CN105770355A - 一种预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂及其应用，该复合制剂由不同菌株与载体复配而成，其中包括酪酸菌含量不低于2×109 CFU/g、保藏编号为CGMCC No. 11386的唾液乳杆菌含量不低于5×109 CFU/g、大蒜提取物和桑叶提取物。本发明的复合制剂对鸡源大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌等具有显著的抑制效果，应用于肉鸡养殖中，可显著降低因产气荚膜梭菌引起的坏死性肠炎的发病率及死亡率，促进肉鸡生长。

Description

一种预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂及其应用
技术领域
本发明属于微生态技术领域，具体涉及一种预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂及其应用。
背景技术
鸡坏死性肠炎是家禽养殖业中普遍存在的一种肠毒性疾病，该病以突然发病、急性死亡为特征，病死率较高，给养鸡业造成巨大的经济损失；一般在潮湿温暖的季节发病较多，多发生在2~8周龄的鸡只，特别是肉仔鸡多发，发病率在我国呈现逐年上升的趋势。产气荚膜梭菌在肠道的过度增殖是引起禽类坏死性肠炎的重要因素之一。
传统的预防和治疗方法是在饮用水或者饲料中添加抗生素，但过度依赖抗生素会导致病菌耐药性增强，鸡肠道有益菌群数量减少，进而引起鸡生产性能的下降。研究发现饲喂有益菌，可减少产气荚膜梭菌在肠道内的定植，降低坏死性肠炎的发病程度，帮助机体恢复肠道菌群的自然平衡。
发明内容
本发明提供了一种预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂及其应用，所述复合制剂安全性高，无毒副作用，对鸡源大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌等具有显著的抑制效果，应用于肉鸡养殖中，可显著降低肉鸡因产气荚膜梭菌引起的坏死性肠炎的发病率及死亡率，促进肉鸡生长。
为实现上述发明目的，本发明通过下述技术方案予以实现：
本发明提供了一种预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂，所述复合制剂含有菌含量不低于2×109CFU/g的酪酸菌、菌含量不低于5×109CFU/g的唾液乳杆菌、大蒜提取物、桑叶提取物和载体，所述大蒜提取物占复合制剂总质量的5~15%，所述桑叶提取物占复合制剂总质量的1~10%。
进一步的：所述唾液乳杆菌选用保藏编号为：CGMCCNo.11386的唾液乳杆菌XJP2。
进一步的：所述的载体为玉米芯粉，60目筛上物为0。
进一步的：所述大蒜提取物占复合制剂总质量为10%。
进一步的：所述桑叶提取物占复合制剂总质量为5%。
本发明还提供了所述的复合制剂在制备用于预防肉鸡坏死性肠炎的添加剂中的应用。
进一步的：所述复合制剂添加到饲料中使用，添加量占饲料总质量的1～3‰。
进一步的：所述复合制剂对鸡源大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌有显著抑制作用。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和技术效果：本发明选用的唾液乳杆菌XJP2是从鸡肠道中分离出来的益生菌菌株，耐酸、耐胆盐，有助于在肠道黏附定植，可有效调节肠道菌群数量并促进生长；唾液乳杆菌、酪酸菌、大蒜提取物和桑叶提取物配合使用，可通过竞争性抑制、产生抗菌物质等有效抑制肠道致病菌的繁殖，提高机体免疫力，降低肉鸡因产气荚膜梭菌引起的坏死性肠炎的发病率及死亡率。
附图说明
图1为所述复合制剂对鸡源致病菌的抑菌测定；
图2为所述产气荚膜梭菌qPCR扩增曲线。
具体实施方式
结合以下具体实例对本发明作进一步详细的说明。
实施例1、唾液乳杆菌的筛选
1、唾液乳杆菌XJP2的分离筛选
以健康肉鸡为样品，用无菌载玻片刮取盲肠黏膜于无菌水中，振荡混匀进行梯度稀释，MRS培养基倾注培养筛选“溶钙圈”明显的菌落，多次纯化后得到单菌落，命名为XJP2，保存。
所述菌株XJP2在MRS平板的菌落形态如图1所示，其生物学特性：革兰氏阳性、镜检为短杆状；菌落圆形、光滑平整，边缘整齐，较湿润，乳白色。生理生化指标显示菌株XJP2不能还原硝酸盐，不液化明胶，不产生吲哚和硫化氢，且接触酶试验阴性。
2、唾液乳杆菌XJP2的16SrRNA序列测定
以所述菌株XJP2的DNA为模板，16SrRNA通用引物进行扩增，扩增片段进行序列测定；Blast比对显示该菌株序列与GenBank基因库中Lactobacillussalivarius的16srRNA序列同源度最高，同源率为99%。通过DNAMAN6.0对Genbank中已有的乳杆菌属的16SrRNA序列进行遗传进化分析，结果显示，菌株XJP2与Lactobacillussalivarius同源性最高，判定该菌株XJP2为唾液乳杆菌。
将筛选到的菌株XJP2进行菌种保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2015年9月16日；唾液乳杆菌Lactobacillussalivarius的保藏编号为CGMCCNo.11386。
实施例2、所述复合制剂的制备
本发明所述预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂包括以下组分：菌含量为2.3×109CFU/g的酪酸菌、菌含量为5.7×109CFU/g的唾液乳杆菌、占复合制剂质量比10%的大蒜提取物（10:1）、占复合制剂质量比5%的桑叶提取物（10:1）和载体，载体为玉米芯粉。所述大蒜提取物（10:1）和桑叶提取物（10:1）为市售商品。
实施例3、所述复合制剂的抑菌作用
取20g所述复合制剂于无菌水中浸泡30min后，离心取上清测定其对鸡源大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌的抑制作用。采用96孔板倍比稀释复合物，加入相应菌液（约106CFU/mL）37℃培养16h，酶标仪测定OD630nm。从图1中可以看出，该复合物对3种致病菌具有较好的抑制作用，稀释倍数增大，抑菌能力有所下降。
实施例4、所述复合制剂在白羽肉鸡养殖中的应用
2015年9月，潍坊某鸡场约400只白羽肉鸡精神沉郁，少食，腹泻症状；解剖发现某些病禽腹腔液增多，肠道胀气，脾脏肿大；取盲肠内容物荧光定量测定发现产气荚膜梭菌数量显著高于健康肉鸡组（P<0.05）。对此400只病禽进行试验并跟踪观察，复合物拌料使用，添加量为3‰。结果如表1和表2所示，连续使用15天后，肉鸡生长状况明显改善，死亡率下降；复合物组和抗生素组的胸腺指数显著高于对照组，脾脏、法氏囊组无差异，说明该复合物能缓解产气荚膜梭菌引起的坏死性肠炎死亡率，促进免疫器官发育，提高机体抵抗力。养殖中定期使用该复合物，可有效预防肉鸡坏死性肠炎的发病率，减少抗生素的使用。
表1复合制剂的应用试验结果
组别 病禽数 死亡率
对照组 130 53.5%
常规药物组 130 24.9%
复合物组 130 25.8%
表2免疫器官指数（mg/g）
组别 胸腺指数 脾脏指数 法氏囊指数
对照组 3.02±0.15 0.52±0.03 1.56±0.03
常规药物组 4.15±0.08 a 0.68±0.05 1.99±0.04
复合物组 3.89±0.12 a 0.64±0.05 1.84±0.11
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1.一种预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂，其特征在于：所述复合制剂含有菌含量不低于2×109CFU/g的酪酸菌、菌含量不低于5×109CFU/g的唾液乳杆菌、大蒜提取物、桑叶提取物和载体，所述大蒜提取物占复合制剂总质量的5~15%，所述桑叶提取物占复合制剂总质量的1~10%。
2.根据权利要求1所述的预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂，其特征在于：所述唾液乳杆菌选用保藏编号为：CGMCCNo.11386的唾液乳杆菌XJP2。
3.根据权利要求1所述的预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂，其特征在于：所述载体为玉米芯粉，60目筛上物为0。
4.根据权利要求1所述的预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂，其特征在于：所述大蒜提取物占复合制剂总质量为10%。
5.根据权利要求1所述的预防肉鸡坏死性肠炎的复合制剂，其特征在于：所述桑叶提取物占复合制剂总质量为5%。
6.权利要求1-5任一项所述的复合制剂在制备用于预防肉鸡坏死性肠炎的添加剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的复合制剂在制备用于预防肉鸡坏死性肠炎的添加剂中的应用，其特征在于：所述复合制剂添加到饲料中使用，添加量占饲料总质量的1～3‰。
8.根据权利要求6所述的复合制剂在制备用于预防肉鸡坏死性肠炎的添加剂中的应用，其特征在于：所述复合制剂对鸡源大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌有显著抑制作用。
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