70°±0.2°的衍射峰位置。
在本申请的部分实施方式中,本申请的式I所示化合物的结晶B的X-射线衍射峰具有如下特征:
序号 |
2θ±0.2(°) |
相对强度(%) |
序号 |
2θ±0.2(°) |
相对强度(%) |
1 |
8.97 |
40.7 |
11 |
20.31 |
36.1 |
2 |
9.39 |
47.4 |
12 |
20.41 |
24.3 |
3 |
11.24 |
17.9 |
13 |
21.03 |
21.3 |
4 |
12.90 |
34.4 |
14 |
21.96 |
18.6 |
5 |
12.96 |
32.8 |
15 |
22.23 |
18.9 |
6 |
14.56 |
14.4 |
16 |
22.78 |
23.1 |
7 |
16.54 |
22.1 |
17 |
23.50 |
46.9 |
8 |
17.15 |
40.4 |
18 |
23.63 |
65.0 |
9 |
17.70 |
100.0 |
19 |
25.55 |
17.3 |
10 |
19.20 |
24.4 |
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在本申请的部分实施方式中,所述式I所示化合物的结晶B的X-射线衍射图谱如图5所示。
本申请所述的式I所示化合物的结晶B是溶剂合物,优选是乙腈合物或丙腈合物。
本申请另一方面提供式I所示化合物的结晶B的制备方法,该方法包括以下步骤:
1)使式I所示化合物溶于结晶溶剂中;
2)析晶、过滤、洗涤、干燥。
在本申请的部分实施方式中,制备式I所示化合物的结晶B的结晶溶剂选自含有氰基的溶剂,优选乙腈、丙腈、包含乙腈的混合溶剂或包含丙腈的混合溶剂。所述包含乙腈的混合溶剂或包含丙腈的混合溶剂中的其他溶剂选自甲醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、乙二醇单甲醚、乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、二氧六环、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、丙酮、1-丁酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、氯仿或水。
在本申请的部分实施方式中,当制备式I所示化合物的结晶B的结晶溶剂选自包含乙腈的混合溶剂或包含丙腈的混合溶剂时,乙腈或丙腈的含量(以体积计算)为10%~90%,优选10%、20%、25%、30%、33%、40%、50%、60%、66%、70%、75%、80%或90%。
在本申请的部分实施方式中,当制备式I所示化合物的结晶B的结晶溶剂选自包含乙腈的混合溶剂或包含丙腈的混合溶剂时,乙腈或丙腈与其他溶剂比(以体积计算)为9:1~1:9,优选9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8或1:9。
本申请另一方面提供了包括式I所示化合物的结晶B的结晶组合物。在本发明的部分实施方式中,式I所示化合物的结晶B占结晶组合物重量50%以上,较好的是80%以上,更好的是90%以上,最好的是95%以上。
本申请的另一方面提供了包括式I所示化合物的结晶B的药物组合物,该药物组合物中包括有效量式I所示化合物的结晶B、或者包括式I所示化合物的结晶B的结晶组合物,此外,该药物组合物还可以含有或不含有药学上可接受的载体、赋形剂和/或介质。
本申请的另一方面提供了式I所示化合物的结晶B或其结晶组合物或其药物组合物在制备治疗或预防两面神激酶介导的疾病的药物中的用途。
本申请中,X-射线衍射图谱采用下述方法测定:仪器:Bruker D8ADVANCE X-射线衍射仪;方法:靶:Cu:K-Alpha;波长管压Voltage:40kV;管流Current:40mA;扫描范围:4~40°;扫描速度:每步0.1秒,每步0.02°。
本申请中,差示扫描量热分析(DSC)采用下述方法测定:仪器:梅特勒DSC-1差示扫描量热仪;方法:取样品(~5mg)置于DSC铝锅内进行测试,方法为:30℃-300℃,升温速率10℃/min。
需要说明的是,在X-射线衍射光谱中,由结晶化合物得到的衍射谱图对于特定的晶型往往是特征性的,其中谱带(尤其是在低角度)的相对强度可能会因为结晶条件、粒径和其它测定条件的差异而产生的优势取向效果而变化。因此,衍射峰的相对强度对所针对的晶型并非是特征性的,判断是否与已知的晶型相同时,更应该注意的是峰的相对位置而不是它们的相对强度。此外,对任何给定的晶型而言,峰的位置可能存在轻微误差,这在晶体学领域中也是公知的。例如,由于分析样品时温度的变化、样品移动、或仪器的标定等,峰的位置可以移动,2θ值的测定误差有时约为±0.2°。因此,在确定每种晶型结构时,应该将此误差考虑在内。在XRD图谱中通常用2θ角或晶面距d表示峰位置,两者之间具有简单的换算关系:d=λ/2sinθ,其中d代表晶面距,λ表入射X射线的波长,θ为衍射角。对于同种化合物的同种晶型,其XRD谱的峰位置在整体上具有相似性,相对强度误差可能较大。还应指出的是,在混合物的鉴定中,由于含量下降等因素会造成部分衍射线的缺失,此时,无需依赖高纯试样中观察到的全部谱带,甚至一条谱带也可能对给定的晶体是特征性的。
需要说明的是,DSC测定当晶体由于其晶体结构发生变化或晶体熔融而吸收或释放热时的转变温度。对于同种化合物的同种晶型,在连续的分析中,热转变温度和熔点误差典型的在约5℃之内,当我们说一个化合物具有某一给定的DSC峰或熔点时,这是指该DSC峰或熔点±5℃。DSC提供了一种辨别不同晶型的辅助方法。不同的晶体形态可根据其不同的转变温度特征而加以识别。
本发明中,术语“药物组合物”是指一种或多种本发明的化合物与在本领域中通常接受的用于将生物活性化合物输送至有机体,例如人,的载体、赋形剂和/或介质的制剂。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本发明的化合物。
本发明所使用的所有溶剂是市售的,无需进一步纯化即可使用。反应一般是在惰性氮气下、无水溶剂中进行的。
本发明化合物经手工或者软件命名,市售化合物采用供应商目录名称。
在本申请中,质子核磁共振数据记录在BRUKER AVANCE Ⅲ HD 500M分光仪上,化学位移以四甲基硅烷低场处的(ppm)表示;质谱是在Waters ACQUITY UPLC+XEVO G2 QTof测定。质谱仪配备有一个正或负模式下操作的电喷雾离子源(ESI)。
本发明提供的式I所示化合物的结晶A和结晶B具有纯度高、结晶度高、稳定性好等优点;同时,本发明提供的式I所示化合物结晶A和结晶B的制备方法简单,溶剂价廉易得,结晶条件温和,适合工业化生产。
实施例1 (3R)-3-{3-氨基-4-{7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}-3-环戊基丙腈(I)
步骤A:3-环戊基丙烯酸
室温下,向盛有5M丙二酸(312g,3.0mol,1.0eq.)吡啶溶液中滴加环戊基甲醛(344.4g,3.51mol,1.17eq.),加毕搅拌10分钟,缓慢滴加哌啶(6.2g,0.075mol,0.025eq.),加毕室温下搅拌反应1小时。升温至70~80℃搅拌反应8小时,减压浓缩蒸去溶剂,余物浓盐酸调pH至3.0,乙酸乙酯萃取三次,合并有机相,2.5M氢氧化钠溶液洗涤五次,水层浓盐酸调pH至3.0,乙酸乙酯萃取三次,合并有机层,水洗三次,饱和食盐水洗,经无水硫酸钠干燥,过滤并减压浓缩得3-环戊基丙烯酸(391.2g,收率:93%)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.08(dd,J=15.6,8.1Hz,1H)、5.81(dd,J=15.6,1.1Hz,1H)、11.25(s,1H)、2.64(m,1H)、1.63(m,2H)、1.42(m,2H)、1.86(m,2H)、1.72(m,2H);HRMS(ESI)calcd.for C8H12O2[M-H]-139.0765;Found:139.0760。
步骤B:5-环戊基吡唑烷-3-酮
室温搅拌下,80%水合肼(253.5g,4.05mol,1.5eq.)滴加至环戊基丙烯酸(378g,2.7mol,1.0eq.)中,升温至70~80℃搅拌反应6小时,降温至0~10℃搅拌析晶,过滤,滤饼水洗两次,45℃鼓风干燥12小时得5-环戊基吡唑烷-3-酮(292.5g,68%收率)。
步骤C:R-5-环戊基吡唑烷-3-酮-D-酒石酸盐
室温搅拌下,D-酒石酸(135g,0.9mol,0.5eq.)加入到5-环戊基吡唑烷-3-酮(278g,1.8mol,1.0eq.)丙酮溶液中,搅拌反应2小时后析晶,过滤,滤饼丙酮打浆5次,50℃鼓风干燥得R-5-环戊基吡唑烷-3-酮-D-酒石酸盐(241g,88%收率,99.5%ee值)。
步骤D:R-5-环戊基吡唑烷-3-酮
室温搅拌下,R-5-环戊基吡唑烷-3-酮-D-酒石酸盐(228g,0.75mol,1.0eq.)加入到4M氢氧化钠(52.2g,2.61mol,1.74eq.)溶液中,二氯甲烷萃取,合并有机层,无水硫酸镁干燥,过滤,滤液减压浓缩得R-5-环戊基吡唑烷-3-酮(100.6g,85.2%收率,99.5%ee值)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.93(s,1H)、5.15(s,1H)、1.89(m,1H)、1.67(m,2H)、1.55(m,2H)、1.47(m,2H)、1.26(m,1H)、1.14(m,1H);HRMS(ESI)calcd.for C8H14N2O[M+H]+155.1179;Found:155.1183。
步骤E:4-氯-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
冰浴下向4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶(200g,1.3mol,1.0eq.)N,N-二甲基甲酰胺溶液中加入60%NaH(62.4g,1.56mol,1.2eq.),加毕室温下搅拌反应1小时,冰浴冷却下缓慢滴加2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(SEMCl,260g,1.56mol,1.2eq)。加毕,冰浴下搅拌反应1小时,加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩得余物,硅胶柱层析纯化得4-氯-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(312.2g,91.8%收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ8.64(s,1H)、7.38(d,J=3.6Hz,1H)、6.65(d,J=3.6Hz,1H)、5.64(s,2H)、3.52(t,J=8.2Hz,2H)、0.90(t,J=8.2Hz,2H)、-0.07(s,9H);HRMS(ESI)calcd.for C12H18N3OSi[M+H]+284.0980;Found:284.0995。
步骤F:2-氰基-2-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}乙酸乙酯
室温搅拌下,碳酸钾(207g,1.5mol,3.0eq.)加入到4-氯-7-{[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(142g,0.5mol,1.0eq.)和氰基乙酸乙酯(85g,0.75mol,1.5eq)DMF溶液中,升温至120℃搅拌反应4小时,降至室温,加水淬灭,搅拌析晶,过滤,滤饼水洗50℃鼓风干燥得2-氰基-2-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}乙酸乙酯(167g,92.6%收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ13.46(s,1H)、8.45(s,1H)、7.56(d,J=3.6Hz,1H)、7.18(d,J=3.6Hz,1H)、5.56(s,2H)、4.32(q,J=7.1Hz,2H)、3.52(t,J=8.2Hz,2H)、1.27(t,J=7.1Hz,3H)、0.83(t,J=8.2Hz,2H)、-0.08(s,9H);HRMS(ESI)calcd.for C17H24N4O3Si[M+H]+361.1690;Found:361.1699。
步骤G:2-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}乙腈
室温下搅拌下,氯化钠(263g,4.5mol,10eq.)加入到2-氰基-2-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}乙酸乙酯(162.2g,0.45mol,1.0eq.)N-甲基吡咯烷酮和水的混合溶液中,升温至160~170℃搅拌反应30小时。加水淬灭,乙酸乙酯萃取,有机层饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩所得余物,硅胶柱层析纯化得2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)乙腈(98.6g,76%收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ8.18(s,1H)、7.77(d,J=3.4Hz,1H)、6.83(d,J=3.4Hz,1H)、5.65(s,2H)、4.56(s,2H)、3.52(t,J=7.6Hz,2H)、0.82(t,J=7.6Hz,2H)、-0.10(s,9H);HRMS(ESI)calcd.forC14H20N4OSi[M+H]+289.1479;Found:289.1498。
步骤H:3-(二甲氨基)-2-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}丙烯腈
DMF-DMA(119g,1.0mol,3.0eq.)加入到2-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}乙腈(95g,0.33mol,1.0eq.)DMF溶液中,升温至回流反应2小时,降至室温,加水搅拌析晶,过滤,滤饼水洗,50℃鼓风干燥,得3-(二甲氨基)-2-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)丙烯腈(106.5g,94%收率)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ8.50(s,1H)、8.38(s,1H)、7.26(d,J=3.7Hz,1H)、7.18(d,J=3.7Hz,1H)、5.56(s,2H)、3.49(t,J=8.4Hz,2H)、3.43(s,3H)、3.23(s,3H)、0.87(t,J=8.4Hz,2H)、-0.10(s,9H);;HRMS(ESI)calcd.for C17H25N5OSi[M+H]+344.1901;Found:344.1907。
步骤I:(R)-3-{3-氨基-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}-3-环戊基丙酸
室温搅拌下,乙酸钾(1.5eq)加入到3-(二甲氨基)-2-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}丙烯腈(68.7g,0.2mol,1.0eq.)和R-5-环戊基吡唑烷-3-酮(37.0g,0.24mol,1.2eq.)N-甲基吡咯烷酮溶液中,升温至120~130℃搅拌反应12小时。加水淬灭,乙酸乙酯萃取,有机层水洗三次,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥。过滤,减压浓缩得余物经硅胶柱层析纯化,得(R)-3-{3-氨基-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}-3-环戊基丙酸(37.6g,40.1%收率,ee值99.8%)。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ8.74(s,1H)、7.96(s,1H)、7.32(d,J=3.4Hz,1H)、6.67(d,J=3.4Hz,1H)、5.63(m,2H)、4.19(t,J=8.2Hz,2H)、3.52(m,1H)、3.52(t,J=8.4Hz,2H)、3.09(dd,J=16.7,8.2Hz,1H)、2.87(d,J=16.7Hz,1H)、2.41(m,1H)、1.87(m,1H)、1.69(m,1H)、1.60(m,2H)、1.51(m,2H)、1.15(m,1H)、0.91(t,J=8.4Hz,2H)、-0.06(s,9H);HRMS(ESI)calcd.for C17H25N5OSi[M+H]+471.2534;Found:471.2538。
步骤J:(R)-3-{3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}-3-环戊基丙酸
室温搅拌下,向0.2M(R)-3-{3-氨基-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1H-吡唑-1-基}-3-环戊基丙酸(35.0g,74.3mmol,1.0eq.)甲苯溶液中加入丁二酸酐(10.4g,104mmol,1.4eq.),氮气保护下升温至回流反应(分水)14小时。减压浓缩蒸去溶剂,余物中加入乙酸乙酯溶解,水洗,饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤,乙酸乙酯层加入无水硫酸钠及活性炭搅拌干燥脱色,过滤,减压浓缩得(R)-3-{3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}-3-环戊基丙酸(39g,70.6mmol,95%收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ8.65(s,1H)、8.28(s,1H)、7.28(d,J=3.7Hz,1H)、6.62(d,J=3.7Hz,1H)、5.59(d,J=11.1Hz,1H)、5.53(d,J=11.1Hz,1H)、4.44(td,J=9.9,3.2Hz,1H)、3.48(m,2H)、3.02(dd,J=16.8,10.0Hz,1H)、2.83(m,1H)、2.43(m,1H)、1.78(m,1H)、1.69(m,1H)、1.61(m,1H)、1.52(m,1H)、1.51(m,1H)、1.50(m,2H)、1.14(m,1H)、0.88(m,2H)、-0.07(s,9H);HRMS(ESI)calcd.for C27H36N6O5Si[M+H]+553.2589;Found:553.2603。
步骤K:(R)-3-环戊基-3-[3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙酰胺
冰浴,氮气保护搅拌下,向0.18M(R)-3-{3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}-3-环戊基丙酸(35.0g,63.3mmol,1.0eq.)二氯甲烷溶液中滴加草酰氯(20.0g,158mmol,2.5eq.),加毕,滴加DMF(0.1g,1.3mmol,0.02eq.),室温下搅拌反应1小时,减压浓缩蒸去溶剂,加入钠丝干燥重蒸THF溶解,滴加至2M氨水(20.0,0.32mol,5.0eq.)THF溶液中,冰浴下搅拌反应30分钟,减压浓缩蒸去THF,冰浴降温析晶2小时,过滤,滤饼水洗,50℃鼓风干燥得(R)-3-环戊基-3-{3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}丙酰胺(29.8g,85.5%收率)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ8.65(s,1H)、8.24(s,1H)、7.32(d,J=3.7Hz,1H)、6.63(d,J=3.7,1H)、6.12(s,1H)、5.60(d,J=11.1Hz,1H)、5.56(d,J=11.1Hz,1H)、5.44(s,1H)、4.40(td,J=10.6,3.2Hz,1H)、3.47(dd,J=9.1,7.5Hz,2H)、2.99(dd,J=14.4,11.0Hz,1H)、2.91(s,4H)、2.67(dd,J=14.4,3.3Hz,1H)、2.48(m,1H)、1.84(m,1H)、1.66(m,1H)、1.58(m,2H)、1.57(m,1H)、1.50(m,1H)、1.31(m,1H)、1.21(m,1H)、0.88(dd,9.1,7.5,2H)、-0.08(s,9H);;HRMS(ES)calcd.for C27H37N7O4Si[M+H]+552.2749;Found:552.2759。
步骤L:(R)-3-环戊基-3-[3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-(7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈
冰浴搅拌下向,0.2M(R)-3-环戊基-3-{3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}丙酰胺(25g,45.3mmol,1.0eq)二氯甲烷溶液中滴加三氯氧磷(27.8g,181mmol,4.0eq.),加毕室温下搅拌反应2小时,加水淬灭,有机层水洗,加入无水硫酸镁及活性炭搅拌干燥、脱色。过滤,减压浓缩除去溶剂得(R)-3-环戊基-3-{3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}丙腈(22.2g,41.7mmol,92%收率)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ8.70(s,1H)、8.35(s,1H)、7.35(d,J=3.7Hz,1H)、6.66(d,J=3.7Hz,1H)、5.62(d,J=10.8Hz,1H)、5.58(d,J=10.8Hz,1H)、4.30(m,1H)、3.50(m,2H)、3.09(dd,J=16.8,4.3Hz,1H)、3.01(dd,J=16.8,4.3Hz,1H)、2.94(s,4H)、2.62(m,1H)、1.96(m,1H)、1.69(m,2H)、1.60(m,1H)、1.58(m,2H)、1.27(m,2H)、0.90(t,J=8.3Hz,2H)、-0.06(s,9H);HRMS(ESI)calcd.for C27H35N7O3Si[M+H]+534.2643;Found:534.2657。
步骤M:(R)-3-环戊基-3-{3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-{(7-羟甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}丙腈
冰浴搅拌下,向0.2M(R)-3-环戊基-3-{3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-{7-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}丙腈(20g,37.5mmol,1.0eq.)二氯甲烷溶液中滴加47%三氟化硼乙醚溶液(34g,112.5mmol,3.0eq.),加毕室温搅拌反应4小时。加水淬灭,10%NaOH溶液调pH至6~7,乙酸乙酯萃取,有机层水洗,饱和食盐水洗涤,无水硫酸镁搅拌干燥。过滤,减压浓缩得(R)-3-环戊基-3-[3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-(7-羟甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(14.4g,88.5%收率)
1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ8.54(s,1H)、8.31(s,1H)、7.31(d,J=3.7Hz,1H)、6.52(d,J=3.7Hz,1H)、5.68(d,J=10.9Hz,1H)、5.61(d,J=10.9Hz,1H)、4.32(m,1H)、3.13(dd,J=17.2,7.9Hz,1H)、3.03(dd,J=17.2,4.3Hz,1H)、2.94(s,4H)、2.62(m,1H)、1.98(m,1H)、1.74(m,1H)、1.65(m,1H)、1.64(m,2H)、1.30(m,1H)、1.29(m,2H);HRMS(ESI)calcd.forC22H23N7O3[M+H]+434.1935;Found:434.1944。
步骤N:(R)-3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(I)
室温搅拌下,向0.2M(R)-3-{3-(2,5-二氧代吡咯-1-基)-4-{(7-羟甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}-1H-吡唑-1-基}-3-环戊基丙腈(12g,27.7mmol,1.0eq.)甲醇溶液中滴加80%水合肼(8.7g,138mmol,5.0eq.),加毕升温至回流反应8小时,减压浓缩蒸去溶剂,余物乙酸乙酯溶解,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥过夜。过滤,减压浓缩得(R)-3-[3-氨基-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-环戊基丙腈(I)(7.7g,收率87%,ee值99.8%)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ11.73(s,1H)、8.79(s,1H)、8.06(s,1H)、7.32(d,J=3.5Hz,1H)、6.62(d,J=3.5Hz,1H)、5.03(s,2H)、4.05(td,J=9.5,3.5Hz,1H)、3.12(dd,J=17.1,8.9Hz,1H)、2.91(dd,J=17.1,3.6Hz,1H)、2.54(m,1H)、1.74(m,1H)、1.63(m,4H)、1.27(m,1H)、1.26(m,2H);HRMS(ESI)calcd.for C17H19N7[M+H]+322.1775;Found:322.1783。