CN105061612A - 荸荠多糖及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种荸荠多糖,其由以下摩尔含量的成分组成:甘露糖0.71%、鼠李糖5%~16%、半乳糖醛酸0.71%、葡萄糖76.74%~83.82%、半乳糖3.48%~8.51%、阿拉伯糖1.25%~2.36%。该荸荠多糖的Mn(数均分子量)为1.116×107~1.137×107,Mw(重均分子量)为1.461×107~1.618×107,多分散指数为1.286~1.434。该荸荠多糖具有较佳的解酒保肝功效。
Description
技术领域
本发明涉及一种纯化荸荠多糖的制备法与表征。
背景技术
荸荠(ChineseWaterChestnut)又称马蹄、慈菇、燕尾草等,为莎草科荸荠属植物的球茎,由于其具有独特的风味,备受人们喜爱。荸荠除食用外,还具有一定的药用价值,具有降压、凉血解毒、利尿通便、祛痰、消食除胀,抗菌等作用。有文献记载荸荠具有一定的解酒功效,开发应用前景较好,近年来研究发现,荸荠中多糖具有良好的活性功能。
荸荠具有良好的医疗保健效果,根据《中药大辞典》记载,荸荠性味甘、微寒、无毒,有温中益气、清热开胃、消食化痰之功效,在我国古典文献和明间尚有荸荠解酒作用。通过对荸荠所含营养成分分析显示,每100克荸荠鲜品中,含碳水化合物21.8g、蛋白质1.5g、脂肪0.1g、粗纤维0.5g、钙5mg和磷68mg等,从所含有的营养成分看,荸荠中以碳水化合物和蛋白类为主,脂肪含量较少。功能活性成分主要包括黄酮类、多酚类以及多糖类,关于荸荠活性成分以及药理作用研究的文献报道较多,然而关于荸荠发挥功能作用的有效成分、作用机制以及相关产品开发研究更少,尤其对多糖类活性成分的结构以及单糖组成的了解甚少。
荸荠中含量大量的黄酮类化合物,蔡建等研究表明荸荠中总黄酮的含量为0.86%,同时有研究也发现荸荠中大部分黄酮类化合物主要集中在荸荠皮中,荸荠皮中总黄酮含量平均值为1.59%,可见,荸荠中黄酮类化合物主要在皮部。此类黄酮类具有降血脂、降血压、降血糖、抗癌、增强免疫力以及消炎抗菌等功效。植物多酚具有良好的抗氧化和清除自由基作用,荸荠的蒂头、芽点以及果皮、果肉之间的部位均富集以花青素为主的多酚类物质。在荸荠抗菌成分研究领域,英国学者曾经在对荸荠的研究中发现了一种重要抗菌成分——荸荠英,该物质对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌以及绿脓杆菌具有显著的抑制作用,对降低血压也有一定功能。国内学者也研究发现,荸荠皮中含有一种抗菌物质,对细菌的最低抑菌浓度(MIC)为0.3%,对大多数真菌的最低抑菌浓度为1.25%,且稳定性良好。而且荸荠提取物不仅体外抗菌活性较强,对体内抗菌能力也具有显著作用和明显了消炎功能。此类研究提示我们,荸荠除了食用外,在食品保鲜、外用抗菌消炎类药品研制等方面均具有广阔开发前景。近年来,新加坡《中医学报》曾报道,当地用荸荠来辅助治疗食道癌。食品加工过程中,亚硝胺是一类易于重要的致癌物,现代研究表明荸荠皮提取物可以明显阻断亚硝胺合成以及清除烟硝酸盐。
除了上述天然活性成分之外,有研究发现荸荠中含有大量的多糖成分,关于其多糖结构组成、平均分子量以及生物功效等研究较少。
目前,现仅有少量的研究报道了荸荠多糖的制备方法,有研究采用单因素基础上的正交实验,考察了不同料液比、提取时间和提取温度对荸荠多糖的影响,结果显示最佳提取工艺为固液比为1:30,提取时间为3h,提取温度为80℃;该研究只对荸荠总多糖含量进行了简单测定,并未对所提取的多糖单糖结构组成以及平均分子量分布等特征进行测定。
也有研究人员采用超声波辅助法从荸荠中提取多糖,并研究了多糖性质和组成,其最佳提取工艺是料液比为1:12、超声波辐射时间为40min、超声功率为80W、温度为70℃,所提取荸荠多糖纯度为78.8%,理化性质检测显示主要有葡萄糖和半乳糖组成,两者摩尔比为1:10,显然该多糖单糖组成较单一,与本发明多糖在单糖组成上有较大差别,而且作者并未对其分子量分布进行表征。
荸荠为我国长江流域以南地区各省广泛栽培的水生瓜果,荸荠不仅汁多味甜,营养丰富,而且具有多种保健作用及药用价值,自古以来就有“地下雪梨”和“江南人参”的美誉。长期使用对人体没有任何副作用。此外,荸荠类化合物来源丰富、价格低廉,开发成本较低。因此,利用荸荠提取物来研究和开发相关功能产品具有良好的前景。
虽然荸荠具有多种生物活性优势,但是其功能活性成分研究尚存在如下不足之处:
1、荸荠作为整体食用,由于其所含天然化学成分较多,主要活性成分不明确,尤其对其中所含的多糖结构了解甚少。
2、由于荸荠中具有多糖、黄酮、多酚、维生素、氨基酸、微量元素等多种天然成分,只有多糖为天然高聚物,然而关于荸荠多糖的平均分子量大小尚不知。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种纯化荸荠多糖及其制备方法。
为了解决上述技术问题,本发明提供一种荸荠多糖,其由以下摩尔含量的成分组成:
甘露糖0.71%
鼠李糖5%~16%
半乳糖醛酸0.71%
葡萄糖76.74%~83.82%
半乳糖3.48%~8.51%
阿拉伯糖1.25%~2.36%;
该荸荠多糖的Mn(数均分子量)为1.116×107~1.137×107,Mw(重均分子量)为1.461×107~1.618×107,多分散指数为1.286~1.434。
作为本发明的荸荠多糖的改进,其由以下摩尔含量的成分组成:甘露糖0.71%、鼠李糖10%、半乳糖醛酸0.71%、葡萄糖82.56%、半乳糖3.98%以及阿拉伯糖2.04%组成;
该荸荠多糖的Mn(数均分子量)为1.137×107,Mw(重均分子量)为1.461×107,多分散指数为1.286。
本发明还同时提供了上述荸荠多糖的制备方法,包括以下步骤:
1)、先将去皮荸荠于榨汁机内进行粉碎榨汁,然后加入为去皮荸荠2.5~3.5倍重量(较佳为3倍重量)的超纯水于75~85℃(较佳为80℃)加热2h;接着过滤,分别得滤液Ⅰ和滤渣;
在滤渣中加入为去皮荸荠1.3~1.8倍重量(较佳为1.5倍重量)的超纯水,75~85℃(较佳为80℃)加热1h,过滤,所得的滤液Ⅱ与滤液Ⅰ合并后得荸荠汁;
将荸荠汁于3~5℃(较佳为4℃)静置10~12小时(过夜),过滤出静置所形成的沉淀物(淀粉),所得的液体浓缩至为原体积的1/30~1/20,得浓缩后荸荠汁;
2)、将氯仿:正丁醇=5:1体积比混合,得试剂(sevage试剂);
将浓缩后荸荠汁与该试剂按5:1的体积比混合,均匀搅拌(搅拌15min)后于2000r/min离心10~60min,取上层液体;
将上层液体与95%(体积浓度)乙醇按照1:3~1:10的体积比例混合搅拌,3~5℃(较佳为4℃)的低温下静置10~12小时(过夜)、过滤,将过滤所得的滤饼用石油醚洗涤(洗涤过程中实现除脂)后,得荸荠粗多糖;
备注说明:因为石油醚是非极性试剂,因此可用来除去滤饼中脂质成分;
3)、准确称取0.5g荸荠粗多糖,溶于10ml超纯水中,高速离心(于6000r/min离心10min)后取上清液,加入DEAE-52纤维素层析柱(内装90g的DEAE-52纤维素作为填料)中,用流速为0.5~2.0ml/min的超纯水洗脱,根据吸光度收集洗脱液(即,收集合并吸光度比较集中洗脱液),然后蒸干(于100℃进行蒸干);
备注说明:洗脱时超纯水的用量一般为3-9个柱体积,即,1g填料配用3-5ml的超纯水;
4)、将步骤3)的蒸干所得物溶于5ml超纯水中,加入葡聚糖凝胶G-100层析柱(内装20g的葡聚糖凝胶G-100)中,用流速为0.5~2.0ml/min的超纯水洗脱,根据吸光度收集洗脱液(即,收集合并吸光度比较集中洗脱液),然后蒸干(于100℃进行蒸干);得荸荠多糖(为纯化的荸荠多糖)。
备注说明:洗脱时超纯水的用量一般为3-9个柱体积。
作为本发明的荸荠多糖的制备方法的改进:
所述步骤2)中:2000r/min离心30min,将上层液体与95%(体积浓度)乙醇按照1:5的体积比例混合搅拌;
所述步骤3)和步骤4)的洗脱,流速均为1.0ml/min。
本发明还对所得的荸荠多糖的解酒功能进行了验证。
本发明在发明过程中,使用了如下的评价方法:
(一)多糖化学组成和分子量的评价:
方法一、单糖组成的评价
准确称取一定量纯化多糖于TFA中充氮气水解,然后利用PMP衍生化,氯仿除脂后取水相过0.22μm滤膜后,进HPLC定量分析单糖组成;同时混合单糖标准品作为定性和定量标准。色谱条件为仪器:waterse2695;色谱柱:AgilentXDB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);检测器:紫外检测器;柱温:25℃;检测波长:250nm;流速:1mL/min;流动相:溶剂A为15%(v/v)乙腈+0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(KH2PO4-NaOH,pH6.9),B溶剂为40%乙腈+0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(KH2PO4-NaOH,pH6.9);梯度模式:时间梯度为0min→10min→30min→35min→45min,相应浓度梯度为0→15%→25%→25%→0溶剂B。进样体积:10μL。
方法二、多糖平均分子量的评价
配制一定浓度的纯化多糖,于配备有十八角度激光散射仪和示差检测器的HPLC上进行分析,分析条件为Waters1525BinaryHPLCpump,十八角度激光散射仪(DAWN);Waters2414RerractiveindexDetector(示差检测器),Ultrahydrogel250色谱柱.流动相:0.2mol/LNaCl,流速:0.5mL/min,光散射仪波长:660nm;示差检测器在线监测。
(二)多糖解酒功能的评价
方法一、乙醇脱氢酶活性测定
采用瓦勒—霍赫(Valle&Hoch)法并稍加改良后检测乙醇脱氢酶活性,在测定管中加入焦磷酸钠缓冲液1.5mL,NAD+1.0mL,乙醇0.5mL,饮品(纯化荸荠多糖溶于水而得)0.1mL,混合后在25℃下,加盖温育5min。温育后的测定管立即加入乙醇脱氢酶0.1mL,摇匀后立即用分光光度计测定在340nm处的吸光度(A340)值,以后每隔30s读数一次,连续测定5min,记录数据。以对照管调定零点,不加药物的反应组为测定乙醇脱氢酶活性的空白对照组。
以吸光度A对时间作图,取反应最初线性部分,计算A340nm/30s的增加值,根据NADH在340nm处的摩尔消光系数为6.2,计算酶的活力单位。
ADH的活性以每分钟NADH生成的纳摩尔数表示。本实验ADH的活性是将实验组的ΔA340和对照组的ΔA340按以下公式进行计算抑制(激活)率:
方法二、急性酒精中毒小鼠血中乙醇脱氢酶活性的影响
将小鼠分成3组,空白组、模型组、饮品组,每组10只。空白组和模型组按0.10mL/10g给予生理盐水,荸荠提取物组0.10mL/10g分别给予饮品(纯化荸荠多糖溶于水而得),30min后,模型组与荸荠组分别灌酒0.15mL/10g。每组小鼠分别在灌酒后0.5,1,1.5,2,2.5,3h摘眼球取血,放在用肝素钠抗凝的试管里,立即进行测试。
按照以下公式计算乙醇脱氢酶活力:
(U/mL)
方法三、对小鼠血中乙醇代谢动力学过程的影响
将小鼠分成3组,空白组、模型组、饮品组,每组10只。空白组和模型组按0.10mL/10g给予生理盐水,荸荠提取物组0.10mL/10g分别给予饮品(纯化荸荠多糖溶于水而得),30min后,模型组与荸荠组分别灌酒0.15mL/10g。每组小鼠分别在灌酒后0.5,1,1.5,2,2.5,3,6,12h摘眼球取血,放在用肝素钠抗凝的试管里,处理后进行GC-FID检测。
将所检测小鼠血清中乙醇峰面积代入标准曲线方程,得出小鼠血中乙醇含量,绘制血液中乙醇浓度——时间曲线图,并利用药物动力学软件计算不同实验组乙醇体内消除半衰期。
在本试验提取方法和色谱条件下,在0.02-5.0mg/ml浓度范围内,线性关系良好,利用线性回归方法计算出斜率、截距以及相关系数(r>0.99)曲线方程为:Y=40.299X-0.071(r=0.9999)。
本试验建立的样品处理方法和色谱分析条件下,乙醇在小鼠血清中的回收率均达95%以上,日内和日间变异系数均小于10%,说明乙醇在小鼠血清中回收率和精密度均符合检测要求(见表1)。
表1.小鼠血清中乙醇回收率和精密度(n=5)
采用本发明方法制备而得的荸荠纯化多糖具有如下优点:
1、与常规荸荠粗多糖或其他天然植物多糖相比,根据本发明所采用的工艺路线制备的荸荠纯化多糖单糖组成较理想,多分散指数较小,分子量分布范围较窄,多糖分子较接近。
2、本发明所制备的纯化荸荠多糖对小鼠体内乙醇脱氢酶和乙醇代谢效率明显较高,相较于其他产品解酒保肝功效明显提高。
综上所述,本发明通过分离、层析柱纯化手段,从荸荠果肉中制备了一种高纯度活性多糖,并表征了该多糖的单糖结构组成以及平均分子量分布特征。该研究为充分发挥荸荠产品的生物活性,深层次开发和挖掘荸荠在保健食品领域的应用具有重要意义。
具体实施方式
实施例1、一种纯化荸荠多糖的制备方法,依次进行以下步骤:
1)、购得去皮荸荠2千克,于榨汁机粉碎榨汁,然后将汁和荸荠渣混匀后加入适量超纯水(约6000g),于80℃加热2h;然后用纱布将汁过滤,滤渣加入适量超纯水(约3000g),80℃加热1h,过滤,合并两次过滤所得的滤液,得荸荠汁。荸荠汁于冰箱内(4℃)静置一夜(约10~12小时),过滤出淀粉;将汁(约9000ml)倒在搪瓷盘中浓缩至约400-420ml,得浓缩后荸荠汁。
2)、配制sevage试剂(氯仿:正丁醇=5:1的v/v),将浓缩后荸荠汁与该试剂(sevage试剂)按5:1的体积比混合,搅拌15min后,2000r/min离心30min,取上层液体。
将上层液体与95%(体积%)乙醇按照1:5的体积比混合,搅拌,4℃低温下静置过夜(约10~12小时)、过滤,将过滤后的沉淀用石油醚(100ml)洗涤(洗涤过程中实现除脂)后,得荸荠粗多糖38g。
3)、准确称取0.5g粗多糖,溶于10ml超纯水中,高速离心(于6000r/min离心10min)后取上清液,加入DEAE-52纤维素层析柱(内装90g的DEAE-52纤维素)中,用流速为1.0ml/min的超纯水洗脱,收集洗脱液,每次4ml(即,每管4ml);苯酚—硫酸法测定吸光度,根据吸光度合并洗脱液(即,将第27管~第45管的洗脱液进行合并),蒸干(于100℃进行蒸干)。
4)、将3)中蒸干的多糖(即骤3)的蒸干所得物)溶于5ml超纯水中,加入葡聚糖凝胶G-100层析柱柱(内装20g的葡聚糖凝胶G-100)中,用流速为1.0ml/min的超纯水洗脱,收集洗脱液,每次3ml(即,每管3ml);苯酚—硫酸法测定吸光度,根据吸光度合并洗脱液(即,将第32管~第47管的洗脱液进行合并),蒸干(于100℃进行蒸干),即为纯化荸荠多糖。
备注说明:0.5g粗多糖能对应得到78mg的纯化荸荠多糖。
实施例2、一种纯化荸荠多糖的制备方法,依次进行以下步骤:
步骤1)同实施例1的步骤1);
2)、配制sevage试剂(氯仿:正丁醇=5:1的v/v),将浓缩后荸荠汁与该试剂按5:1的体积比混合,搅拌15min后,2000r/min离心10min,取上层液体。
将上层液体与95%(体积%)乙醇按照1:3的体积比混合,搅拌,4℃低温下静置过夜、过滤,将过滤后的沉淀用石油醚(100ml)洗涤(洗涤过程中实现除脂)后,得荸荠粗多糖约38g。
3)、准确称取0.5g粗多糖,溶于10ml超纯水中,高速离心(于6000r/min离心10min)后取上清液,加入DEAE-52纤维素层析柱(内装90g的DEAE-52纤维素)中,用流速为0.5ml/min的超纯水洗脱,收集洗脱液,每次4ml;苯酚—硫酸法测定吸光度,根据吸光度合并洗脱液,蒸干。
4)、将步骤3)所得蒸干的多糖溶于5ml超纯水中,加入装有填料20g的葡聚糖凝胶G-100层析柱中,用流速为0.5ml/min的超纯水洗脱,收集洗脱液,每次3ml;苯酚—硫酸法测定吸光度,根据吸光度合并洗脱液,蒸干,即为纯化荸荠多糖。
备注说明:0.5g粗多糖能对应得到55mg的纯化荸荠多糖。
实施例3、一种纯化荸荠多糖的制备方法,依次进行以下步骤:
步骤1)同实施例1的步骤1);
2)、配制sevage试剂(氯仿:正丁醇=5:1的v/v),将浓缩后荸荠汁与该试剂按5:1的体积比混合,搅拌15min后,2000r/min离心60min,取上层液体。
将上层液体与95%(体积%)乙醇按照1:10的体积比混合,搅拌,4℃低温下静置过夜、过滤,将过滤后的沉淀用石油醚(100ml)洗涤(洗涤过程中实现除脂),得荸荠粗多糖约38g。
3)、准确称取0.5g粗多糖,溶于10ml超纯水中,6000r/min高速离心10min后取上清液,加入装有90g填料的DEAE-52纤维素层析柱中,用流速为2.0ml/min的超纯水洗脱,收集洗脱液,每次4ml;苯酚—硫酸法测定吸光度,根据吸光度合并洗脱液,蒸干。
4)、将步骤3)所得的蒸干的多糖溶于5ml超纯水中,加入装有20g填料的葡聚糖凝胶G-100层析柱中,用流速为2.0ml/min的超纯水洗脱,收集洗脱液,每次5ml;苯酚—硫酸法测定吸光度,根据吸光度合并洗脱液,蒸干,即为纯化荸荠多糖。
备注说明:0.5g粗多糖能对应得到43mg的纯化荸荠多糖。
试验1、
将实施例1、实施例2、实施例3所得纯化荸荠多糖分别溶于水,从而配制成浓度0.1mg/mL的饮品;将上述3种饮品按照上述“(一)多糖化学组成和分子量的评价”以及“(二)多糖解酒功能的评价中的方法一”进行检测,其对应结果如下:
实施例1所得饮品乙醇脱氢酶激活率(%)=62.78%;
该荸荠多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖以及阿拉伯糖组成,其组成摩尔百分比分别为0.71%、10%、0.71%、82.56%、3.98%以及2.04%。其Mn(数均分子量)为1.137×107,Mw(重均分子量)为1.461×107,其多分散指数为1.286。
实施例2所得饮品乙醇脱氢酶激活率(%)=15.97%;
该荸荠多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖以及阿拉伯糖组成,其组成摩尔百分比分别为0.71%、5%、0.71%、83.82%、8.51%以及1.25%。其Mn(数均分子量)为1.116×107,Mw(重均分子量)为1.581×107,其多分散指数为1.417。
实施例3所得饮品乙醇脱氢酶激活率(%)=20.23%;
该荸荠多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖以及阿拉伯糖组成,其组成摩尔百分比分别为0.71%、16%、0.71%、76.74%、3.48%以及2.36%。其Mn(数均分子量)为1.128×107,Mw(重均分子量)为1.618×107,其多分散指数为1.434。
试验2、检测急性酒精中毒小鼠血中乙醇脱氢酶活性:
将实施例1、实施例2、实施例3所得的荸荠纯化多糖分别溶于水,从而配制成浓度0.1mg/mL的饮品;将上述3种饮品按照上述“方法二、急性酒精中毒小鼠血中乙醇脱氢酶活性的影响”进行检测,其乙醇脱氢酶激活能力对应结果如下(见表2):
表2.小鼠血清中乙醇脱氢酶激活率(n=10)
试验3、检测小鼠血中乙醇代谢动力学参数:
将实施例1、实施例2、实施例3所得纯化荸荠多糖分别溶于水,从而配制成浓度5mg/ml的解酒饮品;依据上述方法三进行检测,按照0.10mL/10g(即,50mg/kg)给小鼠灌胃;其乙醇小鼠体内血药浓度和消除半衰期对应结果如下(见表3):
表3.小鼠血清中平均乙醇浓度—时间数据(n=10)
实施例1所得乙醇代谢动力学半衰期为:2.31h;
实施例2所得乙醇代谢动力学半衰期为:3.79h;
实施例3所得乙醇代谢动力学半衰期为:5.57h。
对比例1、将实施例1步骤1)改成如下内容:
1)、购得去皮荸荠2千克,于榨汁机粉碎榨汁,然后将汁和荸荠渣混匀后加入适量超纯水(约60kg),于80℃加热3h;然后用纱布将汁过滤,滤渣加入适量超纯水(约30kg),80℃加热3h,过滤,合并两次过滤所得的滤液,得荸荠汁。荸荠汁于冰箱内(4℃)静置一夜(约10~12小时),过滤出淀粉;将汁倒在搪瓷盘中浓缩至约400-420ml,得浓缩后荸荠汁。
后续步骤同实施例1。
对比例2、将实施例1步骤1)改成如下内容:
1)、购得去皮荸荠2千克,于榨汁机粉碎榨汁,然后将汁和荸荠渣混匀后加入适量超纯水(约24kg),于80W的超声波功率、70℃的温度下超声波辐射40min;过滤,得荸荠汁。荸荠汁于冰箱内(4℃)静置一夜(约10~12小时),过滤出淀粉;将汁倒在搪瓷盘中浓缩至约400-420ml,得浓缩后荸荠汁。
后续步骤同实施例1。
对比试验、将对比例1和对比例2所得的荸荠多糖按照上述试验3进行检测,所得结果如下表4所述:
表4.小鼠血清中平均乙醇浓度—时间数据(n=10)
对比例1所得乙醇代谢动力学半衰期为:2.86h;
对比例2所得乙醇代谢动力学半衰期为:4.08h。
最后,还需要注意的是,以上列举的仅是本发明中荸荠纯化多糖的制备及其结构表征和功能检测的具体实例。显然,本发明不限于以上实施例,还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形,均应认为是本发明的保护范围。
Claims (6)
1.荸荠多糖,其特征是由以下摩尔含量的成分组成:
甘露糖0.71%
鼠李糖5%~16%
半乳糖醛酸0.71%
葡萄糖76.74%~83.82%
半乳糖3.48%~8.51%
阿拉伯糖1.25%~2.36%。
2.根据权利要求1所述的荸荠多糖,其特征是:该荸荠多糖的Mn(数均分子量)为1.116×107~1.137×107,Mw(重均分子量)为1.461×107~1.618×107,多分散指数为1.286~1.434。
3.根据权利要求1或2所述的荸荠多糖,其特征是由以下摩尔含量的成分组成:甘露糖0.71%、鼠李糖10%、半乳糖醛酸0.71%、葡萄糖82.56%、半乳糖3.98%以及阿拉伯糖2.04%组成。
4.根据权利要求3所述的荸荠多糖,其特征是:该荸荠多糖的Mn(数均分子量)为1.137×107,Mw(重均分子量)为1.461×107,多分散指数为1.286。
5.如权利要求1~4任一所述的荸荠多糖的制备方法,其特征是包括以下步骤:
1)、先将去皮荸荠于榨汁机内进行粉碎榨汁,然后加入为去皮荸荠2.5~3.5倍重量的超纯水于75~85℃加热2h;接着过滤,分别得滤液Ⅰ和滤渣;
在滤渣中加入为去皮荸荠1.3~1.8倍重量的超纯水,75~85℃加热1h,过滤,所得的滤液Ⅱ与滤液Ⅰ合并后得荸荠汁;
将荸荠汁于3~5℃静置10~12小时,过滤出静置所形成的沉淀物,所得的液体浓缩至为原体积的1/30~1/20,得浓缩后荸荠汁;
2)、将氯仿:正丁醇=5:1体积比混合,得试剂;
将浓缩后荸荠汁与该试剂按5:1的体积比混合,均匀搅拌后于2000r/min离心10~60min,取上层液体;
将上层液体与95%乙醇按照1:3~1:10的体积比例混合搅拌,3~5℃的低温下静置10~12小时、过滤,将过滤所得的滤饼用石油醚洗涤后,得荸荠粗多糖;
3)、准确称取0.5g荸荠粗多糖,溶于10ml超纯水中,高速离心后取上清液,加入DEAE-52纤维素层析柱中,用流速为0.5~2.0ml/min的超纯水洗脱,根据吸光度收集洗脱液,然后蒸干;
4)、将步骤3)的蒸干所得物溶于5ml超纯水中,加入葡聚糖凝胶G-100层析柱中,用流速为0.5~2.0ml/min的超纯水洗脱,根据吸光度收集洗脱液,然后蒸干;得荸荠多糖。
6.根据权利要求5所述的荸荠多糖的制备方法,其特征是:
所述步骤2)中:2000r/min离心30min,将上层液体与95%乙醇按照1:5的体积比例混合搅拌;
所述步骤3)和步骤4)的洗脱,流速均为1.0ml/min。
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