CN105062921B - 一种抑制禽致病性沙门氏菌的唾液乳杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种抑制禽致病性沙门氏菌的唾液乳杆菌及其应用。本发明的唾液乳杆菌，是从健康鸡群中分离得到，命名为Lactobacillus salivarius SCL87，其保藏编号为CCTCC NO：M2015338。该菌株具有耐酸、耐胆盐、耐胰蛋白酶及良好的黏附能力，其分泌上清液对禽类沙门氏菌具有很强的抑制作用，能有效的竞争抑制禽类沙门氏菌的生长，并且能防治禽类沙门氏菌病，促进禽类生长。本发明菌株可应用于制备防治禽类沙门氏菌感染的制剂，或者应用于制备改善禽类肠道菌群生态平衡、促进禽类生长的制剂。

Description

一种抑制禽致病性沙门氏菌的唾液乳杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及一株新菌种及其在生物制药工程中的应用，本发明涉及一种抑制禽致病性沙门氏菌的唾液乳杆菌及其应用。

背景技术

唾液乳杆菌是动物体内具有重要生理功能的益生菌之一，也是动物体内肠道中的正常菌群之一。多数唾液乳酸菌都可产生有机酸、过氧化氢、细菌素和类似抗菌素等物质，并以此来抑制病原菌的生长。有机酸可透过病原菌的菌膜，阻碍其代谢活性如氧化和磷酸化过程；过氧化氢可引起菌体蛋白质的氧化变性，使代谢过程中某些酶类失活，最终导致菌体死亡。当动物摄入一定量的乳酸菌时，占有生长优势的乳酸菌可在动物消化道内迅速繁殖，消耗大量的氧气，从而创造出有利于双歧杆菌和链球菌等益生菌的生长而不利于大肠杆菌和沙门氏菌等有害的兼性厌氧菌的生长。同时，乳酸菌还能产生维生素、氨基酸、促生长因子等各种营养物质，并能产生淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等多种酶类，提高消化酶活性、减少肠源性内毒素吸收，从而促进动物采食和增重，提高饲料的利用率和转化率。

沙门氏菌是一类需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性肠道杆菌，是公共卫生学上具有重要意义的人兽共患病之一。据统计，在世界各国的各类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首，我国大陆地区也以沙门氏菌为首位。沙门氏菌是胞内寄生菌，能垂直传播，禽类沙门氏菌可引起鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒等疾病，目前还没有有效的疫苗可供免疫，一般通过种蛋消毒来控制此病。据调查，我国各地养殖场沙门氏菌的阳性率极高，虽然有些鸡场通过使用药物等方法将感染控制在较低水平，没有出现发病现状，但如果鸡场管理不当，鸡群免疫力下降，则容易爆发沙门氏菌病，导致严重的损失。

动物刚出生时，处于无菌状态的消化道很快受到外界环境的细菌污染，之后大量的细菌开始生长繁殖，并逐渐适应，定植，形成稳定的正常微生物菌群。由于雏鸡肠道天然菌群进入体内太晚而不能及时定植，雏鸡很容易受到沙门氏菌感染。在动物养殖业上，由于抗生素等抗菌药的滥用及不合理使用，细菌的耐药性和药物残留等问题严重危害食品安全及人类健康。因此，运用乳酸菌等益生菌来研制安全、无毒副作用，既能防治疾病又能促进动物生长的微生态制剂具有广阔的应用前景。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种抑制禽致病性沙门氏菌的唾液乳杆菌。

本发明的另一目的在于提供上述抑制禽致病性沙门氏菌的唾液乳杆菌的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种抑制禽致病性沙门氏菌的唾液乳杆菌，是从健康鸡群中分离得到，命名为Lactobacillus salivarius SCL87。

申请人将菌株保藏在位于武汉市武昌珞珈山武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏中心于2015年5月28日收到申请人提供的菌株。保藏中心给予该培养物的保藏号为CCTCC NO：M2015338，提议的分类命名为Lactobacillus salivarius SCL87。

Lactobacillus salivarius SCL87在制备防治致病性沙门氏菌感染的制剂中的应用。

Lactobacillus salivarius SCL87在制备防治禽类沙门氏菌感染的制剂中的应用。

Lactobacillus salivarius SCL87在制备改善肠道菌群生态平衡，防治腹泻疾病并促进生长制剂中的应用。

Lactobacillus salivarius SCL87在制备改善禽类肠道菌群生态平衡，防治禽类腹泻疾病并促进禽类生长制剂中的应用。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：

(1)本发明唾液乳杆菌Lactobacillus salivarius SCL87是一种具有高效抑制沙门氏菌的益生菌，可防治禽类沙门氏菌病，对保障食品安全和人类健康具有重要意义。

(2)本发明菌株是从健康动物分离出来的菌株，经过多重检查筛选，证明其安全可靠且稳定。

(3)本发明菌株是以针对治疗沙门氏菌而开发的菌株，对沙门氏菌具有针对性，并且效果良好。

(4)本发明菌株具有耐酸、耐胆盐、耐胰蛋白酶及良好的黏附能力，其分泌上清液对禽类沙门氏菌具有很强的抑制作用，能有效的竞争抑制禽类沙门氏菌的生长、防治禽类沙门氏菌病，并且能促进禽类生长，提高饲料利用率。

附图说明

图1为唾液乳杆菌SCL87的PCR鉴定图；其中，泳道M：DL2000DNA Marker；泳道1：保加利亚乳杆菌ATCC 393；泳道2：菌株SCL87；泳道3：鼠伤寒沙门氏菌CMCC50115；泳道4：金黄色葡萄球菌ATCC25923；泳道5：空肠弯曲杆菌ATCC33291；泳道6：大肠杆菌ATCC25922。

图2为唾液乳杆菌SCL87的光学显微镜图。

图3为唾液乳杆菌SCL87的生长曲线。

图4为唾液乳杆菌SCL87与鼠伤寒沙门氏菌CMCC50115在MRS固体培养基上的生长情况。

图5为不同处理组动物的平均体重。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例中所述的唾液乳杆菌，命名为Lactobacillus salivarius SCL87；所述菌株保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2015年5月28日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO:M 2015338。

下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂商所建议的实验条件。

实施例1

一、唾液乳杆菌Lactobacillus salivarius SCL87的来源

该唾液乳杆菌为本发明人于2013年中从广东养殖场的健康鸡群中分离得到，现由华南农业大学兽医学院禽病研究室保存和提供。

二、唾液乳杆菌Lactobacillus salivarius SCL87的鉴定和分类

经过本发明人实验室系统鉴定表明该株为唾液乳杆菌。

(1)生化鉴定

参照《伯杰细菌鉴定手册》，对分离的菌株SCL87过氧化氢酶试验、硝酸盐还原试验、明胶液化试验、吲哚试验、硫化氢试验、V-P试验和动力试验这七项生化试验，结果均为阴性。初步判定菌株SCL87属于乳酸菌(Lactobacillus)属。

(2)PCR鉴定

参照Dubernet设计的引物对SCL87菌株基因检测，扩增的目的基因长度约为200bp，引物序列为LbLMA1-rev(5'-CTCAAAACTAAACAAAGTTTC-3')，R16-1(5'-CTTGTACACACGCCCGTCA-3')，PCR反应参照宝生物公司rTaq DNA聚合酶的使用说明书进行，PCR反应体系(25μL)为：ddH₂O 11μL、rTaq(Premix Taq)10μL、引物LbLMA1-rev(20μmol/L)1μL、引物R16-1(20μmol/L)1μL，模板DNA 2μL。PCR反应条件为：95℃预变性5min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，30s，30个循环；72℃延伸7min。PCR鉴定结果如图1所示，进一步确定SCL87菌株属于乳酸菌(Lactobacillus)属。

注：泳道M：DL2000DNA Marker；泳道1：保加利亚乳杆菌ATCC 393；泳道2：菌株SCL87；泳道3：鼠伤寒沙门氏菌CMCC50115；泳道4：金黄色葡萄球菌ATCC25923；泳道5：空肠弯曲杆菌ATCC33291；泳道6：大肠杆菌ATCC25922。

大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC25922、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC25923、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)ATCC33291和保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)ATCC 393分别购于广东省微生物菌种保藏中心；

鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)CMCC50115购于美国菌种保藏中心。

(3)16S rRNA基因测序

参照Messick设计的引物对分离的SCL87菌株16S rRNA基因测序，引物序列为fD1：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，rD1：5'-AAGGAGGTGATCC AGCC-3'，PCR反应体系(50μL)为：rTaq(Premix Taq)25μL、引物fD1(20μmol/L)1μL、引物rD1(20μmol/L)1μL，模板DNA 2μL、ddH₂O 21μL。PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃，45s，55℃，45s，72℃，90s，35个循环；72℃延伸10min。反应结束后取7μL PCR产物经1％琼脂糖凝胶(0.5μg/mL EB)电泳检测。将目的产物送上海美吉生物医药科技有限公司进行DNA双向测序。将测序结果与Genbank数据库中不同菌株16S rRNA基因序列进行同源性比较，比较结果显示所筛选出的SCL87菌株与唾液乳杆菌成员相似度最高，说明其为唾液乳杆菌。

Lactobacillus salivarius SCL87菌株的16S rRNA序列如下：1221bp

GCCCGGTAGCGGCGGCTATAATGCAAGTCGAACGAAACTTTCTTACACCGAATGCTTGCATTCACCGTAAGAAGTTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTAAAAGAAGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCTAATACCGTATATCTCTAAGGATCGCATGATCCTTAGATGAAAGATGGTTCTGCTATCGCTTTTAGATGGACCCGCGGCGTATTAACTAGTTGGTGGGGTAACGGCCTACCAAGGTGATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTCTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACACGAGTGAGAGTAACTGTTCATTCGATGACGGTATCTAACCAGCAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGAACGCAGGCGGTCTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACCGGAGTAGTGCATTGGAAACTGGAAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGTTCGAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCAATAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCTTTGACCACCTAAGAGATTAGGCTTTTCCCTTCGGGGACAAAGTGAACAGGTGGTTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAAGTCCCCGCACGAGCGCACCCTTTGTTGTCAGTTGGCAGCATTAAGCGGGCCACCTCTTGGCGAGACTGGCCGGTGACAAACCGGTAGAATGTTGGGTACGACGTTCAAGTCATCATGCGCTTATGAACCTGGGGCTC。

三、唾液乳杆菌SCL87的主要特性

(1)生物学形态特征

菌体形态特征：菌体呈杆状，一般呈单个、成对或短链状存在，如图2所示。

菌落形态特征：在MRS固体培养基(成分(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉浸粉8.0，酵母浸粉4.0，葡萄糖20.0，磷酸氢二钾2.0，柠檬酸氢二铵2.0，乙酸钠5.0，硫酸镁0.2，硫酸锰0.04，琼脂14.0，吐温80 1.0，pH值6.5±0.2)上能形成乳白色的菌落，菌落圆形，边缘整齐，不透明，不形成芽孢。

(2)生长特征：兼性厌氧生长，生长温度范围32～42℃(最适37℃)，生长pH范围为pH 6～8(最适pH6.5)。

(3)生长曲线

复壮唾液乳杆菌，在MRS固体培养基上传代培养两次，再将菌株接种于MRS肉汤(成分(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉浸粉8.0，酵母浸粉4.0，葡萄糖20.0，磷酸氢二钾2.0，柠檬酸氢二铵2.0，乙酸钠5.0，硫酸镁0.2，硫酸锰0.04，吐温80 1.0，pH值5.7±0.2)，37℃培养12h左右得到种子液。取种子液10μL分别接种于事先准备好的含等量MRS肉汤的10个离心管中，于37℃静置培养。其间每隔2h轮流向每只离心管，漩涡混匀，用分光光度计检测菌液的OD值，MRS肉汤调零，取500μL菌液检测OD_600nm值，将实验结果绘制成SCL87的生长曲线，如下图3所示。

结果表明，唾液乳杆菌SCL87从第10h到第18h为对数增长期，20h后进入稳定期，细菌几乎停止生长，活菌数量和凋亡数量处于一个平衡时。当乳酸菌在动物肠道内达到一定数量时，在对动物无害的情况下，占有生长优势的乳酸菌会竞争性的抑制肠道中病原菌的生长，其代谢产物如有机酸、过氧化氢等也可杀灭肠道病原菌。

四、唾液乳杆菌SCL87对沙门氏菌的体外抑制作用

(1)牛津杯试验

采用国内外测定抗生素效价通用方法及各国药典规定的方法——牛津杯定量扩散法，来测定唾液乳杆菌的抑菌活力。

将唾液乳杆菌SCL87、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)(购于美国菌种保藏中心，编号ATCC 393)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)(购于广东省微生物菌种保藏中心，GIM编号：GIM1.730)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)(购于广东省微生物菌种保藏中心，编号ACCC11095)复壮，在MRS固体培养基上传代培养两次，挑取单菌落接种于MRS肉汤，37℃，静置培养19～22h，10000r/min离心10min，上清液经0.22μm无菌微孔滤膜过滤后，4℃保存待用。取100μL 1×10¹⁰cfu/mL经15h培养的新鲜鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)(购于广东省微生物菌种保藏中心，编号CMCC50115)LB肉汤菌液，放于37℃培养箱10min，待培养基表面水分蒸发完全。用无菌棉签蘸取菌液均匀涂于LB(成分(g/L)：胰蛋白胨10.0，酵母浸粉5.0，氯化钠10.0，琼脂15.0，pH值7.0±0.2)培养基表面，用镊子夹取牛津杯放置于平皿中，然后每个牛津杯中加入已制备好的发酵上清液200μL，200μL MRS肉汤放于牛津杯作对照。然后将培养基平皿置于37℃培养15～24h，观察牛津杯周围抑菌圈，并测量其直径。

实验结果如下表1所示，与其它菌株相比，装有SCL87菌株发酵上清液的牛津杯周围出现了明显的抑菌圈，抑菌圈直径为13mm左右，对照组MRS肉汤没有出现抑菌圈，说明该唾液乳杆菌SCL87发酵上清液对鼠伤寒沙门氏菌的生长具有很好的抑制作用。

表1 菌株抑菌圈直径(mm)

(2)竞争性抑制试验

分别将新鲜培养出的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和唾液乳杆菌SCL87划线接种于MRS固体培养基表面上，将培养基平皿置于37℃培养24h，结果发现，48h后鼠伤寒沙门氏菌和唾液乳杆菌SCL87都能在MRS培养基生长，且都生长旺盛。与唾液乳杆菌SCL87菌落不同，MRS培养基上的鼠伤寒沙门氏菌菌落呈微透明状，湿润，边缘整齐，而菌株SCL87菌落为边缘整齐的乳白色，从菌落的形态和色泽可以在MRS培养基上肉眼区分沙门氏菌和唾液乳杆菌，唾液乳杆菌SCL87与鼠伤寒沙门氏菌CMCC50115在MRS固体培养基上的生长情况如图4所示。基于以上基础，可以做如下竞争抑制试验：

①正向竞争试验

将培养出的新鲜唾液乳杆菌SCL87划线接种于MRS固体培养基上，37℃培养24h，24h后取出培养皿，将已准备好的新鲜鼠伤寒沙门氏菌100μL1×10¹⁰cfu/mL均匀涂布在长有唾液乳杆菌SCL87的MRS固体培养基上，再将培养皿放入37℃培养箱，48h后观察MRS固体培养基上细菌的生长情况。

观察结果发现MRS固体培养基上只长有乳白色的唾液乳杆菌菌落，没有微透明的鼠伤寒沙门氏菌菌落，为进一步确定MRS固体培养基上没有活的鼠伤寒沙门氏菌，用灭菌的接种环粘取涂过鼠伤寒沙门氏菌的MRS固体培养基表面，然后划线于SS固体培养基(成分(g/L)：牛肉浸粉5.0，月示胨5.0，乳糖10.0，三号胆盐8.5，枸橼酸钠8.5，硫代硫酸钠8.5，枸橼酸铁1.0，中性红0.025，煌绿0.00033，琼脂17.0)上，37℃培养24小时，24h后观察SS培养基，结果发现SS培养基上没长任何菌落。

以上结果证明唾液乳杆菌SCL87对沙门氏菌有很好的竞争性防御效果，可能的原因是唾液乳杆菌在MRS固体培养基上分泌的有机酸和过氧化氢创造了一个酸性环境，抑制了沙门氏菌的生长。

②反向竞争试验

将培养出的新鲜鼠伤寒沙门氏菌划线接种于MRS固体培养基上，37℃培养24h，24h后取出培养皿，将已准备好的100μL新鲜唾液乳杆菌SCL873×10⁸cfu/ml均匀涂布在长有鼠伤寒沙门氏菌的MRS固体培养基上，再将培养皿放入37℃培养箱，24h后观察MRS固体培养基上细菌的生长情况。

观察结果发现在微透明的鼠伤寒沙门氏菌菌落周围出现乳白色的唾液乳杆菌菌落，为证明鼠伤寒沙门氏菌是否还有生命力，挑取唾液乳杆菌SCL87菌落周围的鼠伤寒沙门氏菌菌落划线接种于SS培养基上，37℃培养24小时，24h后观察SS培养基，结果发现SS培养基上没长任何菌落，实验室较早之前做过实验：SS培养基37℃培养48小时的沙门氏菌还有生命力，能继续传代下去。

以上结果证明，在体外环境生长的鼠伤寒沙门氏菌无法抑制唾液乳杆菌SCL87的生长。

五、唾液乳杆菌SCL87的模拟体内环境耐受性及黏附性

(1)耐胃酸试验

将唾液乳杆菌SCL87用MRS肉汤进行增殖培养，制备10⁸CFU/mL浓度的唾液乳杆菌SCL87菌液，再按5％(v/v)的量分别接种于pH值为2和3的10mL MRS肉汤中，置于37℃恒温培养箱中，培养4h后吸取100μL菌液进行梯度稀释，选择合适稀释倍数作平板活菌计数，其中pH值为2的培养基中SCL87菌株存活率为75％，pH值为3的存活率为83％。说明本发明SCL87菌株在酸性环境中可以很好地生存。

(2)耐胆盐试验

益生菌只有能耐受一定的胆盐浓度，才能在肠道内定植，同耐酸性实验的操作过程，制备10⁸CFU/mL浓度的唾液乳杆菌SCL87菌液，再按5％(v/v)的量接种于胆盐浓度(W/V，质量浓度)为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％的MRS肉汤中，置于37℃恒温培养箱，培养4h后吸取100μL菌液进行梯度稀释，选择合适稀释倍数作平板活菌计数(苗玉和，刘岩，闫艳丽，等.2011.猪源乳酸杆菌的分离鉴定及生物学特性分析.中国兽药杂志)，在0.3％的胆盐浓度下，仍有27％的存活率。表明SCL87有很好的耐胆盐能力。

(3)耐胰蛋白酶试验

菌株SCL87用MRS肉汤增菌培养，将菌液浓度调为10⁸CFU/mL左右，按2％(v/v，体积浓度)的接种量分别接种于含胰蛋白酶浓度为(W/V，质量浓度)0.8％、1.0％、1.2％、1.4％的液体培养基中。37℃培养8h，吸取100μL菌液进行梯度稀释，选择合适稀释倍数作平板活菌计数在1.2％胰蛋白酶浓度下培养8h后，存活率能达50％以上，表明SCL87对胰蛋白酶有较强的耐受能力。

(4)唾液乳杆菌SCL87的黏附性

将培养好的Hela细胞(人宫颈癌细胞)(购于广州赛哲生物科技有限公司)消化后，接种于24孔(浓度2×10⁵/mL)细胞培养板，每孔1mL，18h长成单层(每孔约5×10⁵个细胞)；用Hank液洗涤，各组每孔分别加入0.9mL DMEM培养液(含1％(v/v)胎牛血清)、0.1mL PBS制成的菌液(含2×10⁷CFU/mL唾液乳杆菌SCL87)，37℃孵育2h；吸去菌液，PBS漂洗三次；各孔加入1ml 0.01％TritonX-100的PBS裂解单层细胞，置于37℃培养箱30min消化单层细胞，使之变成细胞悬液；吸出各孔悬液，混匀，稀释后选择100μL合适稀释倍数涂布于MRS固体培养基，培养36h计数菌落，黏附力用黏附细菌数10的对数值CFU/mL表示。

计算结果为：菌株SCL87对Hela细胞间的黏附力为5.975，具有统计学意义，结果说明唾液乳杆菌SCL87与Hela细胞具有很好的黏附结合作用。

六、唾液乳杆菌SCL87对沙门氏菌的体内抑制作用

动物实验方案，见表2

将1日龄SPF鸡分成4组，每组20只，动物实验使用的病原菌为鼠伤寒沙门氏菌，攻毒剂量200μL 3×10¹¹cfu/mL，分别于3、10、19、24、29日龄称重。

表2 动物实验方案

实验结果：

动物实验各组平均体重增长情况如图5。

动物试验期间，对动物的精神状态及饮食情况观察，观察结果如下表3。

表3 各组精神状态及饮食情况

预防组14日龄停止拌料唾液乳杆菌SCL87，时隔5日，19日龄攻毒致病性沙门氏菌，体重、饮食及精神状态跟攻毒组和对照组对比，可以看出唾液乳杆菌SCL87对致病性沙门氏菌病有很好的预防作用，同时在鸡肠道有较长时间的定植效果。

上述结果说明，本发明的唾液乳杆菌SCL87不仅可以有效防治禽类沙门氏菌病，还可以促进禽类消化吸收，使禽类健康快速生长。

综上所述，所述的唾液乳酸杆菌SCL87具有以下特性：

(1)具有耐酸性，在pH1.5～3的环境生存良好；

(2)具有耐胆盐能力，能耐受胆盐浓度是0.3％(W/V，质量浓度)；

(3)具有耐胰蛋白酶能力，在高浓度的胰蛋白酶浓度下存活率极高；

(4)对细胞有较好的黏附能力；

(5)竞争性抑制沙门氏菌的生长，预防及治疗禽致病性沙门氏菌病；

(6)具有促进鸡生长，增加体重的作用。

根据上述实验结果，本发明的Lactobacillus salivarius SCL87菌株可应用于制备防治禽类沙门氏菌感染的制剂，或者应用于制备改善禽类肠道菌群生态平衡、促进禽类生长的制剂。

益生菌在动物消化道生长繁殖，形成稳定的正常微生物菌落，当其数量达到一定的优势时，这些益生菌可在动物消化道黏膜形成一道生物屏障，保护动物消化道免受病原菌的侵害。研究发现乳酸菌和双歧杆菌(Bifidobacterium)对肠道上皮细胞有很强的亲和力，通过竞争排斥作用，阻止沙门氏菌等病原菌的粘附和定植，使有害菌迅速减少，从而恢复消化道内环境和菌群的生态平衡。已有研究者通过动物实验很好的证明了给家畜饲喂益生菌能抑制沙门氏菌病。Baba等(1991)用大肠杆菌(Escherichia coli)、乳酸杆菌(Lactobacillus)以及两者的混合物分别处理动物，然后口服鼠伤寒沙门氏菌，结果都能抑制鼠伤寒沙门氏菌，其中混合物表现出较高的抑菌效率。Hejliek等(1995)报道单独用益生菌制剂能预防沙门氏菌，明显降低其在禽群中的感染率。

如果在饲料中添加益生菌，可使动物消化道益生菌占据优势，但益生菌必须经过低pH的胃液才能到达肠道生长繁殖，且在低温环境下保存没处理过得益生菌，最多只能保存5天，若在-20℃保存则会冻伤益生菌，无法使其复活。为解决以上问题，研究者们用不同的生产工艺将益生菌包埋保护起来，研制出了有益活体微生物制剂，固体粉末状的微生态制剂具有耐受低pH的胃液及各种消化酶类，使活菌体免受胃液的侵害，到达肠道则释放菌体的特点，且其无毒副作用、无耐药性、无残留、成本低、效果显著、不污染环境及能长期保存的特性使其具有广阔的应用前景。

因此可以通过特殊工艺，进一步将Lactobacillus salivarius SCL87菌株包埋制成的防治禽类沙门氏菌病，改善禽类肠道菌群生态平衡并促进禽类生长的固态粉末状微生态制剂，并运用于临床生产中。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一株唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)SCL87，其特征在于：所述菌株于2015年5月28日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2015338。

2.权利要求1所述的Lactobacillus salivarius SCL87在制备防治致病性鼠伤寒沙门氏菌感染的制剂中的应用。

3.权利要求1所述的Lactobacillus salivarius SCL87在制备防治禽类鼠伤寒沙门氏菌感染的制剂中的应用。

4.权利要求1所述的Lactobacillus salivarius SCL87在制备改善鸡肠道菌群生态平衡，防治鸡腹泻疾病并促进生长制剂中的应用。