CN105031645A - 一种人用狂犬病疫苗及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种人用狂犬病疫苗，其特征在于：含有狂犬病毒灭活疫苗原料和复合佐剂，其中复合佐剂由氢氧化锌胶体、角鲨烯、透明质酸和Tween-80组成；每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用氢氧化锌胶体0.1-10mg，角鲨烯10-1000μg，透明质酸10-1000μg，Tween-8010-1000μg。采用本发明的复合佐剂，大大提高免疫应答时间，快速产生中和，免疫持续时间较长，而且制备工艺简单，所需设备易得，大大降低工业生产成本，得到的狂犬病疫苗的稳定性也大大提高。

Description

一种人用狂犬病疫苗及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种人用狂犬病疫苗及其制备方法，特别涉及含有复合佐剂的人用狂犬病疫苗及其制备方法。

背景技术

狂犬病是一种自然疫原性疾病，地理分布广泛，除南极州与大洋州外，全世界各大洲均有流行。中国属于狂犬病高发国家之一，目前居世界第二位。造成人狂犬病发病的主要原因是公众养犬量增加，而公众对狂犬病的危害认识不足，被犬咬伤者未采取正确的伤口处理和疫苗接种等措施也是狂犬病发病的重要因素。

抗狂犬病免疫接种是早期免疫预防医学史中的成功范例之一。早在19世纪80年代巴斯德开创疫苗使用到现在，已发展了五代疫苗，早期为神经组织来源疫苗，第二代为禽胚培养疫苗，第三代为细胞培养疫苗，第四代为亚单位疫苗及精制疫苗，以及正在发展的新一代基因工程疫苗。

疫苗佐剂在疫苗的研发中具有重要的作用。由于现代分子生物学技术和基因工程技术及免疫学的应用，人工合成肽段、纯化的重组抗原亚单位和质粒D等新型疫苗的研宄已取得了初步成果。尽管这些疫苗有很多优越性，然而这些疫苗普遍存在免疫原性弱,难以诱导机体产生有效免疫应答等不足。而传统的灭活疫苗虽然具备了制作工艺简单的特点，但仍存在灭活过程中有可能改变有效的抗原决定簇，产生的免疫应答维持时间不长，且需要多次免疫等问题。因此需要添加佐剂以增强机体对新型疫苗和灭活疫苗的免疫应答。

CN1824302A公开了新型人用狂犬疫苗的制备方法及用途，其基本特征在于将市售的无佐剂的人用狂犬疫苗吸附于纳米铝佐剂上，所生成的新型人用狂犬疫苗，新型人用狂犬疫苗所采用的纳米铝佐剂的颗粒直径为1－999纳米，成分为氢氧化铝化合物。纳米铝佐剂增加10－20倍地吸附人用狂犬疫苗，具有明显的“爆释”效应。

此外，现有技术中还公开了使用其他类型复合佐剂，但这些狂犬病疫苗免疫应答时间较长，而且免疫持久水平也较低，接种后不能及时产生有效保护水平的中和抗体，致使不能快速治疗疾病。

发明内容

针对现有技术不足，本发明提供一种人用狂犬病疫苗及其制备方法，特别涉及含有复合佐剂的人用狂犬病疫苗及其制备方法。

为达到上述发明目的，本发明可采用以下任何一个技术方案：

本发明一方面提供一种人用狂犬病疫苗，其特征在于：含有狂犬病毒灭活疫苗原料和复合佐剂，其中复合佐剂由氢氧化锌胶体、角鲨烯、透明质酸和Tween-80组成；每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用氢氧化锌胶体0.1-10mg，角鲨烯10-1000μg，透明质酸10-1000μg，Tween-8010-1000μg。

每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料优选使用氢氧化锌胶体1-10mg，更优选1-5mg。

每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料优选使用角鲨烯50-500μg，更优选100-300μg；透明质酸优选50-500μg，更优选100-300μg；Tween-8050-500μg，更优选100-300μg。

本发明还提供了一种制备人用狂犬病疫苗的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

(1)将葡萄糖酸锌和氢氧化钠分别配制成水溶液，在无菌条件下，将氢氧化钠溶液缓慢滴加入葡萄糖酸锌溶液中，充分搅拌，得到氢氧化锌胶体，备用；

(2)将角鲨烯和透明质酸分别配制成溶液，备用；

(3)将氢氧化锌胶体、角鲨烯溶液、透明质酸溶液、Tween-80以及狂犬病毒灭活疫苗原料混合，振荡混匀，制成人用狂犬病疫苗。

角鲨烯是一种脂质不皂化物，最初是从鲨鱼的肝油中发现的，1914年被命名为Squalene,其化学名为(6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-三十碳六烯，属开链三萜，又称鱼肝油萜，具有提高体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能，是一种无毒性的具有防病治病作用的海洋生物活性物质。

透明质酸是D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的双糖单位玻尿酸(Hyaluronan)，又称糖醛酸，基本结构是由两个双糖单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的大型多糖类。与其它粘多糖不同，它不含硫。它的透明质分子能携带500倍以上的水分。

Tween-80为失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚。由失水山梨醇单油酸酯与环氧乙烷聚合而成，是一种非离子型表面活性剂。

狂犬病毒灭活疫苗原料为市售产品。

本发明通过优化复合佐剂和制备工艺，与现有技术相比，具有以下有益效果：

1、使用复合佐剂，大大提高免疫应答时间，快速产生中和；

2、使用复合佐剂，免疫持续时间较长；

3、制备工艺简单，所需设备易得，大大降低工业生产成本，得到的狂犬病疫苗的稳定性也大大提高。

具体实施方式

下面结合具体实施例来对本发明进行进一步说明，但并不将本发明局限于这些具体实施方式。本领域技术人员应该认识到，本发明涵盖了权利要求书范围内所可能包括的所有备选方案、改进方案和等效方案。

实施例1

人用狂犬病疫苗由下列成分组成：每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用氢氧化锌0.1mg，角鲨烯10μg，透明质酸10μg，Tween-8010μg。

制备方法：将葡萄糖酸锌加入无菌双蒸水中，充分搅拌溶解，得葡萄糖酸锌溶液。将氢氧化钠加入无菌双蒸水中，充分搅拌溶解，得氢氧化钠溶液。在无菌条件下，分别用封闭式薄膜过滤器将葡萄糖酸锌溶液和氢氧化钠溶液过滤除菌后备用。中速搅拌下，将氢氧化钠溶液缓慢滴加入葡萄糖酸锌溶液中，充分搅拌，得到氢氧化锌胶体，备用；

将角鲨烯和透明质酸分别加入到无菌双蒸水中，充分搅拌溶解，并在无菌间中用无菌滤膜过滤器除菌，得到角鲨烯和透明质酸溶液。

将上述制备的氢氧化锌胶体、角鲨烯水溶液、透明质酸水溶液、Tween-80以及狂犬病毒灭活疫苗原料混合，振荡混匀，制成人用狂犬病疫苗。

实施例2

人用狂犬病疫苗由下列成分组成：每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用氢氧化锌1mg，角鲨烯100μg，透明质酸100μg，Tween-80100μg。

制备方法：与实施例1相同。

实施例3

人用狂犬病疫苗由下列成分组成：每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用氢氧化锌2mg，角鲨烯300μg，透明质酸300μg，Tween-80300μg。

制备方法：与实施例1相同。

实施例4

人用狂犬病疫苗由下列成分组成：每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用氢氧化锌0.5mg，角鲨烯100μg，透明质酸500μg，Tween-80200μg。

制备方法：与实施例1相同。

实施例5

人用狂犬病疫苗由下列成分组成：每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用氢氧化锌5mg，角鲨烯800μg，透明质酸500μg，Tween-80500μg。

制备方法：与实施例1相同。

免疫试验

对本发明的疫苗免疫情况进行试验，设试验组5组(以实施例1-5所制备的疫苗)和对照组2组(生理盐水对照和以氢氧化铝为佐剂的疫苗)。随机在抽取56只小鼠，分为7组，每组8只，对小鼠注射疫苗，免疫部位均为小鼠胫骨前肌。小鼠血清中抗-RABVIgG水平的检测采用间接ELISA法。分别于初免疫后0.5、1、2、4、8、12和16周，经尾静脉采血0.1ml，分离血清，以纯化灭活的RABV包被96孔板，将各实验组小鼠血清样品以初始稀释度为1:40进行倍比稀释，详细结果见表1所示:

表1：小鼠初免后不同时间血清抗-RABVIgG水平

从表1数据可知，使用氢氧化锌胶体、角鲨烯、透明质酸和Tween-80复合佐剂的人用狂犬病疫苗可显著提高提高免疫应答时间，快速产生中和，而且免疫持续时间较长，得到的狂犬病疫苗的稳定性也大大提高。

Claims (4)

1.一种人用狂犬病疫苗，其特征在于：含有狂犬病毒灭活疫苗原料和复合佐剂，其中复合佐剂由氢氧化锌胶体、角鲨烯、透明质酸和Tween-80组成；每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用氢氧化锌胶体0.1-10mg，角鲨烯10-1000μg，透明质酸10-1000μg，Tween-8010-1000μg。

2.如权利要求1所述的人用狂犬病疫苗，其特征在于每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用氢氧化锌胶体1-10mg，优选1-5mg。

3.如权利要求1所述的人用狂犬病疫苗，其特征在于每剂量所述的狂犬病毒灭活疫苗原料使用角鲨烯50-500μg，优选100-300μg；透明质酸50-500μg，优选100-300μg；Tween-8050-500μg。

4.一种制备如权利要求1所述人用狂犬病疫苗的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

(1)将葡萄糖酸锌和氢氧化钠分别配制成溶液，在无菌条件下，将氢氧化钠溶液缓慢滴加入葡萄糖酸锌溶液中，充分搅拌，得到氢氧化锌胶体，备用；

(2)将角鲨烯和透明质酸分别配制成溶液，备用；

(3)将氢氧化锌胶体、角鲨烯溶液、透明质酸溶液、Tween-80以及狂犬病毒灭活疫苗原料混合，振荡混匀，制成人用狂犬病疫苗。