CN105004719A - 一种尿碘测定试剂盒及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种尿液碘测定试剂盒,是在现有试剂盒的吸附剂、稀释液、显色剂和标准品基础上,选择质量百分比浓度为5~12%的过氧化氢、过氧乙酸、次氯酸钠或高锰酸钾溶液为氧化剂并设置了专用终止液,其中所述终止液是质量百分比浓度为1%~20%的硫酸、盐酸、柠檬酸、氟化钠、叠氮钠或碘酸钾溶液,或其任意几种按任意质量百分比组合的溶液。本发明的试剂盒使用单一吸附剂和氧化剂,显著降低了成本,并利用终止液快速终止反应,确保了在一定的时间内颜色不再发生明显变化,实现了检测结果显色稳定和检测结果的判读准确。
Description
技术领域
本发明涉及一种尿检试剂盒及其应用,尤其涉及一种尿碘测定试剂盒及其应用,属于体外诊断试剂领域。
背景技术
碘是人体的必需微量元素之一,其生物学作用主要通过在甲状腺内合成的甲状腺素来体现的。人体一般通过空气、饮水和食物等途径获得碘。通常,人体摄入的碘約90%由尿排出,5~10%由粪便排出。基于此,尿碘指标测定密切关联到临床上对人体碘营养状况的评价。
尿碘的分析方法有分光光度法、气象色谱法、电化学法、离子色谱法等,但这些方法有的分析过程复杂,有的仪器设备昂贵,不适宜现场快速检测。目前,我国现行的尿碘测定标准方法是砷铈催化分光光度法,该方法具有灵敏度高、重复性好等优点,但尿样需采用过硫酸铵消化处理,耗时较长,试剂中的三氧化二砷容易对环境造成污染,对人体健康造成危害。王加义CN1811394A专利公开了一种尿液碘测定试剂盒,该专利涉及的尿液碘的测定方法具有灵敏度高和简便快速等优点。但该方法使用的吸附剂和氧化剂均较复杂,成本较高,尤其是在判读结果时,由于反应没有达到终点或处于平衡状态,颜色一直处于变化之中,致使对测定结果,特别是半定量目测结果无法准确判读,造成误判或误差。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明要解决的问题是提供一种成本低廉、简便快速、检测结果易判断的尿碘测定试剂盒及其应用。
本发明所述的尿液碘测定试剂盒由吸附剂、稀释液、显色剂、氧化剂、终止液、标准品和色标比色板组成;其中,所述吸附剂是硅胶、氧化铝、活性炭或分子筛,其用量为尿样重量的3~20分之一,优选4~10分之一,最优选6~8分之一;所述稀释液是由pH3.5~5.5的醋酸或柠檬酸缓冲液与质量百分比浓度为1~8%的NaCL、MgCL2或NaBr中的一种和质量百分比浓度为0.1%~5%的硫柳汞或叠氮钠制成的溶液;其中缓冲液的pH值优选3.5~4.5;NaCL、MgCL2或NaBr的质量百分比浓度优选1%~6%,更优选4%~5.5%;硫柳汞或叠氮钠的质量百分浓度优选0.5%~4%,更优选1%~3%;所述显色剂是质量百分比浓度为3%~10%的四甲基联苯胺溶液;其中浓度优选0.5%~5%,更优选3%~4.5%;所述标准品是指由碘浓度为50~350ug/L的尿液(尿液碘)、碘酸钾、碘化钾中的一种或几种按任意质量百分比混合组成,优选是碘浓度为50~350ug/L的碘化钾尿液混合液;所述色标比色板是由碘浓度为50~350ug/L的碘化钾尿液混合液按设定的碘浓度梯度分别进行同本试剂盒所述的检测反应,然后将产生的颜色作为色标制成的对应各浓度的比色板,该比色板包括尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的色标;
其特征在于:
所述氧化剂是质量百分比浓度为5~12%的过氧化氢、过氧乙酸、次氯酸钠或高锰酸钾溶液;
所述终止液是质量百分比浓度为1%~20%的硫酸、盐酸、柠檬酸、氟化钠、叠氮钠或碘酸钾溶液,或其任意几种按任意质量百分比组合的溶液。
上述的尿液碘测定试剂盒中:所述氧化剂优选是质量百分比浓度为5~10%的过氧化氢、过氧乙酸、次氯酸钠或高锰酸钾溶液;所述终止液优选是质量百分比浓度为2%~15%的柠檬酸、氟化钠、叠氮钠或碘酸钾溶液。
上述的尿液碘测定试剂盒中:所述氧化剂进一步优选是质量百分比浓度为8~10%的过氧乙酸溶液;所述终止液进一步优选是质量百分比浓度为8%~12%的柠檬酸、叠氮钠或碘酸钾溶液。
上述的尿液碘测定试剂盒中:所述氧化剂再进一步优选是质量百分比浓度为8.5~9.5%的过氧乙酸溶液;所述终止液再进一步优选是质量百分比浓度为9%~11%的柠檬酸或叠氮钠溶液。
上述的尿液碘测定试剂盒中:所述氧化剂最优选是质量百分比浓度为9%的过氧乙酸溶液;所述终止液最优选是质量百分比浓度为10%的叠氮钠溶液。
本发明所述的尿液碘测定试剂盒在检测尿液中碘含量的应用。
应用本发明所述试剂盒进行尿液碘测定的步骤如下:
1.半定量目测法:
a.吸附:取一定量的稀释液于吸附剂瓶中,加入1ml待测尿液,摇匀后过滤(吸附剂瓶盖带有过滤膜),收集滤液,备用;
b.测定:取一定量的滤液于一新的玻璃管中,加入一定量的显色剂,立即混匀,再加入一定量的氧化剂,立即计时,摇匀,室温准确反应一定时间(1~3分钟),加终止液,混匀,于1~5分钟内对照标准色标比色板,根据比色判定待测尿液的碘含量。
2.定量比色法:
a.吸附:同上述半定量目测法操作。
b.测定:取一定量滤液于一新的试管中,加入一定量显色剂,混匀,再加入一定量的氧化剂,立即计时,反应一定时间后(1~3分钟),加终止液,,混匀,1~5分钟内于分光光度计测其吸光度值。用一定浓度的标准品替代尿液标本,用相同方法测其吸光度值。根据标准管与样品管的吸光度值计算出待测尿液的碘含量。吸光度值与碘浓度成正比。
测定过程也可在自动或半自动仪器上进行。使用带有自动计时和判读功能的仪器进行检测时,可不加终止液。
本发明公开的尿液碘测定试剂盒所具有的突出特点是:
(1)本发明的试剂盒经过反复试验优化选定了使用单一吸附剂和氧化剂,显著降低了成本,与同类试剂盒相比价格低廉。
(2)本发明提供的试剂盒专门设置了终止液,当实际反应一定时间后,加入本试剂盒专用终止液,能立即使反应终止,确保了在一定的时间内颜色不再发生明显变化,实现了检测结果显色稳定和检测结果的判读准确。显著克服了现有类似试剂盒由于反应没有达到终点或处于平衡状态,颜色一直处于变化之中,使测定结果无法准确判读,或存在误差的不足。
具体实施方式
实施例1
本发明所述的尿液碘测定试剂盒由吸附剂、稀释液、显色剂、氧化剂、终止液、标准品和色标比色板组成;其中,所述吸附剂是硅胶,其用量为尿样重量的6~8分之一;所述稀释液是由pH4的醋酸缓冲液与质量百分比浓度为5%的MgCL2和质量百分比浓度为2%的叠氮钠制成的溶液;所述显色剂是质量百分比浓度为4.5%的四甲基联苯胺溶液;所述氧化剂是质量百分比浓度为9%的过氧乙酸溶液;所述终止液是质量百分比浓度为10%的叠氮钠溶液;所述标准品是碘浓度为50~350ug/L的碘化钾尿液混合液;所述色标比色板是由碘浓度为50~350ug/L的碘化钾尿液混合液按设定的碘浓度梯度分别进行同本试剂盒所述的检测反应,然后将产生的颜色作为色标制成的对应各浓度的比色板,该比色板包括尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的色标。
实施例2
本发明所述的尿液碘测定试剂盒由吸附剂、稀释液、显色剂、氧化剂、终止液、标准品和色标比色板组成;其中,所述吸附剂是分子筛,其用量为尿样重量的3~5分之一;所述稀释液是由pH4.5的柠檬酸缓冲液与质量百分比浓度为3%的NaBr和质量百分比浓度为5%的叠氮钠制成的溶液;所述显色剂是质量百分比浓度为1%的四甲基联苯胺溶液;所述氧化剂是质量百分比浓度为10%的次氯酸钠溶液;所述终止液是质量百分比浓度为2%的氟化钠溶液;所述标准品是碘浓度为50~350ug/L的碘酸钾尿液混合液;所述色标比色板是由碘浓度为50~350ug/L的碘酸钾尿液混合液按设定的碘浓度梯度分别进行同本试剂盒所述的检测反应,然后将产生的颜色作为色标制成的对应各浓度的比色板,该比色板包括尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的色标。
实施例3
本发明所述的尿液碘测定试剂盒由吸附剂、稀释液、显色剂、氧化剂、终止液、标准品和色标比色板组成;其中,所述吸附剂是氧化铝,其用量为尿样重量的15~20分之一;所述稀释液是由pH5.5的醋酸缓冲液与质量百分比浓度为8%的NaCL和质量百分比浓度为0.2%的硫柳汞制成的溶液;所述显色剂是质量百分比浓度为10%的四甲基联苯胺溶液;所述氧化剂是质量百分比浓度为5%的高锰酸溶液;所述终止液是质量百分比浓度为1%的硫酸溶液;所述标准品是碘浓度为50~350ug/L的碘化钾尿液混合液;所述色标比色板是由碘浓度为50~350ug/L的碘化钾尿液混合液按设定的碘浓度梯度分别进行同本试剂盒所述的检测反应,然后将产生的颜色作为色标制成的对应各浓度的比色板,该比色板包括尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的色标。
实施例4
1.吸附剂:每瓶0.15克活性炭。
2.稀释液:pH4.5的醋酸缓冲液与质量百分浓度为6%的NaCL和质量百分浓度1%的硫柳汞。
3.显色剂:质量百分浓度为4%四甲基联苯胺。
4.氧化剂:质量百分浓度为10%的过氧乙酸。
5.终止液:质量百分浓度为2%的柠檬酸。
6.标准品:由150mg/L碘的尿液经冷冻干燥后制成。
7.标准色板:用碘浓度为50~350ug/L的尿液(尿液碘)按尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的碘浓度梯度分别进行同本试剂盒所述的检测反应,然后将产生的颜色作为色标制成对应各浓度的比色板,该比色板包括尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的色标。
应用上述试剂盒对待测尿液样品检测步骤如下:
1.半定量目测法:
a.取含有吸附剂的试剂瓶1个,加稀释液3毫升,加尿样1毫升,混匀,过滤。收集滤液,备用。
b.取1毫升滤液于一试管中,加入100微升显色剂,立即混匀,再加入10微升氧化剂,立即计时,摇匀,室温准确反应60秒,加终止液50微升,,混匀,于5分钟内对照标准色标比色板,根据比色判定待测尿液的碘含量。
2.定量比色法:
a.吸附:同上述半定量目测法操作。
b.测定:取1毫升滤液于一试管中,加入100微升显色剂,立即混匀,再加入10微升氧化剂,立即计时,摇匀,室温准确反应60秒,加终止液50微升,混匀,1~5分钟内于分光光度计在630nm比色测其吸光度值。用标准品替代尿液标本,用相同方法测其吸光度值。根据标准管与样品管的吸光度值计算出待测尿液样品的碘含量。吸光度值与碘浓度成正比。
3.测定过程也可在自动或半自动仪器上进行。使用带有自动计时和判读功能的仪器进行检测时,可不加终止液。
实施例5
1.吸附剂:每瓶0.15克氧化铝。
2.稀释液:pH5.5的磷酸缓冲液与质量百分浓度为5%的NaBr和质量百分浓度2%的叠氮钠。
3.显色剂:质量百分浓度为5%四甲基联苯胺。
4.氧化剂:质量百分浓度为7%的次氯酸钠。
5.终止液:质量百分浓度为10%的碘酸钾。
6.标准品:由150mg/L碘的尿液和碘化钾经冷冻干燥后制成。
7.标准色板:用碘浓度为50~350ug/L的尿液(尿液碘)按尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的碘浓度梯度分别进行同本试剂盒所述的检测反应,然后将产生的颜色作为色标制成对应各浓度的比色板,该比色板包括尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的色标。
应用上述试剂盒对待测尿液样品检测步骤同实施例4。
实施例6
1.吸附剂:每瓶0.3克活性炭。
2.稀释液:pH3.5的醋酸缓冲液与质量百分浓度为1%的MgCL2和质量百分浓度3%的硫柳汞。
3.显色剂:质量百分浓度为2%四甲基联苯胺。
4.氧化剂:质量百分浓度为5%的过氧化氢。
5.终止液:质量百分浓度为15%的叠氮钠。
6.标准品:由150mg/L碘的尿液和碘酸钾经冷冻干燥后制成。
7.标准色板:用碘浓度为50~350ug/L的尿液(尿液碘)按尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的碘浓度梯度分别进行同本试剂盒所述的检测反应,然后将产生的颜色作为色标制成对应各浓度的比色板,该比色板包括尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的色标。
应用上述试剂盒对待测尿液样品检测步骤同实施例4。
实施例7
色标比色板制备:取碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的尿液碘化钾标准品各1份,按实施例4所述方法对该标准品进行检测,将检测反应后产生的颜色作为色标,拍照印刷制成对应尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的色标比色板,即为本发明试剂盒所述标准色标比色板。
实施例8
用本发明试剂盒与同类产品对同一尿液样品分别进行检测,以630nm比色测其吸光度值,比较显色结果稳定性。
对比试剂盒:北京中生金域诊断技术有限公司生产,发明专利CN1811394A产品。
对比试剂盒检测操作按其说明书介绍进行,本发明试剂盒及检测操作按实施例4所述方法进行。
结果如下:
由上述结果显示:当使用本试剂盒专用终止液后,在一定的时间内颜色不再发生明显变化,即630nm比色的吸光度值相对稳定,实现了检测结果显色稳定和检测结果的判读准确。显著克服了对比试剂盒由于反应没有达到终点或处于平衡状态,颜色一直处于变化之中,使测定结果无法准确判读,或存在误差的不足。
Claims (6)
1.一种尿液碘测定试剂盒,该试剂盒由吸附剂、稀释液、显色剂、氧化剂、终止液、标准品和色标比色板组成;其中,所述吸附剂是硅胶、氧化铝、活性炭或分子筛,其用量为尿样重量的3~20分之一;所述稀释液是由pH3.5~5.5的醋酸或柠檬酸缓冲液与质量百分比浓度为1~8%的NaCL、MgCL2或NaBr中的一种和质量百分比浓度为0.1%~5%的硫柳汞或叠氮钠制成的溶液;所述显色剂是质量百分比浓度为3%~10%的四甲基联苯胺溶液;所述标准品是碘浓度为50~350ug/L的碘化钾尿液混合液;所述色标比色板是由碘浓度为50~350ug/L的碘化钾尿液混合液按设定的碘浓度梯度分别进行同本试剂盒所述的检测反应,然后将产生的颜色作为色标制成的对应各浓度的比色板,该比色板包括尿碘浓度分别为50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L、300ug/L、350ug/L的色标;
其特征在于:
所述氧化剂是质量百分比浓度为5~12%的过氧化氢、过氧乙酸、次氯酸钠或高锰酸钾溶液;
所述终止液是质量百分比浓度为1%~20%的硫酸、盐酸、柠檬酸、氟化钠、叠氮钠或碘酸钾溶液,或其任意几种按任意质量百分比组合的溶液。
2.根据权利要求1所述的尿液碘测定试剂盒,其特征在于:所述氧化剂是质量百分比浓度为5~10%的过氧化氢、过氧乙酸、次氯酸钠或高锰酸钾溶液;所述终止液是质量百分比浓度为2%~15%的柠檬酸、氟化钠、叠氮钠或碘酸钾溶液。
3.根据权利要求2所述的尿液碘测定试剂盒,其特征在于:所述氧化剂是质量百分比浓度为8~10%的过氧乙酸溶液;所述终止液是质量百分比浓度为8%~12%的柠檬酸、叠氮钠或碘酸钾溶液。
4.根据权利要求3所述的尿液碘测定试剂盒,其特征在于:所述氧化剂是质量百分比浓度为8.5~9.5%的过氧乙酸溶液;所述终止液是质量百分比浓度为9%~11%的柠檬酸或叠氮钠溶液。
5.根据权利要求4所述的尿液碘测定试剂盒,其特征在于:所述氧化剂是质量百分比浓度为9%的过氧乙酸溶液;所述终止液是质量百分比浓度为10%的叠氮钠溶液。
6.权利要求1~5之一所述的尿液碘测定试剂盒在检测尿液中碘含量的应用。
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