KR101340081B1

KR101340081B1 - 항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 플라보노이드 함유 뽕나무 잎 추출물의 신규한 제조 방법 및 그 산물

Info

Publication number: KR101340081B1
Application number: KR1020120014927A
Authority: KR
Inventors: 최상원; 김은옥; 이원정
Original assignee: 최상원; 대구가톨릭대학교산학협력단
Priority date: 2012-02-14
Filing date: 2012-02-14
Publication date: 2013-12-11
Also published as: KR20130093371A

Abstract

본 발명은 고혈압 뿐만 아니라 당뇨, 피부노화 억제용 플라보노이드 함유 뽕나무잎(상엽)추출물의 제조방법에 관한 것으로, 건조 상엽을 30% 에탄올수용액으로 추출하여 얻은 에탄올추출물을 다이아이온 HP-20 흡착이온수지 칼럼 크로마토그래피를 실시하여 항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 퀘세틴 3-O-(6"-O-말로닐)-베타-디-글루코사이드(Q3MG) 및 캄페롤 3-O-(6"-O-말로닐)-베타-디-글루코사이드(K3MG)를 함유한 상엽추출물 I과 루틴(rutin, RT), 이소퀘시트린(isoquercitrin, IQT) 및 아스트라갈린(astragalin, AG)을 함유한 상엽추출물 Ⅱ를 제조하고 이를 이용하여 상엽으로부터 항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 퀘세틴 및 캄페롤유도체를 대량생산과 고혈압, 당뇨 및 피부미백 기능성식품 및 화장품의 신소재의 용도를 개시한다.

Description

항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 플라보노이드 함유 뽕나무 잎 추출물의 신규한 제조 방법 및 그 산물 {Novel preparation method of Mulberry leaf extract for anti-hypertensive, anti-diabetic, and anti-aging and the product of the same}

본 발명은 항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 플라보노이드를 함유하고 있는 뽕나무 잎 추출물의 신규한 제조방법에 관한 것이다.

뽕나무는 식물분류학상 Morus alba L. 로 표시되는 교목식물이다. 뽕나무 (Mulberry)는 열매(桑子)로부터 잎(桑葉), 가지(桑枝), 뿌리껍질(桑白皮), 뽕나무에 기생하는 겨우살이(桑寄生), 상황버섯(桑黃), 누에(白蠶), 동충하초(冬蟲夏草)에 이르기까지 하나도 버릴게 없는 신목으로서 ‘동의보감’ 및 ‘본초강목’에는 고혈압과 동맥경화, 중풍을 비롯해 각기에 의한 부종, 신경통과 관절염, 감기의 기침과 가래 등에 효과가 있고, 자양강장 효과도 있는 것으로 적혀있다(약품식물학연구회, 신약품식물학, 학창사, p. 242, 1994; Tsuneo Namba 和漢藥百科圖鑑 I, 보육사, p 320, 1980).

동의보감에 ‘뽕잎은 따뜻하고 독이 없으며 각기와 수종을 없애주고 대·소장을 이롭게 하며 하기(下氣)하고 풍통(風痛)을 없앤다’라고 씌여져 있으며, 뽕잎은 고혈압, 동맥경화, 콜레스테롤, 당뇨를 다스리는 생리활성물질이 있어 예로부터 뽕잎차를 선약중의 제일 귀중한 선약이라고 알려져 있다(Tsuneo Namba 和漢藥百科圖鑑 I, 보육사, p 320, 1980).

지금까지 알려진 상엽의 생리적 약리적 효능으로는 항암, 항고혈압, 항관절염, 항동맥경화증, 항콜레스테롤, 항당뇨, 항염증, 항노화 및 항산화작용 등이 보고되었으며(이주선 등, 약학회지 4: 367-372, 1995; 김선여 등, 한국식품영양과학회지 27: 1217-1222, 1998; Zhishen et al., Food Chem 64: 555-559, 1999; Doi et al., Biol Pharm Bull 23: 1066-1071, 2000; Andallu et al., Clinica Chimica Acta 314: 47-53, 2001; 양정화 및 한지숙, 한국식품영양과학회지 35: 549-556, 2006; Padilha et al., Phytotherapy Res 24: 1496-1500, 2010; Dat et al., Fitoterapia 81: 1224-1227, 2010; Kwon et al., J Agric Food Chem 59: 3014-3019, 2011), 그 주된 생리활성성분으로서 flavonoids, 1-deoxynojiri- mycin(DNJ), γ-aminobutyric acid(GABA), phenolic acids, coumaric acids, stilbene 및 2-arylbenzofuran 유도체 등이 알려져 있다(Basnet et al., Chem Pharm Bull 41: 1238-1243, 1993; Sharma et al., Biosci Biotechnol Biochem 65: 1402-1405, 2001; Asano et al., J Agric Food Chem 49: 4208-4213, 2001; Doier et al., Chem Pharm Bull 49: 151-153, 2001; Lee et al., Biol Pharm Bull 25: 1045-1048, 2002; Dugo et al., J Sep Sci 32: 3627-3634, 2009; Katsube et al., J Sci Food Agric 90: 2386-2392, 2010; Yang et al., J Agric Food Chem 59: 1985-1995, 2011).

플라보노이드는 식물에 존재하는 황색의 천연색소로서 C6-C3-C6 벤조페론 구조를 지닌 페놀화합물의 일종으로 그 구조에 따라 flavones, flavonols, flavanols, flavanones, anthocyanidins, isoflavones 등이 존재하며, 대부분 배당체로 존재하나, 간혹 아글리콘으로도 존재하고, 항암뿐 아니라 항고혈압, 항당뇨, 항염증, 항고지혈증, 항노화 및 항산화작용 등 다양한 생리적 약리적 작용을 갖고 있는 식물화학물질(phytochemicals)로서 잘 알려져 있다(Hertog et al., Nutr Cancer 20: 21-29, 1993; Hertog et al., Lancet 342: 1007-1011, 1993b; Hollman et al., Food Chem Toxicol 37: 937-942, 1999; Harborne & Williams Phytochemistry 55: 481-504, 2000; Liu, New York Fruit Quarterly 10: 21-24, 2002). 특히 플라보노이드는 체내 활성산소에 의해 유발되는 지질과산화반응을 효과적으로 억제하여 암, 고혈압, 당뇨, 염증 및 노화 등 여러 성인병을 예방하는 항산화제로서(Harborne & Williams Phytochemistry 55: 481-504, 2000) 뿐만 아니라 암과 염증을 유발하는 prostaglandin synthase, lipoxygenase, cyclooxygenase 및 protein kinase 등의 효소저해제로서 작용하며(Havsteen, Biochem Pharmcol 32: 1141-1148, 1983; Laughton et al., Biochem Pharmcol 42: 1673-1681, 1991), 아울러 glutathione peroxidase 및 glutathione-s-transferase와 같은 우리 인체내 독소인 활성산소를 제거하는 효소의 부활제로서 작용한다(Smith & Yang, Chem Pharm Bull 12:34-38, 2001). 이러한 플라보노이드 화합물은 식물의 종류에 따라 그 형태와 함량이 다르며, 특히 그 함량은 품종, 재배, 시비, 숙성 및 가공에 따라 천차만별이다(Hertog et al., Nutr Cancer 20: 21-29, 1993; Liu, New York Fruit Quarterly 10: 21-24, 2002).

지금까지 뽕잎으로부터 플라보노이드의 분리 및 동정 그리고 그들의 생리적작용에 관한 많은 보고가 이루어져 왔다(Katsube et al., J Sci Food Agric 90: 2386-2392, 2010). 김 등(Kim et al., Arch Pharm Res 22: 81-85, 1999)은 뽕잎으로부터 9가지 항산화성 플라보노이드를 분리 및 동정한 바가 있으며, Enkhmaa 등(Enkhmaa et al., J Nutr 135: 729-734, 2005)과 Katsube 등(Katsube et al., J Sci Food Agric 90: 2386-2392, 2010)은 뽕잎에 함유된 Q3MG는 항고혈압 및 항당뇨성 생리활성물질로서 작용함을 보고한 바가 있고 특히 Katsube 등은(Katsube et al., Food Chem 113: 964-969, 2009) 볶음처리 중 Q3MG가 Q3AG(퀘세틴 3-O-(6"-O-아세틸)-베타-디-글루코사이드)로 변형됨을 밝힌 바가 있다. 그리고 채 등(채주영 등 한국식품영양과학회지 32: 15-21, 2003), 김현복(김현복, 잠사학지 47: 62-67, 2005), 임 등(임명자 등, 농업생명과학지 41: 17-24, 2007) 및 배 등(배희애 등 한약작지 19: 276-286, 2011)은 뽕나무 품종, 수확시기 및 가공처리에 따른 뽕잎 플라보노이드의 함량 차이를 보고한 바가 있으며, 조 등(조영제 등, 한국농화학회지 50: 334-343, 2007)은 108가지 뽕나무로부터 채취한 뽕잎의 생리활성을 측정하여 비교한 바가 있다. 또한, 뽕잎을 이용한 뽕잎차를 비롯하여 뽕잎떡, 뽕잎국수, 뽕잎아이스크림, 뽕잎음료 등 여러 가공식품이 개발되어 현재 시판되고 있으며(Kim et al., Korean J Seric Sci 41: 129-134, 1999), 최근에는 DNJ 강화 뽕잎식품, 발효뽕잎흑차, 뽕잎초코렛, 뽕잎분유, 요구르트, 와인 및 식초 등 고부가가치 가공식품이 개발되어 크게 주목을 받고 있다(임명자 등, 농업생명과학지 41: 17-24, 2007; 예은주 및 배만종, 한국식품영양과학회지 39: 421-427, 2010; Kimura et al., J Agric Food Chem 55: 5869-5874, 2007).

그러나, 지금까지 뽕나무 품종별, 시기별, 및 가공별 뽕잎 플라보노이드의 함량 분석이나 생리활성 차이 그리고 고품질의 뽕잎분말 및 추출물 제조와 그를 이용한 가공식품의 개발에 관한 연구가 일부 보고되었으나 아직까지 뽕잎으로부터 5종의 플라보노이드의 대량생산과 이를 이용한 고부가가치 기능성식품 및 화장품의 개발은 미미한 실정이다.

본 발명의 목적은 항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 플라보노이드를 함유한 고품질의 상엽추출물 및 그 신규한 제조방법에 관한 것이다.

본 발명의 상기 목적은 건조 상엽의 에탄올 추출 단계, 다이아이온 HP-20 흡착이온수지 칼럼 크로마토그래피에 의한 QMG 및 KMG를 함유한 상엽추출물 I과 RT, IQT, AG를 함유한 상엽추출물 Ⅱ을 제조함으로써 달성하였다.

이상 설명한 바와 같이 본 발명의 분리 및 정제방법은 상엽으로부터 고부가가치 플라보노이드 함유 정제분말을 대량으로 생산할 수 있는 효과가 있을 뿐만 아니라 이를 사용하여 항고혈압, 항당뇨, 항노화 및 항산화 기능성 뽕잎 플라보노이드 성분 및 이 성분들이 함유된 기능성식품 또는 화장품의 신소재 제공에 뛰어난 효과가 있다.

도 1은 항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 플라보노이드(QMG, KMG, RT, IQT, 및 AG) 함유 상엽추출물의 제조방법을 나타낸 것이다.
도 2는 QMG, KMG, RT, IQT, 및 AG 함유 상엽추출물의 고속액체크로마토그램 결과를 나타낸 것이다.

본 발명은 건조 상엽의 에탄올 추출 단계, 다이아이온 HP-20 흡착이온수지 칼럼 크로마토그래피에 의한 QMG 및 KMG를 함유한 상엽추출물 I과 RT, IQT, AG를 함유한 상엽추출물 Ⅱ의 제조 단계로 구성된다.

본 발명은 다음의 단계를 포함하는 상엽으로부터 플라보노이드(QMG, KMG, 및 RT, IQT, AG)를 함유한 상엽추출물의 제조방법을 제공한다. 건조 상엽에 30% 에탄올수용액을(650 kg/100 kg 시료)로 가하여 40 ~ 50℃에서 12시간 초음파추출기에서 추출한 다음 여과 및 감압농축하여 상엽에탄올추출물 얻고, 상기의 추출물에 30% 에탄올수용액으로 다시 용해시킨 다음 일야 방치하여 하층에 침전하는 색소 및 수지를 제거하였다. 상층은 감압농축하여 미리 20% 에탄올수용액으로 평형화시켜 놓은 다이아이온 HP-20 이온수지에 흡착시킨 후 20% 에탄올수용액으로 먼저 칼럼을 충분히 수세한 후 30% 에탄올수용액 및 50% 에탄올수용액으로 각각 용출시키고 농축하여 항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 플라보노이드(QMG, KMG, 및 RT, IQT, AG)을 함유한 상엽추출물을 제조한다.

본 발명의 상엽으로부터 플라보노이드 함유 추출물 제조에서 에탄올수용액의 바람직한 농도는 25% 내지 55%이며, 가장 바람직하게는 30% 내지 50% 에탄올수용액이다. 이 때 추출용매로써 에탄올 대신 메탄올을 사용할 수도 있다. 본 발명의 상엽에서 플라보노이드 함유 추출물 제조방법에서 추출온도는 40℃ 내지 60℃ 이며, 가장 바람직하게는 50℃이다.

이하, 본 발명의 구체적인 방법을 실시예를 들어 상세히 설명하고자 하지만 본 발명의 권리범위는 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.

실시예 1 : 흡착이온수지 , 실리카겔, 및 겔 크로마토그래피에 의한 상엽 에탄올추출물로부터 플라보노이드 화합물의 분리, 정제 및 동정

상엽으로부터 항고혈압, 항당뇨, 항노화 및 항산화성 플라보노이드를 분리 정제하기 위해 상엽 에탄올추출물을 Diaion HP-20 흡착이온수지, 실리카겔 및 Sephadex LH-20 칼럼 크로마토그래피를 순차적으로 실시하였다.

우선, 건조 상엽 100 kg에 30% 에탄올수용액 650 kg을 가하여 초음파추출기에서 50℃에서 12시간 동안 추출한 후 여과하였다. 상기 추출과정을 2회 반복 실시하여 얻은 혼합 에탄올추출액을 부분 감압농축하여 상엽 에탄올추출물(23 kg)을 얻었다.

다음, 에탄올추출물을 다시 30% 에탄올수용액(100 kg)을 가하여 용해시킨 후 하룻밤 실온에서 방치한 다음 침전물을 제거하고 얻어진 상층액을 감압농축하여 상엽 에탄올추출물(21.2 kg)을 얻었다. 이것을 20% 에탄올수용액(50 kg)으로 현탁시킨 후 미리 20% 에탄올수용액으로 평형화시켜 놓은 Diaion HP-20 흡착이온수지(Mistubishi Chem. Co., Japan) 칼럼(55 cm × 200 cm)에 충진시킨 후 20% 에탄올수용액(200 L)로 충분히 수세한 후 30% 에탄올수용액(100 L) 및 50% 에탄올수용액(200 L)으로 각각 용출하였다. 이때 30% 에탄올수용액으로 용출되는 분획을 회전식 증발감압농축기(rotary evaporator)로 50℃ 이하에서 감압농축시켜 QMG 및 KMG를 함유한 상엽추출물 I(1.1 kg, 수율: 1.1%, QMG 함량: 58.14%, KMG 함량: 3.75%)과, 같은 방법으로 50% 에탄올수용액 분획으로부터 RT, IQT 및 AG를 함유한 상엽추출물 Ⅱ(0.73 kg, 수율: 0.73%, RT 함량: 4.82%, IQT 함량: 16.33%, AG 함량: 7.82%)를 각각 얻었다(도 1). 다음, 두 가지 상엽추출물을 연이어 silica gel 및 Sephadex LH-20 칼럼 크로마토그래피를 각각 실시하여 상엽추출물 I로부터 QMG 및 KMG를, 그리고 상엽추출물 Ⅱ로부터 RT, IQT 및 AG를 각각 순수하게 분리 및 정제하였으며, 아울러 그들의 자외선(UV), 핵자기공명(NMR) 및 매스스펙트럼(MS)을 각각 측정하여 5가지 플라보노이드의 화학구조를 동정하였다(이원정, 석사학위논문, 대구가톨릭대학교, 2012).

앞서 서술했듯이 뽕잎의 QMG 및 KMG 성분은 항고혈압 및 항당뇨성 기능성물질로 잘 알려져 있고(Enkhmaa et al., J Nutr 135: 729-734, 2005; Katsube et al., J Sci Food Agric 90: 2386-2392, 2010), 아울러 RT, IQT, 및 AG 성분도 또한 항고혈압, 항노화 및 항산화작용이 있는 플라보노이드 화합물임이 이미 밝혀진 바가 있다(Harborne & Williams Phytochemistry 55: 481-504, 2000; Liu, New York Fruit Quarterly 10: 21-24, 2002). 따라서 이들 플라보노이드 화합물들은 뽕잎을 이용하여 제조한 뽕잎분말 및 뽕잎엑기스와 같은 기능성소재 뿐만 아니라 뽕잎차, 뽕잎빵, 뽕잎아이스크림 및 뽕잎초코렛 등 여러 가공식품과 폼크린징, 마사지 크림 및 로션 등 뽕잎을 이용한 여러 천연화장품의 품질의 표준화 및 규격화를 위한 지표성분으로서 매우 중요하다. 또한, 이들 기능성 플라보노이드 화합물을 많이 함유한 뽕나무 품종 개발과 고품질의 가공식품 생산을 위한 최적 수확시기 및 가공법 개발이 필요하다.

실시예 2 : 본 발명의 방법에 따라 제조된 상엽추출물 중의 플라보노이드의 정량분석

상기 실시예 1에서 따라 제조된 상엽추출물 I 및 Ⅱ 중의 5가지 플라보노이드 퀘세틴(QMG), 캄페롤(KMG), 루틴(RT), 이소퀘시트린(IQT) 및 아스트라갈린(AG)의 정량분석은 고속액체크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 다음과 같이 실시하였다. 우선, 상엽추출물(I 및 Ⅱ) 1 g을 30% 메탄올수용액으로 적절히 용해한 후 같은 용액으로 100 mL로 정용하였다. 상기 용액을 같은 용매로 10배 희석한 후 이 중 1 mL을 취하여 0.45 ㎛ membrane filter(gelman Sci, USA)를 통과시킨 후 20 ㎕를 HPLC에 주입시켜 정량분석을 수행하였다. HPLC 분석은 워터스 e2690/5 고속액체크로마토그래피, 칼럼; YMC-Pack C₁₈(5 ㎛, 250 × 4.6 mm I.D., YMC Inc., USA), 이동상(용매 A --> 용매 B로 60분간 농도구배 용출); 용매 A(0.05% 인산) & 용매 B(100% 메탄올), 자외선 검출기; UV_{350 nm}, 유속; 0.8 mL/min의 조건하에서 수행하였다.

상기 실시예 1에 따라 상엽으로부터 제조된 상엽추출물 I 및 Ⅱ의 고속액체크로마토그램(도 2)과 그로부터 분리된 5가지 플라보노이드 화합물 1 ~ 5의 화학식은 다음과 같다.

(화합물 1)

(화합물 2)

(화합물 3)

(화합물 4)

(화합물 5)

또한, 순수 분리된 5가지 플라보노이드를 이용하여 작성된 표준검량곡선[QMG: y=0.621x+0.034 (r²=0.997), KMG: y=4.983x-0.781 (r²=0.998), RT: y=1.922x+0.121 (r²=0.997), IQT: y=2.068x-0.830 (r²=0.997), AG: y=1.602x-0.900 (r²=0.998)]을 토대로 상엽추출물, 뽕나무 품종별, 시기별 및 가공별 뽕잎의 5가지 플라보노이드 QMG, KMG, RT, IQT 및 AG의 함량을 측정한 결과를 [표 1]과 [표 2]에 각각 나타내었다.

[표 1] 상엽추출물 (I 및 Ⅱ) 중의 5가지 플라보노이드( QMG , KMG , 및 RT , IQT , AG )의 함량 분석

상기 [표 1]에서와 같이 상엽 에탄올추출물을 다이아이온 HP-20 칼럼 크로마토그래피를 실시하여 제조된 상엽추출물 I 및 Ⅱ 중의 QMG, KMG, RT, IQT 및 AG의 함량은 각각 58.14%, 3.75%, 4.82%, 16.33%, 및 7.82%로 나타나, QMG가 반이상 차지하였다.

[표 2] 뽕나무 품종별 및 시기별 뽕잎의 5가지 플라보노이드 함량 비교

상기 [표 2]에서 보는 바와 같이, 6가지 뽕나무 품종별(개량대화, 개량일지뢰, 국상, 부사, 수획 20호, 율목) 및 시기별(6월, 7월 및 9월) 뽕잎의 플라보노이드 함량을 비교한 결과, 거의 모든 품종에서 5가지 플라보노이드 중 QMG가 가장 높은 함량을 나타내었으며, 그 다음으로 RT > IQT > KMG > AG 순으로 낮았다. 다음, 6월에 수확한 6가지 뽕나무 품종의 뽕잎 중 ‘수획20호’품종이 가장 높은 총 플라보노이드 함량(829.01 mg/100 g)을 나타내었으며, 그 다음으로 개량일지뢰(810.72 mg/100 g) > 부사(723.43 mg/100 g) > 국상(612. 30 mg/100 g) > 율목(599.75 mg/100 g) > 개량대화(471.51 mg/100 g) 순으로 나타났다. 마지막으로 채취시기별로 뽕잎의 플라보노이드 함량 변화를 관찰한 결과, 대체로 6월에 수확한 뽕잎의 플라보노이드 함량이 가장 높았으며, 그 다음으로 7월 및 9월에 수확한 뽕잎의 플라보노이드 함량이 차례로 낮아졌다. 반면,‘율목’의 뽕잎 플라보노이드 함량은 역으로 6월보다 7월이, 7월보다 9월에 수확한 뽕잎이 가장 높게 나타나서 수확시기가 증가할수록 함량이 증가하는 경향을 나타내었다. 이와같이 뽕잎의 플라보노이드 함량은 뽕나무 품종 및 수확시기에 따라 상당히 차이가 있음을 알 수 있었다.

이상의 결과로부터 6가지 뽕나무 품종 중 ‘수획20’및‘개량일지뢰’는 6월에 수확한 뽕잎의 플라보노이드 함량이 가장 높은 반면,‘율목’은 9월에 수확한 뽕잎의 플라보노이드 함량이 가장 높음을 알 수 있었다. 따라서 ‘수획20’및‘개량일지뢰’는 6월에 수확한 뽕잎이, 그리고 ‘율목’은 9월에 수확한 뽕잎이 각각 기능성 뽕잎차 원료로 적합하다고 생각되며, 또한, 품종 및 수확시기에 따라 5가지 플라보노이드의 함량 차이가 큰 것으로 나타났기에 이를 활용하여 맞춤식 고품질 기능성뽕잎차 생산이 가능할 것으로 사료된다.

실시예 3 : 뽕잎의 가공처리에 따른 플라보노이드 함량 변화

뽕잎 가공처리에 따른 플라보노이드 함량 변화를 조사하기 위해 다음과 같이 뽕잎을 가공 처리하였다. 영천양잠에서 생산한 건조 청일뽕 뽕잎을 180℃에서 1분, 3분, 5분간 볶음기(동광유압, 서울, 한국)를 이용하여 볶음처리하였으며, 찜처리는 스텐레스 찜통기(키친아트, 인천, 한국)에 넣어 증기가 발생하는 시점부터 10분, 20분, 30분간 찜처리하였다. 또한, microwave처리는 뽕잎분말을 전자레인지(삼성 RE-C200T, 2450 MHz, 서울, 한국)에 넣고 1분, 3분 및 5분간 microwave 처리하였다. 뽕잎의 가공처리에 따른 5가지 플라보노이드 함량 변화를 나타낸 것은 [표 3]과 같다.

[표 3] 뽕잎의 가공처리에 따른 5가지 플라보노이드 함량 변화

뽕잎을 이용한 고품질의 차 및 엑기스 제조에 앞서 최적 가공 조건을 찾기위해 영천에서 수확한 청일뽕 뽕잎을 이용하여 찜처리, 볶음처리, 마이크로웨이브 처리했을 때 5가지 플라보노이드 함량 변화를 나타낸 것은 [표 3]과 같다. 먼저 대조구의 5가지 플라보노이드 화합물, 즉 RT, IQT, QMG, AG, KMG 함량은 각각 59.18, 74.07, 248.92, 35.44, 45.27 mg/100 g이었으나, 찜처리의 경우 10분 처리 시 126.69, 200.8, 416.73, 7709, 65.88 mg/100 g으로 거의 대부분 플라보노이드 함량이 2배 이상 증가하였다. 20분 찜처리 시 RT 및 KMG는 다소 감소하였으나, 나머지 IQT, QMG, AG의 함량은 증가하였고 30분 처리 시 KMG를 제외한 4가지 플라보노이드 함량은 증가하는 경향을 나타내었다.

볶음처리 경우 1분 처리 시 5가지 플라보노이드의 함량은 112.16, 149.09, 415.16, 65.37, 66.54 mg/100 g로 대조구에 비해 함량이 크게 증가하였으나 찜처리 경우보다 함량 증가폭이 적었다. 다음, 5분간 볶음처리 시 RT, IQT, AG 함량이 증가하였으며 특히 IQT의 경우 190.73 mg/100 g으로 볶음처리 시간이 길어질수록 함량이 크게 증가하였으나 QMG 및 KMG의 경우는 감소하는 경향을 나타내었다.

마지막으로 마이크로웨이브 처리의 경우 1분 처리 시 플라보노이드의 함량이 95.99, 126.49, 384.49, 54.29, 62.15 mg/100 g으로 5가지 플라보노이드 함량 모두 증가하였으며, 아울러 5분 처리 경우도 증가하였으나 찜처리 및 볶음처리보다 증가폭이 적었다.

이와같이 뽕잎을 찜처리, 볶음처리, 마이크로웨이브처리 했을 경우 가공방법에 크게 관계없이 대개 플라보노이드의 함량이 크게 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 뽕잎을 이용한 고품질의 뽕잎차를 개발하기 위해서는 우선 뽕잎의 특유취인 풀내음과 비린내를 제거하고 아울러 갈변을 유도하는 폴리페놀옥시다제를 불활성화시키기 위해 적절한 찜처리 및 볶음처리가 필요하며, 그렇게 함으로서 동시에 항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 플라보노이드 화합물의 함량도 증가시킬 수 있었다.

이상에서 설명한 바와 같이 본 발명은 뽕잎을 이용한 다양한 가공식품 및 기능성식품 그리고 기능성화장품 소재로서 고품질의 뽕잎분말, 기능성뽕잎차, 뽕잎분말이 함유된 화장료 조성물을 제공하는 뛰어난 효과가 있으므로 가공식품 및 화장품 산업상 매우 유용한 방법인 것이다.

Claims

상엽을 예비 음건한 후 열풍건조기에서 건조하여 얻은 건조 상엽(Morus leaf)에 30% 에탄올수용액을 가하여 초음파 추출한 다음 여과 및 감압농축하고, 상기에서 얻은 농축물을 다시 30% 에탄올수용액으로 용해시킨 다음 실온에서 방치하여 침전하는 침전물을 원심분리하여 제거한 후 수득한 상층을 감압농축한 다음 다시 20% 에탄올수용액으로 용해한 후 미리 같은 용매로 평형화시켜 놓은 다이아이온 HP-20 흡착이온수지 칼럼에 통과하여 플라보노이드를 흡착시켜 비플라보노이드 성분을 20% 에탄올수용액으로 충분히 수세한 후 30% 및 50% 에탄올수용액으로 각각 순차적으로 용출시킨 다음 다시 각 분획을 실리카겔 및 세파덱스 칼럼 크로마토그래피를 순차적으로 실시하는 단계를 포함함을 특징으로 하는 상엽으로부터 하기 화합물 1 내지 화합물 5의 구조를 갖는 플라보노이드 화합물의 분리 및 정제방법.
(화합물 1)

(화합물 2)

(화합물 3)

(화합물 4)

(화합물 5)
제1항에 있어서, 상기 분리 및 정제방법은 흡착이온수지로부터 30% 에탄올수용액으로 용출시킨 후 농축하여 퀘세틴(QMG) 및 캄페롤(KMG)을 함유한 상엽추출물 I을 제조하는 단계와 50% 에탄올수용액으로 용출시킨 후 농축하여 루틴(RT), 이소퀘시트린(IQT) 및 아스트라갈린(AG)을 함유한 상엽추출물 Ⅱ를 제조하는 단계를 더 포함함을 특징으로 하는 플라보노이드 함유 상엽추출물을 제조하는 방법.
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