CN105087699B - 一种利用生物转化法制备γ‑氨基丁酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用生物转化法制备γ‑氨基丁酸的方法，属于γ‑氨基丁酸制备技术领域。以短乳杆菌CGMCC NO.3414为出发菌株，经增殖培养和菌体收集，将菌体重悬于科学复配L‑谷氨酸钠、谷氨酸混合物的缓冲溶液中，加入对菌株所产胞内酶具有较强激活作用的Na2B4O7·10H2O或MgSO4，以最大限度地发挥胞内酶的活性，将L‑谷氨酸钠、谷氨酸混合物催化转化为γ‑氨基丁酸，转化液中γ‑氨基丁酸含量为45.74‑202.18g/L,底物摩尔转化率为95.92‑99.75％，菌体可重复利用8次。该方法不仅提高了产品质量和产量，而且保护了环境，具有较好的经济价值和社会效益，可规模化生产，利于工业推广。
Description
技术领域
本发明涉及γ-氨基丁酸的制备，具体涉及一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法。
背景技术
γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)是一种广泛存在于动植物体中的天然非蛋白质氨基酸。在哺乳动物体内，γ-氨基丁酸作为脑和脊髓中的重要抑制性神经递质，由谷氨酸(Glutamic acid，Glu)在谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase，GAD，EC4.1.1.15)的作用下催化脱羧转化而来，并参与多种代谢活动，具有很高的生理活性，具有降血压、调节心律失常、改善睡眠、抗焦虑、改善脂质代谢、防止动脉硬化等功效，因此受到越来越多的科学工作者的关注。在日本，这类富含GABA的功能性食品的研究取得了较大的进展。大久长范、津志田藤二郎等人分别利用富集技术以糙米、米胚芽、茶叶、大豆等为食品原料成功研制出了GABA大米、GABA茶等产品。2009年，GABA被我国当时的卫生部列为新资源食品(现更名为新食品原料)。
GABA的制备方法主要有化学合成法和微生物发酵法。常见的化学合成法是将邻苯二甲酰亚胺钾和4-氯丁氰进行反应，产物经过浓硫酸回流水解后结晶提纯得到，其反应如下：
此外还有以吡咯烷酮作为原料，经过氢氧化钙和碳酸氢铵水解开环制得GABA，反应如下：
虽然通过化学合成方法来制备GABA具有反应速度快的优势，但由于其合成成本较高，而产率较低，并且在其生产工艺中使用了危险溶剂、甚至有毒溶剂，因而化学合成法制备的GABA不能用于食品，也不能被认为是天然的食品添加剂。
微生物发酵法主要是通过具有高活性GAD的微生物发酵生产GABA。发酵法具有生产条件温和、易放大、生产成本相对较低等优点。中国专利CN 102174449 B公开了一种高产γ-氨基丁酸的生产方法及应用，包括菌种分离筛选、吖啶橙—紫外线诱变和N+注入诱变获得一株高产γ-氨基丁酸(Lactobacillus brevis)TCCC(CGMCC NO.3414)菌株；发酵培养基和发酵条件的优化以及采用该菌株的生长细胞发酵和休止细胞的生物转化相偶联生产γ-氨基丁酸；采用膜过滤、吸附树脂脱色、强酸阳离子树脂离交、乙醇重结晶等技术以及制备色谱技术节能降耗技术，将γ-氨基丁酸从发酵和生物转化液中分离出来，提纯制得纯度达99％的结晶γ-氨基丁酸。中国专利CN 102559552 A公开了一种高产γ-氨基丁酸的生产方法及应用,其中的高产γ-氨基丁酸(GABA)生长棉子糖肠球菌M1，保藏号为CGMCC No.5584。其生产方法包括菌种分离筛选获得一株高产γ-氨基丁酸的(Entercoccus raffinosus)TCCC 11660(CGMCC No.5584)菌株、发酵培养基和发酵条件的优化以及10L发酵罐实验。中国专利CN 104388514 A公开了利用一种复合菌种发酵制备γ-氨基丁酸的方法，发酵菌株包括植物乳杆菌ZSM-002、卡斯特酒香酵母ZSM-001和保藏号为CCTCC NO：M 2014376的根霉(Rhizopus oryzae)zsm-005，其特征在于，以谷物种子或含胚副产物为原料，经清洗消毒、γ-氨基丁酸富集、分离提取、精制与纯化等过程制备高浓度液态γ-氨基丁酸产品，液态γ-氨基丁酸经干燥过程制备高浓度固态γ-氨基丁酸产品。中国专利CN 103555779 B公开了利用一种发酵生产γ-氨基丁酸的方法，是将两种谷氨酸脱羧酶基因gadB1，gadB2构建共表达载体导入到谷氨酸生产菌中构建基因工程菌，利用基因工程菌表达的谷氨酸脱羧酶将其自身积累的谷氨酸脱去一个羧基合成出γ-氨基丁酸的复合菌种发酵制备γ-氨基丁酸的方法。通过对种子培养基、发酵培养基和发酵条件优化，尤其是尿素在6-24小时内间断补加，大大提高了GABA的产量和谷氨酸转化率。上述已经公开的专利无论是经分离、诱变得到的纯化菌株还是经改造的工程菌株；无论是单一菌种发酵还是混合菌种发酵，其发酵法生产γ-氨基丁酸的方法仍然存在以下几个方面的问题：(1)发酵周期长，一般需要几十到上百小时；(2)发酵过程放热量大，冷却循环水用量大，能耗高；(3)发酵液组成比较复杂，提取成本较高；(4)废渣产量相对较大，菌体过滤困难，活性炭、珍珠岩等物质用量大，副产物给企业带来处理压力。
而采用微生物转化法生产GABA可以提高底物转化率和产品纯度，具有节约生产成本、缩短生产周期及降低环境污染等诸多优点。中国专利CN 104031951 A公开了一种利用乳酸菌静息细胞发酵生产γ-氨基丁酸工艺，利用经过诱导的乳酸菌活性静息细胞体，分散于含有底物的转化缓冲液中，在合适的条件下转化生产γ-氨基丁酸；利用该方法可以大幅度缩短转化时间，提高转化效率，产物成份简单，利于分离提纯，且转化无需无菌条件，设备要求简单，耗能低；经条件优化，本工艺已适合工业化生产。中国专利CN 103320362 A一株产谷氨酸脱羧酶的菌株及用其生产γ-氨基丁酸的方法，提供了一株从泡菜中筛选而来的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SK30.001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2013250，并提供了一种利用该菌株发酵生产γ-氨基丁酸的方法，该方法包括：(a)在发酵培养基中对该菌株进行培养，以得到该植物乳杆菌菌体；(b)用植物乳杆菌菌体转化谷氨酸钠生成γ-氨基丁酸；(c)γ-氨基丁酸的分离纯化。上述公开的专利仍然存在γ-氨基丁酸产量低、转化时间长、转化率低等缺陷，效果不太理想。
因此，探索一种γ-氨基丁酸产量高、转化时间短、转化率高的直接利用高产菌株菌体转化MSG制备GABA的方法仍是本领域技术人员的不懈追求。
发明内容
本发明所解决的技术问题是克服现有直接利用高产菌株菌体转化制备γ-氨基丁酸的方法的缺陷，以具有高效转化L-谷氨酸钠(MSG)或谷氨酸(GLu)为γ-氨基丁酸(GABA)能力的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CGMCC NO.3414为出发菌株，经增殖培养和湿菌体收集，将湿菌体重悬于科学复配L-谷氨酸钠(MSG)、谷氨酸(GLu)混合物的缓冲溶液中，加入对菌株所产胞内酶具有较强激活作用的Na2B4O7·10H2O或MgSO4，以最大限度地发挥胞内酶的活性，将L-谷氨酸钠(MSG)、谷氨酸(GLu)混合物催化、转化为γ-氨基丁酸，再加上与缓冲溶液中其它成分的科学复配、协同作用，大大提高了L-谷氨酸钠(MSG)和谷氨酸(GLu)的摩尔转化率和γ-氨基丁酸的产量。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法，包括如下步骤：
1)将保存完好的短乳杆菌CGMCC NO.3414的斜面菌种活化1-3次，接种1-2环于种子培养基中，30-35℃静置培养12h后，以5-20％(V/V)的接种量接种到发酵培养基中，30-35℃静置培养16-72h得发酵液；
进一步地，所述种子培养基组成为：玉米糖化液15-30g，蛋白胨5-15g，酵母浸出粉5-10g,柠檬酸铵1-5g，硫酸镁0.3-1.0g，硫酸锰0.1-0.5g,乙酸钠1-4g，磷酸二氢钾1-4g，蒸馏水1000mL,pH值6.0；
进一步地，所述发酵培养基组成为：玉米糖化液20-30g，酵母浸出粉10-20g，玉米浆10-30g，乙酸钠1-4g，磷酸钾1-4g，硫酸镁0.2-0.8g，硫酸铵0.1-0.5g，蒸馏水1000mL,pH值6.0；
2)将发酵液于4℃、5000r/min离心10min，然后用无菌水洗涤、离心，重复3次，收集湿菌体；
3)向每升pH值为4.5-5.0的缓冲溶液中加入收集得到的湿菌体25-75g、底物70-320g、磷酸吡哆醛0.05-0.3mmol、Na2B4O7·10H2O或MgSO4 0.14-0.72g、表面活性剂0.5-2g，均匀混合，于温度25-55℃、转速150-200r/min催化转化4-12h得到转化液，转化液经常规分离、提取和纯化工艺即得纯化γ-氨基丁酸；
进一步地，所述缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸铵缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、乙酸-乙酸铵缓冲液、乳酸-乳酸钠缓冲液中的任意一种；
优选地，所述缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸铵缓冲液；
进一步地，所述缓冲液体系浓度为0.4-0.8mol/L；
进一步地，所述底物为L-谷氨酸钠、谷氨酸的混合物；
优选地，所述L-谷氨酸钠、谷氨酸混合的质量比为1:1-3；
进一步地，所述表面活性剂为Tween-20、Tween-60、Tween-80、PEG 4000、PEG 6000中的任意一种；
优选地，所述表面活性剂为PEG 6000或Tween-80。
经上述制备方法制备的转化液中γ-氨基丁酸含量为45.74-202.18g/L,底物摩尔转化率为95.92-99.75％，菌体可重复利用8次。
本发明所述的高产γ-氨基丁酸的菌株为中国专利CN201110051732公开的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CGMCC NO.3414。
有益效果：
本发明所解决的技术问题是克服现有直接利用高产菌株菌体转化MSG制备GABA的方法的缺陷，以具有高效转化L-谷氨酸钠(MSG)或谷氨酸(GLu)为γ-氨基丁酸(GABA)能力的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CGMCC NO.3414为出发菌株，经增殖培养和菌体收集，将菌体重悬于科学复配L-谷氨酸钠(MSG)、谷氨酸(GLu)混合物的缓冲溶液中，加入对菌株所产胞内酶具有较强激活作用的Na2B4O7·10H2O或MgSO4，以最大限度地发挥胞内酶的活性，将L-谷氨酸钠(MSG)、谷氨酸(GLu)混合物催化、转化为γ-氨基丁酸，再加上与缓冲溶液中其它成分的科学复配、协同作用，大大提高了L-谷氨酸钠(MSG)和谷氨酸(GLu)的摩尔转化率和γ-氨基丁酸的产量，最终转化液中γ-氨基丁酸含量为45.74-202.18g/L,底物摩尔转化率为95.92-99.75％，菌体可重复利用8次。该方法具有γ-氨基丁酸产量大、无毒副产物、转化时间短、转化效率高、转化液成分简单，利于产品分离纯化、可以人为地调节转化过程以缩短生产时间，从而节约大量的能源和生产成本，不仅提高了产品质量和产量，而且保护了环境，具有较好的经济价值和社会效益，可规模化生产，利于工业推广。
需要说明的是，将Na2B4O7·10H2O或MgSO4创造性地科学复配于缓冲液中以激活或提高胞内酶的活力机理是本申请发明人等的推断，本申请发明的机理即使与所述机理不符，仍属本发明范围内。还需要说明的是本发明的技术效果是各个步骤技术特征协同作用的总和，各步骤之间具有一定的内在相关性，并非单个技术特征效果的简单叠加，事实上，上述技术效果与现有技术相比确实大大提高了L-谷氨酸钠(MSG)和谷氨酸(GLu)的摩尔转化率和γ-氨基丁酸的产量。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
实施例1
一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法，包括如下步骤：
1)将保存完好的短乳杆菌CGMCC NO.3414的斜面菌种活化1次，接种1环于种子培养基中，30℃静置培养12h后，以5％(V/V)的接种量接种到发酵培养基中，30℃静置培养16h得发酵液；
所述种子培养基组成为：玉米糖化液15g，蛋白胨5g，酵母浸出粉5g,柠檬酸铵1g，硫酸镁0.3g，硫酸锰0.1g,乙酸钠1g，磷酸二氢钾1g，蒸馏水1000mL,pH值6.0；
所述发酵培养基组成为：玉米糖化液20g，酵母浸出粉10g，玉米浆10g，乙酸钠1g，磷酸钾1g，硫酸镁0.2g，硫酸铵0.1g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
2)将发酵液于4℃、5000r/min离心10min，然后用无菌水洗涤、离心，重复3次，收集湿菌体；
3)向每升pH值为4.5的0.8mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液中加入收集得到的湿菌体75g、谷氨酸钠35g、谷氨酸35g、磷酸吡哆醛0.05mmol、MgSO4 0.72g、PEG 4000 0.5g，均匀混合，于温度25℃、转速150r/min催化转化4h得到转化液，转化液经常规分离、提取和纯化工艺即得纯化γ-氨基丁酸；
经上述制备方法制备的转化液中γ-氨基丁酸含量为45.74g/L,谷氨酸钠摩尔转化率为99.75％。
实施例2
一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法，包括如下步骤：
1)将保存完好的短乳杆菌CGMCC NO.3414的斜面菌种活化2次，接种2环于种子培养基中，35℃静置培养12h后，以20％(V/V)的接种量接种到发酵培养基中，35℃静置培养32h得发酵液；
所述种子培养基组成为：玉米糖化液30g，蛋白胨15g，酵母浸出粉10g，柠檬酸铵5g，硫酸镁1.0g，硫酸锰0.5g，乙酸钠4g，磷酸二氢钾4g，蒸馏水1000mL,pH值6.0；
所述发酵培养基组成为：玉米糖化液30g，酵母浸出粉20g，玉米浆30g，乙酸钠4g，磷酸钾4g，硫酸镁0.8g，硫酸铵0.5g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
2)将发酵液于4℃、5000r/min离心10min，然后用无菌水洗涤、离心，重复3次，收集湿菌体；
3)向每升pH值为4.6的0.6mol/L的乙酸-乙酸铵缓冲液中加入收集得到的湿菌体25g、谷氨酸钠40g、谷氨酸60g、磷酸吡哆醛0.3mmol、MgSO4 0.14g、PEG 6000 1.5g，均匀混合，于温度55℃、转速180r/min催化转化6h得到转化液，转化液经常规分离、提取和纯化工艺即得纯化γ-氨基丁酸；
经上述制备方法制备的转化液中γ-氨基丁酸含量为65.75g/L,谷氨酸摩尔转化率为99％。
实施例3
一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法，包括如下步骤：
1)将保存完好的短乳杆菌CGMCC NO.3414的斜面菌种活化2次，接种2环于种子培养基中，33℃静置培养12h后，以10％(V/V)的接种量接种到发酵培养基中，33℃静置培养48h得发酵液；
所述种子培养基组成为：玉米糖化液25g，蛋白胨10g，酵母浸出粉8g,柠檬酸铵3g，硫酸镁0.3g，硫酸锰0.2g，乙酸钠2g，磷酸二氢钾3g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
所述发酵培养基组成为：玉米糖化液25g，酵母浸出粉15g，玉米浆20g，乙酸钠3g，磷酸钾2g、硫酸镁0.3g、硫酸铵0.2g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
2)将发酵液于4℃、5000r/min离心10min，然后用无菌水洗涤、离心，重复3次，收集湿菌体；
3)向每升pH值为4.5的0.8mol/L的柠檬酸-柠檬酸铵缓冲溶液中加入收集得到的湿菌体30g、谷氨酸钠40g，谷氨酸80g、磷酸吡哆醛0.2mmol、MgSO4 0.5g、Tween-60 2g，均匀混合，于温度30℃、转速200r/min催化转化6h得到转化液，转化液经常规分离、提取和纯化工艺即得纯化γ-氨基丁酸；
经上述制备方法制备的转化液中γ-氨基丁酸含量为77.15g/L，底物摩尔转化率为95.92％。
实施例4
一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法，包括如下步骤：
1)将保存完好的短乳杆菌CGMCC NO.3414的斜面菌种活化2次，接种2环于种子培养基中，33℃静置培养12h后，以12％(V/V)的接种量接种到发酵培养基中，33℃静置培养48h得发酵液；
所述种子培养基组成为：玉米糖化液22g，蛋白胨10g，酵母浸出粉8g,柠檬酸铵3g，硫酸镁0.6g，硫酸锰0.3g，乙酸钠3g，磷酸二氢钾3g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
所述发酵培养基组成为：玉米糖化液25g，酵母浸出粉15g，玉米浆20g，乙酸钠3g，磷酸钾3g，硫酸镁0.5g，硫酸铵0.3g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
2)将发酵液于4℃、5000r/min离心10min，然后用无菌水洗涤、离心，重复3次，收集湿菌体；
3)向每升pH值为5.0的0.6mol/L的柠檬酸-柠檬酸铵缓冲溶液中加入收集得到的湿菌体40g、谷氨酸钠80g、谷氨酸80g、磷酸吡哆醛0.2mmol、Na2B4O7·10H2O 0.14g、Tween-80 1.5g，均匀混合，于温度30℃、转速200r/min催化转化8h得到转化液，转化液经常规分离、提取和纯化工艺即得纯化γ-氨基丁酸；
经上述制备方法制备的转化液中γ-氨基丁酸含量为100.53g/L，底物摩尔转化率为95.92％。
实施例5
一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法，包括如下步骤：
1)将保存完好的短乳杆菌CGMCC NO.3414的斜面菌种活化1次，接种2环于种子培养基中，35℃静置培养12h后，以8％(V/V)的接种量接种到发酵培养基中，30℃静置培养60h得发酵液；
所述种子培养基组成为：玉米糖化液15g，蛋白胨15g，酵母浸出粉5g，柠檬酸铵5g，硫酸镁0.3g，硫酸锰0.5g，乙酸钠1g，磷酸二氢钾4g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
所述发酵培养基组成为：玉米糖化液20g，酵母浸出粉20g，玉米浆10g，乙酸钠4g，磷酸钾1g，硫酸镁0.8g，硫酸铵0.1g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
2)将发酵液于4℃、5000r/min离心10min，然后用无菌水洗涤、离心，重复3次，收集湿菌体；
3)向每升pH值为4.5的0.6mol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中加入收集得到的湿菌体60g、谷氨酸钠80g、谷氨酸160g、磷酸吡哆醛0.15mmol、Na2B4O7·10H2O 0.5g、Tween-80 0.5g，均匀混合，于温度50℃、转速200r/min催化转化10h得到转化液，转化液经常规分离、提取和纯化工艺即得纯化γ-氨基丁酸；
经上述制备方法制备的转化液中γ-氨基丁酸含量为159.12g/L，底物摩尔转化率为98.92％。
实施例6
一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法，包括如下步骤：
1)将保存完好的短乳杆菌CGMCC NO.3414的斜面菌种活化3次，接种1环于种子培养基中，30℃静置培养12h后，以15％(V/V)的接种量接种到发酵培养基中，35℃静置培养72h得发酵液；
所述种子培养基组成为：玉米糖化液30g，蛋白胨5g，酵母浸出粉10g,柠檬酸铵1g，硫酸镁1.0g，硫酸锰0.1g,乙酸钠4g，磷酸二氢钾1g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
所述发酵培养基组成为：玉米糖化液30g，酵母浸出粉10g，玉米浆30g，乙酸钠1g，磷酸钾4g、硫酸镁0.2g、硫酸铵0.5g，蒸馏水1000mL，pH值6.0；
2)将发酵液于4℃、5000r/min离心10min，然后用无菌水洗涤、离心，重复3次，收集湿菌体；
3)向每升pH值为4.8的0.4mol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中加入收集得到的湿菌体50g、L-谷氨酸钠80g、谷氨酸240g、磷酸吡哆醛0.2mmol、Na2B4O7·10H2O 0.72g、PEG6000 0.5g，均匀混合，于温度45℃、转速180r/min催化转化12h得到转化液，转化液经常规分离、提取和纯化工艺即得纯化γ-氨基丁酸；
经上述制备方法制备的转化液中γ-氨基丁酸含量为202.18g/L，底物摩尔转化率为99.43％。
Claims (8)
1.一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：将保存完好的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CGMCC NO.3414的斜面菌种活化后，逐级扩培至种子培养基、发酵培养基，于30-35℃静置培养16-72h，离心、洗涤，收集湿菌体；向每升缓冲溶液中加入收集得到的湿菌体25-75g、底物70-320g、磷酸吡哆醛0.05-0.3mmol、Na2B4O7·10H2O 0.14-0.72g、表面活性剂0.5-2g，均匀混合，于温度25-55℃、转速150-200r/min催化转化4-12h得到转化液，转化液经常规分离、提取和纯化工艺即得纯化γ-氨基丁酸；
所述底物为L-谷氨酸钠、谷氨酸的混合物；
所述表面活性剂为Tween-60、Tween-80、PEG 4000、PEG 6000中的任意一种。
2.如权利要求1所述制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述离心、洗涤条件为发酵液首先于4℃、5000r/min离心10min，再用无菌水洗涤、离心，重复3次。
3.如权利要求1所述制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸铵缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、乙酸-乙酸铵缓冲液、乳酸-乳酸钠缓冲液中的任意一种。
4.如权利要求3所述制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述缓冲液pH值为4.5-5.0。
5.如权利要求3所述制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述缓冲液体系浓度为0.4-0.8mol/L。
6.如权利要求1所述制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述L-谷氨酸钠、谷氨酸混合的质量比为1:1-3。
7.如权利要求1所述制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述种子培养基组成为：玉米糖化液15-30g，蛋白胨5-15g，酵母浸出粉5-10g，柠檬酸铵1-5g，硫酸镁0.3-1.0g，硫酸锰0.1-0.5g，乙酸钠1-4g，磷酸二氢钾1-4g，蒸馏水1000mL，pH值6.0。
8.如权利要求1所述制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述发酵培养基组成为：玉米糖化液20-30g，酵母浸出粉10-20g，玉米浆10-30g，乙酸钠1-4g，磷酸钾1-4g，硫酸镁0.2-0.8g，硫酸铵0.1-0.5g，蒸馏水1000mL，pH值6.0。
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