CN104823698B - 一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法。通过野生环柄菇子实体组织分离获得环柄菇菌丝体，在母种（PDA或PSA）培养基上进行菌丝体培养和一级种扩繁，在麦粒培养基上进行二级种和三级种的制备，采用发酵料床式覆土栽培方式进行出菇。利用该栽培技术可以成功实现野生环柄菇的人工代料栽培和出菇，菌丝体在母种培养基和麦粒培养基上能够正常生长，且菌丝长势好，浓密，子实体能够正常现蕾、发育和成熟，其形态特征和口感也与野生环柄菇相似，获得类似野生环柄菇的营养、外形特征和口感，具有广泛的应用价值。

Description

一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法

技术领域

本发明属于食用菌栽培技术领域，更具体的，本发明涉及一种野生环柄菇人工驯化栽培的技术领域。一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法。

背景技术

中国是最早研究食用菌栽培的国家之一，曾经在世界上率先驯化栽培了木耳、香菇、银耳、草菇等野生食用菌。近年来我国食用菌业焕发出一片蓬勃发展的生机，栽培食用菌的产量迅猛增加，栽培种类也日渐增多。至上世纪八十年代末，各地普遍栽培的食用菌种类已达20多种。

环柄菇，子实体中等至较大，菌盖近圆形，脐状至漏斗状，薄，革质，直径3cm-15cm，生长在阔叶树倒木上，群生或单生。幼嫩时可食用，成长后柔韧不可食。科属为黑伞植物蘑菇的子实体。别名为蘑菇、麻菇、蘑菇草、肉蕈等。性味归经，性平，味甘；人肠、胃经。功效主治为益神开胃，化痰理气。主治精神不振，食欲大减，痰核凝聚，上呕下泻，尿浊不禁等症。现有文献记载环柄菇具有大量不可替代的功效：

1.提高机体免疫力 蘑菇的有效成分可增强T淋巴细胞功能，从而提高机体抵御各种疾病的免疫功能。

2.镇痛，镇静 巴西某研究所从蘑菇中提取到一种物质Act－2，具镇痛、镇静功效，其镇痛效果可代替吗啡。

3.止咳化痰 蘑菇提取液用于动物实验，发现其有明显的镇咳、稀化痰液的作用。

4.抗癌 日本研究人员在蘑菇有效成分中分析出一种分子量为288的超强力抗癌物质，能抑制癌细胞的生长，其作用比绿茶中的抗癌物质强1000倍。蘑菇中还含有一种毒蛋白，能有效地阻止癌细胞的蛋白合成。

5.通便排毒 蘑菇中所含的人体很难消化的粗纤维、半粗纤维和木质素，可保持肠内水分，并吸收余下的胆固醇、糖分，将其排出体外，对预防便秘、肠癌、动脉硬化。糖尿病等都十分有利。

目前，环柄菇主要处于野生状态，未见有关野生环柄菇人工驯化栽培的有效方法，如何有效利用现代生物技术，实现高效的野生环柄菇人工驯化栽培的方法具有重要的意义。

发明内容

针对目前现有技术未见有关野生环柄菇人工驯化栽培的有效方法的技术现状，本发明旨在于提供一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法，通过野生环柄菇子实体组织分离获得环柄菇菌丝体，在母种培养基上进行菌丝体培养和一级种扩繁，在麦粒培养基上进行二级种和三级种的制备，采用发酵料床式覆土栽培方式进行出菇，利用该栽培方法可以成功实现野生环柄菇的人工代料栽培和出菇，具有现实的意义和作用。

本发明通过以下技术方案实现的：

通过野生环柄菇子实体组织分离获得环柄菇菌丝体，在母种（PDA或PSA）培养基上进行菌丝体培养和一级种扩繁，在麦粒培养基上进行二级种和三级种的制备，采用发酵料床式覆土栽培方式进行出菇。利用该栽培技术可以成功实现野生环柄菇的人工代料栽培和出菇，菌丝体在母种培养基和麦粒培养基上能够正常生长，且菌丝长势好，浓密，子实体能够正常现蕾、发育和成熟，其形态特征和口感也与野生环柄菇相似，获得类似野生环柄菇的营养、外形特征和口感，具有广泛的应用价值。

本发明具体提供一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法，所述的方法具体步骤如下：

1、野生环柄菇菌种分离驯化、扩繁：

（1）野生环柄菇子实体组织分离：在无菌微环境中将野生环柄菇的子实体从中央分开，然后用灭过菌的分离镊子迅速从子实体菌盖与菌柄交界处取出黄豆粒大小的菌肉组织接种到常规PDA或PSA母种培养基斜面中部，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面,然后对菌丝进行纯化培养，方法为：从菌落边缘挑取尖端菌丝体，移植到常规PDA或PSA培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面。

（2）一级种扩繁：将上述步骤分离筛选保藏的菌种转管扩繁至常规PDA或PSA母种培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个培养基斜面，备用。

（3）二级种、三级种的制备：将扩繁好的一级种转接至常规麦粒培养基中，置温度25℃，湿度60%的黑暗环境进行培养，至菌丝长满整个麦粒培养基后称为二级种；再将二级种转接到常规麦粒培养基中，置温度25℃，湿度60%的黑暗环境进行培养，至菌丝长满整个麦粒培养基后称为三级种。

2、野生环柄菇人工驯化栽培：

（1）栽培发酵料培养基配方由棉籽壳50.4%、干牛粪44.1%、尿素0.6%、碳酸钙0.5%、石膏1.3%、过磷酸钙1.3%、油渣0.5%和石灰1.3%组成。

（2）培养料发酵方法：

建堆：先在地面上铺一层20cm-25cm厚预湿好的棉籽壳，在棉籽壳上撒一层干牛粪、过磷酸钙、尿素、油渣、石灰，其上再铺20cm-25cm厚的棉籽壳，再撒一层干牛粪、过磷酸钙、尿素、油渣、石灰，依次逐渐上堆，当堆至第三、六、十层棉籽壳时，均匀淋水，至堆底有水溢出为止；建好的发酵培养料堆宽250cm-350cm，高150cm-180cm，长度不限，在建好的发酵料堆顶部覆盖1-2层塑料薄膜以利于保湿。

翻堆：每次翻堆需把下面的发酵培养料翻到上面，四周翻到中间，中间翻到外边，把干料和湿料充分拌和均匀，促使培养料发酵均匀一致，同时尽可能将发酵培养料抖松、抖散，排尽其中废气；由于经过发酵，每次翻堆时，发酵培养料堆体积都会缩小，再次建堆时，在不改变堆高、宽的前提下，可缩短堆的长度；第一次翻堆时加入石膏、碳酸钙，用石灰调解酸碱度至pH值7-8，并浇水调节湿度，第二次翻堆加入石灰调解酸碱度至pH值7-8，再根据干湿情况适当调节水分；检查发酵培养料含水量：抓一把发酵培养料轻轻一捏，有1-2滴水滴下为标准，不可太湿或过干；经翻堆4-5次，培养料发酵结束；发酵好的培养料标准：培养料颜色呈咖啡色，无氨臭味，培养料中均匀分布有白色高温菌落，质地松软，富有弹性，含水量60%-65%，pH值7-8；达到以上标准，发酵培养料即可进棚播种。

（3）发酵料进棚和菇棚消毒：发酵培养料要趁热进棚，每间菇棚进料要当天完成；铺料厚度要求均匀一致，厚度采用20cm-30cm；发酵培养料进棚前和进棚后都要对菇棚进行消毒；消毒方法：密闭菇棚，按每立方米空间用甲醛10ml、高锰酸钾5g进行气化消毒，闷24h后打开门窗，排出甲醛气体，无味时预备播种。

（4）播种：播种前应检查栽培发酵培养料中的温度、氨气浓度、料含水量；当栽培发酵培养料温度低于30℃、无氨臭味，含水量达到60%-65%时方可播种；播种时将菌种从菌种瓶中取出稍加揉散呈颗粒状，均匀撒播于栽培发酵培养料表面，用消过毒的木板轻压培养料表面，使菌种与栽培发酵培养料紧密接触，以利菌丝恢复和长入栽培发酵培养料。播种后要及时覆膜，以便保温保湿，以利菌种萌发。

（5）菌丝培养：这一时期主要是促进菌丝生长，防止杂菌发生，温度控制在25℃左右，适当通风，每天为料床抖膜1次增氧；播种3d-5d后菌种萌发成雪花状，及时揭膜，并适当给菇棚通风，5d-7d后菌丝长入培养料，加大通风量，促使料表干燥，抑制杂菌发生，同时保持新鲜空气，促进菌丝向料纵深生长；播种20d后，菌丝长入培养料内2/3以上至长透培养料时，就可以覆土。菌丝长满培养料时覆土最为理想，能使菌丝上土齐整有力。

（6）覆土的选择与处理：选用吸水性强，保水性好，不易板结，有适当肥质的中性粘壤土或中壤土为覆土材料；采挖回来的覆土材料要充分暴晒，然后用加有一定浓度福尔马林和施百功的清水将土浸透，盖膜堆闷5d以上，让药物气体充分穿透土层消毒，5d后揭膜，散去农药气味；使用前均匀加入石灰粉，将覆土酸碱度调至pH值7-8方可使用。

覆土分两次覆土，头遍土覆盖厚度2.5-3cm，要求厚薄均匀一致，覆土后在3d-5d时间内用细喷勤喷的方法调好含水量，调水时和调水后一天，要加强通风，随后减少通风2d-3d，促进菌丝迅速上土；当土表面可见大量菌丝既可覆盖二遍土，二遍土含水量较低，覆盖厚度1cm；覆盖二遍土后，要经常检查土层菌丝生长情况，如见菌丝长到两层覆土之间，应加强通风，促使二遍土表面较干，防止菌丝直上冒出土面，促使菌丝横卧变粗，在土层内长好发足，并促使菌丝由营养生长开始向生殖生长转化，控制出菇部位于两层覆土之间；整个覆土期间控制温度25℃；当土中菌丝已普遍形成小白点，表明出菇条件已到，就要适时喷“出菇水”，连续喷2d-3d，增加覆土含水量，同时要加大菇棚通风量，使覆土表面湿度减少，防止菌丝冒出土面。

（7）出菇管理：出菇期间要求的适宜条件：温度20℃-28℃，空气相对湿度85%-95%，培养料含水量65%，覆土含水量22%，空气新鲜；及时清理床面死菇、病菇和发黄的死菇根，注意菇房卫生，预防病虫害发生；适时适量追肥，对提高产量及质量有一定效果；结合喷水或追肥，调节酸碱度，通常喷施0.5%-1%石灰清液。

本发明中，采用的无菌微环境是经过人为制造，常见的无菌微环境为超净工作台。

本发明中，采用的发酵料进棚前和进棚后都要对菇棚进行消毒，采用常用的燃烧硫磺粉或蒸发福尔马林的方法进行熏蒸消毒，熏蒸前先用喷雾器用清水将菇棚四壁、床架喷湿，提高消毒效果，熏蒸24h后打开门窗及通风口让剩余的毒气逸出，直到菇棚内无异味人才能进入菇棚内操作。

本发明中，采用的出菇管理中，水分管理要求掌握看菇喷水的原则，菇多时多喷水，如果床面湿度已够，可隔1d-2d喷一次，以免喷水过多，造成菌丝闷死。

本发明中，采用的出菇管理中，通风时间视菇棚内空气质量情况进行，以菇棚内空气清新，无异味，无憋闷感为度；喷水时和喷水后多通风，避免菇棚湿闷，造成菌丝死亡。

本发明中，采用的出菇管理中，挑菇根和补土按照每次采菇后，菇床上均留有死菇和菇根，要及时清除干净，以免腐烂后引起病虫危害；对采菇时带走的泥土，要及时补平，保持原来的厚度。采菇补土工作必须在每批菇采收后及时进行。

本发明中，采用的出菇管理中，及时清理床面死菇、病菇和发黄的死菇根，注意菇房卫生，预防病虫害发生，适时适量追肥，对提高产量及质量有一定效果。结合喷水或追肥，调节酸碱度，通常喷施0.5%-1%石灰清水。

通过实施本发明具体的发明内容，可以达到以下有益效果。

本发明通过野生环柄菇子实体组织分离获得环柄菇菌丝体，在母种（PDA或PSA）培养基上进行菌丝体培养和一级种扩繁，在麦粒培养基上进行二级种和三级种的制备，采用发酵料床式覆土栽培方式进行出菇。利用该栽培技术可以成功实现野生环柄菇的人工代料栽培和出菇，菌丝体在母种培养基和麦粒培养基上能够正常生长，且菌丝长势好，浓密，子实体能够正常现蕾、发育和成熟，其形态特征和口感也与野生环柄菇相似，获得类似野生环柄菇的营养、外形特征和口感，具有广泛的应用价值。

具体实施方式

本发明中选用的所有原辅材料，所选用的所有试剂和仪器都为本领域熟知选用的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。

实施例一：野生环柄菇人工驯化栽培的方法

一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法，所述的方法具体步骤如下：

（1）野生环柄菇子实体组织分离：在无菌微环境中将野生环柄菇的子实体沿菌盖和菌柄纵向掰开，然后用灭过菌的镊子迅速从子实体菌盖和菌柄交界处取出黄豆粒大小的子实体菌肉组织接种到常规PDA或PSA母种培养基斜面上，25℃恒温暗培养7d-10d；然后对菌丝进行纯化培养，方法为：从菌落边缘挑取尖端菌丝体，移植到常规PDA或PSA培养基斜面上，25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面，如此重复3次即可。

（2）一级种扩繁：将上述步骤分离筛选保藏的菌种转管扩繁至PDA或PSA母种培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个培养基斜面，备用。

（3）二级种、三级种的制备：将扩繁好的一级种转接至常规麦粒培养基中，置温度25℃，湿度60%的黑暗环境进行培养，至菌丝长满整个麦粒培养基后称为二级种；再将二级种转接到常规麦粒培养基中，置温度25℃，湿度60%的黑暗环境进行培养，至菌丝长满整个麦粒培养基后称为三级种。

（4）发酵料床式覆土栽培：发酵料培养基配方由棉籽壳50.4%、干牛粪44.1%、尿素0.6%、碳酸钙0.5%、石膏1.3%、过磷酸钙1.3%、油渣0.5%和石灰1.3%组成。

建堆：先在地面上铺一层20cm-25cm厚预湿好的棉籽壳，在棉籽壳上撒一层干牛粪、过磷酸钙、尿素、油渣、石灰，其上再铺20cm-25cm厚的棉籽壳，再撒一层干牛粪、过磷酸钙、尿素、油渣、石灰，依次逐渐上堆，当堆至第三、六、十层棉籽壳时，均匀淋水，至堆底有少量水溢出为止；建好的发酵培养料堆宽250cm-350cm，高150cm-180cm，长度不限，在建好的发酵料堆顶部覆盖1-2层塑料薄膜以利于保湿。

翻堆：每次翻堆需把下面的发酵培养料翻到上面，四周翻到中间，中间翻到外边，把干料和湿料充分拌和均匀，促使培养料发酵均匀一致，同时尽可能将发酵培养料抖松、抖散，排尽其中废气；由于经过发酵，每次翻堆时，发酵培养料堆体积都会缩小，再次建堆时，在不改变堆高、宽的前提下，可缩短堆的长度。第一次翻堆时加入石膏、碳酸钙，用石灰调解酸碱度至pH值7-8，并浇水调节湿度，第二次翻堆加入石灰调解酸碱度至pH值7-8，再根据干湿情况适当调节水分；检查发酵培养料含水量：抓一把发酵培养料轻轻一捏，有1-2滴水滴下为标准，不可太湿或过干。经翻堆4-5次，培养料发酵结束。发酵好的培养料标准：培养料颜色呈咖啡色，无氨臭味，培养料中均匀分布有白色高温菌落，质地松软，富有弹性，含水量60%-65%，pH值7-8，达到以上标准，发酵培养料即可进棚播种。

（5）发酵培养料进棚和菇棚消毒：发酵培养料要趁热进棚，每间菇棚进料要当天完成；铺料厚度要求均匀一致，厚度采用20cm-30cm；发酵培养料进棚前和进棚后都要对菇棚进行消毒；消毒方法：密闭菇棚，按每立方米空间用甲醛10ml、高锰酸钾5g进行气化消毒，闷24h后打开门窗，排出甲醛气体，无味时预备播种。

（6）播种：播种前应检查栽培发酵培养料中的温度、氨气浓度、料含水量。当栽培发酵培养料温度低于30℃、无氨臭味，含水量达到60-65%时方可播种。播种时将菌种从菌种瓶中取出稍加揉散呈颗粒状，均匀撒播于栽培发酵培养料表面，用消过毒的木板轻压培养料表面，使菌种与栽培发酵培养料紧密接触，以利菌丝恢复和长入栽培发酵培养料。播种后要及时覆膜，以便保温保湿，以利菌种萌发。

（7）菌丝培养：这一时期主要是促进菌丝生长，防止杂菌发生，温度控制在25℃左右，适当通风，每天为料床抖膜1次增氧；播种3d-5d后菌种萌发成雪花状，及时揭膜，并适当给菇棚通风，5d-7d后菌丝长入培养料，加大通风量，促使料表干燥，抑制杂菌发生，同时保持新鲜空气，促进菌丝向料纵深生长；播种20d后，菌丝长入培养料内2/3以上至长透培养料时，就可以覆土。菌丝长满培养料时覆土最为理想，能使菌丝上土齐整有力。

（8）覆土：覆土的选择与处理：选用吸水性强，保水性好，不易板结，有适当肥质的中性粘壤土或中壤土为覆土材料。采挖回来的覆土材料要充分暴晒，然后用加有一定浓度福尔马林和施百功的清水将土浸透，盖膜堆闷5d以上，让药物气体充分穿透土层消毒，5d后揭膜，散去农药气味。使用前均匀加入石灰粉，将覆土酸碱度调至pH值7-8方可使用。

覆土方法：分两次覆土，头遍土覆盖厚度2.5cm-3cm，要求厚薄均匀一致，覆土后在3d-5d时间内用细喷勤喷的方法调好含水量，调水时和调水后一天，要加强通风，随后减少通风2d-3d，促进菌丝迅速上土；当土表可见大量菌丝既可覆盖二遍土，二遍土含水量较低，覆盖厚度1cm；覆盖二遍土后，要经常检查土层菌丝生长情况，如见菌丝长到两层覆土之间，应加强通风，促使二遍土表面较干，防止菌丝直上冒出土面，促使菌丝横卧变粗，在土层内长好发足，并促使菌丝由营养生长开始向生殖生长转化，控制出菇部位于两层覆土之间；整个覆土期间控制温度25℃。当土中菌丝已普遍形成小白点，表明出菇条件已到，就要适时喷“出菇水”，连续喷2d-3d，增加覆土含水量，同时要加大菇棚通风量，使覆土表面湿度减少，防止菌丝冒出土面。

（9）出菇管理：出菇期间要求的适宜条件：温度20℃-28℃，空气相对湿度85%-95%，培养料含水量65%，覆土含水量22%，空气新鲜；及时清理床面死菇、病菇和发黄的死菇根，注意菇房卫生，预防病虫害发生。适时适量追肥，对提高产量及质量有一定效果。结合喷水或追肥，调节酸碱度，通常喷施0.5%-1%石灰清液。

实施例二：野生环柄菇人工驯化栽培的方法

一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法，所述的方法具体步骤如下：

（1）野生环柄菇子实体组织分离：在无菌微环境中将野生环柄菇的子实体沿菌盖和菌柄纵向掰开，然后用灭过菌的镊子迅速从子实体菌盖和菌柄交界处取出黄豆粒大小的子实体菌肉组织接种到常规PDA培养基斜面上，25℃恒温暗培养7d-10d；然后对菌丝进行纯化培养，方法为：从菌落边缘挑取尖端菌丝体，移植到常规PDA培养基斜面上，25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面，如此重复3次即可。

（2）一级种扩繁：将上述步骤分离筛选保藏的菌种转管扩繁至PDA培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个培养基斜面，备用。

（3）二级种、三级种的制备：将扩繁好的一级种转接至常规麦粒培养基中，置温度25℃，湿度60%的黑暗环境进行培养，至菌丝长满整个麦粒培养基后称为二级种；再将二级种转接到常规麦粒培养基中，置温度25℃，湿度60%的黑暗环境进行培养，至菌丝长满整个麦粒培养基后称为三级种。

（4）发酵料床式覆土栽培：发酵料培养基配方: 棉籽壳2000㎏、干牛粪1750㎏、尿素25㎏、碳酸钙20㎏、石膏50㎏、过磷酸钙50㎏、油渣20㎏和石灰50㎏。

建堆：先在地面上铺一层20cm-25cm厚预湿好的棉籽壳，在棉籽壳上撒一层干牛粪、过磷酸钙、尿素、油渣、石灰，其上再铺20cm-25cm厚的棉籽壳，再撒一层干牛粪、过磷酸钙、尿素、油渣、石灰，依次逐渐上堆，当堆至第三、六、十层棉籽壳时，均匀淋水，至堆底有少量水溢出为止；建好的发酵培养料堆宽250cm-350cm，高150cm-180cm，长度不限，在建好的发酵料堆顶部覆盖1-2层塑料薄膜以利于保湿。

翻堆：每次翻堆需把下面的发酵培养料翻到上面，四周翻到中间，中间翻到外边，把干料和湿料充分拌和均匀，促使培养料发酵均匀一致，同时尽可能将发酵培养料抖松、抖散，排尽其中废气；由于经过发酵，每次翻堆时，发酵培养料堆体积都会缩小，再次建堆时，在不改变堆高、宽的前提下，可缩短堆的长度。第一次翻堆时加入石膏、碳酸钙，用石灰调解酸碱度至pH值7-8，并浇水调节湿度，第二次翻堆加入石灰调解酸碱度至pH值7-8，再根据干湿情况适当调节水分；检查发酵培养料含水量：抓一把发酵培养料轻轻一捏，有1-2滴水滴下为标准，不可太湿或过干。经翻堆4-5次，培养料发酵结束。发酵好的培养料标准：培养料颜色呈咖啡色，无氨臭味，培养料中均匀分布有白色高温菌落，质地松软，富有弹性，含水量60%-65%，pH值7-8，达到以上标准，发酵培养料即可进棚播种。

（5）发酵培养料进棚和菇棚消毒：发酵培养料要趁热进棚，每间菇棚进料要当天完成；铺料厚度要求均匀一致，厚度采用20cm-30cm；发酵培养料进棚前和进棚后都要对菇棚进行消毒；消毒方法：密闭菇棚，按每立方米空间用甲醛10ml、高锰酸钾5g进行气化消毒，闷24h后打开门窗，排出甲醛气体，无味时预备播种。

（6）播种：播种前应检查栽培发酵培养料中的温度、氨气浓度、料含水量。当栽培发酵培养料温度低于30℃、无氨臭味，含水量达到60-65%时方可播种。播种时将菌种从菌种瓶中取出稍加揉散呈颗粒状，均匀撒播于栽培发酵培养料表面，用消过毒的木板轻压培养料表面，使菌种与栽培发酵培养料紧密接触，以利菌丝恢复和长入栽培发酵培养料。播种后要及时覆膜，以便保温保湿，以利菌种萌发。

（7）菌丝培养：这一时期主要是促进菌丝生长，防止杂菌发生，温度控制在25℃左右，适当通风，每天为料床抖膜1次增氧；播种3d-5d后菌种萌发成雪花状，及时揭膜，并适当给菇棚通风，5d-7d后菌丝长入培养料，加大通风量，促使料表干燥，抑制杂菌发生，同时保持新鲜空气，促进菌丝向料纵深生长；播种20d后，菌丝长入培养料内2/3以上至长透培养料时，就可以覆土。菌丝长满培养料时覆土最为理想，能使菌丝上土齐整有力。

（8）覆土：覆土的选择与处理：选用吸水性强，保水性好，不易板结，有适当肥质的中性粘壤土或中壤土为覆土材料。采挖回来的覆土材料要充分暴晒，然后用加有一定浓度福尔马林和施百功的清水将土浸透，盖膜堆闷5d以上，让药物气体充分穿透土层消毒，5d后揭膜，散去农药气味。使用前均匀加入石灰粉，将覆土酸碱度调至pH值7-8方可使用。

覆土方法：分两次覆土，头遍土覆盖厚度2.5cm-3cm，要求厚薄均匀一致，覆土后在3d-5d时间内用细喷勤喷的方法调好含水量，调水时和调水后一天，要加强通风，随后减少通风2d-3d，促进菌丝迅速上土。当土表可见大量菌丝既可覆盖二遍土，二遍土含水量较低，覆盖厚度1cm。覆盖二遍土后，要经常检查土层菌丝生长情况，如见菌丝长到两层覆土之间，应加强通风，促使二遍土表面较干，防止菌丝直上冒出土面，促使菌丝横卧变粗，在土层内长好发足，并促使菌丝由营养生长开始向生殖生长转化，控制出菇部位于两层覆土之间。整个覆土期间控制温度25℃。当土中菌丝已普遍形成小白点，表明出菇条件已到，就要适时喷“出菇水”，连续喷2d-3d，增加覆土含水量，同时要加大菇棚通风量，使覆土表面湿度减少，防止菌丝冒出土面。

（9）出菇管理：出菇期间要求的适宜条件：温度20℃-28℃，空气相对湿度85%-95%，培养料含水量65%，覆土含水量22%，空气新鲜。及时清理床面死菇、病菇和发黄的死菇根，注意菇房卫生，预防病虫害发生。适时适量追肥，对提高产量及质量有一定效果。结合喷水或追肥，调节酸碱度，通常喷施0.5%-1%石灰清液。

实施例三：出菇管理

出菇期间要求的适宜条件：温度20℃-28℃，空气相对湿度85%-95%，培养料含水量65%，覆土含水量22%，空气新鲜。

1、出菇前期管理：

（1）水分管理：掌握看菇喷水的原则，菇多时多喷水，如果床面湿度已够，可隔1d-2d喷一次，以免喷水过多，造成菌丝闷死。

（2）通风管理：通风时间视菇棚内空气质量情况进行，以菇棚内空气清新，无异味，无憋闷感为度。喷水时和喷水后多通风，避免菇棚湿闷，造成菌丝死亡。

（3）追肥：由于产菇前期出菇快，产菇多，适时适量追肥，对提高双孢菇产量及质量效果明显。

（4）挑菇根和补土：每次采菇后，菇床上均留有死菇和菇根，要及时清除干净，以免腐烂后引起病虫危害。对采菇时带走的泥土，要及时补平，保持原来的厚度。采菇补土工作必须在每批菇采收后及时进行。

2、出菇中后期管理：环柄菇经前两茬旺产后，养分已消耗大部分，菌丝生活力下降，应抓好以下几个管理环节。

（1）掌握看土喷水的原则，防止覆土偏湿，以免造成湿度过大引起杂菌滋生或产生病斑菇，以保持覆土层湿度为好。晴冷干燥天气要采取少量多次的喷水原则，并适当减少通风，以提高菇房空气湿度。

（2）及时清理床面死菇、病菇和发黄的死菇根，注意菇房卫生，预防病虫害发生；适时适量追肥，对提高产量及质量有一定效果。结合喷水或追肥，调节酸度，通常喷施0.5%-1%石灰清水。

3、采收：当环柄菇子实体菌盖由半球形逐渐平展时及时采收。采收时应整丛或整株拔起，剪去菇根，摆放整齐，用塑料袋分装成500克/袋-1000克/袋。运往市场销售，也可制成干品或盐渍品远销。

通过实施上述各实施例，本发明提供的一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法，利用该栽培方法可以成功实现野生环柄菇的人工代料栽培和出菇，菌丝体在母种培养基和麦粒培养基上能够正常生长，且菌丝长势好，浓密，子实体能够正常现蕾、发育和成熟，其形态特征和口感也与野生环柄菇相似，获得类似野生环柄菇的营养、外形特征和口感，具有广泛的应用价值。

如上所述，即可较好地实现本发明,上述的实施例仅仅是本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。

Claims (2)

1.一种野生环柄菇人工驯化栽培的方法，其特征在于，所述的方法具体步骤如下：

(1)野生环柄菇子实体组织分离：在无菌微环境中将野生环柄菇的子实体沿菌盖和菌柄纵向掰开，然后用灭过菌的镊子迅速从子实体菌盖和菌柄交界处取出黄豆粒大小的子实体菌肉组织接种到常规PDA培养基斜面上，25℃恒温暗培养7d-10d；然后对菌丝进行纯化培养，方法为，从菌落边缘挑取尖端菌丝体，移植到常规PDA培养基斜面上，25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面，如此重复3次即可；

(2)一级种扩繁：将上述步骤分离筛选保藏的菌种转管扩繁至PDA培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个培养基斜面，备用；

(3)二级种、三级种的制备：将扩繁好的一级种转接至常规麦粒培养基中，置温度25℃，湿度60％的黑暗环境进行培养，至菌丝长满整个麦粒培养基后称为二级种；再将二级种转接到常规麦粒培养基中，置温度25℃，湿度60％的黑暗环境进行培养，至菌丝长满整个麦粒培养基后称为三级种；

(4)发酵料床式覆土栽培：发酵料培养基配方为，棉籽壳2000㎏、干牛粪1750㎏、尿素25㎏、碳酸钙20㎏、石膏50㎏、过磷酸钙50㎏、油渣20㎏和石灰50㎏；建堆采用，先在地面上铺一层20cm-25cm厚预湿好的棉籽壳，在棉籽壳上撒一层干牛粪、过磷酸钙、尿素、油渣、石灰，其上再铺20cm-25cm厚的棉籽壳，再撒一层干牛粪、过磷酸钙、尿素、油渣、石灰，依次逐渐上堆，当堆至第三、六、十层棉籽壳时，均匀淋水，至堆底有少量水溢出为止；建好的发酵培养料堆宽250cm-350cm，高150cm-180cm，长度不限，在建好的发酵料堆顶部覆盖1-2层塑料薄膜以利于保湿；翻堆：采用每次翻堆需把下面的发酵培养料翻到上面，四周翻到中间，中间翻到外边，把干料和湿料充分拌和均匀，促使培养料发酵均匀一致，同时尽可能将发酵培养料抖松、抖散，排尽其中废气；由于经过发酵，每次翻堆时，发酵培养料堆体积都会缩小，再次建堆时，在不改变堆高、宽的前提下，可缩短堆的长度；第一次翻堆时加入石膏、碳酸钙，用石灰调解酸碱度至pH值7-8，并浇水调节湿度，第二次翻堆加入石灰调解酸碱度至pH值7-8，再根据干湿情况适当调节水分；检查发酵培养料含水量：抓一把发酵培养料轻轻一捏，有1-2滴水滴下为标准，不可太湿或过干；经翻堆4-5次，培养料发酵结束；发酵好的培养料标准为，培养料颜色呈咖啡色，无氨臭味，培养料中均匀分布有白色高温菌落，质地松软，富有弹性，含水量60％-65％，pH值7-8，达到以上标准，发酵培养料即可进棚播种；

(5)发酵培养料进棚和菇棚消毒：发酵培养料要趁热进棚，每间菇棚进料要当天完成；铺料厚度要求均匀一致，厚度采用20cm-30cm；发酵培养料进棚前和进棚后都要对菇棚进行消毒；消毒方法为，密闭菇棚，按每立方米空间用甲醛10ml、高锰酸钾5g进行气化消毒，闷24h后打开门窗，排出甲醛气体，无味时预备播种；

(6)播种：播种前应检查栽培发酵培养料中的温度、氨气浓度、料含水量；当栽培发酵培养料温度低于30℃、无氨臭味，含水量达到60-65％时方可播种；播种时将菌种从菌种瓶中取出稍加揉散呈颗粒状，均匀撒播于栽培发酵培养料表面，用消过毒的木板轻压培养料表面，使菌种与栽培发酵培养料紧密接触，以利菌丝恢复和长入栽培发酵培养料；播种后要及时覆膜，以便保温保湿，以利菌种萌发；

(7)菌丝培养：这一时期主要是促进菌丝生长，防止杂菌发生，温度控制在25℃左右，适当通风，每天为料床抖膜1次增氧；播种3d-5d后菌种萌发成雪花状，及时揭膜，并适当给菇棚通风，5d-7d后菌丝长入培养料，加大通风量，促使料表干燥，抑制杂菌发生，同时保持新鲜空气，促进菌丝向料纵深生长；播种20d后，菌丝长入培养料内2/3以上至长透培养料时，就可以覆土；

(8)覆土：覆土的选择与处理：选用吸水性强，保水性好，不易板结，有适当肥质的中性粘壤土或中壤土为覆土材料；采挖回来的覆土材料要充分暴晒，然后用加有一定浓度福尔马林和施百功的清水将土浸透，盖膜堆闷5d以上，让药物气体充分穿透土层消毒，5d后揭膜，散去农药气味；使用前均匀加入石灰粉，将覆土酸碱度调至pH值7-8方可使用；

(9)出菇管理：出菇期间要求的适宜条件：温度20℃-28℃，空气相对湿度85％-95％，培养料含水量65％，覆土含水量22％，空气新鲜；及时清理床面死菇、病菇和发黄的死菇根，注意菇房卫生，预防病虫害发生，结合喷水或追肥，调节酸碱度，喷施0.5％-1％石灰清液。

2.如权利要求1所述的野生环柄菇人工驯化栽培的方法，其特征在于，所述的覆土方法分两次覆土，头遍土覆盖厚度2.5cm-3cm，要求厚薄均匀一致，覆土后在3d-5d时间内用细喷勤喷的方法调好含水量，调水时和调水后一天，要加强通风，随后减少通风2d-3d，促进菌丝迅速上土；当土表可见大量菌丝即可覆盖二遍土，二遍土含水量较低，覆盖厚度1cm；覆盖二遍土后，要经常检查土层菌丝生长情况，如见菌丝长到两层覆土之间，应加强通风，促使二遍土表面较干，防止菌丝直上冒出土面，促使菌丝横卧变粗，在土层内长好发足，并促使菌丝由营养生长开始向生殖生长转化，控制出菇部位于两层覆土之间；整个覆土期间控制温度25℃；当土中菌丝已普遍形成小白点，表明出菇条件已到，就要适时喷“出菇水”，连续喷2d-3d，增加覆土含水量，同时要加大菇棚通风量，使覆土表面湿度减少，防止菌丝冒出土面。