KR101536388B1 - 비-교차반응성 항-ＩｇＧ 항체 - Google Patents

비-교차반응성 항-ＩｇＧ 항체 Download PDF

Info

Publication number
KR101536388B1
KR101536388B1 KR1020127010001A KR20127010001A KR101536388B1 KR 101536388 B1 KR101536388 B1 KR 101536388B1 KR 1020127010001 A KR1020127010001 A KR 1020127010001A KR 20127010001 A KR20127010001 A KR 20127010001A KR 101536388 B1 KR101536388 B1 KR 101536388B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
antibodies
dsm
therapeutic
human
Prior art date
Application number
KR1020127010001A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20130026409A (ko
Inventor
울리히 에시히
슈테판 클로슈테르만
프랑크 코발레브스키
카이-군나르 슈튜벤라우흐
루돌프 포겔
우베 베쎌스
Original Assignee
에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 에프. 호프만-라 로슈 아게 filed Critical 에프. 호프만-라 로슈 아게
Publication of KR20130026409A publication Critical patent/KR20130026409A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101536388B1 publication Critical patent/KR101536388B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본원에는 세포주 DSM ACC3006, DSM ACC3007, 및 DSM ACC3008 뿐 아니라, 상기 세포주로부터 수득된 항체 및 면역검정법에서의 상기 세포주로부터 수득된 항체의 용도가 보고된다. 또한 인간 또는 침팬지 IgG 에 결합하고 개 및 마모셋 IgG 에 결합하지 않는 항체 및 카파 경쇄 불변 도메인을 포함하는 IgG1 에 특이적으로 결합하는 항체가 보고된다.

Description

비-교차반응성 항-ＩｇＧ 항체 {NON-CROSS-REACTIVE ANTI IGG ANTIBODIES}
본원에는 IgG 계열의 인간 및 침팬지 항체의 IgG-Fab-절편의 불변 영역에 특이적으로 결합하는 항체 및 면역검정법에서의 이의 용도가 보고된다.
1974 년에 [Koehler and Milstein] 에 의해 첫번째 단일클론 항체가 개발된 이래로, 인간 요법에 적합한 항체의 개발을 위한 많은 노력이 시도되었다. 이용가능하게 된 첫번째 단일클론 항체는 마우스 및 래트에서 개발되었다. 지난 10 년 동안 증가하는 수의 인간 단일클론 항체 또는 인간화 단일클론 항체가 시장에 도입되었다. 잘 알려진 예에는 예를 들어, Herceptin® 및 MabThera® (F. Hoffmann-La Roche AG, Basel) 가 있다.
인간 또는 인간화 단일클론 항체의 꽤 많은 수가 연구 중에 있으며 인간 내로 도입 전 실험 동물에서 연구될 필요성이 첫번째 시도 목적으로 고려될 수 있다. 이들 중 둘을 언급하자면 생체-이용능 및 항체 소거율과 같은 중요한 기준이 연구되어야만 한다. 많은 상기 연구가 실험 동물의 자체 항체의 백그라운드에서 치료 항체의 정량화를 필요로 한다. 대부분의 경우 포유동물은 실험 동물로서 사용된다. 마우스 또는 래트와 같은 설치류에서 독성학이 종종 처음으로 평가된다. 더욱 진행된 약물 개발 단계에서, 특히 약물을 인간 내로 도입 전에, 심지어 원숭이가 이러한 전임상 연구에 포함되도록 해야한다.
포유동물은 통상적으로 순환 내 ml 당 약 10 내지 약 30 밀리그램의 항체를 갖는다. 치료적 단일클론 항체는 전형적으로는 ml 당 약 1 나노그램 내지 ml 당 약 100 마이크로그램 범위의 혈청으로 시험되어야만 한다. 그러므로 치료 항체는, 약 100 배 내지 106 배를 넘는 실험 동물의 항체의 백그라운드에 대항하여 검출되어야만 한다.
실험 동물의 항체의 백그라운드 중 인간 또는 인간화 치료 항체의 검출은 약리학자에게 꽤 중요한 과제로 대표된다. 인간 또는 인간화 항체의 검출은 시험 동물이 H. 사피엔스 (H. sapiens) 와 가깝게 관련될수록 더욱더 어려워진다.
WO 2008/031532 호에는 항-약물 항체 검정법이 보고된다. 실험 동물 중의 치료 항체의 검출은 WO 2006/066912 호에 보고된다. US 5,332,665 호에는 종 특이적, 고 친화성 단일클론 항체가 보고된다.
발명의 요약
본원에는 첫번째로 통상 사용되는 실험 동물에 존재하지 않는 인간 및 침팬지의 면역글로불린 계열 G 의 항체 상의 형태적 에피토프가 보고된다. 두번째로 상기 에피토프에 결합하는 비-교차반응성 항-인간 IgG 항체 및 항-침팬지 IgG 항체가 보고된다. 세번째로 상기 항체를 사용하는 검정법이 보고된다.
본원에 보고되는 하나의 양상은 인간 또는 침팬지 IgG (서브계열 G 의 면역글로불린) 에 결합하고, 개 및 마모셋 IgG 에 결합하지 않는 항체이다.
하나의 구현예에서 항체는 개, 붉은털 원숭이 (Rhesus-monkey), 마모셋, 개코원숭이, 및 사이노몰거스 원숭이 IgG 에 결합하지 않는다. 또다른 구현예에서 항체는 인간 및 침팬지 IgG 에 특이적으로 결합한다. 추가의 구현예에서 인간 또는 침팬지 IgG 에 대한 결합에 대한 KD-값은 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 10-9 mol/l 이하이고, 개, 붉은털 원숭이, 마모셋, 개코원숭이, 및 사이노몰거스 원숭이 IgG 에 대한 결합에 대한 KD-값은 10-6 mol/l 이상이다. 하나의 구현예에서 인간 또는 침팬지 IgG 에 대한 결합에 대한 KD-값은 10-9 mol/l 내지 10-13 mol/l 이다. 또다른 구현예에서 개, 붉은털 원숭이, 마모셋, 개코원숭이, 및 사이노몰거스 원숭이 IgG 에 대한 결합에 대한 KD-값은 표면 플라즈몬 공명을 통해 측정가능하지 않다. 하나의 구현예에서 항체는 단일클론 항체이다.
본원에서 보고되는 또다른 양상은 카파 경쇄 불변 도메인을 포함하는 IgG1 (서브계열 G1 의 면역글로불린) 에 특이적으로 결합하는 항체이다.
하나의 구현예에서 항체는 IgG2 에 추가로 결합한다. 또한 구현예에서 항체는 IgG4 에 추가로 결합한다. 또다른 구현예에서 항체는 IgG3 에 결합하지 않는다. 하나의 구현예에서 항체는 람다 경쇄 불변 도메인을 포함하는 IgG1 에 결합하지 않는다. 하나의 구현예에서 항체는 단일클론 항체이다.
세포주 DSM ACC3006 (M-1.3.2), DSM ACC3007 (M-1.5.8), 및 DSM ACC3008 (M-1.7.10) 로부터 수득된 본원에 보고된 항체는 예를 들어, 세포주 DSM ACC2708 에 의해 제조된 항체 M-R10Z8E9 에 비해 감소된 교차-반응성을 보이고, Fab-영역 중의 상이한 에피토프와 결합하고, 이웃하는 글리코실화 부위에 의해 영향을 받지 않고, 각각의 항체의 결합 부위가 Fab-절편에만 오직 1 회 존재하므로 Fab 치료 항체의 측정을 위한 면역검정법과 혼합될 수 있다.
본원에 보고된 개별 양상은 세포주 DSM ACC3006, DSM ACC3007, 및 DSM ACC3008 뿐 아니라 상기 세포주로부터 수득된 각각의 항체 및 면역검정법에서의 상기 항체의 용도이다.
추가의 양상은 하기를 포함하는 키트이다:
a) 비오티닐화 형태의 세포주 DSM ACC3006, 또는 DSM ACC3007, 또는 DSM ACC3008, 또는 DSM ACC2708 로부터 수득된 항체,
b) 디곡시게닐화 형태의 세포주 DSM ACC3006, 또는 DSM ACC3007, 또는 DSM ACC3008, 또는 DSM ACC2708 로부터 수득된 항체.
본원에 보고된 또다른 양상은 하기 단계를 포함하는, 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 치료 항체를 검출하기 위한 방법이다:
a) 분석할 샘플을 제공하는 단계,
b) 상기 샘플을 본원에 보고된 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체로 인큐베이션하는 단계,
c) 임의로, 상기 샘플을 총, 활성의 또는 항원-결합된 치료 항체의 선택적 검출에 적합한 시약으로 인큐베이션하는 단계, 및
d) (b) 또는 (c) 에서 형성된 복합체를, 임의로 교정 곡선을 통해 상기 치료 항체의 농도와 연관시키는 단계.
본원에 보고된 여전히 또다른 양상은 포획 항체 및 추적 항체가 모두 본원에 보고된 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체로부터 독립적으로 선택되는, 포획 항체 및 추적 항체를 포함하는 항원 가교 면역검정법을 사용하는 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 치료 항체를 면역학적으로 측정하기 위한 방법이다.
하나의 구현예에서 면역검정법은 샌드위치 면역검정법이다. 또다른 구현예에서 공액 파트너에 대한 항체의 공액은 항체의 아미노산 백본의 상이한 라이신의 N-말단 및/또는 ε-아미노기 (라이신), ε-아미노기, 카르복시-, 술프히드릴-, 히드록실- 및/또는 페놀 작용기 및/또는 항체의 탄수화물 구조의 당 알코올 기를 통한 화학적 결합에 의해 수행된다. 추가의 구현예에서 포획 항체는 특정 결합 쌍을 통해 부동화된다. 하나의 구현예에서 포획 항체는 비오틴에 공액되고, 부동화는 부동화된 아비딘 또는 스트렙타비딘을 통해 수행된다. 여전히 또다른 구현예에서 추적 항체는 특정 결합 쌍을 통해 검출 가능한 표지에 공액된다. 하나의 구현예에서 추적 항체는 디곡시게닌에 공액되고, 검출가능한 표지에 대한 연결은 디곡시게닌에 대항하는 항체를 통해 수행된다. 또다른 구현예에서 치료 항체는 Fab 이다. 하나의 구현예에서 실험 동물은 마모셋 및 타마린, 구세계 원숭이, 꼬마여우원숭이 및 쥐여우원숭이, 긴팔원숭이 및 소형 유인원, 참여우원숭이의 과의 일원, 뿐 아니라 이들의 교배종을 포함하는 군으로부터 선택된다. 하나의 구현예에서 실험 동물은 개, 붉은털 원숭이, 마모셋, 개코원숭이 및 사이노몰거스 원숭이로부터 선택된다. 하나의 구현예에서 실험 동물은 마카카 (Macaca) 원숭이이다. 추가의 구현예에서 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 면역글로불린에 결합하지 않는 항체는 본원에 보고된 항체이다. 하나의 구현예에서 치료 항체는 인간 또는 인간화 항체이다. 추가의 구현예에서 인간 또는 인간화 항체는 단일클론 항체이다. 하나의 구현예에서 총 치료 항체가 검출되고, 또다른 구현예에서 활성의 치료 항체가 검출되고, 추가의 구현예에서 항원에 결합된 치료 항체가 검출된다.
본원에 보고된 또다른 양상은 항체가 본원에 보고된 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 실험 동물로부터 수득된 샘플 내 총, 활성의, 또는 항원-결합된 치료 항체의 농도를 측정하기 위한, 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 면역글로불린에 결합하지 않는 항체의 용도이다. 하나의 구현예에서 항체는 본원에 보고된 항체이다.
본원에 보고된 추가의 양상은 세포주 DSM ACC3006, 세포주 DSM ACC3007, 세포주 DSM ACC3008, 및/또는 세포주 DSM ACC2708 에 의해 생성된 항체의 혼합물을 포함하는 항체 조성물이다.
또한 양상은 본원에 보고된 방법에서의 본원에 보고된 항체 조성물의 용도이다.
M-R10Z8E9 로 표시되는 비-교차반응성 항-인간 IgG 항체 (세포주 DSM ACC2708 로부터 수득됨) 는 글리코실화 부위 Asn297 근처의 계열 G 의 인간 면역글로불린의 CH2 도메인 내 에피토프에 결합한다. 본원에 보고된 항체 M-1.3.2, M-1.5.8 및 M-1.7.10 은 항체 M-R10Z8E9 에 비해 감소된 교차-반응성을 보이고, Fab-영역 내 상이한 에피토프에 결합하고, 이웃하는 글리코실화 부위에 의해 영향을 받지 않고, 각각의 항체의 결합 부위가 Fab-절편에 존재하므로 치료 항체, 특히 Fab 치료 항체의 측정을 위한 면역검정법과 혼합될 수 있다.
"치료 항체" 라는 용어는 인간 치료제로서 승인받기 위한 임상 연구에서 시험되고 질환 치료를 위해 개인에게 투여될 수 있는 항체를 나타낸다. 하나의 구현예에서 치료 항체는 단일클론 항체이다. 추가의 구현예에서 치료 항체는 유인원으로부터 수득된 항체, 인간 항체 유전자좌로 형질전환된 동물로부터 수득된 항체, 인간 단일클론 항체, 또는 인간화 단일클론 항체로부터 선택된다. 하나의 구현예에서 치료 항체는 인간 단일클론 항체이다. 추가의 구현예에서 치료 항체는 인간화 단일클론 항체이다. 치료 항체는 다양한 질환, 예컨대 종양학적 질환 (예를 들어, 비-호지킨 림프종, 유방암, 및 결장직장암을 비롯한 혈액학적 및 고형 악성종양), 면역학적 질환, 중추 신경 질환, 혈관 질환, 또는 감염성 질환의 치료에 널리 사용된다. 이러한 항체는 예를 들어 CD20, CD22, HLA-DR, CD33, CD52, EGFR, G250, GD3, HER2, PSMA, CD56, VEGF, VEGF2, CEA, Levis Y 항원, IL-6 수용체 (IL6R), 또는 IGF-1 수용체 (IGF1R) 에 대항하는 항체이다.
"항체" 라는 용어는 전체 항체 및 항체 절편을 포함하는 항체 구조의 다양한 형태를 포함한다. 본원에 보고된 항체는 하나의 구현예에서 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 또는 T-세포 항원 고갈성 항체이다. 항체의 유전적 조작은, 예를 들어 문헌 [Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855; US 5,202,238 및 US 5,204,244; Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270; Lonberg, N., Nat. Biotechnol. 23 (2005) 1117-1125] 에 기재되어 있다.
비-인간 (예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 항체 및 인간 항체로부터 유래되는 일부 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분, 인간화 항체는 인간 항체 (수령체 항체) 로부터 유래되고, 과가변 영역으로부터의 잔기는 원하는 특이성 및 친화성을 갖는, 마우스, 래트, 토끼, 또는 비-인간 영장류와 같은 비-인간 종의 과가변 영역으로부터의 잔기 (공여체 항체) 로 대체된다. 일부 예에서, 인간 항체의 골격 영역 (FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 게다가, 인간화 항체는 추가의 개질, 예를 들어, 수령체 항체 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 개질은 상응하는 모 서열과 상동이나 일치하지 않는 이러한 수령체 또는 공여체 항체의 변이체를 산출한다. 이러한 개질은 항체 성능을 추가로 정련하기 위해 이루어진다.
일반적으로, 인간화 항체는 1 개 이상, 전형적으로는 2 개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이고, 과가변 루프의 모두 또는 실질적으로 모두는 비-인간 공여체 항체의 것에 상응하고, FR 의 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 수령체 항체의 것이다. 인간화 항체는 임의로 또한 항체 불변 영역의 적어도 일부, 전형적으로는 인간 항체의 것을 포함할 것이다.
비-인간 항체의 인간화 방법은 당업계에 기재되어 있다. 하나의 구현예에서 인간화 항체는 비-인간인 기원으로부터 내부로 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 상기 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "수입" 잔기로서 언급되고, 이것은 전형적으로는 "수입" 가변 도메인으로부터 채택된다. 인간화는 과가변 영역 서열을 비-인간 항체의 상응하는 서열로 치환함으로써 Winter 및 공동연구자의 방법을 따라 본질적으로 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화" 항체는 키메라 항체이고, 실질적으로 더 적은 미손상 인간 가변 도메인이 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열에 의해 치환된다. 실제로, 인간화 항체는 일부 과가변 영역 잔기 및 가능하게는 일부 골격 영역 잔기가 설치류 또는 비-인간 영장류 항체 중 유사 부위로부터의 잔기로 치환된, 전형적으로는 인간 항체이다.
본원에서 사용되는 "단일클론 항체" 라는 용어는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체가 적은 양으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생적 돌연변이를 제외하고는 일치하는 것을 말한다. 단일클론 항체는 고도로 특이적인, 단일 항원 부위에 대한 것이다. 게다가, 상이한 항원 부위 (결정소 또는 에피토프) 에 대항하는 상이한 항체를 포함하는 폴리클론 항체 제제와는 반대로, 각각의 단일클론 항체는 항원 상의 단일 항원 부위에 대항하는 것이다. 이들의 특이성 외에, 단일클론 항체는 다른 항체에 의해 비오염되어 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어 "단일클론" 은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득되는 것인 항체의 특성을 나타내고 임의의 특정 방법에 의한 항체의 제조를 요구하는 것으로서 해석되지 않는다.
본원에서 사용되는 "실험 동물" 이라는 용어는 마모셋 및 타마린 (칼리트리키다에 (Callitrichidae) 과), 신세계원숭이 (세비다에 (Cebidae) 과), 구세계 원숭이 (세르코피테시다에 (Cercopithecidae) 과, 예를 들어, 마카카 (Macaca) 원숭이), 꼬마여우원숭이 및 쥐여우원숭이 (케이로갈레이다에 (Cheirogaleidae) 과), 아이아이원숭이 (다우덴토니이다에 (Daubentoniidae) 과), 바늘발톱갈라고 및 갈라고 (갈라고니다에 (Galagonidae) 과), 긴팔원숭이 및 소형 유인원 (힐로바티다에 (Hylobatidae) 과), 인드리원숭이, 시파카, 및 친척 (인드리다에 (Indridae) 과), 참여우원숭이 (레무리다에 (Lemuridae) 과), 로리스원숭이 (로리다에 (Loridae) 과), 족제비리머 (메갈라다피다에 (Megaladapidae) 과), 안경원숭이 (타르시이다에 (Tarsiidae) 과) 를 포함하는 영장류 목의 과의 일원, 뿐 아니라 이들의 교배종을 나타낸다.
하나의 구현예에서 실험 동물은 마모셋 및 타마린, 구세계 원숭이, 꼬마여우원숭이 및 쥐여우원숭이, 긴팔원숭이 및 소형 유인원, 참여우원숭이의 과의 일원, 뿐 아니라 이들의 교배종을 포함하는 군으로부터 선택된다. 본 구현예에서 인류와 가장 가까운 친척, 유인원, 특히 침팬지, 난장이 침팬지 (bonobo), 고릴라 및 오랑우탄 군은 배제된다.
"샘플" 이라는 용어는 실험 동물로부터 제거된 임의의 조직 또는 액체 샘플을 나타낸다. 하나의 구현예에서 샘플은 액체 샘플, 예컨대 타액, 소변, 전혈, 혈장 또는 혈청일 것이다. 추가의 구현예에서 샘플은 전혈, 혈장 또는 혈청일 것이다.
"치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체" 는 적어도 10-9 mol/l 의 해리 상수 (=KDiss) 로, 또다른 구현예에서 적어도 10-10 mol/l 의 KDiss 로 치료 항체에 결합할 것이다. 동시에 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 특성은 10-7 mol/l 이하의 KDiss 에 의해 보장된다. 또한 하나의 구현예에서 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체는 실험 동물의 계열 G 의 면역글로불린에 대한 반응성과 계열 G 의 인간 또는 침팬지 면역글로불린에 대한 반응성 사이에 각각 적어도 100 배의 KDiss-갭을 가질 것이다.
일반적으로 "~ 에 결합하는" 이라는 용어는 항체가 그의 항원 또는 또는 상응하는 항체 수용체에 (어느 것이든 각각의 문맥에서 의도됨) 10-9 mol/l 이하의 해리 상수 (=KD =KDiss.) 로, 또다른 구현예에서 적어도 10-10 mol/l 의 KD 로 결합하는 것을 나타낸다. 동시에 결합하지 않는 특성은 10-7 mol/l 이상 (예를 들어, 10-5 mol/l) 의 KD 에 의해 보장된다. 또한 하나의 구현예에서 첫번째 항체에 결합하고 두번째 항체에 결합하지 않는 항체는 계열 G 의 첫번째 면역글로불린에 대한 반응성과 계열 G 의 두번째 면역글로불린에 대한 반응성 사이에 적어도 100 배의 KD-갭을 가질 것이다.
항체의 결합 특성, 특히 KDiss 는, 하나의 구현예에서 BIAcore® 기구 상의 표면 플라즈몬 공명에 의해 평가된다. 본 방법에서 결합 특성은 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 의 변화에 의해 평가된다. 항체를 연구시 고체 상 (칩이라고 부름) 에 결합시키고 단일클론 항체, 폴리클론 항체의 또는 심지어 IgG 를 포함하는 혈청의 상기 코팅된 칩에 대한 결합을 평가하는 것이 통상적이다.
연구 중 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체는 단일클론 항체, 상기 항체의 절편, 뿐 아니라 상기 항체의 결합 도메인을 포함하는 유전적 구축물일 수 있다. 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 상기 기준을 보유하는 임의의 항체 절편이 사용될 수 있다.
실험 동물에서 치료 항체의 적용과 관련된 다양한 양상은 전임상 연구 동안 평가되어야 할 것이다. 특정 설정에서, 존재하는 치료 항체의 총 양을 분석하는 것이 적절할 수 있거나, 또는 치료 항체의 특정 절편, 또는 치료 항체의 특정 개질, 또는 항원에 결합된 치료 항체의 농도, 또는 항원에 여전히 결합할 수 있는 치료 항체의 분획을 분석하는 것이 중요할 수 있다. 하나의 구현예에서 본원에 보고된 항체 및 방법은 총, 활성의, 또는 항원-결합된 치료 항체를 각각 검출하는데 사용될 수 있다.
"총 치료 항체" 라는 용어는 항체가 활성인지 (즉, 그의 항원과 여전히 반응성인), 비활성인지 및/또는 항원-결합된 것인지와 관계없이 검출된 임의의 항체를 나타낸다.
"활성의 치료 항체" 라는 용어는 그의 항원에 여전히 결합할 수 있는 실험 동물에 존재하는 치료 항체를 나타낸다. 이러한 항체는 예를 들어, 그의 항원 결합 부위에서 그의 항원 또는 임의의 기타 분자가 결합되지 않았다.
"항원-결합된 치료 항체" 라는 용어는 그의 항원에 결합된 실험 동물의 순환에 존재하는 치료 항체를 나타낸다.
상기 정의된 총, 활성의, 또는 항원-결합된 치료 항체는 본원에 보고된 방법에서 그리고 항체로 직접 검출될 수 있다. 부가적으로 다른 형태의 비-활성의 치료 항체, 예컨대 항-약물 항체 또는 항-유전자형 항체 또는 특히 중화 항-약물 항체에 의해 결합된 치료 항체를 검출하는 것이 가능하다.
또한, 임의의 "비활성의 치료 항체" 를 간접적으로 평가하는 것도 가능하다. 이러한 비활성의 치료 항체는 예를 들어, 그의 항원에 결합된 치료 항체, 또는 교차반응성 항원에 결합된 치료 항체, 또는 치료 항체에 대항하는 자가 또는 항-유전자형 항체에 의해 차단된 치료 항체일 수 있다. 총 항체의 양이 활성의 항체 및 항원-결합된 항체의 합을 초과하는 경우, 그의 상응하는 항원에 결합되지 않은 비활성의 항체를 포함하는 항체의 부가적인 분획이 존재할 것이다.
총 치료 항체는 예를 들어, 소위 경쟁적 면역검정법 시스템 또는 소위 샌드위치 유형 검정법 시스템에서 검출될 수 있다. 이러한 검정법은 하나의 구현예에서 세정 단계 없이 (동종 면역검정법) 또는 또다른 구현예에서 세정 단계를 포함하여 (이종 면역검정법) 수행될 수 있다.
하나의 구현예에서 총 치료 항체는 샌드위치 유형 면역검정법에서 검출되며, 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체가 이러한 샌드위치 검정법의 양 면에서 사용된다. 이러한 샌드위치의 한 면에서 사용되는 항체는 고체 상 (종종 포획 항체로서 언급됨) 에 결합되거나 이에 결합할 수 있는 반면, 이러한 샌드위치의 다른 면에서의 항체는 직접 또는 간접 검출이 이용되는 (소위 검출 항체) 방식으로 표지된다. 이러한 샌드위치 검정법 절차에서 결합된 검출 항체의 양은 조사되는 샘플 내 치료 항체의 양과 직접 연관된다.
샘플 내 활성의 치료 항체의 검출은 통상의 당업계 절차에 의해 달성될 수 있다. 그러나, 총 치료 항체 또는 그의 항원에 결합된 치료 항체의 분획의 검출은 다소 복잡하고 꽤 상이한 검정법 셋업을 필요로 하고 특히 각각의 상이한 검정법에 대한 맞춤 제작된 시약을 필요로 한다. 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 본원에 보고된 항체로, 서로 유사한 시험 시스템에서 활성의 치료 항체, 총 치료 항체, 또는 항원-결합된 치료 항체의 분획을 평가하는 것이 가능하다. 총, 활성의, 또는 항원-결합된 치료 항체의 상기 종류의 비교 평가는 일단 상기 다양한 분획의 치료 항체 사이에서 양적 비교가 이루어졌다면 장점을 가져야만 한다.
하나의 구현예에서 샌드위치 유형 검정법 형식은 활성의 치료 항체를 검출하기 위해 셋업된다. 추가의 구현예에서 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체는 포획 항체로서 사용되고, 이러한 샌드위치 검정법의 검출 면은 표지된 형태의 항원을 사용하거나 항원의 결합 후 치료 항체에 의해 인지된 에피토프에 결합하지 않거나 이와 경쟁하는 두번째 항체를 사용하고, 두번째 항체는 직접 또는 간접 검출이 용이한 방식으로 특이적으로 검출가능하고 및/또는 표지된다.
항원-결합된 치료 항체는 하나의 구현예에서 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체를 포획 시약으로 사용하는 샌드위치 유형 검정법 형식에서 검출된다. 검출시 하나의 구현예에서 두번째 항체는 치료 항체의 에피토프와 경쟁하지 않는 에피토프에서 항원에 대한 결합에 사용된다. 두번째 항체는 하나의 구현예에서 직접 또는 간접 검출이 용이한 방식으로 표지된다.
직접 검출을 위해 표지기는 임의의 공지된 검출가능 마커 기, 예컨대 염료, 발광 표지기, 예컨대 화학발광기, 예를 들어, 아크리디늄 에스테르 또는 디옥세탄, 또는 형광 염료, 예를 들어, 플루오레세인, 코우마린, 로다민, 옥사진, 레조루핀, 시아닌 및 이의 유도체로부터 선택될 수 있다. 표지 기의 다른 예는 발광 금속 착물, 예컨대 루테늄 또는 유로퓸 착물, 효소, 예를 들어 ELISA 또는 CEDIA (Cloned Enzyme Donor Immunoassay) 에 사용되는 것, 및 방사능동위원소이다. 전기화학발광에 의해 검출될 수 있는 금속 킬레이트는 또한 하나의 구현예에서 검출가능한 표지로서 사용되는 신호-방출기이고, 루테늄 킬레이트가 특히 바람직하다. 하나의 구현예에서 표지 기는 루테늄 (비스피리딜)3 2+ 킬레이트이다.
직접 검출 시스템은 예를 들어, 결합 쌍의 첫번째 파트너로 표지된 검출 시약, 예를 들어, 검출 항체를 포함한다. 적합한 결합 쌍의 예는 합텐 또는 항원/항체, 비오틴 또는 비오틴 유사체, 예컨대 아미노비오틴, 이미노비오틴 또는 데스티오비오틴/아비딘 또는 스트렙타비딘, 당/렉틴, 핵산 또는 핵산 유사체/상보성 핵산, 및 수용체/리간드, 예를 들어, 스테로이드 호르몬 수용체/스테로이드 호르몬이다. 하나의 구현예에서 첫번째 결합 쌍 일원은 합텐, 항원 및 호르몬으로부터 선택된다. 하나의 구현예에서 합텐은 디곡신 및 비오틴 및 이의 유사체로부터 선택된다. 이러한 결합 쌍의 두번째 파트너, 예를 들어, 항체, 스트렙타비딘 등은 통상적으로 예를 들어, 상기 언급된 바와 같은 표지에 의해 직접 검출을 허용하도록 표지된다.
모든 상기 면역학적 검출 방법에서 시약 조건은 예를 들어, 항체의 그의 상응하는 항원에 대한 결합을 위해 사용되는 시약의 결합을 허용하도록 선택된다. 당업자는 용어 복합체를 사용함으로써 이러한 결합 사건의 결과를 언급한다. 본원에 보고된 검정법 방법에서 형성된 복합체는 당업계의 절차에 의해 치료 항체의 상응하는 농도와 연관성이 있다. 이러한 연관성은 예를 들어, 본원에 보고된 방법으로 상응하는 복합체의 연속 희석 중 복합체를 제조 및 측정함에 의해 그리고 수득되는 결과를 개별적인 복합체 성분의 농도와 연관지음으로써 이루어질 수 있다. 사용되는 검출 시약에 따라 상기 연관 단계는 총, 활성의, 또는 항원-결합된 치료 항체의 농도를 산출할 것이다.
당업자가 인지하듯이 본원에 보고된 방법은 총, 항원-결합된, 활성의 또는 심지어 불활성의 치료 항체의 농도를 밝히기도 할 것이다. 하나의 및 동일한 시약, 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체의 사용으로 인해, 상이한 검정법에서 수득되는 값은 서로 쉽게 비교되고 심지어 이의 비가 평가될 수 있다. 추가의 구현예에서 본 방법은 활성 대 총 치료 항체의 비에 관한 것이다. 상기 비는 치료 항체의 효율에 대한 지표로서 잘 담당할 수 있다.
실험 과정 동안, 계열 G 의 인간 및 침팬지 항체의 모든 계열 상에 존재하는 하나 이상의 에피토프(들) 가 임의의 실험 동물의 항체 상에 존재하지 않는다는 것이 발견되었다. 상기 에피토프(들) 는 수탁된 세포주 DSM ACC3006, DSM ACC3007, DSM ACC3008 에 의해 생성된 항체에 대한 결합을 특징으로 한다. 그러므로 세포주 DSM ACC3006, 또는 DSM ACC3007, 또는 DSM ACC3008 에 의해 생성된 항체가 본원에 기재된 하나의 양상이다.
상기 3 개의 수탁된 세포주에 의해 인지된 에피토프(들) 가 항체의 Fab 영역에서 독특하므로 본원에 보고된 또다른 양상은 수탁된 세포주 DSM ACC3006, DSM ACC3007, DSM ACC3008 로부터 수득된 항체에 결합하는 에피토프(들) 이다. 본원에 보고된 하나의 양상에서, 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체는 항체가 세포주 DSM ACC3006, DSM ACC3007 및 DSM ACC3008 에 의해 생성된 항체 중 하나와 동일한 에피토프에 결합하는 항체라는 것을 특징으로 한다.
예를 들어, 동일한 표적 항원에 결합하는 2 개의 항체의 에피토프 중복이 경쟁 시험 시스템의 도움으로 측정되는 방법이 사용될 수 있다. 상기 목적을 위해, 예를 들어 효소 면역검정법의 도움으로, 예를 들어, 본원에 보고된 세포주 중 하나에 의해 생성된 항체를 사용하여, 의문의 항체가 부동화된 표적 항원에 대한 결합에 대해 공지된 항체가 경쟁하는 범위를 시험한다. 상기 목적을 위해, 적합하게 부동화된 표적 항원을 표지된 형태의 공지된 항체 및 과량의 의문의 항체와 인큐베이션한다. 결합된 표지를 검출함으로써, 의문의 항체가 공지된 항체를 결합으로부터 대체할 수 있는 범위를 쉽게 알아낼 수 있다. 동일한 농도에서 20 % 초과의, 또다른 구현예에서 30 % 초과의 대체가 있는 경우, 또는 고 농도에서 70 % 초과의 대체, 또다른 구현예에서 80 % 초과의 대체가 있는 경우, 하나의 구현예에서 공지된 항체로 언급되는 의문의 항체의 103-105 배 초과의 경우에서, 에피토프 중복이 존재하고 두 항체는 동일한 에피토프의 동일 또는 중복 부분에 결합한다.
수탁된 세포주 DSM ACC3006, DSM ACC3007, 및 DSM ACC3008 로부터 수득된 항체의 특이성은 상이한 종으로부터의 각각의 항체 및 혈청의 각각의 비오티닐화 및 디곡시게닐화 변이체를 사용하는 샌드위치-ELISA 에서 제시될 수 있다. 검정법에서 (도 1 참조), 포획 및 검출 항체는 일치하는 에피토프에 결합하는 동일한 세포주로부터 수득된다. 실험 동물의 혈청 내 인간 IgG 의 검출 및 정량화를 위한 일반적으로 적용되는 검정법이 되기 위해, 이러한 검정법은 결합 부위가 임의의 이차 항체 개질, 예컨대 글리코실화 또는 탈아미드화와 독립적인 항-인간 IgG 항체를 필요로 한다. 다르게는 검출되고 정량되는 각각의 신규 치료 항체에 대해 검정법을 최적화하는 것이 필요할 것이다. 게다가 각각의 본원에 보고된 항-인간 IgG 항체는 또한 분석된 치료 항체와 상이하고, 참조 표준 및 양성 대조군으로서 사용될 수 있다. 상기 검정법으로 수득된 특이성 결과는 도 2 에 제시된다.
본원에 보고된 항체가 면역글로불린 계열 G 의 인간 및 침팬지 면역글로불린에 대해 고도로 특이적이고 항체 M-R10Z8E9 보다 양호한 특이성을 나타내고 실험 동물의 계열 G 의 면역글로불린과 결합하지 않는다는 것을 볼 수 있다. 실험 동물의 모든 값은 존재하는 페록시다아제 없이 ABTS 로 수득되는 빈칸 값의 미만이다.
본원에 보고된 항체의 특이성은 또한 BIAcore 기술을 사용하는 표면 플라즈몬 공명 실험에서 제시될 수 있다. 도 3 a) 내지 c) 에서 항체 M-1.7.10 (DSM ACC3008 로부터 수득됨), M-1.3.2 (DSM ACC3006 으로부터 수득됨), 및 M-1.5.8 (DSM ACC3007 로부터 수득됨) 의 BIAcore 다이아그램이 제시되고 이것으로부터 항체가 계열 G 의 인간 및 침팬지 면역글로불린에 특이적이라는 것을 볼 수 있다.
닷-블롯 실험을 사용함으로써, 본원에 보고된 항체에 의해 결합된 에피토프(들) 는, 결합이 상실된 변성된 인간 면역글로불린이므로 형태적 에피토프라는 것을 보여준다 (도 4).
본원에 보고된 또다른 양상은 포획 항체로서 본원에 보고된 비오티닐화 항체 및 추적 항체로서 본원에 보고된 디곡시게닐화 항체를 포함하는 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 인간 항체 또는 이의 유도체, 예컨대 Fab-절편을 정량화하기 위한 검정법이다. 도 5 에서 본원에 보고된 예시 항체로의 상기 검정법에 대한 도식 검정법 셋업 및 교정 곡선이 제시된다 (포획 항체: 비오티닐화 M-1.7.10, 분석물: 인간 항-IL13Rα1 항체의 Fab-절편, 추적 항체: 디곡시게닐화 M-1.3.2). 상기 검정법은 2 개의 상이한 에피토프 상의 인간 IgG 의 Fab 절편에 결합하는 포획 및 추적 항체를 필요로 한다. 본원에 보고된 항체는 면역글로불린 계열 G 의 인간 또는 침팬지 항체의 불변 경쇄 도메인에 적어도 부분적으로 결합하므로 본 검정법에 적합하다.
본원에 보고된 또다른 양상은 인간 IgG 의 상이한 도메인 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 포획 및 추적 항체를 포함하는 검정법이다. 본 검정법에서, 오직 미손상 치료 항체만이 양성 검정법 결과 및 검출가능한 신호를 야기할 것이다. 하나의 구현예에서 포획 항체 및 추적 항체는 한편으로는 본원에 보고된 항체 및 다른 한편으로는 항체 M-R10Z8E9 로부터 독립적으로 선택된다. 본 양상에 따른 예시적 검정법에서 실험 동물에서 인간 IgG 의 구조적 통합성을 입증하기 위해 포획 항체로서 비오티닐화 M-R10Z8E9, 분석물로서 항-IL13Rα1 항체, 및 추적 항체로서 디곡시게닐화 M-1.3.2 를 사용한다 (도 6 에서, 상기 검정법에 대한 도식적 검정법 셋업 및 교정 곡선이 제시된다).
본원에 보고된 추가의 양상은 항-인간 IgG 항체가 항-약물 항체 (ADA) 를 모방하기 위한 참조 표준 및/또는 양성 대조군으로서 사용되는 검정법이다. 이것은 검정법의 최적 검정법 조건 및 시험 견고성을 발견하기 위해, 즉, 상이한 표준 시약/양성 대조군으로 검정법 성능을 체크하기 위해 검정법 개발 동안 유용할 수 있다. 특히 유리한 것은 ADA 가 폴리클론일 것이고 아마도 Fab 절편 및 Fc 부분 모두에 대항하는 것이라는 사실의 관점에서 상기 셋업이다.
본원에 보고된 추가의 양상에서, 세포주 DSM ACC3006, DSM ACC3007, 및 DSM ACC3008 로부터 수득된 항체 중 하나는 본원에 언급된 방법에서 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체로서 사용된다.
본원에 보고된 추가의 양상은 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 총, 활성의, 또는 항원-결합된 치료 항체의 농도를 측정하기 위한 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 항체의 용도에 관한 것이다. 하나의 구현예에서 상기 방법에 사용되는 항체는 세포주 DSM ACC3006, DSM ACC3007, 또는 DSM ACC3008 로부터 수득된 항체 중 하나에 의해 인지되는 동일한 또는 중복 에피토프에 결합하는 항체로부터 선택된다.
본원에 보고된 추가의 양상은 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 총, 활성의, 또는 항원-결합된 치료 항체의 농도를 측정하기 위한 모두, 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 항체에 결합하지 않는 2 개의 항체의 용도에 관한 것으로, 상기 항체 중 하나는 포획 항체이고, 항체 중 하나는 추적 항체이다. 하나의 구현예에서 치료 항체는 Fab 절편이다.
대안적으로는 본원에 보고된 항체는 하나의 부분으로서 단일 면역글로불린 계열의 참조 면역글로불린을 포함하는 공액체에 사용될 수 있다. 참조 면역글로불린은 항-면역글로불린-계열 항체, 예컨대 항-인간-면역글로불린-G 항체에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 면역글로불린 계열 특이적 불변 영역을 제공한다. 그러므로, 참조 면역글로불린은 태그 특이적 항체에 의해 특이적으로 확인될 수 있는 면역글로불린 계열 특이적 태그를 갖는 공액체와 같이 제공된다. 예를 들어, 태그가 면역글로불린 G 불변 영역인 경우 태그 특이적 항체는 항-면역글로불린-G 항체이다. 이러한 공액체는 면역검정법에서 표준으로 또는 면역검정법에서 양성 대조군으로 사용될 수 있다.
본원에 보고된 방법에서 또한 상이한 포획 분자가 완전한 항체, F(ab')2 절편, Fab 절편 또는 심지어 단일 사슬 항체와 같이 사용될 수 있다.
본원에 보고된 바람직한 하이브리도마 세포주인, 각각 항체 M-1.3.2, M-1.5.8, 및 M-1.7.10 을 발현하는 MAK<H-IgG>M-1.3.2, MAK<H-IgG>M-1.5.8, MAK<H-IgG> M-1.7.10 을, 특허 절차 미생물 수탁에 대한 국제적 승인을 위한 부다페스트 조약 (Budapest Treaty) 에 의해 독일생물자원센터 [Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Germany] 에 수탁하였다:
Figure 112012030925736-pct00001
세포주 및 상기 세포주로부터 수득가능한 항체가 본원에 보고된 양상이다.
본원에 보고된 방법은 WO 2006/072564 호에 보고된 IL13 수용체 α1 단백질에 대항하는 항체 (항-IL13Rα1 항체), WO 2005/023872 호에 보고된 IL-1R 수용체에 대항하는 항체 (항-IL1R 항체), WO 2003/070760 호 또는 US 2005/0169925 호에 보고된 아밀로이드 β-A4 펩티드에 대항하는 항체 (항-Aβ 항체), WO 2005/100402 호 또는 US 2005/0226876 호에 보고된 인간 P-셀렉틴 당단백질에 대항하는 항체 (항-P 셀렉틴 항체), WO 2004/096274 호에 보고된 IL-6 수용체에 대항하는 항체 (항-IL6R 항체), 및 WO 2004/087756 호 또는 WO 2005/005635 호에 보고된 IGF-1 수용체에 대항하는 항체 (항-IGF1R 항체) 로 예증된다 (모두 참조로서 본원에 인용됨).
하기 실시예 및 도면은 본 발명의 이해를 돕기 위해 제공되며, 이의 참 범주는 특허청구범위에 언급된다. 본 발명의 취지로부터 벗어남 없이 언급된 절차를 개질할 수 있는 것으로 이해된다.
도면의 간단한 설명
도 1 실험 동물 내 인간 항체 (인간 IgG) 의 정량화를 위한 전체적 일반 검정법: a) 검정법 형식; b) 포획 및 검출 시약: 항체 M-R10Z8E9; c) 포획 및 검출 시약 항체 M-1.7.10; 치료 항체: 흰색 삼각형: 항-IL13Rα1 항체, 흰색 사각형: 항-Abeta 항체, 검은색 사각형: 항-IL1R 항체, 검은색 삼각형 항-IL6R 항체.
도 2 본원에 보고된 항체를 사용하는 검정법으로 수득된 결과; 좌에서 우 방향으로 사용된 항체: M-R10Z8E9, M-1.3.2, M-1.5.8, M-1.7.10.
도 3 본원에 보고된 항체 a) M-1.3.2, b) M-1.5.8, 및 c) M-1.7.10 의 예시적 표면 플라즈몬 표면 공명 다이아그램.
도 4 항-인간 IgG 항체의 닷 블롯; 예시적 참조 항체로서 P-셀렉틴에 대항하는 항체가 선택된다; 참조 항체를 니트로셀룰로오스 멤브레인 상에 고유의 (좌측 열) 및 변성된 (우측 열) 형태로 점으로 찍고, 각각의 디곡시게닐화 항-인간 IgG 항체에 의해 검출된다; a) M-R10Z8E9, b) M-1.3.2, c) M-1.5.8, d) M-1.7.10.
도 5 실험 동물로부터 수득된 샘플 내 인간 항체 유도체의 정량을 위한 검정법: a) 도식적 검정법 셋업, b) 교정 곡선.
도 6 실험 동물에서 인간 IgG 의 구조적 통합을 입증하기 위한 검정법: a) 도식적 검정법 셋업, b) 교정 곡선.
도 7 사이노몰거스 원숭이 혈청에 대해 검출가능한 교차-반응성이 없는 항체의 선별.
실시예 1
인간 IgG 의 F( ab' ) 2 절편 (면역원) 의 제조
100 mM 나트륨 시트레이트 완충액 (pH 3.7) 중의 계열 G (인간 IgG) 의 전장 인간 항체를 펩신 (IgG mg 당 1 ㎍ 펩신) 으로 인큐베이션하였다. 분석적 겔 여과에 의해 절편을 분석하고, 인산칼륨의 첨가에 의해 pH 값을 6.5 로 조정함으로써 90 분 후 중지하였다. 10 mM 염화나트륨 (pH 5.5) 이 있는 10 mM 나트륨 시트레이트 완충액에 대항하여 혼합물을 투석한 후, 용액을 SP-세파로오스 크로마토그래피 컬럼에 적용하였고, 염 구배로 용리된 단리된 분획을 분석적 겔 여과에 의해 개별적으로 분석하였다. 항체 F(ab')2 절편을 함유하는 집단을 미량의 Fcγ 절편을 제거하기 위해 인간 Fcγ 에 대항하는 부동화된 폴리클론 항체가 있는 친화성 매트릭스에 적용하였다. 관통액 (flow through) 을 모으고, 약 16 mg/ml 로 농축하고, 최종적으로 겔 여과 컬럼 (Superdex 200) 에 적용하였다.
실시예 2
단일클론 항-인간 IgG 항체의 생성
a) 마우스의 면역화
8-12 주령의 암컷 NMRI 마우스를 각각 CFA (Complete Freund's Adjuvant) 와 혼합된 실시예 1 에 따라 제조된 100 ㎍ 의 항체 F(ab')2 절편으로 복강 내로 일차적으로 면역화하였다. 6 및 10 주 후 2 회의 추가의 복강내 면역화 단계를, 각각 마우스 당 IFA (Incomplete Freund's adjuvant) 와 혼합된 100 ㎍ 의 항체 F(ab')2 절편으로 후속하였다. 이어서, 정맥 부스트 면역화를 융합 3 일 전에, 각각 PBS (인산염 완충 식염수) 중 50 ㎍ 의 항체 F(ab')2 절편으로 수행하였다.
b) 융합 및 클로닝
a) 에 따라 면역화된 마우스의 비장 세포를 Galfre and Milstein (Galfre, G. and Milstein, C, Methods Enzymol. 73 (1981) 3-46) 에 따라 골수종 세포와 융합시켰다. 대략 2.1 × 108 의 비장세포를 4.2 × 107 골수종 세포 (P3x63-Ag8.653, ATCC CRL1580) 와 혼합하고, 원심분리하였다 (10 분, 300 × g 및 4℃). 이후 세포를 FCS (송아지 태아 혈청) 가 없는 배양 배지 RPMI 1640 로 1 회 세정하고, 50 ml 뾰족한 바이알에서 400 × g 로 다시 원심분리하였다. 그 다음, 1 ml 의 PEG (폴리(에틸렌 글리콜), 분자량 4,000 g/mol) 를 첨가하고, 파이펫팅에 의해 혼합하였다. 1 분 후. 37℃ 의 수조에, FCS 가 없는 5 ml 의 RPMI 1640 을 적가하고, 현탁액을 혼합하고, 10 % (v/v) FCS 가 있는 RPMI 1640 를 최종 부피 50 ml 까지 첨가한 다음, 원심분리하였다. 침강된 세포를 10% FCS 가 있는 RPMI 1640 에 재현탁하고, 성장 인자 재조합 쥣과 인터류킨 6 (Peprotech, 0.5 ng/ml) 을 함유하는 하이포잔틴-아자세린 선별 배지 (10% FCS 를 함유하는 RPMI 1640 중 100 mmol/l 하이포잔틴, 1 ㎍/ml 아자세린) 에 플레이팅하였다. 11 일 후, 일차 배양물을 특이적 항체 합성에 대해 검정하였다 (실시예 3 참조). 비오티닐화 항체 F(ab')2 절편 뿐 아니라 비오티닐화 인간 정상 IgG 에 대한 결합을 나타내는 일차 배양물을 성장 인자 재조합 쥣과 인터류킨 6 (Peprotech, 0.5 ng/ml) 을 함유하는 배지에 유세포 측정기 (FACSAria, BD Biosciences) 를 사용하여 96 웰 세포 배양 플레이트 내로 단일 세포 침전물에 의해 개별화하였다. 상기 프로토콜에 따라, 세포주 DSM ACC3006, DSM ACC3007, 및 DSM ACC3008 을 수득하였다. 항체 M-1.7.10 은 IgG2a 계열의 것이고, 항체 M-1.5.8 및 M-1.3.2 은 IgG1 계열의 것이다.
c) 면역글로불린의 제조
b) 에서 수득된 하이브리도마 세포주를 10% FCS, 및 통상적으로 사용되는 보충물이 보충된 RPMI 1640 중 ml 당 1.0 × 105 내지 2.2 × 105 세포의 초기 세포 밀도 (살아있는 세포) 로 접종하였고, T-플라스크 (Celline, IBS) 에서 대략 3 주 기간 동안 팽창시켰다. 수확된 배양 상청액에서, 0.7 mg/ml 내지 1.5 mg/ml 의 단일클론 항체 농도가 수득되었다. 배양 상청액으로부터 항체의 정제를 예를 들어, 문헌 [Bruck, C., et al., Methods Enzymol. 121 (1986) 587-596] 에 보고된 것과 같은 표준 단백질 화학 방법에 따라 수행하였다.
실시예 3
항-인간 IgG 항체의 검출을 위한 스크리닝 검정법
a) 인간 IgG 에 결합하는 항체에 대한 일차 스크리닝
하이브리도마 세포의 배양 상청액 중의 항체의 특이성의 측정을 위해, 재조합 스트렙타비딘 (MicroCoat, Bernried, 로트 MC 1098) 으로 미리 코팅된 MTP (마이크로역가 플레이트) 를, 1 % (w/v) BSA II 가 보충된 PBS 에서, 면역화 공정에 사용되는 비오티닐화 인간화 IgG, 250 ng/ml, 또는 비오티닐화 인간 IgG, 250 ng/ml 각각으로 코팅하고 (웰 당 100 ㎕, 주위 온도에서 60 분 인큐베이션, 진탕하면서), 이어서 0.9% (w/v) NaCl / 0.05 % Tween® 20 으로 3 회 세정하였다. 다음 단계에서, 웰 당 검정되는 항체 용액 100 ㎕ (배양 상청액) 을 첨가하고, 진탕하면서 주위 온도에서 60 분 동안 인큐베이션하였다. 웰 당 0.9 % (w/v) NaCl / 0.05 % Tween® 20 으로 3 회 세정 단계 후, 100 ㎕ 의 폴리클론 양 항-마우스 Fcγ 항체의 호스래디쉬 퍼옥시다제-표지된 F(ab')2 절편을, 결합된 샘플 항체의 검출을 위해 첨가하였고, 주위 온도에서 60 분 동안 진탕하면서 인큐베이션하였다. 이어서, 세정을 상기와 같이 수행하였다. 마지막으로, 웰 당 100 ㎕ 의 ABTS® (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany; 카탈로그 번호. 1684302) 를 첨가하였다. 주위 온도에서 30 분 인큐베이션 후, 소거 (OD) 를 시판 마이크로역가 플레이트 ELISA Reader 에서 405 및 492 nm [405/492] 에서 측정하였다. 상기 스크리닝은 인간화 IgG 뿐 아니라 인간 IgG 에 잘 결합하는 항체의 선별을 야기하였다. 항체의 선별은 검정법 b) 에 추가로 적용되었다.
b) 다른 종의 IgG 에 대한 최소 교차-반응성을 갖는 항체의 선별
비오티닐화 인간 IgG 는 첫번째 단계에서 스트렙타비딘-코팅된 마이크로역가플레이트 (SA-MTP) 의 웰에 결합하였다. 과량의 비결합된 항체를 세정에 의해 제거하였다. 이후 샘플 및 참조 표준 (예를 들어, 실시예 2 로 수득된 항-인간 IgG 항체) 을 완충액 및 10% 사이노몰거스 원숭이 혈청에 희석하였다. 희석된 샘플을 플레이트에 첨가하고, 60 분 동안 주위 온도에서 진탕하면서 인큐베이션하였다. 비결합된 기질을 세정하여 제거한 후, 디곡시게닐화 형태의 첫번째 단계의 인간 IgG 를 플레이트의 웰에 첨가하고 추가 60 분 동안 인큐베이션하였다. 세정 후, 결합된 디곡시게닐화 항체를 항-디곡시게닌 항체-HRP 공액체로 검출하였다. 항체-효소 공액체의 HRP (호스래디쉬 퍼옥시다제) 는 ABTS 기질의 색상 반응을 촉매화한다. 신호를 405 nm 파장 (참조 파장: 490 nm) 에서 ELISA 판독기에 의해 측정한다. 각각의 혈청 샘플의 흡광도 값을 삼중으로 측정하였다.
사이노몰거스 원숭이 혈청 뿐 아니라 완충액에서 높은 검정법 응답을 보이는 항체를 선별하였다 (도 7 참조). 상기 두번째 스크리닝은 다른 종의 IgG 에 비해 최소 교차-반응성을 갖는 인간 IgG 에 대한 항체 결합 웰의 선별을 야기하였다.
실시예 4
표면 플라즈몬 공명에 의한 항체 결합/특이성의 평가
CM5-칩을 사용하는 BIAcore® T100 기구로 모든 측정을 수행하였다. 항체로의 상기 칩의 코팅은 표준 아민 커플링에 의해 달성되었다. 다르게 표시되지 않는다면, 모든 인큐베이션을 HBS-완충액 (HEPES, NaCl, pH 7.4) 중의 25℃ 에서 수행하였다. 폴리클론 염소 항-마우스 Fc-감마 항체의 포화량은 CM5-칩 상의 하나의 유 세포 상의 아민 커플링에 의해 부동화되었다. 이어서, 인간 IgG 에 대항하는 상이한 단일클론 마우스 항체를 30 ㎕/분의 유속으로 60 초 동안 주입하였고, 항 마우스 Fc 항체에 의해 결합되었다. 모든 동물 혈청을 HBS 완충액에 희석하였다. 30 ㎕/분의 유속에서 100 중 1 로 희석된 혈청의 주입 및 60 초 동안의 인큐베이션에 의해 결합을 분석하였다. HBS 완충액으로 180 초 동안 칩 표면을 세정함으로써 해리를 측정하였다. BIAcore® 의 BIAevaluation Software 를 사용하여 해리 상수 값 (=KD) 을 1:1 Langmuir 피팅 모델로 계산하였다. 모든 동물 혈청에 대해 상기 계산은 IgG 수준이 15 mg/ml 라는 가정을 근거로 하였다. 시험 항체 주입 시작 80 초 후 신호 값을 결합된 IgG 의 양의 비교를 위해 선택하였다 (표 1 참조).
표 1: 상이한 단일클론 항-인간 IgG 항체에 대한 동물 혈청의 결합에 대한 결합 신호 [RU] 및 KD-값.
Figure 112012030925736-pct00002
Figure 112012030925736-pct00003
표 1 은 3 개의 항-인간 IgG 항체가 침팬지를 제외한 다른 종으로부터의 혈청과 교차반응하지 않는 것을 나타낸다. 반대로, M-R10Z8E9 의 경우 개 및 마모셋으로부터의 혈청과 부가적인 상호작용이 검출되었다.
실시예 5
a) 마우스 단일클론 항-인간 IgG 항체의 정제
실시예 2 에서 수득된 세포주의 발효 상청액을 약 10 배 농축하고, 20 mM TRIS, 1 M 암모늄 술페이트 (pH 9.0) 가 있는 완충액으로 옮기고, 단백질 A-세파로오스 크로마토그래피 컬럼에 적용하였다. 0.2 M 나트륨 시트레이트, 0.2 M 암모늄 술페이트 (pH 5.0) 로 수득된 용리액을 인산염 완충액 (pH 7.5) 에 대항하여 투석하였다. 소 IgG (발효 브로스 중 FCS 로부터) 의 오염물을 소 IgG 에 대항하는 부동화 항체로의 면역흡착에 의해 분리하였다.
b) 비오티닐화 항-인간 IgG 항체의 제조
인산염 완충액 (pH 8.5) 중의 a) 에서 수득된 항-인간 IgG 항체를 약 5 mg/ml 의 단백질 농도로 조정하였다. D-비오티노일-아미노카프로산-N-히드록시숙신이미드를 DMSO 에 용해하고, 1:5 의 몰 비로 항체 용액에 첨가하였다. 60 분 후 L-라이신을 첨가함으로써 반응을 중지시키고, 과잉의 표지화 시약을 150 mM NaCl (pH 7.5) 을 함유하는 50 mM 인산칼륨 완충액에 대항하는 투석에 의해 제거하였다.
c) 디곡시게닐화 항-인간 IgG 항체의 제조
인산염 완충액 (pH 8.5) 중의 a) 에서 수득된 항-인간 IgG 항체를 약 5 mg/ml 의 단백질 농도로 조정하였다. 디곡시게닌 3-O-메틸카르보닐-ε-아미노카프로산-N-히드록시숙신이미드를 DMSO 에 용해하고, 1:4 의 몰 비로 항체 용액에 첨가하였다. 60 분 후 L-라이신을 첨가함으로써 반응을 중지시키고, 과잉의 표지화 시약을 150 mM NaCl (pH 7.5) 을 함유하는 50 mM 인산칼륨 완충액에 대항하는 투석에 의해 제거하였다.
실시예 6
실험 동물로부터의 샘플 내 인간 항체 (인간 IgG ) 의 정량화를 위한 전체적 일반 검정법
비오티닐화 항체 M-R10Z8E9 (플레이트 1) 또는 항체 M-1.7.10 (플레이트 2) 은 첫번째 단계에서 스트렙타비딘-코팅된 마이크로역가 플레이트 (SA-MTP) 에 결합하였다. 과량의 비결합된 항체를 세정에 의해 제거하였다. 사이노몰거스 원숭이 혈청에서 급등한 샘플/표준, 예를 들어, 항-IL1R 항체, 항-IL13Rα1 항체, 항-Abeta 항체 및 항-IL6R 항체를 연속 농도로 플레이트에 첨가하고 60 분 동안 주위 온도에서 진탕하면서 인큐베이션하였다. 비결합된 항체를 세정하여 제거한 후, 100 ㎕ 디곡시게닐화 항체 M-R10Z8E9 (플레이트 1) 또는 항체 M-1.7.10 (플레이트 2) 를 플레이트에 첨가하였다. 세정 후, 결합된 디곡시게닐화 항체를 항-디곡시게닌-항체-HRP 공액체로 검출하였다. 각각의 혈청 샘플의 흡광도 값을 삼중으로 측정하였다 (도 1 참조).
표 2: 포획 및 검출 시약 항체 M-R10Z8E9 에 대한 OD 데이터.
Figure 112012030925736-pct00004
표 3: 포획 및 검출 시약 항체 M-1.7.10 에 대한 OD 데이터.
Figure 112012030925736-pct00005
실시예 7
실험 동물로부터의 샘플 내 인간 항체 유도체 (예를 들어, Fab -절편) 의 정량화를 위한 검정법
비오티닐화 항체 M-1.7.10 은 첫번째 단계에서 스트렙타비딘-코팅된 마이크로역가 플레이트 (SA-MTP) 에 결합하였다. 과량의 비결합된 항체를 세정에 의해 제거하였다. 사이노몰거스 원숭이 혈청에서 급등한 샘플/표준, 예를 들어, 항-IGF1R 항체 Fab 절편을 웰에 첨가하고 60 분 동안 주위 온도에서 진탕하면서 인큐베이션하였다. 비결합된 항체를 세정하여 제거한 후, 100 ㎕ 디곡시게닐화 항체 M-1.3.2 를 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 세정 후, 결합된 디곡시게닐화 항체를 항-디곡시게닌-항체-HRP 공액체로 검출하였다. 각각의 혈청 샘플의 흡광도 값을 삼중으로 측정하였다 (도 5 참조).
표 4: OD 데이터.
Figure 112012030925736-pct00006
실시예 8
실험 동물로부터의 샘플 내 인간 IgG 의 구조적 통합을 입증하기 위한 검정법
인간 Fc 에 대항하는 비오티닐화 항체 M-R10Z8E9 는 첫번째 단계에서 스트렙타비딘-코팅된 마이크로역가 플레이트 (SA-MTP) 에 결합하였다. 과량의 비결합된 항체를 세정에 의해 제거하였다. 사이노몰거스 원숭이 혈청에서 급등한 샘플/표준, 예를 들어, 항-IL13Rα1 항체를 플레이트에 첨가하고 60 분 동안 주위 온도에서 진탕하면서 인큐베이션하였다. 비결합된 항체를 세정하여 제거한 후, 100 ㎕ 디곡시게닐화 항체 M-1.3.2 를 플레이트에 첨가하였다. 세정 후, 결합된 디곡시게닐화 항체를 항-디곡시게닌-항체-HRP 공액체로 검출하였다. 각각의 혈청 샘플의 흡광도 값을 삼중으로 측정하였다 (도 3 참조).
표 5: OD 데이터.
Figure 112012030925736-pct00007
실시예 9
본원에 보고된 항-인간 IgG 항체와 조합으로 Fc -융합 단백질 (항원) 을 사용하는 실험 동물로부터의 샘플 내 인간 항체 (인간 IgG ) 의 정량화를 위한 검정법
인간 수용체 X 의 가용성 세포외 도메인을 인간 IgG1 계열의 Fc-절편에 융합한다. 비오티닐화 융합 단백질 (Bi-X-Fc) 은 첫번째 단계에서 스트렙타비딘-코팅된 마이크로역가 플레이트 (SA-MTP) 에 결합하였다. 과량의 비결합된 항체를 세정에 의해 제거하였다. 이후 사이노몰거스 원숭이 혈청에서 급등한 항-X 항체는 부동화된 인간 수용체 X 에 결합하였다. 비결합된 기질을 세정하여 제거한 후, 결합된 항-X 항체를 a) 인간 Fc 절편에 대항하는 디곡시게닐화 단일클론 항체 (항체 M-R10Z8E9) 또는 b) 인간 Fab 절편에 대항하는 디곡시게닐화 단일클론 항체 (항체 M-1.7.10) 로 검출한 후, 호스-래디쉬 퍼옥시다아제 표지된 항-디곡시게닌 항체로 인큐베이션하였다. 각각의 혈청 샘플의 흡광도 값을 삼중으로 측정하였다.
실시예 10:
닷 블롯 - 형태 대 선형 에피토프
항-인간 IgG 항체가 형태 에피토프 또는 선형 에피토프를 검출하는 지의 여부를 측정하기 위해, 닷 블롯 분석을 수행하였다.
본 시험 동안, 항원-단백질 (인간 IgG) 을 니트로셀룰로오스 멤브레인에 고유의 및 변성된 형태로 점을 찍었다. 변성된 형태를 수득하기 위해, 항원-단백질을 37℃ 에서 밤새 진탕기 상에서 SDS 로 인큐베이션하였다. 두 형태를 연속 농도로 멤브레인에 점을 찍었다. 멤브레인의 완전한 건조 후, 표면을 차단 완충액 (Roti-Block, Roth, Germany) 으로 60 분 동안 주위 온도에서 진탕하면서 차단하였다. 멤브레인의 세정 후, 이것을 디곡시게닐화 항체 M-R10Z8E9 또는 3 개의 상이한 항체 M-1.3.2, M-1.5.8, 또는 M-1.7.10 중 하나를 함유하는 용액으로 인큐베이션하였다. 세정 후, 결합된 디곡시게닐화 항체를 항-디곡시게닌 항체-HRP 공액체로 검출하였다. 항체-효소 공액체의 HRP 는 BM-Blue 기질의 색상 반응을 촉매화한다. 신호는 시각적으로 직접 조절되고 스캐너로 캡쳐될 수 있다.
실시예 11:
가교 ELISA 검정법에 의한 항체 결합/특이성의 평가
어떤 종류의 인간 IgG 서브계열이 연구된 항-인간 항체에 의해 결합되는지를 측정하기 위해, 가교 ELISA 분석을 수행하였다.
비오티닐화 항체 M-R10Z8E9, M-1.3.2, M-1.5.8 및 M-1.7.10 은 첫번째 단계에서 스트렙타비딘 마이크로역가플레이트에 결합하였다. 두번째 단계에서, 상이한 서브계열의 인간 IgG 항체를 인큐베이션하였다. 인간 IgG1 카파; 인간 IgG1 람다; 인간 IgG4; 키메라 인간 IgG1; 인간 IgG2 (폴리클론 정제된 인간 IgG2) 및 인간 IgG3 (폴리클론 정제된 인간 IgG3) 을 연속 희석으로 제조하고 비오티닐화 항 인간 항체로 코팅된, 스트렙타비딘 마이크로역가플레이트에 인큐베이션하였다. 세정 단계 후, 코팅에 사용되는 것과 동일한 항체를 디곡시게닐화 형태의 검출 항체로서 사용하였다. 이것은 동일한 항 인간 항체 클론이 코팅 및 검출에 대해 사용되었다는 것을 의미한다. 예를 들어 하나의 플레이트를 M-1.7.10 Bi 로 코팅하고 M-1.7.10-Dig 를 검출을 위해 사용하였다. 인큐베이션 및 세정 단계 후, 상기 단계에 호스-래디쉬 퍼옥시다아제 표지된 항-디곡시게닌 항체로의 인큐베이션을 후속하였다. 각각의 혈청 샘플의 흡광도 값을 삼중으로 측정하였다.
표 6: 가교 ELISA 분석의 요약
Figure 112012030925736-pct00008
독일생물자원센터 (DSMZ) DSMACC2708 20041222 독일생물자원센터 (DSMZ) DSMACC3006 20090924 독일생물자원센터 (DSMZ) DSMACC3007 20090924 독일생물자원센터 (DSMZ) DSMACC3008 20090924

Claims (26)

  1. 세포주 DSM ACC3006, 또는 DSM ACC3007, 또는 DSM ACC3008.
  2. 제 1 항에 따른 세포주 중 하나로부터 수득된 항체.
  3. 제 2 항에 있어서, 항체가 면역검정법에서 사용되는 것을 특징으로 하는 항체.
  4. 하기를 포함하는, 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 치료 항체를 검출하기 위한 키트로서,
    상기 실험 동물은 개, 붉은털 원숭이 (Rhesus-monkey), 마모셋, 개코원숭이, 및 사이노몰거스 원숭이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 키트:
    a) 포획 시약으로서의 세포주 DSM ACC2708, 또는 DSM ACC3006, 또는 DSM ACC3007, 또는 DSM ACC3008 로부터 수득된 항체,
    b) 검출 시약으로서의 세포주 DSM ACC2708, 또는 DSM ACC3006, 또는 DSM ACC3007, 또는 DSM ACC3008 로부터 수득된 항체.
  5. 하기 단계를 포함하는, 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 치료 항체를 검출하기 위한 방법으로서,
    상기 실험 동물은 개, 붉은털 원숭이 (Rhesus-monkey), 마모셋, 개코원숭이, 및 사이노몰거스 원숭이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법:
    a) 분석할 샘플을 제공하는 단계,
    b) 상기 샘플을 제 2 항에 따른 항체로 인큐베이션하는 단계,
    c) 임의로, 상기 샘플을 총, 활성의 또는 항원-결합된 치료 항체의 선택적 검출에 적합한 시약으로 인큐베이션하는 단계, 및
    d) (b) 또는 (c) 에서 형성된 복합체를 상기 치료 항체의 농도와 연관시키는 단계.
  6. 포획 항체 및 추적 항체가 모두 제 2 항에 따른 항체로부터 독립적으로 선택되는 것을 특징으로 하는, 포획 항체 및 추적 항체를 포함하는 항원 가교 면역검정법을 사용하여 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 치료 항체를 면역학적으로 측정하기 위한 방법으로서,
    상기 실험 동물은 개, 붉은털 원숭이 (Rhesus-monkey), 마모셋, 개코원숭이, 및 사이노몰거스 원숭이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 면역검정법이 샌드위치 면역검정법인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 6 항 또는 제 7 항에 있어서, 포획 항체가 비오틴에 공액되고, 부동화가 부동화된 아비딘 또는 스트렙타비딘을 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 6 항 또는 제 7 항에 있어서, 추적 항체가 디곡시게닌에 공액되고, 검출가능한 표지에 대한 연결이 디곡시게닌에 대항하는 항체를 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 항체가 Fab 인 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 실험 동물이 마모셋 및 타마린, 구세계 원숭이, 꼬마여우원숭이 및 쥐여우원숭이, 긴팔원숭이 및 소형 유인원, 참여우원숭이의 과의 일원, 뿐 아니라 이들의 교배종을 포함하는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 항체가 인간 또는 인간화 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 2 항에 따른 항체를 사용하여 실험 동물로부터 수득된 샘플 내 총 치료 항체, 활성 치료 항체, 또는 항원-결합된 치료 항체의 농도를 측정하는 방법으로서,
    상기 제 2 항에 따른 항체는 치료 항체에 결합하고 실험 동물의 면역글로불린에 결합하지 않고, 상기 실험 동물은 개, 붉은털 원숭이 (Rhesus-monkey), 마모셋, 개코원숭이, 및 사이노몰거스 원숭이로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  14. 세포주 DSM ACC3006, 세포주 DSM ACC3007 또는 세포주 DSM ACC3008 에 의해 생성된 항체의 혼합물을 포함하는, 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 치료 항체를 검출하기 위한 항체 조성물로서,
    상기 실험 동물은 개, 붉은털 원숭이 (Rhesus-monkey), 마모셋, 개코원숭이, 및 사이노몰거스 원숭이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 항체 조성물.
  15. 포획 항체 및 추적 항체를 포함하는 항원 가교 면역검정법을 사용하여 실험 동물로부터 수득된 샘플에서 치료 항체를 면역학적으로 측정하기 위한 항체 조성물로서,
    세포주 DSM ACC3006, 세포주 DSM ACC3007 또는 세포주 DSM ACC3008 에 의해 생성된 항체의 혼합물을 포함하고, 상기 실험 동물이 개, 붉은털 원숭이 (Rhesus-monkey), 마모셋, 개코원숭이, 및 사이노몰거스 원숭이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 항체 조성물.
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
KR1020127010001A 2009-10-19 2010-10-18 비-교차반응성 항-ＩｇＧ 항체 KR101536388B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP09013144 2009-10-19
EP09013144.2 2009-10-19
PCT/EP2010/065617 WO2011048043A1 (en) 2009-10-19 2010-10-18 NON-CROSS-REACTIVE ANTI IgG ANTIBODIES

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20130026409A KR20130026409A (ko) 2013-03-13
KR101536388B1 true KR101536388B1 (ko) 2015-07-22

Family

ID=41834476

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020127010001A KR101536388B1 (ko) 2009-10-19 2010-10-18 비-교차반응성 항-ＩｇＧ 항체

Country Status (13)

Country Link
US (1) US9957331B2 (ko)
EP (1) EP2491397B1 (ko)
JP (2) JP5715634B2 (ko)
KR (1) KR101536388B1 (ko)
CN (2) CN105624118B (ko)
AU (1) AU2010309931B2 (ko)
BR (1) BR112012005668A2 (ko)
CA (1) CA2776576C (ko)
ES (1) ES2628839T3 (ko)
IL (1) IL217934A (ko)
MX (1) MX337290B (ko)
SG (1) SG2014014823A (ko)
WO (1) WO2011048043A1 (ko)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101536388B1 (ko) 2009-10-19 2015-07-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 비-교차반응성 항-ＩｇＧ 항체
RU2603284C2 (ru) 2010-08-17 2016-11-27 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг АНТИТЕЛА ПРОТИВ IgG1 ЧЕЛОВЕКА
CA2859268A1 (en) 2012-02-01 2013-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for the detection of a binding partner of a multispecific binder
WO2014147101A1 (en) * 2013-03-20 2014-09-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Specific detection of rat antibodies in mouse serum
KR101654890B1 (ko) * 2013-07-10 2016-09-07 한국과학기술원 면역글로불린 g에 대한 리피바디 및 그 용도
IL295756A (en) 2015-10-29 2022-10-01 Hoffmann La Roche Antibodies against fc-variable region and methods of use
WO2017082214A1 (ja) * 2015-11-09 2017-05-18 国立大学法人京都工芸繊維大学 単鎖抗体のスクリーニング方法及び単鎖抗体
EP3391050B1 (en) * 2015-12-16 2020-09-16 F. Hoffmann-La Roche AG Three-step acid dissociation enzyme linked immunosorbent (tadelis) assay
CN109280644B (zh) * 2018-09-04 2023-02-17 四川安可瑞新材料技术有限公司 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN109266620B (zh) * 2018-09-04 2023-01-10 四川安可瑞新材料技术有限公司 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN109112113B (zh) * 2018-09-05 2023-01-10 四川安可瑞新材料技术有限公司 抗人IgG的单克隆抗体、杂交瘤细胞株、试剂盒及其应用
CN109082413B (zh) * 2018-09-18 2023-01-10 四川安可瑞新材料技术有限公司 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN109112114B (zh) * 2018-09-18 2023-02-17 四川安可瑞新材料技术有限公司 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
CN110483643B (zh) * 2018-09-19 2021-06-08 深圳市雅为泓源生物科技有限公司 一种新型的抗体组合物、分离的核酸和制备方法
CN111190020B (zh) * 2020-01-20 2024-02-02 苏州药明康德新药开发有限公司 一种添加猴血清优化通用型生物分析的方法
CN112010981B (zh) * 2020-09-10 2021-05-18 南京妙迪生物科技有限公司 一种小鼠抗人IgG单克隆抗体
JP2024534067A (ja) 2021-08-19 2024-09-18 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 多価抗バリアントｆｃ領域抗体および使用方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5332665A (en) * 1991-12-18 1994-07-26 The General Hospital Corporation Species specific, high affinity monoclonal antibodies
WO2006066912A2 (en) * 2004-12-23 2006-06-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Detection of a therapeutic antibody in an experimental animal

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5736137A (en) * 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
CN1180107A (zh) * 1996-06-18 1998-04-29 三井东压化学株式会社 一种单克隆抗体,能生产该抗体的细胞系及该抗体的用途
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
US20060239927A1 (en) 2003-03-31 2006-10-26 Kyowa Hakko Kogyo Co., Drug for airway administration
CA2519113C (en) 2003-04-02 2012-06-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
US7579157B2 (en) 2003-07-10 2009-08-25 Hoffmann-La Roche Inc. Antibody selection method against IGF-IR
AR045614A1 (es) 2003-09-10 2005-11-02 Hoffmann La Roche Anticuerpos contra el recepctor de la interleuquina- 1 y los usos de los mismos
EP2360186B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
TWI306862B (en) 2005-01-03 2009-03-01 Hoffmann La Roche Antibodies against il-13 receptor alpha 1 and uses thereof
CN101213450A (zh) * 2005-07-06 2008-07-02 霍夫曼-拉罗奇有限公司 不论存在或不存在相对应的治疗用抗体而检测靶抗原
CN101506659B (zh) * 2006-09-12 2012-12-12 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗药物抗体测定法
EP2067044B1 (en) 2006-09-12 2013-07-03 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-drug antibody assay
TWI434855B (zh) * 2006-11-21 2014-04-21 Hoffmann La Roche 結合物及其在免疫分析中作為參考標準之用途
KR101536388B1 (ko) 2009-10-19 2015-07-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 비-교차반응성 항-ＩｇＧ 항체
RU2603284C2 (ru) 2010-08-17 2016-11-27 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг АНТИТЕЛА ПРОТИВ IgG1 ЧЕЛОВЕКА

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5332665A (en) * 1991-12-18 1994-07-26 The General Hospital Corporation Species specific, high affinity monoclonal antibodies
WO2006066912A2 (en) * 2004-12-23 2006-06-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Detection of a therapeutic antibody in an experimental animal

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 49 (2009) 1003-1008 *

Also Published As

Publication number Publication date
BR112012005668A2 (pt) 2020-10-13
EP2491397A1 (en) 2012-08-29
SG2014014823A (en) 2014-07-30
US9957331B2 (en) 2018-05-01
JP5715634B2 (ja) 2015-05-13
CN102656460A (zh) 2012-09-05
AU2010309931A1 (en) 2012-03-01
MX337290B (es) 2016-02-24
JP5894248B2 (ja) 2016-03-23
CA2776576C (en) 2018-01-02
AU2010309931B2 (en) 2015-08-20
CN102656460B (zh) 2016-03-02
US20120208216A1 (en) 2012-08-16
CN105624118A (zh) 2016-06-01
KR20130026409A (ko) 2013-03-13
WO2011048043A1 (en) 2011-04-28
JP2013508700A (ja) 2013-03-07
IL217934A (en) 2015-04-30
ES2628839T3 (es) 2017-08-04
CA2776576A1 (en) 2011-04-28
IL217934A0 (en) 2012-03-29
EP2491397B1 (en) 2017-04-19
MX2012003825A (es) 2012-05-08
JP2015070847A (ja) 2015-04-16
CN105624118B (zh) 2019-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101536388B1 (ko) 비-교차반응성 항-ＩｇＧ 항체
US9766251B2 (en) Anti-human IgG1 antibody
US9933433B2 (en) Anti-drug antibody assay
KR100950635B1 (ko) 실험동물의 치료용 항체의 검출
KR20150133196A (ko) 마우스 혈청 내의 래트 항체의 특이적인 검출
US9017959B2 (en) 5.9 kDa peptide immunoassay method

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180628

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190624

Year of fee payment: 5