CN105432470A - 铜皮石斛的组织培养方法 - Google Patents
铜皮石斛的组织培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105432470A CN105432470A CN201510899851.9A CN201510899851A CN105432470A CN 105432470 A CN105432470 A CN 105432470A CN 201510899851 A CN201510899851 A CN 201510899851A CN 105432470 A CN105432470 A CN 105432470A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medium
- plantlet
- dendrobium moniliforme
- test
- vitro
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Cultivation Of Plants (AREA)
Abstract
本发明公开了一种铜皮石斛的组织培养方法，包括：步骤一、取铜皮石斛果荚作为外植体进行消毒；步骤二、外植体萌发获得无菌试管苗；步骤三、将无菌试管苗培养得到试管苗丛生芽；步骤四、将试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在壮苗培养基中培养得到试管苗；步骤五、将试管苗置于生根培养基中得到组培苗；步骤六、炼苗后将组培苗移栽至基质中培养。采用本发明的培养方法得到的铜皮石斛丛生芽增殖系数达到20～30倍，本发明能在短时间内提供健壮的铜皮石斛优质种苗，有效解决铜皮石斛的规模化育苗问题。
Description
技术领域
本发明涉及栽培方法，更具体地说，本发明涉及一种铜皮石斛的组织培养方法。
背景技术
铜皮石斛，又名：细茎石斛，细黄草，属兰科石斛属，多年生附生草本，是一种名贵的中草药，具有极高的药用保健价值。近年来石斛的研究引起人们的广泛兴趣，铜皮石斛中含有较高的多糖、总生物碱等多种化学成份，现代药理研究更证明铜皮石斛具有益胃生津、滋阴清热、养清音明目、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、增强机体免疫能力等功效，因此铜皮石斛逐渐引起人们的关注。
然而由于兰科种子自然繁殖主要靠分株繁殖，在野外本就很难发芽，而随着社会的发展，人们过度的采摘使得野生的铜皮石斛资源大多遭到破坏，几近灭绝，因此寻找一种组织培养的方法培养铜皮石斛使铜皮石斛快速繁殖，实现铜皮石斛优质种苗的工厂化育苗，满足人们的需求，成为亟待人们解决的问题。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种铜皮石斛的组织培养方法，能保持原有品种的优良性状，在短时间内培育出大量适合栽培种植的铜皮石斛幼苗，单芽增殖系数达20～30倍以上，且试管苗丛生芽健壮，在生根培养基中容易生根，移栽基质后成活率在90％以上。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种铜皮石斛的组织培养方法，包括以下步骤：
步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗15～30min，然后将铜皮石斛的果荚灼烧2次，每次灼烧5～10s后，得到外植体；
步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养50～70天后得到无菌试管苗；
所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素和2.0g/L活性炭；
步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养50～70天后得到试管苗丛生芽；
所述第二培养基中包括：MS、0.5～2.0mg/L的甲巯达嗪、0.2～1.5mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸和0.2～0.5mg/L的激动素；
步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养20～40天后得到试管苗；
所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、1.0～4.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和1.0～4.0mg/L的萘乙酸；
步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养30～50天后得到组培苗；
所述生根培养基中包括：1/2MS和20g/L的香蕉泥，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。
优选的是，将铜皮石斛的果荚灼烧2次的具体方法为：在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次。
优选的是，所述第一培养基、所述第二培养基、所述壮苗培养基以及所述生根培养基中均含有5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，且所述第一培养基、所述第二培养基、所述壮苗培养基以及所述生根培养基的初始pH值均调节为5.8。
优选的是，步骤二到步骤五中的培养均为控制光照培养，均为：培养温度23～27℃，光照强度1500lux，光照时间为8～10h/d。
优选的是，还包括：
步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照3～5d。
优选的是，还包括：
步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。
优选的是，步骤四中控制光照培养以外，培养期间，每天早上6～7点，用红蓝LED光照射所述试管苗丛生芽0.2～0.5h，步骤五中控制光照培养以外，培养期间，每天早上6～7点和每天晚上7～8点各用红蓝LED光照射1次所述试管苗，每次0.5～1h。
优选的是，所述第一培养基中含有5g/L果荚碎；
所述果荚碎的制备方法为：收集取出种子后的铜皮石斛的果荚，刮去灼烧痕迹后，用丙酮浸泡10～20min后，用无菌水冲洗，粉碎后，与燕麦片均匀混合得到混合物，将所述混合物在所述灭菌液中浸泡5～10min后，用无菌水冲洗，得到所述果荚碎，其中，所述燕麦片与铜皮石斛的果荚的质量比为1∶3。
本发明至少包括以下有益效果：
1、采用生物技术对铜皮石斛进行组织培养快速繁殖，保持了原有品种的优良性状，能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的铜皮石斛幼苗，且培养的铜皮石斛种苗质量好，能够实现规模化生产，满足生产上的需要。本发明中单芽增殖系数达20～30倍以上，且试管苗丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，移栽基质后成活率在90％以上。
2、本发明中以灼烧的方式对外植体进行灭菌，与传统的采用升汞灭菌方式相比，既避免了二次污染，又无毒害更环保。
3、其中萌发实验的第一培养基中添加活性炭，使得第一培养基中的环境模仿黑暗培养，更有利于种胚发芽。生根培养基中加入打碎的香蕉泥，香蕉泥中含有丰富的碳水化合物、蛋白质，还有丰富的钾、钙、磷、铁及维生素A，B和C等，既能提供生根所需的营养物质，且B12维生素能促进生根，有利于组培苗生根。
4、早上6～7点，自然光较弱，用红蓝LED光照射试管苗丛生芽或试管苗能补充光照，唤醒植物细胞，同时红蓝LED光独特的作用能促进试管苗丛生芽的发育和苗的生长，且使培养期间的植物细胞更活跃，积累更多的生物量，晚上7～8点用红蓝LED光照射试管苗，既是延长光照时间，使植物细胞保持活跃，同时能促进生根。
5、铜皮石斛的果荚中含有丰富的碳水化合物、氨基酸、蛋白质，还有丰富的钾、钙、磷、铁、镁等以及多种微量元素，在第一培养基中添加果荚碎，铜皮石斛果荚粉碎后和燕麦中的氨基酸种类相互互补，协同作用更好的提供胚乳中的营养物质，从而促进种子发芽。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗15min，然后在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次，每次灼烧5s，得到外植体。
步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养50天，培养温度23℃，光照强度1500lux，光照时间为8h/d，得到无菌试管苗。
所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素，2.0g/L活性炭，5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述第一培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养50天，培养温度23℃，光照强度1500lux，光照时间为8h/d，得到试管苗丛生芽。
所述第二培养基中包括：MS、0.5mg/L的甲巯达嗪、0.2mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸、0.2mg/L的激动素、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述第二培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养20天，培养温度23℃，光照强度1500lux，光照时间为8h/d，得到试管苗。
所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的萘乙酸、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述壮苗培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养30天，培养温度23℃，光照强度1500lux，光照时间为8h/d，得到组培苗。
所述生根培养基中包括：1/2MS、20g/L的香蕉泥、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述生根培养基的初始pH值调节为5.8，其中，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。
步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照3d。
步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。
实施例2
步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗30min，然后在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次，每次灼烧10s，得到外植体。
步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养70天，培养温度27℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d，得到无菌试管苗。
所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素，2.0g/L活性炭，5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述第一培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养70天，培养温度27℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d，得到试管苗丛生芽。
所述第二培养基中包括：MS、2.0mg/L的甲巯达嗪、1.5mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的激动素、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述第二培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养40天，培养温度27℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d，得到试管苗。
所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、4.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、4.0mg/L的萘乙酸、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述壮苗培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养50天，培养温度27℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d，得到组培苗。
所述生根培养基中包括：1/2MS、20g/L的香蕉泥、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述生根培养基的初始pH值调节为5.8，其中，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。
步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照5d。
步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。
实施例3
步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗20min，然后在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次，每次灼烧8s，得到外植体。
步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养60天，培养温度25℃，光照强度1500lux，光照时间为9h/d，得到无菌试管苗。
所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素，2.0g/L活性炭，5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述第一培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养60天，培养温度25℃，光照强度1500lux，光照时间为9h/d，得到试管苗丛生芽。
所述第二培养基中包括：MS、1.0mg/L的甲巯达嗪、1.0mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸、0.3mg/L的激动素、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述第二培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养30天，培养温度25℃，光照强度1500lux，光照时间为9h/d，得到试管苗。
所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/L的萘乙酸、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述壮苗培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养40天，培养温度25℃，光照强度1500lux，光照时间为9h/d，得到组培苗。
所述生根培养基中包括：1/2MS、20g/L的香蕉泥、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述生根培养基的初始pH值调节为5.8，其中，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。
步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照4d。
步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。
实施例4
步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗15min，然后在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次，每次灼烧5s，得到外植体。
步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养50天，培养温度23℃，光照强度1500lux，光照时间为8h/d，得到无菌试管苗。
所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素，2.0g/L活性炭，5g/L的琼脂、30g/L蔗糖和5g/L果荚碎，所述第一培养基的初始pH值调节为5.8。
其中，所述果荚碎的制备方法为：收集取出种子后的铜皮石斛的果荚，刮去灼烧痕迹后，用丙酮浸泡10min后，用无菌水冲洗，粉碎后，与燕麦片均匀混合得到混合物，将所述混合物在所述灭菌液中浸泡5min后，用无菌水冲洗，得到所述果荚碎，其中，所述燕麦片与铜皮石斛的果荚的质量比为1∶3。
步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养50天，培养温度23℃，光照强度1500lux，光照时间为8h/d，得到试管苗丛生芽。
所述第二培养基中包括：MS、0.5mg/L的甲巯达嗪、0.2mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸、0.2mg/L的激动素、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述第二培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养20天，培养温度23℃，光照强度1500lux，光照时间为8h/d，且期间每天早上6点，用红蓝LED光照射所述试管苗丛生芽0.2h，得到试管苗。
所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的萘乙酸、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述壮苗培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养30～50天，培养温度23℃，光照强度1500lux，光照时间为8h/d，且期间每天早上6点和晚上7点各用红蓝LED光照射1次所述试管苗，每次0.5h，得到组培苗。
所述生根培养基中包括：1/2MS、20g/L的香蕉泥、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述生根培养基的初始pH值调节为5.8，其中，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。
步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照3d。
步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。
实施例5
步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗30min，然后在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次，每次灼烧10s，得到外植体。
步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养70天，培养温度27℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d，得到无菌试管苗。
所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素，2.0g/L活性炭，5g/L的琼脂、30g/L蔗糖和5g/L果荚碎，所述第一培养基的初始pH值调节为5.8。
其中，所述果荚碎的制备方法为：收集取出种子后的铜皮石斛的果荚，刮去灼烧痕迹后，用丙酮浸泡20min后，用无菌水冲洗，粉碎后，与燕麦片均匀混合得到混合物，将所述混合物在所述灭菌液中浸泡10min后，用无菌水冲洗，得到所述果荚碎，其中，所述燕麦片与铜皮石斛的果荚的质量比为1∶3。
步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养70天，培养温度27℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d，得到试管苗丛生芽。
所述第二培养基中包括：MS、2.0mg/L的甲巯达嗪、1.5mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的激动素、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述第二培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养40天，培养温度27℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d，且期间每天早上7点，用红蓝LED光照射所述试管苗丛生芽0.5h，得到试管苗。
所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、4.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、4.0mg/L的萘乙酸、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述壮苗培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养50天，培养温度27℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d，且期间每天早上7点和晚上8点各用红蓝LED光照射1次所述试管苗，每次1h，得到组培苗。
所述生根培养基中包括：1/2MS、20g/L的香蕉泥、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述生根培养基的初始pH值调节为5.8，其中，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。
步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照5d。
步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。
实施例6
步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗20min，然后在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次，每次灼烧8s，得到外植体。
步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养60天，培养温度25℃，光照强度1500lux，光照时间为9h/d，得到无菌试管苗。
所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素，2.0g/L活性炭，5g/L的琼脂、30g/L蔗糖和5g/L果荚碎，所述第一培养基的初始pH值调节为5.8。
其中，所述果荚碎的制备方法为：收集取出种子后的铜皮石斛的果荚，刮去灼烧痕迹后，用丙酮浸泡15min后，用无菌水冲洗，粉碎后，与燕麦片均匀混合得到混合物，将所述混合物在所述灭菌液中浸泡8min后，用无菌水冲洗，得到所述果荚碎，其中，所述燕麦片与铜皮石斛的果荚的质量比为1∶3。
步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养60天，培养温度25℃，光照强度1500lux，光照时间为9h/d，得到试管苗丛生芽。
所述第二培养基中包括：MS、1.0mg/L的甲巯达嗪、1.0mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸、0.3mg/L的激动素、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述第二培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养30天，培养温度25℃，光照强度1500lux，光照时间为9h/d，且期间每天早上6点，用红蓝LED光照射所述试管苗丛生芽0.3h，得到试管苗。
所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/L的萘乙酸、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述壮苗培养基的初始pH值调节为5.8。
步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养40天，培养温度25℃，光照强度1500lux，光照时间为9h/d，且期间每天早上6点和晚上8点各用红蓝LED光照射1次所述试管苗，每次0.8h，得到组培苗。
所述生根培养基中包括：1/2MS、20g/L的香蕉泥、5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，所述生根培养基的初始pH值调节为5.8，其中，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。
步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照4d。
步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。
为了说明本发明的效果，发明人将经过步骤一得到的50颗种子平均分为2组，其中，a组按照本发明的实施例3中的方法进行组织培养，b组中步骤二与步骤三均采用MS培养基，步骤四采用花宝2号培养基，步骤五采用1/2MS培养基，其余均与实施例3中的培养方法相同，测得结果如下：
表1组织培养实验结果
由表1中可以看出，采用本发明的铜皮石斛的组织培养方法的a组，相比普通方法的b组，单芽增殖系数与成活率均大幅增加。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
Claims (8)
1.一种铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗15～30min，然后将铜皮石斛的果荚灼烧2次，每次灼烧5～10s后，得到外植体；
步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养50～70天后得到无菌试管苗；
所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素和2.0g/L活性炭；
步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养50～70天后得到试管苗丛生芽；
所述第二培养基中包括：MS、0.5～2.0mg/L的甲巯达嗪、0.2～1.5mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸和0.2～0.5mg/L的激动素；
步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养20～40天后得到试管苗；
所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、1.0～4.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和1.0～4.0mg/L的萘乙酸；
步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养30～50天后得到组培苗；
所述生根培养基中包括：1/2MS和20g/L的香蕉泥，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。
2.如权利要求1所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，步骤一中将铜皮石斛的果荚灼烧2次的具体方法为：在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次。
3.如权利要求2所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，所述第一培养基、所述第二培养基、所述壮苗培养基以及所述生根培养基中均含有5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，且所述第一培养基、所述第二培养基、所述壮苗培养基以及所述生根培养基的初始pH值均调节为5.8。
4.如权利要求2所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，步骤二到步骤五中的培养均为控制光照培养，均为：培养温度23～27℃，光照强度1500lux，光照时间为8～10h/d。
5.如权利要求2所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，还包括：
步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照3～5d。
6.如权利要求5所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，还包括：
步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。
7.如权利要求4所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，步骤四中控制光照培养以外，培养期间，每天早上6～7点，用红蓝LED光照射所述试管苗丛生芽0.2～0.5h，步骤五中控制光照培养以外，培养期间，每天早上6～7点和每天晚上7～8点各用红蓝LED光照射1次所述试管苗，每次0.5～1h。
8.如权利要求1所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，所述第一培养基中含有5g/L果荚碎；
所述果荚碎的制备方法为：收集取出种子后的铜皮石斛的果荚，刮去灼烧痕迹后，用丙酮浸泡10～20min后，用无菌水冲洗，粉碎后，与燕麦片均匀混合得到混合物，将所述混合物在所述灭菌液中浸泡5～10min后，用无菌水冲洗，得到所述果荚碎，其中，所述燕麦片与铜皮石斛的果荚的质量比为1∶3。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510899851.9A CN105432470B (zh) | 2015-12-08 | 2015-12-08 | 铜皮石斛的组织培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510899851.9A CN105432470B (zh) | 2015-12-08 | 2015-12-08 | 铜皮石斛的组织培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105432470A true CN105432470A (zh) | 2016-03-30 |
| CN105432470B CN105432470B (zh) | 2017-12-22 |
Family
ID=55543467
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510899851.9A Expired - Fee Related CN105432470B (zh) | 2015-12-08 | 2015-12-08 | 铜皮石斛的组织培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105432470B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106665180A (zh) * | 2016-12-31 | 2017-05-17 | 广东国方医药科技有限公司 | 一种多功能抗腐蚀的铁皮石斛种植基质及其制备方法 |
| CN106665366A (zh) * | 2017-03-09 | 2017-05-17 | 广西壮族自治区农业科学院农产品质量安全与检测技术研究所 | 一种独角石斛的组织培养方法 |
| CN107318646A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-11-07 | 江苏绿洲园艺绿化有限公司 | 一种梳唇石斛幼苗快速繁育方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104472364A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-04-01 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种金果榄叶片成苗的快速繁育方法 |
-
2015
- 2015-12-08 CN CN201510899851.9A patent/CN105432470B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104472364A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-04-01 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种金果榄叶片成苗的快速繁育方法 |
Non-Patent Citations (10)
| Title |
|---|
| 刘世平: "不同培养基及培养环境对铁皮石斛幼苗生长的影响试验", 《林业调查规划》 * |
| 尚文倩等: "不同红蓝光质比LED光源对铁皮石斛试管苗生长的影响", 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 * |
| 李洪林等: "拟蝶唇兰的组织培养", 《植物生理学通讯》 * |
| 李海燕等: "铁皮石斛组培苗生根壮苗培养基的优化筛选研究", 《佛山科学技术学院学报（ 自然科学版）》 * |
| 李璐等: "春石斛和铁皮石斛试管苗壮苗生根条件的优化", 《福建农林大学学报（自然科学版）》 * |
| 李翠等: "药用植物马鞭石斛组织培养与快速繁殖", 《北方园艺》 * |
| 杜刚等: "兜唇石斛的组织培养研究", 《北方园艺》 * |
| 王培林: "精神治疗药甲硫达嗪对人体内染色体的断裂效应", 《国外医学.遗传学分册》 * |
| 胡颂平等: "《植物细胞组织培养技术》", 31 August 2014, 中国农业大学出版社 * |
| 陈继敏等: "不同添加物对石斛兰壮苗生根的影响", 《北方园艺》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106665180A (zh) * | 2016-12-31 | 2017-05-17 | 广东国方医药科技有限公司 | 一种多功能抗腐蚀的铁皮石斛种植基质及其制备方法 |
| CN106665366A (zh) * | 2017-03-09 | 2017-05-17 | 广西壮族自治区农业科学院农产品质量安全与检测技术研究所 | 一种独角石斛的组织培养方法 |
| CN107318646A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-11-07 | 江苏绿洲园艺绿化有限公司 | 一种梳唇石斛幼苗快速繁育方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105432470B (zh) | 2017-12-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103416305B (zh) | 金线莲种苗的无激素组织培养及快速繁殖方法 | |
| CN104335903A (zh) | 一种促进白及快速繁殖的方法 | |
| CN101720670B (zh) | 旱半夏组织培养快速繁殖方法 | |
| CN104082138B (zh) | 一种通城虎的组织培养快繁方法 | |
| CN102499090A (zh) | 十二卷类多肉植物的离体培养方法 | |
| CN103250645B (zh) | 艾纳香的快速繁殖与移栽方法 | |
| CN103202229B (zh) | 一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法 | |
| CN104322375A (zh) | 一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法 | |
| CN105123529A (zh) | 白芨快繁和高效栽培方法 | |
| CN104067939A (zh) | 一种龙胆的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN102487823B (zh) | 黄花蒿的快速繁殖方法 | |
| CN103168692B (zh) | 一种灌木柳组织培养方法 | |
| CN101116424A (zh) | 高效诱导培养百合小鳞茎的方法 | |
| CN102405841B (zh) | 一种利用花梗诱导石蒜愈伤组织的方法 | |
| CN104137779A (zh) | 一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法 | |
| CN102150619A (zh) | 辣木胚愈伤组织诱导和植株再生方法 | |
| CN104938338A (zh) | 金钗石斛快速繁殖成苗的培养基系列及组培方法 | |
| CN105432470B (zh) | 铜皮石斛的组织培养方法 | |
| CN104488723A (zh) | 一种朝鲜淫羊藿组培快速繁殖方法 | |
| CN101946698A (zh) | 荞麦三七的快速繁殖技术 | |
| CN101637130B (zh) | 海南粗榧种胚培养育苗方法 | |
| CN103548695B (zh) | 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103039360B (zh) | 韭菜组织培养快繁的方法 | |
| CN102138527B (zh) | 土茯苓组培苗的培养方法 | |
| CN103444551B (zh) | 以诱导独一味种子萌发幼苗为外植体的组织培养试管苗获得方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171222 Termination date: 20181208 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |