CN104884086A - 经鼻流感疫苗组合物 - Google Patents
经鼻流感疫苗组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104884086A CN104884086A CN201380068031.4A CN201380068031A CN104884086A CN 104884086 A CN104884086 A CN 104884086A CN 201380068031 A CN201380068031 A CN 201380068031A CN 104884086 A CN104884086 A CN 104884086A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- spray
- vaccine composition
- based agent
- gel
- per nasal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0043—Nose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明涉及一种经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其特征在于,包含流感病毒灭活全粒子抗原及含有羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂,且不含有佐剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物。
背景技术
流感为由流感病毒引起的急性呼吸器传染病,尤其在冬季,每年均会流行。另外,有时成为世界性的大流行,因而重症化而至死亡的情况也不少。对于流感,已知有通过接种流感疫苗而具有一定的预防效果,在流行时期之前广泛地进行其接种。
在日本,流感疫苗仅皮下接种流感病毒抗原的灭活蛋白质成分的流感疫苗被认可,目前,该裂解疫苗被用作季节性流感疫苗。这样的皮下接种型疫苗在肺炎等的流感的重症化预防方面有效性高,但作为流感病毒的感染部位的上呼吸道粘膜中的抗体诱导能力低,感染防御效果不能说充分。另外,也存在观察到注射给药导致的疼痛或接种局部的炎症等导致的副作用的问题点。
从这样的问题点出发,迄今为止,从多种多样的侧面进行了许多尝试,作为新的疫苗接种方法,经鼻给药型疫苗备受瞩目。但是,报道有:在将目前被通用的裂解疫苗照原样经鼻给药的情况下,在实验动物及人中无法诱导对流感病毒的良好的免疫应答。
其中,将大肠杆菌易热性毒素用于佐剂的世界上最早的裂解疫苗的经鼻给药型流感疫苗在瑞士获得认可,从2000年10月开始出售[BernaBiotech社(瑞士)制、商品名Nasalflu],但由于佐剂的毒性,在2004年2月临床使用被中止。另外,在专利文献1中也公开有含有佐剂的经鼻给药型流感疫苗,虽显示通过含有佐剂而提高免疫诱导能力,但在面临实用化时,担心使用的佐剂的毒性。
另外,在经鼻给药时,对于复杂的鼻腔内的构造,谋求使流感疫苗广范围地遍及并长久展布及滞留,必须以专利文献2所示的基剂中的喷雾方式进行给药等。
如上所述,迫切期望从皮下或肌肉内等接种的现有的流感疫苗出发,进行作为新一代流感疫苗的经鼻给药型疫苗的开发和实用化,但如何抑制为了提高免疫诱导能力而使用的佐剂的毒性等,在面临实用化方面存在各种问题。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:WO2010/114169
专利文献2:WO2007/123193
发明内容
本发明的目的在于,提供一种使用以前被认可并使用的流感病毒灭活全粒子疫苗作为抗原、不使用佐剂、以更少的抗原量的有效且副作用反应小的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物及其制造方法以及流感的预防方法。
本发明人等鉴于上述问题点,进行了潜心研究,结果发现,通过将含有羧基乙烯基聚合物的经鼻粘膜喷雾给药凝胶基剂与流感病毒灭活全粒子疫苗组合,可不使用佐剂而提高对人类的免疫诱导能力,其中该经鼻粘膜喷雾给药凝胶基剂为了附加喷雾性能而从外部赋予剪切力进行了处理,直至完成本发明。即,本申请发明如下所示。
[1]一种经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其特征在于,包含:
(i)流感病毒灭活全粒子、以及
(ii)为了附加喷雾性能而从外部赋予剪切力处理后的含有羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂,
并且所述流感疫苗组合物不含有佐剂。
[2]根据[1]所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,(i)的流感病毒灭活全粒子,每1种疫苗病毒株为1~500μgHA/mL。
[3]根据[1]或[2]所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,含有0.1w/v%~1.0w/v%的羧基乙烯基聚合物。
[4]根据[1]~[3]中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其使用为了附加下述喷雾性能而从外部赋予剪切力进行了处理的含有羧基乙烯基聚合物的喷雾给药凝胶基剂:(1)制剂粒度分布范围、(2)喷雾密度均匀性、和/或(3)喷射角度控制。
[5]根据[1]~[4]中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其使用0.5w/v%~2.0w/v%的含有羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂,为了附加作为喷雾性能的(1)制剂粒度分布范围、(2)喷雾密度均匀性、和/或(3)喷射角度控制,从外部赋予剪切力进行处理,得到喷雾给药凝胶基剂之后,与含有流感病毒灭活全粒子的病毒原液在不赋予应力的条件下在短时间内均匀地混合而得到。
[6]根据[1]~[5]中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其使用对含有羧基乙烯基聚合物的基剂从外部赋予剪切力而附加有下述喷雾性能的喷雾给药凝胶基剂而制造:(1)在制剂粒度分布中,制剂平均粒径在30μm~80μm的范围,粒度分布为80%以上在10μm~100μm的范围,(2)喷雾密度成为没有偏斜的均等的全锥形,(3)喷射角度控制在30°~70°的范围。
[7]根据[1]~[5]中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其使用对含有羧基乙烯基聚合物的基剂从外部赋予剪切力而附加有下述喷雾性能的喷雾给药凝胶基剂而制造:(1)在制剂粒度分布中,制剂平均粒径在40μm~70μm的范围,粒度分布为90%以上在10μm~100μm的范围,(2)喷雾密度成为没有偏斜的均等的全锥形,(3)喷射角度控制在40°~60°的范围。
[8]根据[1]~[7]中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其为了能够使用不具有泵功能的可喷雾的设备进行喷雾给药,而使用含有羧基乙烯基聚合物的喷雾给药凝胶基剂,
该喷雾给药凝胶基剂为了附加下述喷雾性能而被从外部赋予剪切力进行了处理:(1)制剂粒度分布范围、(2)喷雾密度均匀性、(3)喷射角度控制。
[9]一种流感的预防方法,其包括使用可将粘稠的制剂从各鼻孔喷雾至鼻腔内粘膜的设备,将[1]~[8]中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物给药至需要该组合物的对象。
[10][1]~[8]中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物用于预防流感的用途。
根据本发明,可以提供一种以流感病毒灭活全粒子作为有效成分、且不使用佐剂、以更少的抗原量诱导有效的免疫应答、且由于不使用佐剂、因此副作用小的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,可以可靠地对付流感的流行。
本发明的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物由于含有为了附加喷雾性能而从外部赋予剪切力进行了处理的包含羧基乙烯基聚合物的经鼻粘膜喷雾给药凝胶基剂,因此,通过广泛且长久地展布、滞留于鼻腔粘膜,可以以更少的抗原量诱导有效的免疫应答。
根据本发明的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物的制造方法,可以提供一种经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其由于可不赋予应力且在短时间内处理,因此,可以良好地维持病毒灭活全粒子的抗原性,诱导有效的免疫应答,且副作用小。
予以说明,在本发明中,虽不含有作为免疫增强剂的佐剂,但可以提供与包含流感病毒疫苗和佐剂的组合物同等、或更强的上呼吸道粘膜及全身的免疫诱导。
具体实施方式
本发明提供一种经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其特征在于,含有为了附加喷雾性能而从外部赋予剪切力进行处理的包含羧基乙烯基聚合物的经鼻粘膜喷雾给药凝胶基剂和流感病毒灭活全粒子,且不使用佐剂。
本发明中使用的“为了附加喷雾性能而从外部赋予剪切力进行处理的含有羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂”是指例如在WO2007/123193中所公开的“含有皮肤、粘膜附着剂的凝胶基剂”,为含有羧基乙烯基聚合物、适当含有结冷胶(Gellan Gum)、从外部赋予剪切力而调整了粘度的基剂。所述的基剂的特征在于,可以通过从外部赋予剪切力而调整为各种粘度,可以以适合目的的方式控制从喷雾容器的喷射角度、喷射密度。另外,作为对发展中国家的多人数的接种及对大流行病的防备,通过使用WO2007/123193及WO2007/123207中所记载的、作为多次剂量喷雾容器的上方排压无空气式喷雾容器,喷雾容器的给药在任一角度或角度的范围都可以没有容器内残量地使用,可以实现其目的。在本发明中,通过使用所述的喷雾给药凝胶基剂,流感病毒灭活全粒子的鼻腔粘膜中的展布性广范围地长时间提高,由此可提高疫苗的免疫原性。
成为经鼻粘膜喷雾给药用基剂的原料的羧基乙烯基聚合物为以丙烯酸为主成分聚合而得到的亲水性聚合物,为了制备水性凝胶剂,可以没有限定地使用通常使用的医药品添加物。
为了附加喷雾性能而从外部赋予剪切力进行处理的含有羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂的含量,换算成羧基乙烯基聚合物的含量,为0.1~1.0w/v%,优选为0.3~0.7w/v%。
本发明的疫苗的特征在于,含有流感病毒灭活抗原粒子作为抗原。本发明中使用的流感病毒灭活全粒子是指:从培养流感病毒而得到的病毒浮游液,保持病毒的形态地精制的病毒粒子。因此,本发明的流感疫苗是指:除含有亚病毒体(subvirion)的裂解疫苗、及含有精制HA或NA的亚单位疫苗之外的疫苗,也被称为全粒子疫苗。
所述流感病毒灭活全粒子优选为在不存在表面活性剂及醚类的条件下从病毒浮游液精制的流感病毒灭活全粒子。将包含为了与经鼻粘膜喷雾给药凝胶基剂的混合而被精制或浓缩的灭活流感病毒全粒子的病毒液称为病毒原液。本发明的疫苗的流感病毒灭活全粒子的浓度优选每1种疫苗病毒株为1~500μgHA/mL(HA换算),更优选20~250μgHA/mL(HA换算)。所述浓度通过测定HA蛋白质的浓度来得到。
在本发明中,流感病毒也包含目前已知的全部类型及亚型、及将来被分离、鉴定的类型及亚型。此外,迄今为止,没有观察到在人类中的流行,从有效地防止今后对人的感染的观点出发,优选包含选自除流感病毒A型的H1及H3之外的H1~16(即H2及H4~16)中的亚型和选自N1~9中的亚型的组合的亚型。这些亚型也被称为新型流感病毒。所述亚型更优选选自H5、7及9中的亚型和选自N1~9中的亚型的组合。流感病毒可以为属于相同的亚型的1种株,也可以为属于相同的亚型的2种以上的株,还可以为属于不同的亚型的2种以上的株。
另外,流感病毒可以为从感染动物或患者中分离的株,也可以为以基因工程的方式在培养细胞中构建的重组病毒。就流感病毒的培养方法而言,可以将病毒接种于鸡蛋的尿膜腔内而培养,也可以使培养细胞感染而培养。
佐剂是指具有免疫应答的强化或抑制等调节活性的物质的总称,是为了提高抗原的免疫原性而在疫苗中添加的免疫增强剂,迄今为止研究了多种物质。另一方面,通过使用佐剂而提高疫苗的免疫效果,相反,也存在可产生炎症等副作用的缺点。当然,作为经鼻给药型疫苗的佐剂,虽可列举几个候选者,但由于没有广泛地确认安全性的佐剂,因此,含有有效性、安全性被确立的佐剂的经鼻给药型疫苗还没有被认可。
如上所述,本发明人发现:通过将具有优异的喷雾性能的鼻腔粘膜展布率高的经鼻粘膜喷雾给药凝胶基剂相对于所述全粒子疫苗使用,可得到在不使用佐剂下以更少的抗原量的有效且副作用小的疫苗,通过与即使为粘稠性高的凝胶基剂也可喷雾的设备组合,所喷雾的制剂平均粒径在30μm~80μm的范围(优选、40μm~70μm的范围)的适当的范围、粒度分布80%以上在10μm~100μm的范围(优选90%在10μm~100μm的范围)、以可以给药至鼻腔内的需要的部位的方式使从设备的喷射角度为30°~70°的范围(优选40°~60°的范围)、并可使喷射密度为全锥形均等地向鼻腔内喷雾给药的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,发现其制作方法以及使用其的预防方法,由此直至本发明。
本发明的疫苗除流感病毒灭活全粒子及经鼻粘膜喷雾给药凝胶基剂以外,可以进而含有作为医药品可允许的载体。作为所述载体,可以使用通常用于疫苗及鼻腔内给药型制剂的制造的载体,具体而言,可列举食盐水、缓冲化食盐水、右旋糖、水、甘油、等渗水性缓冲液及它们的组合。另外,其中适当配合保存剂(例如硫汞撒)、等渗剂、pH调整剂、表面活性剂及灭活剂(例如福尔马林)等。
本发明的疫苗为向鼻腔内喷雾给药的疫苗。
使用本发明的疫苗,可以预防流感或减轻其症状。
作为疫苗的给药方法,可以使用多次剂量喷雾点鼻容器或对两鼻孔不具有泵功能的可喷雾的设备,一般而言,可以使用不具有泵功能的可喷雾的一次性设备。
就给药量而言,考虑对象的年龄、性别、体重等而确定,但作为抗原,每1种疫苗病毒株通常为可将1~150μg HA、优选5~50μg HA给药1次或2次以上。优选为多次的给药,该情况下,优选空出1~4周的间隔进行给药。
实施例
以下,通过实施例详细地说明本发明,但本发明并不受这些实施例任何限定。
用以下所示的方法制备凝胶基剂及3种病毒原液,将两者如以下方式混合,作为实施例,制备流感疫苗组合物。
[凝胶基剂的制造]
凝胶基剂例1
[含有灭活流感病毒全粒子的病毒原液的制造]
病毒原液例1
病毒原液例2
病毒原液例3
[凝胶基剂与病毒原液的混合]
将上述的凝胶基剂例1和病毒原液例1~3分别以(1:1)的比率进行混合搅拌,得到均质的流感疫苗组合物实施例1、实施例2及实施例3。将各实施例中得到的组合物的组成及其物性值/喷雾性能示于下表。该混合搅拌对病毒灭活全粒子抗原不赋予应力,且可以通过缓慢的混合搅拌在短时间实现。示出得到的流感疫苗组合物的成分份量及物性值以及使用适当的设备喷雾时所附加的喷雾性能。
实施例1
实施例2
实施例3
适当使用上述实施例中所使用的灭活全粒子抗原,以下表所示的组成制备不含有凝胶基剂的流感疫苗组合物,制成比较例1~4。
比较例1
比较例2
比较例3
比较例4
免疫应答的分析试验(1)
用适当的一次性设备将实施例1及比较例1中制备的流感疫苗组合物分别对4名成人志愿者,每鼻孔以0.25mL(两鼻孔合计为45μgHA)的量进行2次经鼻喷雾接种,每次相隔3周。
连续地进行采血和鼻腔清洗液的回收,测定对疫苗株的中和抗体值并进行评价。关于实施例1的结果示于表1,关于比较例1的结果示于表2。
[表1]
[表2]
将实施例1疫苗(病毒原液+喷雾给药凝胶基剂)和比较例1疫苗(不含有凝胶基剂的灭活裂解流感病毒抗原组合物)进行比较时,在比较例1疫苗中,血清中和抗体值在3/4中没有看到抗体值的上升,但在实施例1疫苗中,在4/4中看到抗体值的上升,其程度也显示为显著。鼻腔清洗液的中和抗体值的上升,在实施例1和比较例1中,在全例中均可看到,但可以确认其程度以实施例1的一方大。
免疫应答的分析试验(2)
用适当的一次性设备将实施例2及比较例2中制备的流感疫苗组合物分别对成人志愿者(实施例2:25名、比较例2:24名),以每鼻孔0.25mL(两鼻孔合计为45μgHA)的量每次相隔3周进行2次,约半年后再追加1次,总计3次经鼻喷雾接种。
在接种3次的3周后,进行采血和鼻腔清洗液的回收,测定对疫苗株的中和抗体值并进行评价。将结果示于表3。
[表3]
将实施例2疫苗(病毒原液+喷雾给药凝胶基剂)和比较例2疫苗(仅病毒原液)进行比较时,含有喷雾给药凝胶基剂的实施例2疫苗与比较例2疫苗相比,其应答上看到明显高的上升率。
可以认为,处于初次与流感病毒抗原接触的初始的状态(Naive State)的人类(幼儿·小儿)的免疫应答难以被诱导,在初始的个体中的免疫应答可以通过研究对没有与多数健康成人接触、且为高病原性的禽流感病毒(H5N1株)的疫苗的抗体应答来推定。
如上述结果所示,发现:即使为初始的被检者,通过进行3次实施例2疫苗(病毒原液+喷雾给药凝胶基剂)的经鼻接种,在血清及鼻腔清洗液中诱导高水平的中和抗体值。
免疫应答的分析试验(3)
用适当的一次性设备及皮下接种将实施例3、比较例3及比较例4中制备的流感疫苗组合物分别对成人志愿者,实施例3-经鼻接种:26名、比较例3-经鼻接种:25名,以每鼻孔0.25mL(两鼻孔合计为15μgHA/株/0.5mL)的量进行2次经鼻喷雾接种,每次相隔3周,以及比较例4(现行疫苗)-皮下接种:38名,以0.5mL(15μgHA/株/0.5mL)的量皮下接种1次。
在1次接种或2次接种3周后,进行采血和鼻腔清洗液的回收,测定对疫苗株的中和抗体值,并进行评价。将结果示于表4。
[表4]
将实施例3疫苗(病毒原液+喷雾给药凝胶基剂)的经鼻接种和比较例3疫苗(仅病毒原液)的经鼻接种及比较例4疫苗(目前在日本所使用的皮下接种疫苗)的皮下接种进行比较时,含有喷雾给药凝胶基剂的实施例3疫苗的经鼻接种与比较例3疫苗的经鼻接种及比较例4疫苗的皮下接种(现行疫苗)相比,其应答上看到明显高的上升率。
Claims (10)
1.一种经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其特征在于,包含:
(i)流感病毒灭活全粒子、以及
(ii)为了附加喷雾性能而从外部赋予剪切力处理后的含有羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂,
并且所述流感疫苗组合物不含有佐剂。
2.根据权利要求1所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,(i)的流感病毒灭活全粒子按照每1种疫苗病毒株为1~500μgHA/mL。
3.根据权利要求1或2所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,含有0.1w/v%~1.0w/v%的羧基乙烯基聚合物。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其使用为了附加下述喷雾性能而从外部赋予剪切力进行了处理的含有羧基乙烯基聚合物的喷雾给药凝胶基剂:(1)制剂粒度分布范围、(2)喷雾密度均匀性、和/或(3)喷射角度控制。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其使用含有0.5w/v%~2.0w/v%的羧基乙烯基聚合物的凝胶基剂,为了附加作为喷雾性能的(1)制剂粒度分布范围、(2)喷雾密度均匀性、和/或(3)喷射角度控制,从外部赋予剪切力进行处理,得到喷雾给药凝胶基剂之后,与含有流感病毒灭活全粒子的病毒原液在不赋予应力的条件下在短时间内均匀地混合而得到。
6.根据权利要求1~5中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其使用对含有羧基乙烯基聚合物的基剂从外部赋予剪切力而附加有下述喷雾性能的喷雾给药凝胶基剂而制造:(1)在制剂粒度分布中,制剂平均粒径在30μm~80μm的范围,粒度分布为80%以上在10μm~100μm的范围,(2)喷雾密度成为没有偏斜的均等的全锥形,(3)喷射角度控制在30°~70°的范围。
7.根据权利要求1~5中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其使用对含有羧基乙烯基聚合物的基剂从外部赋予剪切力而附加有下述喷雾性能的喷雾给药凝胶基剂而制造:(1)在制剂粒度分布中,制剂平均粒径在40μm~70μm的范围,粒度分布为90%以上在10μm~100μm的范围,(2)喷雾密度成为没有偏斜的均等的全锥形,(3)喷射角度控制在40°~60°的范围。
8.根据权利要求1~7中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物,其中,其为了能够使用不具有泵功能的可喷雾的设备进行喷雾给药,而使用含有羧基乙烯基聚合物的喷雾给药凝胶基剂,
该喷雾给药凝胶基剂为了附加下述喷雾性能而被从外部赋予剪切力进行了处理:(1)制剂粒度分布范围、(2)喷雾密度均匀性、(3)喷射角度控制。
9.一种流感的预防方法,其包括使用可将粘稠的制剂从各鼻孔喷雾至鼻腔内粘膜的设备,将权利要求1~8中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物给药至需要该组合物的对象。
10.权利要求1~8中任一项所述的经鼻粘膜喷雾给药型流感疫苗组合物用于预防流感的用途。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910188181.8A CN110038123A (zh) | 2012-12-28 | 2013-10-23 | 经鼻流感疫苗组合物 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012287900 | 2012-12-28 | ||
JP2012-287900 | 2012-12-28 | ||
PCT/JP2013/078721 WO2014103488A1 (ja) | 2012-12-28 | 2013-10-23 | 経鼻インフルエンザワクチン組成物 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910188181.8A Division CN110038123A (zh) | 2012-12-28 | 2013-10-23 | 经鼻流感疫苗组合物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104884086A true CN104884086A (zh) | 2015-09-02 |
Family
ID=51020588
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201380068031.4A Pending CN104884086A (zh) | 2012-12-28 | 2013-10-23 | 经鼻流感疫苗组合物 |
CN201910188181.8A Pending CN110038123A (zh) | 2012-12-28 | 2013-10-23 | 经鼻流感疫苗组合物 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910188181.8A Pending CN110038123A (zh) | 2012-12-28 | 2013-10-23 | 经鼻流感疫苗组合物 |
Country Status (27)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20160015800A1 (zh) |
EP (2) | EP2939692B1 (zh) |
JP (1) | JP6247639B2 (zh) |
KR (1) | KR102071099B1 (zh) |
CN (2) | CN104884086A (zh) |
AU (1) | AU2013367751B2 (zh) |
BR (1) | BR112015015523B1 (zh) |
CA (1) | CA2894223C (zh) |
CY (1) | CY1122372T1 (zh) |
DK (1) | DK2939692T3 (zh) |
ES (1) | ES2731899T3 (zh) |
HK (1) | HK1209646A1 (zh) |
HU (1) | HUE044434T2 (zh) |
IL (1) | IL239284B (zh) |
LT (1) | LT2939692T (zh) |
MX (1) | MX371154B (zh) |
MY (1) | MY173503A (zh) |
NZ (1) | NZ708922A (zh) |
PH (1) | PH12015501482A1 (zh) |
PL (1) | PL2939692T3 (zh) |
PT (1) | PT2939692T (zh) |
RU (1) | RU2652296C2 (zh) |
SG (2) | SG11201504648TA (zh) |
SI (1) | SI2939692T1 (zh) |
TR (1) | TR201910293T4 (zh) |
TW (1) | TWI624280B (zh) |
WO (1) | WO2014103488A1 (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105342982A (zh) * | 2015-11-19 | 2016-02-24 | 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 | 经鼻给药的流感疫苗免疫制剂及其制备方法 |
CN108289948A (zh) * | 2015-11-27 | 2018-07-17 | 日东电工株式会社 | 口腔内给药用疫苗药物组合物和口腔内给药用疫苗药物组合物的制造方法 |
CN111344005A (zh) * | 2017-10-05 | 2020-06-26 | 东兴药品工业株式会社 | 经鼻乙型肝炎疫苗组合物及其制备方法 |
CN113117093A (zh) * | 2019-12-31 | 2021-07-16 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 一种适用于鼻粘膜递送流感疫苗的促进剂 |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5762307B2 (ja) * | 2009-03-31 | 2015-08-12 | 国立感染症研究所長 | 経鼻投与用ワクチンを用いるインフルエンザの予防方法 |
US9408880B2 (en) | 2013-12-20 | 2016-08-09 | Katherine Rose Kovarik | Method and system for prevention and treatment of allergic and inflammatory diseases |
US9457077B2 (en) | 2009-11-18 | 2016-10-04 | Katherine Rose Kovarik | Method and system for targeting the microbiome to promote health and treat allergic and inflammatory diseases |
US9585920B2 (en) | 2011-02-04 | 2017-03-07 | Katherine Rose Kovarik | Method and system for treating cancer cachexia |
US9730967B2 (en) | 2011-02-04 | 2017-08-15 | Katherine Rose Kovarik | Method and system for treating cancer cachexia |
US11844720B2 (en) | 2011-02-04 | 2023-12-19 | Seed Health, Inc. | Method and system to reduce the likelihood of dental caries and halitosis |
US11951140B2 (en) | 2011-02-04 | 2024-04-09 | Seed Health, Inc. | Modulation of an individual's gut microbiome to address osteoporosis and bone disease |
US11951139B2 (en) | 2015-11-30 | 2024-04-09 | Seed Health, Inc. | Method and system for reducing the likelihood of osteoporosis |
US10314865B2 (en) | 2011-02-04 | 2019-06-11 | Katherine Rose Kovarik | Method and system for treating cancer and other age-related diseases by extending the healthspan of a human |
US11980643B2 (en) | 2013-12-20 | 2024-05-14 | Seed Health, Inc. | Method and system to modify an individual's gut-brain axis to provide neurocognitive protection |
US11833177B2 (en) | 2013-12-20 | 2023-12-05 | Seed Health, Inc. | Probiotic to enhance an individual's skin microbiome |
US11826388B2 (en) | 2013-12-20 | 2023-11-28 | Seed Health, Inc. | Topical application of Lactobacillus crispatus to ameliorate barrier damage and inflammation |
US11839632B2 (en) | 2013-12-20 | 2023-12-12 | Seed Health, Inc. | Topical application of CRISPR-modified bacteria to treat acne vulgaris |
US11969445B2 (en) | 2013-12-20 | 2024-04-30 | Seed Health, Inc. | Probiotic composition and method for controlling excess weight, obesity, NAFLD and NASH |
SG11201610567TA (en) | 2014-06-25 | 2017-01-27 | Toko Yakuhin Kogyo Kk | Rhinovaccination system of influenza vaccine |
JP6322844B2 (ja) | 2014-06-25 | 2018-05-16 | 東興薬品工業株式会社 | 医療用シリンジに用いられる点鼻用噴霧ノズル |
WO2018021889A1 (ko) * | 2016-07-29 | 2018-02-01 | 주식회사 셀투인 | 점막용 항인플루엔자 바이러스 조성물 |
CN114340637A (zh) | 2019-07-03 | 2022-04-12 | 阿伊里斯株式会社 | 用于治疗流感病毒感染症的药物组合物 |
WO2023120535A1 (ja) * | 2021-12-20 | 2023-06-29 | 東興薬品工業株式会社 | ポリアクリル酸系ポリマーを含有するワクチンアジュバント剤およびその使用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1046097A (zh) * | 1989-04-05 | 1990-10-17 | 东兴药品工业株式会社 | 喷雾胶凝基质和应用该基质的喷雾胶凝剂 |
CN101426531A (zh) * | 2006-04-21 | 2009-05-06 | 东兴药品工业株式会社 | 喷雾用凝胶型皮肤·粘膜附着型制剂及使用它的给药系统 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0678245B2 (ja) * | 1989-07-04 | 1994-10-05 | 東興薬品工業株式会社 | 鼻腔内噴霧投与用インフルエンザワクチンゲル製剤 |
US5215739A (en) * | 1989-04-05 | 1993-06-01 | Toko Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha | Spray gel base and spray gel preparation using thereof |
KR20070116650A (ko) * | 2005-03-23 | 2007-12-10 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 조성물 |
DK2011467T3 (da) * | 2006-04-21 | 2020-04-06 | Toko Yakuhin Kogyo Kk | Fluidbeholder og luftfrit fluiddispenseringssystem |
JP5762307B2 (ja) * | 2009-03-31 | 2015-08-12 | 国立感染症研究所長 | 経鼻投与用ワクチンを用いるインフルエンザの予防方法 |
-
2013
- 2013-10-23 US US14/653,131 patent/US20160015800A1/en not_active Abandoned
- 2013-10-23 WO PCT/JP2013/078721 patent/WO2014103488A1/ja active Application Filing
- 2013-10-23 NZ NZ70892213A patent/NZ708922A/en unknown
- 2013-10-23 SG SG11201504648TA patent/SG11201504648TA/en unknown
- 2013-10-23 CN CN201380068031.4A patent/CN104884086A/zh active Pending
- 2013-10-23 PT PT13867863T patent/PT2939692T/pt unknown
- 2013-10-23 ES ES13867863T patent/ES2731899T3/es active Active
- 2013-10-23 DK DK13867863.6T patent/DK2939692T3/da active
- 2013-10-23 TR TR2019/10293T patent/TR201910293T4/tr unknown
- 2013-10-23 MX MX2015008380A patent/MX371154B/es active IP Right Grant
- 2013-10-23 SG SG10201705190TA patent/SG10201705190TA/en unknown
- 2013-10-23 BR BR112015015523-5A patent/BR112015015523B1/pt active IP Right Grant
- 2013-10-23 EP EP13867863.6A patent/EP2939692B1/en active Active
- 2013-10-23 RU RU2015130634A patent/RU2652296C2/ru active
- 2013-10-23 PL PL13867863T patent/PL2939692T3/pl unknown
- 2013-10-23 MY MYPI2015701959A patent/MY173503A/en unknown
- 2013-10-23 AU AU2013367751A patent/AU2013367751B2/en active Active
- 2013-10-23 LT LTEP13867863.6T patent/LT2939692T/lt unknown
- 2013-10-23 KR KR1020157016766A patent/KR102071099B1/ko active IP Right Grant
- 2013-10-23 CN CN201910188181.8A patent/CN110038123A/zh active Pending
- 2013-10-23 EP EP19167809.3A patent/EP3566715A1/en not_active Withdrawn
- 2013-10-23 SI SI201331485T patent/SI2939692T1/sl unknown
- 2013-10-23 JP JP2014554202A patent/JP6247639B2/ja active Active
- 2013-10-23 HU HUE13867863 patent/HUE044434T2/hu unknown
- 2013-10-23 CA CA2894223A patent/CA2894223C/en active Active
- 2013-10-30 TW TW102139274A patent/TWI624280B/zh active
-
2015
- 2015-06-08 IL IL239284A patent/IL239284B/en active IP Right Grant
- 2015-06-26 PH PH12015501482A patent/PH12015501482A1/en unknown
- 2015-10-28 HK HK15110594.2A patent/HK1209646A1/zh unknown
-
2018
- 2018-11-26 US US16/200,233 patent/US20190091324A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-06-28 CY CY20191100681T patent/CY1122372T1/el unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1046097A (zh) * | 1989-04-05 | 1990-10-17 | 东兴药品工业株式会社 | 喷雾胶凝基质和应用该基质的喷雾胶凝剂 |
CN101426531A (zh) * | 2006-04-21 | 2009-05-06 | 东兴药品工业株式会社 | 喷雾用凝胶型皮肤·粘膜附着型制剂及使用它的给药系统 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
OKA T ET AL: "influenza vaccine: enhancement of immune response by application of carboxy-vinylpolymer", 《VACCINE》 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105342982A (zh) * | 2015-11-19 | 2016-02-24 | 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 | 经鼻给药的流感疫苗免疫制剂及其制备方法 |
CN105342982B (zh) * | 2015-11-19 | 2018-08-28 | 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 | 经鼻给药的流感疫苗免疫制剂及其制备方法 |
CN108289948A (zh) * | 2015-11-27 | 2018-07-17 | 日东电工株式会社 | 口腔内给药用疫苗药物组合物和口腔内给药用疫苗药物组合物的制造方法 |
CN111344005A (zh) * | 2017-10-05 | 2020-06-26 | 东兴药品工业株式会社 | 经鼻乙型肝炎疫苗组合物及其制备方法 |
CN113117093A (zh) * | 2019-12-31 | 2021-07-16 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 一种适用于鼻粘膜递送流感疫苗的促进剂 |
CN113117093B (zh) * | 2019-12-31 | 2024-02-09 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 一种适用于鼻粘膜递送流感疫苗的促进剂 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104884086A (zh) | 经鼻流感疫苗组合物 | |
Chivukula et al. | Development of multivalent mRNA vaccine candidates for seasonal or pandemic influenza | |
Zhao et al. | Preparation and immunological effectiveness of a swine influenza DNA vaccine encapsulated in chitosan nanoparticles | |
US7981428B2 (en) | Flu vaccines and methods of use thereof | |
WO2010036948A2 (en) | Dna prime/inactivated vaccine boost immunization to influenza virus | |
CN109562057A (zh) | 聚乙二醇化脂质体和使用方法 | |
CN111603556B (zh) | 一种新型冠状病毒亚单位纳米疫苗的制备和应用 | |
JP2016517414A (ja) | インフルエンザ核酸分子及びそれから作製したワクチン | |
CN104984357B (zh) | 不含明胶的疫苗保护剂组合物及流感减毒活疫苗 | |
EP2822585B1 (en) | Improved vaccination against influenza | |
TWI721949B (zh) | 流行性感冒疫苗經鼻接種系統 | |
CN107530417A (zh) | H1n1流感的计算优化的广泛反应性抗原的协同共同给药 | |
CN100340290C (zh) | 包含ADP-核糖化毒素和含有CpG结构的寡核苷酸的颗粒疫苗组合物 | |
JP2023012539A (ja) | 経鼻b型肝炎ワクチン組成物およびその製造方法 | |
Ross et al. | Vaccine technologies against avian influenza: current approaches and new directions | |
CN101754770B (zh) | 皮内流感疫苗 | |
KR102673991B1 (ko) | 경비 b형 간염 백신 조성물 및 그 제조방법 | |
RU2773357C2 (ru) | Назальная вакцинная композиция против гепатита b и способ ее получения | |
CN106029686A (zh) | 单价h5疫苗 | |
WO2012176582A1 (ja) | 鳥インフルエンザに対する点眼ワクチン | |
김은도 | CD11b+ dendritic cells-mediated immune induction of inactivated eyedrop vaccine | |
TW202302142A (zh) | 人用溫敏型佐劑及其製作方法 | |
Vector-Mediated | HEMATOLOGIC-GENE CORRECTION OF HEMATOPOIETIC DISORDERS |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1209646 Country of ref document: HK |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150902 |
|
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: WD Ref document number: 1209646 Country of ref document: HK |