CN104640540B - 与抗炎活性偶联的增强的抗流感剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了通过与抗炎剂偶联而形成的新的双重靶向的双功能抗流感药物。本发明的示例性药物包括用于同时抑制流感病毒神经氨酸酶并抑制促炎性细胞因子的带有咖啡酸(CA)的扎那米韦(ZA)偶联物ZA‑7‑CA(1)、ZA‑7‑CA‑酰胺(7)和ZA‑7‑Nap(43)。提供了用于制备这些增强的抗流感偶联物药物的合成方法。所述合成的双功能ZA偶联物协同作用，以保护被H1N1或H5N1流感病毒致命感染的小鼠。ZA‑7‑CA、ZA‑7‑CA‑酰胺和ZA‑7‑Nap偶联物的效能远高于ZA与抗炎剂的组合疗法。

Description

与抗炎活性偶联的增强的抗流感剂
相关申请
本申请要求2013年3月15日提交的美国专利申请号13/836,356和2012年4月14日提交的美国临时申请号61/624,250的优先权，每个所述申请的内容以其全文通过参考并入本文。
技术领域
本发明涉及抗病毒疗法领域。具体来说，本发明涉及针对流感病毒感染的双功能治疗剂，其中所述治疗药物包含与抗炎剂偶联的抗流感组成部分。
发明背景
流感是一种引起严重健康问题的呼吸道感染。A/H5N1禽流感在世界范围内的传播以及2009年新型A/H1N1人流感的爆发，增加了公众对全球流感大流行的可能性的警觉。H5N1流感病毒似乎比季节性流感和流行的H1N1/2009毒株复制更快。巨噬细胞的H5N1病毒感染也引起促炎性细胞因子和趋化因子的强烈表达，被称为细胞因子风暴(参见Lee,S.M.Y.等，J.Infect.Dis.2008,198,525；Woo,P.C.Y.等，J.Infec.Dis.2010,201,346)。
在H5N1病毒感染患者中，已在肺泡和支气管上皮细胞中观察到肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(ΙFΝ)-β/γ的诱导(Yuen,K.Y.等，Hong Kong Med.J.11,189(2005))。其他细胞因子例如白介素(例如IL-6和IL-10)、IFN-诱导的趋化因子(例如IP-10、MIG和MIG-1)也在H5N1病毒感染的患者中以高水平被发现(de Jong,M.D.等，Nat Med 2005,11,189)。被流感H5N1感染的人类的高死亡率已被归因于病毒对神经氨酸酶(NA)抑制剂例如奥司他韦的响应不佳，以及严重的细胞因子风暴的过度诱导(Peiris,J.S.M.等，Lancet 2004,363,617；Geiler,J.,Med.Microbiol.Immunol.2011,200,53)。尽管单独使用抗炎剂治疗H5N1病毒感染的小鼠可以抑制促炎性细胞因子(Fedson,D.S.Influenza OtherResp.2009,3,129)，但被感染小鼠的死亡率没有降低(Carter,M.J.AJ.Med.Microbiol.2007,56,875；Salomon,R.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2007,104,12479)。
由于快速发展的耐药性，使用用于流感的单一抗病毒药物的单一疗法可能在效能上有限(Baz,M.等，New Engl.J.Med.2009,361,2296)。此外，不受控制的病毒诱导的细胞因子可能造成了被H5N1禽流感病毒感染的人类的高死亡率。
在不同的方法中，由靶向不同病毒蛋白或宿主免疫应答的两种或更多种药物构成的组合化学疗法，可能提供累加或协同的抗病毒活性(Govorkova,E.A.&Webster,R.G.Viruses 2010,2,1510)，因此降低了使用单一疗法的耐药性风险。
扎那米韦(ZA)是一种强力流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制剂，在市场上被称为RelenzaTM(Ryan,D.M.等，Antimicrob.Agents Chemother.1994,38,2270)；病毒对扎那米韦的耐药性罕见(Collins,P.J.等，Nature 2008,453,1258-1261)。扎那米韦与一种抗炎性皮质甾类曲安西龙的组合，已被应用于治疗H3N2病毒感染(Ottolini,M.等，Pediatr.Pulmonol.2003,36,290)。在另一项研究中(Zheng,B.J.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2008,105,8091)，接受扎那米韦与免疫调节药物(塞来昔布和美沙拉嗪)的三重组合的用高毒力H5N1病毒(1000 LD50)感染的小鼠，与单独使用扎那米韦的治疗相比，显示出更好的存活率。增强的治疗效果可能可归因于协同的抗病毒活性和细胞因子抑制。
因此，对于用于流感病毒感染的预防、治疗和疗法，通过抗流感组成部分与抑制促炎性细胞因子的组成部分的偶联而形成的更新的且有协同效果的双功能药物，存在着需求。
发明概述
本发明提供了具有双重靶向和双功能抗流感活性的化合物。所提供的化合物总的来说通过将一种或多种抗炎剂与一种或多种抗流感剂相偶联来形成。本发明的示例性化合物包括带有咖啡酸(CA)的扎那米韦(ZA)偶联物ZA-7-CA(1)、ZA-7-CA-酰胺(7)和ZA-7-Nap(43)，其用于同时抑制流感病毒神经氨酸酶和阻遏促炎性细胞因子。本文中描述了这些增强的抗流感偶联化合物的制备。本申请还证实了合成的双功能ZA偶联物协同作用以保护被H1N1或H5N1流感病毒致死性感染的小鼠。出人意料的是，发现ZA-7-CA、ZA-7-CA-酰胺和ZA-7-Nap偶联物的效能远高于ZA和抗炎剂的组合疗法。
一方面，本发明提供了源自于神经氨酸酶抑制剂和抗炎剂的嵌合化合物(参见例如在图2中示出的)，例如偶联物43-51。
另一方面，本发明通过将一种或多种抗炎剂与一种或多种抗炎剂相偶联，提供了双重靶向抗流感化合物。在某些实施方式中，所述抗炎剂是扎那米韦(ZA)、膦酰-扎那米韦(PZA)、奥司他韦(OS)、零流感(tamiphosphor)(TP)或帕拉米韦(PE)。在某些实施方式中，所述抗炎剂是咖啡酸(CA)、美沙拉嗪(ME)、萘普生(Nap)和布洛芬(Ibu)。在某些实施方式中，所提供的化合物同时抑制流感病毒神经氨酸酶并阻遏促炎性细胞因子。这些抗流感偶联物显示出协同效应，为细胞和小鼠提供针对流感感染的显著保护。低剂量(<1.2μmol/kg/天)扎那米韦偶联物、尤其是ZA-7-CA(1)和ZA-7-CA-酰胺(7)偶联物的鼻内给药，与ZA和抗炎剂的组合疗法相比，在被H1N1或H5N1流感病毒致命感染的小鼠的保护中显示出更大效果。
另一方面，本发明提供了嵌合的双功能化合物，其包含第一组成部分和第二组成部分。在某些实施方式中，所述第一组成部分是抗流感剂。在某些实施方式中，所述第二组成部分是抗炎剂或抗氧化剂组成部分。在某些实施方式中，所述第一和第二组成部分通过连接物偶联。在某些实施方式中，所述抗流感剂和抗炎剂如式(A)中所示通过连接物偶联。在某些实施方式中，所述连接物包含2-12个碳原子和/或0-5个选自N、O和S的杂原子。
在某些实施方式中，可以将超过一种(例如2种)抗流感剂通过所述连接物与一种抗炎剂相偶联。实例如下所示。
在其他实施方式中，可以将一种抗流感剂通过所述连接物与一种或多种抗炎剂相偶联。实例如下所示。
在其他实施方式中，将多种抗流感剂通过所述连接物与多种抗炎剂相偶联。下面是一个实例。
在某些实施方式中，所述抗炎剂是非甾类抗炎剂。在特定实施方式中，所述非甾类抗炎剂是酸抗炎剂。在某些实施方式中，所述抗流感剂是扎那米韦(ZA)、膦酰-扎那米韦(PZA)、奥司他韦(OS)、零流感(TP)或帕拉米韦(PE)的衍生物。
另一方面，式(A)的化合物具有式(I)或式(II)或者是其可药用盐：
其中X1、L、Y、B、R1、R2、R3、R4和R5如本文中所定义。
另一方面，提供的化合物是式(III)或(IV)的化合物或其可药用盐：
其中X2、L、Y、B、R2、R3、R4和R6如本文中所定义。
另一方面，提供的化合物是式(V)或(VI)的化合物或其可药用盐：
其中X1、L、Y、B、R2、R4和R6如本文中所定义。
另一方面，所提供的化合物是式(VII)或(VIII)的化合物或其可药用盐：
其中Y、B、R1、R2、R3、R4、R5和R6如本文中所定义。
另一方面，提供的化合物是式(IX)或(X)的化合物或其可药用盐：
其中X2、L、Y、B和R4如本文中所定义。
另一方面，提供的化合物是式(XI)或(XII)的化合物或其可药用盐：
其中X1、L、Y、B、R1和R4如本文中所定义。
在某些实施方式中，提供的化合物是下列任一式的化合物：
在某些实施方式中，提供的化合物选自：
在某些实施方式中，提供的化合物选自：
在某些实施方式中，提供的化合物选自：
在某些实施方式中，提供的化合物选自：
在某些实施方式中，提供的化合物选自：
另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含式(A)的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多形体、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前体药物，以及任选地可药用赋形剂。在某些实施方式中，本文中描述的药物组合物包括治疗有效量的式(A)的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多形体、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前体药物。在某些实施方式中，所述提供的药物组合物同时抑制流感病毒和炎症。
在某些实施方式中，所述药物组合物抑制流感病毒神经氨酸酶。在某些实施方式中，所述药物组合物抑制促炎性细胞因子。在某些实施方式中，与使用包含等同量的未偶联的流感病毒抑制剂和未偶联的抗炎剂的组合物所观察到的抑制相比，所述药物组合物以更高水平抑制流感病毒神经氨酸酶和促炎性细胞因子。
在某些实施方式中，式(A)的化合物或其可药用盐结合人和禽流感病毒毒株两者。在某些实施方式中，式(A)的化合物或其可药用盐结合H1N1和H5N1流感病毒毒株中的至少一种。
在某些实施方式中，式(A)的化合物或其可药用盐结合流感病毒的神经氨酸酶蛋白。在某些实施方式中，所述神经氨酸酶是野生型的。在某些实施方式中，所述神经氨酸酶是奥司他韦抗性的。
另一方面，本发明提供了通过向需要的受试者给药治疗有效量的任何式(A)的化合物或其可药用盐，来治疗或预防流感感染的方法。在某些实施方式中，所述给药持续到流感感染的症状减轻、缓解或终结为止。本公开的范围内还包括用于治疗流感感染的药物组合物，所述组合物包含本文中所描述的一种或多种式(A)的化合物和可药用载体，并且还包括这样的化合物在制造用于治疗流感感染的药物中的用途。
另一方面，本发明提供了试剂盒，其包含式(A)的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多形体、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前体药物，或其药物组合物。本发明的试剂盒可以包括单剂或多剂式(A)的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多形体、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前体药物，或其药物组合物。所提供的试剂盒可能可用于流感感染的治疗和/或预防。在某些实施方式中，本文中描述的试剂盒还包括给药式(A)的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多形体、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前体药物或其药物组合物的说明书。所述试剂盒还可以包括包装信息，其为受试者或健康护理专业人员描述了使用或处方信息。这样的信息可能是管理机构例如美国食品和药品管理局(FDA)所要求的。所述试剂盒还可以任选地包括用于化合物或组合物的给药的装置，例如用于眼部给药的滴管或用于肠胃外给药的注射器。
本文阐明了本发明的某些实施方式的详细情况。从详细描述、图、实施例和权利要求书，本发明的其他特点、目的和优点将显而易见。
定义
化学定义
特定官能团和化学术语的定义在下文中更详细描述。化学元素按照《化学和物理学手册》(Handbook of Chemistry and Physics)第75版封面内的CAS版的元素周期表来鉴定，并且具体官能团总的来说如其中所述来定义。此外，有机化学的一般性原理以及具体的功能组成部分和反应性，描述在《有机化学》(Organic Chemistry,Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito,1999)、Smith和March March的《高等有机化学》(Advanced Organic Chemistry，第5版，John Wiley&Sons,Inc.,New York,2001)、Larock的《有机转化详解》(Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers,Inc.,New York,1989)和Carruthers的《有机合成的一些现代方法》(Some Modern Methods ofOrganic Synthesis，第3版，Cambridge University Press,Cambridge,1987)中。
本文描述的化合物可以包含一个或多个不对称中心，并因此可以以各种立体异构形式例如对映异构体和/或非对映异构体存在。例如，本文描述的化合物可以采取单一对映异构体、非对映异构体或几何异构体的形式，或者可以采取立体异构体的混合物的形式，包括消旋混合物和富集有一种或多种立体异构体的混合物。可以通过本领域技术人员已知的方法，包括手性高压液相色谱(HPLC)和手性盐的形成和结晶，从混合物分离异构体；或者可以通过不对称合成来制备优选的异构体。参见例如Jacques等，《对映异构体、消旋体和拆分》(Enantiomers,Racemates and Resolutions)(Wiley Interscience,New York,1981)；Wilen等，Tetrahedron 33:2725(1977)；Eliel,E.L.，《碳化合物的立体化学》(Stereochemistry of Carbon Compounds)(McGraw-Hill,NY,1962)；和Wilen,S.H.，《拆分剂和光学拆分表》(Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions)p.268(E.L.Eliel主编，Univ.of Notre Dame Press,Notre Dame,IN 1972)。另外，本发明涵盖作为基本上不含其他异构体的单独异构体或作为各种异构体的混合物的化合物。
当列出值的范围时，该范围旨在涵盖所述范围内的每个值和子范围。例如，“C1-6烷基”打算涵盖C1、C2、C3、C4、C5、C6、C1-6、C1-5、C1-4、C1-3、C1-2、C2-6、C2-5、C2-4、C2-3、C3-6、C3-5、C3-4、C4-6、C4-5和C5-6烷基。
当在本文中使用时，术语“脂族”是指烷基、烯基、炔基和碳环基。同样地，当在本文中使用时，术语“杂脂族”是指杂烷基、杂烯基、杂炔基和杂环基。
当在本文中使用时，“烷基”是指具有1至10个碳原子的直链或支链饱和烃基的自由基(“C1-10烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有1至9个碳原子(“C1-9烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有1至8个碳原子(“C1-8烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有1至7个碳原子(“C1-7烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有1至6个碳原子(“C1-6烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有1至5个碳原子(“C1-5烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有1至4个碳原子(“C1-4烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有1至3个碳原子(“C1-3烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有1至2个碳原子(“C1-2烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有1个碳原子(“C1烷基”)。在某些实施方式中，烷基具有2至6个碳原子(“C2-6烷基”)。C1-6烷基的实例包括甲基(C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)、异丙基(C3)、正丁基(C4)、叔丁基(C4)、仲丁基(C4)、异丁基(C4)、正戊基(C5)、3-戊基(C5)、异戊基(C5)、新戊基(C5)、3-甲基-2-丁基(C5)、叔戊基(C5)和正己基(C6)。烷基的其他实例包括正庚基(C7)、正辛基(C8)等。除非另有指明，否则烷基在每种情况下独立地是未取代的(“未取代的烷基”)或被一个或多个取代基取代(“取代的烷基”)。在某些实施方式中，烷基是未取代的C1-10烷基(例如-CH3)。在某些实施方式中，烷基是取代的C1-10烷基。
当在本文中使用时，“卤代烷基”是其中一个或多个氢原子被卤素例如氟、溴、氯、或碘独立地取代的本文中定义的烷基。“全卤代烷基”是卤代烷基的亚类，并且是指其中所有氢原子被卤素例如氟、溴、氯、或碘独立地取代的烷基。在某些实施方式中，卤代烷基组成部分具有1至8个碳原子(“C1-8卤代烷基”)。在某些实施方式中，卤代烷基组成部分具有1至6个碳原子(“C1-6卤代烷基”)。在某些实施方式中，卤代烷基组成部分具有1至4个碳原子(“C1-4卤代烷基”)。在某些实施方式中，卤代烷基组成部分具有1至3个碳原子(“C1-3卤代烷基”)。在某些实施方式中，卤代烷基组成部分具有1至2个碳原子(“C1-2卤代烷基”)。在某些实施方式中，卤代烷基的所有氢原子被氟代替，以提供全氟代烷基。在某些实施方式中，卤代烷基的所有氢原子被氯代替，以提供全氯代烷基。卤代烷基的实例包括-CF3、-CF2CF3、-CF2CF2CF3、-CCl3、-CFCl2、-CF2Cl等。
正如从上文所理解的，在某些实施方式中，本文中所定义的烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基任选地被取代。任选地被取代是指基团可能是取代或未取代的(例如“取代的”或“未取代的”烷基、“取代的”或“未取代的”烯基、“取代的”或“未取代的”炔基、“取代的”或“未取代的”杂烷基、“取代的”或“未取代的”杂烯基、“取代的”或“未取代的”杂炔基、“取代的”或“未取代的”碳环基、“取代的”或“未取代的”杂环基、“取代的”或“未取代的”芳基或“取代的”或“未取代的”杂芳基)。一般来说，术语“取代的”意味着基团上存在的至少一个氢被容许的取代基代替，所述取代基例如在取代后产生稳定的化合物、例如不自发经历转化例如重排、环化、消除或其他反应的化合物的取代基。除非另有指明，否则“取代的”基团在所述基团的一个或多个可取代位置处具有取代基，并且当任何给定结构中超过一个位置被取代时，每个位置处的取代基是相同或不同的。设想了术语“取代的”包括被有机化合物的所有容许的取代基、即本文中描述的任何导致形成稳定化合物的取代基取代。本发明设想了任何和所有这样的组合，以便获得稳定的化合物。出于本发明的目的，杂原子例如氮可以具有氢取代基和/或本文中描述的任何适合的满足杂原子的价数并导致形成稳定组成部分的取代基。
当在本文中使用时，术语“卤”或“卤素”是指氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)或碘(-I)。
当在本文中使用时，“平衡离子”是与带正电荷的季铵结合以便维持电中性的带负电荷的基团。示例性的平衡离子包括卤素离子(例如F-、Cl-、Βr-、I-)、NO3 -、ClO4 -、OH-、H2PO4 -、HSO4 -、磺酸根离子(例如甲磺酸根、三氟甲磺酸根、对甲苯磺酸根、苯磺酸根、10-樟脑磺酸根、萘-2-磺酸根、萘-1-磺酸-5-磺酸根、乙烷-1-磺酸-2-磺酸根等)和羧酸根离子(例如醋酸根、乙酸根、丙酸根、苯甲酸根、甘油酸根、乳酸根、酒石酸根、乙醇酸根等)。
当在本文中使用时，术语“羟基”是指-OH基团。通过扩展，术语“取代的羟基”是指其中直接附连于母体分子的氧原子被氢之外的基团取代的羟基，并包括选自-ORaa、-ON(Rbb)2、-OC(＝O)SRaa、-OC(＝O)Raa、-OCO2Raa、-OC(＝O)N(Rbb)2、-OC(＝NRbb)Raa、-OC(＝NRbb)ORaa、-OC(＝NRbb)N(Rbb)2、-OS(＝O)Raa、-OSO2Raa、-OSi(Raa)3、-OP(Rcc)2、-OP(Rcc)3、-ΟΡ(＝O)2Raa、-OP(＝O)(Raa)2、-OP(＝O)(ORcc)2、-OP(＝O)2N(Rbb)2和-OP(＝O)(NRbb)2的基团，其中Raa、Rbb和Rcc如本文中所定义。
当在本文中使用时，术语“氨基”是指-NH2基团。通过扩展，术语“取代的氨基”是指如本文中所定义的单取代的氨基、二取代的氨基或三取代的氨基。在某些实施方式中，“取代的氨基”是单取代的氨基或二取代的氨基。
当在本文中使用时，术语“单取代的氨基”是指其中直接附连到母体分子的氮原子被一个氢和一个氢之外的基团取代的氨基，并包括选自-NH(Rbb)、-NHC(＝O)Raa、-NHCO2Raa、-NHC(＝O)N(Rbb)2、-NHC(＝NRbb)N(Rbb)2、-NHSO2Raa、-NHP(＝O)(ORcc)2和-NHP(＝O)(NRbb)2的基团，其中Raa、Rbb和Rcc如本文中所定义，并且其中基团-NH(Rbb)的Rbb不是氢。
当在本文中使用时，术语“二取代的氨基”是指其中直接附连到母体分子的氮原子被两个氢之外的基团取代的氨基，并包括选自-N(Rbb)2、-NRbbC(＝O)Raa、-NRbbCO2Raa、-NRbbC(＝O)N(Rbb)2、-NRbbC(＝NRbb)N(Rbb)2、-NRbbSO2Raa、-NRbbP(＝O)(ORcc)2和-NRbbP(＝O)(NRbb)2的基团，其中Raa、Rbb和Rcc如本文中所定义，前提是直接附连到母体分子的氮原子不被氢取代。
当在本文中使用时，术语“三取代的氨基”是指其中直接附连到母体分子的氮原子被三个基团取代的氨基，并包括选自-N(Rbb)3和-N(Rbb)3 +X-的基团，其中Rbb和X-如本文中所定义。
当在本文中使用时，术语“羟基”是指-OH基团。通过扩展，术语“取代的羟基”是指其中直接附连于母体分子的氧原子被氢之外的基团取代的羟基，并包括选自-ORaa、-ON(Rbb)2、-OC(＝O)SRaa、-OC(＝O)Raa、-OCO2Raa、-OC(＝O)N(Rbb)2、-OC(＝NRbb)Raa、-OC(＝NRbb)ORaa、-OC(＝NRbb)N(Rbb)2、-OS(＝O)Raa、-OSO2Raa、-OSi(Raa)3、-OP(Rcc)2、-OP(Rcc)3、-ΟΡ(＝O)2Raa、-OP(＝O)(Raa)2、-OP(＝O)(ORcc)2、-OP(＝O)2N(Rbb)2和-OP(＝O)(NRbb)2的基团，其中Raa、Rbb和Rcc如本文中所定义。在其中“取代的羟基”是配体L1或L2的情况下，“取代的羟基”也是指(Raa)2O基团，其中Raa如本文中所定义。
氮保护基团例如氨基甲酸酯基团(例如-C(＝O)ORaa)包括但不限于氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、9-芴基甲基氨基甲酸酯(Fmoc)、9-(2-磺基)芴基甲基氨基甲酸酯、9-(2,7-二溴)芴基甲基氨基甲酸酯、2,7-二叔丁基-[9-(10,10-二氧基-10,10,10,10-四氢噻吨基)]甲基氨基甲酸酯(DBD-Tmoc)、4-甲氧基苯甲酰甲基氨基甲酸酯(Phenoc)、2,2,2-三氯乙基氨基甲酸酯(Troc)、2-三甲基甲硅烷基乙基氨基甲酸酯(Teoc)、2-苯基乙基氨基甲酸酯(hZ)、1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙基氨基甲酸酯(Adpoc)、1,1-二甲基-2-卤代乙基氨基甲酸酯、1,1-二甲基-2,2-二溴乙基氨基甲酸酯(DB-t-BOC)、1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙基氨基甲酸酯(TCBOC)、1-甲基-1-(4-联苯基)乙基氨基甲酸酯(Bpoc)、1-(3,5-二叔丁基苯基)-1-甲基乙基氨基甲酸酯(t-Bumeoc)、2-(2'-和4'-吡啶基)乙基氨基甲酸酯(Pyoc)、2-(N,N-二环己基氨基甲酰胺基)乙基氨基甲酸酯、氨基甲酸叔丁基酯(BOC)、1-金刚烷基氨基甲酸酯(Adoc)、氨基甲酸乙烯基酯(Voc)、氨基甲酸烯丙基酯(Alloc)、1-异丙基烯丙基氨基甲酸酯(Ipaoc)、肉桂酰基氨基甲酸酯(Coc)、4-硝基肉桂酰基氨基甲酸酯(Noc)、8-喹啉基氨基甲酸酯、N-羟基哌啶基氨基甲酸酯、烷基二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸苯甲基酯(Cbz)、对甲氧基苯甲基氨基甲酸酯(Moz)、对硝基苯甲基氨基甲酸酯、对溴苯甲基氨基甲酸酯、对氯苯甲基氨基甲酸酯、2,4-二氯苯甲基氨基甲酸酯、4-甲基亚磺酰基苯甲基氨基甲酸酯(Msz)、9-蒽基甲基氨基甲酸酯、二苯基甲基氨基甲酸酯、2-甲基硫代乙基氨基甲酸酯、2-甲基磺酰基乙基氨基甲酸酯、2-(对甲苯磺酰基)乙基氨基甲酸酯、[2-(1,3-二硫杂环己烷基)]甲基氨基甲酸酯(Dmoc)、4-甲基硫苯基氨基甲酸酯(Mtpc)、2,4-二甲基硫苯基氨基甲酸酯(Bmpc)、2-磷鎓基乙基氨基甲酸酯(Peoc)、2-三苯基磷鎓基异丙基氨基甲酸酯(Ppoc)、1,1-二甲基-2-氰基乙基氨基甲酸酯、间氯对酰基氧基苯甲基氨基甲酸酯、对(二羟基硼氧基)苯甲基氨基甲酸酯、5-苯并异噁唑基甲基氨基甲酸酯、2-(三氟甲基)-6-色酮基甲基氨基甲酸酯(Tcroc)、间硝基苯基氨基甲酸酯、3,5-二甲氧基苯甲基氨基甲酸酯、邻硝基苯甲基氨基甲酸酯、3,4-二甲氧基-6-硝基苯甲基氨基甲酸酯、苯基(邻硝基苯基)甲基氨基甲酸酯、叔戊基氨基甲酸酯、S-苯甲基硫代氨基甲酸酯、对氰基苯甲基氨基甲酸酯、环丁基氨基甲酸酯、环己基氨基甲酸酯、环戊基氨基甲酸酯、环丙基甲基氨基甲酸酯、对癸氧基苯甲基氨基甲酸酯、2,2-二甲氧基酰基乙烯基氨基甲酸酯、邻(N,N-二甲基氨基甲酰胺基)苯甲基氨基甲酸酯、1,1-二甲基-3-(N,N-二甲基氨基甲酰胺基)丙基氨基甲酸酯、1,1-二甲基丙炔基氨基甲酸酯、二(2-吡啶基)甲基氨基甲酸酯、2-呋喃基甲基氨基甲酸酯、2-碘乙基氨基甲酸酯、异冰片基氨基甲酸酯、异丁基氨基甲酸酯、异烟酰基氨基甲酸酯、对(对'-甲氧基苯基偶氮)苯甲基氨基甲酸酯、1-甲基环丁基氨基甲酸酯、1-甲基环己基氨基甲酸酯、1-甲基-1-环丙基甲基氨基甲酸酯、1-甲基-1-(3,5-二甲氧基苯基)乙基氨基甲酸酯、1-甲基-1-(对苯基偶氮苯基)乙基氨基甲酸酯、1-甲基-1-苯基乙基氨基甲酸酯、1-甲基-1-(4-吡啶基)乙基氨基甲酸酯、苯基氨基甲酸酯、对(苯基偶氮)苯甲基氨基甲酸酯、2,4,6-三叔丁基苯基氨基甲酸酯、4-(三甲基铵)苯甲基氨基甲酸酯和2,4,6-三甲基苯甲基氨基甲酸酯。
氮保护基团例如磺酰胺基团(例如-S(＝O)2Raa)包括但不限于对甲苯磺酰胺(Ts)、苯磺酰胺、2,3,6-三甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Mtr)、2,4,6-三甲氧基苯磺酰胺(Mtb)、2,6-二甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Pme)、2,3,5,6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Mte)、4-甲氧基苯磺酰胺(Mbs)、2,4,6-三甲基苯磺酰胺(Mts)、2,6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰胺(iMds)、2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰胺(Pmc)、甲磺酰胺(Ms)、β-三甲基甲硅烷基乙磺酰胺(SES)、9-蒽磺酰胺、4-(4',8'-二甲氧基萘基甲基)苯磺酰胺(DNMBS)、苯甲基磺酰胺、三氟甲基磺酰胺和苯甲酰甲基磺酰胺。
其他的氮保护基团包括但不限于吩噻嗪基-(10)-酰基衍生物、N'-对甲苯磺酰基氨基酰基衍生物,N'-苯基氨基硫代酰基衍生物、N-苯甲酰基苯丙氨酰基衍生物、N-乙酰基甲硫氨酸衍生物、4,5-二苯基-3-噁唑啉-2-酮、N-邻苯二甲酰亚胺、N-二硫代琥珀酰亚胺(Dts)、N-2,3-二苯基马来酰亚胺、N-2,5-二甲基吡咯、N-1,1,4,4-四甲基二甲硅烷基氮杂环庚烷加成物(STABASE)、5-取代的1,3-二甲基-1,3,5-三氮杂环己烷-2-酮、5-取代的1,3-二苯甲基-1,3,5-三氮杂环己烷-2-酮、1-取代的3,5-二硝基-4-吡啶酮、N-甲胺、N-烯丙基胺、N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基胺(SEM)、N-3-乙酰氧基丙基胺、N-(1-异丙基-4-硝基-2-氧基-3-吡咯啉-3-基)胺、季铵盐类、N-苯甲基胺、N-二(4-甲氧基苯基)甲基胺、N-5-二苯并环庚基胺、N-三苯基甲基胺(Tr)、N-[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]胺(MMTr)、N-9-苯基芴基胺(PhF)、N-2,7-二氯-9-芴基亚甲基胺、N-二茂铁基甲基氨基(Fcm)、N-2-吡啶甲基氨基N'-氧化物、N-1,1-二甲基硫代亚甲基胺、N-亚苯甲基胺、N-对甲氧基亚苯甲基胺、N-二苯基亚甲基胺、N-[(2-吡啶基)均三甲苯基]亚甲基胺、N-(N',N'-二甲基氨基亚甲基)胺、Ν,Ν'-亚异丙基二胺、N-对硝基亚苯甲基胺、N-亚水杨基胺、N-5-氯亚水杨基胺、N-(5-氯-2-羟基苯基)苯基亚甲基胺、N-亚环己基胺、N-(5,5-二甲基-3-氧基-1-环己烯基)胺、N-硼烷衍生物、N-二苯基硼酸衍生物、N-[苯基(五酰基铬-或钨)酰基]胺、N-铜螯合剂、N-锌螯合剂、N-硝基胺、N-亚硝基胺、胺N-氧化物、二苯基膦酰胺(Dpp)、二甲基硫代膦酰胺(Mpt)、二苯基硫代膦酰胺(Ppt)、二烷基氨基磷酸酯、二苯甲基氨基磷酸酯、二苯基氨基磷酸酯、苯次磺酰胺、邻硝基苯次磺酰胺(Nps)、2,4-二硝基苯次磺酰胺、五氯苯次磺酰胺、2-硝基-4-甲氧基苯次磺酰胺、三苯基甲基次磺酰胺和3-硝基吡啶次磺酰胺(Npys)。
这些以及其他示例性取代基在详细描述、实施例和权利要求书中更详细描述。本发明不打算以任何方式受上面的取代基的示例性名单限制。
当在本文中使用时，术语“盐”是指任何和所有盐类。
术语“可药用盐”是指在合理的医学判断范围内，适合于与人类和更低等动物的组织接触使用而没有过度毒性、刺激性、过敏反应等，并且与合理的利益/风险比相称的盐类。可药用盐在本领域中是公知的。例如，Berge等在J.Pharmaceutical Sciences(1977)66:1-19中详细描述了可药用盐。本发明的化合物的可药用盐包括源自于适合的无机和有机酸和碱的盐类。可药用的无毒性酸加成盐的实例，是使用无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或使用有机酸例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸或使用本领域中使用的其他方法例如离子交换而形成的氨基的盐类。其他可药用盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、巴莫酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。源自于适合的碱的可药用盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1-4烷基)4盐类。代表性的碱或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。在适合时，其他可药用盐包括使用平衡离子例如卤素离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒性铵、季铵和胺阳离子。
当在本文中使用时，术语“互变异构体”是指化合物的其中氢和双键相对于分子的其他原子具有改变的位置的特定异构体。为了存在一对互变异构体，必须存在相互转变的机制。互变异构体的实例包括酮-烯醇形式、亚胺-烯胺形式、酰胺-亚胺醇形式、脒-aminidine形式、亚硝基-肟形式、硫酮-烯硫醇形式、N-亚硝基-羟基偶氮形式、硝基-酸式硝基形式和吡啶酮-羟基吡啶形式。
当在本文中使用时，短语“至少一种情况”的使用是指1、2、3、4或更多种情况，但是也涵盖例如包含性的1至4、1至3、1至2、2至4、2至3或3至4种情况的范围。
其他定义
下面的定义是在整个本申请中使用的更多一般性术语。
当在本文中使用时，术语“可药用盐”是指在合理的医学判断范围内，适合于与人类和更低等动物的组织接触使用而没有过度毒性、刺激性、过敏反应等，并且与合理的利益/风险比相称的盐类。可药用盐在本领域中是公知的。例如，Berge等在J.PharmaceuticalSciences(1977)66:1-19中详细描述了可药用盐，所述文献通过参考并入本文。本发明的化合物的可药用盐包括源自于适合的无机和有机酸和碱的盐类。可药用的无毒性酸加成盐的实例，是使用无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或使用有机酸例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸或使用本领域中使用的其他方法例如离子交换而形成的氨基的盐类。其他可药用盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、巴莫酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。源自于适合的碱的可药用盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1-4烷基)4盐类。代表性的碱或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。在适合时，其他可药用盐包括使用平衡离子例如卤素离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒性铵、季铵和胺阳离子。
术语“溶剂化物”是指化合物的通常通过溶剂化反应而与溶剂缔合的形式。这种物理缔合可以包括氢键键接。常规溶剂包括水、甲醇、乙醇、乙酸、DMSO、THF、二乙醚等。式(I)-(II)的化合物可以被制备成例如结晶形式，并且可以被溶剂化。适合的溶剂化物包括可药用溶剂化物，并进一步包括化学定量的溶剂化物和非化学定量的溶剂化物。在某些情况下，溶剂化物能够分离，例如当一种或多种溶剂分子被并入到结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”涵盖了溶液相和可分离的溶剂化物。代表性的溶剂化物包括水合物、乙醇化物和甲醇化物。
术语“水合物”是指与水缔合的化合物。通常，化合物的水合物中包含的水分子的数量与所述水合物中化合物分子的数量采取确定比率。因此，化合物的水合物可以例如用通式R·xH2O表示，其中R是化合物，x是大于0的数字。给定的化合物可以形成超过一种类型的水合物，包括例如单水合物(x为1)、更低的水合物(x是大于0并小于1的数字，例如半水合物(R·0.5H2O))和多水合物(x是大于1的数字，例如二水合物(R·2H2O)和六水合物(R·6H2O))。
当在本文中使用时，术语“互变异构体”包括由氢原子的至少一种形式迁移和价数的至少一种变化(例如单键变为双键、叁键变为双键或与之相反)产生的两种或更多种可相互转变的形式。互变异构体的准确比例取决于几种因素，包括温度、溶剂和pH。互变异构化作用(即提供互变异构对的反应)可以由酸或碱催化。示例性的互变异构化作用包括酮至烯醇、酰胺至酰亚胺、内酰胺至内酰亚胺、烯胺至亚胺和烯胺至(不同的)烯胺的互变异构化作用。
还应该理解，具有相同的分子式但它们的原子键合的本质或顺序或它们的原子在空间中的排列不同的化合物，被称为“异构体”。其原子在空间中的排列不同的异构体被称为“立体异构体”。
彼此不是镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，而彼此是不可重叠的镜像的立体异构体被称为“对映异构体”。当化合物具有不对称中心，例如它键合到四个不同集团时，可能存在一对对映异构体。对映异构体可以通过其不对称中心的绝对构型来表征，并且通过Cahn和Prelog的R-和S-定序规则或通过分子旋转偏振光平面的方式来描述，并命名为右旋或左旋(即分别为(+)或(-)-异构体)。手性化合物可以作为任一种单独的对映异构体或作为其混合物存在。含有等比例的对映异构体的混合物被称为“消旋混合物”
术语“多形体”是指化合物(或其盐、水合物或溶剂化物)的采取特定晶体堆积排列方式的结晶形式。所有多形体具有相同的元素组成。不同的结晶形式通常具有不同的X-射线衍射图案、红外光谱图、熔点、密度、硬度、晶体形状、光学和电学性质、稳定性和/或溶解性。重结晶溶剂、结晶速率、储存温度和其他因素可能造成一种晶体形式占优。化合物的各种多形体可以通过在不同条件下结晶来制备。
术语“前体药物”是指具有可切开的基团，并且通过溶剂化或在生理条件下变成在体内具有药物活性的式(I)-(II)的化合物的化合物，包括式(I)的化合物的衍生物。这样的实例包括但不限于胆碱酯衍生物等、N-烷基吗啉酯等。本发明的化合物的其他衍生物在它们的酸和酸衍生两种形式下具有活性，但是在酸敏感形式下通常提供溶解性、组织相容性或在哺乳动物生物体中延迟释放的优点(参见Bundgard，《前体药物的设计》(Design ofProdrugs)，pp.7-9,21-24,Elsevier,Amsterdam 1985)。前体药物包括本领域从业人员公知的酸衍生物，例如通过母体酸与适合的醇的反应制备的酯类，或通过母体酸化合物与取代或未取代的胺的反应制备的酰胺、或酸酐或混合酸酐。具体的前体药物是从随附在本发明的化合物上的酸性基团衍生的简单的脂族或芳香族酯、酰胺和酸酐。在某些情况下，制备双酯类型的前体药物例如(酰基氧基)烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯是合乎需要的。在某些情况下，式(I)-(II)的化合物的C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、C7-C12取代芳基和C7-C12芳基烷基酯可能是优选的。
被设想进行给药的“受试者”包括但不限于人类(即任何年龄组的男性或女性，例如儿科受试者(例如婴儿、儿童、少年)或成年受试者(例如年轻人、中年人或老年人))和/或其他非人类动物，例如哺乳动物(例如灵长动物(例如食蟹猴、恒河猴)、商业上相关的哺乳动物例如牛、猪、马、绵羊、山羊、猫和/或狗))和鸟类(例如商业上相关的鸟类例如鸡、鸭、鹅和/或火鸡)。在某些实施方式中，所述动物是哺乳动物。动物可以是雄性或雌性并处于任何发育阶段。非人类动物可以是转基因动物。
当在本文中使用时，术语“给药”是指植入、吸收、摄食、注射、吸入或以其他方式导入本发明的化合物或其药物组合物。
当在本文中使用时，术语“治疗”是指本文中描述的“病理状况”(例如疾病、障碍或病症或其一种或多种征兆或症状)的逆转、缓解、发作的延迟或进展的抑制。在某些实施方式中，治疗可以在一种或多种征兆或症状已经发展或已被观察后实施。在其他实施方式中，治疗可以在疾病或病症的征兆或症状不存在的情况下实施。例如，治疗可以在症状发作之前实施到易感个体(例如根据症状史和/或根据遗传或其他易感性因素)。治疗也可以持续到症状已消解之后，以例如延迟或阻止复发或降低疾病或病症的风险。
当在本文中使用时，术语“病症”、“疾病”和“障碍”可互换使用。
式(A)的化合物的“有效量”是指足以引发所需的生物学响应即治疗病症的量。正如本领域普通技术人员将会认识到的，式(A)的化合物的有效量可以随着多种因素而变，例如所需的生物学终点、化合物的药物动力学、待治疗的病症、给药方式和受试者的年龄和健康。有效量涵盖了治疗性和预防性治疗。例如，在治疗癌症中，本发明的化合物的有效量可以减少肿瘤负荷或停止肿瘤的生长或扩散。在治疗黄斑变性中，本发明的化合物的有效量可以改善视力、降低视力损失风险或防止中央视力损失恶化。
式(A)的化合物的“治疗有效量”是足以在病症的治疗中提供治疗性益处或延迟或最小化与病症相关的一种或多种症状的量。化合物的治疗有效量意味着单独或与其他疗法组合的治疗药剂的在病症的治疗中提供治疗性益处的量。术语“治疗有效量”可以涵盖改进总体疗法、减轻或避免病症的症状或病因、或提高另一种治疗药剂的治疗效能的量。
式(A)的化合物的“预防有效量”是足以阻止病症或与所述病症相关的一种或多种症状或阻止其复发的量。化合物的预防有效量意味着单独或与其他药剂组合的治疗药剂的在病症的预防中提供预防性益处的量。术语“预防有效量”可以涵盖改进总体预防或提高另一种预防性药剂的预防效能的量。
当在本文中使用时，“抑制”和“抑制剂”等是指化合物的相对于介质来说降低、减缓、停止或阻止细胞中涉及Ras的特定生物过程的活性的能力。
附图简述
下面的图形成了本说明书的一部分，并且被包含以进一步演示本公开的某些方面，通过与本文中提出的具体实施方式的详细描述相结合参考一个或多个这些图，可以更好地理解本发明。
图1.双重靶向抗流感药物对病毒失活和细胞因子抑制的工作机制。偶联药物通过神经氨酸酶抑制剂(例如扎那米韦)的强亲和力被带到病毒感染位点，使得感染介导的细胞因子诱导可以被偶联药物的抗炎组分(例如咖啡酸)有效地抑制。
图2.示例性的抗流感偶联药物的化学结构。
图3.在1-、7-、9-或胍(G)位置处带有抗炎剂的扎那米韦的示例性偶联化合物的合成设计。
图4.ZA-7-HP偶联物6的合成
图5.ZA-7-CA偶联物1的合成
图6.ZA-7-MCA偶联物2的合成
图7.ZA-7-ME偶联物3的合成
图8.ZA-7-HNAP偶联物4的合成
图9.ZA-7-DHBA偶联物5的合成
图10.ZA-7-CA-酰胺偶联物7的合成
图11.ZA-7-HNAP-酰胺偶联物8的合成
图12.ZA-1-CA偶联物9的合成
图13.ZA-1-MCA偶联物10的合成
图14.ZA-1-ME偶联物11的合成
图15.ZA-1-HNAP偶联物12的合成
图16.H1N1病毒感染的小鼠在用ZA-7-CA(1)、ZA-7-ME(3)和ZA-7-CA-酰胺(7)偶联物治疗后的存活率。将BALB/c小鼠用10LD50的A/Cal/07/2009(H1N1)病毒鼻内激惹。动物实验使用每组至少10只小鼠进行。化合物通过鼻内滴注进行给药，并且每天两次持续5天。如果不使用人类当量剂量(1.2μmol/kg/天)，则每种化合物的给药剂量示出在括号中，单位为μmol/kg/天。(A)12μmol/kg/天的剂量；(B)1.2μmol/kg/天的剂量；(C)各种不同剂量；(D)各种不同剂量。**：p<0.05；***：p<0.001；****：p<0.0001。
图17.H5N1病毒感染的小鼠在用ZA-7-CA(1)、ZA-7-ME(3)和ZA-7-CA-酰胺(7)偶联物治疗后的存活率。将BALB/c小鼠用10LD50的NIBRG-14(A/VietNam/1194/2004)(H5N1)病毒鼻内激惹。动物实验使用每组至少10只小鼠进行。化合物通过鼻内滴注进行给药，并且每天两次持续5天。(A)12μmol/kg/天的剂量和(B)12或1.2μmol/kg/天的剂量。**：p<0.05；***：p<0.001；****：p<0.0001。
图18.LPS诱导的炎性测定法和病毒感染的小鼠中的细胞因子抑制。(A)将RAW264.7细胞用不同浓度的抗炎剂处理30分钟，然后用脂多糖(LPS，100ng/mL)诱导：第1道，阴性对照(无LPS)；第2道，无化合物处理；第3道，芹菜素(20μΜ)；第4道，芹菜素(50μΜ)作为阳性对照；第5道，CA(20μΜ)；第6道，CA(50μΜ)；第7道，偶联物2(20μΜ)；第8道，偶联物2(50μΜ)；第9道偶联物1(20μΜ)；第10道，偶联物1(50μΜ)；第11道，MCA(20μΜ)；第12道，MCA(50μΜ)；第13道，ME(20μΜ)和第14道，ME(50μΜ)。使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内部对照。(B)在将小鼠(n＝10)用10LD50的NIBRG14(A/VietNam/1194/2004)H5N1病毒激惹，然后用试验化合物以12μmol/kg/天的剂量治疗后72h收集的血清中，检测细胞因子IL-6的水平。***表示p<0.001。(C)在与(B)中所描述的相同条件下的血清中，检测的细胞因子IFN-γ的水平。
图19.ZA-7-Nap偶联物43的合成
图20.ZA-7-Ibu偶联物44的合成
图21.ZA-9-Nap偶联物45的合成
图22.ZA-G-Nap偶联物46的合成
图23.ZA-G-Ibu偶联物47的合成
图24.OS-1-CA偶联物48的合成
图25.TP-1-CA偶联物49的合成
图26.PZA(1Et)-7-CA-酰胺偶联物50的合成
图27.PE-1-CA偶联物51的合成
图28.PE-2-CA偶联物52的合成
发明详述
本发明提供了式(A)的化合物。还提供了使用式(A)的化合物来治疗和/或预防流感感染的方法。本发明还提供了使用式(A)的化合物在例如流感感染的治疗和/或预防中作为治疗剂的方法。
正如上面一般性描述的，本文提供了式(A)的化合物。在某些实施方式中，本公开提供了式(A)的化合物：
式(A)的化合物包含第一组成部分和第二组成部分，其中第一组成部分是抗流感剂，第二组成部分是抗炎剂；并且第一和第二组成部分通过连接物偶联。在某些实施方式中，抗炎剂是非甾类抗炎剂。在某些实施方式中，非甾类抗炎剂是酸抗炎剂。在某些实施方式中，抗流感剂是神经氨酸酶抑制剂。在某些实施方式中，抗流感剂是扎那米韦(ZA)、膦酰-扎那米韦(PZA)、奥司他韦(OS)、零流感(TP)或帕拉米韦(PE)或其衍生物。在某些实施方式中，连接物被共价连接到一种或多种抗流感剂和一种或多种抗炎剂。在某些实施方式中，连接物包含任选被取代的C1-20烃链或任选被取代的环烷基，其中一个或多个碳单元被NRN、O或S替换，其中RN是氢、任选被取代的烷基或氮保护基团。在某些实施方式中，连接物能被酯酶切开。在某些实施方式中，连接物不能被酯酶切开。在某些实施方式中，连接物在溶酶体中能被切开。在某些实施方式中，连接物在溶酶体中不能被切开。
在某些实施方式中，式(A)的化合物是式(I)或(II)的化合物或其可药用盐：
其中：
X1是-O-、-O(C＝O)-、-NH-、-NHCO-、-O(C＝O)NH-、-O(C＝S)NH-、-NH(C＝O)NH-或-NH(C＝S)NH-；
L是连接物，其选自连键、-(CH2)n-、-(CH2)nO-、-O(CH2)n-、-(CH2)n-C(O)-、-(CH2)n-NH-、-NH-(CH2)n-、-C(O)(CH2)n-、-(CH2)n-NHC(O)-、-C(O)(CH2)n-NHC(O)-、-(CH2)nSCH2C(O)-和-(CH2CH2O)m-；
n是1至8的整数并包括1和8；
m是1至4的整数并包括1和4；
X1共价连接到L；
Y是非甾类抗炎剂，其选自醋氯芬酸、阿西美辛、乙酰水杨酸、5-氨基乙酰水杨酸、aldlofenac、氨芬酸、苄达酸、苯噁洛芬、柏莫洛芬、溴芬酸、5-溴水杨酸乙酸酯(5-bromosalicylic acid acetate)、布氯酸、布替布芬、咖啡酸、卡洛芬、色甘酸盐(chromoglycate)、桂美辛、clindanac、氯吡酸、双氯芬酸钠、二氟尼柳、3,4-二羟基苯甲酸、因法来酸、依托度酸、联苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬多沙、非诺洛芬、芬替酸、flufenac、氟芬那酸、氟尼辛、氟诺洛芬、氟比洛芬、1-羟基萘甲酸、异丁芬酸、布洛芬、吲哚美辛、吲哚洛芬、三苯唑酸、伊索克酸、酮洛芬、酮洛酸、洛索洛芬、甲氯灭酸、甲芬那酸、美沙拉嗪、3,4-亚甲基二氧肉桂酸、甲嗪酸、莫苯唑酸、孟鲁司特、霉酚酸、萘普生、尼氟灭酸、奥沙拉嗪、奥沙西罗、奥沙普嗪、pyrazolac、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、舒林酸、舒洛芬、琥布宗(suxibutazone)、噻洛芬酸、替诺立定酸、托芬那酸、托美汀、tropesin、联苯丁酸、希莫洛芬、扎托洛芬和佐美酸；
Y通过所述非甾类抗炎剂中的酸基团共价连接到L；
B是叠氮基、羟基、未取代或取代的氨基或未取代或取代的胍基，或者是具有选自下列的阴离子平衡离子的相应盐类：氯离子，溴离子，碘离子，乙酸根，三氟乙酸根，磷酸根，二磷酸根，硝酸根，硫酸根，苯磺酸根，苯甲酸根，水杨酸根，羟基萘甲酸根，延胡索酸根，马来酸根，乳酸根，苹果酸根，琥珀酸根，酒石酸根，柠檬酸根，谷氨酸根和葡萄糖酸根；
R1和R5在每种情况下独立地是氢或任选被取代的C1-6烷基；
R2和R3在每种情况下独立地是氢、任选被取代的烷基,或任选被取代的酰基；并且
R4是-COCH3、-COCF3、-SO2CH3或-SO2CF3。
在某些实施方式中，式(A)的化合物是式(V)或(VI)的化合物或其可药用盐：
其中：
X1是-O-、-O(C＝O)-、-NH-、-NHCO-、-O(C＝O)NH-、-O(C＝S)NH-、-NH(C＝O)NH-或-NH(C＝S)NH-；
L是连接物，其选自连键、-(CH2)n-、-(CH2)nO-、-O(CH2)n-、-(CH2)n-C(O)-、-(CH2)n-NH-、-NH-(CH2)n-、-C(O)(CH2)n-、-(CH2)n-NHC(O)-、-C(O)(CH2)n-NHC(O)-、-(CH2)nSCH2C(O)-和-(CH2CH2O)m-；
n是1至8的整数；
m是1至4的整数；
X1共价连接到L；
Y是非甾类抗炎剂，其选自醋氯芬酸、阿西美辛、乙酰水杨酸、5-氨基乙酰水杨酸、aldlofenac、氨芬酸、苄达酸、苯噁洛芬、柏莫洛芬、溴芬酸、5-溴水杨酸乙酸酯、布氯酸、布替布芬、咖啡酸、卡洛芬、色甘酸盐、桂美辛、clindanac、氯吡酸、双氯芬酸钠、二氟尼柳、3,4-二羟基苯甲酸、因法来酸、依托度酸、联苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬多沙、非诺洛芬、芬替酸、flufenac、氟芬那酸、氟尼辛、氟诺洛芬、氟比洛芬、1-羟基萘甲酸、异丁芬酸、布洛芬、吲哚美辛、吲哚洛芬、三苯唑酸、伊索克酸、酮洛芬、酮洛酸、洛索洛芬、甲氯灭酸、甲芬那酸、美沙拉嗪、3,4-亚甲基二氧肉桂酸、甲嗪酸、莫苯唑酸、孟鲁司特、霉酚酸、萘普生、尼氟灭酸、奥沙拉嗪、奥沙西罗、奥沙普嗪、pyrazolac、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、舒林酸、舒洛芬、琥布宗、噻洛芬酸、替诺立定酸、托芬那酸、托美汀、tropesin、联苯丁酸、希莫洛芬、扎托洛芬和佐美酸；
Y通过所述非甾类抗炎剂中的酸基团共价连接到L；
B是叠氮基、羟基、未取代或取代的氨基或未取代或取代的胍基，或者是具有选自下列的阴离子平衡离子的相应盐类：氯离子，溴离子，碘离子，乙酸根，三氟乙酸根，磷酸根，二磷酸根，硝酸根，硫酸根，苯磺酸根，苯甲酸根，水杨酸根，羟基萘甲酸根，延胡索酸根，马来酸根，乳酸根，苹果酸根，琥珀酸根，酒石酸根，柠檬酸根，谷氨酸根和葡萄糖酸根；
R1、R5和R6在每种情况下独立地是氢或任选被取代的C1-6烷基；
R2和R3在每种情况下独立地是氢、任选被取代的烷基或任选被取代的酰基，并且
R4是-COCH3、-COCF3、-SO2CH3或-SO2CF3。
正如在本文中一般性定义的，X1是-O-、-O(C＝O)-、-NH-、-NHCO-、-O(C＝O)NH-、-O(C＝S)NH-、-NH(C＝O)NH-或-NH(C＝S)NH-。在某些实施方式中，Χ1是-O-。在某些实施方式中，X1是-O(C＝O)-。在某些实施方式中，X1是-NH-。在某些实施方式中，X1是-O(C＝O)NH-。在某些实施方式中，X1是-O(C＝S)NH-。在某些实施方式中，X1是-NH(C＝O)NH-。在某些实施方式中，X1是-NH(C＝S)NH-。
正如在本文中一般性定义的，L是连接物，其选自-(CH2)n-、-(CH2)nO-、-O(CH2)n-、-(CH2)n-C(O)-、-(CH2)n-NH-、-NH-(CH2)n-、-C(O)(CH2)n-、-(CH2)n-NHC(O)-、-C(O)(CH2)n-NHC(O)-、(CH2)nSCH2C(O)-和-(CH2CH2O)m-。当在本文中使用时，n是1至8的整数并包括1和8。在某些实施方式中，n是1。在某些实施方式中，n是2。在某些实施方式中，n是3。在某些实施方式中，n是4。在某些实施方式中，n是5。在某些实施方式中，n是6。在某些实施方式中，n是7。在某些实施方式中，n是8。当在本文中使用时，m是1至4的整数并包括1和4。在某些实施方式中，m是1。在某些实施方式中，m是2。在某些实施方式中，m是3。在某些实施方式中，m是4。在某些实施方式中，L是-(CH2)n-。在某些实施方式中，L是-(CH2)2-。在某些实施方式中，L是-(CH2)3-。在某些实施方式中，L是-(CH2)4-。在某些实施方式中，L是-(CH2)5-。在某些实施方式中，L是-(CH2)6-。在某些实施方式中，L是-(CH2)7-。在某些实施方式中，L是-(CH2)8-。在某些实施方式中，m是4。在某些实施方式中，L是-(CH2)nO-。在某些实施方式中，L是-(CH2)2O-。在某些实施方式中，L是-(CH2)3O-。在某些实施方式中，L是-(CH2)4O-。在某些实施方式中，L是-(CH2)5O-。在某些实施方式中，L是-(CH2)6O-。在某些实施方式中，L是-(CH2)7O-。在某些实施方式中，L是-(CH2)8O-。在某些实施方式中，L是-(CH2)nNH-。在某些实施方式中，L是-(CH2)2NH-。在某些实施方式中，L是-(CH2)3NH-。在某些实施方式中，L是-(CH2)4NH-。在某些实施方式中，L是-(CH2)5NH-。在某些实施方式中，L是-(CH2)6NH-。在某些实施方式中，L是-(CH2)7NH-。在某些实施方式中，L是-(CH2)8NH-。
在某些实施方式中，-X1-L-是-O(C＝O)NH-(CH2)nO-。在某些实施方式中，-X1-L-是-O(C＝O)NH-(CH2)nNH-。在某些实施方式中，-X1-L-是-(C＝O)O-(CH2)nNH-。在某些实施方式中，-X1-L-是-(C＝O)O-(CH2)nO-。在某些实施方式中，-X1-L-是-O-(CH2)nO-。在某些实施方式中，-X1-L-是-NH-(CH2)nO-。
正如在本文中一般性定义的，Y是非甾类抗炎剂，其选自醋氯芬酸、阿西美辛、乙酰水杨酸、5-氨基乙酰水杨酸、aldlofenac、氨芬酸、苄达酸、苯噁洛芬、柏莫洛芬、溴芬酸、5-溴水杨酸乙酸酯、布氯酸、布替布芬、咖啡酸、卡洛芬、色甘酸盐、桂美辛、clindanac、氯吡酸、双氯芬酸钠、二氟尼柳、3,4-二羟基苯甲酸、因法来酸、依托度酸、联苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬多沙、非诺洛芬、芬替酸、flufenac、氟芬那酸、氟尼辛、氟诺洛芬、氟比洛芬、1-羟基萘甲酸、异丁芬酸、布洛芬、吲哚美辛、吲哚洛芬、三苯唑酸、伊索克酸、酮洛芬、酮洛酸、洛索洛芬、甲氯灭酸、甲芬那酸、美沙拉嗪、3,4-亚甲基二氧肉桂酸、甲嗪酸、莫苯唑酸、孟鲁司特、霉酚酸、萘普生、尼氟灭酸、奥沙拉嗪、奥沙西罗、奥沙普嗪、pyrazolac、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、舒林酸、舒洛芬、琥布宗、噻洛芬酸、替诺立定酸、托芬那酸、托美汀、tropesin、联苯丁酸、希莫洛芬、扎托洛芬和佐美酸。Y通过非甾类抗炎剂中的酸基团共价连接到L。在某些实施方式中，Y是咖啡酸(CA)。在某些实施方式中，Y是美沙拉嗪(ME)。在某些实施方式中，Y是萘普生(Nap)。在某些实施方式中，Y是布洛芬(Ibu)。
正如在本文中一般性定义的，B是叠氮基、羟基、未取代或取代的氨基或未取代或取代的胍基，或者是具有选自下列的阴离子平衡离子的相应盐类：氯离子，溴离子，碘离子，乙酸根，三氟乙酸根，磷酸根，二磷酸根，硝酸根，硫酸根，苯磺酸根，苯甲酸根，水杨酸根，羟基萘甲酸根，延胡索酸根，马来酸根，乳酸根，苹果酸根，琥珀酸根，酒石酸根，柠檬酸根，谷氨酸根和葡萄糖酸根。在某些实施方式中，B是叠氮基。在某些实施方式中，B是羟基。在某些实施方式中，B是取代的氨基。在某些实施方式中，B是未取代的氨基。在某些实施方式中，B是未取代的胍基。在某些实施方式中，B是取代的胍基。
正如在本文中一般性定义的，R1在每种情况下独立地是氢或任选被取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R1是氢。在某些实施方式中，R1是取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R1是未取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R1是甲基。在某些实施方式中，R1是乙基。在某些实施方式中，R1是丙基、丁基、戊基或己基。在某些实施方式中，R1是异丙基、异丁基或异戊基。在某些实施方式中，R1是异丁基。在某些实施方式中，R1是叔丁基。
正如在本文中一般性定义的，R5在每种情况下独立地是氢或任选被取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R5是氢。在某些实施方式中，R5是取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R5是未取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R5是甲基。在某些实施方式中，R5是乙基。在某些实施方式中，R5是丙基、丁基、戊基或己基。在某些实施方式中，R5是异丙基、异丁基或异戊基。在某些实施方式中，R5是异丁基。在某些实施方式中，R5是叔丁基。
正如在本文中一般性定义的，R6在每种情况下独立地是氢或任选被取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R6是氢。在某些实施方式中，R6是取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R6是未取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R6是甲基。在某些实施方式中，R6是乙基。在某些实施方式中，R6是丙基、丁基、戊基或己基。在某些实施方式中，R6是异丙基、异丁基或异戊基。在某些实施方式中，R6是异丁基。在某些实施方式中，R6是叔丁基。
正如在本文中一般性定义的，R2在每种情况下独立地是氢、任选被取代的烷基或任选被取代的酰基。在某些实施方式中，R2是氢。在某些实施方式中，R2是取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R2是未取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R2是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或己基。在某些实施方式中，R2是异丙基、异丁基或异戊基。在某些实施方式中，R2是异丁基。在某些实施方式中，R2是叔丁基。在某些实施方式中，R2是酰基。在某些实施方式中，R2是乙酰基。
正如在本文中一般性定义的，R3在每种情况下独立地是氢、任选被取代的烷基或任选被取代的酰基。在某些实施方式中，R3是氢。在某些实施方式中，R3是取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R3是未取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R3是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或己基。在某些实施方式中，R3是异丙基、异丁基或异戊基。在某些实施方式中，R3是异丁基。在某些实施方式中，R3是叔丁基。在某些实施方式中，R3是酰基。在某些实施方式中，R3是乙酰基。
正如在本文中一般性定义的，R4是-COCH3、-COCF3、-SO2CH3或-SO2CF3。在某些实施方式中，R4是-COCH3。在某些实施方式中，R4是-COCF3。在某些实施方式中，R4是-SO2CH3。在某些实施方式中，R4是-SO2CF3。
在某些实施方式中，式(A)的化合物是式(VII)或(VIII)的化合物或其可药用盐：
其中Y、B、R1、R2、R3、R4、R5和R6如本文中所定义。
另一方面，所提供的化合物是式(III)或(IV)的化合物或其可药用盐：
其中：
L、Y、B、R2、R3、R4和R6如本文中所定义；并且
X2是-O-或-NH-。
在某些实施方式中，所提供的化合物是式(IX)或(X)的化合物或其可药用盐：
其中：
L、Y、B和R4如本文中所定义；并且
X2是-O-或-NH-。
另一方面，所提供的化合物是式(XI)或(XII)的化合物或其可药用盐：
其中：
L、Y、B、X1、R1和R4如本文中所定义；
X2是-O-或-NH-；并且
R7是氢或任选被取代的C1-6烷基。
正如在本文中一般性定义的，X2是-O-或-NH-。在某些实施方式中，X2是-O-。在某些实施方式中，X2是-NH-。在某些实施方式中，-X2-L-是-O-(CH2)nO-。在某些实施方式中，-X2-L-是-O-(CH2)nNH-。在某些实施方式中，-X2-L-是-NH-(CH2)nO-。在某些实施方式中，-X2-L-是-NH-(CH2)nNH-。
正如在本文中一般性定义的，R7独立地是氢或任选被取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R7是氢。在某些实施方式中，R7是取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R7是未取代的C1-6烷基。在某些实施方式中，R7是甲基。在某些实施方式中，R7是乙基。在某些实施方式中，R7是丙基、丁基、戊基或己基。在某些实施方式中，R7是异丙基、异丁基或异戊基。在某些实施方式中，R7是异丁基。在某些实施方式中，R7是叔丁基。
本发明还提供了药物组合物，其包含本文中所定义的式(A)的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多形体、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前体药物，和任选的可药用赋形剂。在某些实施方式中，本发明的药物组合物包含式(A)的化合物或其可药用盐，和任选的可药用赋形剂。在某些实施方式中，式(A)的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多形体、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物或前体药物，以有效量提供在药物组合物中。在某些实施方式中，有效量是治疗有效量。在某些实施方式中，有效量是预防有效量。
本文中描述的药物组合物可以通过药物学领域的任何已知方法来制备。总的来说，这样的制备方法包括将式(A)的化合物与载体和/或一种或多种其他辅助成分相结合，然后如果必需和/或希望，将产品造型和/或包装成所需的单剂或多剂单位的步骤。
药物组合物可以散装、作为单一单位药剂和/或作为多个单一单位药剂制备、包装和/或销售。当在本文中使用时，“单位药剂”是包含预定量的活性成分的不连续的量的药物组合物。活性成分的量一般等于将要给药于受试者的活性成分的剂量和/或这样的剂量的方便的分数，例如这样的剂量的一半或三分之一。
本发明的药物组合物中活性成分、可药用赋形剂和/或任何其他成分的相对量将随着待治疗受试者的身份、大小和/或病症并进一步随着组合物将要给药的途径而变。例如，组合物可以包含0.1％至100％(w/w)之间的活性成分。
在所提供的药物组合物的制造中使用的可药用赋形剂包括惰性稀释剂、分散和/或成粒剂、表面活性剂和/或乳化剂、崩解剂、粘合剂、防腐剂、缓冲剂、润滑剂和/或油类。赋形剂例如可可脂和栓剂用蜡、着色剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和增香剂，也可以存在于组合物中。
示例性稀释剂包括碳酸钙、碳酸钠、磷酸钙、磷酸二钙、硫酸钙、磷酸氢钙、磷酸钠、乳糖、蔗糖、纤维素、微晶纤维素、高岭土、甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、氯化钠、干燥淀粉、玉米淀粉、粉状糖及其混合物。
示例性的成粒和/或分散剂包括马铃薯淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、羟基乙酸淀粉钠、粘土、海藻酸、瓜尔胶、柑橘渣、琼脂、膨润土、纤维素和木制品、天然海绵、阳离子交换树脂、碳酸钙、硅酸盐、碳酸钠、交联聚乙烯吡咯烷酮(交聚维酮)、羧甲基淀粉钠(羟乙基酸淀粉钠)、羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠(交联甲羧纤维素)、甲基纤维素、预明胶化淀粉(淀粉1500)、微晶体淀粉、水不溶性淀粉、羧甲基纤维素钙、硅酸镁铝(Veegum)、月桂基硫酸钠、季铵化合物及其混合物。
示例性的表面活性剂和/或乳化剂包括天然乳化剂(例如阿拉伯树胶、琼脂、海藻酸、藻酸钠、黄耆树胶、chondrux、胆固醇、黄原胶、果胶、明胶、蛋黄、酪蛋白、羊毛脂、胆固醇、蜡和卵磷脂)、胶体粘土(例如膨润土(硅酸铝)和Veegum(硅酸镁铝))、长链氨基酸衍生物、高分子量醇类(例如硬脂醇、鲸蜡醇、油醇、单硬脂酸三醋精、二硬脂酸乙二酯、单硬脂酸甘油酯和单硬脂酸丙二酯、聚乙烯醇)、卡波姆(例如羧基聚亚甲基、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物和羧基乙烯基聚合物)、卡拉胶、纤维素衍生物(例如羧甲基纤维素钠、粉状纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素)、失水山梨糖醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯(吐温20)、聚氧乙烯失水山梨糖醇(吐温60)、聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯(吐温80)、失水山梨糖醇单棕榈酸酯(Span 40)、失水山梨糖醇单硬脂酸酯(Span 60)、失水山梨糖醇三硬脂酸酯(Span 65)、单油酸甘油酯、失水山梨糖醇单油酸酯(Span 80))、聚氧乙烯酯类(例如聚氧乙烯单硬脂酸酯(Myrj 45)、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚氧亚甲基硬脂酸酯和Solutol)、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如CremophorTM)、聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯月桂基醚(Brij 30))、聚乙烯吡咯烷酮、单月桂酸二甘醇酯、三乙醇胺油酸酯、油酸钠、油酸钾、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、月桂基硫酸钠、Pluronic F-68、Poloxamer-188、十六烷基三甲基溴化铵、鲸蜡基氯化吡啶、苯扎氯铵、多库酯钠等和/或其混合物。
示例性的粘合剂包括淀粉(例如玉米淀粉和淀粉糊)、明胶、糖类(例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露糖醇等)、天然和合成的胶(例如阿拉伯胶、藻酸钠、爱尔兰藓提取物、潘瓦尔胶、印度树胶、依莎贝果壳胶(mucilage of isapol husk)、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、纤维素乙酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸镁铝(Veegum)和落叶松阿拉伯半乳聚糖)、藻酸盐、聚环氧乙烷、聚乙二醇、无机钙盐、硅酸、聚甲基丙烯酸酯、蜡类、水、醇和/或其混合物。
示例性的防腐剂包括抗氧化剂、螯合剂、抗微生物防腐剤、抗真菌防腐剂、醇类防腐剤、酸性防腐剂和其他防腐剂。在某些实施方式中，所述防腐剂是抗氧化剂。在其他实施方式中，所述防腐剂是螯合剂。
示例性的抗氧化剂包括α-生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸基棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、单硫代甘油、焦亚硫酸钾、丙酸、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和亚硫酸钠。
示例性的螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)及其盐和水合物(例如乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、乙二胺四乙酸单钙二钠、乙二胺四乙酸二钾等)、柠檬酸及其盐和水合物(例如单水合柠檬酸)、延胡索酸及其盐和水合物、苹果酸及其盐和水合物、磷酸及其盐和水合物和酒石酸及其盐和水合物。示例性的抗微生物防腐剂包括苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲醇、溴硝丙二醇、溴棕三甲铵、鲸蜡基氯化吡啶、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲苯酚、甲酚、乙醇、甘油、海克替啶、咪脲、苯酚、苯氧基乙醇、苯基乙醇、硝酸苯基汞、丙二醇和硫柳汞。
示例性的抗真菌防腐剂包括对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯甲酸钾、山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钠和山梨酸。
示例性的醇类防腐剂包括乙醇、聚乙二醇、苯酚、酚类化合物、双酚、氯丁醇、羟基苯甲酸酯和苯乙醇。
示例性的酸性防腐剂包括维生素A、维生素C、维生素Ε、β-胡萝卜素、柠檬酸、醋酸、脱氢乙酸、抗坏血酸、山梨酸和植酸。
其他的防腐剂包括生育酚、醋酸生育酚、甲磺酸去铁胺、溴化十六烷基三甲铵、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、乙二胺、月桂基硫酸钠(SLS)、月桂基醚硫酸钠(SLES)、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钾、焦亚硫酸钾、Glydant Plus、Phenonip、对羟基苯甲酸甲酯、Germall 115、Germaben II、Neolone、Kathon和Euxyl。
示例性的缓冲剂包括柠檬酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、氯化铵、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡乳醛酸钙、葡庚糖酸钙、葡萄糖酸钙、D-葡糖酸、甘油磷酸钙、乳酸钙、丙酸、果糖酸钙、戊酸、磷酸氢二钙、磷酸、磷酸三钙、磷酸氢氧化钙、乙酸钾、氯化钾、葡萄糖酸钾、钾的混合物、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸钾的混合物、乙酸钠、碳酸氢钠、氯化钠、柠檬酸钠、乳酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钠的混合物、氨基丁三醇、氢氧化镁、氢氧化铝、藻酸、无热原水、等渗盐水、林格氏溶液、乙醇及其混合物。
示例性的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、二氧化硅、滑石、麦芽、甘油山嵛酸酯、氢化植物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、月桂基硫酸镁、月桂基硫酸钠及其混合物。
示例性的天然油类包括杏仁油、苦杏仁油、鳄梨油、巴西棕榈油、佛手柑油、黑加仑籽油、紫草油、杜松油、春黄菊油、芥花油、页蒿子油、巴西棕榈蜡油、蓖麻油、肉桂油、可可脂、椰子油、鳕鱼肝油、咖啡油、玉米油、棉花籽油、鸸鹋油、桉树油、月见草油、鱼油、亚麻籽油、香叶醇油、葫芦油、葡萄籽油、榛子油、牛膝草油、肉豆蔻酸异丙酯、霍霍巴油、夏威夷核果(kukui nut)油、杂薰衣草油、薰衣草油、柠檬油、山苍子油、澳洲坚果油、锦葵油、芒果籽油、绣线菊籽油、貂油、肉豆蔻油、橄榄油、橙油、罗非鱼油、棕榈油、棕榈仁油、桃仁油、花生油、罂粟籽油、南瓜籽油、菜籽油、米糠油、迷迭香油、红花油、檀香油、sasquana油、烈香油、沙棘油、芝麻油、乳木果油、硅酮油、大豆油、葵花油、茶树油、蓟子油、山茶花油、香根草油、核桃油和小麦胚芽油。示例性的合成的油类包括但不限于硬脂酸丁酯、辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯、环聚二甲基硅氧烷、癸二酸二乙酯、二甲基聚硅氧烷360、肉豆蔻酸异丙酯、矿物油、辛基十二烷醇、油醇、硅油及其混合物。
用于口服和肠胃外给药的液体剂型包括可药用乳液、微乳液、溶液、悬液、糖浆和酏剂。除了活性成分之外，液体剂型还可以包含本领域中常用的惰性稀释剂例如水或者其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺，油类(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和失水山梨糖醇脂肪酸酯，及其混合物。除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括佐剂例如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和增香剂。在某些用于胃肠外给药的实施方式中，本发明的偶联物与增溶剂例如CremophorTM、醇类、油类、改性油类、二醇类、聚山梨酸酯类、环糊精类、聚合物及其混合物混合。
可注射的制剂例如无菌可注射的水性或油性悬液，可根据已知的现有技术，使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。无菌可注射制剂可以是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬液或乳液，例如作为1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的介质和溶剂包括水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油通常被用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何品牌的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸例如油酸被使用在注射剂的制备中。
可注射配方可以通过例如经滤菌滤器进行过滤，或者通过掺入采取无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述无菌固体组合物可以在使用之前溶解或分散在无菌水或者其他无菌可注射介质中。
为了延长药物的效果，经常需要减缓来自皮下或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体悬液来实现。药物的吸收速率便取决于其溶解速率，而其溶解速率可能又反过来取决于晶体大小和结晶形式。或者，肠胃外给药的药物形式的延迟吸收通过将药物溶解或悬浮在油介质中来实现。
用于直肠或阴道给药的组合物通常是栓剂，其可以通过将本发明的偶联物与适合的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂用蜡进行混合来制备，所述赋形剂或载体在室温下是固体但在体温下是液体，因此在直肠或阴道腔内融化并释放出活性成分。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，将活性成分与至少一种惰性的可药用赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或如下成分混合：(a)填充剂或增量剂例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，(b)粘合剂例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，(c)保湿剂例如甘油，(d)崩解剂例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，(e)溶液阻滞剂例如石蜡，(f)吸收促进剂例如季铵化合物，(g)润湿剂例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，(h)吸附剂例如高岭土和膨润土粘土，以及(i)润滑剂例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型可以包括缓冲剂。
相似类型的固体组合物也可以作为填料用于软质和硬质填充的明胶胶囊中，并使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以使用包衣和壳体例如肠溶包衣和制药领域公知的其他包衣来制备。它们可以可选地包含遮光剂，并且可以是任选地以延迟的方式仅仅或者优选地在肠道的某一部分中释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。相似类型的固体组合物也可以作为填料用于软质和硬质填充的明胶胶囊中，并使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂。
活性成分可以采取微胶囊的形式，并使用一种或多种上面提到的赋形剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以使用包衣和壳体例如肠溶包衣、受控释放包衣和制药领域公知的其他包衣来制备。在这样的固体剂型中，可以将活性成分与至少一种惰性稀释剂例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。正如通常做法那样，这样的剂型可以包含惰性稀释剂以外的其他物质，例如制片润滑剂和其他制片助剂如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型可以包含缓冲剂。它们可以可选地包含遮光剂，并且可以是任选地以延迟的方式仅仅或者优选地在肠道的某一部分中释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。
用于本发明的化合物的表面和/或透皮给药的剂型可以包括软膏、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶、粉剂、溶液、喷剂、吸入剂和/或贴片。一般来说，将活性成分在无菌条件下与可药用载体和/或任何需要的防腐剂和/或需要的缓冲剂混合。此外，本发明考虑到了使用透皮贴片，其通常具有提供活性成分向身体的受控递送的附加优点。这样的剂型可以通过例如将活性成分溶解和/或分配在适合的介质中来制备。可替选地或另外地，可以通过提供控制速率的膜和/或通过将活性成分分散在聚合物基质和/或凝胶中，来控制速率。
用于递送本文描述的真皮内药物组合物的适合的装置包括短针头装置，例如在美国专利4,886,499、5,190,521、5,328,483、5,527,288、4,270,537、5,015,235、5,141,496和5,417,662中所描述的。真皮内组合物可以通过限制针头在皮肤中的有效穿透长度的装置，例如在PCT公布WO 99/34850中所描述的或其功能等同物来给药。通过液体喷射注射器和/或通过刺穿角质层并产生到达真皮的射流的针头将液体疫苗递送到真皮的喷射注射装置，是适合的。喷射注射装置描述在例如美国专利5,480,381、5,599,302、5,334,144、5,993,412、5,649,912、5,569,189、5,704,911、5,383,851、5,893,397、5,466,220、5,339,163、5,312,335、5,503,627、5,064,413、5,520,639、4,596,556、4,790,824、4,941,880、4,940,460和PCT公布WO 97/37705和WO 97/13537。使用压缩气体加速采取粉末形式的化合物通过皮肤外层到达真皮的弹道粉剂/粒子递送装置，是适合的。可替选地或另外地，在经典的真皮内给药方法中，可以使用常规注射器。
适合于表面给药的配方包括但不限于液体和/或半液体制剂，例如擦剂、洗剂、水包油和/或油包水乳剂例如霜剂、软膏和/或糊剂和/或溶液和/或悬液。可表面给药配方可以包含例如约1％至约10％(w/w)的活性成分，尽管活性成分的浓度可以高达所述活性成分在溶剂中的溶解度极限。用于表面给药的配方可以进一步包含一种或多种本文中描述的其它成分。
本发明的药物组合物可以在适合于通过口腔进行肺部给药的配方中制备、包装和/或销售。这样的配方可以包含干粒子，其包含活性成分并具有约0.5至约7纳米或约1至约6纳米范围内的直径。这样的组合物方便地采取干粉形式，使用包含干粉储存器的装置，可以将推进剂气流导向所述干粉储存器以分散所述粉剂来给药，和/或使用自推进溶剂/粉剂分配容器，例如在密封容器中包含溶解和/或悬浮在低沸点推进剂中的活性成分的装置来给药。这样的粉剂包含粒子，其中至少98重量％的所述粒子具有大于0.5纳米的直径，并且至少95数量％的粒子具有小于7纳米的直径。或者，至少95重量％的粒子具有大于1纳米的直径，并且至少90数量％的粒子具有小于6纳米的直径。干粉组合物可以包括固体细粉稀释剂例如糖，并方便地以单位药剂形式提供。
低沸点推进剂一般包括在大气压下具有低于65℉的沸点的液体推进剂。推进剂一般可以占组合物的50至99.9％(w/w)，并且活性成分可以占组合物的0.1至20％(w/w)。推进剂可以进一步包含其他成分例如液体非离子型和/或固体阴离子型表面活性剂和/或固体稀释剂(其可以具有与包含活性成分的粒子相同量级的粒径)。
被配制成肺部递送的本发明的药物组合物，可以将活性成分提供成溶液和/或悬液的小滴的形式。这样的配方可以作为任选无菌的包含活性成分的水性和/或稀的醇性溶液和/或悬液来制备、包装和/或销售，并且可以方便地使用任何喷雾和/或雾化装置来给药。这样的配方可以进一步包含一种或多种其他成分，包括但不限于调味剂例如糖精钠、挥发性油、缓冲剂、表面活性剂和/或防腐剂例如羟基苯甲酸甲酯。由这种给药途径提供的小滴可以具有约0.1至约200纳米范围内的平均直径。
本文中描述的可用于肺部给药的配方，可用于本发明的药物组合物的鼻内递送。适合用于鼻内给药的另一种配方是包含活性成分并具有约0.2至500微米的平均粒径的粗粉剂。这样的配方从对鼻孔保持关闭的粉剂容器通过快速吸入经鼻道给药。
用于鼻给药的配方可以例如包含约少至0.1％(w/w)到多至100％(w/w)的活性成分，并且可以包含本文中描述的一种或多种其他成分。本发明的药物组合物可以在用于颊给药的配方中制备、包装和/或销售。这样的配方可以例如采取使用常规方法制造的片剂和/或含片的形式，并且可以含有例如0.1至20％(w/w)的活性成分，其余包含可在口中溶解和/或降解的组合物，并任选地包含本文中描述的一种或多种其他成分。或者，用于颊给药的配方可以包含含有活性成分的粉剂和/或气溶胶化和/或雾化的溶液和/或悬液。这样的粉状、气溶胶化和/或雾化的配方在分散时，可能具有约0.1至约200纳米范围内的平均粒子和/或液滴尺寸，并且可以进一步包含本文中描述的一种或多种其他成分。
本发明的药物组合物可以在眼部给药的配方中制备、包装和/或销售。这样的配方可以例如采取滴眼液的形式，其包含例如活性成分在水性或油性液体载体中的0.1/1.0％(w/w)溶液和/或悬液。这样的滴剂可以进一步包含缓冲剂、盐类和/或本文中描述的一种或多种其他成分。其他可以使用的可眼部给药的配方包括包含采取微晶体形式和/或在脂质体制剂中的活性成分的配方。在本发明的范围内设想了滴耳液和/或滴眼液。
尽管本文提供的药物组合物的描述原则上针对适合于人类给药的药物组合物，但专业技术人员将会理解，这样的组合物通常适合于给药到所有类型的动物。适合给药于人类的药物组合物为了使所述组合物适合于给药到各种不同动物而进行的修改是公知的，并且普通兽医药剂师可以使用常规实验来设计和/或进行这样的修改。
本文中提供的化合物通常被配制成剂量单位形式，以便于给药和剂量的均匀性。然而，应该理解，本发明的组合物的每日总用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任何特定受试者或生物体的具体的治疗有效剂量水平取决于各种因素，包括待治疗的疾病和障碍的严重性、所使用的具体活性成分的活性、所使用的具体组合物、受试者的年龄、体重、总体健康、性别和饮食、给药时间、给药途径和所使用的特定活性成分的排泄速率、治疗的持续时间、与所使用的特定活性成分组合或同步使用的药物等医学领域中公知的因素。
本文中提供的化合物和组合物可以通过任何途径给药，包括肠内(例如经口)、肠胃外、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、鞘内、皮下、心室内、透皮、真皮内、直肠、阴道内、腹膜内、表面(例如通过粉剂、软膏、霜剂和/或滴剂)、粘膜、鼻、颊、舌下、通过鞘内灌注、支气管灌注和/或吸入、和/或作为口腔喷剂、鼻喷剂和/或气溶胶。具体设想的途径是口服给药、静脉内给药(例如系统性静脉内注射)、通过血液和/或淋巴供应的区域性给药和/或向患病位点的直接给药。一般来说，最适合的给药途径取决于各种不同因素，包括药剂的本质(例如它在胃肠道环境中的稳定性)和/或受试者的状况(例如受试者是否能够耐受口服给药)。
获得有效量所需的化合物的准确量随受试者而变，并取决于例如受试者的种族、年龄和总体状况、副作用或障碍的严重性、特定化合物的身份、给药方式等。所需剂量可以每日三次、每日两次、每日一次、每两日、每三日、每周、每两周、每三周或每四周递送。在某些实施方式中，所需剂量可以使用多次给药(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14次或更多次给药)来递送。
在某些实施方式中，用于每日一次或多次给药到70kg成年人的化合物的有效量可以为每单位剂型包括约0.0001mg至约3000mg、约0.0001mg至约2000mg、约0.0001mg至约1000mg、约0.001mg至约1000mg、约0.01mg至约1000mg、约0.1mg至约1000mg、约1mg至约1000mg、约1mg至约100mg、约10mg至约1000mg或约100mg至约1000mg的化合物。
在某些实施方式中，式(I)的化合物可以处于足以每日一次或多次递送约0.001mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约50mg/kg、优选地约0.1mg/kg至约40mg/kg、优选地约0.5mg/kg至约30mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、更优选地约1mg/kg至约25mg/kg受试者体重的剂量水平，以获得所需治疗效果。
应该认识到，本文中描述的剂量范围为所提供的药物组合物向成人的给药提供了指南。给药到例如儿童或少年的量可以由医学从业人员或本领域技术人员确定，并且可以低于或等于给药到成人的量。
还应该认识到，本文中所描述的化合物或组合物可以与一种或多种其他药剂组合给药。化合物和组合物可以与提高它们的生物利用度、降低和/或改变它们的代谢、抑制它们的排泄和/或改变它们在体内的分布的其他药剂组合给药。还应该认识到，所使用的疗法可以对相同障碍实现所需效果，和/或它可能实现不同效果。
化合物或组合物可以与可能可用作例如组合疗法的一种或多种其他药剂同时、在其之前或之后给药。药剂包括治疗活性药剂。药剂还包括预防活性药剂。每种其他药剂可以以为该药剂确定的剂量和/或时间安排给药。所述其他药剂也可以相互一起和/或与本文中描述的化合物或组合物一起，在单一药剂中给药或在不同药剂中分开给药。在疗法中使用的具体组合将考虑到本发明的化合物与所述其他药剂的相容性和/或需要实现的治疗和/或预防效果。一般来说，预期在组合中使用的其他药剂将以不超过它们被单独使用时的水平的水平使用。在某些实施方式中，在组合中使用的水平将低于单独使用的水平。
示例性的其他药剂包括但不限于抗增殖药剂、抗癌药剂、抗糖尿病药剂、抗炎剂、免疫抑制剂和疼痛缓解剂。药剂包括小的有机分子例如药物化合物(例如被美国食品和药品管理局(U.S.Food and Drug Administration)批准的提供在美国联邦法规(Code ofFederal Regulations)(CFR)中的化合物)、肽类、蛋白质、糖类、单糖、寡糖、多糖、核蛋白、黏蛋白、脂蛋白、合成的多肽或蛋白质、连接到蛋白质的小分子、糖蛋白、甾类、核酸、DNA、RNA、核苷酸、核苷、寡核苷酸、反义寡核苷酸、脂质、激素、维生素和细胞。
本发明还设想了试剂盒(例如药物包装)。本发明的试剂盒可能可用于预防和/或治疗流感感染。所提供的试剂盒可以包含本发明的药物组合物或化合物和容器(例如小管、安瓿、瓶子、注射器和/或配药包装或其他适合的容器)。在某些实施方式中，提供的试剂盒可以任选地还包括第二容器，其包含用于稀释或悬浮本发明的药物组合物或化合物的药用赋形剂。在某些实施方式中，将提供在容器和第二容器中的本发明的药物组合物或化合物合并，以形成一个单位剂型。
因此，一方面，提供了包括第一容器的试剂盒，所述容器包含本文中描述的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多形体、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前体药物，或其药物组合物。在某些实施方式中，本发明的试剂盒包括第一容器，其包含本文中描述的化合物或其可药用盐或其药物组合物。在某些实施方式中，所述试剂盒可用于在受试者中预防和/或治疗流感感染。在某些实施方式中，所述试剂盒还包括将所述化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多形体、共晶体、互变异构体、立体异构体、同位素标记的衍生物和前体药物或其药物组合物给药于受试者，以预防和/或治疗流感感染的说明书。
本说明书中使用的术语，在本发明的上下文中，并且在使用每个术语的具体上下文中，一般具有它们在本领域中的常用意义。用于描述本发明的某些术语在下面或本说明书中的别处讨论，以便为从业人员提供关于本发明的描述的进一步指导。为方便起见，某些术语可能被突出，例如使用斜体字和/或引号标志。突出法的使用对术语的范围和意义没有影响；在相同的上下文中，术语的范围和意义是相同的，不论是否被突出。应该认识到，同一件事可以用超过一种方式来叙述。因此，对于本文中讨论的任一个或多个术语，可以使用可替换的语言和同义词，它们对于术语是否在本文中被详细阐述或讨论都没有特别的意义。提供了某些术语的同义词。一个或多个同义词的叙述不排除其他同义词的使用。本说明书中任何位置处的实例、包括本文中讨论的任何术语的实例的使用仅仅是说明性的，并且不以任何方式限制本发明或任何示例的术语的范围和意义。同样地，本发明不限于本说明书中给出的各种实施方式。
除非另有定义，否则在本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员所通常理解的相同的意义。在有冲突的情况下，以本文件、包括定义为准。
当在本文中使用时，术语治疗性药物打算定义一亚类具有治疗性(并且不仅仅是预防性)性质的药物。这样的药物除了治疗性潜力之外可能还具有预防活性。它们可应用于现有疾病、感染或病症的治疗。
当在本文中使用时，术语共同给药，当用于本发明的组合物、疫苗等的各种不同组分的给药的上下文中时，打算涵盖所指称组分的顺序、同时或分开给药。因此，同时给药涵盖了在给药前将所指称组分物理混合的情况。顺序给药涵盖了将所指称组分分开一定程度的时间间隔给药(通常为几分钟至几小时，尽管在某些实施方式中共同给药的组分的给药可以隔开一天或更多天)的情况。
“协同作用”可以通过联合指数(CI)来度量。联合指数由Chou和Talalay描述(Chou,T.-C.，用于协同作用和拮抗作用定量的中位数效应原理和联合指数(The median-effect principle and the combination index for quantitation of synergism andantagonism)，p.61-102，在T.-C.Chou和D.C.Rideout主编的《化疗的协同作用和拮抗作用》(Synergism and antagonism in chemotherapy)中，Academic Press,San Diego,Calif.(1991)；Chou,T.-C和P.Talalay，剂量-效应关系的定量分析：多种药物对酶抑制剂的联合效应(Quantitative analysis of dose-effect relationships:the combined effectsof multiple drugs on enzyme inhibitors)，Adv.Enzyme Regul.22:27-55(1984))。0.90或更低的CI值被认为是协同的，0.85的值是中度协同的，低于0.70的值是显著协同的。0.90至1.10的CI值被认为是接近累加的，更高的值是拮抗的。
表1.协同作用/拮抗作用随CI值的变化
CI值 解释
>10 非常强的拮抗作用
3.3-10 强拮抗作用
1.45-3.3 拮抗作用
1.2-1.45 中度拮抗作用
1.1-1.2 轻微拮抗作用
0.9-1.0 累加作用
0.85-0.9 轻微协同作用
0.7-0.85 中度协同作用
0.3-0.7 协同作用
0.1-0.3 强协同作用
<0.1 非常强的协同作用
应该指出，协同性的确定可能受到生物变化性、剂量、实验条件(温度、pH、氧张力等)、治疗计划和组合比的影响。
扎那米韦与免疫调节药物的新的双功能双重靶向偶联物预期产生比单一组分更大的协同效果(Meunier,B.Acc.Chem.Res.2008,41,69)。图1示出了这样的双重靶向的扎那米韦偶联物的推定的工作机制。使用设计的多种配体(DML)的疗法，在多基因和多靶疾病例如癌症、糖尿病和传染病的治疗中，与单个药物的组合相比可能具有更好的药理效果和提高的安全性的优点(Morphy,R.等，Drug Discov.Today 2004,9,641；Morphy,R.&Rankovic,Z.J.Med.Chem.2006,49,4961；Zimmermann,G.R.等，Drug Discov.Today 2007,12,34)。
本文中公开的本发明的双重靶向抗流感药物被设计用于病毒失活和细胞因子抑制(图1)。由于ZA与NA的高亲和性，ZA偶联物将被带到流感感染的组织，以高效方式允许偶联物的抗炎组成部分抑制促炎性细胞因子的诱导。提供了三种扎那米韦偶联物ZA-7-CA(1)、ZA-7-ME(3)和ZA-7-CA-酰胺(7)，其在扎那米韦的C-7位置处具有通过酯或酰胺键连接到咖啡酸(CA)或美沙拉嗪(ME)的连接(图2)。为了进行比较，提供了其他扎那米韦C-7偶联物ZA-7-MCA(2)、ZA-7-HNAP(4)、ZA-7-DHBA(5)、ZA-7-HP(6)和ZA-7-HNAP-酰胺(8)以及扎那米韦C-l偶联物ZA-1-CA(9)、ZA-1-MCA(10)、ZA-1-ME(11)和ZA-1-HNAP(12)。根据ZA-NA复合物的结构分析(Varghese,J.N.等，Protein Sci.1995,4,1081)，ZA的7-OH基团暴露于水，并且不与流感NA蛋白发生直接相互作用。
已显示，在C7羟基处具有修饰的ZA衍生物保留了良好的NA抑制活性(Andrews,D.M.等，Eur.J.Med.Chem.1999,34,563；Honda,T.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2002,12,1921；Honda,T.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2002,12,1925)。因此，具有提高的亲脂性的ZA-7偶联物1-8预计表现出良好的抗流感活性。具有酯连键的ZA-1偶联物9-12将在体内经历酶水解给出有活性的ZA药物，使得9-12可以起到长效神经氨酸酶抑制剂的作用(Liu,Z.-y.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,4851；Yamashita,M.等，Antimicrob.AgentsChemother.2009,53,186；Kubo,S.等，Antimicrob.Agents Chemother.2010,54,1256；Ishizuka,H.等，J.Clin.Pharmacol.2010,50,1319)。
咖啡酸(CA)及其酯衍生物已知表现出抗炎效果以及其他生物活性(Michaluart,P.等，Cancer Res.1999,59,2347；Jung,W.K.等，Int.J.Biochem.Cell Biol.2008,40,2572；Shin,K.-M.等，Biochem.Pharmacol.2004,68,2327)。咖啡酸酯可以通过抑制NF-κΒ与DNA的复合物的形成，来抑制NF-κΒ及其下游介导物iNOS和COX-2(Natarajan,K.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1996,93,9090；Chiang,Y.M.等，Brit.J.Pharmacol.2005,146,352)。美沙拉嗪(ME)是用于治疗溃疡性结肠炎和克罗恩病这两种主要的人类慢性炎性肠病的抗炎剂(Kaiser,G.C.等，Gastroenterology 1999,116,602；Kruis,W.等，Gut 2001,49,783；Sandborn,W.J.等，Aliment.Pharmacol.Ther.2007,26,987)。还已知美沙拉嗪是诱导抗炎效应的过氧化物酶体增殖物-激活物受体(PPAR-γ)的激动剂(Rousseaux,C.等，J.Exp.Med.2005,201,1205)。
抗流感偶联物的化学合成
图3示出了扎那米韦偶联物1-12的通用合成策略。通过对用于相应的甲基酯13a的已报道的方法进行略微修改，将唾液酸转变成乙基酯衍生物13(Chandler,M.等，J.Chem.Soc,Perkin Trans.I 1995,1173)。然后将化合物13转化成14，其具有游离羟基，容易进一步与适合的抗炎剂连接以形成扎那米韦-7-偶联物，例如化合物1-8。或者，将酯14水解以给出相应的酸，其可以与适合的醇类经历缩合反应，给出扎那米韦-1-偶联物例如化合物9-12。这些偶联物的合成程序示出在图4-15、图19和图20中。化合物14还起到共同中间体的作用，用于合成在9-或胍位置处含有抗炎剂的扎那米韦偶联物，例如图21-23中所示出的。
将化合物14在无水吡啶中用氯甲酸4-硝基苯基酯和DMAP处理，得到活性碳酸酯15(Ying,L.&Gervay-Hague,J.ChemBioChem 2005,6,1857；Wen,W.-H.等，J.Med.Chem.2009,52,4903)，其随后与3-氨基-1-丙醇反应，给出氨基甲酸酯衍生物16(图4)。移除16中的所有保护基团，得到在ZA的C-7位置处带有N-(3-羟基丙基)氨基甲酸酯组成部分的ZA-7-HP偶联物6。
16与咖啡酸的双烯丙基醚(18)的缩合反应使用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)作为催化剂来进行，得到所需的带有酯键的偶联产物19(图5)。将化合物19在室温下用KOH(1M水性溶液)处理，以选择性皂化C-1处的乙基酯而不切开扎那米韦与咖啡酸组成部分之间的酯键。进行钯催化的脱烯丙基反应，并随后用三氟乙酸(TFA)处理除去缩丙酮和叔丁氧基羰基(Boc)保护基团，以得到ZA-7-CA偶联物(1)。
通过类似的程序，16与3,4-(亚甲基二氧基)肉桂酸(MCA)、美沙拉嗪烯丙基醚(22)、1-羟基-2-萘甲酸(HNAP)烯丙基醚(25)和3,4-二羟基苯甲酸(DHBA)双烯丙基醚(28)的偶联反应，分别给出化合物20、23、26和29，它们在除去保护基团后被精心制造成ZA-7-MCA(2)、ZA-7-ME(3)、ZA-7-HNAP(4)和ZA-7-DHBA(5)偶联物(图6-9)。
制备带有末端氨基的CA衍生物32，然后与活化的碳酸酯15反应，在除去保护基团后给出ZA-7-CA-酰胺偶联物(7)(图10)。ZA-7-HNAP-酰胺偶联物(8)类似地通过碳酸酯15与附连有胺的HNAP衍生物35的偶联反应，然后除去保护基团来合成(图11)。据认为，ZA-7-CA-酰胺和ZA-7-HNAP-酰胺偶联物中的酰胺键比偶联物1-5中的可酶切开的酯键更稳定。
为了制备ZA-1-偶联物，将酸37用KOH(1当量)处理以得到羧酸钾盐，将其与3-碘-1-丙醇反应以提供酯38。38与CA烯丙基醚18、MCA、ME烯丙基醚22和HNAP烯丙基醚25的偶联反应，在除去保护基团后分别产生ZA-1-CA(9)、ZA-1-MCA(10)、ZA-1-ME(11)和ZA-1-HNAP(12)偶联物(图12-15)。
图19和20示出了ZA-7-Nap偶联物(43)和ZA-7-Ibu(44)的合成。按照已报道的程序制备乙基酯13的对应物甲基酯13a(Chandler,M.等，J.Chem.Soc,Perkin Trans.I 1995,1173)。13a与NaOMe在甲醇中的皂化，然后使用2,2-二甲氧基丙烷进行酸催化的缩醛化以得到化合物14a，将其在无水吡啶中用氯甲酸4-硝基苯基酯和4-二甲基氨基吡啶处理，给出碳酸酯15a。15a与萘普生3-氨基丙基酯在1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)存在下的偶联反应，在除去乙缩醛和t-Boc保护基团后，给出ZA-7-Nap偶联物43。通过类似的程序进行15a与布洛芬3-氨基丙基酯的偶联反应，并除去保护基团以得到ZA-7-Ibu偶联物44。
为了合成9-位处的扎那米韦偶联物，将乙酰基化合物13选择性水解以给出三醇化合物56(图21)。萘普生与56的偶联反应在伯醇处区域选择性地发生，给出化合物57。57中的乙基酯在温和碱性条件下选择性皂化，并在除去t-Boc基团后获得ZA-9-Nap偶联物45。
图22和23示出了在胍位置处的扎那米韦偶联物的合成。例如，将萘普生与[亚氨基(甲基硫基)甲基]氨基甲酸叔丁基酯缩合，以给出化合物60。60与从叠氮化物59的加氢获得的胺的反应在HgCl2和Et3N存在下进行，给出化合物60。除去t-Boc基团并随后水解，由此产生ZA-G-Nap 46。通过类似的程序，使用布洛芬作为起始原料，制备了ZA-G-Ibu偶联物47(图23)。
图24示出了奥司他韦-咖啡酸偶联物OS-1-CA(48)的合成。将奥司他韦N-Boc衍生物64在碱性条件下用3-碘-1-丙醇处理以得到酯65，其与咖啡酸的双烯丙基醚(18)经历缩合反应，给出偶联产物66。通过除去烯丙基和Boc保护基团，由此获得所需的OS-1-CA偶联物(48)。
图25示出了零流感-咖啡酸偶联物TP-1-CA(49)的合成。按照以前的描述制备碘代化合物67(Shie,J.-J.等，Angew.Chem.Int.Ed.2008,47,5788)。67与2-膦酰-1,3-二氧芑-2-酮(68)的由钯的催化的反应给出膦酸酯产物69。69的皂化产生膦酸单酯70，其与活化的咖啡酸O-Su酯(71)反应，给出偶联产物72。在72中除去烯丙基和Boc保护基团，给出所需的TP-1-CA偶联物49。
图26示出了源自于膦酰-扎那米韦单乙基酯和咖啡酸的偶联物50的合成。按照已报道的程序(Horn,E.J.等，Carbohydr.Res.2008,343,936)，将唾液酸在吡啶中用乙酸酐处理，得到全乙酰化产物，将其在100℃下加热以诱导脱羧反应，提供化合物73。使用三甲基甲硅烷基二乙基亚磷酸酯作为适合的亲核剂，通过三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯(TMSOTf)的催化进行73的取代反应，给出作为α和β异头物的混合物(2:3)的膦酸酯化合物74。这些异头物通过层析进行分离并通过NMR波谱分析进行表征。出于合成目的，将异头物混合物74没有进一步分离直接用N-溴琥珀酰亚胺(NBS)在光化学条件下进行处理，给出α-溴代化合物，其随后用吡啶处理以给出偶联的膦酸酯75。在乙酸酐、乙酸和浓H2SO4存在下将化合物75转变成噁唑啉76。进行噁唑啉76与叠氮基三甲基硅烷的区域和立体选择性开环反应，以产生叠氮基化合物77。在催化加氢后，将胺中间体作为t-Boc衍生物78进行保护。78的皂化给出三元醇产物，其与2,2'-二甲氧基丙烷反应，以给出缩醛79。将C-7位置处的游离羟基活化成对硝基苯基碳酸酯80，其与源自于咖啡酸的胺81反应，得到氨基甲酸酯82。在用LiBr回流后，将膦酸二乙酯转变成膦酸单乙酯。随后用TFA处理，由此完成PZA(1Et)-7-CA-酰胺偶联物50的合成。
图27示出了帕拉米韦-咖啡酸偶联物PE-1-CA(51)的合成。按照已报道的方法(Mineno,T.,Miller,M.J.J.Org.Chem.2003,68,6591)，将(1R,4S)-2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮83在MeOH中用HCl处理，给出4-氨基环戊-2-烯羧酸酯84。对氨基进行保护以给出85，将其与从2-乙基丁醛肟产生的腈氧化物进行1,3-偶极环加成反应，给出化合物86。在氢解后，对新形成的氨基进行乙酰化。在酸性条件下除去t-Boc基团，然后用1,3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲在HgCl2存在下进行处理，给出化合物90。在皂化后，得到的羧酸经历与咖啡酸衍生物92的缩合反应，给出化合物93。将93在温和碱性条件下皂化，然后用TFA除去t-Boc基团，给出PE-1-CA(51)。
图28示出了帕拉米韦-咖啡酸偶联物PE-2-CA(52)的合成。将化合物90用氯甲酸对硝基苯基酯活化，给出碳酸酯中间体，并与咖啡酸衍生物95反应，得到氨基甲酸酯96。在甲基酯的皂化和除去烯丙基和t-Boc保护基团之后，因此获得所需产物PE-2-CA(52)。
偶联物的生物活性
流感病毒神经氨酸酶A/WSN/1933(H1N1)的抑制
使用荧光底物2'-(4-甲基-伞形酮基)-α-D-N-乙酰基神经氨酸(MUNANA)，评估了扎那米韦及其偶联物1-12针对流感A/WSN/1933(H1N1)病毒的NA抑制活性(表1)。ZA-7-偶联物1-8表现出与ZA相当的NA抑制活性，其IC50值在纳摩尔范围内。相反，ZA-1-偶联物9-12失去了NA抑制活性，表明羧酸的C-1基团在与NA活性位点中的三个精氨酸(Arg118、Arg292和Arg371)残基的静电相互作用中发挥必不可少的作用(Chong,A.K.J.等，Eur.J.Biochem.1992,207,335；von Itzstein,M.等，Nature 1993,363,418；Taylor,N.R.&von Itzstein,M.J.Med.Chem.1994,37,616；Lew,W.等，Curr.Med.Chem.2000,7,663；Russell,R.J.等，Nature 2006,443,45)。单独的抗炎剂CA、MCA和ME不表现出任何NA抑制活性。
抗流感活性
在Madin-Darby狗肾(MDCK)细胞中进行了细胞病变预防测定法，以评估抗流感活性。与我们的预期相符，ZA-7-偶联物是针对人类H1N1病毒的强力抑制剂(表2)。ZA-1-偶联物9-12在基于细胞的测定法中也恢复了抗流感活性。作为鲜明的对比，我们的测定法表明，咖啡酸3-羟基丙基酯、咖啡酸3-(叔丁氧基酰胺基)丙基酯和氯原酸(一种使用奎尼酸形成的咖啡酸酯)对H1N1流感病毒无活性。因此，偶联物ZA-1-CA(1)和ZA-7-CA(9)的观察到的强力抗流感活性，可能与酯键的酶切割以释放出有活性的ZA药物相关。单独的咖啡酸酯不能引起抗流感活性(Salomon,R.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2007,104,12479)。
使用重组NIBRG-14(A/VietNam/1194/2004)病毒，通过细胞病变预防测定法也评估了针对禽H5N1流感病毒的活性。具体来说，ZA-7-CA偶联物显示出非常高的针对禽H5N1病毒的活性，其EC50值为50nM，比扎那米韦(EC50＝680nM)的效能高约13倍。ZA-7-ME和ZA-7-HP偶联物显示出与扎那米韦类似的针对H5N1病毒的抑制活性，其EC50为430和820nM，与ZA的效能类似。
表2.针对A/WSN/1933(H1N1)病毒的流感神经氨酸酶抑制(IC50)和抗流感活性(EC50)
a所有试验化合物在最高试验浓度(100μΜ)下对MDCK细胞无毒性。
bIC50和EC50值通过测定结果的非参数曲线拟合来确定，并且示出的数据是测定结果的范围，括号中为测定的次数。
c使用Advanced Chemistry Development(ACD/Labs)软件V12.01获得的辛醇-水分配系数的计算值。
ZA-7-Nap(43)和ZA-7-Ibu(44)偶联物针对流感A/WSN/1933(H1N1)病毒的神经氨酸酶显示出强抑制活性，其IC50值为3-6nM，与扎那米韦相近。ZA-7-Nap在被A/WSN/1933病毒感染的MDCK细胞的保护中活性提高，其EC50值为0.8nM，而ZA-7-Ibu显示出与扎那米韦相近的抗流感活性(在本实验中EC50＝14nM)。
ZA-G-Nap(46)和ZA-G-Ibu(47)偶联物显示出对神经氨酸酶降低的亲和性(IC50＝44-81nM)。然而，针对A/WSN/1933病毒，它们具有与扎那米韦相近的抗流感活性(EC50＝18-20nM)。
OS-1-CA(48)和TP-1-CA(49)偶联物针对流感A/WSN/1933(H1N1)病毒的神经氨酸酶显示出轻度抑制活性，其IC50值分别为2.4μΜ和0.7μΜ。在基于细胞的测定法中，在被A/WSN/1933病毒感染的MDCK细胞的保护中，OS-1-CA恢复了高活性，其EC50值为73nM，比奥司他韦的效能高约6倍。
动物实验
扎那米韦(RelenzaTM)是用于治疗流感感染的患者的吸入药物，需要20mg/50kg/天(1.2μmol/kg/天)的剂量，进行两次鼻内给药(每次给药使用一半的剂量)。因此，将指定剂量(12、1.2、0.12、0.012或0.0012μmol/kg/天)的试验化合物在用致死剂量(10LD50)的流感A/Cal/07/2009H1N1(图16A-D)或NIBRG-14(A/VietNam/1194/2004)H5N1(图17A和17B)病毒感染前的第1-4日和第0日每日两次鼻内给药到小鼠。对小鼠的存活率进行14天监测。在H1N1病毒感染的小鼠中，剂量为12μmol/kg/天的合成的偶联物ZA-7-CA(1)和Za-7-ME(3)显示出比ZA、CA或ME更高的保护作用(图16A)。在1.2μmol/kg/天的剂量下，使用ZA+CA的组合疗法与单独使用ZA或CA治疗的小鼠相比显示出存活时间的略微增加，但是除了用偶联物1治疗的之外，所有其他小鼠在第12天死亡(图16B)。在0.12μmol/kg/天的低剂量下，用偶联物1治疗的小鼠组在第14天时都存活(图16C)。当使用甚至更低剂量(0.012μmol/kg/天)的1治疗后，在第14天时小鼠的存活率降低到40％。然而，0.0012μmol/kg/天的1对小鼠不显示出显著的针对流感病毒感染的保护作用(数据未示出)。在H1N1病毒感染的小鼠的治疗中，剂量为1.2μmol/kg/天的带有酰胺键的ZA-7-CA-酰胺偶联物(7)也显示出针对病毒诱导的死亡的100％的保护作用，保护作用比ZA或ZA+CA的组合疗法更高(两者在第14天时均显示出10％的存活率)(图16D)。使用0.12μmol/kg/天的偶联物7的治疗在第14天产生50％的存活率，但是使用0.012μmol/kg/天的较低剂量的治疗不提高存活率。
通过用偶联物1以12μmol/kg/天的剂量鼻内给药治疗，被NIBRG-14H5N1病毒感染的小鼠都存活，而同样剂量的ZA+CA或ZA+ME的组合疗法不提高存活率，单独使用ZA的治疗也不提高存活率(图17A)。针对禽H5N1病毒，偶联物3不提供比ZA更好的保护效果(图17A)，尽管这种偶联物在人类H1N1流感的治疗中显示出良好活性(图16A)。与单独的ZA或ZA+CA的组合疗法相比，12μmol/kg/天的偶联物7显示出针对H5N1病毒的更高的效能(图17B)。在使用剂量为1.2μmol/kg/天的偶联物7治疗后，仍注意到提高的存活率(图17B)。
细胞因子抑制
在脂多糖(LPS)激活的RAW264.7细胞中，确定了合成的偶联物抑制促炎性细胞因子的生产的潜在效应(图18A)。将芹菜素、一种已知具有抗炎活性的黄酮，用作阳性对照(图18A，第3和4道)。抗炎剂(第5、6和11-14道中的CA、MCA和ME)和它们的ZA偶联物1和3(第7-10道)引起编码IL-6和TNF-α的mRNA的剂量依赖性的减少。
对于H5N1病毒感染的小鼠来说，将试验化合物以12μmol/kg/天的剂量鼻内给药，并在72h时收集血清样品，以测定IL-6和INF-γ的水平。结果表明，与使用ZA+CA和ZA+ME的组合或单独的扎那米韦治疗的组相比，在相应地用ZA-7-CA和ZA-7-ME偶联物治疗的组(图18B和18C)中血清中的细胞因子水平较低。这些初步结果表明，ZA-7-CA和ZA-7-ME偶联物起到在转录水平上防止促炎性细胞因子积累的作用。
生物试验清楚地表明，在用H1N1或H5N1病毒激惹的小鼠中，通过用扎那米韦偶联物例如ZA-7-CA(1)、ZA-7-ME(3)和ZA-7-CA-酰胺(7)治疗，与使用扎那米韦和抗炎剂的组合治疗相比，存活率被极大提高。尽管不能完全解析这种对流感治疗的协同效果的详细过程，但来自于我们的试验的一些观察可以为工作机制提供见解。这些双重靶向偶联物不仅使流感病毒失活，而且也减少促炎性细胞因子，正如由基于细胞的测定法和小鼠激惹实验所示出的。已建议，偶联物中的扎那米韦组分可以起到流感病毒的特异性结合物的作用，并将抗炎组分带到病毒诱导的细胞因子风暴可能被有效抑制的位置。
酯键可以被血液、肝脏和肾脏中的内源酯酶水解(Lavis,L.D.ACSChem.Biol.2008,3,203)。如表1中所示，扎那米韦-1-偶联物不表现出良好的NA抑制；然而，它们在基于细胞的测定法中恢复抗流感活性(EC50＝16-48nM)，这可能是由C-1酯的酶切开以释放出有活性的扎那米韦药物所造成的。事实上，将ZA-1-HNAP偶联物(12，m/z 561，[M+H]+)在大鼠血浆中在37℃下温育24h，给出了预期的降解产物ZA(m/z 333，[M+H]+)和HNAP(m/z 189，[M+H]+)，正如通过MALDI-TOFMS和LC-QTOFMS波谱测量分析所证实的。在类似的温育条件下，ZA-1-CA偶联物(9，m/z 561[M+H]+)中的酯键也被血浆酯酶切开，以释放出两个活性组分ZA和CA(m/z 181，[M+H]+)。ZA-7-CA偶联物(1，m/z 596[M+H]+)在血浆中的酶切开也释放出降解产物ZA-7-HP(6)，其在m/z 434处显示出质子化信号。然而，具有酰胺键的ZA-7-CA-酰胺偶联物(7，m/z 617[M+H]+)在血浆中相对稳定。由于ZA-7-CA和ZA-7-CA-酰胺偶联物两者显示出良好的抗流感活性，因此扎那米韦-7-偶联物中酯键的酶切开似乎不是NA抑制和细胞因子抑制中的协同双重靶向功能的先决条件。
另一方面，扎那米韦由于其低的亲脂性和快速代谢，具有不良的生物利用度(估计在人类中为5％)(Cass,L.M.R.等，Clin.Pharmacokinet.1999,36,1)。亲脂性是药物的药物动力学行为的关键决定因素。通常将在辛醇与水之间的分配系数(P)作为亲脂性的适合的度量。扎那米韦的clog P的计算值为-4.13(表1)。具有含有芳香族组成部分的CA、MCA、ME和HNAP的ZA-7-偶联物将具有比扎那米韦更高的亲脂性，正如由这些偶联物的clog P值在-2.36至0.65的范围内(表2)所示。已显示，含有亲脂性的烷氧基组成部分的扎那米韦C-1酯，在被流感病毒感染的小鼠中表现出显著的保护效果(Liu,Z.-y.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,4851)。在本研究中，具有提高的亲脂性的ZA-7-偶联物也可以提高药物动力学性质，用于更好的抗流感活性。
为了治疗伴有病毒诱导的细胞因子风暴的流感感染，包含与抗炎剂相连的抗流感组成部分的药物可能提供更好的疗法。我们的研究表明，双重靶向ZA偶联物与单独的ZA或ZA与抗炎剂的组合相比，表现出协同的抗流感活性。
实施例
不打算限制本发明的范围，在下面给出了本发明的实施方式的示例性仪器、装置、方法及其相关结果。注意，在实施例中为了读者的方便可以使用标题和子标题，但它们绝不应该限制本发明的范围。此外，在本文中提出并公开了某些理论；然而，不论它们是否正确，只要本发明按照本发明进行实践而不考虑任何特定理论或行动计划的话，它们绝不应该限制本发明的范围。
实施例1：仪器
熔点在Yanaco或Electrothermal MEL-TEMP 1101D装置上，在开口毛细管中记录，并且不进行校正。旋光在Japan JASCO Co.的数字式旋光计DIP-1000上测量。[α]D值以10- 1deg cm2g-1为单位给出。红外(IR)光谱在Nicolet Magna 550-II或Thermo Nicolet380FT-IR光谱仪上记录。UV-可见光谱在Perkin Elmer Lambda 35分光光度计上测量。核磁共振(NMR)波谱在Bruker Advance-400(400MHz)波谱仪上获得。化学位移(δ)以相对于CHCl3/CDCl3的δΗ7.24/δC 77.0(t的中心线)、H2O/D2O的δΗ4.80、CD3OD的δΗ3.31/δC 48.2或DMSO-d6的δΗ2.49/δC 39.5的百万分率(ppm)为单位给出。裂开的图案被报告为s(单线)、d(双重线)、t(三重线)、q(四重线)、m(多重线)、dd(加倍的双重线)和br(宽峰)。耦合常数(J)以Hz为单位给出。获取无畸变增强极化转移(DEPT)谱以确定碳信号的类型。ESI-MS实验在Bruker Daltonics BioTOF III高分辨率质谱仪上进行。MALDI-MS测量在BrukerDaltonics Ultraflez II MALDI-TOF/TOF 2000质谱仪上进行。将作为MALDI基质的2,5-二羟基苯甲酸(DHB)在λ最大为337nm和355nm的UV激光的不同辐照度下光致电离。
实施例2：化学材料
除非另有指明，否则所有试剂和溶剂为试剂级并不需进一步纯化直接使用。除非另有指明，否则所有溶剂是无水等级的。CH2Cl2从CaH2蒸馏。除非另有指明，否则所有非水性反应均在烤箱干燥的玻璃器皿中，在氩气的微正压下进行。对反应进行磁力搅拌，并通过在硅胶上的薄层层析，并使用水性对甲氧基苯甲醛作为可视化试剂进行监测。硅胶(0.040-0.063mm粒径)和RP-18(0.040-0.063mm粒径)被用于柱层析。快速层析在60-200μm粒径的硅胶上进行。分子筛在高真空下，在220℃活化6小时以上。化合物1-12的纯度通过HPLC(Agilent HP-1100)并在254或360nm波长处检测，估计为>95％。
实施例3：生物材料
流感病毒A/Vietnam/1194/2004RG14(H5N1)和A/California/7/2009(H1N1)来自于台湾疾病控制和预防中心(Center for Disease Control and Prevention inTaiwan)，流感A/WSN/1933(H1N1)来自于台湾长庚大学的Dr.Shin-Ru。所有病毒在10日龄胚胎化鸡卵的尿囊腔中培养72h，并通过蔗糖梯度离心进行纯化。Madin-Darby狗肾(MDCK)细胞从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(Manassas,Va)获得，并在含有10％胎牛血清(GibcoBRL)和青霉素-链霉素(GibcoBRL)的DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基，GibcoBRL)中，在37℃和5％CO2下生长。
实施例4：流感病毒TCID50的测量
通过在96孔微量滴定板中，将流感病毒储用物在100μL浓度为1x105个细胞/mL的MDCK细胞上进行连续稀释，来测定TCID50(50％组织培养物感染剂量)。将被感染的细胞在37℃和5.0％CO2下温育48h，并与每个孔100μL的CellTiterAQueous非放射活性细胞增殖测定试剂(Promega)一起加入到每个孔。在37℃温育15分钟后，在读板器上读取490nm处的吸光值。使用Reed-Muench方法确定流感病毒的TCID50(Reed,L.J.；Muench,H.Am.J.Epidemiol.1938,27,493；Burleson,F.G.等，《病毒学实验指南》(Virology,aLaboratory Manual)，1992)。
实施例5：通过荧光测定法测定NA活性
使用从流感A/WSN/1933(H1N1)感染的胚胎化卵收获的稀释的尿囊液来测量神经氨酸酶(NA)活性。使用荧光底物2'-(4-甲基伞形酮基)-α-D-N-乙酰基神经氨酸(MUNANA；Sigma)，利用荧光测定法来测定NA活性。释放出的4-甲基伞形酮的荧光在Envision读板器(Perkin-Elmer,Wellesley,MA)中，分别使用365和460nm的激发和发射波长来测量。神经氨酸酶活性在200μΜ的MUNANA下测定。酶活性被表示成在室温下的15分钟温育期间荧光的增加。
实施例6：NA抑制剂的IC50的测定
通过将抑制剂与神经氨酸酶在室温混合10分钟，然后加入200μΜ底物，来测定NA抑制。从使用Graph Pad Prism 4将NA活性的抑制百分数相对于抑制剂浓度作图的剂量响应曲线，确定抑制剂的IC50值。
实施例7：NA抑制剂的EC50的测定
神经氨酸酶抑制剂的抗流感活性通过EC50值来度量，该值是H1N1 CPE活性保留50％时的NA抑制剂浓度。将50μL稀释的100TCID50的H1N1与等体积的不同浓度的NA抑制剂混合。将混合物用于感染96孔板中的100μL浓度为1x105个细胞/mL的MDCK细胞。在37℃和5.0％CO2下温育48h后，如上所述使用CellTiterAQueous非放射活性细胞增殖测定试剂测定细胞病变效果(CPE)。通过使用Graph Pad Prism 4来拟合CPE百分数相对于NA抑制剂浓度的曲线，来确定抑制剂的EC50值。
实施例8：动物实验
将雌性BALB/c小鼠(4-5周龄)用zoletil麻醉，并用25μL感染性流感病毒鼻内接种。将合成的化合物和扎那米韦以每天每kg体重0.0012、0.012、0.12、1.2和12μmol的剂量，每天两次通过鼻内灌注给药到10只小鼠的组，共5天。对照(安慰剂)小鼠按照同样的时间安排接受PBS。在第一剂药物后4小时，将小鼠用10MLD50的流感病毒[A/Cal/07/2009(H1N1)或NIBRG-14(A/Vietnam/1194/2004(H5N1)]接种。每天观察小鼠的存活，共14天。
实施例9：RNA分离和实时聚合酶链反应(RT-PCR)
将Raw264.7细胞在6孔板中以每个孔3x106个细胞的密度培养24h并用试验化合物处理30分钟，然后加入100ng mL-1LPS继续处理6h。收集细胞并储存在-80℃直至使用。使用(Invitrogen)提取总RNA，并按照以前的描述进行处理以用于RT-PCR(Hsieh,Y.S.Y.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2008,16,6054-6068)。
实施例10：通过ELISA进行细胞因子测定
小鼠血清中IL-6和IFN-γ的浓度使用小鼠ELISA试剂盒(R&DSystems,Minneapolis,MN)，按照制造商的流程来测定。
实施例11：扎那米韦偶联物在血浆中的温育和质谱测量分析
将Sprague大鼠血清(550μL)与50μL被分析物混合以获得1mM的终浓度。将混合物在37℃温育24h，通过在4℃涡旋振荡2h用甲醇(3.6mL)萃取，然后以10,000rpm进行20分钟离心。通过过滤除去沉淀物。将滤液在减压下浓缩，并通过MALDI-TOFMS分析酶切开产物的含量。
或者，对从温育获得的混合物进行LC-QTOF MS分析。将样品装载到PlustC18柱(Waters Corp)上，并用去离子水(2x2mL)冲洗以除去过量的盐和蛋白，然后用MeOH/H2O(1：1，4x2mL)洗脱，以收集被分析物。将被分析物蒸发至干，并重新溶解在CH3CN/H2O(1：9，100μL)中，用于在nano Acquity UPLC BEH C18柱(1.7μm，75μm x250mm，Waters Corp)上进行LC-QTOF MS分析。进样体积为2-5μL，总运行时间为50分钟。在室温下，以0.3μL/分钟的流速，利用梯度程序使用0.1％甲酸的水溶液(流动相A)和0.1％甲酸的乙腈溶液(流动相B)的混合物。为了分析由ZA-1-HNAP在血浆中的温育形成的产物混合物，流动相的梯度程序被设置为：在25分钟内从10:90线性增加到85:15B/A，并在85:15B/A下保持10分钟。将柱冲洗15分钟，然后返回到原始条件。
实施例12：辛醇-缓冲液分配系数的测定
制备每种化合物在辛醇饱和的磷酸盐缓冲盐水(0.01M，pH 7.4)中的溶液(100μg/mL)。然后在37℃下将这些水性溶液与等体积(0.5mL)的缓冲液饱和的辛醇，使用磁力搅拌以1200rpm平衡24小时。对每个测定进行5次平行试验以评估可重复性。然后通过在3000rpm离心15分钟来分离辛醇和水性相。将每种水性层样品(300μL)用PBS稀释到3mL，并将有机层用MeOH稀释到3mL。使用UV分光光度计测量药物浓度，对于1-羟基-2-萘甲酸的发色团来说，在pH 7.4下在λ最大(MeOH)290nm(ε＝14440)和λ最大(PBS)290nm(ε＝4610)下进行测量。从这些数据确定表观辛醇/缓冲液(pH 7.4)分配系数DB＝[Bt]oct/[Bt]aq，其中[Bt]oct和[Bt]aq分别是有机和水性相中的药物浓度。
实施例13：扎那米韦的合成(图3)
扎那米韦(ZA)通过与以前的报道相似的程序(Chandler,M.等，J.Chem.Soc,Perkin Trans.I 1995,1173)，从唾液酸通过乙基酯13代替相应的甲基酯来制备。
实施例14：ZA-7-HP偶联物6的合成(图4)
5-乙酰基氨基-4-[2,3-双(叔丁氧基羰基)胍基]-6-[(2,2-二甲基-[1,3]二氧戊 环-4-基)-羟基-甲基]-5,6-二氢-4H-吡喃-2-甲酸乙基酯(14)
向13(1100mg，1.60mmol)在无水乙醇(10mL)中的溶液加入NaOEt(54.4mg，0.80mmol)。将混合物在室温搅拌1h，用Dowex50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩，得到黄色固体。将残留物溶解在无水丙酮(10mL)中，并加入对甲苯磺酸和2,2-二甲氧基丙烷。将混合物在室温搅拌12h。在浓缩后，将残留物通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝2:3)，得到化合物14(635mg，66％)。C27H44N4O11；白色固体，熔点118-120℃；TLC(EtOAc/己烷＝2:3)Rf＝0.22；[α]20 D-33.4(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3309,2981,1725,1647,1609,1559,1369,1251,1151cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.30(1H,s),8.54(1H,d,J＝7.2Hz),7.91(1H,d,J＝4.4Hz),5.71(1H,d,J＝2.4Hz),5.21(1H,br s),5.08-5.05(1H,m),4.33-4.30(1H,m),4.19-4.13(2H,m),4.11-4.00(2H,m),3.98-3.88(1H,m),3.45(1H,d,J＝3.6Hz),1.93(3H,s),1.44(9H,s),1.41(9H,s),1.34(3H,s),1.28-1.22(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ173.8,162.2,161.3,157.5,152.5,147.0,108.9,106.3,84.2,79.9,78.5,74.1,69.6,67.3,61.4,51.9,48.3,28.1(3x),27.9(3x),26.9,25.1,22.8,13.9；ESI-HRMS(负电荷模式)对C27H44N4O11的计算值：599.2928，实测值：m/z 599.2926[M-H]-。
5-乙酰基氨基-4-[2,3-双(叔丁氧基羰基)胍基]-6-[(2,2-二甲基-[1,3]二氧戊 环-4-基)-(4-硝基苯氧基)羰基氧基)甲基]-5,6-二氢-4H-吡喃-2-甲酸乙基酯(15)
将化合物14(540mg，0.8mmol)、氯甲酸4-硝基苯基酯(1131mg，5.6mmol)和4-二甲基氨基吡啶(327mg，5.6mmol)在无水吡啶(12mL)中的溶液在室温搅拌16h。浓缩后，向混合物加入EtOAc，然后过滤。将滤液在减压下浓缩，并通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:2)，以给出碳酸酯15(360mg，60％)。C34H47N5O15；白色固体，熔点127-128℃；TLC(EtOAc/己烷＝2:3)Rf＝0.35；[α]20 D-45.7(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)2981,1777,1729,1645,1612,1527,1369,1253,1221,1149cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.29(1H,s),8.44(1H,d,J＝8.8Hz),8.16(2H,d,J＝9.2Hz),7.44(2H,d,J＝9.2Hz),6.54(1H,d,J＝8.8Hz),5.81(1H,d,J＝2.0Hz),5.25(1H,dd,J＝5.6,1.6Hz),5.13-5.08(1H,m),4.38-4.31(2H,m),4.19-4.14(4H,m),4.09-3.99(1H,m),1.82(3H,s),1.39(18H,s),1.31(3H,s),1.28-1.22(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.2,162.5,160.9,157.0,155.7,152.4,152.3,145.3,125.0(2x),122.2(2x),108.9,108.5,83.8,79.6,77.3,75.2,73.9,65.3,61.5,60.2,48.5,48.0,28.0(3x),27.8(3x),26.1,25.3,22.8,13.9；ESI-HRMS，对C34H48N5O15的计算值：766.3147，实测值：m/z 766.3146[M+H]+。
5-乙酰基氨基-6-[(2,2-二甲基-[1,3]二氧戊环-4-基)-3-[(羟基丙基)氨基甲酰 氧基]甲基-4-[2,3-双(叔丁氧基羰基)胍基]-5,6-二氢-4H-吡喃-2-甲酸乙基酯(16)
向碳酸酯15(400mg，0.52mmol)在CH3CN(7mL)中的溶液加入3-氨基-1-丙醇(0.084mL,1.1mmol)和Et3N(0.153mL，1.1mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后在减压下浓缩。将残留物在EtOAc和1M HCl之间分配。将有机层用饱和NaHCO3和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝3:1)，得到氨基甲酸酯16(320mg，88％)。C31H51N5O13：白色固体，熔点135-137℃；TLC(EtOAc/己烷＝4:1)Rf＝0.38；[α]20 D-24.2(c＝1.0,CHCl3)；IRν最大(纯净的)3315,2981,1731,1643,1613,1250,1144,1057cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.28(1H,s),8.34(1H,d,J＝8.8Hz),6.55(1H,d,J＝9.6Hz),5.79(1H,d,J＝1.2Hz),5.22-5.14(2H,m),5.04-5.00(1H,m),4.29-4.20(2H,m),4.17-4.06(4H,m),4.04-3.89(2H,m),3.60(2H,s),3.39-3.30(1H,m),3.10-3.03(1H,m),1.82(3H,s),1.72-1.60(1H,m),1.59-1.50(1H,m),1.39(9H,s),1.37(9H,s),1.27(3H,s),1.25-1.20(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.1,162.9,161.4,157.0,156.0,152.7,145.4,109.5,108.7,83.7,79.6,77.7,74.9,69.7,65.8,61.5,59.5,49.2,47.9,38.3,31.7,28.2(3x),28.0(3x),26.4,25.3,23.0,14.1；ESI-HRMS，对C31H52N5O13的计算值：702.3562，实测值：m/z 702.3560[M+H]+。
5-乙酰基氨基-6-[2,3-二羟基-l-(3-羟基丙基氨基甲酰氧基)丙基]-4-胍基-5, 6-二氢-4H-吡喃-2-甲酸(6)
向氨基甲酸酯16(100mg，0.14mmol)在THF(2mL)中的溶液加入1M KOH(2mL)。将溶液在室温搅拌1.5h，用Dowex 50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温下搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-7-HP偶联物6(51mg，84％)。C16H27N5O9；无色固体，熔点265-267℃；[α]20 D-218.7(c＝1.0，H2O)；IRν最大(纯净的)3410,1674,1544,1263,1140cm-1；1H NMR(400MHz,D2O)δ6.05(1H,d,J＝2.4Hz),4.99(1H,dd,J＝8.8,2.0Hz),4.60(1H,dd,J＝10.0,2.0Hz),4.48(1H,dd,J＝10.0,2.0Hz),4.18(1H,dd,J＝9.6,9.2Hz),4.08-4.03(1H,m),3.72-3.63(3H,m),3.56-3.51(1H,m),3.17(1H,dd,J＝6.8,6.8Hz),2.00(3H,s),1.78-1.71(3H,m)；13C NMR(100MHz,D2O)δ173.9,164.8,157.0,156.6,145.0,109.1,75.8,69.5,68.8,62.3,59.1,51.1,47.1,37.5,31.2,21.8；ESI-HRMS(负电荷模式)，为C16H26N5O9的计算值：432.1731，实测值：m/z 432.1727[M-H]-。
实施例15：ZA-7-CA偶联物1的合成(图5)
3-(3,4-双-烯丙氧基苯基)丙烯酸烯丙基酯(17)
向咖啡酸(1000mg，5.56mmol)和烯丙基溴(2mL，22.2mmol)在无水丙酮(15mL)中的溶液加入细粉状K2CO3(3069mg，22.2mmol)。将混合物在60℃搅拌4h，然后在减压下浓缩。将残留物在EtOAc与1M HCl之间分配。将有机层用饱和NaHCO3和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:9)，得到全烯丙基化产物17(1320mg，79％)。C18H20O4；TLC(EtOAc/己烷＝1:9)Rf＝0.80；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(1H,d,J＝16.0Hz),7.05(2H,m),6.84(1H,d,J＝8.8Hz),6.27(1H,d,J＝16.0Hz),6.12-5.90(3H,m),5.42-5.25(6H,m),4.65(2H,dd,J＝5.6,1.0Hz),4.60(4H,dd,J＝3.6,1.8Hz)。
3-(3,4-双-烯丙氧基苯基)丙烯酸(18)
向咖啡酸的全烯丙基化衍生物17(845mg，2.82mmol)在MeOH(20mL)中的溶液加入1M NaOH(2mL)。将混合物在60℃搅拌4h，然后在减压下浓缩。加入H2O(20mL)并用乙醚洗涤，用1M HCl酸化，然后用CH2Cl2萃取。将有机层在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝3:7)，得到双-烯丙基醚18(695mg，95％)。C15H16O4；黄色固体；TLC(EtOAc/己烷＝3:7)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(1H,d,J＝16.0Hz),7.08(2H,m),6.86(1H,d,J＝8.0Hz),6.26(1H,d,J＝16.0Hz),6.09-6.03(2H,m),5.44-5.27(4H,m),4.63(4H,dd,J＝3.2,1.6Hz)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.5,151.0,148.5,146.9,133.0,132.8,127.2,123.1,118.0,117.9,114.9,113.3,112.8,69.9,69.7；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C15H15O4的计算值：259.0970，实测值：m/z259.0957[M-H]-。
化合物19
向ZA-7-HP衍生物16(210mg，0.30mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液加入咖啡酸的烯丙基醚18(86mg，0.33mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI，63mg，0.33mmol)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP，37mg，0.33mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将得到的溶液用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩，并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝2:3至EtOAc/己烷＝3:2)，得到酯19(240mg，85％)。C46H65N5O16；无色固体，熔点98-100℃；TLC(EtOAc/己烷＝3:2)Rf＝0.30；[α]24 D-20.3(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3316,2980,1728,1638,1609,1510,1306,1253,1142cm-1；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.36(1H,s),8.37(1H,d,J＝8.4Hz),7.54(1H,d,J＝16.0Hz),7.03(2H,m),6.82(1H,d,J＝8.8Hz),6.21(1H,d,J＝16.0Hz),6.16(1H,d,J＝9.6Hz),6.08-5.96(2H,m),5.83(1H,d,J＝2.0Hz),5.40-5.38(1H,m),5.36-5.34(1H,m),5.26-5.16(4H,m),5.10-5.06(1H,m),4.59(4H,dd,J＝2.8,2.4Hz),4.36-4.28(2H,m),4.24-4.16(3H,m),4.09-3.95(4H,m),3.28-3.19(2H,m),1.84(5H,s),1.42(9H,s),1.41(9H,s),1.34(3H,s),1.30-1.18(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.8,167.3,163.0,161.4,157.0,155.6,152.7,150.6,148.5,145.4,144.8,133.0,132.8,127.5,122.7,117.9,117.8,115.6,113.4,112.6,109.5,108.7,83.6,79.6,77.5,74.9,69.9,69.7,65.9,61.6,61.5,48.7,48.4,37.9,36.6,29.6,29.0,28.2(3x),28.0(3x),25.3,23.0,14.1；ESI-HRMS，对C46H66N5O16的计算值：944.4505，实测值：m/z 944.4518[M+H]+。
ZA-7-CA偶联物1
向化合物19(215mg，0.23mmol)在THF(4mL)中的溶液加入1M KOH(4mL)。将溶液在室温搅拌1.5h，用Dowex 50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在无水THF(5mL)中，然后加入Pd(PPh3)4(26mg，0.02mmol)和吗啉(0.4mL，4.5mmol)。将混合物在室温搅拌4h。将得到的溶液用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(MeOH/CH2Cl2＝1:9至MeOH/CH2Cl2＝1:4)。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-7-CA偶联物1(75mg，56％)。C25H33N5O12；黄色固体，熔点217-219℃；[α]24 D+144.9(c＝0.33，H2O)；IRν最大(纯净的)3403,1702,1628,1404,1262cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.55(1H,d,J＝16.0Hz),7.04(1H,d,J＝1.6Hz),6.94(1H,dd,J＝8.4,2.0Hz),6.78(1H,d,J＝8.4Hz),6.26(1H,d,J＝16.0Hz),5.84(1H,d,J＝2.4Hz),5.00(1H,dd,J＝8.8,2.0Hz),4.57(1H,dd,J＝10.0,2.0Hz),4.43(1H,dd,J＝6.8,1.6Hz),4.25-4.16(2H,m),4.04-3.99(1H,m),3.89-3.86(1H,m),3.66(1H,dd,J＝12.0,3.2Hz),3.53-3.47(1H,m),3.23-3.19(2H,m),1.95(3H,s),1.92-1.86(2H,m)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ172.3,168.0,163.7,157.5,156.6,148.2,145.8,145.5,145.4,126.3,121.6,115.1,113.7(2x),107.1,75.9,69.5,69.1,62.9,61.6,51.1,48.5,37.3,28.6,21.4；ESI-HRMS(负电荷模式)，为C25H32N5O12的计算值：594.2047，实测值：m/z 594.2051[M-H]-。
实施例16：ZA-7-MCA偶联物2的合成(图6)
化合物20
向ZA-7-HP衍生物16(90mg，0.13mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液加入3,4-(亚甲基二氧基)肉桂酸(MCA，27mg，0.14mmol)、EDCI(27mg，0.14mmol)和4-二甲基氨基吡啶(17mg，0.14mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h，然后用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水萃取。将有机相在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝3:7至EtOAc/己烷＝1:1)，得到酯20(98mg，86％)。C41H57N5O16；无色固体，熔点112-114℃；TLC(EtOAc/己烷＝3:2)Rf＝0.18；[α]25 D-19.2(c＝1.0，CH3Cl)；IRν最大(纯净的)3316,2980,2931,1729,1639,1609,1250,1152cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.34(1H,s),8.34(1H,d,J＝8.4Hz),7.51(1H,d,J＝16.0Hz),6.97(1H,s),6.94(1H,d,J＝8.0Hz),6.73(1H,d,J＝8.0Hz),6.30(1H,d,J＝9.2Hz),6.19(1H,d,J＝16.0Hz),5.94(2H,s),5.82(1H,d,J＝2.4Hz),5.24-5.11(3H,m),4.33-4.72(2H,m),4.22-4.16(4H,m),4.14-4.04(2H,m),4.02-3.95(1H,m),3.22-3.19(2H,m),1.84(5H,s),1.41(9H,s),1.40(9H,s),1.31(3H,s),1.28-1.23(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.6,167.1,162.9,161.3,156.8,155.5,152.4,149.5,148.2,145.3,144.5,128.6,124.4,115.7,109.6,108.6,108.4,106.4,101.4,83.4,79.4,77.5,74.9,69.6,65.7,61.6,61.4,48.7,48.1,37.8,28.9,28.1(3x),27.9(3x),26.3,25.2,22.9,14.0；ESI-HRMS，对C41H58N5O16的计算值：876.3879，实测值：m/z 876.3876[M+H]+。
ZA-7-MCA偶联物2
向化合物20(98mg，0.11mmol)在THF(2mL)中的溶液加入1M KOH(2mL)。将溶液在室温搅拌1.5h，用Dowex 50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-7-MCA偶联物2(48mg，71％)。C26H33N5O12；白色固体，熔点218-220℃；[α]20 D+11.4(c＝0.33，H2O)；IRν最大(纯净的)3369,2920,1686,1629,1449,1252,1038cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.60(1H,d,J＝16.0Hz),7.14(1H,s),7.10(1H,d,J＝8.0Hz),6.87(1H,d,J＝8.0Hz),6.35(1H,d,J＝16.0Hz),6.01(2H,s),5.59(1H,d,J＝2.0Hz),4.93(1H,dd,J＝7.6,1.6Hz),4.48(1H,dd,J＝10.4,1.6Hz),4.36(1H,dd,J＝9.2,2.0Hz),4.26-4.14(3H,m),4.08-4.03(1H,m),3.63(1H,dd,J＝12.0,2.8Hz),3.51-3.46(1H,m),3.21(2H,t,J＝6.4Hz),1.95(3H,s),1.90(2H,t,J＝6.8Hz)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ174.0,169.7,158.7,158.1,151.4,151.3,149.8,146.6,146.4,130.0,126.1,126.0,116.5,109.7,107.5,103.2,103.1,76.9,71.2,70.2,64.4,63.5,53.4,38.8,29.8,23.1；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C26H32N5O12的计算值：606.2047，实测值：m/z 606.2044[M-H]-。
实施例17：ZA-7-ME偶联物3的合成(图7)
2-烯丙氧基-5-叔丁氧基羰基氨基-苯甲酸烯丙基酯(21)
向美沙拉嗪(500mg，3.27mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌的溶液加入Et3N(0.9mL，6.54mmol)，然后加入Boc2O(784mg，3.60mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后通过加入NaHCO3进行淬灭。将混合物倾倒在水中并用EtOAc萃取(3x)。将合并的有机层在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩，给出N-Boc保护的衍生物5-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基苯甲酸(803mg，97％)。将粗产物不需进一步纯化用于下一反应中。浅黄色固体；C12H15NO5；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.92(1H,d,J＝2.0Hz),7.44(1H,d,J＝8.8Hz),6.84(1H,d,J＝8.8Hz),1.51(9H,s)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ172.6,158.3,155.0,131.3,128.0,121.2,117.5,112.8,80.2,28.0(3x)；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C12H14NO5的计算值：252.0872，实测值：m/z 252.0862[M-H]-。
向上面制备的N-Boc保护的衍生物(605mg，2.39mmol)在无水丙酮(10mL)中的溶液加入烯丙基溴(0.6mL，7.17mmol)和细粉状K2CO3(990mg，7.17mmol)。将混合物在60℃搅拌4h，然后在减压下浓缩。将残留物在EtOAc和1M HCl之间分配。将有机层用饱和NaHCO3和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝2:8)，产生烯丙基化产物21(620mg，78％)。C18H23NO5；白色固体，熔点77-78℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.72(1H,d,J＝2.8Hz),7.50(1H,br),7.18(1H,s),6.76(1H,d,J＝9.2Hz),5.94-5.85(2H,m),5.37-5.27(2H,m),5.18-5.11(2H,m),4.68(2H,m),4.34(2H,m),1.38(9H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ165.4,153.6,153.0,132.6,131.9,131.5,124.1,122.1,120.2,117.8,117.0,114.3,79.8,69.7,65.2,28.0(3x)；ESI-HRMS(负电荷模式)，为C18H22NO5的计算值：332.1498，实测值：m/z 332.1499[M-H]-。
2-烯丙氧基-5-叔丁氧基羰基氨基-苯甲酸(22)
向化合物21(500mg，1.50mmol)在MeOH(20mL)中的溶液加入1M NaOH(2mL)。将混合物在60℃搅拌4h，然后在减压下浓缩。加入H2O(20mL)并用乙醚洗涤，用1M HCl酸化，然后用CH2Cl2萃取。将有机层在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝2:3)，得到烯丙基醚22(405mg，92％)。C15H19NO5；黄色固体；[α]22 D+2.1(c＝0.5，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3347,1694,1589,1523,1416,1260,1239,1163cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71(1H,d,J＝2.8Hz),7.50(1H,s),7.18(1H,s),6.86(1H,d,J＝8.8Hz),6.05-5.96(2H,m),6.76(1H,d,J＝9.2Hz),5.43(1H,dt,J＝17.2,1.6Hz),5.23(1H,dt,J＝10.4,1.6Hz),4.54(2H,m),1.47(9H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ165.9,152.8,133.0,131.1,125.5,123.2,119.6,117.8,113.7,80.2,77.2,70.7,28.0(3x)；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C15H18NO5的计算值：292.1185，实测值：m/z 292.1179[M-H]-。
化合物23
向ZA-7-HP衍生物16(70mg，0.10mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液加入美沙拉明衍生物22(33mg，0.11mmol)、EDCI(21mg，0.11mmol)和4-二甲基氨基吡啶(13mg，0.11mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将得到的溶液用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝3:7至EtOAc/己烷＝1:1)，得到酯23(75mg，77％)。C46H68N6O17；浅黄色固体，熔点114-116℃；TLC(EtOAc/己烷＝7:3)Rf＝0.33；[α]20 D-11.5(c＝1.0，CH3Cl)；IRν最大(纯净的)3319,2979,1728,1610,1248,1154cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.32(1H,s),8.29(1H,d,J＝8.8Hz),7.70(1H,br),7.57(1H,d,J＝2.4Hz),7.00(1H,br),6.87(1H,d,J＝9.2Hz),6.15(1H,d,J＝9.2Hz),6.07-5.97(1H,m),5.79(1H,d,J＝2.0Hz),5.42(1H,s),5.38(1H,s),5.26-5.16(2H,m),4.56(1H,d,J＝4.8Hz),4.42-4.19(7H,m),4.09-3.89(4H,m),3.35-3.24(2H,m),1.98-1.92(2H,m),1.85(3H,s),1.46(9H,s),1.43(9H,s),1.42(9H,s),1.32(3H,s),1.31-1.25(6H,m)；13C NMR(100MHz,CD Cl3)δ170.8,166.2,163.1,161.5,156.9,155.6,153.8,153.1,152.8,145.4,132.9,131.8,124.4,122.3,120.4,117.9,114.6,109.6,108.8,83.7,80.3,79.6,74.9,70.1,69.6,65.8,63.1,61.5,48.7,48.4,38.7,29.7,28.5,28.3(3x),28.2(3x),28.0(3x),26.5,25.4,23.0,14.1；ESI-HRMS，对C46H69N6O17的计算值：977.4719，实测值：m/z 977.4716[M+H]+.
ZA-7-ME偶联物3
向化合物23(70mg，0.07mmol)在THF(4mL)中的溶液加入1M KOH(4mL)。将溶液在室温搅拌1.5h，用50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在无水THF(5mL)，然后加入Pd(PPh3)4(12mg，0.01mmol)和吗啉(0.1mL，1.4mmol)。将混合物在室温搅拌4h。将得到的溶液用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(MeOH/CH2Cl2＝1:20至MeOH/CH2Cl2＝1:9)。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温下搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-7-ME偶联物3(28mg，69％)。C23H32N6O11；橙色固体，熔点210-212℃；[α]22 D-53.0(c＝0.5，MeOH)；IRν最大(纯净的)3351,1673,1622,1493,1403,1228cm-1；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.38(1H,d,J＝2.8Hz),7.10(1H,dd,J＝8.8,2.8Hz),6.88(1H,d,J＝8.8Hz),5.67(1H,d,J＝2.0Hz),4.93(1H,dd,J＝9.2,1.6Hz),4.50(1H,dd,J＝10.4,1.6Hz),4.47-4.38(3H,m),4.09-4.01(2H,m),3.64(1H,dd,J＝12.0,2.8Hz),3.48-3.43(1H,m),3.32-3.28(2H,m),2.00-1.96(5H,m)；13C NMR(100MHz,D2O)δ173.6,169.8,168.6,157.0,156.6,153.6,149.4,136.9,125.8,117.8,117.3,112.9,104.5,75.2,69.8,68.5,63.6,62.5,51.9,47.3,37.8,27.8,21.9；ESI-HRMS，对C23H33N6O11的计算值：569.2207，实测值：m/z 569.2215[M+H]+.
实施例18：ZA-7-HNAP偶联物4的合成(图8)
1-羟基-2-萘甲酸的烯丙基醚烯丙基酯(24)
向1-羟基-2-萘甲酸(HNAP，1.04g，5.51mmol)在无水丙酮(12mL)中的溶液加入烯丙基溴(1.4mL，16.53mmol)和细粉状K2CO3(2.28g，16.53mmol)。将混合物在60℃搅拌4h，然后在减压下浓缩。将残留物在EtOAc和1M HCl之间分配。将有机层用饱和NaHCO3和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤，在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:9)，得到双-烯丙基化产物24(1180mg，80％)。C17H16O3；TLC(EtOAc/己烷＝1:9)Rf＝0.65；IRν最大(纯净的)1722,1334,1274,1233,1131cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27-8.24(1H,m),7.87(1H,d,J＝8.4Hz),7.77-7.27(1H,m),7.53(1H,d,J＝8.4Hz),7.51-7.47(2H,m),6.24-6.17(1H,m),6.09-6.02(1H,m),5.50-5.40(2H,m),5.30-5.25(2H,m),4.87-4.84(2H,m),4.61-4.62(2H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ165.4,156.7,136.4,133.5,131.9,128.5,128.0,127.5,126.3,126.2,123.4,123.3,119.3,118.2,117.4,76.3,65.4；ESI-HRMS，为C17H17O3的计算值：269.1178，实测值：m/z 269.1184[M+H]+。
1-羟基-2-萘甲酸的烯丙基醚(25)
向烯丙基酯24(350mg，1.31mmol)在MeOH(10mL)中的溶液加入1M NaOH(1mL)。将混合物在60℃加热4h，然后在减压下浓缩。加入H2O(20mL)并用乙醚洗涤，用1M HCl酸化，然后用CH2Cl2萃取。将有机层在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝3:7)，得到HNAP的烯丙基醚25(289mg，97％)。C14H12O3；黄色固体，熔点99-101℃；TLC(EtOAc/己烷＝3:7)Rf＝0.18；IRν最大(纯净的)3455,1738,1365,1232,1228cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(1H,d,J＝9.6Hz),8.03(1H,d,J＝8.4Hz),7.83(1H,dd,J＝8.4,1.2Hz),7.63(1H,d,J＝8.8Hz),7.60-7.52(2H,m),6.28-6.17(1H,m),5.50(1H,dd,J＝17.2,1.2Hz),5.37(1H,dd,J＝10.4,0.8Hz),4.71(1H,d,J＝6.0Hz)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ169.2,157.1,137.2,132.5,128.8,128.0,127.8,126.7,126.6,124.3,119.2,118.2,77.4；ESI-HRMS(负电荷模式)，为C14H11O3的计算值：227.0708，实测值：m/z 227.0715[M-H]-。
化合物26
向ZA-7-HP衍生物16(96mg，0.14mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液加入美沙拉明衍生物25(34mg，0.15mmol)、EDCI(29mg，0.15mmol)和4-二甲基氨基吡啶(18mg，0.15mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将得到的溶液用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水相继萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:4至EtOAc/己烷＝1:1)，得到化合物26(101mg，82％)。C45H61N5O15；白色固体，熔点95-97℃；TLC(EtOAc/己烷＝1：1)Rf＝0.62；[α]20D-17.0(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3316,2979,2930,1724,1641,1610,1369,1249,1141cm-1；ESI-HRMS，对C45H62N5O15的计算值：912.4242，实测值：m/z912.4249[M+H]+。
ZA-7-HNAP偶联物4
向化合物26(84mg，0.09mmol)在THF(3mL)中的溶液加入1M KOH(3mL)。将溶液在室温搅拌1.5h，用Dowex 50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在无水THF(5mL)中，然后加入Pd(PPh3)4(12mg，0.01mmol)和吗啉(0.24mL，2.3mmol)。将混合物在室温搅拌4h。将得到的溶液用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(MeOH/CH2Cl2＝1:9至MeOH/CH2Cl2＝1:4)。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-7-HNAP偶联物4(30mg，55％)。C27H33N5O11；无色固体，熔点230-232℃；[α]24 D-5.0(c＝0.5，CH3OH)；IRν最大(纯净的)3402,1740,1655,1596,1406,1369,1256,1163cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.34(1H,d,J＝8.4Hz),7.80(2H,d,J＝8.8Hz),7.61(1H,m),7.51(1H,t,J＝1.6Hz),7.31(1H,d,J＝8.8Hz),5.58(1H,d,J＝2.0Hz),4.97(1H,m),4.49-4.44(3H,m),4.34(1H,d,J＝8.8Hz),4.23-4.18(1H,m),4.07-4.02(1H,m),3.64(1H,dd,J＝12.0,2.4Hz),3.51-3.46(1H,m),3.30-3.27(2H,m),2.04-1.97(2H,m),1.93(3H,s)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ172.1,170.9,160.4,157.5,156.8,137.3,129.1,127.3,125.5,124.5,124.0,123.1,118.4,105.5,103.3,75.7,69.8,68.8,63.1,62.8,52.0,47.8,37.3,29.3,28.5,21.5；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C27H32N5O11的计算值：602.2098，实测值：m/z602.2087[M-H]-。
实施例19：ZA-7-DHBA偶联物5的合成(图9)
3,4-(双-烯丙氧基)苯甲酸烯丙基酯(27)
向3,4-二羟基苯甲酸(DHBA，676mg，4.39mmol)在无水丙酮(10mL)中的溶液加入烯丙基溴(1.5mL，17.56mmol)和细粉状K2CO3(2426mg，17.56mmol)。将混合物在60℃搅拌4h，然后在减压下浓缩。将残留物在EtOAc和1M HCl之间分配。将有机层用饱和NaHCO3和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:9)，得到全烯丙基化产物27(852mg，71％)。C16H18O4；黄色油状物；TLC(EtOAc/己烷＝1:9)Rf＝0.52；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(1H,dd,J＝8.4,1.6Hz),7.55(1H,d,J＝1.6Hz),6.84(1H,d,J＝8.4Hz),6.01-5.92(3H,m),5.43-5.33(3H,m),5.27-5.21(3H,m),4.75(2H,d,J＝5.6Hz),4.62-4.60(4H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ165.2,152.5,147.9,133.0,132.7,132.4,123.8,122.7,118.0(2x),117.9,114.6,112.4,69.8,69.6,65.3；ESI-HRMS，为C16H19O4的计算值：275.1283，实测值：m/z 275.1293[M+H]+。
3,4-(双-烯丙氧基)苯甲酸(28)
向烯丙基酯27(300mg，1.09mmol)在MeOH(5mL)中的溶液加入1M NaOH(0.5mL)。将混合物在60℃搅拌4h，然后在减压下浓缩。加入H2O(15mL)并用乙醚洗涤，用1M HCl酸化，然后用CH2Cl2萃取。将有机层在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝3:7)，得到酸28(235mg，92％)。C13H14O4；无色固体；TLC(EtOAc/己烷＝3:7)Rf＝0.35；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71(1H,dd,J＝8.8,1.0Hz),7.59(1H,d,J＝2.0Hz),6.89(1H,d,J＝8.8Hz),6.12-6.01(2H,m),5.45-5.39(2H,m),5.31-5.27(2H,m),4.66-4.63(4H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)5172.0,153.1,147.8,132.8,132.5,124.6,121.8,118.1,118.0,114.8,112.3,69.8,69.6；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C13H13O4的计算值：233.0814，实测值：m/z 233.0812[M-H]-。
化合物29
向ZA-7-HP衍生物16(100mg，0.14mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液加入3,4-(双-烯丙氧基)苯甲酸28(37mg，0.16mmol)、EDCI(30mg，0.16mmol)和4-二甲基氨基吡啶(20mg，0.16mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将得到的溶液用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝3:7至EtOAc/己烷＝3:2)，得到化合物29(90mg，70％)。C44H63N5O16；白色固体，熔点102-104℃；[α]20 D-26.5(c＝0.5，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3315,2980,2931,1729,1641,1608,1267,1141cm-1；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.36(1H,s),8.40(1H,d,J＝8.8Hz),7.59(1H,d,J＝8.4Hz),7.52(1H,s),6.85(1H,d,J＝8.8Hz),6.11(1H,d,J＝5.2Hz),6.08-5.98(2H,m),5.84(1H,d,J＝2.0Hz),5.40(2H,dd,J＝17.2,4.8Hz),5.27-5.16(5H,m),5.10-5.07(1H,m),4.61(1H,t,J＝5.6Hz),4.33-4.31(5H,m),4.23-3.97(6H,m),3.28-3.25(2H,m),1.95-1.92(2H,m),1.86(3H,s),1.44(9H,s),1.42(9H,s),1.34(3H,s),1.30-1.26(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.7,166.3,163.0,161.4,157.0,155.6,152.7,152.5,147.9,145.5,133.0,132.7,123.7,122.7,118.0,117.9,114.6,112.5,109.5,108.7,83.6,79.5,77.6,74.9,69.8,69.6,65.9,62.0,61.5,48.9,48.4,38.0,29.6,29.1,28.2(3x),28.0(3x),26.4,25.3,23.0,14.1；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C44H62N5O16的计算值：916.4192，实测值：m/z916.4194[M-H]-。
ZA-7-DHBA偶联物5
向化合物29(80mg，0.09mmol)在THF(3mL)中的溶液加入1M KOH(3mL)。将溶液在室温搅拌1.5h，用Dowex 50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在无水THF(5mL)中，然后加入Pd(PPh3)4(23mg，0.02mmol)和吗啉(0.4mL，4.5mmol)。将混合物在室温搅拌4h。将得到的溶液用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(MeOH/CH2Cl2＝1:9至MeOH/CH2Cl2＝1:4)。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-7-DHBA偶联物5(26mg，52％)。C23H31N5O12；黄色固体，熔点223-225℃；[α]25 D-6.5(c＝0.33，H2O)；IRν最大(纯净的)3376,1674,1618,1405,1296,1234,1119cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.44(1H,s),7.42(1H,d,J＝8.0Hz),6.80(1H,dd,J＝8.0Hz),5.58(1H,d,J＝2.0Hz),4.95(1H,m),4.46(1H,dd,J＝10.4,2.0Hz),4.36-4.29(3H,m),4.20-4.15(1H,m),4.06-4.01(1H,m),3.62(1H,dd,J＝12.0,2.8Hz),3.49-3.45(1H,m),3.30-3.22(2H,m),1.94(3H,s),1.93-1.91(2H,m)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ173.7,169.3,168.5,159.0,158.3,151.8,151.7,146.3,123.8,122.9,117.6,116.1,104.6,77.1,71.3,70.4,64.6,63.5,39.0,30.2,23.0；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C23H30N5O12的计算值：568.1891，实测值：m/z 568.1893[M-H]-。
实施例20：ZA-7-CA-酰胺偶联物7的合成(图10)
3-氨基丙基氨基甲酸叔丁基酯(30)
在室温下，在3h内，向1,3-二氨基丙烷(2.5mL，11.45mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液加入Boc2O(500mg，2.29mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液。在搅拌16h后，在减压下除去溶剂。向残留物加入水(20mL)，并通过过滤收集不溶性副产物。将滤液用CH2Cl2萃取。将有机萃取物在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩，得到氨基甲酸酯30(358mg，90％)。C8H18N2O2；无色油状物；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.32(1H,br),2.95(2H,m),2.51(2H,t,J＝6.4Hz),1.48(1H,br),1.38(2H,t,J＝6.4Hz),1.20(9H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ155.9,78.2,39.0,37.7,32.9,28.0；ESI-HRMS，对C8H19N2O2的计算值：175.1447，实测值：m/z175.1445[M+H]+。
3-[(3,4-双-烯丙氧基苯基)丙烯酰基氨基]丙基氨基甲酸叔丁基酯(31)
向咖啡酸的烯丙基醚18(134mg，0.51mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液加入胺30(98mg，0.56mmol)、EDCI(108mg，0.56mmol)和4-二甲基氨基吡啶(68mg，0.56mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将得到的溶液用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水相继萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩，并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:3至EtOAc/己烷＝2:3)，得到偶联产物31(154mg，73％)。C23H32N2O5；无色固体，熔点115-117℃；[α]24 D-3.7(c＝0.25，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3306,2925,1694,1658,1510,1257cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46(1H,d,J＝15.6Hz),6.97(2H,m),6.82(1H,br),6.76(1H,d,J＝8.0Hz),6.28(1H,d,J＝15.6Hz),6.03-5.95(2H,m),5.35(2H,d,J＝17.2Hz),5.23-5.20(3H,m),4.53(4H,s),3.35(2H,t,J＝5.6Hz),3.12(2H,t,J＝5.2Hz),1.61(2H,s),1.38(9H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ166.5,156.6,149.8,148.3,140.3,133.0,132.8,128.0,121.8,118.8,117.7,117.6,113.4,112.7,79.1,69.8,69.6,36.9,35.9,30.1,28.2(3x)；ESI-HRMS，对C23H33N2O5的计算值：417.2389，实测值：m/z 417.2388[M+H]+。
化合物33
向上面制备的N-Boc化合物31(150mg，0.36mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液加入TFA(2mL)。在室温搅拌1h后，将混合物在减压下蒸发，给出相应的胺32。将胺粗产物溶解在CH3CN(7mL)中，并加入碳酸酯15(260mL，0.34mmol)和Et3N(0.075mL，0.50mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后在减压下浓缩。将残留物在CH2Cl2与饱和NaHCO3之间分配。将有机层在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝4:1)，得到氨基甲酸酯33(224mg，70％)。Ο46Η66Ν6Ο15；TLC(EtOAc/己烷＝4:1)Rf＝0.15；白色固体，熔点113-115℃；[α]24 D+13.5(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3308,2979,2930,1728,1641,1611,1511,1253,1140cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.36(1H,s),8.45(1H,d,J＝8.4Hz),7.44(1H,d,J＝15.6Hz),7.32(1H,t,J＝2.0Hz),6.98(2H,d,J＝6.8Hz),6.79(1H,d,J＝8.8Hz),6.50(1H,d,J＝9.2Hz),6.31(1H,d,J＝15.6Hz),6.05-5.95(2H,m),5.84(1H,d,J＝1.2Hz),5.34(1H,d,J＝17.2Hz),5.26-5.18(3H,m),5.12-5.05(2H,m),4.56-4.52(4H,m),4.30-4.25(2H,m),4.22-4.12(3H,m),4.08-4.01(3H,m),3.98-3.94(1H,m),3.50-3.45(1H,m),3.38-3.32(3H,m),3.05-3.00(1H,m),1.97(3H,s),1.41(9H,s),1.33(9H,s),1.30-1.18(9H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.0,166.5,163.0,161.2,156.9,155.6,152.6,149.7,148.3,145.1,139.9,133.0,133.0,128.2,121.4,119.2,117.6,113.5,113.1,109.4,108.6,83.5,79.4,75.0,69.6,69.5,65.6,61.4,60.2,49.2,47.8,38.1,36.1,29.5,28.5,28.1(3x),27.8(3x),26.3,25.2,23.0,14.0；ESI-HRMS，对C46H67N6O15的计算值：943.4664，实测值：m/z 943.4662[M+H]+。
ZA-7-CA-酰胺偶联物7
向化合物33(100mg，0.11mmol)在THF(4mL)的溶液加入1M KOH(2mL)。将溶液在室温搅拌1.5h，用Dowex 50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在无水THF(5mL)中，然后加入Pd(PPh3)4(23mg，0.02mmol)和吗啉(0.4mL，4.5mmol)。将混合物在室温搅拌4h。将得到的溶液用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(MeOH/CH2Cl2＝1:9至MeOH/CH2Cl2＝1:4)。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-7-CA-酰胺偶联物7(35mg，56％)C25H34N6O11；黄色固体，熔点288-290℃；[α]19 D+220.1(c＝0.50，H2O)；IRν最大(纯净的)3422,1702,1655,1545,1259,1202,1131,1064cm-1；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.36(1H,d,J＝15.6Hz),7.13(1H,s),7.06(1H,d,J＝1.6Hz),6.94(1H,d,J＝8.0Hz),6.40(1H,dd,J＝16.0Hz),5.74(1H,d,J＝2.0Hz),4.99(1H,dd,J＝9.2,2.0Hz),4.46(1H,dd,J＝8.4,3.2Hz),4.45(1H,d,J＝7.2Hz),4.18-4.11(2H,m),3.72(1H,dd,J＝12.0,2.0Hz),3.57-3.52(1H,m),3.35(2H,t,J＝6.0Hz),3.18(2H,t,J＝6.4Hz),2.02(3H,s),1.78(2H,m)；13C NMR(100MHz,D2O)δ173.8,169.0,168.5,157.0,156.7,149.2,146.3,144.2,140.7,127.4,121.9,117.8,116.2,114.8,104.8,75.3,69.8,68.6,62.5,51.8,47.4,38.2,37.0,28.4,21.9；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C25H33N6O11的计算值：593.2207，实测值：m/z 593.2222[M-H]-。
实施例21：ZA-7-HNAP-酰胺偶联物8的合成(图11)
N-3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基1-羟基萘-2-甲酰胺(34)
向HNAP(300mg，1.60mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液加入胺30(306mg，1.76mmol)、EDCI(334mg，1.76mmol)和4-二甲基氨基吡啶(215mg，1.76mmol)。将混合物在室温搅拌12h。将得到的溶液用1M HCl洗涤，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(从己烷到EtOAc/己烷＝1:4)，得到偶联产物34(378mg，69％)。C19H24N2O4；TLC(EtOAc/己烷＝3:7)Rf＝0.31；红色泡沫；IRν最大(纯净的)3356,2976,1692,1619,1609,1538,1392,1365,1282cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ14.16(1H,s),8.43(1H,d,J＝8.4Hz),7.94(1H,s),7.73(1H,d,J＝8.0Hz),7.53(3H,m),7.25(1H,d,J＝8.8Hz),5.22(1H,s),3.51(2H,m),3.23(2H,t,J＝6.0Hz),1.71(2H,t,J＝5.2Hz),1.49(9H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.7,160.2,157.1,136.0,128.5,127.1,125.4,123.5,121.3,118.0,106.8,79.5,77.0,36.9,35.5,29.8,28.2(3x)；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C19H23N2O4的计算值：343.1658，实测值：m/z 343.1648[M-H]-。
化合物36
向N-Boc化合物34(189mg，0.55mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液加入TFA(2mL)。在室温搅拌1h后，将混合物在减压下蒸发，给出相应的胺35。将胺粗产物溶解在CH3CN(7mL)中，并加入碳酸酯15(236mL，0.31mmol)和Et3N(0.05mL，0.34mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后在减压下浓缩。将残留物在CH2Cl2与饱和NaHCO3之间分配。将有机层在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:4至EtOAc/己烷＝2:3)，得到氨基甲酸酯36(165mg，61％)。C42H58N6O14；TLC(EtOAc/己烷＝1:1)Rf＝0.55；白色固体，熔点157-160℃；[α]24 D+14.6(c＝0.5，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3413,1641,1634,1252,1142cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ14.08(1H,s),11.36(1H,s),8.56(1H,d,J＝8.4Hz),8.46(1H,s),8.35(1H,d,J＝8.0Hz),7.66(1H,t,J＝8.0Hz),7.60(1H,t,J＝8.8Hz),7.50-7.41(2H,m),7.16(1H,d,J＝8.8Hz),6.62(1H,d,J＝8.4Hz),5.88(1H,d,J＝2.0Hz),5.30(1H,d,J＝5.2Hz),5.13-5.08(2H,m),4.35-4.15(6H,m),4.11-3.95(3H,m),3.71-3.66(1H,m),3.41(2H,br),3.04(1H,br),1.92(3H,s),1.46(9H,s),1.43(9H,s),1.34-1.25(9H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.4,171.0,162.5,161.2,160.3,156.9,155.6,152.6,145.3,136.1,128.3,127.1,125.5,125.3,123.6,122.0,117.7,109.2,108.8,107.2,83.8,79.9,77.3,74.9,69.6,65.7,61.5,49.4,47.5,38.0,35.9,28.3,28.1(3x),27.6(3x),26.3,25.2,23.0,14.0；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C42H57N6O14的计算值：869.3933，实测值：m/z 869.3932[M-H]-。
ZA-7-HNAP-酰胺偶联物8
向化合物36(95mg，0.11mmol)在THF(3mL)中的溶液加入1M KOH(1mL)。将溶液在室温搅拌1.5h，用Dowex 50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)中，并用TFA(2mL)处理。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-7-HNAP-酰胺偶联物8(41mg，62％)。C27H34N6O10；浅黄色固体，熔点230-232℃；[α]24 D+17.1(c＝1.0，CH3OH)；IRν最大(纯净的)3423,1637,1405,1261,1145cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.33(1H,d,J＝8.0Hz),7.78(1H,d,J＝8.0Hz),7.72(1H,d,J＝8.8Hz),7.57(1H,t,J＝9.2Hz),7.49(1H,t,J＝8.0Hz),7.30(1H,d,J＝8.8Hz),5.55(1H,d,J＝2.4Hz),4.93(1H,dd,J＝9.2,6.4Hz),4.46(1H,dd,J＝10.4,6.0Hz),4.32(1H,dd,J＝9.2,2.0Hz),4.22(1H,d,J＝10.0Hz),4.07-4.02(1H,m),3.66-3.61(1H,m),3.60-3.43(3H,m),3.27-3.20(1H,m),3.17-3.10(1H,m),1.97(3H,s),1.89-1.75(2H,m)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ172.6,171.5,169.2,160.2,157.9,157.2,150.9,136.7,128.7,127.4,125.7,125.6,123.4,122.2,118.1(2x),107.5,103.0,76.0,70.2,69.2,63.6,52.6,38.2,36.6,29.3,21.9；ESI-HRMS，对C27H35N6O10的计算值：603.2415，实测值：m/z603.2405[M+H]+。
实施例22：ZA-1-CA偶联物9的合成(图12)
5-乙酰基氨基-4-[2,3-双(叔丁氧基羰基)胍基]-6-[(2,2-二甲基-[1,3]二氧戊 环-4-基)-羟甲基]-5,6-二氢-4H-吡喃-2-甲酸(37)
向酯14(500mg，0.83mmol)在THF(10mL)的溶液加入1M KOH(5mL)。将溶液在室温搅拌1.5h，用Dowex 50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在CH2Cl2(20mL)中并用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(MeOH/CH2Cl2＝1:9)，得到酸37(428mg，90％)。C25H40N4O11；白色固体，熔点118-120℃；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.28(1H,s),8.57(1H,d,J＝7.6Hz),8.00(1H,d,J＝4.4Hz),5.74(1H,d,J＝2.4Hz),5.08-5.03(1H,m),4.32(1H,d,J＝5.6Hz),4.09-3.89(4H,m),3.41(1H,d,J＝8.8Hz),1.95(3H,s),1.41(9H,s),1.39(9H,s),1.33(3H,s),1.26(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCI3)δ174.1,171.2,162.0,157.3,152.3,146.7,109.2,106.9,84.1,79.9,77.9,73.6,69.6,67.2,51.6,48.3,28.0(3x),27.8(3x),26.9,24.9,22.7；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C25H39N4O11的计算值：571.2615，实测值：m/z 571.2615[M-H]-。
5-乙酰基氨基-4-[2,3-双(叔丁氧基羰基)胍基]-6-[(2,2-二甲基-[1,3]二氧戊 环-4-基)-羟甲基]-5,6-二氢-4H-吡喃-2-甲酸3-羟基丙基酯(38)
向酸37(402mg，0.80mmol)在MeOH(5mL)中的溶液加入KOH(45mg，0.80mmol)。将混合物在室温搅拌30分钟，然后在减压下浓缩以给出相应的钾盐。将所述盐溶解在DMF(5mL)中，然后加入3-碘-1-丙醇(93μL，1.00mmol)。在50℃搅拌4h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物溶解在CH2Cl2(20mL)中，并用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:1至EtOAc/己烷＝4:1)，得到酯38(285mg，57％)。C28H46N4O12；无色固体，熔点86-88℃；TLC(EtOAc/己烷＝4:1)Rf＝0.48；[α]21 D-23.1(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3275,2931,1727,1646,1611,1558,1150cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.32(1H,s),8.58(1H,d,J＝7.6Hz),7.96(1H,d,J＝0.8Hz),5.76(1H,d,J＝2.0Hz),5.26(1H,d,J＝4.4Hz),5.12-5.08(1H,m),4.34-4.28(2H,m),4.14-4.10(1H,m),4.07-3.91(3H,m),3.68(2H,t,J＝6.0Hz),3.47-3.44(1H,m),1.96(3H,s),1.90-1.87(2H,m),1.46(9H,s),1.44(9H,s),1.37(3H,s),1.31(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ173.9,162.2,161.6,157.5,152.6,146.7,109.1,107.0,84.3,80.0,78.5,74.0,69.7,67.4,62.7,59.1,51.7,48.3,31.4,28.1(3x),27.9(3x),26.9,25.1,22.9；ESI-HRMS，对C28H47N4O12的计算值：631.3190，实测值：m/z 631.3187[M+H]+。
化合物39
向38(86mg，0.14mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液加入咖啡酸的烯丙基醚18(39mg，0.15mmol)、EDCI(29mg，0.15mmol)和4-二甲基氨基吡啶(18mg，0.15mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将得到的溶液用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:4至EtOAc/己烷＝2:3)，得到化合物39(101mg，85％)。C43H60N4O15；浅黄色固体，熔点70-72℃；TLC(EtOAc/己烷＝2:3)Rf＝0.24；[α]20 D-18.7(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3311,2979,2930,1724,1646,1607,1253,1153cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.34(1H,s),8.60(1H,d,J＝8.0Hz),7.96(1H,d,J＝5.2Hz),7.56(1H,d,J＝16.0Hz),7.03(2H,s),6.83(1H,d,J＝8.8Hz),6.22(1H,d,J＝16.0Hz),6.21-5.98(2H,m),5.77(1H,d,J＝2.0Hz),5.39(2H,dd,J＝17.2,5.2Hz),5.28-5.44(2H,m),5.14-5.10(1H,m),4.61-4.55(4H,m),4.37-4.33(1H,m),4.30-4.24(4H,m),4.16-4.12(2H,m),4.06-3.93(3H,m),2.09-2.05(2H,m),1.98(3H,s),1.47(9H,s),1.45(9H,s),1.38(3H,s),1.32(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ173.9,166.9,162.2,161.3,157.5,152.6,150.6,148.5,146.7,144.8,133.0,132.8,127.4,122.7,117.8,117.7,115.4,113.3,112.6,109.0,106.9,84.2,80.0,78.5,77.2,73.9,69.8,69.7,67.4,62.1,60.6,51.8,48.3,29.6,28.1(3x),27.9(3x),26.9,25.0,22.8；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C43H59N4O15的计算值：803.3351，实测值：m/z 803.3351[M-H]-。
ZA-1-CA偶联物9
向化合物39(60mg，0.07mmol)在无水THF(4mL)中的溶液加入Pd(PPh3)4(12mg，0.01mmol)和吗啉(0.1mL，1.4mmol)。将混合物在室温搅拌4h。将得到的溶液用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(MeOH/CH2Cl2＝1:20至MeOH/CH2Cl2＝1:9)。将残留物溶解在CH2C12(2mL)和TFA(2mL)中。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-1-CA偶联物9(23mg，61％)。C24H32N4O11；橙色固体，熔点135-137℃；[α]20 D+6.6(c＝1.0，H2O)；IRν最大(纯净的)3414,1675,1636,1276,1203,1185,1141cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.55(1H,d,J＝16.0Hz),7.04(1H,d,J＝2.0Hz),6.95(1H,dd,J＝8.0,2.0Hz),6.79(1H,d,J＝8.0Hz),6.25(1H,d,J＝15.6Hz),5.90(1H,d,J＝2.4Hz),4.35-4.19(6H,m),3.88-3.81(2H,m),3.71-3.67(3H,m),2.11-2.07(2H,m),1.99(3H,s)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ174.6,169.3,163.4,159.0,149.8,147.3,147.0,146.6,127.8,123.2,116.7,115.3,115.0,109.0,78.1,71.5,70.3,64.8,63.5,62.1,51.5,50.0,29.2,22.8；ESI-HRMS，对C24H33N4O11的计算值：553.2146，实测值：m/z 553.2150[M+H]+。
实施例23：ZA-1-MCA偶联物10的合成(图13)
化合物40
向醇38(40mg，0.06mmol)在CH2Cl2(3mL)中的溶液加入(3,4-亚甲基二氧基)肉桂酸(MCA，13mg，0.07mmol)、EDCI(13mg，0.07mmol)和4-二甲基氨基吡啶(9mg，0.07mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将得到的溶液用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:4至EtOAc/己烷＝2:3)，得到化合物40(43mg，84％)。C38H52N4O15；浅黄色固体，熔点73-75℃；TLC(EtOAc/己烷＝1:1)Rf＝0.20；[α]20 D-17.3(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)2924,1723,1646,1607,1250,1154,1127cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.34(1H,s),8.59(1H,d,J＝7.9Hz),7.95(1H,d,J＝5.2Hz),7.55(1H,d,J＝16.0Hz),7.00(1H,s),6.98(1H,d,J＝8.0Hz),6.78(1H,d,J＝8.0Hz),6.22(1H,d,J＝15.6Hz),5.97(2H,s),5.77(1H,d,J＝1.6Hz),5.27(1H,br),5.13-5.09(1H,m),4.38-4.32(1H,m),4.29-4.25(3H,m),4.21-4.13(2H,m),4.06-3.90(3H,m),2.09-2.05(2H,m),1.98(3H,s),1.48(9H,s),1.46(9H,s),1.39(3H,s),1.33(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.0,166.9,162.3,161.4,157.6,152.6,149.6,148.3,146.8,144.7,128.7,124.4,115.7,109.1,108.5,106.9,106.5,101.5,84.3,80.1,78.6,74.0,69.8,67.5,62.2,60.8,51.9,48.4,29.7,28.2(3x),28.0(3x),27.0,25.1,22.9；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C38H51N4O15的计算值：803.3351，实测值：m/z 803.3351[M-H]-。
ZA-1-MCA偶联物10
向化合物40(48mg，0.06mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液加入TFA(2mL)。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-1-MCA偶联物10(21mg，62％)。C25H32N4O11；白色固体，熔点130-132℃；[α]19 D+17.2(c＝0.5，CH3OH)；IRν最大(纯净的)3395,1682,1634,1253,1203,1040cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.61(1H,d,J＝16.0Hz),7.17(1H,d,J＝1.2Hz),7.09(1H,dd,J＝8.0,2.0Hz),6.85(1H,d,J＝8.0Hz),6.37(1H,d,J＝16.0Hz),6.00(2H,s),5.89(1H,d,J＝2.8Hz),4.47-4.19(7H,m),3.90-3.81(2H,m),3.71-3.67(2H,m),2.11(2H,t,J＝6.4Hz),2.01(3H,s)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ173.6,168.1,162.5,158.1,150.6,149.2,145.7,145.6,131.5,129.3,125.1,115.6,108.7,107.9,106.7,102.3,77.2,70.5,69.5,63.9,62.5,61.2,50.6,28.3,21.8；ESI-HRMS，对C25H33N4O11的计算值：565.2146，实测值：m/z 565.2144[M+H]+.
实施例24：ZA-1-ME偶联物11的合成(图14)
化合物41
向38(100mg，0.16mmol)在CH2Cl2(5mL)的溶液加入美沙拉嗪的烯丙基醚22(47mg，0.16mmol)、EDCI(31mg，0.16mmol)和4-二甲基氨基吡啶(18mg，0.16mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将得到的溶液用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:4至EtOAc/己烷＝2:3)，得到酯41(98mg，70％)。C43H63N5O16；浅黄色固体，熔点82-84℃；TLC(EtOAc/己烷＝1:1)Rf＝0.18；[α]20 D-21.0(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)3312,2978,2927,1725,1646,1248,1231,1155cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.32(1H,s),8.55(1H,d,J＝8.0Hz),7.90(1H,d,J＝3.6Hz),7.61(1H,s),7.58(1H,d,J＝2.8Hz),6.87(1H,d,J＝9.2Hz),6.69(1H,s),6.07-5.95(1H,m),5.73(1H,d,J＝2.4Hz),5.41(2H,dd,J＝16.8,1.0Hz),5.25-5.21(2H,m),5.10-5.01(1H,m),4.54(2H,d,J＝5.2Hz),4.38-4.29(4H,m),4.16-3.91(2H,m),3.48-3.44(2H,m),2.14-2.07(2H,m),1.98(3H,s),1.47(9H,s),1.46(18H,s),1.39(3H,s),1.32(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ173.9,165.7,162.3,161.3,157.5,154.1,153.2,152.6,146.5,132.9,131.4,131.0,120.6,117.7,114.6,114.0,109.1,107.1,84.3,80.1,78.5,77.2,74.0,71.2,70.1,69.8,67.4,62.4,61.5,51.5,48.3,36.6,29.6,28.3(3x),28.2(3x),28.0(3x),27.0,25.1,22.9；ESI-HRMS(负电荷模式)，对C43H62N5O16的计算值：904.4192，实测值：m/z 904.4214[M-H]-。
ZA-1-ME偶联物11
向化合物41(34mg，0.04mmol)在无水THF(3mL)中的溶液加入Pd(PPh3)4(12mg，0.01mmol)和吗啉(0.1mL，1.4mmol)。将混合物在室温搅拌4h。将得到的溶液用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(MeOH/CH2Cl2＝1:20至MeOH/CH2Cl2＝1:9)。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-1-ME偶联物11(23mg，62％)。C22H31N5O10；黄色固体，熔点126-128℃；[α]18 D+18.6(c＝0.25,CH3OH)；IRν最大(纯净的)3422,1677,1493,1204,1137cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.73(1H,d,J＝2.8Hz),7.38(1H,dd,J＝9.2,2.8Hz),5.86(1H,d,J＝2.8Hz),4.53-4.38(6H,m),4.20-4.16(1H,m),3.89-3.80(2H,m),3.71-3.66(3H,m),2.21(2H,t,J＝6.4Hz),2.00(3H,s)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ173.7,172.1,169.5,162.4,160.0,158.1,145.7,129.1,122.2,119.3,113.4,108.1,77.3,70.6,69.4,64.1,63.9,62.8,62.5,50.6,28.1,21.8；ESI-HRMS，对C22H32N5O10的计算值：526.2149，实测值：m/z 526.2146[M+H]+。
实施例25：ZA-1-HNAP偶联物12的合成(图15)
化合物42
向醇38(117mg，0.19mmol)在CH2Cl2(3mL)中的溶液加入1-羟基-2-萘甲酸的烯丙基醚25(43mg，0.19mmol)、EDCI(36mg，0.19mmol)和4-二甲基氨基吡啶(21mg，0.19mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将得到的溶液用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:4至EtOAc/己烷＝2:3)，得到化合物42(105mg，68％)。C42H56N4O14；浅黄色泡沫；TLC(EtOAc/己烷＝2:3)Rf＝0.22；[α]19 D-25.5(c＝1.0，CHCl3)；IRν最大(纯净的)2980,2930,1726,1647,1607,1565,1369,1250,1152,1129cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.32(1H,s),8.57(1H,d,J＝7.6Hz),8.22(1H,d,J＝8.0Hz),7.94(1H,d,J＝4.8Hz),7.81(1H,d,J＝8.8Hz),7.58-7.47(3H,m),6.21-6.11(1H,m),5.75(1H,d,J＝2.0Hz),5.45(1H,dd,J＝17.2,1.2Hz),5.27(2H,d,J＝11.6Hz),5.09-5.04(1H,m),4.61(1H,d,J＝5.6Hz),4.45-4.42(2H,m),4.38-4.33(3H,m),4.16-4.01(3H,m),3.97-3.91(2H,m),3.47-3.44(1H,m),2.18-2.14(2H,m),1.97(3H,s),1.46(9H,s),1.45(9H,s),1.37(3H,s),1.31(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ173.9,165.9,162.2,161.2,157.5,156.9,152.6,146.7,136.6,133.6,128.7,128.3,127.8,126.5,126.4,123.6,119.5,117.6,109.0,106.8,84.2,80.0,78.5,76.5,73.9,69.7,67.4,62.3,61.5,60.3,51.9,48.3,28.1(3x),27.9(3x),26.9,25.0,22.9,14.1；ESI-HRMS，对C42H57N4O14的计算值：841.3871，实测值：m/z 841.3907[M+H]+。
ZA-1-HNAP偶联物12
向化合物42(65mg，0.08mmol)在无水THF(4mL)中的溶液加入Pd(PPh3)4(12mg，0.01mmol)和吗啉(0.1mL，1.4mmol)。将混合物在室温搅拌4h。将得到的溶液用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:4至EtOAc/己烷＝1:1)。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物用Et2O研磨并离心，给出ZA-1-HNAP偶联物12(33mg，75％)。C26H32N4O10；浅黄色固体，熔点120-122℃；[α]21 D+19.3(c＝1.0,MeOH)；UV-vis(MeOH)λ最大316nm(ε＝5340),260nm(ε＝28990)；UV-vis(PBS)λ最大316nm(ε＝4180),260nm(ε＝4420)；IRν最大(纯净的)3422,1719,1663,1638,1253,1203,1139,1090cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.35(1H,d,J＝8.4Hz),7.81(1H,d,J＝8.4Hz),7.77(1H,d,J＝8.8Hz),7.63(1H,m),7.53(1H,m),7.33(1H,d,J＝8.8Hz),5.89(1H,d,J＝2.8Hz),4.54-4.51(2H,m),4.46-4.41(4H,m),4.23-4.18(1H,m),3.89-3.81(2H,m),3.72-3.67(2H,m),2.26-2.20(2H,m),2.00(3H,s)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ173.5,171.3,162.4,161.0,158.0,145.6,137.8,129.8,127.8,126.1,125.0,124.3,123.6,119.0,108.0,105.7,77.1,70.5,69.3,63.8,62.5,62.3,50.4,47.9,28.1,21.7；ESI-HRMS，对C26H33N4O10的计算值：561.2197，实测值：m/z561.2194[M+H]+。
实施例26：ZA-7-Nap偶联物43的合成(图19)
5-乙酰基氨基-4-[2,3-双(叔丁氧基羰基)胍基]-6-[(2,2-二甲基-[1,3]二氧戊 环-4-基)-(4-硝基苯氧基)羰基氧基)甲基]-5,6-二氢-4H-吡喃-2-甲酸乙基酯(15a)
按照已报道的程序(Chandler,M.等，J.Chem.Soc,Perkin Trans.I 1995,1173)制备乙基酯13的对应物甲基酯13a。将13a与NaOMe在甲醇中皂化，然后与2,2-二甲氧基丙烷进行酸催化的缩醛化以得到化合物14a，将其用氯甲酸4-硝基苯基酯和4-二甲基氨基吡啶在无水吡啶中处理，以36％的总得率给出碳酸酯15a。
氨基甲酸酯化合物53
向萘普生(100mg，0.43mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液加入EDCI(92mg，0.48mmol)和DMAP(63mg，0.52mmol)。在5分钟后，加入3-(叔丁氧基羰基)氨基-1-丙醇(91mg，0.52mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将混合物用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水萃取，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷，1:2)，得到酯产物(93mg，55％)。C22H29NO5；TLC(EtOAc/己烷，1:2)Rf＝0.38；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(2H,d,J＝8.1Hz),7.64(1H,s),7.38(1H,dd,J＝8.6,1.6Hz),7.12(1H,dd,J＝8.5,2.1Hz),7.09(2H,d,J＝2.1Hz),4.62(1H,br,NH),4.13-4.09(2H,m),3.89(3H,s),3.83(1H,q,J＝7.32Hz),3.04(2H,m),1.76-1.69(2H,m),1.56(3H,d,J＝7.1Hz),1.40(9H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.7,157.6,155.8,135.6,133.7,129.2,128.9,127.1,126.1,125.8,119.0,105.6,79.1,62.2,55.2,45.4,37.2,29.0,28.3,18.4；HRMS，对C22H30NO5的计算值：388.2124，实测值：m/z 388.2125[M+H]+。
将上面制备的产物(69mg，0.18mmol)在CH2Cl2(4mL)中用三氟乙酸(1.5mL)处理15分钟，然后在减压下浓缩以给出萘普生3-氨基丙基酯。将该化合物溶解在CH3CN(7mL)中，并加入15a(112mg，0.15mmol)和Et3N(0.080mL，0.59mmol)。将混合物在室温搅拌12h，然后在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷，1:2至2:1)，得到氨基甲酸酯产物53(119mg，90％)。C44H61N5O15；黄色油状物；TLC(EtOAc:己烷＝2:1)Rf＝0.38；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.36(1H,s),8.41(1H,d,J＝8.4Hz),7.68(2H,dd,J＝8.7,3.4Hz),7.63(1H,s),7.36(1H,d,J＝8.7Hz),7.11-7.09(2H,m),6.11(1H,d,J＝9.4Hz),5.85(1H,d,J＝1.6Hz),5.21-5.14(2H,m),4.91(1H,t,J＝6.4Hz),4.34-4.30(2H,m),4.14-4.08(3H,m),4.06-4.02(1H,m),3.97-3.94(1H,m),3.88(3H,s),3.82(1H,q,J＝1.0Hz),3.75(3H,s),3.13-3.01(2H,m),1.84(3H,s),1.79-1.71(2H,m),1.53(3H,d,J＝7.1Hz),1.45(18H,s),1.33(3H,s),1.32(3H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.7,170.7,162.9,161.9,157.6,157.0,155.5,152.7,145.3,135.6,133.6,129.3,128.9,127.2,126.1,125.9,118.9,109.8,108.9,105.6,83.7,79.6,77.5,74.6,69.7,65.9,62.2,55.3,52.3,48.8,48.3,45.4,37.9,28.7,28.2,28.0,26.5,25.4,23.0,18.4；HRMS，对C44H62N5O15的计算值：900.4242，实测值：m/z 900.4245[M+H]+。
ZA-7-Nap 43
将化合物53(101mg，0.112mmol)在THF/MeOH(1:1，6mL)和1M水性K2CO3(6mL)中的溶液在室温搅拌7h。将混合物用Dowex 50W×8中和，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在CH2Cl2(2.5mL)中，并加入TFA(0.5mL)。在室温搅拌30分钟后，将混合物在减压下浓缩。将残留物通过RP-18反相柱层析进行纯化(MeOH/H2O，20:80至80:20)并进行冷冻干燥，得到ZA-7-Nap 43(72mg，72％)。如HC-C18柱(Agilent,4.6x250mm,5μm)上的HPLC所示，产物的纯度为96％，tR＝18.5分钟(MeOH/H2O的梯度，在30分钟内40％至100％，1mL/分钟)。C30H39N5O11；白色固体；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.74-7.71(2H,m),7.66(1H,s),7.39(1H,dd,J＝8.6,1.5Hz),7.20(1H,d,J＝2.3Hz),7.11(1H,dd,J＝9.0,2.5Hz),5.88(1H,d,J＝2.5Hz),4.97(1H,dd,J＝9.3,2.5Hz),4.55(1H,dd,J＝9.9,2.2Hz),4.39(1H,dd,J＝8.8,2.2Hz),4.19-4.10(3H,m),4.02-3.97(1H,m),3.92-3.87(4H,m),3.62(1H,dd,J＝11.9,2.8Hz),3.47(1H,dd,J＝11.9,5.9Hz),3.12-3.00(2H,m),1.90(3H,s),1.79-1.72(2H,m),1.54(3H,d,J＝7.1Hz)；13C NMR(100MHz,D2O)δ176.7,173.7,166.0,157.2,156.6,146.4,135.8,133.6,129.4,128.8,127.4,126.3,125.9,118.7,108.1,106.0,75.8,69.8,68.9,63.1,62.6,57.4,55.1,51.6,47.3,45.2,37.5,28.0,22.0,17.7；HRMS，对C30H40N5O11的计算值：646.2724，实测值：m/z 646.2722[M+H]+。
实施例27：ZA-7-Ibu偶联物44的合成(图20)
氨基甲酸酯化合物55
向(S)-(+)-布洛芬(102mg，0.49mmol)在CH2Cl2(2.5mL)中的溶液添加EDCI(124mg，0.65mmol)和DMAP(79mg，0.65mmol)。5分钟后，加入3-(叔丁氧基羰基)氨基-1-丙醇(93mg，0.53mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h。将混合物用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水萃取，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝3:1)，得到酯产物(127mg，72％)。C21H33NO4；TLC(EtOAc:己烷＝1:3)Rf＝0.63；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.16(2H,d,J＝8.4Hz),7.05(2H,d,J＝8.4Hz),4.67(1H,br),4.08(2H,t,J＝6.6Hz),3.65(1H,q,J＝7.4Hz),3.01-3.00(2H,m),2.41(2H,d,J＝7.1Hz),1.84-1.77(1H,m),1.74-1.68(2H,m),1.45(3H,d,J＝7.1Hz),1.40(9H,s),0.86(6H,d,J＝7.1Hz)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.7,155.8,140.5,137.6,129.3,127.0,79.0,62.1,45.0,44.9,37.2,30.1,28.9,28.3,22.3,18.2.
将上面制备的产物(123.4mg，0.34mmol)在CH2Cl2(4mL)中用三氟乙酸(1mL)处理20分钟，然后在减压下浓缩，给出布洛芬衍生物54。
ZA-7-Ibu偶联物44
将化合物54溶解在CH3CN(10mL)中，并加入15a(232mg，0.31mmol)和Et3N(0.180mL，1.34mmol)。将混合物在室温搅拌12h，然后在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷，2:3至1:1)，得到氨基甲酸酯产物55(160mg，60％)。C43H65N5O14；白色泡沫；TLC(EtOAc:己烷，1:1)Rf＝0.37；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.34(1H,s),8.39(1H,d,J＝9.1Hz),7.14(2H,d,J＝7.8Hz),7.04(2H,d,J＝9.1Hz),6.14(1H,d,J＝9.1Hz),5.85(1H,d,J＝2.1Hz),5.19-5.13(2H,m),4.93(1H,t,J＝5.8Hz),4.33-4.28(2H,m),4.13-4.04(4H,m),3.98-3.94(1H,m),3.74(3H,s),3.64(1H,q,J＝7.4Hz),3.11-2.99(2H,m),2.39(2H,d,J＝7.9Hz),1.84(3H,s),1.82-1.69(3H,m),1.43-1.42(21H,m),1.32(3H,s),1.30(3H,s),0.84(6H,d,J＝6.6Hz)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.8,170.6,162.9,161.9,156.9,155.4,152.6,145.2,140.4,137.6,129.3,127.0,109.8,108.8,83.6,79.5,77.5,74.6,69.6,65.9,62.0,52.3,48.8,48.2,45.0,44.9,37.8,30.1,28.6,28.2,28.0,26.5,25.3,23.0,22.3,18.3；HRMS，对C43H66N5O14的计算值：876.4606，实测值：m/z 876.4605[M+H]+。
实施例28：ZA-9-Nap偶联物45的合成(图21)
将化合物13(2455mg，3.58mmol)在无水EtOH(15mL)中用NaOEt(194.5mg，2.86mmol)在室温下处理1h。将混合物用Dowex50W×8(H+)中和，过滤并在减压下浓缩，得到脱乙酰化产物56的固体。
向萘普生(32mg，0.13mmol)在无水CH2Cl2(7mL)中的溶液加入Et3N(17.3mg，0.17mmol)和HBTU(81.2mg，0.21mmol)。5分钟后，加入上面制备的化合物56(96mg，0.17mmol)和Et3N(17.3mg，0.17mmol)在无水CH2Cl2(3mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌2h，然后在减压下浓缩。将残留物在EtOAc和饱和NaHCO3水溶液之间分配。将有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶柱层析进行纯化(己烷/EtOAc＝1:1)，得到化合物57。C38H52N4O13；白色固体；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.29(1H,s),8.55(1H,d,J＝3.8Hz),7.98(1H,d,J＝2.8Hz),7.70-7.64(3H,m),7.39-7.36(1H,m),7.13-7.08(2H,m),5.72(1H,d,J＝1.2Hz),5.26(1H,d,J＝2.2Hz),5.08-5.03(1H,m),4.50(1H,d,J＝5.8Hz),4.27-4.04(5H,m),3.93-3.81(6H,m),3.47-3.44(1H,m),1.92(3H,s),1.62-1.57(3H,m),1.53-1.47(18H,m),1.27-1.20(3H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.2,173.9,162.3,161.4,157.7,157.5,152.6,146.7,135.6,133.7,129.3,128.9,127.2,127.2,126.0,125.9,119.0,106.7,105.6,84.3,79.9,78.1,68.8,68.6,67.5,61.6,55.3,51.8,48.4,45.4,29.7,28.2,28.0,22.8,18.6,18.3,16.4,14.0；ESI-HRMS，对C38H53N4O13的计算值：773.3609，实测值：m/z 773.3594[M+H]+。
通过与用于制备ZA-7-Nap 43的相似的程序，将化合物53在THF中的溶液用1MK2CO3水溶液在室温下处理，给出ZA-9-Nap 45。
实施例29：ZA-G-Nap偶联物46的合成(图22)
化合物60
向S-甲基异硫脲半硫酸盐(1085mg，7.80mmol)和NaHCO3(655mg，7.80mmol)在H2O(15mL)和THF(15mL)中的溶液逐滴加入(Boc)2O(1283mg，5.88mmol)。将混合物在氩气下在室温搅拌14h，然后在减压下浓缩。将残留物在EtOAc和H2O之间分配。将有机相在MgSO4上干燥，过滤，通过硅胶层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:4)，得到叔丁基[亚氨基(甲基硫代)甲基]氨基甲酸酯产物(1104mg，99％)。C7H14N2O2S；白色固体；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ2.39(3H,s),1.45(9H,s)；13C NMR(CDCl3,100MHz)δ172.3,160.4,79.1,27.5,12.7；HRMS(ESI)，对C7H15N2O2S的计算值：191.0854，实测值：m/z 191.0848[M+H]+。
向萘普生(115mg，0.50mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液加入上面制备的化合物(114mg，0.6mmol)、HBTU(247mg，0.65mmol)和二异丙基乙基胺(130μL，0.75mmol)。将混合物在氩气下在室温搅拌14h，然后在减压下浓缩。将残留物用EtOAc稀释并用1M HCl水溶液、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机相在MgSO4上干燥，过滤，并通过硅胶层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:9)，得到所需产物60(169mg，84％)。C21H26N2O4S；无色油状物；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ12.31(0.55H,s),12.19(0.45H,s),7.69(3H,m),7.38(1H,br),7.15-7.07(2H,m),4.02-3.90(1H,br),3.87(3H,s),2.30(3H,s),1.62(3H,d,J＝6.8Hz),1.37(9H,br)；HRMS(ESI)，对C21H27N2O4S的计算值：403.1692，实测值：m/z 403.1700[M+H]+。
化合物61
向叠氮化物59(192mg，0.42mmol)在MeOH(10mL)中的溶液加入Lindlar催化剂(96mg)。将混合物在氢气气氛下在室温搅拌14h。将混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液在减压下浓缩。将残留物溶解在CH2Cl2(5mL)中，并加入化合物60(169mg，0.42mmol)、HgCl2(125mg，0.46mmol)和Et3N(64μL，0.46mmol)。将混合物在氩气下在室温搅拌6h，通过硅藻土垫过滤，并在减压下浓缩。将残留物用EtOAc稀释，并用1M HCl水溶液、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机相在MgSO4上干燥，过滤，并通过硅胶层析进行纯化(EtOAc/己烷，1:1至7:3)，得到产物61(293mg，88％)。C38H48N4O14；无色油状物；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ12.24(0.6H,s),11.97(0.4H,s),8.98(0.6H,d,J＝8.4Hz),8.39(0.4H,d,J＝7.2Hz),7.77-7.62(3H,m),7.46(0.4H,d,J＝8.4Hz),7.33(0.6H,d,J＝8.4Hz),7.18-7.07(2H,m),6.12(0.6H,d,J＝8.8Hz),5.87-5.78(0.4H,m),5.42-5.37(0.6H,m),5.30-5.23(1H,m),5.23-5.18(0.4H,m),5.09-4.97(1H,m),4.69-4.59(1H,m),4.29-4.05(3H,m),3.95-3.82(3H,m),3.82-3.66(4H,m),2.18-1.97(9H,m),1.89-1.78(3H,m),1.62-1.52(3H,m),1.43-1.28(9H,m)；HRMS(ESI)，对C38H49N4O14的计算值：785.3245，实测值：m/z782.3236[M+H]+。
ZA-G-Nap 46
向化合物61(33mg，0.042mmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液加入TFA(1mL)。将混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。将残留物溶解在THF(2mL)中，并加入1M KOH水溶液(2mL)。将混合物在室温搅拌30分钟，通过加入TFA进行酸化，并在减压下浓缩。将残留物通过反相层析进行纯化(RP-18；0-100％MeOH在H2O中)，得到ZA-G-Nap 46(21mg，93％)。C26H32N4O9；白色固体；1H NMR(D2O,400MHz)δ7.69(3H,m),7.36(1H,br),7.21-7.05(2H,m),5.52(1H,m),4.56-4.46(1H,m),4.40-4.31(1H,m),4.31-4.21(1H,m),4.02-3.76(6H,m),3.68-3.55(2H,m),1.87(3H,s),1.51(3H,d,J＝5.2Hz)；HRMS(ESI)，对C26H33N4O9的计算值：545.2248，实测值：m/z545.2249[M+H]+。
实施例30：ZA-G-Ibu偶联物47的合成(图23)
化合物62
向(S)-布洛芬(103mg，0.50mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液加入HBTU(247mg，0.65mmol)、DIEA(130μL，0.75mmol)和化合物叔丁基[亚氨基(甲基硫代)甲基]氨基甲酸酯(114mg，0.6mmol)。将混合物在氩气下在室温搅拌14h，然后在减压下浓缩。将残留物用EtOAc稀释，并用1M HCl水溶液、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机相在MgSO4上干燥，过滤，并通过硅胶层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:49)，得到所需产物62(153mg，80％)。C20H30N2O3S；无色油状物；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ12.20(1H,s),7.19(2H,d,J＝7.6Hz),7.08(2H,d,J＝6.0Hz),3.69(1H,br),4.41(2H,d,J＝7.2z),229(3H,s),1.81(1H,sep,J＝6.8Hz),1.50(3H,d,J＝7.2Hz),1.42(9H,s),0.86(6H,d,J＝6.4Hz)；HRMS(ESI)，对C20H31N2O3S的计算值：379.2055，实测值：m/z 379.2060[M+H]+。
化合物63
向叠氮化物59(183mg，0.40mmol)在MeOH(5mL)中的溶液加入Lindlar催化剂(91mg)。将混合物在氢气气氛下在室温搅拌14h。将得到的混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液在减压下浓缩。将残留物溶解在CH2Cl2(5mL)中，加入化合物62(153mg，0.40mmol)、HgCl2(119mg，0.44mmol)和Et3N(61μL，0.44mmol)。将混合物在氩气下在室温搅拌6h，通过硅藻土垫过滤，并在减压下浓缩。将残留物用EtOAc稀释，并用1M HCl水溶液、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机相在MgSO4上干燥，过滤，并通过硅胶层析进行纯化(EtOAc/己烷，1:1至7:3)，得到产物63(259mg，85％)。C37H52N4O13；无色油状物；1H NMR(CDCl3,400MHz)δ12.12(0.6H,s),δ11.97(0.4H,s),9.01(0.6H,d,J＝8.4Hz),8.40(0.4H,d,J＝8.4Hz),7.22(0.4H,d,J＝8.4Hz),7.16(0.6H,d,J＝8.0Hz),7.09(1H,d,J＝8.0Hz),6.00(0.6H,d,J＝8.4Hz),5.88-5.82(0.4H,m),5.42-5.37(0.6H,m),5.32-5.22(1.4H,m),5.13-4.97(1H,m),4.67-4.58(1H,m),4.27-4.08(3H,m),3.80-3.71(3H,m),3.67-3.55(1H,m),2.50-2.35(2H,m),2.02-1.98(9H,m),1.88-1.75(3H,m),1.55-1.31(13H,m),0.92-0.78(6H,m)；HRMS(ESI)，对C37H53N4O13的计算值：761.3609，实测值：m/z 761.3613[M+H]+。
ZA-G-Ibu 47
向化合物63(28mg，0.037mmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液加入TFA(1mL)。将混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。将残留物溶解在THF(2mL)中，并加入1M KOH水溶液(2mL)。将混合物在室温搅拌30分钟，通过加入TFA进行酸化，并在减压下浓缩。将残留物通过反相层析进行纯化(RP-18；0-100％MeOH在H2O中)，得到ZA-G-Ibu 47(18mg，95％)。C25H36N4O8；无色油状物；1H NMR(CD3OD,400MHz)δ7.25(2H,d,J＝8.4Hz),7.12(2H,d,J＝7.6Hz),5.59(1H,m),4.62-4.52(1H,m),4.41-4.32(1H,m),4.32-4.20(1H,m),3.92-3.75(3H,m),3.71-3.58(2H,m),2.44(2H,d,J＝7.2Hz),1.93(3H,s),1.89-1.79(1H,m),1.46(3H,d,J＝6.8Hz),0.88(6H,d,J＝6.8Hz)；HRMS(ESI)，对C25H37N4O8的计算值521.2611，实测值：m/z 521.2612[M+H]+。
实施例31：OS-1-CA偶联物48的合成(图24)
化合物46
向奥司他韦羧酸N-Boc衍生物(64，60mg，0.16mmol)在MeOH(0.5mL)中的溶液加入KOH(6.87mg，0.17mmol)。将混合物在室温搅拌30分钟，然后在减压下浓缩。将残留物溶解在DMF(0.5mL)中，然后加入3-碘-1-丙醇(17mL，0.19mmol)。在50℃搅拌4h后，将混合物在减压下蒸发。将残留物溶解在CH2Cl2(10mL)中，并用1M HCl和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩，并通过快速硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷，2:1)，得到化合物65(50mg，72％)。C22H38N2O7；白色固体；熔点93-95℃；TLC(EtOAc/正己烷，2:1)Rf＝0.31；[α]D 22＝-81.9(c＝1.0，CH2Cl2)；IR(薄膜)3309,2964,2935,2878,1686,1536,1458,1392,1368,1295,1255,1172,1057cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.77(1H,s),5.88(1H,d,J＝8.8Hz),5.11(1H,d,J＝9.6Hz),4.28-4.31(2H,m),4.01-4.08(1H,m),3.95(1H,d,J＝7.2Hz),3.73-3.82(1H,m),3.70(2H,t,J＝6.0Hz),3.30-3.34(1H,m),2.72(1H,dd,J＝17.6,5.2Hz),2.26(1H,dd,J＝18.0,10.0Hz),1.97(3H,s),1.87-1.93(2H,m),1.47-1.57(4H,m),1.41(9H,s),0.85-0.91(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.9,165.9,156.2,138.1,128.8,82.3,79.5,75.8,61.8,58.6,54.6,49.3,31.5,30.9,28.4(3x),26.2,25.7,23.3,9.7,9.3；HRMS，对C22H39N2O7的计算值：443.2757，实测值：m/z443.2753[M+H]+。
化合物66
向咖啡酸的烯丙基醚18(70mg，0.27mmol)在无水CH2Cl2(2.3mL)中的溶液加入NEt3(1.0mL，0.69mmol)、O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸脲(HBTU，103mg，0.27mmol)和DMAP(催化量)。将混合物在室温搅拌30分钟，并加入醇化合物46(100mg，0.23mmol)。将混合物在室温继续搅拌3h，并在减压下浓缩。将残留物在硅胶柱上通过快速层析进行纯化(EtOAc/己烷，3:1)，得到偶联产物47(93mg，60％)。C37H52N2O10；浅黄色固体；TLC(EtOAc/己烷，3:1)Rf＝0.57；[α]D 25＝-87.2(c＝1，CH2Cl2)；IR(薄膜)3443,2966,1876,1714,1658,1514,1458,1426,1368,1295,1257,1167,1016cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(1H,d,J＝16.0Hz),7.07(2H,s),6.86(1H,d,J＝8.8Hz),6.79(2H,s),6.24(1H,d,J＝16.0Hz),6.00-6.10(2H,m),5.39-5.44(2H,m),5.29(2H,d,J＝10.8Hz),5.04(1H,d,J＝8.8Hz),4.59-4.63(4H,m),4.27(4H,t,J＝6.4Hz),4.02-4.09(1H,m),3.83(1H,br),3.77-3.83(1H,m),3.31-3.34(1H,m),2.74(1H,dd,J＝18.4,6.0Hz),2.25-2.32(1H,m),2.08(2H,t,J＝6.0Hz),1.97(3H,s),1.47-1.54(4H,m),1.41(9H,s),0.85-0.91(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.5,166.7,165.5,156.1,150.4,148.2,144.7,138.0,132.8,132.6,128.8,127.2,122.5,117.8,117.7,115.3,113.2,112.4,82.1,79.4,75.7,69.8,69.6,61.5,60.8,54.4,49.1,30.9,28.3(3x),28.1,26.1,25.7,23.3,9.6,9.3；HRMS，对C37H53N2O10的计算值：685.3700，实测值：m/z 685.3725[M+H]+。
OS-1-CA偶联物48
向化合物66(50mg，0.07mmol)在无水THF(2mL)中的溶液加入Pd(PPh3)4(23mg，0.02mmol)和吗啉(2mL)。将混合物在室温搅拌4h，然后用1M HCl和盐水萃取。将有机相在MgSO4上干燥，在减压下浓缩，并在硅胶柱上通过快速层析进行纯化(EtOAc/己烷，2:1)。将残留物溶解在CH2Cl2(2mL)和TFA(2mL)中。在室温搅拌3h后，将混合物在减压下浓缩。将残留物通过反相硅胶层析进行纯化(MeOH/H2O，0:10至10:0)，得到OS-1-CA偶联物48(25mg，70％)。C26H36N2O8；白色粉末；TLC(2-丙醇/H2O/NH4OH，10:2:3)Rf＝0.78；[α]D 24＝-28.0(c＝1，MeOH)；IR(薄膜)3263,2966,2936,2878,1679,1600,1523,1443,1374,1272,1249,1201,1182,1135cm-l；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.26(1H,d,J＝8.8Hz),7.53(1H,d,J＝15.6Hz),7.03(1H,d,J＝2.0Hz),6.94(1H,dd,J＝8.0,2.0Hz),6.86(1H,d,J＝2.0Hz),6.78(1H,d,J＝8.0Hz),6.25(1H,d,J＝15.6Hz),4.24-4.35(4H,m),4.21(1H,d,J＝8.0Hz),3.94-3.99(1H,m),3.49-3.56(1H,m),3.39-3.44(1H,m),2.94(1H,dd,J＝17.6,5.6Hz),2.47(1H,tt,J＝10.4,2.8Hz),2.07-2.13(2H,m),2.04(3H,s),1.47-1.57(4H,m),0.92(3H,t,J＝6.4Hz),0.88(3H,t,J＝7.6Hz)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.0,169.3,166.9,149.8,147.3,147.0,139.5,128.4,127.8,123.2,116.7,115.4,115.0,83.9,75.8,63.3,62.3,54.4,50.8,29.6,29.3,27.3,26.8,23.3,10.0,9.7；HRMS，对C26H36N2O8的计算值：505.2550，实测值：m/z505.2553[M+H]+。
实施例32：TP-1-CA偶联物49的合成(图25)
化合物68
在0℃下向三氯化磷(1.57g，11.4mmol)在CH2Cl2(114mL)中的溶液逐滴加入1,3-丙二醇(0.9g，12mmol)。将混合物搅拌8h，然后用盐水洗涤两次。将有机层在MgSO4上干燥，并在减压下浓缩，给出2-氧基-1,3,2-二氧杂磷杂环己烷(68，0.93g，66％)。C3H7O3P；无色油状物；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.87(1H,d,J＝675.6Hz),4.20-4.49(2H,m),2.20-2.31(1H,m),1.75-1.82(1H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ67.1(2x,d,JC-P＝6.8Hz),25.5(d,JC-P＝8.4Hz)；31PNMR(162MHz,CDCl3)δ3.47。
化合物69
将碘化合物67(50mg，0.11mmol)、磷杂环己烷68(20mg，0.22mmol)和Et3N(46μL，0.32mmol)在无水甲苯(1.0mL)中的混合物，通过用氮气鼓泡10分钟，然后加入到放置在圆底烧瓶中氮气气氛下的四(三苯基膦)钯(0)(10mg，8.6mmol)中，进行脱氧。将混合物逐渐加热至90℃并在该温度维持12h。将混合物通过硅藻土垫进行过滤，将滤液在减压下浓缩，给出黄色泡沫(98mg)，将其在硅胶柱上通过快速柱层析进行纯化(EtOAc/己烷，1；1)，得到膦酸酯粗产物69(77mg)。
化合物51
将粗产物69溶解在乙醇(1.1mL)中，并在25℃下用KOH(1.1mL 1M水性溶液)处理0.5h。将混合物用Dowex 50W×8中和，过滤，并在减压下浓缩。在残留物在C-18柱上纯化。将产物溶解在NH4OH中，在室温搅拌0.5h，然后冷冻干燥，得到作为铵盐的化合物70(43mg，83％)。C21H39N2O8P；白色固体；熔点174-178℃；TLC(MeOH/CH2Cl2，1:10)Rf＝0.10；[α]D 19＝-46.9(c＝0.9，MeOH)；IR(薄膜)3325,2965,2937,1660,1541,1458,1369,1296,1256,1184cm-l；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.52(1H,J＝21.2Hz),4.03-4.08(3H,m),3.86(1H,t,J＝11.2Hz),3.69-3.76(1H,m),3.67(2H,t,J＝6.8Hz),3.39-3.42(1H,m),2.54-2.58(1H,s),2.22-2.28(1H,s),1.96(3H,s),1.84-1.90(2H,m),1.48-1.56(4H,m),1.43(9H,s),0.86-0.94(6H,s)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ174.8,173.8,158.2,137.8(C-1,d,JC-P＝118Hz),83.6,80.2,76.5(d,JC-P＝18.7Hz),63.4(d,JC-P＝5.3Hz),54.7,50.8(d,JC-P＝12.0Hz),34.9,34.86,34.3(d,JC-P＝6.7Hz),28.9(3x),26.8,23.3,10.02,10.0；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ15.6；HRMS，对C21H38N2O8P(M-H)的计算值：477.2366，实测值：m/z 477.2368。
化合物71
向咖啡酸的烯丙基醚18(160mg，0.61mmol)在无水CH2Cl2中的溶液加入N-羟基琥珀酰亚胺(84mg，0.74mmol)、HBTU(280mg，0.74mmol)、DMAP(16mg，10％w/w)和二异丙基乙基胺(0.4mL，1.8mmol)。将混合物在室温搅拌2h，浓缩，并用H2O洗涤。将残留物通过硅胶层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:3)，给出化合物71(164mg，75％)。C19H19NO6；TLC(EtOAc/己烷＝1:2)Rf＝0.26；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(1H,d,J＝16.0Hz),7.10(2H,td,J＝8.4,2.0Hz),6.87(1H,d,J＝8.4Hz),6.38(1H,d,J＝16.0Hz),6.00-6.10(2H,m),5.41(2H,dt,J＝17.2,1.2Hz),5.29(2H,dd,J＝10.8,1.2Hz),4.61-4.64(4H,m),2.85(4H,s)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ168.7(2x),161.6,151.1,149.4,148.0,132.4,132.1,126.1,123.5,117.8,117.7,112.8,112.4,108.5,69.9,69.6,26.0(2x)。
化合物72
将醇化合物70(65mg，0.14mmol)和咖啡酸活性酯71在无水DMF(2.4mL)中的溶液在室温搅拌16h。将混合物浓缩，并将残留物在RP-18反相柱上进行纯化(H2O/MeOH＝6:4至5:5)，给出偶联产物72(66mg，67％)。C36H53N2O11P；TLC(MeOH/CH2Cl2＝1:10)Rf＝0.17；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.43(1H,d,J＝16.0Hz),7.14(lH,s),7.09(1H,d,J＝8.4Hz),6.94(1H,d,J＝8.4Hz),6.50(1H,d,J＝19.2Hz),6.41(1H,d,J＝16.0Hz),6.02-6.11(2H,m),5.42(2H,d,J＝17.2Hz),5.25(2H,d,J＝10.8Hz),4.59(4H,d,J＝4.8Hz),4.18-4.23(1H,m),4.12-4.14(1H,m),3.96-4.01(3H,m),3.66-3.74(2H,m),3.41-3.44(1H,m),2.62-2.66(1H,m),2.35-2.37(1H,m),1.89(3H,s),1.811.87(2H,m),1.46-1.56(4H,m),1.30-1.37(4H,m),0.92(3H,t,J＝7.6Hz),0.87(3H,t,J＝7.6Hz)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ173.7,168.6,163.7,150.7(C-l,d,Vc-p＝172.5Hz),141.8,134.8,134.7,134.5,129.4,125.0,123.5,119.7,117.9,117.3,115.0,114.0,83.6,77.8,71.1(d,2JC-P＝6.8Hz),70.8,62.8,59.4,56.5,47.9(3x),34.9,32.8,29.0,27.6,27.0,23.1,10.2,9.9,9.4；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ13.4。
TP-1-CA偶联物49
将72(100mg，0.14mmol)在无水甲苯(1.0mL)中的溶液，通过用氮气鼓泡10分钟，然后加入到放置在圆底烧瓶中氮气气氛下的四(三苯基膦)钯(0)(10mg，8.6μmol)中，进行脱氧。将混合物在25℃搅拌8h，然后通过硅藻土垫进行过滤。将滤液在减压下浓缩，给出黄色泡沫，将其溶解在CH2Cl2(0.50mL)中，并用TFA(0.10mL，1.4mmol)处理。在搅拌3h后，将混合物在减压下浓缩。将残留物溶解在NH4OH中，在室温搅拌0.5h，并在C-18柱上纯化，然后冷冻干燥，得到TP-1-CA偶联物49(48mg，64％)。C25H37N2O9P；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.36(1H,d,J＝15.6Hz),7.00(1H,d,J＝2.0Hz),6.89(1H,dd,J＝8.0,1.6Hz),6.76(1H,d,J＝8.4Hz),6.45(1H,br),6.31(1H,d,J＝15.6Hz),4.19-4.27(1H,m),4.10-4.12(1H,m),3.78-3.89(2H,m),3.42-3.45(1H,m),3.21(2H,t,J＝4.8Hz),2.63(1H,br),2.35(1H,br),1.90(3H,s),1.75(2H,m,J＝6.8Hz),1.43-1.58(4H,m),0.93(3H,t,J＝7.6Hz),0.88(3H,t,J＝1.6Hz)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ174.0,168.9,150.9(C-1,d,JC-P＝172.8Hz),138.9,134.8(d,JC-P＝18.3Hz),129.6,123.6,119.9,115.2,114.2,83.7(d,JC-P＝7.8Hz),62.8,59.4,56.5,34.8,32.7,28.9,27.5,26.9,23.1,10.1,9.8,9.3；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ14.3；HRMS，对C25H36N2O9P(M-H)的计算值：539.2158，实测值：m/z 539.2147。
实施例33：PZA(1Et)-7-CA-酰胺偶联物50的合成(图26)
3-乙酰胺基-4,6-二乙酰氧基-2-(1,2,3-三乙酰氧基)丙基-3,4,5,6-四氢-2H-吡 喃(73)
在氮气气氛下，将N-乙酰基神经氨酸(5g，16.2mmol)在吡啶(75mL)和乙酸酐(75mL)中的悬液在室温搅拌12h，然后在100℃加热5h。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残留的浅棕色玻璃态油状物溶解在CH2Cl2(150mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(100mL)、1M HCl水溶液(100mL)和盐水(100mL)相继洗涤。将有机层在MgSO4上干燥，过滤并浓缩。将浅棕色残留物通过在硅胶上柱层析进行纯化(EtOAc/己烷，67:33至100:0)，得到作为浅黄色泡沫的73(3.8g,50％)，其含有不可分离的异头物混合物(α/β＝1:5)。将所述73的异头物混合物不需进一步纯化直接用于下一步中。C20H29NO12；TLC(EtOAc)Rf＝0.35；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ6.26(0.83H,d,J＝2.5Hz,Η-1β),5.62(0.17H,dd,J＝10.3,2.1Hz,H-1α),5.43(0.17H,ddd,J＝6.1,4.4,1.9Hz),5.29-5.27(1.66H,m),5.22(0.83H,td,J＝10.6,4.9Hz),5.17(0.83H,td,J＝6.5,2.7Hz),5.11-5.07(0.34H,m),5.03(0.17H,dd,J＝6.5,2.7Hz),4.36(0.17H,dd,J＝12.5,2.6Hz),4.31(0.83H,dd,J＝12.5,2.8Hz),4.08-3.98(2.83H,m),3.74(0.17H,dd,J＝10.5,2.5Hz),2.17-2.15(0.17H,m),2.15-2.13(0.83H,m),2.11(2.49H,s),2.10(0.51H,s),2.09(0.51H,s),2.08(2.49H,s),2.07(0.51H,s),2.04(2.49H,s),2.03(0.51H,s),2.017(2.49H,s),2.013(0.51H,s),2.00(2.49H,s),2.00-1.98(0.83H,m),1.98-1.96(0.17H,m),1.88(2.49H,s),1.87(0.51H,s)；HRMS，对C20H29NO12Na的计算值：498.1587，实测值：m/z 498.1557[M+Na]+。
[5-乙酰胺基-4-乙酰氧基-6-(1,2,3-三乙酰氧基)丙基-3,4,5,6-四氢-2H-吡喃- 2-基]膦酸二乙酯(74)
将无水CH2Cl2(30mL)中的73的异头物混合物(2.15g，4.52mmol)和三甲基甲硅烷基亚磷酸二乙酯(3.11mL，13.65mmol)用三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯(TMSOTf，1.23mL，6.78mmol)在0℃进行处理。30分钟后，将混合物升温至室温并搅拌24h。将混合物倾倒在冰水(20mL)中，并将水性层用CH2Cl2萃取(20mL，2x)。将合并的萃取物用饱和NaHCO3水溶液(50mL)和盐水(50mL)相继洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩。将残留物通过在硅胶上柱层析进行纯化(丙酮/EtOAc，1:9)，得到作为无色糖浆的74(1.55g，62％)，其含有α-和β-异头物的混合物(2:3)。将膦酸酯74的异头物混合物不需进一步分离直接用于下一步中。纯的α-和β-异头物的分析样品(74α和74β)通过在硅胶上快速柱层析来获得(EtOAc/丙酮，100:0至90:10)。α-异头物74α：C22H36NO13P；无色泡沫；TLC(EtO Ac/丙酮，9:1)Rf＝0.25；[α]D 20＝+39.4(c＝4.6，CH2Cl2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ5.30(1H,dd,J＝5.7,1.7Hz),5.24(1H,d,J＝9.9Hz,NH),5.18(1H,td,J＝6.6,2.5Hz),4.98(1H,td,J＝10.6,5.0Hz),4.40(1H,dd,J＝12.3,5.0Hz),4.22-4.09(5H,m),3.97(1H,q,J＝10.1Hz),3.74(1H,td,J＝12.5,2.4Hz),3.62(1H,dd,J＝10.3,2.0Hz),2.27(1H,dd,J＝12.8,4.9Hz),2.09(3H,s),2.05(3H,s),2.02(3H,s),2.01(3H,s),1.98-1.92(1H,m),1.87(3H,s),1.35-1.31(6H,m)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.9(C),170.5(C),170.3(C),170.2(C),170.1(C),79.0(CH,d,3JC-P＝17.3Hz),71.8(CH,d,1JC-P＝174.6Hz,C-1),71.6(CH,d,3JC-P＝20.9Hz),71.0(CH),67.9(CH),63.4(CH2,d,2JC-P＝6.9Hz,POCH2),62.8(CH2,d,2JC-P＝6.2Hz,POCH2),62.2(CH2,C-8),49.6(CH,C-4),31.3(CH2,C-2),23.1(CH3),20.9(CH3),20.8(CH3),20.7(CH3,2x),16.5(CH3,d,3JC-P＝5.4Hz,POCH2 CH3),16.3(CH3,d,3JC-P＝5.4Hz,POCH2 CH3)；31P NMR(202MHz,CDCl3)518.5；HRMS，对C22H35NO13P的计算值：552.1846，实测值：m/z 552.1921[M-H]-。β-异头物74β：C22H36NO13P；无色泡沫TLC(EtOAc/丙酮，9:1)Rf＝0.28；[a]D 20＝-40.1(c＝3.0，CH2Cl2)；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ5.45(1H,d,J＝10.1Hz,NH),5.35(1H,dd,J＝7.3,2.3Hz),5.32(1H,td,J＝15.0,4.8Hz),5.21-5.18(1H,m),4.45(1H,d,J＝10.0Hz),4.33(1H,dd,J＝12.4,2.8Hz),4.30(1H,dd,J＝12.3,7.1Hz),4.19-4.13(2H,m),4.12-4.04(4H,m),2.35-2.31(1H,m),2.11(3H,s),2.08(3H,s),2.017(3H,s),2.011(3H,s),2.09-2.03(1H,m),1.88(3H,s),1.34(3H,t,J＝7.0Hz),1.33(3H,t,J＝1.0Hz)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.8(C),170.6(C),170.2(C),170.1(C),169.8(C),74.0(CH),69.7(CH),69.5(CH),67.9(CH,d,lJC-P＝157.2Hz,C-1),67.7(CH),63.0(CH2,d,2JC-P＝7.2Hz,POCH2),62.7(CH2,d,2JC-P＝6.6Hz,POCH2),62.0(CH2,C-8),49.0(CH,C-4),29.5(CH2,d,2JC-P＝3.2Hz,C-2),23.1(CH3),21.0(CH3),20.9(CH3),20.7(CH3,2x),16.2(CH3,d,3JC-P＝5.1Hz,POCH2 CH3),16.3(CH3,d,3JC-P＝5.1Hz,POCH2 CH3)；31P NMR(202MHz,CDCl3)δ21.4；HRMS，对C22H35NO13P的计算值：552.1846，实测值：m/z 552.1879[M-H]-。
[5-乙酰胺基-4-乙酰氧基-6-(1,2,3-三乙酰氧基)丙基-4,5,6-三氢吡喃-2-基] 膦酸二乙酯(75)
将无水CH2Cl2(20mL)中的膦酸酯74的异头物混合物(1.1g，2mmol)和N-溴琥珀酰亚胺(885mg，5mmol)，在100W钨灯的辐照下加热至回流。反应进程通过TLC监测。在完成后(～6h)，将混合物冷却至室温，并过滤掉沉淀的琥珀酰亚胺。将滤液在减压下蒸发，给出作为黄色糖浆的2-溴衍生物粗品，其不需进一步纯化直接用于下一步中。
将上面制备的溴化合物在无水吡啶(10mL)中的溶液在50℃搅拌2h。将溶液在减压下浓缩，并将棕色残留物在硅胶上通过柱层析进行纯化(EtOAc/丙酮，100:0至90:10)，得到作为无色泡沫的偶联的膦酸酯75(827mg，两个步骤共75％)。C22H34NO13P；TLC(EtOAc/丙酮，9:1)Rf＝0.28；[α]D 20＝+43.8(c＝0.59,CH2Cl2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ5.74(1H,dd,J＝10.7,2.2Hz),5.54(1H,d,J＝8.2Hz,NH),5.42-5.40(2H,m),5.26(1H,td,J＝6.4,2.9Hz),4.39-4.34(2H,m),4.29(1H,q,J＝9.1Hz),4.17-4.09(5H,m),2.09(3H,s),2.05(3H,s),2.04(3H,s),2.02(3H,s),1.91(3H,s),1.35(3H,t,J＝7.0Hz),1.31(3H,t,J＝7.0Hz)；13CNMR(150MHz,CDCl3)δ170.8(C),170.4(C),170.3(C),169.8(C),169.7(C),147.8(C,d,1JC-P＝225Hz,C-1),113.0(CH,d,2JC-P＝22.8Hz,C-2),76.5(CH,d,3JC-P＝9.3Hz),69.9(CH),68.4(CH,d,3JC-P＝15.2Hz),67.2(CH),63.2(CH2,d,2JC-P＝5.4Hz,POCH2),63.0(CH2,d,2JC-P＝5.7Hz,POCH2),61.8(CH2,C-8),46.4(CH,C-4),23.0(CH3),20.78(CH3),20.73(CH3),20.63(CH3),20.60(CH3),16.16(CH3,d,3JC-P＝4.8Hz,POCH2 CH3),16.12(CH3,d,3JC-P＝4.8Hz,POCH2 CH3)；31P NMR(202MHz,CDCl3)δ6.4；HRMS，对C22H33NO13P的计算值：550.1690，实测值：m/z 550.1684[M-H]-。
[4-(1,2,3-三乙酰氧基)丙基-2-甲基-3a,7a-二氢-4H-吡喃并[3,4-d]噁唑-6- 基]膦酸二乙酯(76)
将膦酸酯75(550mg，1mmol)在乙酸(2mL)和乙酸酐(2mL)的混合物中的溶液用浓H2SO4(0.2mL)处理。将混合物在室温搅拌48h，倾倒在冷的(0℃)饱和NaHCO3水溶液(pH 9)中，并搅拌30分钟，然后用EtOAc萃取(30mL，5x)。将合并的萃取物在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留的油状物在硅胶上通过柱层析进行纯化(丙酮/EtOAc，1:9)，得到作为浅黄色糖浆的76(394mg，两个步骤共80％)。C20H30NO11P；TLC(EtOAc/丙酮，9:1)Rf＝0.30；[α]D 20＝-11.6(c＝0.50,CH2Cl2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ6.20(1H,dd,J＝10.3,4.0Hz),5.58(1H,ddd,J＝6.6,2.9,1.1Hz),5.38(1H,td,J＝7.7,2.5Hz),4.71(1H,ddd,J＝8.6,4.0,2.0Hz),4.40(1H,dd,J＝12.4,2.5Hz),4.19(1H,dd,J＝12.5,5.9Hz),4.18-4.07(4H,m),3.93(1H,td,J＝9.2,0.6Hz),3.34(1H,dd,J＝10.1,2.7Hz),2.11(3H,s),2.04(3H,s),2.03(3H,s),1.98(3H,s),1.34(3H,t,J＝7.0Hz),1.32(3H,t,J＝7.0Hz)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ170.5(C),169.7(C),169.4(C),167.2(C,N＝CCH3),150.1(C,d,1JC-P＝225Hz,C-1),111.9(CH,d,2JC-P＝23.4Hz,C-2),76.1(CH,d,3JC-P＝6.3Hz),71.2(CH,d,3JC-P＝15.3Hz),69.6(CH),68.8(CH),63.1(CH2,d,2JC-P＝5.9Hz,POCH2),62.9(CH2,d,2JC-P＝5.7Hz,POCH2),61.8(CH,C-4),61.6(CH2,C-8),20.7(CH3),20.6(CH3),20.5(CH3),16.2(CH3,d,3JC-P＝5.1Hz,POCH2 CH3),16.1(CH3,d,3JC-P＝5.1Hz,POCH2 CH3),14.0(CH3,N＝CCH3)；31P NMR(202MHz,CDCl3)δ6.4；HRMS，对C20H29NO11P的计算值：490.1478，实测值：m/z 490.1374[M-Η]-。
[5-乙酰胺基-4-叠氮基-6-(1,2,3-三乙酰氧基)丙基-4,5,6-三氢吡喃-2-基]膦 酸二乙酯(77)
将噁唑啉76(393mg，0.8mmol)在t-BuOH(10mL)中的溶液在80℃下用叠氮基三甲基甲硅烷(0.53mL，4mmol)处理24h。将溶液倾倒在饱和NaHCO3水溶液中，并用EtOAc萃取(30mL，3x)。将合并的萃取液在MgSO4上干燥，过滤并浓缩，得到作为无色糖浆的叠氮化合物77(371mg，87％)，其纯度足以用于下一步中。分析样品通过在硅胶上快速柱层析来获得(10％丙酮在EtOAc中)。C20H31N4O11P；TLC(EtOAc/丙酮，9:1)Rf＝0.30；[α]D 20＝+82.7(c＝0.58,CH2Cl2)；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ5.75(1H,dd,J＝10.3,2.4Hz),5.73(1H,d,J＝8.6Hz),5.38(1H,dt,J＝7.1,1.5Hz),5.26(1H,ddd,J＝8.5,5.8,2.6Hz),4.53-4.50(2H,m),4.36(1H,dd,J＝12.5,2.6Hz),4.17-4.08(5H,m),3.67(1H,q,J＝9.2Hz),2.10(3H,s),2.05(3H,s),2.02(3H,s),1.99(3H,s),1.34(3H,t,J＝7.1Hz),1.32(3H,t,J＝7.1Hz)；13CNMR(150MHz,CDCl3)δ170.8(C),170.5(C),170.1(C),169.7(C),147.7(C,d,1JC-P＝224Hz,C-1),112.4(CH,d,2JC-P＝22.9Hz,C-2),75.9(CH,d,3JC-P＝9.2Hz),69.7(CH),67.3(CH),63.5(CH2,d,2JC-P＝5.7Hz,POCH2),63.3(CH2,d,2JC-P＝5.9Hz,POCH2),61.9(CH2,C-8),57.8(CH,d,3JC-P＝14.7Hz),48.5(CH,C-4),23.2(CH3),20.8(CH3),20.77(CH3),20.71(CH3),16.27(CH3,d,3JC-P＝5.7Hz,POCH2 CH3),16.23(CH3,d,3JC-P＝5.7Hz,POCH2 CH3)；31P NMR(202MHz,CDCl3)δ6.2；HRMS，对C20H30N4O11P的计算值：533.1649，实测值：m/z 533.1540[M-H]-。
[5-乙酰胺基-4-叔丁氧基羰基氨基-6-(1,2,3-三乙酰氧基)丙基-4,5,6-三氢吡 喃-2-基]膦酸酯(78)
在氢气气氛下，将叠氮化物77(249mg，0.47mmol)在乙醇(21mL)中的溶液用Lindlar催化剂(110mg)加氢。将混合物搅拌12h，通过硅藻土垫过滤，并用甲醇洗涤。将滤液在减压下浓缩以给出无色泡沫(240mg)。将胺的粗产物溶解在CH2Cl2(20mL)中，并用Boc2O(171mg，0.78mmol)和Et3N(191μL，1.42mmol)处理。将反应在室温搅拌12h，然后用1M HCl水溶液和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩。将残留物通过快速柱层析进行纯化(EtOAc)，得到作为白色泡沫的78(204mg，72％)。C25H41N2O13P；TLC(EtOAc)Rf＝0.25；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.75(1H,d,J＝9.3Hz),5.69(1H,dd,J＝10.5,1.7Hz),5.40(1H,d,J＝6.4Hz),5.22(1H,td,J＝6.4,2.6Hz),4.71(1H,d,J＝9.5Hz),4.42-4.36(2H,m),4.21-4.07(7H,m),2.07(3H,s),2.06(3H,s),2.02(3H,s),1.90(3H,s),1.38(9H,s),1.35-1.32(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.0,170.5,169.9,169.8,156.2,147.1(d,lJC-P＝225Hz),115.2(d,2JC-P＝22.8Hz),80.3,77.6(d,3JC-P＝9.9Hz),70.2,67.5,63.2(d,2JC-P＝5.4Hz),63.0(d,2JC-P＝6.1Hz),62.0,49.9(d,3JC-P＝14.4Hz),48.0,28.2,23.2,20.9,20.7,20.6,16.3,16.2；31PNMR(162MHz,CDCl3)δ6.1；HRMS，对C25H40N2O13P的计算值：607.2268，实测值：m/z 607.2269[M-H]-。
[5-乙酰胺基-4-叔丁氧基羰基氨基-6-[(2,2-二甲基-[1,3]二氧戊环-4-基)-羟 基-甲基]-5,6-二氢吡喃-2-基]膦酸酯(79)
向78(181mg，0.30mmol)在乙醇(9mL)中的溶液加入NaOEt(20mg，0.29mmol)。将混合物在室温搅拌0.5h，用Dowex 50W×8(H+)中和，过滤，在减压下浓缩，得到白色固体。将残留物溶解在丙酮(4mL)中，并加入对甲苯磺酸和2,2-二甲氧基丙烷。将混合物在室温搅拌16h，然后用Et3N淬灭反应。在浓缩后，将残留物通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc)，得到79(129mg，83％)。C22H39N2O10P；无色泡沫；TLC(EtOAc)Rf＝0.33；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.65(1H,d,J＝6.5Hz),5.62(1H,d,J＝10.0Hz),5.01(1H,br),4.82(1H,d,J＝8.6Hz),4.54(1H,br),4.24-4.19(1H,m),4.17-4.11(5H,m),4.01-3.95(2H,m),3.87(1H,m),3.45(1H,d,J＝7.6Hz),2.02(3H,s),1.42(9H,s),1.37-1.30(12H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ173.8,157.3,147.9(d,1JC-P＝220Hz),113.7(d,2JC-P＝24.0Hz),109.0,80.5,78.8(d,3JC-P＝9.0Hz),73.9,70.0,67.7,63.3(d,2JC-P＝6.0Hz),63.1(d,2JC-P＝6.0Hz),51.8,48.7(d,3JC-P＝15.0Hz),28.2,26.9,25.2,22.9,16.2-16.1(2x)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ5.1；HRMS，对C22H38N2O10P的计算值：521.2264，实测值：m/z 521.2267[M-H]-。
[5-乙酰胺基-4-叔丁氧基羰基氨基-6-[(2,2-二甲基-[1,3]二氧戊环-4-基)-(4- 硝基-苯氧基羰基氧基)-甲基]-5,6-二氢吡喃-2-基]膦酸二乙酯(80)
将79(129mg，0.25mmol)、氯甲酸4-硝基苯基酯(127mg，0.63mmol)在吡啶(4mL)中的溶液在室温搅拌18h。浓缩后，将残留物通过硅胶柱层析进行纯化(EtOAc/己烷＝1:3到EtOAc)，得到80(130mg，77％)。C29H42N3O14P；TLC(EtOAc:丙酮＝9:1)Rf＝0.48；无色固体；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(2H,d,J＝9.2Hz),7.49(2H,d,J＝9.0Hz),5.96(1H,d,J＝9.5Hz),5.71(1H,dd,J＝10.4,1.9Hz),5.23(1H,d,J＝5.2Hz),4.76(1H,m),4.51-4.46(1H,m),4.37-4.29(2H,m),4.21(1H,d,J＝10.1Hz),4.18-4.07(5H,m),4.02(1H,dd,J＝9.0,6.8Hz),1.94(3H,s),1.39(9H,s),1.39-1.32(12H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.1,156.3,155.7,152.4,146.6(d,1JC-P＝220Hz),145.5,125.2,122.3,115.7(d,2JC-P＝23.0Hz),108.8,80.3,77.7(d,3JC-P＝9.7Hz),74.9,74.3,65.5,63.1(d,2JC-P＝5.0Hz),62.9(d,2JC-P＝6.0Hz),60.3,49.7(d,3JC-P＝15.0Hz),28.1,26.2,25.3,23.1,16.2(d,3JC-P＝6.7Hz),16.2(d,3JC-P＝6.2Hz)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ6.3；HRMS，对C29H43N3O14P的计算值：688.2483，实测值：m/z 688.2482[M+H]+。
化合物82
向化合物81(47mg，0.20mmol)在CH3CN(5mL)中的溶液加入化合物80(120mg，0.17mmol)和Et3N(0.094mL，0.70mmol)。将混合物在室温搅拌12h，然后在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱层析进行纯化(MeOH/CH2Cl2＝1:9)，得到产物82(98mg，72％)。C35H53N4O14P；白色固体；TLC(MeOH/CH2Cl2＝1:9)Rf＝0.25；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.39(1H,d,J＝16.2Hz),7.00(1H,d,J＝1.7Hz),6.90(1H,dd,J＝8.5,2.1Hz),6.77(1H,d,J＝8.5Hz),6.37(1H,d,J＝15.8Hz),5.66(1H,d,J＝9.4Hz),5.20(1H,d,J＝6.4Hz),4.39-4.36(2H,m),4.30(1H,q,J＝6.1Hz),4.20-4.10(4H,m),4.08-4.04(2H,m),3.96(1H,dd,J＝8.6,6.4Hz),3.39-3.33(3H,m),3.20-3.06(2H,m),1.94(3H,s),1.80-1.67(2H,m),1.41(9H,s),1.38-1.29(12H,m)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ173.3,169.3,158.1,157.7,147.7(d,1JC-P＝201Hz),142.1,128.3,122.1,118.5,116.5,115.0,110.2,80.5,79.3,76.0,71.1,67.1,64.7-64.6(2x),51.5,39.3,37.8,30.2,28.7,26.9,25.7,23.1,16.7-16.6(2x)；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ7.7；HRMS，对C35H54N4O14P的计算值：785.3374，实测值：m/z 785.3364[M+H]+。
PZA(1Et)-7-CA-酰胺50
向82(52mg，0.066mmol)在CH3CN(15mL)中的溶液加入LiBr(23mg，0.26mmol)。在回流下搅拌12h后，将混合物在减压下浓缩。将残留物溶解在CH2Cl2(15mL)中，并加入TFA(2mL)。在室温下搅拌3h后，将混合物在减压下浓缩。将残留物通过RP-18反相柱层析进行纯化(MeOH/H2O＝5:95至40:60)并进行冷冻干燥，得到PZA(1Et)-7-CA-酰胺偶联物50(20mg，50％)。C25H37N4O12P；黄色固体；TLC(n-PrOH/H2O＝7:3)Rf＝0.77；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.38(1H,d,J＝12.0Hz),7.01(1H,s),6.90(1H,d,J＝8.6Hz),6.76(1H,d,J＝8.1Hz),6.36(1H,d,J＝15.5Hz),5.44(1H,d,J＝8.6Hz),4.98(1H,d,J＝9.8Hz),4.41(1H,d,J＝10.4Hz),4.24(1H,t,J＝10.4Hz),4.08(1H,q,J＝7.1Hz),4.03-3.96(2H,m),3.92-3.87(1H,m),3.61-3.57(1H,m),3.49-3.44(1H,m),3.35(2H,m),3.18-3.08(2H,m),2.00(3H,s),1.79-1.68(2H,m),1.29(3H,t,J＝6.8Hz)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ174.3,169.5,158.1,147.9(d,1JC-P＝202Hz),142.3,128.5,122.2,118.6,116.6,115.2,105.3,76.8,71.1,70.1,64.7,62.8,53.2,47.4,39.4,37.9,30.5,23.3,17.4(d,3JC-P＝6.3Hz)；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ2.3；HRMS，对C25H36N4O12P的计算值：615.2067，实测值：m/z 615.2066[M-H]-。
实施例34：PE-1-CA偶联物51的合成(图27)
(-)-(1S,4R)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环戊-2-烯-1-甲酸甲酯(85)
将(-)-(1R,4S)-2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮83(3.0g,27.5mmol)和1.25MHCl在MeOH(59.0mL，73.8mmol)中的混合物加热回流12h。将混合物在减压下浓缩，并将残留物与Et2O(42mL)搅拌。收集获得的固体，用Et2O洗涤，并在真空中干燥，给出4.2g(85％)(1S,4R)-(-)-甲基-4-氨基环戊-2-烯-1-甲酸酯盐酸盐(84)。在0℃下，在2.5h内，向化合物84(4.2g，23.6mmol)和二碳酸二叔丁基酯(10.86mL，47.3mmol)在CH2Cl2(120mL)中的混合物加入三乙胺(9.9mL，70.9mmol)。将混合物搅拌1h，并在硅胶上通过快速柱层析进行纯化(EtOAc/己烷，1:6)，得到化合物85(4.9g，86％)。C12H19NO4；白色固体；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.87-5.82(2H,m),4.88(1H,br s),4.76(1H,br s),3.70(3H,s),3.48-3.45(1H,m),2.50(1H,ddd,J＝13.6,8.4,8.4Hz),1.86(1H,ddd,J＝13.6,4.0,4.0Hz),1.43(9H,s)；ESI-HRMS，对C12H20NO4的计算值：242.1392，实测值：m/z 242.1395[M+H]+。
(+)-(3aR,4R,6S,6aS)-4-[(叔丁氧基羰基)-氨基]-3-(1-乙基丙基)-4,5,6,6a- 四氢-3aH-环戊[d]异噁唑-6-甲酸甲酯(86)
向烯烃85(1.3g，5.4mmol)、2-乙基丁醛肟(4.2g，36.5mmol)和Et3N(0.34mL，2.4mmol)在CH2Cl2(12mL)中的混合物加入漂白粉(34.7mL 13％NaOCl水溶液，72.7mmol)。将混合物加热回流44h，并通过TLC监测反应完成。将混合物用CH2Cl2萃取(3x45mL)。将合并的有机层用水和盐水洗涤，在无水Mg2SO4上干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。将残留物通过硅胶快速柱层析进行纯化(EtOAc/己烷梯度，1:12到1:9到1:6)，给出化合物86(1.1g，57％)。C18H30N2O5；浅黄色油状物；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.57(1H,d,J＝7.2Hz),5.17(1H,d,J＝9.2Hz),4.19(1H,br s),3.73(3H,s),3.56(1H,d,J＝9.6Hz),3.16(1H,d,J＝7.6Hz),2.50-2.46(1H,m),2.12-2.05(1H,m),2.02-1.97(1H,m),1.74-1.55(4H,m),1.41(9H,s),0.92-0.84(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.4,160.5,154.3,87.0,79.5,63.6,55.7,52.7,52,3,40.7,33.6,28.7,26.0,24.3,12.5,11.2；ESI-HRMS，对C18H31N2O5的计算值，355.2233，实测值：m/z 355.2233[M+H]+。
(-)-(1S,2S,3R,4R)-3-[(1S)-1-(乙酰基氨基)-2-乙基丁基]-4-[(叔丁氧基羰 基)氨基]-2-羟基环戊烷甲酸甲酯(88)
向86(951.1mg，2.7mmol)在MeOH(20mL)中的溶液加入浓HCl(0.2mL，2.7mmol)和PtO2·H2O(92.1mg，0.4mmol)。将混合物在100psi氢气压力下非常剧烈地搅拌8h。通过过滤除去催化剂，并将滤液浓缩，给出(-)-(1S,2S,3R,4R)-3-[(1S)-1-(氨基)-2-乙基丁基]-4-[(叔丁氧基-羰基)氨基]-2-羟基环戊烷甲酸甲酯盐酸盐(87)，将其用于乙酰化。在室温下向87(1.1g，2.7mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液加入Et3N(0.37mL，2.7mmol)和Ac2O(0.28mL，3.0mmol)。将混合物搅拌12h，然后用水(10mL)洗涤。将水层用CH2Cl2(4mL)回萃。将合并的有机层用水和盐水洗涤，在无水Mg2SO4上干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过硅胶快速柱层析进行纯化(EtOAc/己烷梯度，1:3至1:1)，给出化合物88(730.8mg，从86计为68％)。C20H36N2O6；白色固体；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52(1H,d,J＝10Hz),4.76(1H,d,J＝9.2Hz),4.21(1H,d,J＝4.8Hz),4.13-4.09(1H,m),4.02-3.97(1H,m),3.68(3H,s),2.82-2.78(1H,m),2.50-2.42(1H,m),2.04(3H,s),1.98-1.95(1H,m),1.67(1H,ddd,J＝14.0,8.4,5.6Hz),1.42-1.19(15H,m),0.89-0.75(6H,m)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.7,170.8,155.4,79.9,77.6,52.2,52.0,50.5,49.1,48.2,43.6,33.5,28.7,23.6,22.2,21.6,11.0,10.5；ESI-HRMS，对C20H37N2O6的计算值：401.2652，实测值：m/z 401.2648[M+H]+。
(-)-(1S,2S,3R,4R)-3-[(1S)-1-(乙酰基氨基)-2-乙基丁基]-4-({[(叔丁氧基羰 基)氨基][(叔丁氧基羰基)亚氨基]甲基}氨基)-2-羟基环戊烷甲酸甲酯(90)
将88(818.9mg，2.04mmol)在Et2O(8.0mL)中的溶液用Et2O(3.3mL，6.54mmol)中的2M HCl处理。将混合物在室温搅拌18h。收集获得的固体，用Et2O洗涤，在真空中干燥，给出726.5mg的89，其不需进一步纯化用于下一步中。将89(726.5mg，2.16mmol)在DMF(7.7mL)中的溶液相继用Et3N(1.1mL，7.55mmol)、1,3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(626.3mg，2.16mmol)和HgCl2(585.6mg，2.16mmol)处理。将混合物在室温搅拌19h，用EtOAc(200mL)稀释，并通过硅藻土垫过滤。将滤液用水和盐水洗涤，在无水Mg2SO4上干燥并过滤。将滤液浓缩，通过硅胶快速柱层析进行纯化(EtOAc/己烷梯度，1:2至2:3)，给出化合物90(730.8mg，从88计为83％)。C26H46N4O8；白色泡沫；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.36(1H,s),8.69(1H,d,J＝10Hz),8.57(1H,d,J＝8.4Hz),4.48-4.39(1H,m),4.28-4.26(1H,m),4.22(1H,s),3.95(1H,t,J＝10Hz),3.70(3H,s),2.83-2.79(1H,m),2.52(1H,ddd,J＝13.6,8.8,8.8Hz),2.09(3H,s),2.08-2.07(1H,m),1.83(1H,ddd,J＝13.6,8.4,6.0Hz),1.48(9H,s),1.46(9H,s),1.42-1.21(5H,m),0.79(3H,t,J＝6.8Hz),0.74(3H,t,J＝7.2Hz)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.8,171.4,162.4,155.5,152.8,83.7,79.8,78.0,52.2,51.9,50.8,49.2,48.5,43.3,33.8,28.4,28.1,23.4,22.5,21.6,10.7,10.1；ESI-HRMS，对C26H47N4O8的计算值：543.3394，实测值：m/z 543.3399[M+H]+。
(-)-(1S,2S,3R,4R)-3-[(1S)-1-(乙酰基氨基)-2-乙基丁基]-4-({[(叔丁氧基羰 基)氨基][(叔丁氧基羰基)亚氨基]甲基}氨基)-2-羟基环戊烷甲酸(91)
将90(921.7mg，1.70mmol)在EtOH/THF(1:1，6.2mL)中的溶液在室温下用1M氢氧化钠(6.1mL，6.11mmol)处理3h。将混合物浓缩。将残留物溶解在水(12.3mL)中，并用乙酸酸化。通过过滤收集由此获得的沉淀物，给出化合物91(448.9mg，50％)。C25H44N4O8；白色固体；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.37(1H,s),8.80(1H,d,J＝10.4Hz),8.58(1H,d,J＝8.4Hz),4.47-4.36(2H,m),4.00(1H,t,J＝9.6Hz),2.82(1H,t,J＝6.8Hz),2.51(1H,ddd,J＝13.6,8.8,8.8Hz),2.12(3H,s),2.09-2.06(1H,m),1.94-1.85(1H,m),1.49(9H,s),1.47(9H,s),1.42-1.21(6H,m),0.80(3H,t,J＝6.8Hz),0.76(3H,t,J＝12Hz)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.5,171.7,162.4,155.5,152.8,83.8,79.8,77.8,51.6,50.9,49.7,48.7,43.4,33.7,28.4,28.1,23.3,22.5,21.6,10.8,10.3；ESI-HRMS，对C25H45N4O8的计算值：529.3237，实测值：m/z 529.3243[M+H]+。
4-((1E)-3-(3-(((1S,2S,3R,4R)-3-((S)-1-乙酰胺基-2-乙基丁基)-4-(2,3-双 (叔丁氧基羰基)胍基)-2-羟基环戊烷羰基)氧基)丙氧基)-3-氧丙-1-烯-1-基)-2-亚苯基 二乙酸酯(93)
将91(88.9mg，0.17mmol)、92(59.6mg，0.18mmol)、EDCI(35.5mg，0.18mmol)和4-二甲基氨基吡啶(22.6mg，0.18mmol)在CH2Cl2(5.0mL)中的溶液在室温搅拌2h。将混合物用1MHCl、饱和NaHCO3和盐水萃取，在MgSO4上干燥，在减压下浓缩并通过硅胶快速柱层析进行纯化(EtOAc/己烷梯度，1:2至2:1)，给出化合物93(45.2mg，32％)。C41H60N4O14；透明油状物；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.37(1H,s),8.71(1H,d,J＝10.0Hz),8.58(1H,d,J＝8.4Hz),7.59(1H,d,J＝16.0Hz),7.38(1H,dd,J＝8.4,2.4Hz),7.33(1H,d,J＝2.4Hz),7.20(1H,d,J＝8.4Hz),6.35(1H,d,J＝16.0Hz),4.48-4.43(1H,m),4.29-4.21(5H,m),3.97(1H,t,J＝9.6Hz),2.83(1H,t,J＝6.8Hz),2.55(1H,ddd,J＝13.6,8.8,8.8Hz),2.29(6H,s),2.13-2.08(4H,m),2.07-2.03(2H,m),1.89-1.82(2H,m),1.49(9H,s),1.47(9H,s),1.33-1.20(4H,m),0.80(3H,t,J＝7.2Hz),0.75(3H,t,J＝7.2Hz)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ174.3,171.5,167.8,167.7,166.1,162.4,155.5,152.8,143.3,142.9,142.2,133.0,126.3,123.8,122.6,118.8,83.8,79.8,78.0,61.7,61.1,51.9,50.8,49.4,48.6,43.2,33.8,29.8,28.4,28.1,23.4,22.5,21.6,20.8,10.7,10.1；ESI-HRMS，对C41H61N4O14的计算值：833.4184，实测值：m/z 833.4185[M+H]+.。
PE-1-CA(51)
通过与用于43类似的程序，将93在K2CO3水溶液中皂化，然后用TFA除去t-Boc基团，给出PE-1-CA(51)。
实施例35：PE-2-CA偶联物52的合成(图28)
(1S,2S,3R,4R)-甲基-3-((S)-1-乙酰胺基-2-乙基丁基)-4-(2,3-双(叔丁氧基羰 基)胍基)-2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)环戊烷甲酸酯(94)
将90(114.4mg，0.21mmol)、氯甲酸4-硝基苯基酯(297.4mg，1.48mmol)和4-二甲基氨基吡啶(297.4mg，1.48mmol)在无水吡啶(180.3mg，1.48mmol)中的溶液在室温搅拌19h。浓缩后，将混合物加入到EtOAc中，然后过滤。将滤液在减压下浓缩，并通过硅胶快速柱层析进行纯化(EtOAc/己烷梯度，1:5至1:4)，给出化合物94(61.0mg，41％)。C33H49N5O12；透明油状物；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.46(1H,s),8.56(1H,d,J＝8.4Hz),8.22(2H,d,J＝9.2Hz),8.13(1H,d,J＝10.4Hz),7.51(2H,d,J＝8.8Hz),5.49(1H,d,J＝5.6Hz),4.66(1H,qui,J＝8.8Hz),4.31-4.27(1H,m),3.72(3H,s),2.99-2.96(1H,m),2.59(1H,ddd,J＝13.6,8.8,8.8Hz),2.00(3H,s),1.93-1.80(2H,m),1.48(9H,s),1.45(9H,s),1.41-1.25(5H,m),0.83(3H,t,J＝1.2Hz),0.78(3H,t,J＝7.2Hz)；ESI-HRMS，对C33H50N5O12的计算值：708.3451，实测值：m/z 708.3450[M+H]+。
(1S,2S,3R,4R)-甲基-3-((S)-1-乙酰胺基-2-乙基丁基)-4-(2,3-双(叔丁氧基羰 基)胍基)-2-(((3-(((E)-3-(3,4-双(烯丙氧基)苯基)丙烯酰基)氧基)丙基)氨甲酰基)氧 基)环戊烷甲酸酯(96)
向咖啡酸衍生物95(47.4mg，0.11mmol)在CH2Cl2(0.63mL)中的溶液加入TFA(0.63mL，8.22mmol)。在室温搅拌1h后，将混合物在减压下浓缩。将残留物溶解在CH3CN(0.91mL)中，然后加入1,3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(31.3mg，0.04mmol)和Et3N(0.03mL，0.22mmol)。将混合物在室温搅拌2h，然后在减压下浓缩。将残留物在CH2Cl2和饱和NaHCO3之间分配。将有机层在MgSO4上干燥，过滤并在减压下通过旋转蒸发进行浓缩。将粗材料通过硅胶快速柱层析进行纯化(EtOAc/己烷梯度，1:1至2:1)，给出氨基甲酸酯96(25.8mg，66％)。C45H67N5O13；透明油状物；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.44(1H,s),8.57(1H,d,J＝8.0Hz),8.27(1H,d,J＝10.0Hz),7.56(1H,d,J＝15.6Hz),7.06-7.04(2H,m),6.84(1H,d,J＝8.8Hz),6.25(1H,d,J＝16.0Hz),6.11-6.00(2H,m),5.82(1H,t,J＝5.6Hz),5.43(1H,dd,J＝6.4,1.6Hz),5.39(1H,dd,J＝6.4,1.6Hz),5.27(2H,dd,J＝10.4,1.6Hz),5.05-5.03(1H,m),4.62-4.61(4H,m),4.49(1H,qui,J＝8.4Hz),4.25-4.18(2H,m),4.17-4.09(1H,m),3.71(3H,s),3.26-3.23(2H,m),2.97-2.92(1H,m),2.44(1H,ddd,J＝12.8,8.0,8.0Hz),2.30-2.26(1H,m),2.07(3H,s),1.90-1.87(2H,m),1.82-1.75(1H,m),1.48(9H,s),1.45(9H,s),1.39-1.12(5H,m),0.84-0.77(6H,m)；ESI-HRMS，对C45H68N5O13的计算值：886.4814，实测值：m/z 886.4813[M+H]+。
PE-2-CA(52)
通过与用于7的类似的程序，在KOH水溶液中对化合物96进行皂化，然后分别用Pd(PPh3)4和TFA除去烯丙基和t-Boc基团，给出PE-2-CA(52)。
在本说明书中引用的所有出版物和专利申请通过参考并入本文，如同每个单个出版物或专利申请被具体且单个地指明通过参考并入本文。
尽管出于清楚理解的目的已通过图示和实例对上述的发明进行了一些细节描述，但对于本领域普通技术人员来说，显然根据本发明的教示，可以对其做出某些改变和修改，而不背离权利要求书的精神或范围。
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其他实施方式
本说明书中公开的所有特征可以以任何组合方式组合。本说明书中公开的每个特征，可以被用于相同、等同或类似目的的可替选特征代替。因此，除非另有明确陈述，否则公开的每个特征仅仅是一系列总的等同或相似特征中的一个实例。
从上面的描述，本领域技术人员可以容易地确定本发明的本质特征，并且可以在不背离其精神和范围的情况下，对本发明做出各种改变和修改，以使其适应于各种用法和条件。因此，其他实施方式也在权利要求书的范围之内。

Claims (6)

1.一种化合物，所述化合物选自由以下所组成的群组：
2.一种用于在受试者中治疗流感感染的药物组合物，所述组合物包含：权利要求1的化合物或其可药用盐；以及可药用赋形剂。
3.权利要求2的药物组合物，其中所述组合物用于抑制人和禽流感病毒两者。
4.权利要求2的药物组合物，其中所述组合物用于抑制流感病毒的H1N1和H5N1毒株中的至少一种。
5.权利要求1的化合物或权利要求2的药物组合物在制造药物中的用途，所述药物用于在受试者中治疗流感感染。
6.权利要求5的用途，其中所述受试者患有、被怀疑患有流感病毒感染或处于流感病毒感染的风险中。
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