CN103397005A - 一种葡萄糖氧化酶的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：(1)取黑曲霉菌种接种于一级种子培养基中，培养得一级种子液；(2)将一级种子液接种于二级种子培养基中，培养得二级种子液；(3)将二级种子液接种于发酵培养基中，得到混合培养基，后添加果糖，流加葡萄糖，得到酶活达到200U/mL以上的发酵液；(4)将发酵液进行过滤，对滤液超滤浓缩，得到酶活达到800U/mL以上的葡萄糖氧化酶酶液；(5)将葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，得到酶活达到2500U/mL以上的固体葡萄糖氧化酶。上述葡萄糖氧化酶的生产方法，工艺简单、操作容易、生产效率高，且生产的葡萄糖氧化酶活力高，稳定性好，易于储存。
Description
技术领域
本发明涉及葡萄糖氧化酶领域，特别是涉及一种葡萄糖氧化酶的生产方法。
背景技术
葡萄糖氧化酶(GOD)以氧为电子接受体，能专一地氧化β-D-葡萄糖为葡萄糖酸和过氧化氢。葡萄糖氧化酶是酶应用技术领域中一种非常重要的酶，作为国家允许使用的酶制剂之一，它在食品、医药、饲料等行业中得到了广泛应用。葡萄糖氧化酶在生物界分布很广泛，其工业化生产是利用微生物发酵法生产，但该方法存在发酵活力低、产量低、生产成本高等限制性因素，故为了克服上述问题，技术人员在应用各种遗传学手段提高微生物的生产性能方面，做了大量工作，而对通过培养方法的改进来提高发酵性能方面所做的工作还有所欠缺。
发明内容
本发明的目的在于提供一种工艺简单、发酵活力高的葡萄糖氧化酶的生产方法。
一种葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：
(1)取黑曲霉菌种按10～15％的接种量接种于一级种子培养基中，在28～32℃培养20～24h，控制溶氧在50％以上，培养即得一级种子液；
(2)将所述一级种子液按10～15％的接种量接种于二级种子培养基中，在28～32℃培养20～24h，控制溶氧在50％以上，培养即得二级种子液；
(3)将所述二级种子液按10～15％的接种量接种于发酵培养基中，在28～32℃培养40～45h，控制溶氧在50％以上，得到混合培养基，后按每升混合培养基添加8～10g果糖的比例添加果糖，并开始按每升混合培养基流加葡萄糖1～2g/小时的比例添加葡萄糖，同时控制pH为5.5～6.5，培养80～96h后即得酶活达到200U/mL以上的葡萄糖氧化酶发酵液，其中，所述发酵培养基的成分为：葡萄糖50～60g/L、酵母浸膏10～15g/L、硫酸铵3～5g/L、磷酸二氢钾2～3g/L、硫酸镁0.5～1g/L、氯化锰0.2～0.5g/L、碳酸钙20～30g/L；
(4)将所述葡萄糖氧化酶发酵液进行过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到800U/mL以上的葡萄糖氧化酶酶液；
(5)将所述葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到2500U/mL以上的固体葡萄糖氧化酶；
其中，步骤(1)中的所述一级种子培养基和步骤(2)中的所述二级种子培养基的成分都为：葡萄糖60～80g/L、酵母浸膏10～15g/L、硫酸铵3～5g/L、磷酸二氢钾2～3g/L、硫酸镁0.5～1g/L、氯化锰0.2～0.5g/L、碳酸钙15～20g/L。
在其中一个实施例中，所述一级种子培养基、所述二级种子培养基的成分都为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
在其中一个实施例中，步骤(2)中，所述发酵培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏10g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙30g/L。
在其中一个实施例中，步骤(3)中，通过添加氨水的方式控制pH为5.5～6.5。
在其中一个实施例中，步骤(1)、(2)、(3)中控制溶氧的方法都为：在培养过程中，调整搅拌转速或通入无菌空气控制溶氧在50％以上。
在其中一个实施例中，步骤(4)中，将葡萄糖氧化酶发酵液通过板框过滤方法，除去菌体及其他微小颗粒。
上述葡萄糖氧化酶的生产方法，通过在发酵培养基中控制葡萄糖的加入量，从而控制菌体生长速度，防止发酵培养后期菌体生长后劲不足；另外，在发酵培养基中加入果糖，可以限制葡萄糖氧化酶对葡萄糖的作用，减少葡萄糖酸的产生，有利于促进葡萄糖氧化酶的合成。
上述葡萄糖氧化酶的生产方法，工艺简单、操作容易、生产效率高，且生产的葡萄糖氧化酶活力高，稳定性好，易于储存。
附图说明
图1为一实施方式的葡萄糖氧化酶的生产方法流程图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
请参阅图1，一实施方式的葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：
一种葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：
步骤S100、取黑曲霉菌种按10～15％的接种量接种于一级种子培养基中，在28～32℃培养20～24h，控制溶氧在50％以上，培养即得一级种子液。
其中，一级种子培养基的成分为：葡萄糖60～80g/L、酵母浸膏10～15g/L、硫酸铵3～5g/L、磷酸二氢钾2～3g/L、硫酸镁0.5～1g/L、氯化锰0.2～0.5g/L、碳酸钙15～20g/L。
步骤S200、将一级种子液按10～15％的接种量接种于二级种子培养基中，在28～32℃培养20～24h，控制溶氧在50％以上，培养即得二级种子液。
其中，二级种子培养基的成分为：葡萄糖60～80g/L、酵母浸膏10～15g/L、硫酸铵3～5g/L、磷酸二氢钾2～3g/L、硫酸镁0.5～1g/L、氯化锰0.2～0.5g/L、碳酸钙15～20g/L。
步骤S300、将二级种子液按10～15％的接种量接种于发酵培养基中，在28～32℃培养40～45h，控制溶氧在50％以上，得到混合培养基，后按每升混合培养基添加8～10g果糖的比例添加果糖，并开始按每升混合培养基流加葡萄糖1～2g/小时的比例添加葡萄糖，同时控制pH为5.5～6.5，培养80～96h后即得酶活达到200U/mL以上的葡萄糖氧化酶发酵液，其中，发酵培养基的成分为：葡萄糖50～60g/L、酵母浸膏10～15g/L、硫酸铵3～5g/L、磷酸二氢钾2～3g/L、硫酸镁0.5～1g/L、氯化锰0.2～0.5g/L、碳酸钙20～30g/L。
优选的，发酵培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏10g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙30g/L。
控制pH值步骤为：通过添加氨水的方式控制pH为5.5～6.5。
上述步骤S100、S200、S300中控制溶氧的方法都为：在培养过程中，调整搅拌转速或通入无菌空气控制溶氧在50％以上。
步骤S400、将葡萄糖氧化酶发酵液进行过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到800U/mL以上的葡萄糖氧化酶酶液。
优选的，将葡萄糖氧化酶发酵液通过板框过滤方法，除去菌体及其他微小颗粒。
其中，葡萄糖氧化酶活力检测按照河北省微生物研究所制定的企业标准Q/WSY01-2010执行。
步骤S500、将葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到2500U/mL以上的固体葡萄糖氧化酶。
喷雾干燥方法的优点为：生产效率高，生产能力大，且产品质量高。淀粉作为载体可以充当葡萄糖氧化酶的保护剂，减少储存过程中的损失。
在葡萄糖氧化酶发酵生产中，葡萄糖一方面作为菌体利用的碳源，葡萄糖氧化酶的诱导物，另一方面其代谢产物葡萄糖酸又会阻碍葡萄糖氧化酶的合成。为此，本发明在发酵初期，在发酵培养基中降低葡萄糖的加量，控制菌体生长速度，防止发酵后期菌体生长后劲不足，及防止葡萄糖酸的大量累积，阻碍萄糖氧化酶的合成；同时在发酵培养基中添加碳酸钙既可以作为孢子附着的载体，有利于黑曲霉的生长，又可以中和生成的葡萄糖酸，有效缓解pH下降过快，减轻葡萄糖酸的阻碍作用。到发酵中期，发酵液中葡萄糖的浓度下降，此时流加葡萄糖既可以维持菌体的生长，又可以持续诱导葡萄糖氧化酶的合成。另外，果糖作为葡萄糖氧化酶的竞争性抑制剂与酶结合后，可以限制葡萄糖氧化酶对葡萄糖的作用，减少葡萄糖酸的产生，有利于促进葡萄糖氧化酶的合成。
本发明的葡萄糖氧化酶的生产方法工艺简单、操作容易、生产效率高，且生产的葡萄糖氧化酶活力高，稳定性好，易于储存。
下面结合具体实施例，对本发明作进一步的阐述。
实施例1
一种葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：
(1)取黑曲霉菌种按10％的接种量接种于一级种子培养基中，在32℃培养24h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，培养即得一级种子液。
其中，一级种子培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
(2)将一级种子液按15％的接种量接种于二级种子培养基中，在28℃培养24h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，培养即得二级种子液。
其中，二级种子培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
(3)将二级种子液按10％的接种量接种于发酵培养基中，在28℃培养40h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，得到混合培养基，后按每升混合培养基添加8g果糖的比例添加果糖，并开始按每升混合培养基流加葡萄糖2g/小时的比例添加葡萄糖，同时通过添加氨水的方式控制pH为5.5～6.0，培养80h后即得酶活达到220U/mL的葡萄糖氧化酶发酵液，其中，发酵培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏10g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙30g/L。
(4)将葡萄糖氧化酶发酵液进行板框过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到850U/mL的葡萄糖氧化酶酶液。
(5)将葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到2500U/mL的固体葡萄糖氧化酶。
实施例2
一种葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：
(1)取黑曲霉菌种按15％的接种量接种于一级种子培养基中，在30℃培养20h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，培养即得一级种子液。
其中，一级种子培养基的成分为：葡萄糖80g/L、酵母浸膏10g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙15g/L。
(2)将一级种子液按12％的接种量接种于二级种子培养基中，在32℃培养24h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，培养即得二级种子液。
其中，二级种子培养基的成分为：葡萄糖80g/L、酵母浸膏10g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙15g/L。
(3)将二级种子液按15％的接种量接种于发酵培养基中，在28℃培养45h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，得到混合培养基，后按每升混合培养基添加10g果糖的比例添加果糖，并开始按每升混合培养基流加葡萄糖1g/小时的比例添加葡萄糖，同时通过添加氨水的方式控制pH为6.0～6.5，培养90h后即得酶活达到250U/mL的葡萄糖氧化酶发酵液，其中，发酵培养基的成分为：葡萄糖50g/L、酵母浸膏10g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
(4)将葡萄糖氧化酶发酵液进行板框过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到850U/mL的葡萄糖氧化酶酶液。
(5)将葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到2580U/mL的固体葡萄糖氧化酶。
实施例3
一种葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：
(1)取黑曲霉菌种按12％的接种量接种于一级种子培养基中，在28℃培养22h，调整搅拌转速控制溶氧在50％以上，培养即得一级种子液。
其中，一级种子培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵4g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙20g/L。
(2)将一级种子液按10％的接种量接种于二级种子培养基中，在32℃培养20h，调整搅拌转速控制溶氧在50％以上，培养即得二级种子液。
其中，二级种子培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵4g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙20g/L。
(3)将二级种子液按15％的接种量接种于发酵培养基中，在30℃培养42h，调整搅拌转速控制溶氧在50％以上，得到混合培养基，后按每升混合培养基添加8g果糖的比例添加果糖，并开始按每升混合培养基流加葡萄糖1g/小时的比例添加葡萄糖，同时通过添加氨水的方式控制pH为5.5～6.0，培养96h后即得酶活达到235U/mL的葡萄糖氧化酶发酵液，其中，发酵培养基的成分为：葡萄糖55g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵4g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙30g/L。
(4)将葡萄糖氧化酶发酵液进行板框过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到880U/mL的葡萄糖氧化酶酶液。
(5)将葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到2600U/mL的固体葡萄糖氧化酶。
实施例4
一种葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：
(1)取黑曲霉菌种按10％的接种量接种于一级种子培养基中，在28℃培养24h，调整搅拌转速控制溶氧在50％以上，培养即得一级种子液。
其中，一级种子培养基的成分为：葡萄糖70g/L、酵母浸膏12g/L、硫酸铵4g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙15g/L。
(2)将一级种子液按15％的接种量接种于二级种子培养基中，在30℃培养22h，调整搅拌转速控制溶氧在50％以上，培养即得二级种子液。
其中，二级种子培养基的成分为：葡萄糖70g/L、酵母浸膏12g/L、硫酸铵4g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙15g/L。
(3)将二级种子液按12％的接种量接种于发酵培养基中，在28℃培养45h，调整搅拌转速控制溶氧在50％以上，得到混合培养基，后按每升混合培养基添加10g果糖的比例添加果糖，并开始按每升混合培养基流加葡萄糖2g/小时的比例添加葡萄糖，同时通过添加氨水的方式控制pH为6.0～6.5，培养80h后即得酶活达到220U/mL的葡萄糖氧化酶发酵液，其中，发酵培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏12g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
(4)将葡萄糖氧化酶发酵液进行板框过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到820U/mL的葡萄糖氧化酶酶液。
(5)将葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到2560U/mL的固体葡萄糖氧化酶。
对比例1
一种葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：
(1)取黑曲霉菌种按10％的接种量接种于一级种子培养基中，在32℃培养24h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，培养即得一级种子液。
其中，一级种子培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
(2)将一级种子液按15％的接种量接种于二级种子培养基中，在28℃培养24h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，培养即得二级种子液。
其中，二级种子培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
(3)将二级种子液按10％的接种量接种于发酵培养基中，在28℃培养40h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，得到混合培养基，后开始按每升混合培养基流加葡萄糖2g/小时的比例添加葡萄糖，同时通过添加氨水的方式控制pH为5.5～6.0，培养80h后即得酶活达到220U/mL的葡萄糖氧化酶发酵液，其中，发酵培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏10g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙30g/L。
(4)将葡萄糖氧化酶发酵液进行板框过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到850U/mL的葡萄糖氧化酶酶液。
(5)将葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到2500U/mL的固体葡萄糖氧化酶。
对比例2
一种葡萄糖氧化酶的生产方法，包括以下步骤：
(1)取黑曲霉菌种按10％的接种量接种于一级种子培养基中，在32℃培养24h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，培养即得一级种子液。
其中，一级种子培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
(2)将一级种子液按15％的接种量接种于二级种子培养基中，在28℃培养24h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，培养即得二级种子液。
其中，二级种子培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
(3)将二级种子液按10％的接种量接种于发酵培养基中，在28℃培养40h，通入无菌空气控制溶氧在50％以上，得到混合培养基，后按每升混合培养基添加8g果糖的比例添加果糖，同时通过添加氨水的方式控制pH为5.5～6.0，培养80h后即得酶活达到175U/mL的葡萄糖氧化酶发酵液，其中，发酵培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏10g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙30g/L。
(4)将葡萄糖氧化酶发酵液进行板框过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到610U/mL的葡萄糖氧化酶酶液。
(5)将葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到2000U/mL的固体葡萄糖氧化酶。
根据上述实施例1～4及对比例1～2可知，实施例1～4中发酵液平均酶活为231U/mL，相比发酵过程中未加果糖的对比例1的发酵液，酶活提升了32％；相比发酵过程中未流加葡萄糖的对比例2的发酵液，酶活提升了54％；本发明的葡萄糖氧化酶的生产方法，由于加入了果糖及在发酵后期流加葡萄糖，能显著提高黑曲霉产葡萄糖氧化酶发酵水平，葡萄糖氧化酶的生产方法工艺简单、酶活高、生产成本低。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (6)
1.一种葡萄糖氧化酶的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取黑曲霉菌种按10～15％的接种量接种于一级种子培养基中，在28～32℃培养20～24h，控制溶氧在50％以上，培养即得一级种子液；
(2)将所述一级种子液按10～15％的接种量接种于二级种子培养基中，在28～32℃培养20～24h，控制溶氧在50％以上，培养即得二级种子液；
(3)将所述二级种子液按10～15％的接种量接种于发酵培养基中，在28～32℃培养40～45h，控制溶氧在50％以上，得到混合培养基，后按每升混合培养基添加8～10g果糖的比例添加果糖，并开始按每升混合培养基流加葡萄糖1～2g/小时的比例添加葡萄糖，同时控制pH为5.5～6.5，培养80～96h后即得酶活达到200U/mL以上的葡萄糖氧化酶发酵液，其中，所述发酵培养基的成分为：葡萄糖50～60g/L、酵母浸膏10～15g/L、硫酸铵3～5g/L、磷酸二氢钾2～3g/L、硫酸镁0.5～1g/L、氯化锰0.2～0.5g/L、碳酸钙20～30g/L；
(4)将所述葡萄糖氧化酶发酵液进行过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到800U/mL以上的葡萄糖氧化酶酶液；
(5)将所述葡萄糖氧化酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到2500U/mL以上的固体葡萄糖氧化酶；
其中，步骤(1)中的所述一级种子培养基和步骤(2)中的所述二级种子培养基的成分都为：葡萄糖60～80g/L、酵母浸膏10～15g/L、硫酸铵3～5g/L、磷酸二氢钾2～3g/L、硫酸镁0.5～1g/L、氯化锰0.2～0.5g/L、碳酸钙15～20g/L。
2.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶的生产方法，其特征在于，所述一级种子培养基、所述二级种子培养基的成分都为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏15g/L、硫酸铵3g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锰0.2g/L、碳酸钙20g/L。
3.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶的生产方法，其特征在于，步骤(2)中，所述发酵培养基的成分为：葡萄糖60g/L、酵母浸膏10g/L、硫酸铵5g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化锰0.5g/L、碳酸钙30g/L。
4.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶的生产方法，其特征在于，步骤(3)中，通过添加氨水的方式控制pH为5.5～6.5。
5.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶的生产方法，其特征在于，步骤(1)、(2)、(3)中控制溶氧的方法都为：在培养过程中，调整搅拌转速或通入无菌空气控制溶氧在50％以上。
6.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶的生产方法，其特征在于，步骤(4)中，将葡萄糖氧化酶发酵液通过板框过滤方法，除去菌体及其他微小颗粒。
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Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103966179A (zh) * | 2014-05-27 | 2014-08-06 | 河北省微生物研究所 | 葡萄糖氧化酶制剂的制备方法及其利用 |
| CN106591249A (zh) * | 2016-11-30 | 2017-04-26 | 温县兴发生物科技有限公司 | 一种葡萄糖氧化酶制备技术 |
| CN106635843A (zh) * | 2017-02-08 | 2017-05-10 | 金华职业技术学院 | 发酵培养基、菌糠发酵菌剂及发酵方法 |
| CN108795892A (zh) * | 2018-06-19 | 2018-11-13 | 张宝华 | 一种制备、分离和纯化葡萄糖氧化酶的方法 |
| CN109706129A (zh) * | 2018-10-09 | 2019-05-03 | 江苏悠恒生物技术有限公司 | 一种富含sod的饲用复合酶制剂的固态发酵制备方法 |
| CN111004786A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-14 | 广东溢多利生物科技股份有限公司 | 一种葡萄糖氧化酶及其载体与应用 |
| CN111334538A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-06-26 | 鄂州职业大学 | 一种强化绳状青霉发酵葡萄糖生产葡萄糖酸的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101348794A (zh) * | 2007-07-19 | 2009-01-21 | 中国科学院武汉病毒研究所 | 一种高活力葡萄糖氧化酶的编码基因及制备方法和应用 |
| CN101481680A (zh) * | 2009-01-19 | 2009-07-15 | 崔增学 | 葡萄糖氧化酶生产方法 |
| CN102382773A (zh) * | 2011-10-26 | 2012-03-21 | 江南大学 | 一种产葡萄糖氧化酶的黑曲霉及其应用 |
| CN102936585A (zh) * | 2012-12-10 | 2013-02-20 | 江南大学 | 一种发酵生产葡萄糖氧化酶的方法 |
-
2013
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101348794A (zh) * | 2007-07-19 | 2009-01-21 | 中国科学院武汉病毒研究所 | 一种高活力葡萄糖氧化酶的编码基因及制备方法和应用 |
| CN101481680A (zh) * | 2009-01-19 | 2009-07-15 | 崔增学 | 葡萄糖氧化酶生产方法 |
| CN102382773A (zh) * | 2011-10-26 | 2012-03-21 | 江南大学 | 一种产葡萄糖氧化酶的黑曲霉及其应用 |
| CN102936585A (zh) * | 2012-12-10 | 2013-02-20 | 江南大学 | 一种发酵生产葡萄糖氧化酶的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 冮洁等: "葡萄糖氧化酶发酵工艺的研究", 《齐齐哈尔轻工学院学报》, vol. 12, no. 4, 31 December 1996 (1996-12-31), pages 49 - 52 * |
| 刘峰等: "从土壤中快速筛选葡萄糖氧化酶产生菌及发酵工艺的优化", 《生物技术》, vol. 17, no. 3, 30 June 2007 (2007-06-30), pages 64 - 68 * |
| 宫艳艳等: "葡萄糖氧化酶的发酵生产与发酵工艺的研究", 《农业工程技术》, 15 August 2007 (2007-08-15), pages 18 - 22 * |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103966179A (zh) * | 2014-05-27 | 2014-08-06 | 河北省微生物研究所 | 葡萄糖氧化酶制剂的制备方法及其利用 |
| CN106591249A (zh) * | 2016-11-30 | 2017-04-26 | 温县兴发生物科技有限公司 | 一种葡萄糖氧化酶制备技术 |
| CN106635843A (zh) * | 2017-02-08 | 2017-05-10 | 金华职业技术学院 | 发酵培养基、菌糠发酵菌剂及发酵方法 |
| CN106635843B (zh) * | 2017-02-08 | 2019-09-27 | 金华职业技术学院 | 发酵培养基、菌糠发酵菌剂及发酵方法 |
| CN108795892A (zh) * | 2018-06-19 | 2018-11-13 | 张宝华 | 一种制备、分离和纯化葡萄糖氧化酶的方法 |
| CN108795892B (zh) * | 2018-06-19 | 2021-01-12 | 北京天一辉远生物科技有限公司 | 一种制备、分离和纯化葡萄糖氧化酶的方法 |
| CN109706129A (zh) * | 2018-10-09 | 2019-05-03 | 江苏悠恒生物技术有限公司 | 一种富含sod的饲用复合酶制剂的固态发酵制备方法 |
| CN109706129B (zh) * | 2018-10-09 | 2023-05-09 | 江苏悠恒生物技术有限公司 | 一种富含sod的饲用复合酶制剂的固态发酵制备方法 |
| CN111004786A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-14 | 广东溢多利生物科技股份有限公司 | 一种葡萄糖氧化酶及其载体与应用 |
| CN111004786B (zh) * | 2019-12-25 | 2021-12-07 | 广东溢多利生物科技股份有限公司 | 一种葡萄糖氧化酶及其载体与应用 |
| CN111334538A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-06-26 | 鄂州职业大学 | 一种强化绳状青霉发酵葡萄糖生产葡萄糖酸的方法 |
| CN111334538B (zh) * | 2020-03-20 | 2023-04-11 | 鄂州职业大学 | 一种强化绳状青霉发酵葡萄糖生产葡萄糖酸的方法 |
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