CN104663434A - 一种花叶红叶石楠的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域，它包括外植体灭菌，初代培养，继代培养，生根培养和炼苗移栽的步骤。本发明建立了组培快繁体系，培养流程明了，操作简便，经济高效，不受季节气候变化及自然灾害的影响，为花叶红叶石楠的工业化育苗提供了技术支持；经炼苗移栽后，花叶红叶石楠的成活率高，达到80%以上。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种组培方法，具体涉及一种花叶红叶石楠的组培快繁方法。
背景技术
花叶红叶石楠（Photinia x fraseri 'Pink Marble'）是红叶石楠的一个变种，为常绿灌木，因其鲜红色的新梢和叶片的叶缘带白斑而得名，具有较高的观赏价值。花叶红叶石楠作为珍贵的常绿彩叶树种，具有生长快，耐修剪，株型紧凑，萌芽力强，适生范围广的特点；其喜阴、耐酸、耐盐碱、耐旱、耐寒且耐贫瘠，黄河以南绝大部分地区均可种植。花叶红叶石楠的叶片在初现时为红色，边缘白色，随着叶片成熟而逐渐转变为深绿色而具银白色叶脉，如同大理石一般，在生长后期带有粉色色调，配合修剪可常年保持极其醒目的鲜红色；它的用途广泛,可作绿篱、绿墙、造型树、孤植树等,效果俱佳。
随着人们生活水平的不断提高,环境的净化和美化愈来愈受到人们的普遍关注,用于园林绿化的植物除了占绝对量的绿色植物外,还具有大量起构图、配色和点睛作用的彩叶植物,尤其是红叶树种。花叶红叶石楠是近年新发现的品种，在市场上的发展潜力非常大，目前还处于种苗繁育阶段，市场上尚未有销售。花叶红叶石楠常规的繁殖方法为扦插，繁殖速度慢，大大限制了花叶红叶石楠的推广速度。
植物快繁基本采用植物组织培养技术，进入20世纪60年代以来，植物的组织培养技术进入产业化应用阶段，研究深入扎实，实现了工业化育苗，是一种切实有效的方法和途径，具有丰富的理论价值和现实意义。现在尚没有关于花叶红叶石楠快繁技术的公开，因此，急需进行花叶红叶石楠组培快繁技术的研究，建立花叶红叶石楠组培快繁体系，获得花叶红叶石楠无菌组培苗。
发明内容
本发明解决了现有技术中花叶红叶石楠繁殖速度慢的问题，提拱了一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，为花叶红叶石楠的工业化育苗提供了技术支持。
本发明的目的通过以下技术方案实现：一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：采集无病虫害的花叶红叶石楠当年生幼嫩茎段，去掉叶片，用清水冲洗30～40min，洗涤剂浸泡8～12min，清水冲洗3～5次，放置在超净工作台上，用70～80%酒精灭菌18～25s，0.1～0.2%升汞处理5～8min，用无菌水冲洗4～6次；（2）初代培养：将灭菌后的幼嫩茎段切割成2～3cm茎段，接种到初代培养基中，在培养室内培养2～3周，腋芽伸长2～4cm；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室中培养3～4周，植株的叶腋处丛生芽生成；
（4）生根培养：将生成的丛生芽切下接种到生根培养基中，在培养室内培养3～4周，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长6～7cm，生根数为2～4根，根长3～5cm；
（5）炼苗移栽：将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外2～5天后，炼苗6～8天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到大棚苗床上，控制大棚内的温度为22～26℃，空气湿度为65%～72%。
进一步地，所述的初代培养基为1/2WPM+ IAA0.3mg/L + GA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 5.8～6.2。
进一步地，所述的继代培养基为NN69+ZT0.2mg/L+CPPU 0.5mg/L+0.3g/L水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 5.8～6.2。
进一步地，所述的生根培养基为1/4WPM+NAA0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 5.8～6.2。
进一步地，步骤（2）、步骤（3）和步骤（4）中所述的培养室内条件为：光照强度2800LX～3200LX，光照时间14～18h/d，温度22～26℃。
进一步地，所述的移栽过程中移栽基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1:1.5～2.5；大棚里面用市售的遮阳网遮光降温保湿。
更进一步地，所述的移栽过程包括每天早晚叶面喷水，培养3～5周后，见到新叶开始生长，表明移栽的花叶红叶石楠成活。
本发明具有以下有益效果：（1）本发明采用组织培养技术，建立了组培快繁体系，经济高效、不受季节气候变化及自然灾害的影响，花叶红叶石楠的工业化育苗提供了技术支持；（2）本发明培养流程明了，操作简便，提高了花叶红叶石楠的繁殖效率，能够快速获得花叶红叶石楠无菌组培苗；（3）本发明得到的花叶红叶石楠无菌组培苗经过炼苗移栽成活率在80%以上。
附图说明
图1是本发明所述的花叶红叶石楠初代培养中腋芽；
图2是本发明所述的花叶红叶石楠继代培养中叶腋处丛生芽；
图3是本发明所述的花叶红叶石楠生根培养中花叶红叶石楠组培苗根部；
图4是本发明所述的花叶红叶石楠移栽成活植株。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1：一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：采集无病虫害的花叶红叶石楠当年生幼嫩茎段，去掉叶片，用清水冲洗30min，洗涤剂浸泡12min，清水冲洗5次，放置在超净工作台上，用70%酒精灭菌18s，0.1%升汞处理5min，用无菌水冲洗4次；
（2）初代培养：将灭菌后的幼嫩茎段切割成2cm茎段，接种到初代培养基中，在培养室内培养2周，腋芽伸长2cm，其中：初代培养基为：1/2WPM+ IAA0.3mg/L + GA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 5.8；培养室内条件为：光照强度2800LX，光照时间14h/d，温度26℃；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室中培养3周，植株的叶腋处丛生芽生成，其中：继代培养基为：NN69+ZT0.2mg/L+CPPU 0.5mg/L+0.3g/L水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 5.8；培养室内条件与步骤（2）中一致；
（4）生根培养：将生成的丛生芽切下接种到生根培养基中，在培养室内培养3周，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长6cm，生根数为2根，根长3cm，其中，生根培养基为：1/4WPM+NAA0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 5.8；培养室内条件与步骤（3）中一致；
（5）炼苗移栽：将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外2天后，炼苗6天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内的温度为22℃，空气湿度为65%，其中：移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1:1.5。
所述的移栽过程包括每天早晚叶面喷水，培养3～5周后，见到新叶开始生长，表明移栽的花叶红叶石楠成活，再过2周，调查花叶红叶石楠的成活率，成活率为80%。
实施例2：一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：采集无病虫害的花叶红叶石楠当年生幼嫩茎段，去掉叶片，用清水冲洗40min，洗涤剂浸泡8min，清水冲洗3次，放置在超净工作台上，用80%酒精灭菌25s，0.2%升汞处理8min，用无菌水冲洗6次；
（2）初代培养：将灭菌后的幼嫩茎段切割成3cm茎段，接种到初代培养基中，在培养室内培养3周，腋芽伸长4cm，其中：初代培养基为：1/2WPM+ IAA0.3mg/L + GA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.2；培养室内条件为：光照强度3200LX，光照时间18h/d，温度22℃；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室中培养4周，植株的叶腋处丛生芽生成，其中：继代培养基为：NN69+ZT0.2mg/L+CPPU 0.5mg/L+0.3g/L水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.2；培养室内条件与步骤（2）中一致；
（4）生根培养：将生成的丛生芽切下接种到生根培养基中，在培养室内培养4周，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长7cm，生根数为4根，根长5cm，其中，生根培养基为：1/4WPM+NAA0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.2；培养室内条件与步骤（3）中一致；
（5）炼苗移栽：将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外5天后，炼苗8天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内的温度为26℃，空气湿度为72%，其中：移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1:2.5。
所述的移栽过程包括每天早晚叶面喷水，培养5周后，见到新叶开始生长，表明移栽的花叶红叶石楠成活，再过2周，调查花叶红叶石楠的成活率，成活率为82%。
实施例3：一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：采集无病虫害的花叶红叶石楠当年生幼嫩茎段，去掉叶片，用清水冲洗33min，洗涤剂浸泡10min，清水冲洗4次，放置在超净工作台上，用73%酒精灭菌20s，0.13%升汞处理6min，用无菌水冲洗5次； （2）初代培养：将灭菌后的幼嫩茎段切割成2.3cm茎段，接种到初代培养基中，在培养室内培养16天，腋芽伸长2.8cm，其中：初代培养基为：1/2WPM+ IAA0.3mg/L + GA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.0；培养室内条件为：光照强度2900LX，光照时间16h/d，温度24℃；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室中培养24天，植株的叶腋处丛生芽生成，其中：继代培养基为：NN69+ZT0.2mg/L+CPPU 0.5mg/L+0.3g/L水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.0；培养室内条件与步骤（2）中一致；
（4）生根培养：将生成的丛生芽切下接种到生根培养基中，在培养室内培养24天，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长6.3cm，生根数为3根，根长3.8cm，其中，生根培养基为：1/4WPM+NAA0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.0；培养室内条件与步骤（3）中一致；
（5）炼苗移栽：将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外3天后，炼苗7天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内的温度为24℃，空气湿度为68%，其中：移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1:1.8。
所述的移栽过程包括每天早晚叶面喷水，培养4周后，见到新叶开始生长，表明移栽的花叶红叶石楠成活，再过2周，调查花叶红叶石楠的成活率，成活率为81.5%。
实施例4：一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：采集无病虫害的花叶红叶石楠当年生幼嫩茎段，去掉叶片，用清水冲洗36min，洗涤剂浸泡11min，清水冲洗5次，放置在超净工作台上，用76%酒精灭菌22s，0.18%升汞处理7min，用无菌水冲洗5次； （2）初代培养：将灭菌后的幼嫩茎段切割成2.8cm茎段，接种到初代培养基中，在培养室内培养18天，腋芽伸长3.5cm，其中：初代培养基为：1/2WPM+ IAA0.3mg/L + GA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.0；培养室内条件为：光照强度3100LX，光照时间16h/d，温度25℃；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室中培养26天，植株的叶腋处丛生芽生成，其中：继代培养基为：NN69+ZT0.2mg/L+CPPU 0.5mg/L+0.3g/L水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.0；培养室内条件与步骤（2）中一致；
（4）生根培养：将生成的丛生芽切下接种到生根培养基中，在培养室内培养26天，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长6.8cm，生根数为4根，根长4.5cm，其中，生根培养基为：1/4WPM+NAA0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.0；培养室内条件与步骤（3）中一致；
（5）炼苗移栽：将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外4天后，炼苗7天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内的温度为25℃，空气湿度为70%，其中：移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1:2.2。
所述的移栽过程包括每天早晚叶面喷水，培养4周后，见到新叶开始生长，表明移栽的花叶红叶石楠成活，再过2周，调查花叶红叶石楠的成活率，成活率为80.9%。
从实施例1～4得出：本发明利用组织培养技术，建立组培快繁体系，能在短时间得到大量的花叶红叶石楠无菌组培苗，经炼苗移栽后，成活率达到80%以上。
Claims (6)
1.一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：采集无病虫害的花叶红叶石楠当年生幼嫩茎段，去掉叶片，用清水冲洗30～40min，洗涤剂浸泡8～12min，清水冲洗3～5次，放置在超净工作台上，用70～80%酒精灭菌18～25s，0.1～0.2%升汞处理5～8min，用无菌水冲洗4～6次；
（2）初代培养：将灭菌后的幼嫩茎段切割成2～3cm茎段，接种到初代培养基中，在培养室内培养2～3周，腋芽伸长2～4cm；
（3）继代培养：将腋芽切下家中到继代培养基中，在培养室中培养3～4周，植株的叶腋处丛生芽生成；
（4）生根培养：将生成的丛生芽切下接种到生根培养基中，在培养室内培养3～4周，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长6～7cm，生根数为2～4根，根长3～5cm；
（5）炼苗移栽：将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外2～5天后，炼苗6～8天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到大棚苗床上，控制大棚内的温度为22～26℃，空气湿度为65%～72%。
2.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，所述的初代培养基为1/2WPM+ IAA0.3mg/L + GA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 5.8～6.2。
3.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，所述的继代培养基为NN69+ZT0.2mg/L+CPPU 0.5mg/L+0.3g/L水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 5.8～6.2。
4.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，所述的生根培养基为1/4WPM+NAA0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 5.8～6.2。
5.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，步骤（2）、步骤（3）和步骤（4）中所述的培养室内条件为：光照强度2800LX～3200LX，光照时间14～18h/d，温度22～26℃。
6.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，所述的移栽过程中移栽基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1:1.5～2.5。
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Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 何家涛: ""红叶石楠离体培养与高效再生体系建立"", 《湖北农业科学》, vol. 49, no. 7, 31 July 2010 (2010-07-31), pages 1553 - 1557 * |
| 吴丽君: ""TDZ和GA3对提高红叶石楠组培快繁效率的研究"", 《福建农业学报》, vol. 23, no. 2, 31 December 2008 (2008-12-31), pages 186 - 190 * |
| 龚霄雯等: ""红叶石楠‘红罗宾’组织培养快繁技术的优化"", 《上海交通大学学报（农业科学版）》, vol. 29, no. 6, 31 December 2011 (2011-12-31), pages 35 - 41 * |
Also Published As
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