CN105051544A - 小鼠血清中大鼠抗体的特异性检测 - Google Patents
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Abstract
本文一方面报道了检测(获)自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：a)提供要分析的样品，b)将所述血清或血浆样品与抗体孵育，该抗体与大鼠IgG特异性结合并且不与小鼠IgG特异性结合，其中该抗体是i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物；或ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物，c)任选地将所述样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的试剂孵育；和d)将(b)或(c)中形成的复合物与样品中大鼠抗体的浓度关联。
Description
本发明报道了单克隆抗体的混合物在免疫测定中作为捕获和示踪抗体用于测量获自小鼠的样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途。
背景技术
相当大量的单克隆抗体正在研究中，并且需要在出于初次试验目的考虑进入人体之前在实验动物中考察。正要提到的其中两个重要标准如生物有效性和抗体清除必须进行研究。许多这些研究要求对实验动物自身抗体背景中的抗体进行量化。在大多数情形中，使用哺乳动物作为实验动物。毒理学常常首先在啮齿动物如小鼠或大鼠中加以评价。
哺乳动物通常在循环中具有大约10至大约30毫克抗体/ml。单克隆抗体通常必须以范围在大约1纳克/ml至大约100微克/ml的血清水平测试。因此，考察的抗体必须针对过量大约100倍至1千万倍的实验动物抗体背景而检测。
源自与实验动物抗体背景中的实验动物不同的物种的抗体的检测代表着药理学家非常重大的任务。
WO2008/031532中报道了抗药抗体测定。WO2006/066912中报道了实验动物中治疗性抗体的检测。US5,332,665中报道了物种特异性的高亲合力单克隆抗体。WO2011/048043中报道了非交叉反应性抗-IgG抗体。
发明内容
本文一方面报道了单克隆抗体的混合物在免疫测定中作为捕获和示踪抗体用于测量获自小鼠的样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途。
本文一方面报道了检测(获)自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：
a)提供要分析的样品，
b)将所述血清或血浆样品与抗体孵育，该抗体与大鼠IgG特异性结合并且不与小鼠IgG特异性结合，例如MAR(K+L)或MRGCOC-1，
c)任选地将所述样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的试剂孵育，和
d)将(b)或(c)中形成的复合物与样品中大鼠抗体的浓度关联。
本文一方面报道了检测(获)自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：
a)提供要分析的样品，
b)将所述血清或血浆样品与抗体孵育，该抗体与大鼠IgG特异性结合并且不与小鼠IgG特异性结合，其中该抗体是
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物；或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
c)任选地将所述样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的试剂孵育，和
d)将(b)或(c)中形成的复合物与样品中大鼠抗体的浓度关联。
本文一方面报道了检测(获)自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与和抗体MAR(K+L)或MRGCOC-1结合相同表位的抗体孵育，
b)任选地将所述血清或血浆样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的治疗性抗体的试剂孵育，和
c)将(a)或(b)中形成的复合物与所述治疗性抗体的存在和/或浓度关联。
本文一方面报道了检测(获)自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与抗体孵育，所述抗体是与至少两种不同的表位结合的单克隆抗体的混合物；
b)任选地将所述血清或血浆样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的治疗性抗体的试剂孵育；和
c)将(a)或(b)中形成的复合物与所述治疗性抗体的存在和/或浓度关联。
本文一方面报道了检测(获)自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大鼠抗体复合物，
b)将(a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将(a)中形成的复合物与所述大鼠抗体的存在或浓度关联，
其中捕获抗体是与至少两种不同的表位结合的单克隆抗体的混合物。
在所有方面的一实施方式中，捕获抗体和示踪抗体各自为与至少两种不同的表位结合的单克隆抗体的混合物。
在所有方面的一实施方式中，捕获抗体是与抗体MAR(K+L)或抗体MRGCOC-1结合相同表位的单克隆抗体的混合物。
在所有方面的一实施方式中，捕获抗体是
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物；或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
在所有方面的一实施方式中，示踪抗体是与抗体MAR(K+L)或抗体MRGCOC-1结合相同表位的单克隆抗体的混合物。
在所有方面的一实施方式中，示踪抗体是
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物；或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
在所有方面的一实施方式中，捕获抗体和示踪抗体彼此独立地是与抗体MAR(K+L)或抗体MRGCOC-1结合相同表位的单克隆抗体的混合物。
在所有方面的一实施方式中，示踪抗体和捕获抗体彼此独立地是
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物；或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
本文一方面报道了检测获自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大鼠抗体复合物，
b)将(a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将(a)中形成的复合物与所述大鼠抗体的存在或浓度关联，
其中捕获抗体是与抗体MAR(K+L)或抗体MRGCOC-1结合相同表位的单克隆抗体的混合物。
本文一方面报道了检测(获)自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大鼠抗体复合物，
b)将(a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将(a)中形成的复合物与所述大鼠抗体的存在或浓度关联，
其中捕获抗体是
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物；或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
本文一方面报道了检测获自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大鼠抗体复合物，
b)将(a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将(a)中形成的复合物与所述大鼠抗体的存在或浓度关联，
其中示踪抗体是与抗体MAR(K+L)或抗体MRGCOC-1结合相同表位的单克隆抗体的混合物。
本文一方面报道了检测(获)自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，其包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大鼠抗体复合物，
b)将(a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将(a)中形成的复合物与所述大鼠抗体的存在或浓度关联，
其中示踪抗体是
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物；或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
在所有方面的一实施方式中，该方法是抗原桥接免疫测定。
在一实施方式中，免疫测定是夹心法(sandwich)免疫测定。
本文一方面报道了使用包括捕获抗体和示踪抗体的抗原桥接免疫测定对获自小鼠的样品中的大鼠抗体进行免疫测定的方法，其中捕获抗体和示踪抗体均独立地选自与抗体MAR(K+L)或MRGCOC-1结合相同表位的抗体。
本文一方面报道了使用包括捕获抗体和示踪抗体的抗原桥接免疫测定对(获)自小鼠的样品中的大鼠抗体进行免疫测定的方法，其中捕获抗体和示踪抗体均独立地选自
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物；或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
在一实施方式中，抗体与其缀合伙伴的缀合通过经由抗体的氨基酸骨架的N-端和/或ε-氨基(赖氨酸)、不同赖氨酸的ε-氨基、羧基-、巯基-、羟基-和/或酚官能团和/或抗体的碳水化合物结构的糖醇基团的化学结合进行。
在一实施方式中，捕获抗体经由特异性结合对固定化。在一实施方式中，捕获抗体与生物素缀合并且固定化经由固定化的抗生物素蛋白或链霉抗生素蛋白进行。
在一实施方式中，示踪抗体经由特异性结合对与可检测标签缀合。在一实施方式中，示踪抗体与洋地黄毒苷(digoxygenin)缀合，并且与可检测标签的连接经由针对洋地黄毒苷的抗体进行。
在所有方面的另一实施方式中，大鼠抗体是Fab。
在所有方面的一实施方式中，大鼠抗体是单克隆抗体。
在一实施方式中，检测总的治疗性抗体，在另一实施方式中，检测活性治疗性抗体，在其他实施方式中，检测与其抗原结合的抗体。
本文一方面报道了与大鼠抗体特异性结合、并且不与小鼠免疫球蛋白结合的抗体用于测量获自小鼠的样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途，其中抗体与抗体MAR(K+L)或MRGCOC-1结合相同表位。
本文一方面报道了与大鼠抗体特异性结合、并且不与小鼠免疫球蛋白结合的抗体用于测量获自小鼠的样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途，其中抗体是
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物，或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
本文一方面报道了与大鼠抗体的至少两种不同表位结合的单克隆抗体的混合物作为捕获抗体在免疫测定中用于测量获自小鼠的血清或血浆样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途。
本文一方面报道了与大鼠抗体的至少两种不同表位结合的单克隆抗体的混合物作为捕获抗体和示踪抗体在免疫测定中用于测量获自小鼠的血清或血浆样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途。
发明详述
术语“大鼠抗体”表示已在用各自的抗原免疫之后自大鼠得到的抗体。大鼠抗体可以改性成“治疗性抗体”，是指要在用于作为人的治疗剂许可而在临床研究中测试，并且可以对个体施用用于治疗疾病。在一实施方式中，大鼠抗体是单克隆抗体。治疗性抗体被广泛地用于治疗许多种疾病，例如肿瘤疾病(例如血液和实体恶性肿瘤，包括非霍奇金氏淋巴瘤、乳癌和结肠直肠癌)、免疫疾病、中枢神经疾病、血管疾病或传染病。这些抗体为，例如，针对CD20、CD22、HLA-DR、CD33、CD52、EGFR、G250、GD3、HER2、PSMA、CD56、VEGF、VEGF2、CEA、LevisY抗原、IL-6受体(IL6R)或IGF-1受体(IGF1R)的抗体。
术语“抗体”包括许多种形式的抗体结构，包括整个抗体和抗体片段。抗体的基因改造见述于，例如，Morrison,S.L.等人,Proc.Natl.AcadSci.USA81(1984)6851-6855；US5,202,238和US5,204,244；Riechmann,L.等人,Nature332(1988)323-327；Neuberger,M.S.等人,Nature314(1985)268-270；Lonberg,N.,Nat.Biotechnol.23(2005)1117-1125。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指由基本上同源的抗体的群体——即，构成群体的单个抗体除可以少量存在的可能的天然突变以外是相同的——得到的抗体。单克隆抗体是高度特异性的，直接针对单个抗原位点。而且，与包括针对不同抗原位点(决定簇或表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一抗原位点。除了其特异性以外，单克隆抗体的优势还在于它们可以不被其他抗体污染地合成。修饰语“单克隆”是指抗体获自基本上同源的抗体群体的特征，而不应理解成要求通过任何特定的方法制造抗体。
如本文所用，术语“单克隆抗体的混合物”表示由其各自与相同抗原的不同表位结合的一种以上的不同的单克隆抗体组成的组合物。在一实施方式中，混合物包括与相同抗原的两个或更多个不同表位结合的抗体。在一实施方式中，混合物包括与同一抗原的2-10个不同表位结合的抗体。在一实施方式中，混合物包括与同一抗原的2-4个不同表位结合的抗体。
术语“样品”表示任何取自实验动物的组织或液体样品。在一实施方式中，样品将会是液体样品，如唾液、尿、全血、血浆或血清。在其他实施方式中，样品将会是全血、血浆或血清。
“与大鼠抗体结合并且不与小鼠抗体结合的抗体”将会以至少10-9mol/l的解离常数(＝KDiss)与大鼠抗体结合。在一实施方式中，KDiss为至少10-10mol/l。同时，不与小鼠抗体结合的特性通过KDiss为10-7mol/l或更差确保。在一实施方式中，与大鼠抗体结合并且不与小鼠抗体结合的抗体在其分别对小鼠G类免疫球蛋白和对G类大鼠球蛋白的反应性之间的KDiss-差距将会为至少100倍。
通常，术语“结合”表示抗体与其抗原或相应的抗体受体，无论哪个在其各自的背景中，以10-9mol/l或更低的解离常数(＝KD＝KDiss.)、在另一实施方式中以至少10-10mol/l的KD结合。同时，不结合的特性通过KD为10-7mol/l或更高(例如10-5mol/l)确保。另外，在一实施方式中，与第一抗体结合并且不与第二抗体结合的抗体在其分别对第一G类免疫球蛋白和对第二G类免疫球蛋白的反应性之间的KD-差距将会为至少100倍。
在一实施方式中，抗体的结合特性，特别是KDiss通过表面等离子体共振在仪器上评价。在该方法中，结合特性通过表面等离子体共振(SPR)的变化评价。方便地将考察的抗体结合在固相(称作芯片)上，并评价单克隆抗体、多克隆抗体或甚至包括IgG的血清与该涂敷的芯片的结合。
与大鼠抗体在小鼠中的应用有关的多个方面可能必须评价。在某些设置中，相关的可以是分析存在的大鼠抗体的总量，或者重要的是分析大鼠抗体的某些片段、或者大鼠抗体的某些修饰、或者与抗原结合的大鼠抗体的浓度、或者大鼠抗体仍能与抗原结合的级分。在一实施方式中，本文报道的抗体和方法可以用于分别检测小鼠中的总的、活性或抗原结合的大鼠抗体。
术语“总的抗体”表示任何检测到的抗体，无论抗体是否是活性的(即，仍与其抗原有反应性)、非活性的和/或抗原结合的。
术语“活性抗体”表示小鼠中存在的仍能够与其抗原结合的大鼠抗体。这些抗体，例如，在其抗原结合位点上尚未与其抗原或任何其他分子结合。
术语“抗原结合的抗体”表示小鼠的循环中存在的与其抗原结合的大鼠抗体。
以上定义的总的、活性或抗原结合的(大鼠)抗体可以用本文报道的抗体和方法直接检测。此外，可以检测其他形式的非活性大鼠抗体，例如，由抗药物抗体或抗-独特型抗体或特别是中和性抗药物抗体(例如，内源性抗药物抗体(ADA))结合的大鼠抗体。
此外，还可以间接地评价任何“非活性抗体”。这些非活性(大鼠)抗体可以是，例如，与其抗原结合的大鼠抗体，或者与交叉反应性抗原结合的大鼠抗体，或者被针对大鼠抗体的自体或抗-独特型抗体阻断的大鼠抗体。在总的抗体总计多于活性抗体和抗原结合抗体的总和时，可以存在有包括不与其对应的抗原结合的非活性抗体的额外的抗体级分。
例如，总的(大鼠)抗体可以在所谓的竞争免疫测定系统或所谓的夹心型测定系统中检测。这些测定可以在没有洗涤步骤的一实施方式中(均质免疫测定)或者在具有洗涤步骤的另一实施方式中(异质免疫测定)进行。
在一实施方式中，总的(大鼠)抗体在夹心免疫测定中检测，其中在这种夹心测定的两侧均使用与大鼠抗体结合并且不与小鼠抗体结合的抗体。在这种夹心的一侧使用的抗体是结合的或者能够与固相结合(常常称作捕获抗体)，而在这种夹心法的另一侧使用的抗体以促进直接或间接检测的方法加以标记(所谓的示踪或检测抗体)。在这种夹心测定方法中结合的示踪/检测抗体的量与被考察的样品中大鼠抗体的量直接相关。
样品中活性(大鼠)抗体的检测可以通过本领域方法方便的状态实现。但是，总的(大鼠)抗体或者与其抗原结合的(大鼠)抗体的部分的检测是相当复杂的，并要求完全不同的测定设定，特别是要求对于每种不同的测定而定制的试剂。用本文报道的与大鼠抗体结合并且不与小鼠抗体结合的抗体，有可能在彼此类似的测试系统中评价活性大鼠抗体、总的大鼠抗体或抗原结合的大鼠抗体的级分。一旦在治疗性抗体的这些多种部分之间进行定量比较时，这种总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的比较性评价应当具有多种优势。
在一实施方式中，建立夹心型测定格式，以检测活性(大鼠)抗体。在其他实施方式中，使用与大鼠抗体结合并且不与小鼠抗体结合的抗体作为捕获抗体，并且这种夹心测定的检测侧利用标记形式的抗原，或者在与抗原结合之后利用不与大鼠抗体所识别的表位结合或竞争的第二抗体，其中第二抗体是特异性可检测的并且/或者以促进直接或间接检测的方式加以标记。
在一实施方式中，使用与大鼠抗体结合并且不与小鼠抗体结合的抗体作为捕获试剂，在夹心型测定格式中检测抗原结合的(大鼠)抗体。在一实施方式中，在检测中使用在不与大鼠抗体的表位竞争的表位处与抗原结合的第二抗体。第二抗体在一实施方式中以促进直接或间接检测的方式加以标记。
为进行直接检测，标记基团可以选自任何已知的可检测标记物基团，例如染料、发光标记基团，例如化学发光基团，例如吖啶酯或二氧杂环丁烷，或者荧光染料，例如荧光素、香豆素、若丹明、、试卤灵、青色素及其衍生物。标记基团的其他例子为发光金属复合物，例如钌或铕复合物，酶，例如，当用于ELISA或用于CEDIA(克隆酶供体免疫测定)时，和放射性同位素。另外在发射信号的基团的一个实施方式中，还使用可以由电化学发光检测的金属螯合物作为可检测标记，具体提到的有钌螯合物。在一实施方式中，标记基团是钌(双吡啶基)3 2+螯合物。
间接检测系统包括，例如，将检测试剂例如示踪/检测抗体用结合对的第一伙伴标记。合适的结合对的例子为半抗原或抗原/抗体，生物素或生物素类似物例如氨基生物素、亚氨基生物素或脱硫生物素/抗生物素蛋白或链霉抗生素蛋白，糖/凝集素，核酸或核酸类似物/互补核酸，以及受体/配体，例如类固醇激素受体/类固醇激素。在一实施方式中，第一结合对成员选自半抗原、抗原和激素。在一实施方式中，半抗原选自地高辛和生物素及其类似物。这些结合对的第二伙伴，例如，抗体、链霉抗生素蛋白等通常是标记的，以允许进行直接检测，例如，通过上述的标签进行标记。
在所有上述免疫检测方法中，选择允许所用试剂的结合，例如允许抗体与其对应的抗原结合的试剂条件。本领域技术人员使用术语复合物来指代这些结合事件的结果。在本文报道的测定方法中，形成的复合物通过本领域方法与治疗性抗体的对应的浓度关联。这种关联可以通过以下方法确立，例如，用本文报道的方法制备并测定在对应复合物的稀释物系列中的复合物，并将得到的结果与单独的复合物组分的浓度关联。取决于所用的检测试剂，该关联步骤的结果是总的、活性的或抗原结合的治疗性抗体的浓度。
本领域技术人员将会认识到，本文报道的方法将不仅仅揭示总的、抗原结合的、活性的或甚至非活性的(大鼠)抗体的浓度。由于在不同的测定中使用一种并且相同的试剂，与大鼠抗体结合并且不与小鼠抗体结合的抗体，得到的值可以很容易地彼此比较，甚至对其比例进行评价。在其他实施方式中，本方法涉及活性的与总的(大鼠)抗体的比例。该比例将很好地用作(大鼠)抗体效力的指标。
对于测定与相同或重叠的表位的结合，例如，可以使用以下方法，其中借助于竞争测试系统测定与同一靶抗原结合的两种抗体重叠的表位。出于该目的，例如，借助于酶免疫测定，对考察的抗体与已知抗体竞争结合固定化的靶抗原的程度加以测试，例如，采用本文报道的细胞系之一所产生的抗体。出于该目的，适当地将固定化的靶抗原与标记形式的已知抗体和过量的考察的抗体孵育。通过检测结合的标记物，很容易确认考察的抗体可以从结合中取代已知抗体的程度。如果在相同的浓度下取代大于20％，在另一实施方式中大于30％，或者在较高的浓度下取代大于70％，在另一实施方式中大于80％，在一实施方式中在考察的抗体对于已知抗体过量103-105倍的情形中，则存在有表位重叠，两种抗体与同样的或相同表位的重叠部分结合。
抗体的特异性可以在夹心-ELISA中显示，其各采用各自抗体的生物素化和洋地黄毒苷化的变体和来自不同物种的血清。为了成为通常可应用于小鼠血清中大鼠IgG的检测和定量的测定，这样的测定要求结合位点不依赖于任何次级抗体修饰例如糖基化或脱酰氨化的抗-大鼠IgG抗体。否则，对于每种要检测和定量的新的大鼠抗体优化测定将会是必需的。
抗体的特异性也可以在使用BIAcore技术的表面等离子共振实验中显示。
本文一方面报道了对获自小鼠的包括单克隆抗体的生物素化的混合物作为捕获抗体和单克隆抗体的洋地黄毒苷化的混合物作为示踪抗体的样品中的大鼠抗体或其衍生物例如Fab-片段进行定量的测定。抗体MARGCOC-1或MRGCOC-1(其名称可互换地使用)是以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
抗体MAR(K+L)是与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物。
“亲和力(affinity)”是指分子(例如抗体)与其结合伙伴(例如抗原)的单一结合位点之间的非共价相互作用的总和。除非另外指出，如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对(例如抗体和抗原)的成员之间1:1相互作用的固有结合亲和力。分子X对于其伙伴Y的亲和力通常可以通过解离常数(类似地通过Kd或KD或平衡常数)表示。亲和力可以通过本领域已知的常见方法测量。
“亲合力(Avidity)”是指单独的非共价结合相互作用例如抗原-抗体相互作用的多种亲和力的累加强度。因此，亲合力给出抗原-抗体复合物的总强度的度量。
本文一方面报道了一种测定，其包括与大鼠IgG的不同结构域上的表位特异性结合的捕获和示踪抗体。在该测定中，只有完整的大鼠抗体将会产生阳性测定结果和可检测的信号。在一实施方式中，捕获抗体和示踪抗体独立地选自本文报道的抗体。
本文一方面报道了一种测定，其中使用抗-大鼠IgG抗体作为参考标准和/或阳性对照，以模拟抗-药物抗体(ADA)。这可以用于测定开发过程中，以找出最优的测定条件和测试测定的稳健性，即，用不同的标准试剂/阳性对照考察测定的性能。鉴于ADA将会是多克隆的并且可能针对Fab片段和Fc部分二者的事实，该设定是特别有优势的。
本文报道的一方面涉及与大鼠抗体结合并且不与小鼠抗体结合的抗体用于测量获自小鼠的样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途。
本文报道的一方面涉及均与大鼠抗体结合并且不与小鼠抗体结合的两种抗体用于测量获自小鼠的样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途，其中抗体中的一种是捕获抗体并且抗体中的一种是示踪抗体。在一实施方式中，大鼠抗体是Fab片段。
在本文报道的方法中，也可以使用不同的捕获分子，例如竞争抗体、F(ab’)2片段、Fab片段或者乃至单链抗体。
本文报道的方法用针对抗IL-IR受体的抗体(抗-IL1R抗体)的抗体所示例，如WO2005/023872中所报道(在此将其并入作为参考)。
提供以下实施例和图，以有助于理解本发明，其真实范围在所附权利要求中说明。应当理解到，可以在不偏离本发明精神的前体下对所述的方法进行多种变化。
附图说明
图1：不同抗-大鼠IgG抗体与若干动物物种血清的反应性；左侧条：MAR(K+L)，右侧条：Pab抗-大鼠HRP(CellSignalingTechnology)。
图2：使用本文所报道方法对总的治疗性抗体进行定量的示例性SA-MTPELISA的图示测定设置。
图3：比较作为单克隆抗体混合物的实例的MARGCOC-1和MAR(K+L)与多克隆抗体对总的治疗性抗体的定量；上方的曲线(三角)：Pab抗-大鼠IgG-HRP(CellSignalingTechnology)；下方的曲线(菱形)：MAR(K+L)。
实施例1
不同抗-大鼠IgG抗体与若干动物物种血清在MTP-ELISA中的反应性
将微滴定板(MTP)(Nunc)在室温(RT)下分别用在磷酸盐缓冲盐水中稀释至10％的不同物种的血清涂覆1小时。使用来自大鼠、小鼠、兔、猕猴、仓鼠和豚鼠的血清。用洗涤3次之后将MTP的所有孔在室温下用PBS/3％BSA封闭1小时。然后将MTP孔与不同的抗-大鼠IgG抗体(洋地黄毒苷或辣根过氧化物酶缀合物(HRP)(POD))孵育(1h；RT)。如相应的制造商推荐，使用抗-大鼠抗体。
将上述的孔洗涤3次。对用POD-缀合物孵育的孔直接进行结合的抗-大鼠免疫球蛋白的酶促反应/检测的处理。将其他的孔酌情用抗-DIG缀合物孵育(1h；RT)(所有试剂均来自RocheDiagnostics,Germany)，然后进行洗涤步骤。POD-缀合物中包括的POD催化ABTS底物的显色反应。信号通过ELISA阅读器在波长405nn下测量(参考波长：490nm)(参见图1)。对于每个抗-大鼠IgG抗体，计算针对大鼠抗体的信号和其他血清的信号的比例。使用这些值评价抗-大鼠IgG抗体的特异性。高的比例翻译过来是与大鼠免疫球蛋白的强反应性并且同时与来自其他物种的免疫球蛋白的低(交叉)反应性(参见下表)。
表
实施例2
单克隆抗体的混合物作为捕获和示踪抗体用于总治疗性抗体的定量的
用途
在第一步中将生物素化的MARGCOC-1(作为包括4种结合不同表位的单克隆抗体的混合物的例子)与涂敷有链霉抗生素蛋白的微滴定板(SA-MTP)结合。通过洗涤除去过量未结合的抗体。然后，加入样品/标准物，例如在小鼠血清中掺入的大鼠抗-CD47抗体，并孵育1小时。洗涤自后，将孔用洋地黄毒苷化的MAR(K+L)(作为包括2种结合不同表位的单克隆抗体的混合物的例子)或HRP标记的pAb抗-Rat-IgG(CellSignalingTechnology)孵育。洗涤之后，将结合的洋地黄毒苷化的MAR(K+L)用抗-洋地黄毒苷抗体HRP缀合物检测。抗体-酶缀合物的HRP催化ABTS底物的显色反应。信号通过ELISA阅读器在405nm波长(参考波长：490nm)下测量(参见图3)。每个血清样品的吸收值一式三份测定。
实施例3
单克隆抗体的相同的混合物作为捕获和示踪抗体用于总治疗性抗体的
定量的用途
在第一步中将微滴定板(MTP)(Nunc)用10μg/mLMAR(K+L)和Pab抗-大鼠-IgG(MolecularProbes#A10536)涂覆。通过洗涤除去过量的未结合的抗体。然后，加入样品/标准物，例如小鼠血清中掺入的并也在缓冲液中稀释的mAb抗-CD47-大鼠-IgG，并孵育1小时。洗涤之后，将孔用洋地黄毒苷化的MAR(K+L)或HRP标记的Pab抗-大鼠-IgG(MolecularProbes#A10549)孵育。洗涤之后，将结合的洋地黄毒苷化的MAR(K+L)用抗-洋地黄毒苷-抗体HRP缀合物检测。其他检测抗体已经具有HRP标签，因此在底物孵育之前不需要第二检测抗体。抗体-酶缀合物的HRP催化ABTS底物的显色反应。信号通过ELISA阅读器在405nm波长(参考波长：490nm)下测量。每个血清样品的吸收值一式三份测定。
Claims (14)
1.检测获自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，所述方法包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与抗体孵育，所述抗体是与至少两种不同的表位结合的单克隆抗体的混合物，
b)任选地将所述血清或血浆样品与适合于选择性地检测总的、活性或抗原结合的治疗性抗体的试剂孵育，和
c)将(a)或(b)中形成的复合物与所述治疗性抗体的存在和/或浓度关联。
2.检测获自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，所述方法包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大鼠抗体复合物，
b)将(a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将(a)中形成的复合物与所述大鼠抗体的存在或浓度关联，
其中捕获抗体是与至少两种不同的表位结合的单克隆抗体的混合物。
3.检测获自小鼠的血清或血浆样品中大鼠抗体的方法，所述方法包括以下步骤：
a)将所述血清或血浆样品与缀合至固相的捕获抗体孵育，从而形成捕获抗体-大鼠抗体复合物，
b)将(a)中形成的复合物与示踪抗体孵育，从而将(a)中形成的复合物与所述大鼠抗体的存在或浓度关联，
其中示踪抗体是与至少两种不同的表位结合的单克隆抗体的混合物。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，所述方法特征在于混合物是：
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物，或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
5.根据权利要求2或4中任一项所述的方法，所述方法特征在于示踪抗体是：
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物，或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
6.根据权利要求3至4所述的方法，所述方法特征在于示踪抗体和捕获抗体彼此独立地为：
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物，或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
7.根据权利要求1-6所述的方法，所述方法特征在于方法是抗原桥接免疫测定。
8.根据权利要求7所述的方法，所述方法特征在于所述免疫测定是夹心免疫测定。
9.根据权利要求2-8中任一项所述的方法，所述方法特征在于捕获抗体与生物素缀合，并且固定化经由固定化的抗生物素蛋白或链霉抗生素蛋白进行。
10.根据权利要求2-9中任一项所述的方法，所述方法特征在于示踪抗体与洋地黄毒苷缀合，并且与可检测标签的连接经由针对洋地黄毒苷的抗体进行。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，所述方法特征在于所述大鼠抗体是Fab。
12.与大鼠抗体的至少两种不同表位结合的单克隆抗体的混合物作为捕获抗体在免疫测定中的用途，所述免疫测定用于测量获自小鼠的血清或血浆样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度。
13.与大鼠抗体的至少两种不同表位结合的单克隆抗体的混合物各自作为捕获抗体和示踪抗体在免疫测定中的用途，所述免疫测定用于测量获自小鼠的血清或血浆样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度。
14.与大鼠抗体结合并且不与小鼠免疫球蛋白结合的抗体用于测量获自小鼠的血清或血浆样品中总的、活性或抗原结合的大鼠抗体的浓度的用途，其中所述抗体是：
i)与大鼠κ轻链结合的抗体和与大鼠λ轻链结合的抗体的混合物，或
ii)以4.1x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG1结合的抗体、以8.6x109M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2a结合的抗体、以6.4x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2b结合的抗体和以9.5x1010M-1或更高的亲合力与大鼠IgG2c结合的抗体的混合物。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118562011A (zh) * | 2024-07-31 | 2024-08-30 | 北京索莱宝科技有限公司 | 大鼠IgG的抗体、抗体组合物及其应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5332665A (en) * | 1991-12-18 | 1994-07-26 | The General Hospital Corporation | Species specific, high affinity monoclonal antibodies |
| WO2005045058A2 (en) * | 2003-10-27 | 2005-05-19 | Monogram Biosciences, Inc. | Detecting human anti-therapeutic antibodies |
| CN101088014A (zh) * | 2004-12-23 | 2007-12-12 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 在实验动物中检测治疗性抗体 |
| CN101506659A (zh) * | 2006-09-12 | 2009-08-12 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 抗药物抗体测定法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62257395A (ja) * | 1986-04-28 | 1987-11-09 | Sumitomo Electric Ind Ltd | ラツト免疫グロブリンに対するモノクロ−ナル抗体 |
| US6306626B1 (en) * | 1990-04-27 | 2001-10-23 | Research Development Foundation | Anti-IgM monoclonal antibodies and methods of their use |
| CZ281796B6 (cs) | 1991-08-06 | 1997-02-12 | Schering Corporation | Použití interleukinu-10, jeho analoga, agonisty nebo antagonisty pro výrobu léčiva a farmaceutický přípravek je obsahující |
| JPH06113830A (ja) * | 1991-12-06 | 1994-04-26 | Nippon Bio Tesuto Kenkyusho:Kk | ヒトヘモグロビンの特異的検出法 |
| DE4418513A1 (de) | 1994-05-27 | 1995-11-30 | Bayer Ag | Immuntest zum Nachweis hochmolekularer Antigene |
| JP3914342B2 (ja) | 1997-09-25 | 2007-05-16 | 武田薬品工業株式会社 | ｇｐ３４結合阻害物を有効成分として含有する医薬組成物 |
| JP2004045384A (ja) * | 2002-05-22 | 2004-02-12 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫学的測定方法、免疫学的測定装置、生体成分測定用トイレ、抗アルブミンモノクローナル抗体、それを産生する細胞株、およびアルブミン検出キット |
| EP2067044B1 (en) * | 2006-09-12 | 2013-07-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-drug antibody assay |
| MX342907B (es) * | 2009-05-13 | 2016-10-17 | Genzyme Corp * | El uso de un anticuerpo anti-cd52 monoclonal para el tratamiento de lupus. |
| KR101536388B1 (ko) * | 2009-10-19 | 2015-07-22 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 비-교차반응성 항-ＩｇＧ 항체 |
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2015
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-
2016
- 2016-05-09 HK HK16105246.3A patent/HK1217231A1/zh not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5332665A (en) * | 1991-12-18 | 1994-07-26 | The General Hospital Corporation | Species specific, high affinity monoclonal antibodies |
| WO2005045058A2 (en) * | 2003-10-27 | 2005-05-19 | Monogram Biosciences, Inc. | Detecting human anti-therapeutic antibodies |
| CN101088014A (zh) * | 2004-12-23 | 2007-12-12 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 在实验动物中检测治疗性抗体 |
| CN101506659A (zh) * | 2006-09-12 | 2009-08-12 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 抗药物抗体测定法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RACHAEL PEARCE-PRATT ET AL.: "False-positive signals in enzyme immunoassay (EIA) interactions between rodent IgG subclasses", 《JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118562011A (zh) * | 2024-07-31 | 2024-08-30 | 北京索莱宝科技有限公司 | 大鼠IgG的抗体、抗体组合物及其应用 |
| CN118562011B (zh) * | 2024-07-31 | 2024-10-11 | 北京索莱宝科技有限公司 | 大鼠IgG的抗体、抗体组合物及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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