TW202424490A - 免疫學測定方法、非特異反應抑制方法、免疫學測定試劑、免疫學測定試劑套組、組成物、非特異反應抑制劑、及用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種免疫學測定方法，其係對試樣中之測定對象物質進行免疫學測定之方法，其特徵在於：於抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下、抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體之存在下、或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下進行免疫反應。該免疫學測定方法可抑制過去利用非特異反應抑制劑無法消除之非特異反應。
Description
本發明係關於一種免疫學測定方法、非特異反應抑制方法、免疫學測定試劑、免疫學測定試劑套組、組成物、非特異反應抑制劑、及用途。
本案基於2022年8月29日於日本提出申請之日本特願2022-136075主張優先權，並將其內容援用於此。
作為診斷試劑領域中之測定方法，可例舉：利用免疫反應對生物樣本中所存在之測定對象物質進行測定之免疫學測定方法。免疫學測定方法由於利用了抗原抗體反應，因此為特異性非常高之測定方法。
生物樣本中存在各種物質，因此，會促進非基於特異反應之結合，或妨礙特異性免疫反應，從而導致測定誤差。將此種現象稱為非特異反應，將作為引起非特異反應之原因之物質稱為非特異因子等。
作為非特異因子，已知存在嗜異性抗體或類風濕因子（RF）。嗜異性抗體係對「承擔免疫學測定方法之主反應之源自動物之抗體」顯示出反應性之人類抗體之總稱，已知具有代表性的是HAMA（人類抗小鼠免疫球蛋白抗體）。已知類風濕因子出現於類風濕性關節炎患者，於對源自動物之抗體顯示出反應性之性質之方面與HAMA共通，且其實體均為人類之免疫球蛋白G或免疫球蛋白M（非專利文獻1）。
作為免疫學測定方法中抑制非特異反應之技術，例如已知專利文獻1及專利文獻2。
於專利文獻1中揭示了一種方法，其係藉由預先利用於人類類風濕因子（RF）之反應部位（Fab）中具有結合能力之充分量之源自動物之抗體對試樣進行預處理而抑制由RF所導致之非特異反應。作為此種源自動物之抗體，可例舉：抗人類免疫球蛋白Fab抗體、抗人類IgG抗體（Fab特異性）、抗人類IgA抗體（Fab特異性）、抗人類IgM抗體（Fab特異性）。
於專利文獻2中揭示了一種方法，其係藉由添加針對IgM型自然抗體之多株抗體而抑制非特異反應，該多株抗體係由與測定用抗體為同種之動物製備。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]日本特開平07-012818號公報
[專利文獻2]日本特開平11-287801號公報
[非專利文獻]
[非專利文獻1]臨床化學：第23卷補編175a-1～175a-10（1994）
[發明所欲解決之課題]
可知專利文獻1所示之自然抗體或用於抑制由RF所導致之非特異反應之抗人類IgM多株抗體、抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體目前為各種試劑中實用之非特異反應抑制劑，但亦存在藉由該方法仍無法抑制之非特異反應。
又，專利文獻2所示之針對IgM型自然抗體之多株抗體需要由「與用於測定之抗體同種之動物」製備，製備方法或所使用之測定用抗體有限制。
本發明之課題在於提供一種可抑制過去利用非特異反應抑制劑無法消除之非特異反應之使用新的非特異反應抑制劑之免疫學測定方法。
[解決課題之技術手段]
本發明人等為了解決上述課題，對各種物質之非特異反應抑制效果進行了研究，結果發現，藉由於抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下、抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體之存在下、或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下進行免疫反應可抑制非特異反應，從而完成本發明。
具體而言，本發明具有以下構成。
[1]一種免疫學測定方法，其係對試樣中之測定對象物質進行免疫學測定之方法，其特徵在於，於抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下、抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體之存在下、或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下進行免疫反應；
其中，上述測定對象物質不包括抗免疫球蛋白L鏈λ抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ抗體。
[2]如[1]中所記載之免疫學測定方法，其係基於均質法之免疫學測定方法或基於異質法之免疫學測定方法。
[3]如[2]中所記載之免疫學測定方法，其包括如下步驟：使包含測定對象物質之試樣與上述抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體或上述抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體接觸之步驟；
添加針對上述測定對象物質之特異性結合同伴（specific binding partner）之步驟；及
檢測來自上述溶液中之測定對象物質與特異性結合同伴之反應之訊號之步驟。
[4]如[2]中所記載之免疫學測定方法，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法。
[5]如[4]中所記載之免疫學測定方法，其包括如下步驟：使包含測定對象物質之試樣與上述抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體或上述抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體在溶液中接觸之步驟；
向上述溶液中添加載持針對上述測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子之步驟；及
對上述溶液中之上述乳膠粒子之凝集程度進行光學檢測之步驟。
[6]一種非特異反應抑制方法，其係對試樣中之測定對象物質進行免疫學測定之方法中之非特異反應抑制方法，且
於抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下、抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體之存在下、或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下進行免疫反應。
[7]如[6]中所記載之非特異反應抑制方法，其中，上述免疫學測定方法為基於均質法之免疫學測定方法或基於異質法之免疫學測定方法。
[8]如[7]中所記載之非特異反應抑制方法，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法。
[9]如[8]中所記載之非特異反應抑制方法，其包括如下步驟：使包含測定對象物質之試樣與上述抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體或上述抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體在溶液中接觸之步驟；
向上述溶液中添加載持針對上述測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子之步驟；及
對上述溶液中之上述乳膠粒子之凝集程度進行光學檢測之步驟。
[10]一種免疫學測定用試劑，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。
[11]如[10]中所記載之免疫學測定用試劑，其用於基於均質法之免疫學測定方法或基於異質法之免疫學測定方法。
[12]如[11]中所記載之免疫學測定用試劑，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法。
[13]一種免疫學測定用試劑套組，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。
[14]如[13]中所記載之免疫學測定用試劑套組，其用於基於均質法之免疫學測定方法或基於異質法之免疫學測定方法。
[15]如[14]中所記載之免疫學測定用試劑套組，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法。
[16]如[14]中所記載之免疫學測定用試劑套組，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法，且上述免疫學測定用試劑套組包含：
（1）第1試劑，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者；
（2）第2試劑，其包含載持針對測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子。
[17]一種組成物，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。
[18]一種免疫學測定方法中之非特異反應抑制劑，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者作為有效成分。
[19]一種[17]中所記載之組成物之用途，其於免疫學測定方法中用作非特異反應抑制劑。
[發明之效果]
根據本發明，可提供一種可抑制過去利用非特異反應抑制劑無法消除之非特異反應之使用新的非特異反應抑制劑之免疫學測定方法。
本發明之免疫學測定方法可抑制藉由市售之非特異反應抑制劑仍無法抑制之非特異反應，可進行準確之測定。
＜免疫學測定方法＞
本發明之免疫學測定方法係對試樣中之測定對象物質進行免疫學測定之方法，其特徵在於，於抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下、抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體之存在下、或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下進行免疫反應。換言之，為下述方法：於作為非特異反應抑制劑之抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下、抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體之存在下、或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下，使用除抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體、抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體、或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體以外之特異性結合同伴對試樣中之測定對象物質進行免疫學測定。
免疫學測定方法進而大致分為均質法與異質法。
均質法係「不進行B/F（結合/非結合）分離而特異性地檢測於試樣與試劑液之混和溶液（反應液）中藉由測定對象物質進行之結合反應」的測定法，異質法係「藉由B/F分離操作將未參與測定反應之剩餘成分洗淨、去除後，進行主反應而檢測」之測定法。
異質法由於經過洗淨步驟，故而存在步驟較多，測定需要耗費較多時間之問題，另一方面，有相對不易受到非特異反應物質之影響之優點。相對於此，均質法由於不經過洗淨步驟，故而存在容易受到非特異反應之影響之問題，另一方面，步驟較少而簡便，測定所需之時間亦較短，因此為臨床診斷領域廣泛需求之方法。
作為均質法，可例舉：利用免疫凝集法之測定方法（TIA）、免疫層析法（側流（lateral flow）式、流通（flow through）式）。TIA係基於由「抗體等特異性結合同伴引起之藉由分析物（測定對象物質）之交聯作用」所形成之免疫複合物之凝集程度，對試樣中之分析物進行定性或定量檢測之方法，其中，為了放大凝集訊號而使用乳膠粒子作為不溶性載體之乳膠免疫比濁法（以下，有時稱為LTIA）適於光學檢測，且亦容易自動化，因此為用於各種檢查項目之泛用性較高之測定方法。
作為異質法，可例舉：使用孔狀板之ELISA法、化學發光法等。
本發明可用於上述任一免疫學測定方法，相對容易受非特異反應之影響之均質法可期待更加享受效果，故而較佳。
（抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體、抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體）
於本發明中，作為抑制非特異反應之有效成分，使用抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及/或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體。
抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體係與免疫球蛋白L鏈之λ鏈反應之抗體，可為針對游離L鏈（包含Bence Jones蛋白）λ鏈之抗體，又，亦可為針對不游離之狀態之L鏈λ鏈之抗體之任一者。
抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體係與免疫球蛋白L鏈之κ鏈反應之抗體，可為針對游離L鏈κ鏈之抗體，又，亦可為針對不游離之狀態之L鏈κ鏈之抗體之任一者。
游離免疫球蛋白L鏈係不與免疫球蛋白H鏈（重鏈）締合之免疫球蛋白L鏈之單體或二聚物等。免疫球蛋白之L鏈可根據抗原性之不同而分類為κ鏈及λ鏈之2種。於本說明書中，以下，抗免疫球蛋白L鏈λ抗體、抗免疫球蛋白L鏈κ抗體有時分別稱為抗L鏈λ抗體、抗L鏈κ抗體。
又，於本說明書中，除非特別說明，否則抗L鏈λ抗體、抗L鏈κ抗體意旨包含單株抗體及多株抗體之兩者。
又，本說明書中，有時亦將Kappa表示為κ，將Lambda表示為λ。
又，本發明中所使用之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體除使用抗體分子整體以外，還可使用具有與抗原之反應性之抗體之功能性片段。
本發明中所使用之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體除為經對普通動物之免疫步驟而獲得者以外，還為藉由噬菌體顯示等方法所獲得之單株抗體。通常，藉由使產生抗體之細胞與源自骨髓瘤之細胞株進行細胞融合而製作具有自主生長能力之融合細胞（融合瘤），僅篩選（screening）出產生對目標抗原具有反應性之抗體之融合細胞，對其進行單一化（選殖），藉此建立產生抗體之融合瘤。藉由對源自本細胞之抗體進行純化、或將源自本細胞之抗體植入小鼠並回收腹水，而獲得目標單株抗體。
單株抗體可為具有源自不同動物種之胺基酸序列之抗體，具體而言為嵌合抗體、人源化抗體或完全人類抗體等。又，作為抗體之功能性片段，可例舉：具有抗原抗體反應活性之片段F(ab')
2、Fab'或單鏈抗體（scFv）、VHH（variable domain of heavy chain of heavy chain antibody）抗體、IgNAR（new antigen receptor）抗體等。該等抗體之功能性片段可藉由利用蛋白質分解酵素（例如胃蛋白酶或木瓜酶等）對以上述方式所獲得之抗體進行處理或利用基因重組技術來製造。於本發明中，除非特別說明，否則抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體中成為可包含功能性片段者。
如上所述，抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體亦可組合使用，亦可進而於各者或組合而成者組合抗人類IgM抗體等其他公知之非特異反應抑制劑。
於本說明書中，抗體與抗原「反應」、抗體「識別」抗原以同義使用，但並不限定於該等例示，必須最廣義地解釋。確認抗體是否與抗原（化合物）「反應」除可藉由抗原固相化ELISA法、競爭ELISA法、三明治（sandwich）ELISA法等進行以外，還可藉由利用表面電漿子共振（surface plasmon resonance）之原理之方法（SPR法）等進行。SPR法可使用以Biacore（註冊商標）之名稱市售之裝置、感測器、試劑類來進行。
本發明所使用之抗L鏈λ抗體及抗L鏈κ抗體可藉由如下方式製造：分別將作為抗原（免疫原）之市售之源自人類之免疫球蛋白等溶解於磷酸緩衝生理食鹽水等溶劑中，將該溶液投予至動物進行免疫。亦可視需要在向上述溶液中添加適宜之佐劑之後，使用乳狀液進行免疫。作為佐劑，除使用油包水型乳劑、水包油包水型乳劑、水包油型乳劑、脂質體、氫氧化鋁凝膠等泛用之佐劑以外，還可使用源自生物成分之蛋白質或肽性物質等。例如，可適宜地使用弗氏不完全佐劑或弗氏完全佐劑等。佐劑之投予路徑、投予量、投予時期並無特別限定，宜適宜地進行選擇以便可於對抗原免疫之動物中增強所需之免疫反應。
免疫所使用之動物之種類亦無特別限定，較佳為哺乳動物，例如可使用小鼠、大鼠、牛、兔、山羊、綿羊、羊駝等，更佳為使用小鼠或大鼠。動物之免疫按照一般方法進行即可，例如，可藉由將抗原之溶液、較佳為與佐劑之混合物注射至動物之皮下、皮內、靜脈或腹腔內而進行免疫。免疫反應一般根據所免疫之動物之種類及系統而不同，因此免疫排程宜根據所使用之動物而適宜地設定。抗原投予較佳為在最初免疫後反覆進行幾次。
為了獲得單株抗體，繼續進行以下操作，但不限於此。單株抗體本身之製造方法係周知的，為業界所泛用，因此從業者可容易地製造本發明之免疫學分析方法中所使用之單株抗體（例如，參照參考文獻1之第6章等）。
最終免疫後，自已免疫之動物取出作為產生抗體之細胞之脾臟細胞或淋巴結細胞，與具有較高之生長能力之源自骨髓瘤之細胞株進行細胞融合，藉此可製作融合瘤。細胞融合較佳為使用抗體產生能力（質、量）較高之細胞，又，源自骨髓瘤之細胞株較佳為與所融合之產生抗體之細胞所來源之動物具有相容性。細胞融合可按照本發明所屬之技術領域中之公知之方法進行，例如可採用聚乙二醇法、使用仙台病毒之方法、利用電流之方法等。所獲得之融合瘤可依據業界所泛用之條件生長，可確認所產生之抗體之性質，並且選擇所需之融合瘤。融合瘤之選殖例如可藉由極限稀釋法或軟瓊脂法等周知之方法進行。
關於融合瘤之選擇，亦可考慮所產生之抗體用於實際測定之條件，按選擇階段有效率地進行。例如，使對動物進行免疫所獲得之抗體與固定於固相之抗原（L鏈λ鏈或L鏈κ鏈）進行反應，作為對照，與不存在抗原時之反應性進行比較，藉此可更高效率地篩選產生所需抗體之融合瘤。
更具體而言，可將與2種以上之類別（例如，IgA及IgG等）之兩者之λ鏈反應之情形判斷為λ鏈特異性。同樣地可將與2種以上之類別（例如，IgA及IgG等）之兩者之κ鏈反應之情形判斷為κ鏈特異性。另一方面，於無論λ鏈或κ鏈與某1種類別（例如IgA）反應，且不與和上述1種不同之類別（例如IgG）反應之情形時，可判斷為與κ鏈及λ鏈非特異性，與前者之某1種類別（於本例中為IgA）具特異性。
藉由在選殖步驟後，使用ELISA法、RIA法、螢光抗體法等方法對所產生之抗體與L鏈λ鏈或L鏈κ鏈之結合能力進行分析，可確認所篩選出之融合瘤是否產生具有所需性質之單株抗體。
藉由大量培養以上述方式篩選出之融合瘤，可製造具有所需特性之單株抗體。大量培養之方法並無特別限定，例如可例舉：於適宜之培養基中培養融合瘤而於培養基中產生單株抗體之方法；或於哺乳動物之腹腔內注射融合瘤並使其生長，於腹水中產生抗體之方法等。單株抗體之純化可適宜地組合上述自抗血清中純化出抗體之方法、例如DEAE陰離子交換層析法、親和層析法、硫酸銨份化法、PEG份化法、乙醇份化法等來進行。
於本發明中，作為使抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者存在於免疫反應系統內之方法，可例舉：用作免疫測定試劑之試劑組成之一之方法、添加於試樣之稀釋液或預處理液等中之方法。
所謂免疫反應系統內，例如於免疫測定試劑為液態試劑之情形時，係指將試樣與液態免疫測定試劑混合，進行免疫反應之液相。
例如，於LTIA法之情形時，可將試樣混合至包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者之LTIA測定試劑中，亦可預先將試樣與包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者之預處理液混合後再與免疫測定試劑混合。
又，於ELISA法之情形時，可預先將試樣與包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者之預處理液混合後再滴加至微板，亦可預先將試樣與包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者及檢測用抗體之溶液混合後再滴加至微板。
又，於化學發光法試劑之情形時，亦可預先將試樣與包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者之預處理液混合後再與免疫測定試劑混合，亦可於免疫測定試劑（例如，包含檢測用抗體或抗原、磁性粒子之溶液）中包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。
進而，又，於免疫層析法等以固相進行免疫反應之情形時，所謂免疫反應系統內係指供液態試樣與結合性同伴進行免疫反應之固相。於該情形時，可預先將試樣與包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者之預處理液混合後再滴加至免疫層析試驗片，亦可為如下狀態：預先將抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者以乾燥狀態保持於樣品墊上，滴加試樣時使抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者溶解，展開固相，藉此存在於反應系統中。
於本發明中，抗L鏈λ單株抗體之濃度為不會對測定對象物質與特異性結合同伴之免疫反應造成強烈影響，可發揮所需之非特異反應抑制效果之濃度即可，從業者可根據測定對象物質或檢體之種類而適宜地設定。
免疫反應系統內之抗L鏈λ單株抗體之濃度亦根據免疫反應系統之試劑組成而不同，抗L鏈λ抗體相對於檢體10 μL之重量為0.1～1000 μg，較佳為1.0～750 μg，更佳為2.0～500 μg，進而較佳為3.0～250 μg，最佳為5.0～150 μg，但不限於該濃度。例如，亦存在較佳為5.0～120 μg、5.0～110 μg、5.0～100 μg、5.0～80 μg、5.0～60 μg、5.0～50 μg之情形。又，亦存在上述範圍之下限較佳為10.0 μg以上、15.0 μg以上、20.0 μg以上之情形。
免疫反應系統內之抗L鏈κ單株抗體之濃度亦根據免疫反應系統之試劑組成而不同，抗L鏈κ抗體相對於檢體10 μL之重量為0.1～1000 μg，較佳為1.0～750 μg，更佳為2.0～500 μg，進而較佳為3.0～250 μg，最佳為5.0～150 μg，但不限於該濃度。例如，亦存在較佳為5.0～120 μg、5.0～110 μg、5.0～100 μg、5.0～80 μg、5.0～60 μg、5.0～50 μg之情形。又，亦存在上述範圍之下限較佳為10.0 μg以上、15.0 μg以上、20.0 μg以上之情形。
於本發明中，抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體可單獨使用，亦能夠以複數種抗L鏈λ單株抗體、複數種抗L鏈κ單株抗體、或抗L鏈λ單株抗體與抗L鏈κ單株抗體之混合物之形式使用。
於將抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體進行混合後使用之情形時，混合比以各抗體之重量計設為20：1～1：20，較佳為設為10：1～1：10，進而較佳為設為5：1～1：5，最佳為設為2：1～1：2。健康人之血清中之κ鏈相對於λ鏈之正常比率為0.26～1.65之範圍（參考文獻2）。又，血清中之κ鏈相對於非游離之λ鏈之正常比率為2.0左右。從業者可根據作為測定對象之檢體供體之人種、疾病群、年齡等而適宜地選擇混合比。
又，可為未與不溶性載體等結合之游離狀態之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者，亦可使用與不溶性載體結合之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。
又，於併用複數種抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者之情形時，較佳為複數種抗體之合計濃度處於上述濃度範圍。
進而，又，於預先使本發明之測定試劑中含有抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者之情形時，較佳為以成為上述反應系統內之濃度之方式預先含有於測定試劑中。
（乳膠免疫比濁法（LTIA法））
對作為本發明之免疫學測定方法之一之LTIA法進行說明。藉由LTIA法對測定對象物質進行測定之方法大致可分為兩種。
第一種係使固定有針對測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子與測定對象物質進行反應，形成三明治型免疫複合物，根據隨著免疫複合物之形成而產生之上述乳膠粒子之凝集之程度對測定對象物質進行測定之方法。
第二種係如下方法：預先向試劑中添加固定有複數種測定對象物質或其相關物（包含該等之片段）之蛋白質等，使其等與試樣中之測定對象物質競爭，抑制試劑中所包含之測定對象物質與固定有針對測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子之免疫複合物之形成，根據隨著免疫複合物之形成抑制而產生之上述乳膠粒子之凝集抑制之程度對測定對象物質（抗原）進行測定。
測定對象物質及針對測定對象物質之特異性結合同伴可根據目的而選擇任意物質。例如，若測定對象物質為抗原，則作為針對測定對象物質之特異性結合同伴，可選擇多株抗體、單株抗體（包含重組型抗體及各抗體之功能性片段）等抗體。若測定對象物質為抗體，則作為針對測定對象物質之特異性結合同伴，可選擇天然型及重組型抗原等抗原。
本發明可用於上述任一方法，具體而言，可例示以下步驟。
（1）使包含測定對象物質之試樣與抗L鏈λ單株抗體或抗L鏈κ單株抗體在溶液中接觸之步驟。
（2）在步驟（1）之後，添加針對上述測定對象物質之特異性結合同伴之步驟；或
（2'）在步驟（1）之後，向上述溶液中添加載持針對測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子之步驟。
（3）在步驟（2）之後，檢測來自上述溶液中之測定對象物質與特異性結合同伴之反應之訊號之步驟；或
（3'）在步驟（2'）之後，對上述溶液中之上述乳膠粒子之凝集程度進行光學檢測之步驟。
此處，步驟（3）及（3'）意指「在步驟（2）之中途或步驟（2）之後，不經洗淨、分離步驟而對上述測定對象物質與上述乳膠粒子之凝集反應進行測定之步驟」。
關於LTIA法，可藉由對所產生之凝集之程度進行光學或電化學觀察而對受檢物質進行測定。作為光學觀察方法，可例舉：利用光學機器測定散射光強度、吸光度或穿透光強度之方法（終點法、速率法等）。將對試樣進行測定而獲得之吸光度等之測定值與對標準物質（測定對象物質之濃度為已知之試樣）進行測定而獲得之吸光度等之測定值進行比較，算出試樣中所包含之測定對象物質之濃度（定量值）。再者，穿透光或散射光等之吸光度等之測定可為單波長測定，或亦可為雙波長測定（兩種波長之差或比）。測定波長一般自500 nm至900 nm中選擇。
本發明之試樣中之測定對象物質之測定可藉由手工法進行，或亦可使用測定裝置等裝置進行。測定裝置可為泛用自動分析裝置，亦可為專用之測定裝置（專用機）。又，該測定較佳為藉由兩步法（雙試劑法）等藉由複數個操作步驟進行之方法實施。
（載持有特異性結合同伴之乳膠粒子）
針對測定對象物質之特異性結合同伴可藉由物理吸附法、化學結合法或該等之併用等公知之方法固定並載持於乳膠粒子。於藉由物理吸附法之情形時，可藉由如下等方式進行：按照公知之方法，將針對測定對象物質之特異性結合同伴與乳膠粒子於緩衝液等溶液中進行混合而使其等接觸，或使溶解於緩衝液等中之針對測定對象物質之特異性結合同伴與載體接觸。又，於藉由化學結合法進行之情形時，可藉由如下等方式進行：按照日本臨床病理學會編「臨床病理臨時增刊特集第53號 用於臨床檢查之免疫分析-技術及應用-」、臨床病理刊行會、1983年發行，日本生化學會編「新生化學實驗講座1 蛋白質IV」、東京化學同人、1991年發行等中所記載之公知之方法，使針對測定對象物質之特異性結合同伴及載體與戊二醛、碳二醯亞胺、醯亞胺酯或馬來醯亞胺等二價性交聯試劑混合、接觸，使針對測定對象物質之特異性結合同伴、載體之各自的胺基、羧基、硫醇基、醛基或羥基等與上述二價性交聯試劑進行反應。
構成本發明之乳膠粒子之合成高分子並無特別限定，例如可例舉：聚苯乙烯、苯乙烯-苯乙烯磺酸鹽共聚物、甲基丙烯酸聚合物、丙烯酸聚合物、伊康酸聚合物、苯乙烯-親水性羧基單體共聚物（例如，苯乙烯-甲基丙烯酸共聚物、苯乙烯-丙烯酸共聚物、苯乙烯-伊康酸共聚物）等。其中，較佳為苯乙烯-甲基丙烯酸共聚物、苯乙烯-伊康酸共聚物、苯乙烯及苯乙烯-苯乙烯磺酸鹽共聚物。尤佳為苯乙烯及苯乙烯-(甲基)丙烯酸共聚物。
為了形成三明治，乳膠粒子所載持之針對特定物質之特異性結合同伴較佳為複數種。於特定物質中存在複數個抗體識別部位之情形時，特異性結合同伴可為一種。例如，於特異性結合同伴為單株抗體之情形時，使用識別部位不同之複數種單株抗體。又，例如於特異性結合同伴為多株抗體之情形時，可為1種源自抗血清之多株抗體，亦可為複數種源自抗血清者。又，亦可將單株抗體與多株抗體組合使用。
再者，若為了抑制乳膠粒子之自然凝集或非特異性反應等而需進行處理，則可藉由使牛血清白蛋白（BSA）、酪蛋白、明膠、卵白蛋白或其鹽等蛋白質、界面活性劑或脫脂乳粉等接觸並被覆乳膠粒子之表面等公知之方法進行處理，進行載體之封閉（blocking）處理（掩蔽處理）。
（免疫學測定用試劑）
本發明之免疫學測定方法之特徵在於：使用免疫學測定用試劑進行，上述免疫學測定用試劑中除包含免疫反應之主成分以外，還包含上述抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。作為反應之主成分，於測定對象物質中包含特異性結合同伴（除抗L鏈λ抗體及抗L鏈κ抗體以外），此外，可例舉免疫測定用粒子、免疫層析試驗片、微板等不溶性載體等。
亦可在不妨礙其非特異性反應抑制效果之範圍內使本發明之免疫學測定用試劑中含有緩衝液、蛋白質、肽、胺基酸、核酸、脂質、磷脂質、醣類、無機鹽、高分子化合物、界面活性劑、其他非特異性反應抑制劑、防腐劑等。作為對試樣之pH、離子強度、滲透壓等進行緩衝、調整之成分，例如可包含乙酸、檸檬酸、磷酸、三羥甲基胺基甲烷（Tris）、甘胺酸、硼酸、碳酸、鄰苯二甲酸、琥珀酸、馬來酸、咪唑等緩衝液、及古德緩衝液、或其等之鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽等。又，作為增強凝集形成之成分，可包含聚乙烯吡咯啶酮、磷脂質聚合物等高分子。
關於抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者在各組成試劑中之濃度，以可在測定時於試劑與試樣之混合狀態下調整為上述免疫反應系統內之濃度之形態包含即可，根據各試劑型而不同。
（試劑套組）
本發明之試劑套組之特徵在於：套組組成中至少包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。作為套組組成，除與免疫測定有關之試劑以外，還可例舉試樣稀釋液、試樣萃取液等，本發明之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者可預先包含於該等之任一者、或兩者以上中。套組之組成除上述以外，還可例舉使用說明書、試樣採集用具（採集吸量管、注射器、棉花棒、過濾濾片等）。
以下，分別對採用各免疫測定方法之試劑組成進行說明。
＜乳膠免疫比濁法＞
例示免疫學測定法為乳膠免疫比濁法時之試劑（LTIA試劑）。
（1）第1試劑，其包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者；及
（2）第2試劑，其包含載持針對測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子。
第1試劑具有代表性的是包含緩衝液，關於抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者在緩衝液中之濃度，以可在測定時於試劑與試樣之混合狀態下調整為上述較佳之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者濃度之形態包含即可，根據各試劑型而不同。抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者除包含於第1試劑中以外，還可包含於第2試劑中。再者，於將抗L鏈λ抗體與抗L鏈κ抗體併用之情形時，以抗L鏈λ抗體及抗L鏈κ抗體之合計量可調整為上述較佳之濃度之形態包含即可。於本發明之乳膠免疫比濁法中，抗L鏈λ抗體較佳為抗L鏈λ單株抗體，又，抗L鏈κ抗體較佳為抗L鏈κ單株抗體。
於本發明之LTIA試劑中，一般第1試劑中所包含之抗L鏈λ單株抗體之濃度為1～2000 μg/mL，較佳為5～1500 μg/mL，更佳為10～1000 μg/mL，進而較佳為15～800 μg/mL，最佳為25～800 μg/mL，但不限於該濃度。
又，於在供LTIA法使用之前，向檢體中添加檢體稀釋液或預處理液等之情形時，抗L鏈λ抗體可包含於預處理液中，預處理液中之抗L鏈λ抗體濃度為1～2000 μg/mL，較佳為5～1500 μg/mL，更佳為10～1000 μg/mL，進而較佳為15～800 μg/mL，最佳為25～800 μg/mL，不限於該濃度。
同樣地，第1試劑中所包含之抗L鏈κ單株抗體之濃度為1～2000 μg/mL，較佳為5～1500 μg/mL，更佳為10～1000 μg/mL，進而較佳為15～800 μg/mL，最佳為25～800 μg/mL，不限於該濃度。
又，於在供LTIA法使用之前，向檢體中添加檢體稀釋液或預處理液等之情形時，抗L鏈κ抗體可包含於預處理液中，預處理液中之抗L鏈κ抗體濃度為1～2000 μg/mL，較佳為5～1500 μg/mL，更佳為10～1000 μg/mL，進而較佳為15～800 μg/mL，最佳為25～800 μg/mL，不限於該濃度。
再者，於將抗L鏈λ抗體與抗L鏈κ抗體併用之情形時，抗L鏈λ抗體及抗L鏈κ抗體之合計量處於上述濃度範圍內即可。
本發明所使用之免疫測定用粒子除使用上述乳膠粒子以外，只要可載持針對測定對象物質之特異性結合同伴，就還可使用公知之粒子。例如，金屬膠體、二氧化矽、碳等無機物粒子亦可用作本發明之免疫測定用粒子。
免疫測定用粒子之尺寸考慮到所使用之光學測定法（例如，測定穿透光之比濁法（turbidimetry）、測定散射光之散射比濁法（nephelometry）等），為了獲得所需之測定感度、測定範圍等，可自0.05～1 μm之範圍中適宜地選擇。再者，於自動分析裝置之光學測定中，泛用平均粒徑0.1～0.4 μm，但不限於此。
＜ELISA法＞
所謂ELISA法係利用各種抗原抗體反應之組合，最終將經酵素標記之抗原或抗體合併至反應系統中，檢測酵素活性之方法。酵素活性之檢測使用吸光光譜根據反應而發生變化之受質，根據抗原抗體反應之組合，可例舉直接法、間接法、三明治法、競爭法等。
例示本發明之免疫學測定法為三明治ELISA法時之試劑。
（a）固定有與測定對象物質反應之抗體之不溶性載體
（b）被標記物質標記，與測定對象物質反應之抗體
作為不溶性載體（a），較佳為板，標記物質可適宜地選擇使用。固定於不溶性載體之抗體捕獲包含試樣之溶液中之測定對象物質，於不溶性載體上形成複合物。被標記物質標記之抗體與上述所捕獲之測定對象物質結合而與上述複合物形成三明治。藉由與標記物質對應之方法測定標記物質之量，藉此可測定試樣中之測定對象物質。可無特別限制地使用抗體固定於不溶性載體之方法、抗體與標記物質之結合方法等，具體方法為從業者所周知之方法。
於本ELISA法中，本發明之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者例如可藉由添加於試樣稀釋液或預處理液等中，或者添加於進行抗原抗體反應之溶液中，而存在於免疫反應系統中。於上述ELISA法中，抗L鏈λ抗體較佳為抗L鏈λ單株抗體，又，抗L鏈κ抗體較佳為抗L鏈κ單株抗體。
＜免疫層析法＞
對本發明之免疫學測定法為免疫層析法時之試劑組成（試驗片組成）進行說明。
免疫層析試驗片；
於使用抗體作為特異性結合同伴之情形時，為於多孔性薄膜等片狀不溶性載體上沿包含試樣之溶液之展開方向依序具備「1.試樣供給部位」、「2.保持標記抗體之部位（標記抗體保持部位）」、「3.用於捕獲由標記抗體及針對測定對象物質之抗體所形成之複合物的固定抗體之部位（捕獲抗體部位）」之試驗片。
於免疫層析法中，若將特定量之「至少包含如上述之試驗片且包含測定對象物質之試樣」添加於試樣供給部位，則試樣藉由毛細現象滲入至標記保持部位，測定對象物質與標記抗體結合而形成複合物。當上述複合物在薄膜上展開，滲入至捕獲抗體部位，則被固定於薄膜之抗體（捕獲抗體）捕獲，形成捕獲抗體-測定對象物質-標記抗體之複合物。並且，藉由利用任意方法（例如，於金膠體等能夠可視化之標記之情形時，藉由其凝集圖像，於酵素之情形時，藉由因添加受質所引起之顯色反應）對標記進行檢測，可檢測測定對象物質。
於本免疫層析法中，本發明之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者例如可藉由添加於試樣稀釋液或預處理液等中，或者含有於試樣供給部位或標記保持部位並預先進行乾燥保持，而存在於反應系統內。於上述免疫層析法中，抗L鏈λ抗體較佳為抗L鏈λ單株抗體，又，抗L鏈κ抗體較佳為抗L鏈κ單株抗體。
＜化學發光法＞
該化學發光法係如下方法：在使測定對象物質與結合有抗原或抗體之磁性粒子進行反應而形成複合物之後，藉由磁性去除未反應物質；進而添加包含標記抗體之試劑，在藉由磁性去除未反應物質之後，添加發光試劑，測定發光量。將酵素用於標記之情形稱為化學發光酵素免疫測定法（CLEIA法：Chemiluminescent enzyme immunoassay）。又，將釕吡啶錯合物等金屬錯合物用於標記且藉由電化學反應測定發光強度之情形稱為電化學發光免疫測定法（ECLIA法：Electro chemiluminescence immunoassay）。又，將化學發光性物質用於標記之情形稱為化學發光免疫測定法（CLIA法：Chemiluminescent immunoassay）。
例示本發明之免疫學測定法為CLEIA法時之試劑。
（a）固定有與測定對象物質反應之抗體（或抗原）之磁性粒子
（b）被酵素標記且與測定對象物質反應之抗體（或抗原）
（c）發光試劑
固定於磁性粒子之抗體捕獲包含試樣之溶液中之測定對象物質，形成複合物。經酵素標記物質標記之抗體與上述所捕獲之測定對象物質結合而與上述複合物形成三明治。使酵素標記物質與發光試劑進行反應而測定發光量，藉此可測定試樣中之測定對象物質。
於本CLEIA法中，本發明之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者例如可藉由添加於試樣稀釋液或預處理液等中，或者添加於進行抗原抗體反應之溶液中，而存在於免疫反應系統中。於上述化學發光法中，抗L鏈λ抗體較佳為抗L鏈λ單株抗體，又，抗L鏈κ抗體較佳為抗L鏈κ單株抗體。
＜特異性結合同伴＞
於本發明中，作為針對測定對象物質之特異性結合同伴，可例舉除抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體以外之蛋白質、肽、胺基酸、脂質、醣類、核酸、半抗原等，分子量之高低及天然、合成等來源並無特別限制，可例舉利用免疫反應之免疫學測定法可使用之抗體或抗原。
上述抗體可為多株抗體，亦可為單株抗體。更佳為單株抗體。
本發明之抗體除使用抗體分子整體以外，還可使用具有抗原抗體反應活性之抗體之功能性片段。除經對普通動物（小鼠、山羊、綿羊等）之免疫步驟所獲得者以外，還可為藉由基因重組技術等而變為與「對免疫原（測定對象物質物質）免疫之動物」不同之動物種之胺基酸序列之抗體（嵌合抗體、人源化抗體或完全人類抗體等）。作為抗體之功能性片段，可例舉：具有抗原抗體反應活性之片段F(ab')
2、Fab'或單鏈抗體（scFv）、VHH（variable domain of heavy chain of heavy chain antibody）抗體、IgNAR（new antigen receptor）抗體等。該等抗體之功能性片段可藉由利用蛋白質分解酵素（例如胃蛋白酶或木瓜酶等）對以上述方式獲得之抗體進行處理而製造。
＜試樣＞
作為包含本發明之測定對象物質之試樣，例如可例舉：人類或動物之血液、血清、血漿、培養上清液、尿、腦脊髓液、唾液、汗、腹水、或者細胞或組織之萃取液等。
又，本發明中之試樣除由生物體所獲得之試樣本身以外，還包含進行了稀釋、純化等預處理之試樣。又，本發明中之試樣可為剛採集後之試樣、採集後經過一定時間之試樣等之任一者，本案發明係採集後經過一定時間仍對所存在之非特異因子具有抑制效果。
又，對冷凍保存一定時間後再融解之試樣或反覆凍結融解之試樣中所存在之非特異因子亦具有抑制效果。作為一定時間，可例舉剛採集後、1天後、1週後、1個月後等。
＜測定對象物質＞
本發明之免疫測定試劑可將上述試樣中所含有之各種物質作為測定對象物質。作為測定對象物質，只要為不與用於抑制非特異反應之抗L鏈λ抗體及抗L鏈κ抗體反應之物質即可，即除免疫球蛋白L鏈λ鏈、免疫球蛋白L鏈κ鏈以外即可。可例舉上述以外之蛋白質、肽、胺基酸、脂質、醣類、核酸、半抗原等，只要為理論上可測定之物質即可，並無特別限制。例如可例舉：CRP（C反應性蛋白質）、Lp(a)、MMP3（基質金屬蛋白酶3）、抗磷脂質抗體、IV型膠原蛋白、PSA、BNP（brain natriuretic peptide，腦排鈉利尿肽）、胰島素、白蛋白、胱蛋白C、RF（類風濕因子）、KL-6、前降鈣素（procalcitonin）、FDP、D二聚物、SF（可溶性血纖維蛋白）、TAT（凝血酶-抗凝血酶III複合物）、PAI-1、或苯妥英、苯巴比妥、卡巴馬平、丙戊酸、茶鹼、TARC（Thymus and activation-regulated chemokine）、sIL-2R（可溶性白細胞介素-2受容體）、SP-D（肺界面活性蛋白D）等。
其中，上述測定對象物質不包括抗免疫球蛋白L鏈λ抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ抗體。再者，此處所謂之抗免疫球蛋白L鏈λ抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ抗體不限於單株抗體，亦包含多株抗體。
＜組成物及非特異反應抑制劑＞
又，本發明提供一種組成物，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。
上述組成物例如可作為包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者作為有效成分之非特異反應抑制劑而用於免疫學測定方法。
於本發明中，抑制非特異反應係指非特異反應抑制劑作用於生物樣本中之產生上述非特異反應之因子（非特異因子），抑制除測定對象物質與特異性結合同伴之免疫反應以外之反應對測定之影響。因此，於本發明中，作為非特異反應抑制劑之候補物質是否具有非特異反應抑制效果例如可藉由以利用某檢體中不產生非特異反應之方法（或不易產生之方法（於實施例中為CLEIA法））進行測定時之測定值（以下，稱為對照法測定值）為基準，將添加候補物質之情形與不添加候補物質之情形進行比較，是否接近對照法測定值來判斷。即，於目標測定方法中，在添加候補物質時之測定值與未添加候補物質時之測定值相比接近對照法測定值之情形時，於上述測定方法中，候補物質具有非特異反應抑制效果，可判斷能夠成為非特異反應抑制劑。
關於本發明中之組成物及非特異反應抑制劑，根據生物樣本中所包含之某些成分，將「將測定對象物質判定為高於原本含量之值，即所謂的產生正測定誤差之因子」、或「判定為低於原本值之值，即所謂的產生負測定誤差之因子」均設為對象。其中，對藉由HBR-1等市售之非特異反應抑制劑仍無法抑制之非特異因子特別有效果。又，對所謂之背離檢體中所包含之產生測定值異常高值化之正測定誤差、測定值異常低值化之負測定誤差之非特異因子具有效果。
本發明之組成物及非特異反應抑制劑包含可抑制如上所述判斷之由源自試樣之非特異因子引起之反應之物質即可，至少包含抗L鏈λ單株抗體或抗L鏈κ單株抗體作為有效成分。本發明之非特異反應抑制劑可直接使用上述試劑組成中之包含抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體、抗L鏈λ單株抗體、或抗L鏈κ單株抗體之組成。
亦可在不妨礙其非特異性反應抑制效果之範圍內使本發明之非特異反應抑制劑中含有緩衝液、蛋白質、肽、胺基酸、核酸、脂質、磷脂質、醣類、無機鹽、高分子化合物、界面活性劑、其他非特異性反應抑制劑（抗C3d抗體或抗人類IgM抗體等）、防腐劑等。
＜非特異反應之抑制方法＞
本發明之非特異反應之抑制方法係藉由於抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之存在下、抗L鏈λ單株抗體之存在下、或抗L鏈κ單株抗體之存在下進行免疫反應，而抑制由試樣所導致之非特異反應之方法。
[參考文獻]
1：Edward A. Greenfield (Ed.) (2012) Antibodies : A Laboratory Manual (Second Edition), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 750pp.
2：Jerry A. Katzmann, Raynell J. Clark, Roshini S. Abraham, Sandra Bryant, James F. Lymp, Arthur R. Bradwell, and Robert A. Kyle (2002) Serum Reference Intervals and Diagnostic Ranges for Free κ and Free λ Immunoglobulin Light Chains : Relative Sensitivity for Detection of Monoclonal Light Chains, Clinical Chemistry, 48 (9) : 1437-1444.
[實施例]
以下，藉由實施例對本發明進行詳細說明，但本發明並不限定於以下實施例。
[參考例1]（源自人類IgA免疫之單株抗體之製造）
1.源自人類IgA免疫動物之融合瘤之製作
（1）對動物之免疫
作為免疫原，使用市售之人類IgA（BETHYL Laboratories公司製造）。以包含150 mM氯化鈉之20 mM磷酸緩衝液（pH為7.2；以下，稱為PBS）稀釋而成免疫原，將該免疫原與弗氏完全佐劑等量混合而製備乳狀液，使用該乳狀液，對每隻Balb/cAJcl小鼠注射30 μg。進而，第2次以後使用弗氏不完全佐劑，對每隻注射20 μg，以7～10天之間隔重複3次～5次。藉由下述抗原固相化ELISA法測定自尾部靜脈採血而獲得之抗血清中之抗體效價。
（2）免疫動物血清中抗體效價之評價（抗原固相化ELISA法）
利用使免疫原固相化之ELISA法（抗原固相化ELISA法）確認上述免疫動物血清中是否存在針對人類IgA之抗體。抗原固相化ELISA法之詳細情況如下所示。
（2-1）抗原固相化ELISA用板之製作
以成為1.0 μg/mL之方式將作為免疫原之人類IgA溶解於PBS中，將50 μL之所獲得之溶解液分注於96孔微板之各孔中，於室溫靜置2小時。
利用400 μL之包含0.05%Tween（註冊商標）20之PBS（以下，稱為PBST）將上述各孔洗淨3次後，添加100 μL之包含1%牛血清白蛋白之PBST（以下，稱為BSA-PBST），於室溫進行1小時封閉。將其作為ELISA用板。
（2-2）抗原固相化ELISA法
自上述ELISA用板之各孔中去除BSA-PBST後，將以BSA-PBST連續稀釋而成之免疫動物抗血清及非免疫動物血清50 μL添加於上述各孔中，於室溫靜置1小時。利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，將50 μL之經BSA-PBST稀釋10000倍而成之HRP標記抗小鼠IgG（H&L）（Southern Biotechnology Associates Inc.製造）分注於上述各孔中，於室溫靜置1小時。利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，添加50 μL之包含0.2%鄰苯二胺及0.02%過氧化氫之檸檬酸緩衝液（pH為5.0），於室溫放置10分鐘後，添加50 μL之1.5 N硫酸而使酵素反應終止，測定波長492 nm時之吸光度。自測定結果確認到抗體效價上升之小鼠摘除脾臟及淋巴結，製備源自脾臟及淋巴結之細胞，用於細胞融合。
（3）細胞融合
將上述源自脾臟之細胞或源自淋巴結之細胞之任一者與骨髓瘤細胞以細胞數6：1之比率進行混合，藉由PEG法進行細胞融合。使藉由細胞融合而獲得之細胞懸浮於HAT培養基中，於CO
2培養箱內以37℃、5% CO
2培養8天，獲得融合細胞（融合瘤）。
2.融合瘤之篩選（抗原固相ELISA法）
利用使免疫原固相化之ELISA法（抗原固相化ELISA法）確認上述融合瘤之培養上清液中是否存在針對IgA之抗體。抗原固相化ELISA法之詳細情況如下所示。
（1）抗原固相化ELISA用板之製作
以成為1.0 μg/mL之方式將作為免疫原之IgA溶解於PBS中，將50 μL之所獲得之溶解液分注於96孔微板之各孔中，於室溫靜置2小時。
利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，添加100 μL之BSA-PBST，於室溫進行1小時封閉。將其作為ELISA用板。
（2）抗原固相化ELISA法
自上述ELISA用板之各孔中去除BSA-PBST後，將50 μL之經BSA-PBST連續稀釋而成之融合瘤之培養上清液添加於上述各孔中，於室溫靜置1小時。利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，將50 μL之經BSA-PBST稀釋10000倍而成之HRP標記抗小鼠IgG（H&L）分注於上述各孔中，於室溫靜置1小時。利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，添加50 μL之包含0.2%鄰苯二胺及0.02%過氧化氫之檸檬酸緩衝液（pH為5.0），於室溫放置10分鐘後，添加50 μL之1.5 N硫酸而使酵素反應終止，測定波長492 nm時之吸光度。
自測定結果，選擇吸光度較高之孔作為存在抗人類IgA產生抗體之融合瘤之孔（陽性孔）。
3.選殖
使用上述2.中所選擇之抗人類IgA產生抗體之融合瘤，進行融合瘤之單株化及單株抗體之純化。選殖化以通常方法（極限稀釋法）進行，以與上述抗原固相ELISA法相同之方法篩選陽性孔，最終獲得複數個單株產生抗體之融合瘤。將所獲得之融合瘤S062XX（XX為數字）所產生之單株抗體分別稱為S062XX抗體。
[參考例2]（源自人類IgA免疫之單株抗體之特異性評價）
1.源自人類IgA免疫之單株抗體之特異性評價（抗原固相ELISA法）
利用使抗原固相化之ELISA法（抗原固相化ELISA法）確認上述源自人類IgA免疫之單株抗體之特異性。抗原固相化ELISA法之詳細情況如下所示。
（1）抗原固相化ELISA用板之製作
以成為1.0 μg/mL之方式將用於評價特異性之抗原（IgG Kappa、IgG Lambda（以上為Bethyl Laboratories Inc.製造）、IgA Kappa、IgA Lambda（以上為Southern Biotechnology Associates Inc.製造）溶解於PBS中，將50 μL之所獲得之溶解液分注於96孔微板之各孔中，於室溫靜置2小時。
利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，添加100 μL之BSA-PBST，於室溫進行1小時封閉。將其作為ELISA用板。
（2）抗原固相化ELISA法
自上述ELISA用板之各孔中去除BSA-PBST後，將50 μL之經BSA-PBST稀釋為1.0 μg/mL、0.2 μg/mL而成之抗體添加於上述各孔中，於室溫靜置1小時。利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，將50 μL之經BSA-PBST稀釋9500倍而成之HRP標記抗小鼠IgG（H&L）分注於上述各孔中，於室溫靜置1小時。利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，添加50 μL之包含0.2%鄰苯二胺及0.02%過氧化氫之檸檬酸緩衝液（pH為5.0），於室溫放置10分鐘後，添加50 μL之1.5 N硫酸而使酵素反應終止，測定波長492 nm時之吸光度。將測定之結果示於表1。
2.特異性評價結果
確認複數種源自人類IgA免疫之單株抗體中之與IgA Kappa及IgA Lambda反應且不與IgG Kappa及IgG Lambda反應之IgA特異性抗體（S06201、S06216）、與IgG Kappa及IgA Kappa反應且不與IgG Lambda及IgA Lambda反應之L鏈κ特異性抗體（S06205、S06204）、及與IgG Lambda及IgA Lambda反應且不與IgG Kappa及IgA Kappa反應之L鏈λ特異性抗體（S06215、S06208）。再者，關於判斷為上述IgA特異性抗體之理由，認為如下。即，與IgA之κ鏈及λ鏈之兩抗原反應之原因在於，認為不是與L鏈反應之抗體，而是與H鏈反應之抗體。又，上述抗體未與IgG之λ鏈及κ鏈反應，因此認為係IgA特異性抗體。
如此，自源自人類IgA免疫之單株抗體中篩選本發明之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體，評價免疫測定法中之非特異反應抑制效果。
[表1]
| 源自人類IgA免疫之單株抗體之特異性評價 | |||||
| 抗體名 | 抗體濃度 | 固相抗原 | |||
| IgG，kappa | IgG，lambda | IgA，kappa | IgA，lambda | ||
| S06201 | 1.0 μg/mL | 0.043 | 0.043 | 1.359 | 1.384 |
| 0.2 μg/mL | 0.042 | 0.041 | 1.140 | 1.145 | |
| S06216 | 1.0 μg/mL | 0.042 | 0.042 | 1.061 | 1.237 |
| 0.2 μg/mL | 0.041 | 0.041 | 0.755 | 0.869 | |
| S06205 | 1.0 μg/mL | 1.410 | 0.043 | 1.301 | 0.072 |
| 0.2 μg/mL | 0.814 | 0.043 | 0.877 | 0.062 | |
| S06204 | 1.0 μg/mL | 1.014 | 0.052 | 1.003 | 0.051 |
| 0.2 μg/mL | 0.562 | 0.044 | 0.598 | 0.051 | |
| S06215 | 1.0 μg/mL | 0.041 | 1.587 | 0.051 | 1.563 |
| 0.2 μg/mL | 0.040 | 1.078 | 0.047 | 1.128 | |
| S06208 | 1.0 μg/mL | 0.103 | 1.178 | 0.072 | 1.072 |
| 0.2 μg/mL | 0.056 | 1.172 | 0.049 | 1.070 | |
| Abs.（OD）at 492 nm |
[實驗例1：LTIA法中之非特異反應抑制：sIL-2R之測定]
示出如下試驗：使用添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體、其他非特異反應抑制劑之基於LTIA法之試劑，對試樣中之sIL-2R濃度進行測定。再者，作為試樣，使用：顯示出與藉由化學發光酵素免疫測定法（CLEIA法）所得之測定值（對照例1）相近之值的試樣（對照檢體：檢體1～6）；及呈現非特異反應，且大幅度背離對照例1之測定值之試樣（背離檢體：檢體7～11）。
[對照例1]（基於CLEIA法之測定）
1.測定方法
1-1.測定試劑
Lumipulse Presto（註冊商標）IL-2R（Fujirebio股份有限公司）
1-2.試樣
檢體（血清）1-11
1-3.測定步驟
利用Lumipulse（註冊商標）-L2400（Fujirebio股份有限公司），按照上述測定試劑之隨附文件，進行測定。
2.測定結果
將測定結果示於表2。
本對照例1所示之CLEIA法實施B/F分離操作，具有洗淨步驟。因此，其為不易受源自試樣之非特異反應之影響之測定方法，故而用作對照例。
[比較例1]（基於LTIA法之測定：不添加非特異反應抑制劑）
1.測定方法
1-1.測定試劑
按照日本特開2017-181377號公報中所記載之方法，製備以下之第1試劑（緩衝液）及第2試劑（抗sIL-2R抗體致敏乳膠粒子溶液）。
1-2.試樣
與對照例1之試樣相同。
1-3.測定步驟
組合第1試劑與第2試劑，使用日立7180型自動分析裝置，測定試樣中之sIL-2R濃度。具體而言，向5.6 μL之試樣中添加120 μL之第1試劑並於37℃保溫5分鐘後，添加40 μL之第2試劑並進行攪拌。其後，歷時5分鐘以主波長570 nm、次波長800 nm測定隨著凝集形成所產生之吸光度變化，將該吸光度變化量套用於對濃度已知之標準物質進行測定所獲得之校準曲線，算出測定值。
2.測定結果
將測定結果示於表2。
[比較例2]（基於LTIA法之測定：添加HBR-1）
以成為200 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加市售之非特異反應抑制劑HBR-1（SCANTIBODIES LABORATORY, INC.製造），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表2。
[比較例3]（基於LTIA法之測定：添加抗人類IgG、IgA、IgM多株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加市售之抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體、抗人類IgM多株抗體（Sera Care Life Sciences, Inc. S製造），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表2。
[實施例1]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表2。
[實施例2]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈κ單株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表2。
[實施例3]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），並以成為200 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表2。
[表2]
| sIL-2R之測定結果（U/mL） | ||||||
| 比較例1 | 比較例2 | 比較例3 | 對照例1 | |||
| 測定方法 | LTIA法 | LTIA法 | LTIA法 | CLEIA法 | ||
| 添加劑及添加濃度 | 無添加劑 | 200 μg/mL之HBR-1 | 200 μg/mL之抗人類IgG、IgA、IgM多株抗體 | - | ||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 1 | 288 | 287 | 369 | 296 |
| 2 | 600 | 619 | 736 | 598 | ||
| 3 | 438 | 471 | 558 | 438 | ||
| 4 | 708 | 736 | 881 | 670 | ||
| 5 | 915 | 934 | 1113 | 906 | ||
| 6 | 2038 | 2047 | 2735 | 2140 | ||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 7 | 1814 | 2037 | 1060 | 672 |
| 8 | 748 | 760 | 669 | 601 | ||
| 9 | 512 | 551 | 558 | 432 | ||
| 10 | 1857 | 1883 | 2385 | 1640 | ||
| 11 | 1227 | 1264 | 1455 | 1070 | ||
| 實施例1 | 實施例2 | 實施例3 | ||||
| 測定方法 | LTIA法 | LTIA法 | LTIA法 | |||
| 添加劑及添加濃度 | 添加200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 | 添加200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | |||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 1 | 273 | 290 | 290 | |
| 2 | 588 | 615 | 622 | |||
| 3 | 440 | 444 | 460 | |||
| 4 | 710 | 722 | 734 | |||
| 5 | 922 | 942 | 925 | |||
| 6 | 2037 | 2096 | 2142 | |||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 7 | 587 | 1809 | 617 | |
| 8 | 607 | 751 | 667 | |||
| 9 | 390 | 521 | 420 | |||
| 10 | 1929 | 1529 | 1567 | |||
| 11 | 1245 | 1068 | 1119 |
＜結果及探討＞
根據對照例1、比較例1～比較例3及實施例1～實施例3之結果，對本發明之效果進行探討。
（1）對於對照檢體（檢體編號1～6）之測定結果進行驗證。
於對照檢體中，CLEIA法之測定值（對照例1）與未添加非特異反應抑制劑之LTIA法之測定值（比較例1）大致相等。又，添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例1）、添加有抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例2）、併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例3）亦與對照例1及比較例1大致相等。因此，可知添加抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體不會對不呈非特異反應之檢體之測定值造成影響。另一方面，確認到添加有抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體及抗人類IgM多株抗體之LTIA法之測定值（比較例3）與比較例1相比進一步背離之傾向。
（2）對背離檢體（檢體編號7～11）之測定結果進行驗證。
於檢體編號7中，CLEIA法之測定值（對照例1）為672 U/mL，相對於此，未添加非特異反應抑制劑之LTIA法之測定值（比較例1）成為1814 U/mL，測定值大幅度背離。進而，添加有HBR-1之LTIA法之測定值（比較例2）為2037 U/mL，大幅度背離對照例1。添加有抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體及抗人類IgM多株抗體之LTIA法之測定值（比較例3）為1060 U/mL，確認到非特異反應抑制效果，但背離對照例1，因此本物質之非特異反應抑制效果不充分。
另一方面，添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例1）成為587 U/mL，併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例3）成為617 U/mL，顯示出接近對照例1之傾向。檢體8、9中亦獲得相同之結果。
進而，於檢體編號10中，CLEIA法之測定值（對照例1）為1640 U/mL，相對於此，未添加非特異反應抑制劑之LTIA法之測定值（比較例1）成為1857 U/mL，測定值背離。添加有HBR-1之LTIA法之測定值（比較例2）為1883 U/mL，大幅度背離對照例1。添加有抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體及抗人類IgM多株抗體之LTIA法之測定值（比較例3）成為2385 U/mL，背離對照例1之程度增大。
另一方面，添加有本發明之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例2）成為1529 U/mL，併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例3）成為1567 U/mL，顯示出接近對照例1之傾向。檢體11中亦獲得相同之結果。
（3）根據以上內容，於免疫測定方法中，藉由使本發明之抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體存在於免疫反應系統內，可抑制源自試樣之非特異反應。
藉由本發明，可抑制藉由市售之非特異反應抑制劑HBR-1或抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體、抗人類IgM多株抗體亦無法抑制之非特異反應，因此本發明之抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體之非特異反應抑制效果為出乎預料之結果。又，藉由併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體，可抑制源自試樣之各種非特異反應。
再者，檢體編號7～9係單獨使用抗L鏈λ單株抗體亦具有非特異反應抑制效果。檢體編號10、11係單獨使用抗L鏈κ單株抗體亦具有非特異反應抑制效果。如此，抗L鏈λ單株抗體或抗L鏈κ單株抗體對特定檢體顯示出單獨抑制非特異反應之效果。另一方面，根據檢體而具有不同效果，因此較佳為併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體。
[實驗例2：LTIA法中之非特異反應抑制：SP-D之測定]
示出如下試驗：使用添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體、其他非特異反應抑制劑之基於LTIA法之試劑，對試樣中之SP-D濃度進行測定。再者，作為試樣，使用：顯示出與藉由化學發光酵素免疫測定法（CLEIA法）所得之測定值（對照例2）相近之值的試樣（對照檢體：檢體12～15）；及呈現非特異反應，且大幅度背離對照例2之測定值之試樣（背離檢體：檢體16及17）。
[對照例2]（基於CLEIA法之測定）
1.測定方法
1-1.測定試劑
CL SP-D「Yamasa」NX（Yamasa醬油股份有限公司）
1-2.試樣
檢體（血清）12～17
1-3.測定步驟
利用CL-JACK NX（Minaris Medical Co., Ltd.），按照上述測定試劑之隨附文件，進行測定。
2.測定結果
將測定結果示於表3。
本對照例2所示之CLEIA法實施B/F分離操作，具有洗淨步驟。因此，其為不易受源自試樣之非特異反應之影響之測定方法，故而用作對照例。
[比較例4]（基於LTIA法之測定：不添加非特異反應抑制劑）
1.測定方法
1-1.測定試劑
製備以下之第1試劑及第2試劑。
（1）第1試劑
100 mM之MES-NaOH（pH為6.0）
500 mM之NaCl
0.5%之BSA
增感劑
（2）第2試劑
抗人類SP-D單株抗體致敏乳膠
5 mM之MOPS-NaOH（pH為7.0）
1-2.試樣
與對照例2之試樣相同。
1-3.測定步驟
組合第1試劑與第2試劑，使用日立7180型自動分析裝置，測定試樣中之SP-D濃度。具體而言，向5.0 μL之試樣中添加120 μL之第1試劑並於37℃保溫5分鐘後，添加40 μL之第2試劑並進行攪拌。其後，歷時5分鐘以主波長570 nm、次波長800 nm測定隨著凝集形成所產生之吸光度變化，將該吸光度變化量套用於對濃度已知之標準物質進行測定所獲得之校準曲線，算出測定值。
2.測定結果
將測定結果示於表3。
[比較例5]（基於LTIA法之測定：添加HBR-1）
以成為200 μg/mL之方式向比較例4所示之第1試劑中添加市售之非特異反應抑制劑HBR-1（SCANTIBODIES LABORATORY, INC.），除此以外，利用與比較例4相同之方法進行測定。將測定結果示於表3。
[實施例4]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例4所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），除此以外，利用與比較例4相同之方法進行測定。將測定結果示於表3。
[實施例5]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈κ單株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例4所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例4相同之方法進行測定。將測定結果示於表3。
[實施例6]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例4所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），並以成為200 μg/mL之方式向比較例4所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例4相同之方法進行測定。將測定結果示於表3。
[表3]
| SP-D之測定結果（ng/mL） | |||||
| 比較例5 | 比較例6 | 對照例2 | |||
| 測定方法 | LTIA法 | LTIA法 | CLEIA法 | ||
| 添加劑及添加濃度 | 無添加劑 | 200 μg/mL之HBR-1 | - | ||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 12 | 234.9 | 239.4 | 254.0 |
| 13 | 159.3 | 161.9 | 167.0 | ||
| 14 | 64.5 | 62.3 | 57.1 | ||
| 15 | 88.6 | 89.7 | 86.0 | ||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 16 | 29.0 | 25.3 | 15.0 |
| 17 | 37.9 | 17.2 | 15.0 | ||
| 實施例4 | 實施例5 | 實施例6 | |||
| 測定方法 | LTIA法 | LTIA法 | LTIA法 | ||
| 添加劑及添加濃度 | 200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 | 200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | ||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 12 | 235.3 | 236.0 | 237.6 |
| 13 | 154.2 | 158.4 | 158.1 | ||
| 14 | 64.1 | 63.2 | 63.8 | ||
| 15 | 88.5 | 88.4 | 90.0 | ||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 16 | 13.6 | 23.7 | 14.1 |
| 17 | 27.2 | 27.8 | 22.0 |
＜結果及探討＞
根據對照例2、比較例4～比較例5及實施例4～實施例6之結果，對本發明之效果進行探討。
（1）對於對照檢體（檢體編號12～15）之測定結果進行驗證。
於對照檢體中，CLEIA法之測定值（對照例2）與未添加非特異反應抑制劑之LTIA法之測定值（比較例4）大致相等。又，添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例4）、添加有抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例5）、併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例6）亦與對照例2及比較例4大致相等。因此，可知添加抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體不會對不呈非特異反應之檢體之測定值造成影響。
（2）對背離檢體（檢體編號16及17）之測定結果進行驗證。
於檢體編號16中，CLEIA法之測定值（對照例2）為15.0 ng/mL，相對於此，未添加非特異反應抑制劑之LTIA法之測定值（比較例4）成為29.0 ng/mL，測定值大幅度背離。進而，添加有HBR-1之LTIA法之測定值（比較例5）為25.3 ng/mL，大幅度背離對照例2。
另一方面，添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例4）成為13.6 ng/mL，併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例6）成為14.1 ng/mL，顯示出接近比較例5之傾向。
進而，於檢體編號17中，CLEIA法之測定值（對照例2）為15.0 ng/mL，相對於此，未添加非特異反應抑制劑之LTIA法之測定值（比較例4）成為37.9 ng/mL，測定值大幅度背離。添加有HBR-1之LTIA法之測定值（比較例5）成為17.2 ng/mL，顯示出接近比較例5之傾向。添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例4）成為27.2 ng/mL，添加有抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例5）成為27.8 ng/mL，背離比較例4之程度降低。進而，併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例6）成為22.0 ng/mL，顯示出與實施例4及實施例5之測定值相比更接近比較例4之傾向。
（3）根據以上內容，於免疫測定方法中，藉由使本發明之抗L鏈λ單株抗體或抗L鏈κ單株抗體存在於免疫反應系統內，可抑制源自試樣之非特異反應。藉由本發明，可抑制藉由市售之非特異反應抑制劑HBR-1亦無法抑制之非特異反應，因此本發明之抗L鏈λ單株抗體或抗L鏈κ單株抗體之非特異反應抑制效果為出乎預料之結果。進而，藉由併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體，確認到非特異反應抑制之累加效應。
[實驗例3：LTIA法中之非特異反應抑制：TARC之測定]
示出如下試驗：使用添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體、其他非特異反應抑制劑之基於LTIA法之試劑，對試樣中之TARC濃度進行測定。再者，作為試樣，使用：顯示出與藉由化學發光酵素免疫測定法（CLEIA法）所得之測定值（對照例3）相近之值的試樣（對照檢體：檢體18～23）；及呈現非特異反應，且大幅度背離對照例3之測定值之試樣（背離檢體：檢體24～30）。
[對照例3]（基於CLEIA法之測定）
1.測定方法
1-1.測定試劑
HISCL（註冊商標）TARC（Sysmex股份有限公司）
1-2.試樣
檢體（血清）18～30
1-3.測定步驟
利用HISCL（註冊商標）-5000（Sysmex股份有限公司），按照上述試劑之隨附文件，進行測定。
2.測定結果
將測定結果示於表4。
本對照例3所示之CLEIA法實施B/F分離操作，具有洗淨步驟。因此，其為不易受源自試樣之非特異反應之影響之測定方法，故而用作對照例。
[比較例6]（基於LTIA法之測定）
1.測定方法
1-1.測定試劑
按照WO2022/009974號公報中所記載之方法，製備由第1試劑（緩衝液）、第2試劑（抗人類TARC單株抗體致敏乳膠溶液）所構成之LTIA測定試劑。再者，以成為100 μg/mL之方式向第1試劑中添加市售之非特異反應抑制劑HeteroBlock（OMEGA Biologicals, Inc.製造）。
1-2.試樣
與對照例3之試樣相同
1-3.測定步驟
組合第1試劑與第2試劑，使用自動分析裝置3500，測定試樣中之TARC濃度。具體而言，向2.4 μL之試樣中添加120 μL之第1試劑並於37℃保溫5分鐘後，添加40 μL之第2試劑並進行攪拌。其後，歷時5分鐘以主波長570 nm、次波長800 nm測定隨著凝集形成所產生之吸光度變化，將該吸光度變化量套用於對濃度已知之標準物質進行測定所獲得之校準曲線，算出測定值。
2.測定結果
將測定結果示於表4。
[實施例7]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體）
以成為50 μg/mL之方式向比較例6所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），除此以外，利用與比較例6相同之方法進行測定。將測定結果示於表4。
[實施例8]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體）
分別向比較例6所示之第1試劑中添加50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體）及抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例6相同之方法進行測定。將測定結果示於表4。
[表4]
| TARC之測定結果（pg/mL） | ||||||
| 實施例7 | 實施例8 | 對照例3 | 比較例6 | |||
| 測定方法 | LTIA法 | LTIA法 | CLEIA法 | LTIA法 | ||
| 添加劑及濃度 | 100 μg/mL之HeteroBlock 50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 | 100 μg/mL之HeteroBlock 50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 50 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 100 μg/mL之HeteroBlock | |||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 18 | 358 | 289 | 316 | 266 |
| 19 | 646 | 633 | 536 | 662 | ||
| 20 | 510 | 469 | 538 | 466 | ||
| 21 | 294 | 221 | 275 | 266 | ||
| 22 | 531 | 436 | 492 | 534 | ||
| 23 | 1341 | 1228 | 1230 | 1317 | ||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 24 | 444 | 428 | 390 | 737 |
| 25 | 834 | 665 | 669 | 816 | ||
| 26 | 628 | 337 | 225 | 612 | ||
| 27 | 1045 | 423 | 410 | 1901 | ||
| 28 | 667 | 426 | 307 | 1054 | ||
| 29 | 3153 | 1044 | 751 | 7109 | ||
| 30 | 6368 | 1675 | 1466 | 8382 |
＜結果及探討＞
根據對照例3、比較例6、實施例7及實施例8之結果，對本發明之效果進行探討。
（1）對於對照檢體（檢體編號18～23）之測定結果進行驗證。
於對照檢體中，添加有CLEIA法之測定值（對照例3）及市售之非特異反應抑制劑HeteroBlock之LTIA法之測定值（比較例6）大致相等。又，添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例7）、併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例8）亦與對照例3及比較例6大致相等。因此，可知添加抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體不會對不呈非特異反應之檢體之測定值造成影響。
（2）對背離檢體（檢體編號24～30）之測定結果進行驗證。
於檢體編號24中，CLEIA法之測定值（對照例3）為390 pg/mL，相對於此，添加有HeteroBlock之LTIA法之測定值（比較例6）成為737 pg/mL，測定值大幅度背離。
另一方面，添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例7）成為444 pg/mL，併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例8）成為428 pg/mL，顯示出接近對照例3之傾向。
進而，於檢體編號25中，CLEIA法之測定值（對照例3）為669 pg/mL，相對於此，添加有HeteroBlock之LTIA法之測定值（比較例6）成為816 pg/mL，測定值大幅度背離。添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例7）成為834 pg/mL，測定值沒有變化，但併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例8）成為665 pg/mL，顯示出接近對照例3之傾向。檢體編號26中亦獲得相同之結果。
於檢體編號27中，CLEIA法之測定值（對照例3）為410 pg/mL，相對於此，添加有HeteroBlock之LTIA法之測定值（比較例6）成為1901 pg/mL，測定值大幅度背離。添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例7）成為1045 pg/mL，背離之程度降低，併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例8）成為423 pg/mL，進而，背離之程度降低，顯示出與對照例3大致相等之值。檢體28～30中亦獲得相同之傾向。
（3）根據以上內容，於免疫測定方法中，藉由使本發明之抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體存在於免疫反應系統內，可抑制源自試樣之非特異反應。藉由本發明，可抑制藉由市售之非特異反應抑制劑HeteroBlock亦無法抑制之非特異反應，因此本發明之抗L鏈λ單株抗體或抗L鏈κ單株抗體之非特異反應抑制效果為出乎預料之結果。進而，藉由併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體，確認到非特異反應抑制之累加效應。
[實驗例4：LTIA法中之非特異反應抑制劑之濃度研究：sIL-2R之測定]
使用以低濃度添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體及/或抗L鏈κ單株抗體之基於LTIA法之試劑，進行試樣中之sIL-2R濃度測定，確認非特異反應抑制效果。
作為試樣，使用實驗例1中所使用之對照檢體（檢體1～6）及一部分背離檢體（檢體7、8、10）。藉由與實驗例1之比較例1之結果進行比較而確認效果。
[實施例9]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體）
以成為20 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表5。
[實施例10]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體）
以成為50 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表5。
[實施例11]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈κ單株抗體）
以成為20 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表5。
[實施例12]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈κ單株抗體）
以成為50 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表5。
[實施例13]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體）
以成為20 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），並以成為20 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表5。
[實施例14]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體）
以成為50 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），並以成為50 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表5。
＜結果及探討＞
根據比較例1及實施例9～實施例14之結果，對本發明之非特異反應抑制劑之低濃度側之效果進行探討。
（1）關於對照檢體（檢體編號1～6）之測定結果
任一實施例均與不含非特異反應抑制劑之比較例1大致相等。此處，根據實驗例1之結果，比較例1與CLEIA法之測定值（對照例1）相等，因此可判斷任一實施例均與對照例1相等。因此，可知添加本發明之抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體於20～50 μg/mL之範圍內不會給對照檢體之測定值造成影響。
（2）關於背離檢體（檢體編號7、8、10）之測定結果
於檢體編號7、檢體編號8及檢體編號10中，未添加非特異反應抑制劑之LTIA法之測定值（比較例1）分別成為1814 U/mL、738 U/mL及1857 U/mL，背離對照例1之測定值如上所述。
另一方面，關於檢體編號7，添加有20 μg/mL、50 μg/mL之本發明之抗L鏈λ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例9及實施例10）分別成為1262 U/mL及812 U/mL，為低於比較例1之數值。
併用20 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及20 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例13）、併用50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及50 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例14）分別成為1235 U/mL、779 U/mL，為低於比較例1之數值。
又，關於檢體編號10，添加有20 μg/mL、50 μg/mL之本發明之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例11及實施例12）分別成為1777 U/mL及1674 U/mL，為低於比較例1之數值。
併用20 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及20 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例13）、併用50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及50 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例14）分別成為1796 U/mL、1685 U/mL，為低於比較例1之數值。
（3）根據以上內容可知，於免疫測定方法中，即便在以抗L鏈λ單株抗體或抗L鏈κ單株抗體相對於檢體10 μL之重量為4.3～10.7 μg之低濃度使20～50 μg/mL之本發明之抗L鏈λ單株抗體或抗L鏈κ單株抗體存在於第1試劑之情形時，亦可抑制源自試樣之非特異反應。又，於分別以上述濃度併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之情形時，亦可同樣地抑制源自試樣之各種非特異反應。
[表5]
| sIL-2R之測定結果（U/mL） | ||||||
| 實施例9 | 實施例10 | 實施例11 | 對照例1 | |||
| 測定方法 | LTIA法 | LTIA法 | LTIA法 | CLEIA法 | ||
| 添加劑及添加濃度 | 20 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 | 50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 | 20 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | - | ||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 1 | 272 | 264 | 267 | 296 |
| 2 | 581 | 586 | 576 | 598 | ||
| 3 | 437 | 455 | 447 | 438 | ||
| 4 | 689 | 702 | 723 | 670 | ||
| 5 | 919 | 928 | 931 | 906 | ||
| 6 | 2026 | 2026 | 2048 | 2140 | ||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 7 | 1262 | 812 | 1808 | 672 |
| 8 | 668 | 641 | 733 | 601 | ||
| 10 | 1873 | 1861 | 1777 | 1640 | ||
| 實施例12 | 實施例13 | 實施例14 | 比較例2 | |||
| 測定方法 | LTIA法 | LTIA法 | LTIA法 | LTIA法 | ||
| 添加劑及添加濃度 | 50 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 20 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 20 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 50 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 無添加劑 | ||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 1 | 266 | 264 | 256 | 288 |
| 2 | 590 | 575 | 589 | 600 | ||
| 3 | 452 | 415 | 449 | 438 | ||
| 4 | 715 | 700 | 697 | 708 | ||
| 5 | 954 | 929 | 935 | 915 | ||
| 6 | 2041 | 2054 | 2041 | 2038 | ||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 7 | 1756 | 1235 | 779 | 1814 |
| 8 | 717 | 668 | 626 | 748 | ||
| 10 | 1674 | 1796 | 1685 | 1857 |
[實驗例5：LTIA法中之非特異反應抑制劑之濃度研究：sIL-2R之測定]
使用添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體及/或抗L鏈κ單株抗體之基於LTIA法之試劑，對試樣中之sIL-2R濃度進行測定，確認非特異反應抑制效果。
再者，作為試樣，使用：顯示出與藉由化學發光酵素免疫測定法（CLEIA法）所得之測定值（對照例1）相近之值之試樣（對照檢體：檢體31～33）；及呈現非特異反應，且大幅度背離對照例1之測定值之試樣（背離檢體：檢體34～37）。
[比較例7]（基於LTIA法之測定：添加抗人類IgG、IgA、IgM多株抗體）
以成為400 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加市售之抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體、抗人類IgM多株抗體（Sera Care Life Sciences, Inc. S製造），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表6。
[實施例15]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈κ單株抗體）
以成為400 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表6。
[實施例12]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈κ單株抗體）
以成為50 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表6。再者，表6中之『ND』意指無資料（No Data）。
[實施例2]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈κ單株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表6。
[實施例16]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體）
以成為400 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（S06215抗體），並以成為400 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表6。
[實施例14]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體）
以成為50 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），並以成為50 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表6。再者，表6中之『ND』意指無資料（No Data）。
[實施例3]（基於LTIA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），並以成為200 μg/mL之方式向比較例1所示之第1試劑中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例1相同之方法進行測定。將測定結果示於表6。
[表6]
| sIL-2R之測定結果（U/mL） | |||||||
| 實施例12 | 實施例2 | 實施例15 | 對照例1 | 比較例1 | |||
| 測定方法 | LTIA法 | LTIA法 | LTIA法 | CLEIA法 | LTIA法 | ||
| 添加劑及添加濃度 | 50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 | 200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 | 400 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | - | 無添加劑 | ||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 31 | 332 | 343 | 351 | 312 | 342 |
| 32 | 2568 | 2596 | 2571 | 2530 | 2537 | ||
| 33 | 3156 | 3213 | 3208 | 3180 | 3104 | ||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 34 | 419 | 372 | 350 | 306 | 504 |
| 35 | 480 | 447 | 470 | 328 | 632 | ||
| 36 | ND | 468 | 449 | 315 | 577 | ||
| 37 | ND | 345 | 291 | 200 | 506 | ||
| 實施例14 | 實施例3 | 實施例16 | 比較例7 | ||||
| 測定方法 | LTIA法 | LTIA法 | LTIA法 | LTIA法 | |||
| 添加劑及添加濃度 | 50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 50 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 400 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 400 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 400 μg/mL之抗人類IgG、IgA、IgM多株抗體 | |||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 31 | 358 | 340 | 356 | 376 | |
| 32 | 2525 | 2561 | 2599 | 2402 | |||
| 33 | 3212 | 3237 | 3220 | 3168 | |||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 34 | 434 | 369 | 410 | 464 | |
| 35 | 438 | 398 | 424 | 502 | |||
| 36 | ND | 452 | 472 | 508 | |||
| 37 | ND | 324 | 297 | 413 |
＜結果及探討＞
根據對照例1、比較例1、比較例7、實施例2、實施例3及實施例14～實施例16之結果，對本發明之非特異反應抑制劑之效果進行探討。
（1）關於對照檢體（檢體編號31～33）之測定結果
任一實施例均與不含非特異反應抑制劑之比較例1大致相等。此處，根據實驗例1之結果，比較例1與CLEIA法之測定值（對照例1）相等，因此可判斷任一實施例均與對照例1相等。又，由實驗例4之結果可知，於20～50 μg/mL之範圍內不會給對照檢體之測定值造成影響。因此，添加本發明之抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體於20～400 μg/mL之範圍內不會給對照檢體之測定值造成影響。
（2）關於背離檢體（檢體編號34～37）之測定結果
於檢體編號34～37中，未添加非特異反應抑制劑之LTIA法之測定值（比較例1）背離對照例1之測定值如上所述。
於檢體編號34中，添加有400 μg/mL之本發明之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例15）成為350 U/mL，有相較於比較例1而言更接近對照例1之傾向。進而，併用50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及50 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例14）、併用200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例3）、併用400 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及400 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例16）分別成為434 U/mL、369 U/mL、410 U/mL，有相較於比較例1而言更接近對照例1之傾向。其他檢體亦可確認到相同之傾向。
又，於檢體編號34中，添加有50 μg/mL、200 μg/mL或400 μg/mL之本發明之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例12、實施例2、實施例15）分別成為419 U/mL、372 U/mL、350 U/mL，以比抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體及抗人類IgM多株抗體（比較例7）少之添加濃度顯示出顯著之非特異反應抑制效果。又，併用50 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及50 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例14）、併用200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例3）、併用400 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體及400 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之LTIA法之測定值（實施例16）分別成為434 U/mL、369 U/mL、410 U/mL，以比抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體及抗人類IgM多株抗體（比較例7）少之添加濃度顯示出顯著之非特異反應抑制效果。其他檢體亦可確認到相同之傾向。
（3）根據以上內容可知，於免疫測定方法中，即便在以抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體相對於檢體10 μL之重量為4.3～85.7 μg之濃度使20～400 μg/mL之本發明之抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體存在於第1試劑之情形時，亦可抑制源自試樣之非特異反應。又，於分別以上述濃度併用抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之情形時，亦可同樣地抑制源自試樣之各種非特異反應。
又，藉由本發明，以比作為市售之非特異反應抑制劑之抗人類IgG多株抗體、抗人類IgA多株抗體、抗人類IgM多株抗體少之添加濃度亦可抑制非特異反應。
[實驗例6：ELISA法中之非特異反應抑制劑之濃度研究：sIL-2R之測定]
以低濃度添加有本發明之抗L鏈λ單株抗體及/或抗L鏈κ單株抗體之基於ELISA法之試劑，對試樣中之sIL-2R濃度進行測定，確認非特異反應抑制效果。
再者，作為試樣，使用：顯示出與藉由化學發光酵素免疫測定法（CLEIA法）所得之測定值（對照例1）相近之值的試樣（對照檢體：檢體31、33）；及呈現非特異反應，背離對照例1之測定值之試樣（背離檢體：檢體38～40）。
＜方法＞
（1）以成為10 μg/mL之方式將抗sIL-2R單株抗體（選殖編號92212）溶解於包含150 mM氯化鈉之20 mM磷酸緩衝液（pH為7.2；以下，稱為PBS）中，將100 μL之該溶解液分注於96孔微板之各孔中，於4℃靜置1晚。
（2）利用400 μL之包含0.05%Tween（註冊商標）20之PBS（以下，稱為PBST）將上述各孔洗淨3次後，添加200 μL之包含1%牛血清白蛋白之PBST（以下，稱為BSA-PBST），於室溫進行1小時封閉。將其作為ELISA用板。
（3）利用400 μL之PBST將上述ELISA用板之各孔洗淨3次後，利用向BSA-PBST中添加下述成分而成之檢體稀釋液稀釋至40倍而獲得試樣，將100 μL之該試樣添加於上述各孔中，於室溫靜置1小時。
（4）利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，將100 μL之經BSA-PBST稀釋為0.50 μg/mL而成之生物素標記抗sIL-2R單株抗體（選殖編號92204R）分注於上述各孔中，於室溫靜置1小時。
（5）利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，將100 μL之經BSA-PBST稀釋為0.20 μg/mL而成之HRP標記鏈球親生物素蛋白（streptavidin）（Thermo Fisher Scientific公司）分注於上述各孔中，於室溫靜置30分鐘。
（6）利用400 μL之PBST將上述各孔洗淨3次後，添加50 μL之包含0.2%鄰苯二胺及0.02%過氧化氫之檸檬酸緩衝液（pH為5.0），於室溫放置10分鐘後，添加50 μL之4.5 N硫酸而使酵素反應終止，測定波長492 nm時之吸光度。
（7）使用濃度已知之標準物質作為校準物，算出受檢試樣中之sIL-2R值。
（8）使用校準物之測定結果，製成使用各試劑之各試驗之校準曲線。使用所獲得之校準曲線，求出各檢體之測定值。關於各檢體，算出將比較例9、比較例10、實施例17中之測定值除以對照例1之測定值而得之值，以相對比（%）之形式進行評價。於相對比為90%以上110%以下之情形時，判定為未背離對照例1之測定值。
[比較例9]（基於ELISA法之測定：無添加劑）
使用BSA-PBST作為檢體稀釋液進行測定。將測定值之結果示於表7，將相對比之結果示於表8。
[比較例10]（基於ELISA法之測定：添加HBR-1）
以成為400 μg/mL之方式向比較例9所示之檢體稀釋液中添加市售之非特異反應抑制劑HBR-1（SCANTIBODIES LABORATORY, INC.製造），除此以外，利用與比較例9相同之方法進行測定。將測定值之結果示於表7，將相對比之結果示於表8。
[實施例17]（基於ELISA法之測定：添加抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體）
以成為200 μg/mL之方式向比較例9所示之檢體稀釋液中添加抗L鏈λ單株抗體（參考例1中所製備之S06215抗體），並以成為200 μg/mL之方式向比較例9所示之檢體稀釋液中添加抗L鏈κ單株抗體（參考例1中所製備之S06205抗體），除此以外，利用與比較例9相同之方法進行測定。將測定值之結果示於表7，將相對於對照例1之相對比之結果示於表8。
[表7]
| sIL-2R之測定結果（U/mL） | ||||||
| 實施例17 | 比較例9 | 比較例10 | 對照例1 | |||
| 測定方法 | ELISA法 | ELISA法 | ELISA法 | CLEIA法 | ||
| 添加劑及添加濃度 | 200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 無添加劑 | 400 μg/mL之HBR-1 | - | ||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 31 | 337 | 325 | 319 | 312 |
| 33 | 3265 | 3137 | 3148 | 3180 | ||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 38 | 884 | 991 | 1088 | 903 |
| 39 | 755 | 831 | 799 | 724 | ||
| 40 | 1408 | 1503 | 1586 | 1330 |
[表8]
| sIL-2R之測定結果（%） | ||||||
| 實施例17 | 比較例9 | 比較例10 | 對照例1 | |||
| 測定方法 | ELISA法 | ELISA法 | ELISA法 | CLEIA法 | ||
| 添加劑及添加濃度 | 200 μg/mL之抗L鏈λ單株抗體 200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體 | 無添加劑 | 400 μg/mL之HBR-1 | - | ||
| 對照檢體 | 檢體編號 | 31 | 108 | 104 | 102 | - |
| 33 | 103 | 99 | 99 | - | ||
| 背離檢體 | 檢體編號 | 38 | 98 | 110 | 120 | - |
| 39 | 104 | 115 | 110 | - | ||
| 40 | 106 | 113 | 119 | - |
＜結果及探討＞
根據對照例1、比較例9、比較例10及實施例17之結果，對本發明之非特異反應抑制劑之效果進行探討。將未添加添加劑之ELISA法之測定值（比較例9）相對於CLEIA法之測定值（對照例1）的比率（相對比）為99～104%之對照檢體31、33作為於ELISA法中未產生非特異反應之對照檢體來進行評價。又，將未添加添加劑之ELISA法之測定值（比較例9）相對於CLEIA法之測定值（對照例1）的比率（相對比）為110～115%之背離檢體38～40作為於ELISA法中產生了非特異反應之背離檢體來進行評價。
（1）關於對照檢體（檢體編號31、33）之測定結果
任一實施例均與對照例1及不含非特異反應抑制劑之比較例9大致相等。因此，可知添加本發明之抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體（分別為200 μg/mL）不會給對照檢體之測定值造成影響。
（2）關於背離檢體（檢體編號38～40）之測定結果
可知於檢體編號38～40中，未添加非特異反應抑制劑之ELISA法之測定值（比較例9）背離對照例1之測定值。
關於檢體編號38，添加有400 μg/mL之HBR-1之ELISA法之測定值（比較例10）成為1088 U/mL，非特異反應抑制效果不充分。
併用200 μg/mL之本發明之抗L鏈λ單株抗體及200 μg/mL之抗L鏈κ單株抗體之ELISA法之測定值（實施例17）成為884 U/mL，為低於比較例9之數值。其他背離檢體亦獲得相同之傾向。於有B/F分離之測定方法即ELISA試劑中，若將本發明之成分添加於檢體稀釋液中，則與有B/F分離之測定方法即CLEIA法之測定值之一致性亦提升。
藉由本發明，可抑制藉由市售之非特異反應抑制劑HBR-1亦無法抑制之非特異反應，因此本發明之抗L鏈λ單株抗體、抗L鏈κ單株抗體之非特異反應抑制效果為超過預期之結果。
（3）根據以上內容，於有B/F分離之測定方法即ELISA試劑中，若將本發明之成分添加於檢體稀釋液中，則與CLEIA法之測定值之一致性亦提升。
一般而言，若有B/F分離，則不易產生非特異反應，但對於稍微產生之非特異反應，可能可藉由本成分來抑制。
[產業上之可利用性]
根據本發明，於藉由於抗L鏈λ單株抗體及抗L鏈κ單株抗體之兩者或任一者之存在下進行免疫反應而於試樣中包含非特異因子之情形時，亦可抑制過去利用非特異反應抑制劑無法消除之非特異反應，可實現準確之免疫測定方法。
無
無
Claims (19)
- 一種免疫學測定方法，其係對試樣中之測定對象物質進行免疫學測定之方法，其特徵在於：於抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下、抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體之存在下、或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下進行免疫反應； 其中，上述測定對象物質不包括抗免疫球蛋白L鏈λ抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ抗體。
- 如請求項1之免疫學測定方法，其係基於均質法之免疫學測定方法或基於異質法之免疫學測定方法。
- 如請求項2之免疫學測定方法，其包括如下步驟： 使包含測定對象物質之試樣與上述抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體或上述抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體接觸之步驟； 添加針對上述測定對象物質之特異性結合同伴（specific binding partner）之步驟；及 檢測來自上述溶液中之測定對象物質與特異性結合同伴之反應之訊號之步驟。
- 如請求項2之免疫學測定方法，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法。
- 如請求項4之免疫學測定方法，其包括如下步驟： 使包含測定對象物質之試樣與上述抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體或上述抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體在溶液中接觸之步驟； 向上述溶液中添加載持針對上述測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子之步驟；及 對上述溶液中之上述乳膠粒子之凝集程度進行光學檢測之步驟。
- 一種非特異反應抑制方法，其係對試樣中之測定對象物質進行免疫學測定之方法中之非特異反應抑制方法，且 於抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下、抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體之存在下、或抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之存在下進行免疫反應。
- 如請求項6之非特異反應抑制方法，其中，上述免疫學測定方法為基於均質法之免疫學測定方法或基於異質法之免疫學測定方法。
- 如請求項7之非特異反應抑制方法，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法。
- 如請求項8之非特異反應抑制方法，其包括如下步驟： 使包含測定對象物質之試樣與上述抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體或上述抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體在溶液中接觸之步驟； 向上述溶液中添加載持針對上述測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子之步驟；及 對上述溶液中之上述乳膠粒子之凝集程度進行光學檢測之步驟。
- 一種免疫學測定用試劑，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。
- 如請求項10之免疫學測定用試劑，其用於基於均質法之免疫學測定方法或基於異質法之免疫學測定方法。
- 如請求項11之免疫學測定用試劑，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法。
- 一種免疫學測定用試劑套組，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。
- 如請求項13之免疫學測定用試劑套組，其用於基於均質法之免疫學測定方法或基於異質法之免疫學測定方法。
- 如請求項14之免疫學測定用試劑套組，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法。
- 如請求項14之免疫學測定用試劑套組，其中，上述基於均質法之免疫學測定方法為乳膠免疫比濁法，且上述免疫學測定用試劑套組包含： （1）第1試劑，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者； （2）第2試劑，其包含載持針對測定對象物質之特異性結合同伴之乳膠粒子。
- 一種組成物，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者。
- 一種免疫學測定方法中之非特異反應抑制劑，其包含抗免疫球蛋白L鏈λ單株抗體及抗免疫球蛋白L鏈κ單株抗體之兩者或任一者作為有效成分。
- 一種請求項17之組成物之用途，其於免疫學測定方法中用作非特異反應抑制劑。
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