CN113080268A - 一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶、紫茶提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶、紫茶提取物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶、紫茶提取物及其制备方法和应用，属于茶叶技术领域。以滇南离蕊茶(CamelliapachyandraHu.)的芽及嫩叶为原料，经杀青、揉捻、干燥等加工工艺制成的紫茶。该紫茶的化学成分主要包括水解单宁、黄酮类以及丰富的多酚类物质，未检测到咖啡因及茶碱等嘌呤类生物碱。该紫茶条索紫红油润，茶汤呈现浅粉红色，滋味醇和、玫瑰花香浓郁。紫茶及其提取物具有显著的抗氧化和降血糖活性。因此，紫茶或紫茶提取物可作为优质茶饮料、功能保健食品、特殊用途化妆品、以及天然药物的原料，也可作为食品添加剂用于食品加工工业。
Description
技术领域
本发明属于茶叶技术领域，具体涉及一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶、紫茶提取物及其制备方法和应用。
背景技术
茶叶为世界三大无酒精饮料之一。传统意义的茶是由山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)茶组植物茶(Camellia sinensis)(俗称小叶茶)及其变种普洱茶(C.sinensisvar.assamica)(俗称大叶茶)的芽及嫩枝叶经杀青、揉捻干燥等步骤加工而成的绿茶。因传统茶叶中富含表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)等多酚类成分及咖啡因和茶碱，赋予茶叶特殊的苦、涩和回甘等口感特征；由于富含这些化学成分使传统茶叶具有抗氧化、抗菌及提神醒脑等多方面的药理活性。
随着生活节奏的不断加快及生活压力的不断增大，加上饮食模式的单一化、高糖高脂肪化及久坐不动的生活方式，导致我国糖尿病患者及糖耐量受损患者(IGT)持续增加。2013年的相关调查显示，我国近40％的成年人正处于糖尿病患病前期的高危状态，若不进行有效干预，每年每6位IGT中将有1人发展成为糖尿病患者。饮食的改变无疑是最有效的早期干预方式之一。
我国自古就有饮茶的习惯，然而传统茶叶中含有大量的咖啡因及茶碱等嘌呤类生物碱，其中咖啡因具有中枢神经系统兴奋的作用，对中枢神经系统敏感的人群而言，咖啡因的摄入会引发或加重失眠程度；茶碱则具有扩张冠状动脉、松弛支气管平滑肌、促进支气管粘膜的纤毛运动等作用，但其有效血浓度和中毒血浓度接近，易产生恶心、呕吐、心律失常等毒副作用，过多摄取不利于身体健康。通过天然茶属植物的挖掘与研究开发，探寻无或低咖啡因、茶碱及具有抗氧化、降血糖活性的茶资源植物不仅可以丰富现有茶叶的种植资源，又能开发人们对大健康需求的特色茶饮。
滇南离蕊茶(Camelliapachyandra Hu.)系山茶属(Camellia)，茶亚属，离蕊茶组(section Heterogenea)植物，为云南特有种，主要分布于云南临沧、西双版纳等地。迄今，未检测到咖啡因的紫茶天然资源及其相关产品尚未见报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶，未检测到咖啡因及茶碱等嘌呤类生物碱，富含多酚类化合物，具有显著的抗氧化和降血糖活性。
本发明还提供了一种紫茶提取物及其制备方法和应用，为制备抗氧化和/或降血糖活性的产品提供物质基础。
本发明提供了一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶，以滇南离蕊茶(Camelliapachyandra Hu.)的芽和/或嫩叶为原料制备而成。
优选的，所述制备的方法按照制备绿茶、白茶、红茶、普洱茶或花茶的制茶工艺进行。
本发明提供了一种从所述紫茶中提取的紫茶提取物，包括以下化合物：
木麻黄鞣质(1)，5-去没食子酰基旌节花素(2)，2,3-O-(S)-六羟基联苯酰基-D-葡萄吡喃糖(3)，长梗马兜铃素(4)，特里马素I(5)，2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(6)，特里马素Ⅱ(7)，2,3:4,6-双-六羟基联苯酰基-1-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(8)，木麻黄素(9)，槲皮素-3-O-α-L-鼠李吡喃糖苷(10)，槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(11)，槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(12)，山柰酚3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷(13)，槲皮素-3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷(14)，芦丁(15)，槲皮素-3-O-(6”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(16)，槲皮素-3-O-(2”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(17)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(18)，槲皮素3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)-α-L-鼠李吡喃糖苷(19)，(-)表儿茶素(20)，5-p-反式-肉桂酰奎尼酸(21)，3,5-二羟基-2-(2'-甲氧基-2'-氧乙基)苯基3”,4”-二羟基苯甲酸酯(22)；其中所述长梗马兜铃素的质量占紫茶质量的百分含量不低于5.8％。
本发明提供了所述紫茶提取物的制备方法，包括以下步骤：
将所述紫茶与溶剂混合，回流提取，固液分离，得到液相去除溶剂，得到紫茶提取物；
所述溶剂为乙醇水溶液。
优选的，所述乙醇溶液的质量浓度为68％～72％。
优选的，所述提取的温度为75～85℃；
所述提取的时间为1h/次，间隔提取3次。
本发明提供了所述紫茶提取物或所述制备方法得到的紫茶提取物在个人护理生活用品、食品添加剂和/或制备降血糖的药物中的应用。
本发明提供了一种抗氧化和/或降血糖的茶饮料，所述茶饮料包括所述茶叶或所述紫茶提取物。
本发明提供了一种具有抗氧化和/或降血糖的药物，所述药物的活性成分包括所述紫茶提取物或所述制备方法得到的紫茶提取物。
本发明提供了一种具有抗衰老的化妆品，所述化妆品中包含所述紫茶提取物或所述制备方法得到的紫茶提取物。
本发明提供了一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶，以滇南离蕊茶(Camelliapachyandra Hu.)的芽和/或嫩叶为原料制备而成。所述紫茶的条索玫红、油润，所述紫茶的茶汤呈粉红色、有玫瑰花香气。以滇南离蕊茶的新鲜芽及嫩枝叶制成的茶叶，未检测到咖啡因、茶碱等嘌呤类生物碱。茶叶中长梗马兜铃素含量≥5.8％。同时，经过检测DPPH自由基清除能力以及对α-葡萄糖酶的抑制作用，结果表明，所述紫茶中含有抗氧化和降血糖的生物活性，因此，本发明提供的紫茶具有降血糖和抗氧化作用。同时本发明以滇南离蕊茶的新鲜芽及嫩枝叶制成的紫茶，可作为优质茶饮料、功能保健食品、特殊用途化妆品以及天然药物的原料，也可作为食品添加剂用于食品加工工业中，用途广泛。
本发明提供了一种从所述紫茶中提取的紫茶提取物，包括至少22种化合物，具体为9个水解单宁(化合物1-9)、11个黄酮苷类成分(化合物10-20，其中化合物19为新化合物)和2个简单酚类成分(化合物21-22)，其中长梗马兜铃素的质量占紫茶质量的百分含量不低于5.8％。通过检测紫茶提取物的DPPH自由基清除能力以及对α-葡萄糖酶的抑制作用，结果表明，紫茶提取物对a-葡萄糖苷酶抑制率为41.3％以上，对DPPH自由基清除率为51.3％以上。因此，本发明提供的紫茶提取物具有双重抗氧化和降血糖作用，为后续制备抗衰老、降血糖的药物、保健品以及化妆品以及食品添加剂等提供了原料基础。
附图说明
图1为以滇南离蕊茶(C.pachysandra Hu.)为原料制作的紫茶I中分离得到的22种化合物结构式；
图2a为紫茶70％乙醇提取物的HPLC图；图2b为去除部分主成分“长梗马兜铃素”后的紫茶提取物的HPLC图，其中各峰对应化合物：5-去没食子酰基旌节花素(2)，2,3-O-(S)-六羟基联苯酰基-D-葡萄吡喃糖(3)，长梗马兜铃素(4)，特里马素I(5)，2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(6)，特里马素Ⅱ(7)，木麻黄素(9)，槲皮素-3-O-α-L-鼠李吡喃糖苷(10)，槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(11)，山柰酚3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷(13)，槲皮素-3-O-(6”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(16)，槲皮素-3-O-(2”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(17)。
具体实施方式
本发明提供了一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶，以滇南离蕊茶(Camelliapachyandra Hu.)的芽和/或嫩叶为原料制备而成。
在本发明中，以滇南离蕊茶的芽和/或嫩叶为材料制备的紫茶，其活性成分并不呈显著差异，但与成年干燥叶片相比，所述紫茶的活性成分具有显著性提高，主要表现在以下三点：1)主成分含量长梗马兜铃素紫茶约是成年叶片的2倍，2)紫茶含有的特里马素I、2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖、特里马素Ⅱ、，2,3:4,6-双-六羟基联苯酰基-1-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖、木麻黄素、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷、山柰酚3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷、芦丁、槲皮素-3-O-(6”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷、槲皮素-3-O-(2”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷、槲皮素3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)-α-L-鼠李吡喃糖苷、(-)表儿茶素、5-p-反式-肉桂酰奎尼酸、3,5-二羟基-2-(2'-甲氧基-2'-氧乙基)苯基3”,4”-二羟基苯甲酸酯等15个化合物在干燥叶片中没有发现，3)紫茶水提物的抗氧化及降血糖活性显著高于成年叶片。
在本发明中，所述制备的方法优选按照制备绿茶、白茶、红茶、普洱茶或花茶的常规制茶工艺进行，在此具体不做赘述。为了举例说明，制备紫茶的具体方法，本发明实施例中以绿茶和白茶的制茶工艺制备紫茶说明紫茶的特性。
本发明提供了一种紫茶提取物的制备方法，包括以下步骤：
将所述紫茶与溶剂混合，回流提取，固液分离，得到液相去除溶剂，得到紫茶提取物。所述紫茶和溶剂的料液比为800～1000g：1800～2600ml，更优选为1000g：2500ml。所述溶剂为乙醇水溶液。所述乙醇溶液的质量浓度优选为68％～72％，更优选为70％。所述回流提取的温度优选为75～85℃，更优选为83℃。所述提取的时间1h/次，间隔提取3～4次。3～4次的提取液合并液相去除有机溶剂，得到粗提物水溶液。所述去除有机溶剂的方法优选进行减压蒸馏。所述减压蒸馏的温度优选为45～50℃，更优选为48℃。将所述粗提物水溶液进行树脂柱层析，得到5个部分。所述树脂柱层析优选采用Diaion HP20SS柱层析。将所述5个部分优选反复用Sephadex LH-20、MCI-gel CHP 20P、Toyopearl HW-40F、Cellulose和Rp18等柱层析手段，结合汉邦半制备高效液相色谱仪进行纯化，共得到如下22种化合物。
本发明提供了一种从所述紫茶中提取的紫茶提取物，包括9个水解单宁(化合物1-9)、11个黄酮苷类成分(化合物10-20，其中化合物19为新化合物)和2个简单酚类成分(化合物21-22)，其中长梗马兜铃素的含量最高，具体包括以下22种化合物：木麻黄鞣质(1)，5-去没食子酰基旌节花素(2)，2,3-O-(S)-六羟基联苯酰基-D-葡萄吡喃糖(3)，长梗马兜铃素(4)，特里马素I(5)，2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(6)，特里马素Ⅱ(7)，2,3:4,6-双-六羟基联苯酰基-1-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(8)，木麻黄素(9)，槲皮素-3-O-α-L-鼠李吡喃糖苷(10)，槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(11)，槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(12)，山柰酚3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷(13)，槲皮素-3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷(14)，芦丁(15)，槲皮素-3-O-(6”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(16)，槲皮素-3-O-(2”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(17)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(18)，槲皮素3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)-α-L-鼠李吡喃糖苷(19)，(-)表儿茶素(20)，5-p-反式-肉桂酰奎尼酸(21)，3,5-二羟基-2-(2'-甲氧基-2'-氧乙基)苯基3”,4”-二羟基苯甲酸酯(22)，其中所述长梗马兜铃素的质量占紫茶质量的百分含量不低于5.8％。
在本发明中，所述紫茶提取物分别进行抗氧化能力检测和a-葡萄糖苷酶抑制活性检测。结果表明，所述紫茶提取物的DPPH自由基清除率为51.3％以上，对a-葡萄糖苷酶抑制率为41.3％以上。由此可知，所述紫茶提取物同时具有较高的抗氧化性和降血糖活性。
基于所述紫茶提取物同时具备较高的抗氧化性和降血糖活性，本发明提供了所述紫茶提取物或所述制备方法得到的紫茶提取物在个人护理生活用品、食品添加剂和/或制备降血糖的药物中的应用。所述个人护理生活用品优选包括化妆品。所述食品添加剂优选包括茶饮品原料或保健品原料。
基于所述紫茶提取物同时具备较高的抗氧化性和降血糖活性，本发明提供了一种抗氧化和/或降血糖的茶饮料，所述茶饮料包括所述茶叶或所述紫茶提取物。所述茶饮料优选还包括产业上常见的辅料。本发明对所述辅料的种类和来源不做具体限定，采用本领域所熟知的辅料即可。
基于所述紫茶提取物同时具备较高的抗氧化性和降血糖活性，本发明提供了一种具有抗氧化和/或降血糖的药物，所述药物的活性成分包括所述紫茶提取物或所述制备方法得到的紫茶提取物。所述药物优选还包括医药领域常见的辅料。本发明对所述辅料的种类和来源不做具体限定，采用本领域所熟知的辅料即可。
基于所述紫茶提取物同时具备较高的抗氧化活性和降血糖活性，本发明提供了一种具有抗衰老的化妆品，所述化妆品中包含所述紫茶提取物或所述制备方法得到的紫茶提取物。所述化妆品优选还包括产业上常见的辅料。本发明对所述辅料的种类和来源不做具体限定，采用本领域所熟知的辅料即可。
下面结合实施例对本发明提供的一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶、紫茶提取物及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
以滇南离蕊茶的新鲜芽及嫩枝叶为原料，采用绿茶工艺制备紫茶。
(1)按常规绿茶制作的规范工序，采摘滇南离蕊茶新鲜芽及嫩枝叶，用传统的热锅杀青，手工揉捻，晒干，即得到滇南离蕊茶制作的紫茶，命名为紫茶Ⅰ。具体制茶工艺参见现有技术(绿茶生产加工技术研究与应用分，姚明谨等,现代食品,2021.2.4.140-142.)。
(2)采用高效液相色谱法(HPLC)和LC-MS技术检测紫茶Ⅰ的化学成分及主要成分的含量。
HPLC分析方法：采用waters2695-2996液相色谱仪，Millennium
分析软件。检测条件：AglientZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，5μm)色谱柱；流动相为乙腈(A)-0.34％磷酸水溶液(B)，0 min(4％A)→45 min(40％A)梯度洗脱；流速1.0 ml/min；进样量5μL；柱温30℃；检测波长210～400 nm全波长。结果见图2a。
LC-MS检测方法：采用API QstarPulsarLC/TOF液质联用仪。检测条件：固定相为AgilentZorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm，5μm)色谱柱，流动相为乙腈-水溶液梯度洗脱(0～45 min，4％～40％乙腈)，流速1mL/min，进样量5μL，柱温30℃，100～1500 amu全波长扫描，点喷雾电压4 kV，毛细管温度400℃；毛细管电压35 V。
实验材料的制备：紫茶Ⅰ样品粉碎，精密称取1.500 g，置于100 mL容量瓶中，用70％乙醇水溶液浸提12 h，间隔超声2次(15 min/次)，溶液过Φ＝0.45μm的微孔滤膜，待测。
样品测定：进样量：5μL。
通过LC-MS分子量及碎片峰的分析结果(见图2b)可知，紫茶Ⅰ中至少含有：5-去没食子酰基旌节花素(2)，2,3-O-(S)-六羟基联苯酰基-D-葡萄吡喃糖(3)，长梗马兜铃素(4)，特里马素I(5)，2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(6)，特里马素Ⅱ(7)，木麻黄素(9)，槲皮素-3-O-α-L-鼠李吡喃糖苷(10)，槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(11)，山柰酚3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷(13)，槲皮素-3-O-(6”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(16)，槲皮素-3-O-(2”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(17)，未检测到咖啡因及其它嘌呤类生物碱。其中长梗马兜铃素的含量为5.8％～6.24％。
(3)紫茶Ⅰ的抗氧化及降糖活性评价。
紫茶Ⅰ粉碎，精密称取3.000g，加入90mL70％的乙醇水溶液，沸水浴浸提45min，冷却，离心，上清液减压浓缩、冷冻干燥，得紫茶Ⅰ提取物。
3.1抗氧化活性评价：采用1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)自由基清除模型进行评价，以乙醇为空白对照(blank control)。
步骤1，将紫茶Ⅰ提取物溶解于乙醇中配制成6mg/mL的待测液，取100μL的紫茶Ⅰ提取物乙醇液和100μL的DPPH的乙醇溶液(100μM)加入96孔板中，空白对照组为100μL乙醇+100μL DPPH的乙醇溶液。室温下避光放置15min。
步骤2，用酶标仪(Emaxprecisionmicroplate reader)测定反应液在517nm波长下的吸光度A。每个待测物重复实验3次，取平均值。
步骤3，DPPH自由基清除率(％)按照公式I计算：
清除率％＝(Ablank control-A sample)/Ablank control×100 式I
经计算，紫茶Ⅰ的DPPH自由基清除率为52.7％。
3.2降糖活性评价，采用a-葡萄糖苷酶抑制活性模型进行评价。
步骤1，配制0.1mol/L的磷酸缓冲液(PBS，pH 6.8)，将待测紫茶Ⅰ提取物溶解于DMSO中，使其浓度为6mg/mL。
步骤2，取96孔板，每孔加入10μL0.1 U/mL的酶液(背景对照组加入等量的PBS)，然后加入50μL的PBS溶液，再加入5μL浓度为6mg/mL的紫茶Ⅰ提取物的DMSO溶液(空白对照组加等量的DMSO)，37℃孵育15min。加入50μL的4-nitrophenylα-D-glucopyranoside(PNPG，1mM)溶液，于37℃恒温孵育反应30min。加入50μL浓度为1M的Na2CO3溶液终止反应，于405nm波长下测吸光值。按照公式II计算抑制率I。
I＝[A0-(A1-A2)]/A0×100％ 式II
式中：A0为空白组吸光度值；A1为样品组吸光度值；A2为背景组吸光度值。
结果显示，紫茶Ⅰ水提物的a-葡萄糖苷酶抑制率为41.3％。
实施例2
以滇南离蕊茶的新鲜芽及嫩枝叶为原料，采用白茶工艺制备紫茶。
(1)按白茶制作工艺的规范工序，采摘滇南离蕊茶新鲜芽、经萎凋、烘干，即得到滇南离蕊茶制作的紫茶，命名为紫茶Ⅱ。制茶工艺参考现有技术(白茶加工工艺及新品种适制性探究,吴远付,南方农业,2020年12月,第14卷,第35期,201-202.)。
(2)采用高效液相色谱法(HPLC)和LC-MS技术检测紫茶Ⅱ化学成分及主要成分的含量。
HPLC分析方法：采用waters2695-2996液相色谱仪，Millennium
分析软件。检测条件：固定相为AglientZORBAX SB-C18(4.6mm×150mm，5μm)色谱柱，流动相为乙腈(A)-0.34％磷酸水溶液(B)，0min(4％A)→45min(40％A)梯度洗脱，流速1.0ml/min，进样量5μL，柱温30℃，检测波长210～400nm全波长。
LC-MS检测方法：采用API QstarPulsarLC/TOF液质联用仪。检测条件：固定相为AgilentZorbax SB-C18(4.6×150mm，5μm)色谱柱，流动相为乙腈-水溶液梯度洗脱(0～45min，4％～40％乙腈)，流速1mL/min，进样量5μL，柱温30℃，100～1500amu全波长扫描，点喷雾电压4kV，毛细管温度400℃；毛细管电压35V。
通过LC-MS分子量及碎片峰的分析结果可知，紫茶Ⅱ中至少含有：
5-去没食子酰基旌节花素(2)，2,3-O-(S)-六羟基联苯酰基-D-葡萄吡喃糖(3)，长梗马兜铃素(4)，特里马素I(5)，2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(6)，特里马素Ⅱ(7)，木麻黄素(9)，槲皮素-3-O-α-L-鼠李吡喃糖苷(10)，槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(11)，山柰酚3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷(13)，槲皮素-3-O-(6”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(16)，槲皮素-3-O-(2”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(17)，未检测到咖啡因及其它嘌呤类生物碱。其中长梗马兜铃素的含量为5.89％。
(3)紫茶Ⅱ的抗氧化及降糖活性评价。
紫茶Ⅱ粉碎，精密称取3.000g，70％的乙醇水溶液，沸水浴浸提45min，冷却，离心，上清液减压浓缩、冷冻干燥，得紫茶Ⅱ提取物。
3.1抗氧化活性评价：采用1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)自由基清除模型进行评价，以乙醇为空白对照(blank control)。
步骤1，将紫茶Ⅱ提取物溶解于乙醇中配制成6mg/mL的待测液，取100μL的紫茶Ⅱ提取物乙醇液和100μL的DPPH的乙醇溶液(100μM)加入96孔板中，空白对照组为100μL乙醇+100μL DPPH的乙醇溶液。室温下避光放置15min。
步骤2，用酶标仪(Emax precision microplate reader)测定反应液在517nm波长下的吸光度A。每个待测物重复实验3次，取平均值。
步骤3，DPPH自由基清除率的计算按照实施例1中式I计算。
结果得出紫茶Ⅱ的DPPH自由基清除率为51.3％。
3.2降糖活性评价：采用a-葡萄糖苷酶抑制活性模型进行评价
步骤1，配制0.1mol/L的磷酸缓冲液(PBS，pH 6.8)，将待测紫茶Ⅱ提取物溶解于DMSO中，使其浓度为6mg/mL。
步骤2，取96孔板，每孔加入10μL 0.1U/mL的酶液(背景对照组加入等量的PBS)，然后加入50μL的PBS溶液，再加入5μL浓度为6mg/mL的紫茶Ⅱ提取物的DMSO溶液(空白对照组加等量的DMSO)，37℃孵育15min。加入50μL的4-nitrophenylα-D-glucopyranoside(PNPG，1mM)溶液，于37℃恒温孵育反应30min。加入50μL浓度为1M的Na2CO3溶液终止反应，于405nm波长下测吸光值。根据实施例1中式II计算α-葡萄糖苷酶抑制率。
结果显示紫茶Ⅱ水提物的α-葡萄糖苷酶抑制率为43.7％。
实施例3
对实施例1制备的紫茶进行化学成分精细研究
将实施例1制备的紫茶(60g)与150ml 70％乙醇水溶液(v/v)，83℃下回流提取3次(1h/次)，过滤，合并提取液，45℃条件下减压浓缩，除去乙醇及部分水溶液。当浓缩成40mL粗提物水溶液，使用Diaion HP-20柱层析(water-methanol＝1:0～0:1)，得到五个部分：Fr.I(0.9g)、Fr.II(2.3g)、Fr.III(3.4g)、Fr.IV(1.9g)、Fr.V(1.5g)。反复使用SephadexLH-20，MCI-gel CHP20P，Toyopearl HW-40F，Cellulose和Rp18柱层析手段，结合汉邦半制备高效液相色谱仪进行纯化，该过程可参见现有技术(Phenolic Antioxidants from theLeaves of Camellia pachysandra Hu.,Da-Fang Gao,et al.,J Agric.Food Chem.2010,58,8820-8824.)。
经过光谱、波谱数据及文献对比分析，所述紫茶中共包含22个化学成分，具体结构见图1。木麻黄鞣质(1)，5-去没食子酰基旌节花素(2)，2,3-O-(S)-六羟基联苯酰基-D-葡萄吡喃糖(3)，长梗马兜铃素(4)，特里马素I(5)，2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(6)，特里马素Ⅱ(7)，2,3:4,6-双-六羟基联苯酰基-1-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(8)，木麻黄素(9)，槲皮素-3-O-α-L-鼠李吡喃糖苷(10)，槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(11)，槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(12)，山柰酚3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷(13)，槲皮素-3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷(14)，芦丁(15)，槲皮素-3-O-(6”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(16)，槲皮素-3-O-(2”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷(17)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(18)，槲皮素3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)-α-L-鼠李吡喃糖苷(19)，(-)表儿茶素(20)，5-p-反式-肉桂酰奎尼酸(21)，3,5-二羟基-2-(2'-甲氧基-2'-氧乙基)苯基3”,4”-二羟基苯甲酸酯(22)，其中化合物19为新化合物，碳谱和氢谱数据如表1所示。
表1.化合物19的13C(150MHz)和1H(600MHz)NMR
实施例4
紫茶I化学成分的活性评价
4.1抗氧化活性评价采用1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)自由基清除实验进行评价。
以抗坏血酸(维生素C)为阳性对照，乙醇为空白对照。
步骤1，精密称取待测物1.000mg，溶于1mL乙醇中，将配制的1mg/mL的待测液依次2倍稀释，配成10个浓度梯度的待测物溶液(样品浓度范围在2～1000μg/mL之间)。
步骤2，将100μL不同浓度的待测物溶液和100μL的DPPH乙醇溶液(100μM)加入96孔板中，空白对照组为100μL乙醇+100μLDPPH乙醇溶液。室温下避光放置15min。
步骤3，用酶标仪测定反应液在517nm波长下的吸光度A。每个待测物重复实验3次。
步骤4，DPPH自由基清除率按照实施例1中记载的公式I计算，并以SC50值(清除半数DPPH自由基所需的样品浓度)反映供试品抗氧化能力的强弱情况，SC50值通过线性回归分析计算，结果如表2所示。
表2.紫茶I化合物DPPH自由基清除活性评价结果
注：化合物10、13、15、20、21抑制率低，未进行SC50测定。
4.2.紫茶I化学成分的降糖活性评价：采用a-葡萄糖苷酶抑制活性实验进行评价。
步骤1，配制0.1mol/L的磷酸缓冲液(pH 6.8)，将待测样品溶解于DMSO。
步骤2，反应混合液(200μL)包括待测样品(终浓度1～50μM)，磷酸缓冲液(pH 6.8，0.1M)，4-nitrophenylα-D-glucopyranoside(PNPG，1mM)，a-glucosidase酶溶液(终浓度0.025U/mL)依次顺序加入96孔酶标板，充分混匀，设置3孔重复。同时设置DMSO溶剂为空白对照和quercetin(终浓度2～10μM)为阳性对照。
步骤3，反应液于37℃孵育50min后，用酶标仪测定在405nm处的吸光值A。
步骤4，α-葡萄糖苷酶抑制活性的抑制率按照以下公式计算：抑制率(％)＝(1-Asample/Ablankcontrol)×100；IC50值按Reed&Muench法进行测算。(Dewi,R.T.,Iskandar,Y.M.,Hanafi,M.,Kardono,L.,Angelina,M.,Dewijanti,I.D.,&Banjarnahor,S.D.(2007).Inhibitory effect of Koji Aspergillus terreus onα-glucosidase activity andpostprandial hyperglycemia.Pakistan Journal of BiologicalSciences,10(18),3131-3135.)进行测算。
结果如表3所示。
表3.紫茶I化合物的a-葡萄糖苷酶抑制活性结果
注：化合物3，11-15，17-18和21抑制率低，未进行IC50测定。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶，其特征在于，以滇南离蕊茶(Camelliapachyandra Hu.)的芽和/或嫩叶为原料制备而成。
2.根据具有抗氧化和/或降血糖活性的紫茶，其特征在于，所述制备的方法按照制备绿茶、白茶、红茶、普洱茶或花茶的制茶工艺进行。
3.一种从权利要求1或2所述紫茶中提取的紫茶提取物，其特征在于，包括以下化合物：木麻黄鞣质，5-去没食子酰基旌节花素，2,3-O-(S)-六羟基联苯酰基-D-葡萄吡喃糖，长梗马兜铃素，特里马素I，2,3,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖，特里马素Ⅱ，2,3:4,6-双-六羟基联苯酰基-1-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖，木麻黄素，槲皮素-3-O-α-L-鼠李吡喃糖苷，槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷，槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷，山柰酚3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷，槲皮素-3-O-(2”-β-D-葡萄吡喃糖基)-α-L-鼠李吡喃糖苷，芦丁，槲皮素-3-O-(6”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷，槲皮素-3-O-(2”-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷，槲皮素-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷，槲皮素3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)-α-L-鼠李吡喃糖苷，(-)表儿茶素，5-p-反式-肉桂酰奎尼酸，3,5-二羟基-2-(2'-甲氧基-2'-氧乙基)苯基3”,4”-二羟基苯甲酸酯，其中所述长梗马兜铃素的质量占紫茶质量的百分含量不低于5.8％。
4.权利要求3所述紫茶提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求1或2所述紫茶与溶剂混合，回流提取，固液分离，得到液相去除溶剂，得到紫茶提取物；
所述溶剂包括乙醇水溶液。
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为68％～72％。
6.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述提取的温度为75～85℃；
所述提取的时间为1h/次，间隔提取3次。
7.权利要求3所述紫茶提取物或权利要求4～6任意一项所述制备方法得到的紫茶提取物在个人护理生活用品、食品添加剂和/或制备降血糖的药物中的应用。
8.一种抗氧化和/或降血糖的茶饮料，其特征在于，所述茶饮料包括权利要求1或2所述茶叶或权利要求3所述紫茶提取物。
9.一种具有抗氧化和/或降血糖的药物，其特征在于，所述药物的活性成分包括权利要求3所述紫茶提取物或权利要求4～6任意一项所述制备方法得到的紫茶提取物。
10.一种具有抗衰老的化妆品，其特征在于，所述化妆品中包含权利要求3所述紫茶提取物或权利要求4～6任意一项所述制备方法得到的紫茶提取物。
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