ES2886910T3 - Cristal de pirrolopirimidina para preparar inhibidor de JAK - Google Patents

Cristal de pirrolopirimidina para preparar inhibidor de JAK Download PDF

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Zhou Zhou
Aiming Zhang
Xiquan Zhang
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Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
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Centaurus Biopharma Co Ltd
Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
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Abstract

Un cristal A de un compuesto representado por la fórmula I: **(Ver fórmula)** en donde un patrón de difracción de rayos X del cristal A del compuesto representado por la fórmula I tiene picos de difracción a 2θ de 9,35°±0,2°, 11,93°±0,2°, 16,32°±0,2°, 21,23°±0,2°, 23,13°±0,2° y 25,58°±0,2°; típicamente tiene picos de difracción a 2θ de 9,35°±0,2°, 11,93°±0,2°, 16,32°±0,2°, 18,82°±0,2°, 20,54°±0,2°, 21,23°±0,2°, 23,13°±0,2° y 25,58°±0,2°; más típicamente tiene picos de difracción a 2θ de 9,35°±0,2°, 10,93°±0,2°, 11,93°±0,2°, 14,46°±0,2°, 16,32°±0,2°, 18,82°±0,2°, 20,54°±0,2°, 21,23°±0,2°, 21,66°±0,2°, 23,13°±0,2°, 25,58°±0,2° y 26,34°±0,2°; y aún más típicamente tiene picos de difracción a 2θ de 9,35°±0,2°, 10,93°±0,2°, 11,93°±0,2°, 14,46°±0,2°, 16,32°±0,2°, 17,28°±0,2°, 18,82°±0,2°, 19,25°±0,2°, 20,54°±0,2°, 21,23°±0,2°, 21,66°±0,2°, 22,15°±0,2°, 23,13°±0,2°, 24,09°±0,2°, 25,58°±0,2° y 26,34°±0,2°.

Description

DESCRIPCIÓN
Cristal de pirrolopirimidina para preparar inhibidor de JAK
Referencia cruzada a solicitud relacionada
La presente solicitud reivindica la prioridad y el beneficio de la solicitud de patente china n.° 201610435947.4 presentada en la Administración Nacional de la Propiedad Intelectual de China el 16 de junio de 2016.
Campo técnico
La presente solicitud pertenece al campo de la química médica. Específicamente, la presente solicitud se refiere a un cristal de un compuesto de pirrolopirimidina (3R)-3-[3-amino-4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il]-3-ciclopentilpropionitrilo como inhibidor de JAK, una composición cristalina, una composición farmacéutica, un método de preparación y el uso de los mismos.
Antecedentes de la técnica
La Janus cinasa (JAK, por sus siglas en inglés) es un tipo de cinasa de tirosina (PTK) no receptor, que reside en células y transduce la señal de estimulación citocínica a través de la vía JAK-STAT. Gracias a la vía JAK-STAT, una señal química externa a la célula es transducida a través de la membrana celular a un promotor génico en el ADN endonuclear, y afecta finalmente al ADN de la célula para modificar su nivel de transcripción y de actividad. La vía JAK-STAT consta principalmente de tres componentes: (1) un receptor; (2) Janus cinasa (JAK) y (3) una proteína transductora de señal y activadora de transcripción (STAT). El receptor puede ser activado por interferón, interleucina, factor de crecimiento u otro mensajero químico, y dicha activación conduce a la fosforilación de la propia JAK. A continuación, la proteína STAT se une al receptor fosforilado, de forma que la STAT es fosforilada por JAK. Después, la proteína STAT fosforilada se separa del receptor y posteriormente se dimeriza y se transloca al núcleo celular, uniéndose así al sitio de ADN específico y modificando la transcripción (Scott, M. J., C. J. Godshall et al. (2002) "Jaks, STATs, Cytokines, and Sepsis" Clin Diagn Lab Immunol 9(6): 1153-9).
La familia JAK interviene en la regulación dependiente de citocina de la proliferación y función de células involucradas en la respuesta inmunitaria. Se conocen actualmente cuatro miembros de la familia JAK en mamíferos: JAK1, JAK2, JAK3 y TYK2 (cinasa 2 de tirosina). Las proteínas JAK tienen un tamaño dentro del intervalo de 120 kDa a 140 kDa, y comprenden 7 dominios conservados de homología JAK (JH). Uno de ellos es un dominio catalítico de cinasa funcional y otro es un dominio de pseudocinasa que ejerce eficazmente una función reguladora y/o actúa como sitio de acoplamiento para STAT (Scott, Godshall et al. 2002, véase más arriba).
Se han notificado hasta la fecha diversos inhibidores de Janus cinasa. La solicitud de patente china n.° 201410784461.2, con fecha de presentación 16 de diciembre de 2014 (cuyo contenido se incorpora en la presente por referencia en su totalidad), da a conocer varios inhibidores de JAK, entre ellos el compuesto (3R)-3-[3-amino-4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-3-ciclopentilpropionitrilo representado por la fórmula I:
Figure imgf000002_0001
Además de la eficacia terapéutica, los desarrolladores de fármacos intentan proporcionar una forma adecuada de una molécula activa que tenga propiedades de fármaco. A la hora de conseguir un método de producción comercialmente viable o a la hora de producir una composición farmacéutica que comprenda un compuesto activo, la estabilidad química, la estabilidad en estado sólido y la vida útil de un ingrediente activo son factores muy importantes. Por ello, para desarrollar un fármaco es muy importante proporcionar una forma adecuada del fármaco que posea propiedades deseadas.
Compendio de la invención
En un aspecto, la presente solicitud proporciona un cristal A de un compuesto representado por la fórmula I,
Figure imgf000003_0001
en donde un patrón de difracción de rayos X (XRD) del cristal A del compuesto representado por la fórmula I tiene picos de difracción a 20 de 9,35°±0,2°, 11,93°±0,2°, 16,32°±0,2°, 21,23°±0,2°, 23,13°±0,2° y 25,58°±0,2°.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar el cristal A del compuesto representado por la fórmula I, y el método comprende los pasos siguientes:
1) disolver el compuesto representado por la fórmula I en un disolvente de cristalización, donde el disolvente de cristalización se selecciona entre metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, monometiléter de etilenglicol, dietiléter, isopropiléter, metil-t-butiléter, dioxano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, acetona, 1-butanona, 2-butanona, acetato de etilo, formiato de etilo, acetato de metilo, acetato de isopropilo, diclorometano, cloroformo, agua o un disolvente mezcla de dos o más cualesquiera de los disolventes precedentes; y
2) cristalizar el compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición cristalina donde el cristal A del compuesto representado por la fórmula I supone 50% o más, preferiblemente 80% o más, más preferiblemente 90% o más, y lo más preferiblemente 95% o más, en peso de la composición cristalina.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición farmacéutica, donde la composición farmacéutica comprende una cantidad eficaz del cristal A del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina que comprende el cristal A del compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona el uso del cristal A del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina, o la composición farmacéutica como se ha descrito más arriba, en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad mediada por Janus cinasa.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un cristal B de un compuesto representado por la fórmula I,
Figure imgf000003_0002
donde un patrón de difracción de rayos X (XRD) del cristal B del compuesto representado por la fórmula I tiene picos de difracción a 20 de 8,97°±0,2°, 9,39°±0,2°, 12,90°±0,2°, 17,70°±0,2°, 20,31°±0,2° y 23,63°±0,2°.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar el cristal B del compuesto representado por la fórmula I, y el método comprende los pasos siguientes:
1) disolver en acetonitrilo el compuesto representado por la fórmula I; y
2) cristalizar el compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición cristalina, donde el cristal B del compuesto representado por la fórmula I supone 50% o más, preferiblemente 80% o más, más preferiblemente 90% o más, y lo más preferiblemente 95% o más, en peso de la composición cristalina.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición farmacéutica, donde la composición farmacéutica comprende una cantidad eficaz del cristal B del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina que comprende el cristal B del compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona el uso del cristal B del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina o la composición farmacéutica como se ha descrito más arriba, en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad mediada por Janus cinasa.
Breve descripción de los dibujos
La Figura
Figure imgf000004_0001
patrón de XRD del cristal A del compuesto representado por la fórmula I (método 1 del Ejemplo La Figura 2 es un espectro de DSC del cristal A del compuesto representado por la fórmula I (método 1 del Ejemplo 2).
La Figura 3 es un patrón de XRD del cristal A del compuesto representado por la fórmula I (método 2 del Ejemplo 2, etanol-acetato de etilo (4:1)).
La Figura 4 es un patrón de XRD del cristal A del compuesto representado por la fórmula I (método 3 del Ejemplo 2). La Figura 5 es un patrón de XRD del cristal B del compuesto representado por la fórmula I (Ejemplo 3).
La Figura 6 es un espectro de DSC del cristal B del compuesto representado por la fórmula I (Ejemplo 3).
Descripción detallada de la invención
En un aspecto, la presente solicitud proporciona un cristal A de un compuesto representado por la fórmula I:
Figure imgf000004_0002
donde un patrón de difracción de rayos X (XRD) del cristal A del compuesto representado por la fórmula I tiene picos de difracción a 20 de 9,35°, 11,93°, 16,32°, 21,23°, 23,13° y 25,58°±0,2°; típicamente tiene picos de difracción a 20 de 9,35°, 11,93°, 16,32°, 18,82°, 20,54°, 21,23°, 23,13° y 25,58°±0,2°; más típicamente tiene picos de difracción a 20 de 9,35°, 10,93°, 11,93°, 14,46°, 16,32°, 18,82°, 20,54°, 21,23°, 21,66°, 23,13°, 25,58° y 26,34°±0,2°; y aún más típicamente tiene picos de difracción a 20 de 9,35°, 10,93°, 11,93°, 14,46°, 16,32°, 17,28°, 18,82°, 19,25°, 20,54°, 21,23°, 21,66°, 22,15°, 23,13°, 24,09°, 25,58° y 26,34°±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, en un patrón de difracción de rayos X (XRD) del cristal A del compuesto representado por la fórmula I de la presente solicitud, el pico que tiene la intensidad relativa más alta aparece en la posición del pico de difracción a 20 de 11,93°, 16,32° o 21,23°±0,2°; y preferiblemente el pico que tiene la intensidad relativa más alta aparece en la posición del pico de difracción a 20 de 11,93°±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, en un patrón de difracción de rayos X (XRD) del cristal A del compuesto representado por la fórmula I de la presente solicitud, los picos que tienen las tres intensidades relativas más altas aparecen en las posiciones de picos de difracción a 20 de 9,35°, 11,93°, 16,32°, 21,23°, 23,13° o 25,58°±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, los picos de difracción de rayos X del cristal A del compuesto representado por la fórmula I de la presente solicitud tienen las siguientes características:
Figure imgf000004_0003
Figure imgf000005_0001
En algunas realizaciones de la presente solicitud, se muestra como Figura 1 un patrón de difracción de rayos X del cristal A del compuesto representado por la fórmula I.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, se muestra como Figura 2 un espectro de DSC del cristal A del compuesto representado por la fórmula I.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, se muestra como Figura 3 un patrón de difracción de rayos X del cristal A del compuesto representado por la fórmula I.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, se muestra como Figura 4 un patrón de difracción de rayos X del cristal A del compuesto representado por la fórmula I.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar el cristal A del compuesto representado por la fórmula I, y el método comprende los pasos siguientes:
1) disolver el compuesto representado por la fórmula I en un disolvente de cristalización, donde el disolvente de cristalización se selecciona entre metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, monometiléter de etilenglicol, dietiléter, isopropiléter, metil-t-butiléter, dioxano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, acetona, 1-butanona, 2-butanona, acetato de etilo, formiato de etilo, acetato de metilo, acetato de isopropilo, diclorometano, cloroformo, agua o un disolvente mezcla de dos o más cualesquiera de los disolventes precedentes; y
2) cristalizar el compuesto representado por la fórmula I y, opcionalmente, filtrar, lavar y/o secar el sólido obtenido.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, el disolvente de cristalización para preparar el cristal A del compuesto representado por la fórmula I es etanol, isopropiléter, acetato de etilo, acetona, diclorometano, agua o un disolvente mezcla de dos o más cualesquiera de los disolventes precedentes; y preferiblemente etanol, un disolvente mezcla de etanol y acetato de etilo, un disolvente mezcla de etanol y agua, un disolvente mezcla de etanol e isopropiléter, acetona, acetato de etilo o diclorometano.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, el disolvente de cristalización para preparar el cristal A del compuesto representado por la fórmula I es preferiblemente etanol o un disolvente mixto que comprende etanol; y más preferiblemente el otro disolvente del disolvente mixto que comprende etanol se selecciona de metanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, monometiléter de etilenglicol, dietiléter, isopropiléter, metilt-butiléter, dioxano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, acetona, 1-butanona, 2-butanona, acetato de etilo, formiato de etilo, acetato de metilo, acetato de isopropilo, diclorometano, cloroformo o agua.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, en la preparación del cristal A del compuesto representado por la fórmula I, una relación de la cantidad del compuesto representado por la fórmula I (en peso, en unidades de g) frente a la cantidad del disolvente de cristalización (en volumen, en unidades de mL) está en el intervalo de 1:5 a 1:50, preferiblemente 1:7,5, 1:10, 1:12, 1:15, 1:18, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:45 o 1:50, y más preferiblemente de 1:7,5 a 1:30.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, cuando el disolvente de cristalización para preparar el cristal A del compuesto representado por la fórmula I es un disolvente mixto que comprende etanol, el contenido de etanol (en volumen) vale de 10% a 90%; y preferiblemente 10%, 20%, 25%, 30%, 33%, 40%, 50%, 60%, 66%, 70%, 75%, 80% o 90%.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, cuando el disolvente de cristalización para preparar el cristal A del compuesto representado por la fórmula I es un disolvente mixto que comprende etanol, una relación de etanol frente al otro disolvente (en volumen) está en el intervalo de 9:1 a 1:9; y preferiblemente 9:1,8:1,7:1,6:1, 5:1,4:1,3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8 o 1:9.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, la cristalización se puede llevar a cabo enfriando, por ejemplo enfriando a una temperatura de 0°C a 5°C para efectuar la cristalización. En algunas realizaciones de la presente solicitud, la cristalización se puede llevar a cabo por concentración bajo presión reducida.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición cristalina que comprende el cristal A del compuesto representado por la fórmula I. En algunas realizaciones de la presente solicitud, el cristal A del compuesto representado por la fórmula I supone 50% o más, preferiblemente 80% o más, más preferiblemente 90% o más, y lo más preferiblemente 95% o más, en peso de la composición cristalina.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición farmacéutica que comprende el cristal A del compuesto representado por la fórmula I, donde la composición farmacéutica comprende una cantidad eficaz del cristal A del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina que comprende el cristal A del compuesto representado por la fórmula I. Además, la composición farmacéutica puede comprender o no un vehículo, excipiente y/o medio farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona el uso del cristal A del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina, o la composición farmacéutica como se ha descrito más arriba, en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad mediada por Janus cinasa.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para tratar o prevenir una enfermedad mediada por Janus cinasa, que comprende administrar a un mamífero que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz del cristal A del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina, o la composición farmacéutica como se ha descrito más arriba.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona el cristal A del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina, o la composición farmacéutica como se ha descrito más arriba, para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por Janus cinasa.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un cristal B de un compuesto representado por la fórmula I:
Figure imgf000006_0001
I
donde un patrón de difracción de rayos X (XRD) del cristal B del compuesto representado por la fórmula I tiene picos de difracción a 20 de 8,97°, 9,39°, 12,90°, 17,70°, 20,31° y 23,63°±0,2°; típicamente tiene picos de difracción a 20 de 8,97°, 9,39°, 12,90°, 16,54°, 17,70°, 19,20°, 20,31 °, 22,78° y 23,63°±0,2°; y más típicamente tiene picos de difracción a 20 de 8,97°, 9,39°, 11,24°, 12,90°, 14,56°, 16,54°, 17,70°, 19,20°, 20,31°, 22,23°, 22,78°, 23,63° y 25,55°±0,2°. En algunas realizaciones de la presente solicitud, en un patrón de difracción de rayos X (XRD) del cristal B del compuesto representado por la fórmula I de la presente solicitud, el pico que tiene la intensidad relativa más alta aparece en la posición del pico de difracción a 20 de 9,39°, 17,70° o 23,63°±0,2°; y preferiblemente el pico que tiene la intensidad relativa más alta aparece en la posición del pico de difracción a 20 de 17,70°±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, los picos de difracción de rayos X del cristal B del compuesto representado por la fórmula I de la presente solicitud tienen las siguientes características:
Figure imgf000007_0001
En algunas realizaciones de la presente solicitud, se muestra como Figura 5 un patrón de difracción de rayos X del cristal B del compuesto representado por la fórmula I.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, se muestra como Figura 6 un espectro de DSC del cristal B del compuesto representado por la fórmula I.
El cristal B del compuesto representado por la fórmula I conforme a la presente solicitud es un acetonitrilato del compuesto representado por la fórmula I, donde una relación molar entre el compuesto representado por la fórmula I y acetonitrilo está en el intervalo de 1:0,5 a 1:2,0 y preferiblemente es 1:0,5, 1:1, 1:1,5 o 1:2,0.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar el cristal B del compuesto representado por la fórmula I y el método comprende los pasos siguientes:
1) disolver en acetonitrilo el compuesto representado por la fórmula I; y
2) cristalizar el compuesto representado por la fórmula I y, opcionalmente, filtrar, lavar y/o secar el sólido obtenido.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, en la preparación del cristal B del compuesto representado por la fórmula I, una relación de la cantidad del compuesto representado por la fórmula I (en peso, en unidades de g) frente a la cantidad del disolvente de cristalización acetonitrilo (en volumen, en unidades de mL) está en el intervalo de 1:5 a 1:50, preferiblemente 1:7,5, 1:10, 1:12, 1:15, 1:18, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:45 o 1:50, y más preferiblemente en el intervalo de 1:10 a 1:25.
En algunas realizaciones de la presente solicitud, la cristalización se puede llevar a cabo enfriando, por ejemplo enfriando a una temperatura de 0°C a 5°C para efectuar la cristalización.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición cristalina que comprende el cristal B del compuesto representado por la fórmula I. En algunas realizaciones de la presente solicitud, el cristal B del compuesto representado por la fórmula I supone 50% o más, preferiblemente 80% o más, más preferiblemente 90% o más, y lo más preferiblemente 95% o más, en peso de la composición cristalina.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una composición farmacéutica que comprende el cristal B del compuesto representado por la fórmula I, donde la composición farmacéutica comprende una cantidad eficaz del cristal B del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina que comprende el cristal B del compuesto representado por la fórmula I. Además, la composición farmacéutica puede comprender o no un vehículo, excipiente y/o medio farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona el uso del cristal B del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina, o la composición farmacéutica como se ha descrito más arriba, en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad mediada por Janus cinasa.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para tratar o prevenir una enfermedad mediada por Janus cinasa, que comprende administrar a un mamífero que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz del cristal B del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina, o la composición farmacéutica como se ha descrito más arriba.
En otro aspecto, la presente solicitud proporciona el cristal B del compuesto representado por la fórmula I, o la composición cristalina, o la composición farmacéutica como se ha descrito más arriba, para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por Janus cinasa.
En la presente solicitud, los patrones de difracción de rayos X se han medido mediante el método siguiente: instrumento: difractómetro de rayos X Bruker D8 ADVANCE; método: diana: Cu: K-alfa; longitud de onda A = 1,54179 Á; tensión del tubo: 40 kV; corriente del tubo: 40 mA; intervalo de exploración: 4-40°; velocidad de exploración: 0,1 s/paso, 0,02°/paso.
En la presente solicitud se utiliza el siguiente método para la calorimetría diferencial de barrido (DSC): instrumento: calorímetro diferencial de barrido Mettler DSC-1; método: se analizan las muestras (-5 mg) en una cápsula de aluminio para DSC a una temperatura de 30°C a 300°C y una velocidad de calentamiento de 10°C/min.
Debe señalarse que, en un espectro de difracción de rayos X, un patrón de difracción de un compuesto cristalino suele ser característico de una forma cristalina específica. Las intensidades relativas de las bandas (especialmente en los ángulos bajos) pueden variar dependiendo de efectos de orientación preferencial que son el resultado de diferencias en el estado de los cristales, el tamaño de las partículas y otras condiciones de medida. Por tanto, las intensidades relativas de los picos de difracción no son características de una forma cristalina específica. Para juzgar si una forma cristalina es igual a una forma cristalina conocida se debe prestar más atención a las posiciones relativas de los picos que a las intensidades relativas de los mismos. Además, como en cualquier forma cristalina dada, puede darse un ligero error en la posición de los picos, lo que también es bien conocido en el campo de la cristalografía. Por ejemplo, la posición de un pico puede variar debido a cambios en la temperatura, al movimiento de la muestra o a la calibración del instrumento, etc., cuando se analiza la muestra, y el error de medición del valor 20 asciende a veces a aproximadamente ±0,2°. En consecuencia, se debe tener en cuenta este error cuando se identifique una estructura cristalina. Habitualmente, la posición de un pico se expresa en términos de ángulo 20 o de espaciado de retículo d en un patrón de XRD, constituyendo la fórmula d = A/2sen0 la relación simple de conversión entre estos parámetros, donde d representa el espaciado del retículo, A representa la longitud de onda del rayo X incidente y 0 representa el ángulo de difracción. Para la misma forma cristalina del mismo compuesto, la posición de los picos en un espectro XRD del mismo es similar en su conjunto, aunque el error en las intensidades relativas puede ser considerable. Se debe señalar además que, a la hora de identificar una mezcla, pueden estar ausentes algunas de las líneas de difracción, debido a factores tales como un contenido escaso. Entonces, incluso una banda puede ser característica de la forma cristalina dada, sin que dependa de todas las bandas de una muestra de alta pureza.
Se debe señalar que la DSC se utiliza para medir una temperatura de transición térmica cuando se absorbe o se desprende calor debido al cambio de una estructura cristalina o a la fusión de un cristal. En un análisis continuo de la misma forma cristalina del mismo compuesto, el error de una temperatura de transición térmica y de un punto de fusión se sitúa típicamente dentro del intervalo de aproximadamente ±5°C. Cuando se dice que un compuesto tiene un pico de DSC o un punto de fusión dado, significa que el pico de DSC o el punto de fusión pueden variar dentro de un intervalo de ±5°C. La DSC proporciona un método auxiliar para distinguir formas cristalinas diferentes. Se pueden identificar formas cristalinas diferentes por sus temperaturas de transición característicamente diferentes.
La enfermedad mediada por Janus cinasa de acuerdo con la presente solicitud incluye, pero sin limitación, un tumor (por ejemplo, linfoma, leucemia). El linfoma de acuerdo con la presente solicitud incluye, pero sin limitación, enfermedad de Hodgkin o linfoma no Hodgkin, y el linfoma no Hodgkin incluye, pero sin limitación, linfoma de células B o linfoma de células T. La leucemia de acuerdo con la presente solicitud incluye, pero sin limitación, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mieloide aguda y leucemia mielocítica crónica.
En la presente solicitud, la expresión "composición farmacéutica" se refiere a una formulación de uno o varios compuestos de la presente solicitud y un vehículo, un excipiente y/o un medio generalmente aceptado en la técnica para transportar un compuesto bioactivo a un organismo (por ejemplo, ser humano). Un objeto de la composición farmacéutica es facilitar la administración del compuesto de la presente solicitud a un organismo.
El término "vehículo" se define como un compuesto que facilita la introducción de un compuesto en una célula o tejido. Por ejemplo, comúnmente se utiliza dimetilsulfóxido (DMSO) como vehículo, ya que es fácil emplearlo para introducir algunos compuestos orgánicos en células o tejidos de organismos.
La expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye, pero sin limitación, cualquier adyuvante, excipiente, lubricante, edulcorante, diluyente, conservante, tinte/colorante, agente saborizante, tensioactivo, agente humectante, dispersante, agente de suspensión, estabilizante, agente isotónico, disolvente o emulsionante, aprobado por la Administración Nacional de Fármacos como aceptable para uso en seres humanos o en animales de cría.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad del compuesto de la presente solicitud que, cuando es administrada a un mamífero, preferiblemente un ser humano, es suficiente para realizar el tratamiento de una infección vírica en un mamífero, preferiblemente en un ser humano, tal como se definirá más adelante. La cantidad del compuesto de la presente solicitud que constituye la "cantidad terapéuticamente eficaz" varía según el compuesto, el estado de la enfermedad y su gravedad, la vía de administración y la edad del mamífero a tratar, pero quienes posean una pericia ordinaria en la técnica pueden determinarla convencionalmente basándose en su propio conocimiento y en lo descrito en la presente solicitud.
El término "tratamiento" utilizado en la presente memoria abarca el tratamiento de infección vírica en mamíferos, preferiblemente infección vírica en seres humanos, y comprende:
(i) inhibir la infección vírica, es decir, detener su desarrollo;
(ii) aliviar la infección vírica; es decir, provocar el retroceso de la infección vírica; o
(iii) aliviar los síntomas causados por la infección vírica.
Todos los disolventes empleados en la presente solicitud están disponibles en el mercado, y se pueden utilizar sin purificación adicional. Las reacciones se llevan a cabo generalmente en una atmósfera inerte de nitrógeno, en un disolvente anhidro.
En la presente solicitud, los datos de resonancia magnética nuclear de protón se han registrado en un espectrómetro BRUKER AVANCE III HD 500M; el desplazamiento químico se expresa en ppm campo abajo desde tetrametilsilano; y el espectro de masas se mide mediante el instrumento Waters ACQUITY UPLC+XEVO G2 QTof. El espectrómetro de masas está equipado con una fuente de iones por electropulverización (ESI, por sus siglas en inglés) que se hace funcionar en modo positivo o negativo.
El cristal A y el cristal B del compuesto representado por la fórmula I de acuerdo con la presente solicitud presentan las ventajas de gran pureza, gran cristalinidad y buena estabilidad. Además, los métodos para preparar el cristal A y el cristal B del compuesto representado por la fórmula I de acuerdo con la presente solicitud son simples, los disolventes utilizados en los mismos son baratos y están fácilmente disponibles, y las condiciones de cristalización son suaves. Por ello, los métodos son adecuados para la producción industrial.
Se proporcionan los ejemplos siguientes para ilustrar aún más las soluciones técnicas de la presente solicitud de una manera no limitante. No deben interpretarse en el sentido de limitar el alcance de la presente invención, sino meramente como descripción ilustrativa y representantes típicos de la presente invención. Los disolventes, reactivos y materiales de partida utilizados en la presente solicitud son productos químicamente puros o analíticamente puros disponibles en el mercado.
Ejemplo 1: (3R)-3-{3-Amino-4-{7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}-3-ciclopentilpropanonitrilo (I)
Figure imgf000009_0001
I
Paso A: Ácido 3-ciclopentilacrílico
Figure imgf000009_0002
Se añadió gota a gota ciclopentilcarbaldehído (344,4 g, 3,51 mol, 1,17 eq.) a una solución 5 M de ácido propanodioico (312 g, 3,0 mol, 1,0 eq.) en piridina, a temperatura ambiente. Una vez completada la adición, se agitó durante 10 minutos la mezcla resultante. Después se añadió lentamente gota a gota piperidina (6,2 g, 0,075 mol, 0,025 eq.). Una vez completada la adición se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora la mezcla resultante. Se calentó a una temperatura de 70°C a 80°C la mezcla resultante, se agitó durante 8 horas y se concentró bajo presión reducida para evaporar el disolvente. Con ácido clorhídrico concentrado se ajustó a pH 3,0 el residuo, y se extrajo con acetato de etilo tres veces. Se combinaron las fases orgánicas y se lavaron cinco veces con una solución 2,5 M de hidróxido de sodio. Con ácido clorhídrico concentrado se ajustó a pH 3,0 la fase acuosa, y se extrajo con acetato de etilo tres veces. Se combinaron las capas orgánicas, se lavaron con agua tres veces, se lavaron con solución salina saturada, se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para obtener ácido 3-ciclopentilacrílico (391,2 g, rendimiento: 93%). 1H-RmN (500 MHz, CDCta): 57,08 (dd, J = 15,6, 8,1 Hz, 1H), 5,81 (dd, J = 15,6, 1,1 Hz, 1H), 11,25 (s, 1H), 2,64 (m, 1H), 1,63 (m, 2H), 1,42 (m, 2H), 1,86 (m, 2H), 1,72 (m, 2H); EMAR (ESI) calculado para C8H12O2 [M-H]- 139,0765; hallado: 139,0760.
Paso B: 5-Ciclopentilpirazolidin-3-ona
Figure imgf000010_0001
Se añadió gota a gota hidrato de hidrazina al 80% (253,5 g, 4,05 mol, 1,5 eq.) a ácido ciclopentilacrílico (378 g, 2,7 mol, 1,0 eq.), con agitación a temperatura ambiente. Se calentó a una temperatura de 70°C a 80°C la mezcla resultante, se agitó durante 6 horas, se enfrió a una temperatura de 0°C a 10°C, se agitó para efectuar la cristalización y se filtró. Se lavó con agua dos veces la torta del filtro y se secó con aire forzado a 45°C, durante 12 horas, para obtener 5-ciclopentilpirazolidin-3-ona (292,5 g, rendimiento 68%).
Paso C: D-Tartrato de R-5-ciclopentilpirazolidin-3-ona
Figure imgf000010_0002
Se añadió ácido D-tartárico (135 g, 0,9 mol, 0,5 eq.) a una solución de 5-ciclopentilpirazolidin-3-ona (278 g, 1,8 mol, 1,0 eq.) en acetona, con agitación a temperatura ambiente, se agitó durante 2 horas para efectuar la reacción, a fin de conseguir la cristalización, y se filtró. Se refinó con acetona 5 veces la torta del filtro y se secó bajo aire forzado a 50°C para obtener D-tartrato de R-5-ciclopentilpirazolidin-3-ona (241 g, rendimiento 88%, valor ee 99,5%).
Paso D: R-5-Ciclopentilpirazolidin-3-ona
Figure imgf000010_0003
Se añadió D-tartrato de R-5-ciclopentilpirazolidin-3-ona (228 g, 0,75 mol, 1,0 eq.) a una solución 4 M de hidróxido de sodio (52,2 g, 2,61 mol, 1,74 eq.), con agitación a temperatura ambiente, y se extrajo con diclorometano la mezcla resultante. Se combinaron las capas orgánicas, se secaron con sulfato de magnesio anhidro y se filtraron. Se concentró bajo presión reducida el filtrado para obtener R-5-ciclopentilpirazolidin-3-ona (100,6 g, rendimiento 85,2%, valor ee 99,5%). 1H-RMN (500 MHz, CDCla): 58,93 (s, 1H), 5,15 (s, 1H), 1,89 (m, 1H), 1,67 (m, 2H), 1,55 (m, 2H), 1,47 (m, 2H), 1,26 (m, 1H), 1,14 (m, 1H); EMAR (ESI) calculado para C8H14N2O [M+H]+ 155,1179; hallado: 155,1183. Paso E: 4-Cloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina
Figure imgf000010_0004
Se añadió una solución de 4-cloropirrolo[2,3-d]pirimidina (200 g, 1,3 mol, 1,0 eq.) en N,N-dimetilformamida a NaH al 60% (62,4 g, 1,56 mol, 1,2 eq.) en un baño de hielo. Una vez completada la adición, se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 hora para efectuar la reacción. Se añadió lentamente gota a gota cloruro de 2-(trimetilsilil)etoximetilo (SEMCl, 260 g, 1,56 mol, 1,2 eq.), enfriando en un baño de hielo. Una vez completada la adición, se agitó en un baño de hielo durante 1 hora la mezcla resultante, para efectuar la reacción, y se inactivó con agua la reacción. Se extrajo con acetato de etilo la mezcla resultante. Se combinaron las fases orgánicas, se lavaron con solución salina saturada, se secaron con sulfato de sodio anhidro y se filtraron. Se concentró bajo presión reducida el filtrado para obtener un residuo, que fue purificado mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener 4-cloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (312,2 g, rendimiento 91,8%). 1H-RMN (500 MHz, CDCla): 58,64 (s, 1H), 7,38 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,64 (s, 2H), 3,52 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 0,90 (t, J = 8,2 Hz, 2H), -0,07 (s, 9H); EMAR (ESI) calculado para C^HieNaOSi [M+H]+ 284,0980; hallado: 284,0995.
Paso F: 2-Ciano-2-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}acetato de etilo
Figure imgf000011_0001
Se añadió carbonato de potasio (207 g, 1,5 mol, 3,0 eq.) a una solución de 4-cloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (142 g, 0,5 mol, 1,0 eq.) y cianoacetato de etilo (85 g, 0,75 mol, 1,5 eq.) en DMF, con agitación a temperatura ambiente. Se calentó a 120°C la mezcla resultante, se agitó durante 4 horas para efectuar la reacción y después se enfrió hasta la temperatura ambiente. Se inactivó con agua la reacción, se agitó para efectuar la cristalización y se filtró. Se lavó con agua la torta del filtro y se secó con aire forzado a 50°C para obtener 2-ciano-2-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}acetato de etilo (167 g, rendimiento 92,6%). 1H-RMN (500 MHz, CDCh): 513,46 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,56 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,56 (s, 2H), 4,32 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,52 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 0,83 (t, J = 8,2 Hz, 2H), -0,08 (s, 9H); EMAR (ESI) calculado para C17H24N4OsSi [M+H]+ 361,1690; hallado: 361,1699.
Paso G: 2-{7-{[2-(Trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}acetonitrilo
Figure imgf000011_0002
Se añadió cloruro de sodio (263 g, 4,5 mol, 10 eq.) a una solución mixta de 2-ciano-2-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}acetato de etilo (162,2 g, 0,45 mol, 1,0 eq.) en N-metilpirrolidona y agua, con agitación a temperatura ambiente. Se calentó a una temperatura de 160°C a 170°C la mezcla resultante y se agitó durante 30 horas para efectuar la reacción. Se inactivó con agua la reacción. Se extrajo con acetato de etilo la mezcla resultante. Se lavó la fase orgánica con solución salina saturada, se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener 2-(7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)acetonitrilo (98,6 g, rendimiento 76%). 1H-RMN (500 mHz, CDCls): 58,18 (s, 1H), 7,77 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 5,65 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 3,52 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 0,82 (t, J = 7,6 Hz, 2H), -0,10 (s, 9H); EMAR (ESI) calculado para CuH20N4OSi [M+H]+ 289,1479; hallado: 289,1498.
Paso H: 3-(Dimetilamino)-2-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}acrilonitrilo
Figure imgf000011_0003
Se añadió DMF-DMA (119 g, 1,0 mol, 3,0 eq.) a una solución de 2-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}acetonitrilo (95 g, 0,33 mol, 1,0 eq.) en DMF. Se calentó a reflujo durante 2 horas la mezcla resultante, para efectuar la reacción, y después se enfrió hasta la temperatura ambiente. Se añadió agua y se agitó la mezcla resultante para efectuar la cristalización, y se filtró. Se lavó con agua la torta del filtro y se secó con aire forzado a 50°C para obtener 3-(dimetilamino)-2-(7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)acrilonitrilo (106,5 g, rendimiento 94%).
1H-RMN (500 MHz, CDCls): 58,50 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,26 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,56 (s, 2H), 3,49 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 3,43 (s, 3H), 3,23 (s, 3H), 0,87 (t, J = 8,4 Hz, 2H), -0,10 (s, 9H); EMAR (ESI) calculado para C ^aN sO Si [M+H]+ 344,1901; hallado: 344,1907.
Paso I: Ácido (R)-3-{3-amino-4-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}-3-ciclopentilpropiónico
Figure imgf000012_0001
Se añadió acetato de potasio (1,5 eq.) a una solución de 3-(dimetilamino)-2-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}acrilonitrilo (68,7 g, 0,2 mol, 1,0 eq.) y R-5-ciclopentilpirazolidin-3-ona (37,0 g, 0,24 mol, 1,2 eq.) en N-metilpirrolidona, con agitación a temperatura ambiente. Se calentó la mezcla resultante a una temperatura de 120°C a 130°C, y se agitó durante 12 horas para efectuar la reacción. Se inactivó con agua la reacción y se extrajo con acetato de etilo la mezcla resultante. Se lavó con agua tres veces la capa orgánica, se lavó con solución salina saturada y se secó con sulfato de sodio anhidro. Después de filtrar se obtuvo un residuo por concentración bajo presión reducida, y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener ácido (R)-3-{3-amino-4-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}-3-ciclopentilpropiónico (37,6 g, rendimiento 40,1%, valor ee 99,8%). 1H-RMN (500 MHz, CDCh): 58,74 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,32 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 5,63 (m, 2H), 4,19 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 3,52 (m, 1H), 3,52 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 3,09 (dd, J = 16,7, 8,2 Hz, 1H), 2,87 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 2,41 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 1,69 (m, 1H), 1,60 (m, 2H), 1,51 (m, 2H), 1,15 (m, 1H), 0,91 (t, J = 8,4 Hz, 2H), -0,06 (s, 9H); EMAR (ESI) calculado para C ^ s ^ O S i [M+H]+ 471,2534; hallado: 471,2538.
Paso J: Ácido (R)-3-{3-(2,5-dioxopirrol-1-il)-4-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}-3-ciclopentilpropiónico
Figure imgf000012_0002
Se añadió anhídrido succínico (10,4 g, 104 mmol, 1,4 eq.) a una solución 0,2 M de ácido (R)-3-{3-amino-4-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}-3-ciclopentilpropiónico (35,0 g, 74,3 mmol, 1,0 eq.) en metilbenceno, con agitación a temperatura ambiente. Se calentó a reflujo durante 14 horas la mezcla resultante, bajo la protección de nitrógeno gaseoso, para efectuar la reacción (eliminación de agua). Se evaporó el disolvente por concentración bajo presión reducida. Se disolvió en acetato de etilo el residuo y se lavó con agua, una solución saturada de bicarbonato de sodio y una solución salina saturada. Se secó la capa de acetato de etilo y se decoloró con sulfato de sodio anhidro y carbón activado con agitación, se filtró y se concentró bajo presión reducida para obtener ácido (R)-3-{3-(2,5-dioxopirrol-1 -il)-4-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}-3-ciclopentilpropiónico (39 g, 70,6 mmol, rendimiento 95%). 1H-RMN (500 MHz, CDCb): 58,65 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,28 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,59 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 5,53 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,44 (td, J = 9,9, 3,2 Hz, 1H), 3,48 (m, 2H), 3,02 (dd, J = 16,8, 10,0 Hz, 1H), 2,83 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 1,78 (m, 1H), 1,69 (m, 1H), 1,61 (m, 1H), 1,52 (m, 1H), 1,51 (m, 1H), 1,50 (m, 2H), 1,14 (m, 1H), 0,88 (m, 2H), -0,07 (s, 9H); EMAR (ESI) calculado para C27H36NsO5Si [m+H]+ 553,2589; hallado: 553,2603.
Paso K: (R)-3-Ciclopentil-3-[3-(2,5-dioxopirrol-1-il)-4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il]propanamida
Figure imgf000013_0001
Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (20,0 g, 158 mmol, 2,5 eq.) a una solución 0,18 M de ácido (R)-3-{3-(2,5-dioxopirrol-1-il)-4-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1-il}-3-ciclopentilpropiónico (35,0 g, 63,3 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano, con agitación en un baño de hielo y bajo la protección de nitrógeno gaseoso. Una vez completada la adición, se añadió gota a gota DMF (0,1 g, 1,3 mmol, 0,02 eq.) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora la mezcla resultante para efectuar la reacción, y se concentró bajo presión reducida para evaporar el disolvente. Se disolvió la mezcla resultante en THF que había sido secado con barras de sodio y se volvió a evaporar, y se añadió gota a gota la mezcla resultante a una solución 2 M de amoniaco acuoso (20,0, 0,32 mol, 5,0 eq.) en THF. Se agitó durante 30 minutos en un baño de hielo la mezcla resultante, para efectuar la reacción, se concentró bajo presión reducida para evaporar THF, se enfrió durante 2 horas en un baño de hielo para efectuar la cristalización, y se filtró. Se lavó con agua la torta del filtro, y se secó con aire forzado a 50°C para obtener (R)-3-ciclopentil-3-{3-(2,5-dioxopirrol-1-il)-4-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1H-pirazol-1-il}propanamida (29,8 g, rendimiento 85,5%).
1H-RMN (500 MHz, CDCla): 58,65 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,32 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 3,7, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,60 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 5,56 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 4,40 (td, J = 10,6, 3,2 Hz, 1H), 3,47 (dd, J = 9,1, 7,5 Hz, 2H), 2,99 (dd, J = 14,4, 11,0 Hz, 1H), 2,91 (s, 4H), 2,67 (dd, J = 14,4, 3,3 Hz, 1H), 2,48 (m, 1H), 1,84 (m, 1H), 1,66 (m, 1H), 1,58 (m, 2H), 1,57 (m, 1H), 1,50 (m, 1H), 1,31 (m, 1H), 1,21 (m, 1H), 0,88 (dd, 9,1, 7,5, 2H), -0,08 (s, 9H); EMAR (ES) calculado para C2yH3yNyO4Si [M+H]+ 552,2749; hallado: 552,2759.
Paso L: (R)-3-Ciclopentil-3-[3-(2,5-dioxopirrol-1-il)-4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-p i razo l -1 -il]propionitrilo
Figure imgf000013_0002
Se añadió gota a gota oxicloruro de fósforo (27,8 g, 181 mmol, 4,0 eq.) a una solución 0,2 M de (R)-3-ciclopentil-3-{3-(2,5-dioxopirrol-1-il)-4-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1-il}propanamida (25 g, 45,3 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano, con agitación en un baño de hielo. Una vez completada la adición, se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente la mezcla resultante, para efectuar la reacción. Se inactivó con agua la reacción. Se lavó con agua la capa orgánica, se secó y se decoloró con sulfato de magnesio anhidro y carbón activado, con agitación. Después de filtrar, se eliminó el disolvente por concentración bajo presión reducida, para obtener (R)-3-ciclopentil-3-{3-(2,5-dioxopirrol-1-il)-4-{7-{[2-(trimetilsilil))etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}propionitrilo (22,2 g, 41,7 mmol, rendimiento 92%).1
1H-RMN (500 MHz, CDCla): 58,70 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,35 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,62 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,58 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,30 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,09 (dd, J = 16,8, 4,3 Hz, 1H), 3,01 (dd, J = 16,8, 4,3 Hz, 1H), 2,94 (s, 4H), 2,62 (m, 1H), 1,96 (m, 1H), 1,69 (m, 2H), 1,60 (m, 1H), 1,58 (m, 2H), 1,27 (m, 2H), 0,90 (t, J = 8,3 Hz, 2H), -0,06 (s, 9H); EMAR (ESI) calculado para CayHsaNyOsSi [M+H]+ 534,2643; hallado: 534,2657.
Paso M: (R)-3-Ciclopentil-3-{3-(2,5-dioxopirrol-1 -il)-4-{(7-hidroxilmetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}propionitrilo
Figure imgf000014_0001
Se añadió gota a gota una solución al 47% de trifluoruro de boro (34 g, 112,5 mmol, 3,0 eq.) en dietiléter, a una solución 0,2 M de (R)-3-ciclopentil-3-{3-(2,5-dioxopirrol-1 -il)-4-{7-{[2-(trimetilsilil)etoxi]metil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}propionitrilo (20 g, 37,5 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano, con agitación en un baño de hielo. Una vez completada la adición, se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente la mezcla resultante, para efectuar la reacción. Se inactivó con agua la reacción. Con una solución de NaOH al 10% se ajustó a pH 6-7 la mezcla resultante y se extrajo con acetato de etilo. Se lavó con agua la capa orgánica, se lavó con solución salina saturada y se secó con sulfato de magnesio anhidro, con agitación. Después filtrar, se concentró bajo presión reducida el filtrado para obtener (R)-3-ciclopentil-3-[3-(2,5-dioxopirrol-1 -il)-4-(7-hidroxilmetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il]propionitrilo (14,4 g, rendimiento 88,5%).
1H-RMN (500 MHz, CDCla): 58,54 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,31 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 6,52 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,68 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 5,61 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,32 (m, 1H), 3,13 (dd, J = 17,2, 7,9 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 17,2, 4,3 Hz, 1H), 2,94 (s, 4H), 2,62 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 1,74 (m, 1H), 1,65 (m, 1H), 1,64 (m, 2H), 1,30 (m, 1H), 1,29 (m, 2H); EMAR (ESI) calculado para C22H23N7O3 [M+H]+ 434,1935; hallado: 434,1944.
Paso N: (R)-3-[3-Amino-4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il]-3-ciclopentilpropanonitrilo (I)
Figure imgf000014_0002
Se añadió gota a gota hidrato de hidrazina al 80% (8,7 g, 138 mmol, 5,0 eq.) a una solución 0,2 M de (R)-3-{3-(2,5-dioxopirrol-1 -il)-4-{(7-hidroximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-1 H-pirazol-1 -il}-3-ciclopentilpropanonitrilo (12 g, 27,7 mmol, 1,0 eq.) en metanol, con agitación a temperatura ambiente. Una vez completada la adición, se calentó a reflujo durante 8 horas la mezcla resultante, para efectuar la reacción, y se concentró bajo presión reducida para evaporar el disolvente. Se disolvió en acetato de etilo el residuo, se lavó con agua, se lavó con solución salina saturada y se secó durante una noche con sulfato de sodio anhidro. Después de filtrar, se concentró bajo presión reducida el filtrado, para obtener (R)-3-[3-amino-4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il]-3-ciclopentilpropanonitrilo (I) (7,7 g, rendimiento 87%, valor ee 99,8%).
1H-RMN (500 MHz, CDCla): 511,73 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,32 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,03 (s, 2H), 4,05 (td, J = 9,5, 3,5 Hz, 1H), 3,12 (dd, J = 17,1, 8,9 Hz, 1H), 2,91 (dd, J = 17,1, 3,6 Hz, 1H), 2,54 (m, 1H), 1,74 (m, 1H), 1,63 (m, 4H), 1,27 (m, 1H), 1,26 (m, 2H); EMAR (ESI) calculado para C17H19N7 [M+H]+ 322,1775; hallado: 322,1783.
Ejemplo 2: Cristal A del compuesto representado por la fórmula I
Método 1
Se añadieron 2,0 g del compuesto representado por la fórmula I, obtenido en el Ejemplo 1, a 24 mL de etanol anhidro. Se calentó a reflujo la mezcla resultante para obtener una solución transparente, se enfrió a una temperatura de 0°C a 5°C, se agitó durante 4 horas para efectuar la cristalización y se filtró. Se lavó la torta del filtro con 2 mL de etanol anhidro y se secó bajo presión reducida a 50°C para obtener 1,62 g de un producto (rendimiento 81%).
Método 2
Se añadieron 4 partes de 2,0 g del compuesto representado por la fórmula I, obtenido en el Ejemplo 1, a 20 mL de un disolvente mezcla de etanol anhidro y acetato de etilo (4:1, 2:1, 1:1, 1:4), respectivamente. Se calentaron a reflujo las mezclas resultantes para obtener una solución transparente, se enfriaron a una temperatura de 0°C a 5°C, se agitaron durante 4 horas para efectuar la cristalización y se filtraron. Se lavaron las tortas de filtración con 2 mL de acetato de etilo y se secaron bajo presión reducida a 50°C para obtener 1,34 g, 1,06 g, 1,00 g y 1,60 g de productos (rendimiento: 67%, 53%, 50%, 80%).
Método 3
Se añadieron 2,0 g del compuesto representado por la fórmula I, obtenido en el Ejemplo 1, a 20 mL de una solución mezcla de etanol anhidro y agua (4:1). Se calentó a reflujo la mezcla resultante para obtener una solución transparente, se enfrió a una temperatura de 0°C a 5°C, se agitó durante 4 horas para efectuar la cristalización y se filtró. Se lavó la torta del filtro con 2 mL de etanol anhidro y se secó bajo presión reducida a 50°C para obtener 1,6 g de un producto (rendimiento 80%).
Método 4
Se añadieron 2,0 g del compuesto representado por la fórmula I, obtenido en el Ejemplo 1, a 15 mL de acetona. Se calentó a reflujo la mezcla resultante para obtener una solución transparente, se enfrió a una temperatura de 0°C a 5°C, se agitó durante 4 horas para efectuar la cristalización y se filtró. Se lavó la torta del filtro con 2 mL de acetona y se secó bajo presión reducida a 50°C para obtener 1,22 g de un producto (rendimiento 61%).
Método 5
Se añadieron 2,0 g del compuesto representado por la fórmula I, obtenido en el Ejemplo 1, a 50 mL de acetato de etilo. Se calentó a reflujo la mezcla resultante para obtener una solución transparente. Se evaporó el disolvente por concentración bajo presión reducida para obtener 1,98 g de un producto (rendimiento 99%).
Método 6
Se añadieron 2,0 g del compuesto representado por la fórmula I, obtenido en el Ejemplo 1, a 60 mL de diclorometano. Se calentó a reflujo la mezcla resultante para obtener una solución transparente. Se evaporó el disolvente por concentración bajo presión reducida para obtener 2,0 g de un producto (rendimiento 100%).
Método 7
Se añadieron 2,0 g del compuesto representado por la fórmula I, obtenido en el Ejemplo 1, a 24 mL de etanol anhidro. Se calentó a reflujo la mezcla resultante para obtener una solución transparente. Se añadieron gota a gota 120 mL de isopropiléter. Se enfrió la mezcla resultante a una temperatura de 0°C a 5°C, se agitó durante 4 horas para efectuar la cristalización y se filtró. Se lavó la torta del filtro con 2 mL de isopropiléter y se secó bajo presión reducida a 50°C para obtener 1,56 g de un producto (rendimiento 78%).
En la Figura 1 y en la Figura 2 se muestran, respectivamente, un patrón de XRD típico y un espectro de DSC típico del cristal A del compuesto representado por la fórmula I (método 1 del Ejemplo 2).
En la Figura 3 se muestra otro patrón de XRD típico del cristal A del compuesto representado por la fórmula I (método 2 del Ejemplo 2, etanol-acetato de etilo (4:1)).
En la Figura 4 se muestra otro patrón de XRD típico más del cristal A del compuesto representado por la fórmula I (método 3 del Ejemplo 2).
Ejemplo 3: Cristal B del compuesto representado por la fórmula I
Se añadieron 2,0 g del compuesto representado por la fórmula I, obtenido en el Ejemplo 1, a 25 mL de acetonitrilo. Se calentó a reflujo la mezcla resultante para obtener una solución transparente, se enfrió a una temperatura de 0°C a 5°C, se agitó durante 4 horas para efectuar la cristalización y se filtró. Se lavó la torta del filtro con 2 mL de acetonitrilo y se secó bajo presión reducida a 50°C para obtener 1,82 g de un producto (rendimiento 91%).
El cristal B del compuesto representado por la fórmula I es un acetonitrilato del compuesto representado por la fórmula I. En la Figura 5 y en la Figura 6 se muestran, respectivamente, un patrón de XRD típico y un espectro de DSC típico del cristal B del compuesto representado por la fórmula I.
Ejemplo 4: Ensayo de estabilidad
Se colocaron en un recipiente limpio abierto, a 60°C, el cristal A obtenido en el método 1 del Ejemplo 2 y el cristal B obtenido en el Ejemplo 3, y se tomaron muestras para análisis los días 5 y 10, respectivamente. Se compararon los resultados del análisis con el resultado del análisis inicial en el día 0, y en la siguiente tabla se muestran los resultados del ensayo:
Figure imgf000016_0001
Ejemplo 5: Ensayos de actividad biológica
1. Ensayo de actividad enzimática (CI50) de los compuestos
Se estableció una plataforma de prueba acerca de la actividad de cinasa JAK2 (tipo natural) basada en el ensayo de fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo (HTRF, por sus siglas en inglés), y se ensayaron las actividades de los compuestos utilizando la plataforma. Desde una concentración de partida 1 mM, se efectuaron con DMSO al 100% diluciones a un tercio en gradiente (11 diluciones en total) de los compuestos. Se añadieron 4 gL de cada dilución a 96 gL de tampón de reacción (HEPES 50 mM, pH 7,4, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM, Tween-20 al 0,01%, BAS al 0,005%, DTT 2 mM) y se mezclaron homogéneamente. Luego se añadieron 2,5 gL del líquido resultante a una placa de 384 pocillos (OptiPlate-384, disponible de PerkinElmer) y después se añadieron 5 gL de cinasa JAK2 (disponible de Carna). Se mezcló homogéneamente la mezcla mediante centrifugación. A continuación se añadieron 2,5 gL de una mezcla de ATP (la concentración final era el valor Km correspondiente) y péptido TK (HTRF® KinEASE-TK, disponible de Cisbio) para iniciar la reacción (el volumen total de reacción era 10 gL). Se dispuso la placa de 384 pocillos en una incubadora y se dejó que tuviera lugar la reacción durante 120 minutos a 23°C. Después se detuvo la reacción añadiendo 5 gL de anticuerpo antifosfotirosina marcado con criptato de Eu3+ (disponible de Cisbio) y 5 gL de Streptavidin-XL-665 (HTRF® KinEASE™-TK, disponible de Cisbio). Se incubó la placa en la incubadora durante 1 hora y después se leyeron los valores de fluorescencia en Envision (disponible de PerkinElmer). La longitud de onda de excitación era 320 nm y las longitudes de onda de emisión para detección eran 665 nm y 620 nm. La actividad enzimática estaba representada por la relación entre las dos lecturas a las dos longitudes de onda de emisión. Se analizó la actividad enzimática de cada compuesto a 11 concentraciones, y se obtuvieron los valores de CI50 de los compuestos realizando el cálculo de los datos mediante el software GraFit6.0 (Erithacus Software). Como se puede deducir de los resultados, tanto el valor de CI50 del compuesto representado por la fórmula I como el valor de CI50 del testigo ruxolitinib eran inferiores a 20 nM.
2. Ensayo de eficacia en el modelo de tumor de xenoinjerto subcutáneo en ratón
Los ratones desnudos Balb/c de calidad SPF eran hembras y tenían 5-6 semanas de edad. Se inyectaron subcutáneamente 0,1 mL de la suspensión de células Ba/F3-JAK2V617F en medio de cultivo sin suero (que contenía 1x107 células, MatriGel al 50%) en el ijar derecho de cada ratón. Cuando el volumen medio del tumor llegó a aproximadamente 500 mm3 , se sacrificaron los ratones portadores de tumor. Se extirparon asépticamente los tejidos tumorales y se cortaron en pequeños trozos, que se implantaron subcutáneamente en ambos ijares de ratones desnudos Balb/c. Cuando el volumen tumoral medio llegó a aproximadamente 100 mm3 , se marcó cada ratón siguiendo números de orden y se determinaron el tamaño de los tumores y los pesos corporales, respectivamente. Se segregaron aleatoriamente estos ratones, comenzando por los de volumen tumoral pequeño hasta los de volumen tumoral grande, y se configuró adecuadamente cada grupo de animales para que el peso corporal medio de los grupos estuviera al mismo nivel. Los cinco grupos fueron el grupo testigo negativo, el grupo testigo positivo, el grupo de dosis baja, el grupo de dosis moderada y el grupo de dosis alta, respectivamente, y cada grupo constaba de cinco ratones. La administración se inició el día de la segregación, efectuándose dos veces al día durante 14 días. Durante el período de administración, se determinaron los volúmenes de los tumores y los pesos corporales dos veces por semana. Los ratones fueron sacrificados al final del experimento, y se aisló y pesó el bazo. Durante el experimento se midieron el máximo diámetro longitudinal (L) y el máximo diámetro transverso (W) en la dirección vertical del tumor, para calcular el volumen tumoral (V) según la fórmula V (mm3) = L x W2/2. Relación de inhibición del crecimiento tumoral ICT (%) = 100% x (1-(Tt-T0)/(Vt-Vü)), donde Tt representa el volumen tumoral medio medido cada vez en el grupo de tratamiento; T0 representa el volumen tumoral medio del grupo de tratamiento en el momento de la segregación; Vt representa el volumen tumoral medio medido cada vez en el grupo testigo; y V0 representa el volumen tumoral medio del grupo testigo en el momento de la segregación.
Los resultados se muestran en la tabla siguiente.
ICT (%) Compuesto Dosis Vía de Frecuencia de
(mg/kg) administración administración
3 d 7 d 10 d 14 d '
ruxolitinib ' 100 BID 47,96 ' 47,23 ' 77,72 ' 64,45 '
25 PO BID 45,45 16,85 54,49 40,74 clorhidrato del
compuesto
representado por la 50 PO BID 41,77 43,60 65,19 68,40 fórmula I
100 PO BID 91,62 79,76 89,37 85,76
De los datos mostrados en la tabla se puede deducir que el clorhidrato del compuesto representado por la fórmula I fue ensayado para determinar el efecto inhibidor del tumor in vivo en el modelo de ratones portadores de tumor Ba/F3-JAK2V617F, y se encontró que presentaba efecto inhibidor, dependiente de la dosis, sobre el crecimiento de tumor Ba/F3-JAK2V617F, y que el efecto de supresión tumoral era muy notable. Tras la administración oral del clorhidrato del compuesto representado por la fórmula I (100 mg / kg) dos veces al día durante 14 días, la tasa de inhibición del crecimiento tumoral (ICT) alcanzó el 85,8%, mientras que para el testigo positivo ruxolitinib (100 mg/kg) en condiciones equivalentes, la tasa de inhibición del crecimiento tumoral (ICT) fue solamente 64,5%. El clorhidrato del compuesto representado por la fórmula I (50 mg/kg) también exhibió un notable efecto de supresión tumoral y la ICT alcanzó 68,4%, que era comparable al efecto de supresión tumoral del testigo positivo ruxolitinib (100 mg/kg). 3. Ensayo farmacocinético en ratas SD macho/hembra adultas
Se obtuvieron ratas SD hembras adultas sanas de Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. Se segregaron las ratas en dos grupos a razón de tres ratas por grupo, y se les administró separadamente por vía oral, mediante administración intragástrica única, la suspensión de una muestra a ensayar (30 mg/kg). Antes del experimento se mantuvo en ayunas a los animales durante una noche, y el tiempo de ayuno abarcó desde 10 horas antes de la administración hasta 4 horas después de la administración. Tras la administración, se tomaron muestras de sangre transcurridas 0,25 h, 0,5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h y 24 h. Después de narcotizar a los animales con isoflurano empleando una máquina de anestesia para animales pequeños, se extrajeron 0,4 mL de sangre entera del plexo venoso del fondo del ojo y se dispusieron en un tubo con anticoagulante heparina. La muestra, a 4°C, fue centrifugada a 4200 r. p. m. durante 5 minutos, y se transfirió plasma a un tubo de centrífuga y se conservó a -80°C hasta el inicio del análisis. Se extrajo la muestra de plasma mediante el método de precipitación de proteínas y se analizó mediante CL/EM/EM el líquido del extracto.
Parámetro Unidad Compuesto representado por la fórmula I ruxolitinib3
t1/2 h 2,20 1,22 '
Tmax h 0,58 0,50
Cmax ng/mL 2204 1143
AUCINFobs h*ng/mL 6316 1345
Nota: a. Los datos se han obtenido de la revisión de farmacología publicada por la FDA (Administración de Alimentos y Medicamentos de los EE. UU.).
Los datos farmacocinéticos en ratas (30 mg/kg PO) mostraban que los datos del compuesto representado por la fórmula I eran superiores a los del ruxolitinib.
4. Ensayo farmacocinético en perros beagle adultos
En este estudio se utilizaron cuatro perros beagle adultos sanos, disponibles de Beijing Marshall Biotechnology Co., Ltd. El estudio se realizó en dos veces: en la primera, la administración a los animales (dos machos y dos hembras) se realizó mediante una única inyección intravenosa con una dosis de 5 mg/kg; en la segunda, la administración al mismo grupo de animales (dos machos y dos hembras) se realizó una semana después mediante administración intragástrica única con una dosis de 10 mg/kg. Antes del experimento se mantuvo en ayunas durante una noche a los animales que iban a ser sometidos a la administración intragástrica, y el tiempo de ayuno abarcó desde 10 h antes de la administración hasta 4 h después de la administración. El grupo de animales que fueron sometidos a la administración intravenosa tenía acceso libre a alimento. En el grupo de administración intravenosa, la toma de muestras de sangre tras la administración se efectuó transcurridas 0,083 h, 0,25 h, 0,5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h y 24 h. En el grupo de administración intragástrica, la toma de muestras de sangre tras de la administración se efectuó transcurridas 0,25 h, 0,5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h y 24 h. Después de narcotizar ligeramente a los animales con isoflurano, se extrajeron 0,4 mL de sangre entera del plexo venoso orbital con un tubo de vidrio para recogida de sangre, y se dispusieron en un tubo anticoagulante con heparina. La muestra, a 4°C, fue centrifugada a 4200 r. p. m. durante 5 minutos, y se transfirió el plasma a un tubo de centrífuga y se conservó a -80°C hasta el inicio del análisis. Se extrajo la muestra en plasma mediante el método de precipitación de proteínas y se analizó mediante CL/EM/EM el líquido del extracto.
Figure imgf000018_0001
Nota: a. Los datos se han obtenido de la revisión de farmacología publicada por la FDA (Administración de Alimentos y Medicamentos de los EE. UU.).
Los datos farmacocinéticos en perros (10 mg/kg PO, 5 mg/kg IV) mostraron que el AUC del compuesto representado por la fórmula I, administrado por vía IV era comparable al del testigo positivo ruxolitinib, pero la biodisponibilidad del compuesto representado por la fórmula I administrado por vía oral era superior a la del testigo positivo ruxolitinib (114% frente a 57%).

Claims (11)

REIVINDICACIONES
1. Un cristal A de un compuesto representado por la fórmula I:
Figure imgf000019_0001
en donde un patrón de difracción de rayos X del cristal A del compuesto representado por la fórmula I tiene picos de difracción a 20 de 9,35°±0,2°, 11,93°±0,2°, 16,32°±0,2°, 21,23°±0,2°, 23,13°±0,2° y 25,58°±0,2°; típicamente tiene picos de difracción a 20 de 9,35°±0,2°, 11,93°±0,2°, 16,32°±0,2°, 18,82°±0,2°, 20,54°±0,2°, 21,23°±0,2°, 23,13°±0,2° y 25,58°±0,2°; más típicamente tiene picos de difracción a 20 de 9,35°±0,2°, 10,93°±0,2°, 11,93°±0,2°, 14,46°±0,2°, 16,32°±0,2°, 18,82°±0,2°, 20,54°±0,2°, 21,23°±0,2°, 21,66°±0,2°, 23,13°±0,2°, 25,58°±0,2° y 26,34°±0,2°; y aún más típicamente tiene picos de difracción a 20 de 9,35°±0,2°, 10,93°±0,2°, 11,93°±0,2°, 14,46°±0,2°, 16,32°±0,2°, 17,28°±0,2°, 18,82°±0,2°, 19,25°±0,2°, 20,54°±0,2°, 21,23°±0,2°, 21,66°±0,2°, 22,15°±0,2°, 23,13°±0,2°, 24,09°±0,2°, 25,58°±0,2° y 26,34°±0,2°.
2. Un método para preparar el cristal A del compuesto representado por la fórmula I según la reivindicación 1, que comprende los pasos siguientes:
1) disolver el compuesto representado por la fórmula I en un disolvente de cristalización, en donde el disolvente de cristalización se selecciona de metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, monometiléter de etilenglicol, dietiléter, isopropiléter, metil-t-butiléter, dioxano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, acetona, 1-butanona, 2-butanona, acetato de etilo, formiato de etilo, acetato de metilo, acetato de isopropilo, diclorometano, cloroformo, agua, o un disolvente mezcla de dos o más cualesquiera de los disolventes anteriores; y
2) cristalizar el compuesto representado por la fórmula I.
3. El método según la reivindicación 2, en donde el disolvente de cristalización es etanol, isopropiléter, acetato de etilo, acetona, diclorometano, agua, o un disolvente mezcla de dos o más cualesquiera de los disolventes anteriores; y preferiblemente etanol, un disolvente mezcla de etanol y acetato de etilo, un disolvente mezcla de etanol y agua, un disolvente mezcla de etanol e isopropiléter, acetona, acetato de etilo o diclorometano.
4. Una composición cristalina, en donde el cristal A del compuesto representado por la fórmula I según la reivindicación 1 supone el 50% o más, preferiblemente el 80% o más, más preferiblemente el 90% o más, y lo más preferiblemente el 95% o más, en peso de la composición cristalina.
5. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del cristal A del compuesto representado por la fórmula I según la reivindicación 1, o la composición cristalina según la reivindicación 4.
6. Uso del cristal A del compuesto representado por la fórmula I según la reivindicación 1, la composición cristalina según la reivindicación 4, o la composición farmacéutica según la reivindicación 5 en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad mediada por Janus cinasa.
7. Un cristal B de un compuesto representado por la fórmula I:
Figure imgf000020_0001
que es un acetonitrilato del compuesto representado por la fórmula I, en donde una relación molar del compuesto representado por la fórmula I con respecto a acetonitrilo está en el intervalo de 1:0,5 a 1:2,0, y preferiblemente 1:0,5, 1:1, 1:1,5 o 1:2,0;
en donde un patrón de difracción de rayos X del cristal B del compuesto representado por la fórmula I tiene picos de difracción a 20 de 8,97°±0,2°, 9,39°±0,2°, 12,90°±0,2°, 17,70°±0,2°, 20,31°±0,2° y 23,63°±0,2°; típicamente tiene picos de difracción a 20 de 8,97°±0,2°, 9,39°±0,2°, 12,90°±0,2°, 16,54°±0,2°, 17,70°±0,2°, 19,20°±0,2°, 20,31°±0,2°, 22,78°±0,2° y 23,63°±0,2°; y más típicamente tiene picos de difracción a 20 de 8,97°±0,2°, 9,39°±0,2°, 11,24°±0,2°, 12,90°±0,2°, 14,56°±0,2°, 16,54°±0,2°, 17,70°±0,2°, 19,20°±0,2°, 20,31°±0,2°, 22,23°±0,2°, 22,78°±0,2°, 23,63°±0,2° y 25,55°±0,2°.
8. Un método para preparar el cristal B del compuesto representado por la fórmula I según la reivindicación 7, que comprende los pasos siguientes:
1) disolver el compuesto representado por la fórmula I en acetonitrilo; y
2) cristalizar el compuesto representado por la fórmula I.
9. Una composición cristalina, en donde el cristal B del compuesto representado por la fórmula I según la reivindicación 7 supone el 50% o más, preferiblemente el 80% o más, más preferiblemente el 90% o más, y lo más preferiblemente el 95% o más, en peso de la composición cristalina.
10. Una composición farmacéutica, que comprende una cantidad eficaz del cristal B del compuesto representado por la fórmula I según la reivindicación 7, o la composición cristalina según la reivindicación 9.
11. Uso del cristal B del compuesto representado por la fórmula I según la reivindicación 7, la composición cristalina según la reivindicación 9, o la composición farmacéutica según la reivindicación 10 en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad mediada por Janus cinasa.
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