CN104807947B - 杜仲和含杜仲制剂的薄层鉴别方法及碘化铋钾溶液的应用 - Google Patents
杜仲和含杜仲制剂的薄层鉴别方法及碘化铋钾溶液的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及杜仲和含杜仲制剂的薄层鉴别方法及碘化铋钾溶液的应用，杜仲的薄层鉴别方法包括以下步骤：(1)将供试品和杜仲的标准品分别制成供试品溶液和对照溶液；(2)将供试品溶液和对照溶液在薄层板上分别点样，用展开剂展开；(3)展开后将薄层板取出，干燥，喷洒显色剂碘化铋钾溶液，吹干或烘干，放置至斑点显色清晰，实现杜仲的薄层鉴别。本发明选择的碘化铋钾溶液特别适用于杜仲药材及含杜仲制剂的显色，具有重现性好、专属性强、简单实用的优点，能有效的控制杜仲药材及含杜仲制剂的质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种杜仲和含杜仲制剂的薄层鉴别方法及碘化铋钾溶液的应用，属于中药材的薄层色谱领域。
背景技术
蓝红胶囊由蓝刺头、杜仲、红花等成分组成，具有活血散瘀、消肿止痛、续筋接骨等功效，是用于治疗软组织挫伤、挤压伤、关节扭伤、开放性创伤、肢体骨折等的伤科良药。杜仲药材系杜仲科植物杜仲（Eucommia ulmoides Oliv）的干燥树皮，其炮制品分为杜仲和盐杜仲，是非常重要的中药材，收载于中国药典2010年版，具有补肝肾、强筋骨、安胎等功效。杜仲植物的药用部位有杜仲皮与杜仲叶，杜仲翅果由于药用成分不高，暂未入药，一般未特别指明的杜仲是指杜仲皮。在蓝红胶囊中，杜仲作为臣药，其真伪对制剂疗效起着十分重要的作用，而《中国药典》2010年版杜仲药材的鉴别项仅为显微与理化鉴别，而薄层鉴别法是快捷有效鉴别中药真伪的方法。为了使杜绝杜仲药材伪劣品，以及其制剂蓝红胶囊等发挥稳定、可靠和确切的疗效，宜建立杜仲的薄层鉴别方法。
目前关于杜仲及含杜仲的制剂已有报道的薄层鉴别方法分别采用下列展开剂和显色方法。参照这些方法对杜仲及含杜仲的制剂蓝红胶囊进行薄层鉴别，均有不完善之处：如薄层色谱斑点较多、目标成分的斑点不够清晰、色带重、或操作繁、或重现性差。
(1)《中国药典》2010版798页青娥丸项下，用展开剂为二氯甲烷-甲醇-甲酸(8:2:0.1)，显色剂为含5%香草醛的10%硫酸乙醇溶液的方法鉴别其中的杜仲成分，参照此方法鉴别杜仲药材及其制剂蓝红胶囊，操作繁琐，目标成分的斑点不够清晰，杂质斑点多，且重现性差。
(2)朱希等在《补肾活血颗粒薄层鉴别研究》中用展开剂为正己烷-乙酸乙酯(9:1)，365nm紫外光下检视的方法鉴别该制剂中的杜仲成分，参照此方法鉴别杜仲药材及含杜仲制剂蓝红胶囊，专属性不强，制剂阴性有明显干扰。
(3)刘新等在《海马追风膏质量标准研究》中用展开剂为乙酸乙酯-丙酮-冰醋酸-水(5:5:1:1)，显色剂为10%硫酸乙醇溶液的方法鉴别该制剂中的杜仲成分，参照此方法鉴别杜仲药材及含杜仲制剂蓝红胶囊，目标成分斑点不清晰，杂质斑点多。
(4)熊建国等在《金刚丸质量标准考察》中用展开剂为二甲苯-乙酸乙酯-70%乙醇-甲酸(3.5:3.5:1:0.6)显色剂为含5%茴香醛和5%硫酸的无水乙醇溶液的方法鉴别该制剂中的杜仲成分，参照此方法鉴别杜仲药材及含杜仲制剂蓝红胶囊，斑点不清晰，色带重。
(5)郑雪等在《杜仲叶中松脂醇二葡萄糖苷的提取分离及含量测定》中用展开剂为三氯甲烷-甲醇-水(70:30:5)，显色剂为20%硫酸乙醇溶液的方法鉴别杜仲叶提取物中的松脂醇二葡萄糖苷，参照此方法鉴别杜仲药材及含杜仲制剂蓝红胶囊，目标成分斑点弱，杂质斑点强且多，重现性差。
(6)白玉海等在《强力接骨散质量标准研究》中用展开剂为三氯甲烷-正丁醇-水-甲醇(5:4:0.5:0.5)的下层溶液，365nm紫外光下检视的方法鉴别制剂中杜仲成分，参照此方法鉴别杜仲药材及含杜仲制剂蓝红胶囊，专属性不强，制剂阴性有疑似干扰。
(7)高志敏等在《天钩降压胶囊的研究》中用展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(2:4：4)，显色剂为5%香草醛硫酸溶液的方法鉴别杜仲成分，参照此方法鉴别杜仲药材及含杜仲制剂蓝红胶囊，目标成分斑点弱，色带重，重现性差。
(8)刘玲等在《杜仲药材薄层色谱鉴别研究》中用展开剂为三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸(1:7:1:1)，365nm紫外光下检视的方法鉴别制剂中杜仲药材中的松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸成分，参照此方法鉴别杜仲药材及含杜仲制剂蓝红胶囊，结果杜仲药材色谱中目标成分斑点弱，杂质斑点强且多；蓝红胶囊制剂色谱中斑点不明显，色带重。
发明内容
本发明解决的是含杜仲的制剂检测不够方便，显色不清晰，杂质斑点多，重现性差的技术问题。
本发明的技术方案是，提供一种杜仲、含杜仲制剂的薄层鉴别方法，包括以下步骤：(1)将供试品和杜仲的标准品分别制成供试品溶液和对照溶液；(2)将供试品溶液和对照溶液在薄层板上分别点样，用展开剂展开；(3)展开后将薄层板取出，干燥，喷洒显色剂碘化铋钾溶液，吹干或烘干，放置至斑点显色清晰，实现杜仲的薄层鉴别。
进一步地，所述碘化铋钾溶液为碘化铋钾试液、稀碘化铋钾试液或改良碘化铋钾试液。
进一步地，所述展开剂为三氯甲烷︰甲醇︰水=3～10︰1～5︰0.1～0.5。
进一步地，所述放置的时间在0.5小时以上。
进一步地，所述显色是在可见光下显色。
进一步地，所述吹干是利用40～120℃的热风吹干。
进一步地，所述标准品为杜仲对照药材与松脂醇二葡萄糖苷对照品。
进一步地，所述干燥为烘干、吹干或晾干。
进一步地，所述含杜仲的制剂为杜仲提取物、蓝红胶囊、蓝红片、蓝红丸、蓝红颗粒、青娥丸、河车大造丸和强力天麻杜仲胶囊中的一种或几种。
本发明进一步提供碘化铋钾溶液的应用，将碘化铋钾溶液用作杜仲薄层鉴别的显色剂。
本发明中使用的碘化铋钾溶液是用于使杜仲中某些成分显色，从而实现对是否含有杜仲实现鉴别，但是本发明中的显色剂碘化铋钾溶液与杜仲中的成分作用后，不会马上显色，而是要放置一段时间后，斑点才会逐渐显色，最好是放置0.5小时以上。
杜仲主要监控成分是松脂醇二葡萄糖苷，且松脂醇二葡萄糖苷目前只作为杜仲的监控成分，目前药典及其他国家标准均只杜仲监控了松脂醇二葡萄糖苷这一成分。松脂醇二葡萄糖苷是杜仲降压的主要成分。
碘化铋钾溶液可以是按照《中国药典》中规定的方法配制的碘化铋钾试液、稀碘化铋钾试液或改良碘化铋钾试液，也可以是其他浓度的碘化铋钾溶液，均可以使杜仲显色。另外，喷洒的显色剂碘化铋钾溶液，应该吹干，最好是热风吹干，若烘干，则应等溶剂干后，立即取出。喷洒碘化铋钾溶液后，可以使热风吹干或烘干，使溶剂干燥后不可以再继续使薄层板接触高温，以免显色的分子结构被破环。本发明使用的展开剂可以是三氯甲烷︰甲醇︰水=3～10︰1～5︰0.1～0.5，也可以是现有技术中的其他展开剂，只是不同的展开剂会使杜仲在薄层板上的比移值(Rf)不同而已，而不会影响显色效果。即使在薄层板上的分离效果略差，其他成分不可以与碘化铋钾溶液显色，故依然可以实现杜仲的鉴别。
本发明可以以杜仲对照药材与松脂醇二葡萄糖苷对照品作为对照溶液，材料易得，成本低廉，杂质干扰较少。另外，本发明中对于杜仲供试品溶液和杜仲对照溶液与现有技术中的制备方法相同。
本发明可以适用于杜仲和含杜仲的制剂的薄层鉴别，进一步，适用于含松脂醇二葡萄糖苷的药材与制剂，当然浓度要适宜，一般松脂醇二葡萄糖苷含量要高于供试品质量的0.02%，才能显色清楚。
本发明的有益效果是，碘化铋钾溶液特别适用于杜仲药材及含杜仲制剂的显色，具有重现性好，专属性强，简单实用的优点，能有效的控制杜仲药材及含杜仲制剂的质量。
附图说明
图1表示本发明提供的薄层鉴别的效果图。
图2表示本发明提供的薄层鉴别杜仲皮和杜仲翅果的效果图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。为保证试验的准确性，实施例中均多添加一种标准品溶液，即杜仲对照药材溶液。杜仲对照药材溶液也是属于本发明中对照溶液中的一种，任何一种对照溶液均可以单独进行对照。没有特别说明的杜仲粉末，实际就是杜仲皮粉末。
实施例中蓝红胶囊的制备工艺为：取珍珠、三七粉碎成极细粉，配研法混合均匀，备用。蓝刺头、杜仲、红花加入12倍量60%乙醇回流提取三次，每次2小时。滤过，滤液回收乙醇得稠膏状物。药渣加入14倍量水煎煮二次，每次1.5小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，两稠膏合并，浓缩至相对密度1.35（80℃测）。加入上述细粉及适量糊精收膏，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量的湿润剂，14目筛制粒，60℃烘干，16目筛整粒，装入胶囊，即得。
实施例
1
取蓝红胶囊内容物粉末3g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至3ml以下，转移至带刻度的离心管中，并定容至3ml，摇匀，静置或离心，取上清液1ml，置中性氧化铝SPE柱（1g/3ml）上，以20%乙醇溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取杜仲对照药材粉末2g，同供试品溶液制备方法制成杜仲对照药材溶液；取松脂醇二葡萄糖苷为对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按处方比例和制备工艺，配制成不含杜仲的蓝红胶囊的阴性样品，并按上述供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液；照薄层色谱法(中国药典2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(7:3:0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液，电吹风热风吹干，放置至斑点显色清晰。放置1小时，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。薄层色谱的鉴别结果如图1，图1中：1-松脂醇二葡萄糖苷对照品；2-杜仲对照药材；3-杜仲药材；4-盐杜仲；5-蓝红胶囊；6-阴性样品。
实施例
2
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于展开剂为：三氯甲烷-甲醇-水（3:1:0.1）的下层溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
3
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于展开剂为：甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水（5:3:2.5:2.5）的下层溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
4
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于展开剂为：三氯甲烷-正丁醇-水-甲酸(1:7:1:1)的下层溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
5
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于展开剂为：二氯甲烷-甲醇-甲酸(8:2:0.1)的下层溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
6
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于显色剂为稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但斑点颜色较浅。
实施例
7
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于显色剂为改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但斑点颜色较浅。
实施例
8
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于：喷以碘化铋钾试液后，60℃烘干，放置至斑点显色清晰。放置2小时，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。
实施例
9
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于：喷以碘化铋钾试液后，常温晾干，放置至斑点显色清晰。放置5小时，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。
实施例
10
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于提取溶剂为甲醇5ml，提取方法为超声60分钟，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水(5:2:0.2)。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
11
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于提取溶剂为乙醇50ml，提取方法为回流1小时，且以40%乙醇溶液20ml洗脱，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水(3:1:0.1)。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
12
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于提取溶剂为乙酸乙酯50ml，提取方法为冷浸1小时，且以50%乙醇溶液30ml洗脱，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水(10:5:0.5)。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
13
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于提取溶剂为丙酮50ml，提取方法为振摇30分钟，且以70%乙醇溶液12ml洗脱。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
14
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于提取溶剂为丙酮50ml，提取方法为浸泡1小时，置D101大孔树脂。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
15
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于纯化方法为：置硅胶柱上。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
16
取蓝红胶囊，按照实施例1的方法操作，不同之处在于纯化方法为：置S-8大孔树脂柱上。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
17
分别取杜仲药材粉末2g、杜仲炮制品盐杜仲粉末2g，按照实施例1的方法操作，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，薄层色谱的鉴别结果如图1。
实施例
18
取杜仲药材粉末1g、杜仲炮制品盐杜仲粉末1g，按照实施例1的方法操作，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
19
取杜仲叶粉末3g、杜仲粉末2g，按照实施例1的方法操作，供试品色谱中，杜仲与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；杜仲叶与对照品、对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点。可采用此薄层鉴别方法区分杜仲皮和杜仲叶。
实施例
20
取杜仲叶粉末6g、杜仲粉末2g，按照实施例1的方法操作，供试品色谱中，杜仲与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；杜仲叶与对照品、对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点。可采用此薄层鉴别方法区分杜仲皮和杜仲叶。薄层色谱的鉴别结果如图2，图2中：1-松脂醇二葡萄糖苷对照品；2-杜仲对照药材；3-杜仲药材；4-盐杜仲；5-杜仲叶对照药材；6-杜仲叶；7-杜仲翅果。
实施例
21
取杜仲翅果粉末6g、杜仲粉末2g，按照实施例1的方法操作，供试品色谱中，杜仲与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；杜仲翅果与对照品、对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点。可采用此薄层鉴别方法区分杜仲皮和杜仲翅果。薄层色谱的鉴别结果如图2。
实施例
22
取杜仲提取物粉末3g，按照实施例1的方法操作，供试品色谱中，与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
23
取杜仲(盐炒)480g、补骨脂(盐炒) 240g、核桃仁150g、大蒜 120g，照青蛾丸工艺制备青蛾丸，取青蛾丸粉末9g，加入石油醚（30～60℃）30ml脱脂，过滤，残渣挥尽石油醚，加甲醇50ml，超声处理60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加20ml水溶解，置大孔树脂柱，以40%乙醇溶液150ml洗脱，洗脱液浓缩至1ml，置中性氧化铝SPE柱（1g/3ml）上，以30%乙醇溶液12ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液与对照品溶液同实施例1。供试品色谱中，与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
24
取河车大造丸粉末18g，加甲醇80ml，超声处理60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加20ml水溶解，置大孔树脂柱，以40%乙醇溶液150ml洗脱，洗脱液浓缩至3ml以下，转移至带刻度的离心管中，并定容至3ml，摇匀，静置或离心，取上清液1ml，置中性氧化铝SPE柱（1g/3ml）上，以30%乙醇溶液12ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液与对照品溶液同实施例1。供试品色谱中，与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例
25
取强力天麻杜仲胶囊内容物粉末18g，加甲醇80ml，超声处理60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加20ml水溶解，置大孔树脂柱，以40%乙醇溶液150ml洗脱，洗脱液浓缩至3ml以下，转移至带刻度的离心管中，并定容至3ml，摇匀，静置或离心，取上清液1ml，置中性氧化铝SPE柱（1g/3ml）上，以30%乙醇溶液12ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液与对照品溶液同实施例1。供试品色谱中，与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
Claims (10)
1. 一种杜仲和含杜仲制剂的薄层鉴别方法，包括以下步骤：
(1)将供试品和杜仲的标准品分别制成供试品溶液和对照溶液；
(2)将供试品溶液和对照溶液在薄层板上分别点样，用展开剂展开；
其特征在于，(3)展开后将薄层板取出，干燥，喷洒显色剂碘化铋钾溶液，吹干或烘干，放置至斑点显色清晰，实现杜仲的薄层鉴别。
2.如权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述碘化铋钾溶液为碘化铋钾试液、稀碘化铋钾试液或改良碘化铋钾试液。
3. 如权利要求1或2所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述展开剂为三氯甲烷︰甲醇︰水=3～10︰1～5︰0.1～0.5。
4.如权利要求1或2所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述放置的时间在0.5小时以上。
5.如权利要求1或2所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述显色是在可见光下显色。
6.如权利要求1或2所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述吹干是利用40～120℃的热风吹干。
7. 如权利要求1或2所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述干燥为晾干、吹干或烘干。
8. 如权利要求1或2所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述标准品为杜仲对照药材与松脂醇二葡萄糖苷对照品。
9.如权利要求1或2所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述含杜仲的制剂为杜仲提取物、蓝红胶囊、蓝红片、蓝红丸、蓝红颗粒、青娥丸、河车大造丸和强力天麻杜仲胶囊中的一种或几种。
10.一种碘化铋钾溶液的应用，其特征在于，将碘化铋钾溶液用作杜仲薄层鉴别的显色剂。
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| 杜仲中双环氧木脂素二糖苷分离纯化技术的研究;戚向阳 等;《林产化学与工业》;20051230;第25卷(第4期);第47-50页 * |
| 杜仲叶中松脂醇二葡萄糖苷的提取分离及含量测定;郑雪 等;《食品科学》;20120325;第33卷(第6期);第166-170页 * |
| 杜仲叶生物碱提取分离与活性研究;杨梅 等;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（医药卫生科技辑）》;20150215(第2期);第24页"3.2.2 试验方法"小节 * |
| 杜仲药材薄层色谱鉴别研究;刘玲 等;《中国民族民间医药》;20140130(第2期);第8-9页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104807947A (zh) | 2015-07-29 |
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