ES2555220T3 - Donantes de sialil-fosfato selectivos para la preparación de sialósidos y matrices de sialósidos para la detección del virus de la gripe - Google Patents
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Abstract
Un compuesto donante de sialil-fosfato para la síntesis de sialósidos, en donde el compuesto tiene la estructura:**Fórmula**
Description
En algunos aspectos, los bloques de construcción de disacáridos de sialilo comprenden uno o más del grupo que consiste en Neu5Acα(2→3)Gal, Neu5Acα(2→6)Gal, Neu5Acα(2→6)GalNAc, Neu5Acα(2→9)Neu5Ac y Neu5Acα(2→8)Neu5Ac. Uno o más de los polisacáridos de sialilo corresponden a sialósidos α(2→3) o α(2→6) que se producen de forma natural. Los polisacáridos de sialilo se unen a proteínas hemaglutinina (HA) del virus de la gripe. En algunos aspectos, los polisacáridos de sialilo se unen a un patógeno, un agente infeccioso, un marcador de células cancerígenas, un virus, una bacteria o un hongo.
También se describe un método para detectar la unión a un sialósido, comprendiendo el método inmovilizar una pluralidad de polisacáridos de sialilo, en el que los polisacáridos se sintetizan a partir de bloques de construcción de disacáridos de sialilo generados por acoplamiento del donante de sialil-fosfato de dibutilo N-acetil-5-N,4-O-carboniloprotegido con un aceptor adecuado, en sitios discretos en una matriz; poner en contacto la matriz con una muestra de la que se sospecha que contiene un agente que se une a un sialósido en la matriz; detectar una reacción de unión en la matriz; y determinar la presencia o ausencia del agente basado en la detección de una reacción de unión en la matriz. En algunos aspectos, el sialósido en la matriz comprende un glicano que se encuentra en un receptor de la superficie celular. En algunos aspectos, el agente comprende una glicoproteína de superficie de un patógeno o un fragmento activo de la misma.
En algunos aspectos, el agente comprende una proteína hemaglutinina de la gripe o un fragmento activo de la misma. La proteína hemaglutinina de la gripe o un fragmento activo de la misma comprende un virus natural. La proteína hemaglutinina de la gripe o un fragmento activo de la misma comprende una proteína HA recombinante, un polipéptido o una variante activa de la misma.
En algunos aspectos, la matriz comprende α(2→3) y α(2→6) sialósidos de longitudes variables. El patrón de unión en la matriz es distintivo de una cepa de virus de la gripe. La cepa del virus de la gripe se selecciona del grupo que consiste en H1N1, H3N1, H3N2, H5N1, H5N2, H7N7 y H9N2. El perfil de unión de la proteína HA o fragmento de una cepa del virus de la gripe depende de la secuencia o la longitud de los α(2→3) y α(2→6) sialósidos. En algunos aspectos, la cepa del virus de la gripe se selecciona del grupo que consiste en Cal/09 H1N1 pandémica, Brisbane/59/2007 (Br/59/07) estacional, H1N1/New Caledonia/1999 (NC/99), Brisbane H3N1 y NIBRG-14 (H5N1), Br10 (H3N2), Cal07 (H1N1) H5 (Vietnam 1194/2004 y CHA5), WSN (H1N1) 1933 y A/Puerto Rico/8/34 (H1N1):virus de la gripe cepa PR8.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
Los siguientes dibujos de esquemas y figuras forman parte de la presente memoria descriptiva y se incluyen para demostrar adicionalmente determinados aspectos de la presente descripción, cuyas invenciones se puede entender mejor por referencia a uno o más de estos dibujos en combinación con la descripción detallada de realizaciones específicas presentadas en esta memoria.
El Esquema 1 muestra la Síntesis escalonada del trisacárido 28 α(2→6)-enlazado al receptor de HA de la gripe. aReactivos y Condiciones: (a) 6a (1,5 equiv), 13 (1,0 equiv), TMSOTf (1,5 equiv), 4Å MS, CH2Cl2, -78°C; (b) 14 (1,2 equiv), 27 (1,0 equiv), NIS (2,0 equiv), TMSOTf (0,5 equiv), 4Å MS, CH2Cl2, -40°C.
El Esquema 2 muestra la Síntesis en un Solo Recipiente de los Trisacáridos α(2→3)-y α(2→6)-Enlazados a Receptores de HA de la Gripe y Tetrasacárido del Epítopo DSGG. Reactivos y Condiciones: (a) 6a (1,5 equiv), 4Å MS, TMSOTf (1,5 equiv), -78°C, CH2Cl2; (b) -78°C → -40°C. (c) NIS (1,2 equiv), global 80% para 28, α solamente; 79% para 29, α solamente; 57% para 30, α solamente.
El Esquema 3 muestra la Síntesis en un Solo Recipiente de los Hexasacárido SSEA-4. Reactivos y Condiciones: (i) TMSOTf, MS 4Å, CH2Cl2, -78°C; (ii) NIS, global 78%; (iii) (a) NaOMe, MeOH (b) Zn, AcOH, THF;(c) Ac2O, piridina, DMAP (d) NaOH 0,1 N, (e) Pd(OH)2, H2, THF: MeOH:AcOH:H2O = 10:8:1:0,7 (v/v)
El Esquema 4 muestra la síntesis del Disacárido 33. Reactivos y Condiciones: (a) TMSOTf, NIS, CH2Cl2/H2O (9:1), 0°C, 75%; (b) K2CO3, CCl3CN, 65%; (c) TMSOTf, MS 4Å, -40°C, 60%; (d) DDQ, CH2Cl2/H2O (9:1), 96%.
El Esquema 5 muestra la síntesis de Bloques de Construcción de Disacáridos α(2→9)-enlazados. Reactivos y Condiciones: (a) fosfato de dibutilo, NIS, TfOH, CH2Cl2, 0°C, 96%; (b) TMSOTf, CH2Cl2/MeCN, -78°C, 1 h, 80%; (c) tiourea, 2,6-lutidina, DMF, 60°C, 12 h, 82%; (d) Ac2O, Piridina, DMAP, CH2Cl2, -50°C, 5 h, 80%; (e) fosfato de dibutilo, NIS, TfOH, CH2Cl2, 0°C, 3 d, 73%.
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Tal como se ha descrito previamente, la preparación de donantes de sialil-fosfato provino de la oxidación del correspondiente sialil-fosfito7a,7d. Desafortunadamente, se observó una deficiente eficiencia cuando estos compuestos de fosfato fueron investigados como donantes de sialilo, que resultaron en un bajo rendimiento y una selectividad α disminuida7a,7d. Por otra parte, en contraposición con el donante de sialil-fosfato, se han utilizado otros 5 donantes de fosfatos de glicosilo tales como los de fucosa, manosa, galactosa, glucosa y glucosamina en la construcción de O-glicósidos24 y C-glicósidos25, y especialmente en la síntesis en fase sólida automatizada de oligosacáridos18.26. Debido a que grupos lábiles a base de fosfato pueden ser activados selectivamente en presencia de tioglicósido, es deseable explorar la síntesis y la utilidad de donantes de sialil-fosfato. Sorprendentemente, sialilfosfato de dibutilo 2 se puede sintetizar con un alto rendimiento (94%) mediante el tratamiento de donante de
10 tiosialósido 1 y fosfato de dibutilo comercialmente disponible en presencia de N-yodosuccinimida y ácido trifluorometanosulfónico (tríflico) catalítico (NIS/cat. TfOH) a 0°C en CH2Cl2 (Tabla 1, entrada 1-2). La reacción se completó en 5 h para dar una mezcla de anómeros α y ß. El sialil-α-fosfato 2a y sialil-β-fosfato 2b se pueden separar fácilmente por cromatografía en columna de gel de sílice y ambos son estables a -20°C durante varios meses.
Tabla 1. Síntesis de Donantes de Sialil-Fosfato N-acetilo, N-TFA, N-acetil-5N,4O-carbonilo-protegidos
Las propiedades de los donantes de glicosilo de sialil-α-fosfato 2a se sometieron inicialmente a ensayo mediante
20 acoplamiento con aceptor de galactopiranósido 723 que porta un grupo OH libre en la posición 6 y un grupo lábil tiocresol (Tabla 2). A una mezcla en agitación de 2a (1,5 equiv), 7 (1,0 equiv) y MS 4Å en CH3CN a -40°C bajo argón, se añadió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (TMSOTf; 1,5 equiv). La reacción se completó en 5 min, y el producto de glicosilación 8 se obtuvo en un rendimiento de 74% con una relación α/β de 5:1 (entrada 1). A
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continuación, también se evaluó la glicosilación de sialil-β-fosfato 2b y aceptor 7 en las mismas condiciones de reacción. Sin embargo, cuando se utilizó un equivalente de TMSOTf, una parte de β-fosfato 2b no se activó, incluso con un tiempo de reacción prolongado. Después de la adición de otro equivalente de TMSOTf, el donante de βfosfato 2b se consumió completamente y produjo el disacárido deseado 8 en un rendimiento de 75%, aunque con una ligera disminución en la selectividad α (entrada 2). Estos resultados son consistentes con el hecho de que el donante de glicosilo ecuatorial es más reactivo que su contraparte axial24f.
Tabla 2. Glicosilación de Donantes de Sialil-Fosfato N-acetilo, N-TFA, N-acetil-5N,4O-carbonilo-protegidos
º Rendimiento aislado. bDeterminado mediante análisis 1H-RMN de la mezcla de reacción
Donantes de Sialil-Fosfato de Dibutilo N-trifluoroacetil y N-acetil-5-N,4-O-Carbonilo-Protegidos
Se ha reseñado que el reemplazo del grupo acetamido C-5 de sialil-fosfato con el grupo azida14a o trifluoroacetamido14b mejoró en gran medida tanto la selectividad α como la reactividad. Utilizando esta estrategia, los autores de la invención sintetizaron N-TFA sialil-fosfato 4 a partir del tiosialósido 315b bajo las condiciones arriba mencionadas (Tabla 1, entrada 3-4). Para la comparación con 2a, α-4a y ß-4b los anómeros se separaron y aceptor 7 se glicosiló con 4a bajo promoción de TMSOTf a -40°C en MeCN. Los resultados demostraron de hecho un rendimiento (97%) y selectividad α muy mejorados (relación α/β de 8:1) (Tabla 2, entrada 3). Dado que se demostró que los tiosialósidos con protecciones N-acetil-5-N,4-O-carbonilo27o 5-N,4-O-carbonilo28, dan una alta selectividad α y excelentes rendimientos hacia diferentes aceptores, los autores de la invención decidieron someter a ensayo un nuevo donante de sialil-fosfato con protección N-acetil-5-N,4-O-carbonilo, ya que el grupo oxazolidinona podría ser escindido bajo condiciones suaves dejando intacta la acetamida27a. El compuesto 5 se transformó en donante de fosfato de dibutilo 6 en un rendimiento casi cuantitativo (Tabla 1, entrada 5-6); el anómero α de tiosialósido dio más producto α fosfato (Tabla 1, entrada 1-4).
El compuesto 6, sin separación de la mezcla α, β, se acopló al aceptor 7 bajo promoción de TMSOTf en CH3CN a 40°C para dar el disacárido 10 con un rendimiento muy alto (96%) y selectividad α marcadamente mejorada (relación α/β de 15:1) (Tabla 2, entrada 4). Los autores de la invención también observaron que la protección N-acetil-5-N,4O-carbonilo potenciaba la reactividad de 6, dado que la mezcla de α-y β-fosfato fue completamente activada con solamente un equivalente de TMSOTf.
Efectos de los Grupos Lábiles y Sistemas de Disolventes en Selectividad α de Donantes de Saililo N-acetil-5N,4Ocarbonilo-protegidos
Para estudiar la influencia de diferentes grupos lábiles en el donante de sialil-fosfato N-acetil-5-N,4-O-carboniloprotegido 6 y sus homólogos toliltio y feniltio, 5 y 5c27a fueron examinados mediante acoplamiento con el hidroxilo
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primario del aceptor de glucosa 11 en CH2Cl2 a -40ºC (Tabla 3). A partir de los resultados de la Tabla 3, el donante de fosfato 6 mostró una mayor selectividad α (entrada 3) que 5 (entrada 1) y 5c (entrada 2). Además, sólo se requieren 5 min para la compleción de la reacción en comparación con 30 min y 2 h para 5 y 5c, respectivamente. A continuación, con el fin de conocer el efecto del disolvente sobre las propiedades donantes de glicosilo del donante de fosfato 6, los autores de la invención sometieron a ensayo su reacción con el aceptor 11 en MeCN y CH2Cl2, respectivamente (entradas 3 y 4), y se encontró que cuando el disolvente se cambió de MeCN a CH2Cl2, el rendimiento mejoró de 80% a 92% y la relación α/β también se mejoró en gran medida de 7:1 a 13:1. Un efecto nitrilo no se observó en este caso. En resumen, estos resultados demostraron que la conversión del grupo lábil sulfuro de 6 en fosfato de dibutilo mejoró la selectividad α y la reactividad.
Tabla 3. Comparación de la Glicosilación Utilizando Donantes de Ácido Siálico N-acetil-5-N, 4-O-Carbonilo Protegido con Grupos Lábiles Tiofenilo, Tiocresol y Fosfato de Dibutilo
aDonante (1,3 equiv), aceptor (1,0 equiv); b NIS (2,0 equiv), TfOH (1,0 equiv), TMSOTf (1,3 equiv); la Glicosilación de 5 fue lenta cuando se utilizó una cantidad catalítica de TfOH; c Rendimiento aislado; d Determinado mediante análisis 1H-RMN de la mezcla de reacción
Síntesis alfa-selectiva de Bloques de Construcción de Disacáridos Neu5Acα(2→6)Gal y Neu5Acα(2→3)Gal.
Los autores de la invención centraron primero su estudio sobre la identificación de aceptores adecuados para la síntesis α-selectiva de bloques de construcción de disacáridos con enlace Neu5Acα(2→6)Gal. Con el fin de facilitar la formación del enlace β deseado mediante la utilización de la participación del grupo vecino en la glicosilación subsiguiente, era deseable instalar el grupo éster de benzoílo en C-2 de los aceptores de galactosa. Para su sorpresa, la glicosilación del aceptor tiogalactósido 4,6-dihidroxi 1329 con donante de sialil-fosfato 6a en presencia de TMSOTf (1 eq de donante) en CH2Cl2 a -78°C dio el disacárido Neu5Acα(2→6)Gal 14 como un único producto α en un rendimiento de 85% (Tabla 4, entrada 1). La configuración a se confirmó mediante el acoplamiento constante de3JC1-Heq. Los autores de la invención centraron luego su atención a la síntesis del disacárido Neu5Acα(2→3)Gal, que es más difícil, debido a la posición C-3 menos reactiva del aceptor de galactosa. Al principio, se utilizó tolil-4,6bencilidina-1-tio-β-D-galactopiranósido 1530 (Tabla 4, entrada 2) como aceptor debido a que se demostró previamente una mejor selectividad α14d,31. Bajo promoción de TMSOTf a -78°C en CH2Cl2, la glicosilación del aceptor 15 (1.5 equiv) con donante de sialil-fosfato 6a (1,0 equiv) dio el producto α principal 16 en un 41%, junto con 39% de producto secundario (compuesto 5) que se formó a partir de una reacción de transferencia de aglicona. Para eliminar la transferencia de aglicona, los autores de la invención introdujeron el grupo benzoilo eliminador de electrones en C-2 de 15 para reducir la reacción secundaria32. Además, el éster de benzoilo en la posición C-2 debería fomentar la glicosilación β-selectiva a través de la participación de grupos vecinos. De hecho, se obtuvieron un alto rendimiento (83%) y el producto α-anomérico cuando se utilizó el aceptor tolil-2-O-benzoil-4,6-bencilidina-1tio-β-D-galactopiranósido 178b, con sólo el 5% del producto de transferencia (entrada 3). Este bloque de construcción
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de disacárido α(2→3)-enlazado con un grupo lábil adecuado en el centro anomérico de galactosa se puede utilizar directamente en la siguiente glicosilación sin la necesidad de proteger la manipulación de grupo.
Tabla 4. Resultados de la Sialilación Utilizando Sialil-Fosfato N-acetil-5-N,4-O-Carbonilo Protegido 6a
a Rendimiento aislado. b Resultado bruto
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Los autores de la invención también observaron que la reactividad entre 6a y 6b no se percibía a -40°C, mientras que la diferencia es notable a -78°C. Para investigar las diferencias de reactividad entre α-y β-fosfatos, los autores de la invención separaron entonces la mezcla de 6a y 6b y los acoplaron con aceptor de galactosa 17, respectivamente (Tabla 5). En presencia de 1,0 equivalente de TMSOTf, el β-fosfato 6b no prosiguió a una activación completa hasta que la temperatura se incrementó a -50°C (entrada 2), mientras que el donante de αfosfato fue completamente activado a -78°C (entrada 1). En ambos casos, el rendimiento del producto de glicosilación 18 es similar, pero la selectividad α disminuyó en el caso de β-fosfato 6b. Los resultados demostraron que la temperatura es un factor importante para controlar la selectividad α de sialilación con donante de sialil-fosfato
6. Además de ello, la diferencia en la reactividad entre sialil α-fosfato 6a y β-fosfato 6b es menor que otros fosfatos de glicosilo; por ejemplo, el galactosil α-fosfato solamente se activó a una temperatura superior a -20°C, mientras que galactosil β-fosfato se activó fácilmente a -78°C24f.
Tabla 5. Comparación de las Reactividades entre Sialil-α-Fosfato 6a y Sialil-β-Fosfato 6b
Entrada Donante Tiempo de Reacción T(ºC) Rendimientoa 18:18bb 1 6a 5 min -78ºC 83% 18 sólo 2 6b 5 min -50ºC 82% 10:1
a Rendimiento aislado; b Determinado mediante análisis 1H-RMN de la mezcla de reacción
Síntesis α-Selectiva del Bloque de Construcción de Disacárido Neu5Acα(2→6)GalNAc.
Las versiones sialiladas de las estructuras de núcleo O-glicano Tn (GalNAcα(1→1)Ser/Thr) y TF (Galβ(1→3)GalNAcα(1→1)Ser/Thr) están altamente expresadas en muchos tipos de tumores humanos, incluyendo el de colon, mama, páncreas, ovario y estómago33. La síntesis de antígenos sialilados O-enlazados tales como STn, 2,6-STF, 2,3-STF y glicoforina (Figura 1) es un reto, porque la reacción de sialilación a menudo da mezclas α y β, y son indispensables separaciones tediosas para obtener el producto α deseado34. Después del análisis de sus estructuras, son esenciales dos bloques de construcción L y M (Figura 1). Después de haber llevado a cabo la síntesis del bloque de construcción NeuAcα(2→3)Gal M, los autores de la invención están interesados en la síntesis del bloque de construcción NeuA5cα(2→6)GalNAc L. Al utilizar el concepto de "síntesis de casete", tal como se ha descrito previamente34-35, los autores de la invención sintetizaron el aceptor GalNAc 19 y 21 con los grupos OH C-3 y C-6 y fijaron el espaciador en el centro anomérico a través de enlaces α y β, respectivamente (Tabla 4, entrada 4 y 5). Así, después de la sialilación en 6-OH, el producto se alargaría directamente desde la posición C-3 sin proteger la manipulación del grupo. Por consiguiente, la sialilación de 19 (1,0 equiv) con donante de sialil-α-fosfato 6a (1,0 equiv) a -78°C proporcionó el disacárido 20 en un rendimiento de 71% y sólo se obtuvo producto α, junto con 13% de trisacárido 3,6-disialilado y 9% de subproducto de 2,3-eliminación (Tabla 4, entrada 4). Otra sialilación utilizando 21 como el aceptor, el disacárido 22 se logró en un rendimiento de 70%, junto con 14% de trisacárido 3,6-disialilado y 8% de subproducto de 2,3-eliminación (Tabla 4, entrada 5). Esta reacción de acoplamiento altamente α-selectivo eliminó la separación de estereoisómero que consume tiempo. Lo más importante, bloques de construcción de disacáridos de este tipo podrían utilizarse como materiales de partida para la preparación de otros antígenos sialilados O-enlazados.
Protocolo de un solo recipiente α-estereoselectivo.
Al lograr con éxito la síntesis estereoselectiva de disacáridos Neu5Acα(2→3)Gal, Neu5Acα(2→6)Gal y Neu5Acα(2→6)GalNAc, los autores de la invención dirigieron su atención hacia el desarrollo de un protocolo de un solo recipiente para la síntesis convergente y α-selectiva de sialósidos. La síntesis escalonada del trisacárido de
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Síntesis de ácidos polisiálicos α(2→9) como candidato de vacuna contra Neisseria meningitidis.
Alentados por los resultados anteriores, los autores de la invención se interesaron por la síntesis de ácidos polisiálicos más largos, ya que este tipo de glicanos es un objetivo importante para la vacuna contra Neisseria 5 meningitidis. Neisseria meningitidis es una bacteria diplococcus gram-negativa, que provoca aproximadamente el 60% de las enfermedades meningocócicas. En base a sus antígenos de superficie del polisacárido capsular, Neisseria meningitidis se puede clasificar en 13 serogrupos. Entre estos 13 serogrupos, A, B, C, Y y W135 son las principales cepas patógenas, mientras que algunos informes recientes indicaban el aumento de los casos de grupo X50. El grupo A es la causa principal de las enfermedades epidémicas en el mundo y a menudo provoca epidemias a 10 gran escala en los países de Asia y África por estaciones51. Los grupos B y C provocan con frecuencia casos esporádicos en países industrializados tales como Estados Unidos de América y el Reino Unido52. Además de ello, la prevalencia del grupo Y y W135 revela la tendencia creciente en América del Norte y Arabia Saudita en los últimos
años50,53
. El polisacárido capsular juega un papel importante en la patogénesis bacteriana. Las propiedades antifagocíticas ayudan a que las bacterias se escapen de la deposición del anticuerpo y complemento54-56 . Sin
15 embargo, debido a que el polisacárido capsular es el escudo más externo de las bacterias, se ha considerado que es el antígeno diana para el diseño de vacunas. Las estructuras de unidades repetitivas del polisacárido capsular de los grupos A, B, C, Y y W135 se muestran en la Tabla 7.
Tabla 7: Estructuras de unidades repetitivas del polisacárido capsular de N. meningitides de cinco cepas principales patógenas.
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Para evaluar las funciones de la vacuna molecular bien definida contra N. meningitides. Síntesis de vacunas basadas en ácido polisiálico α(2→9) o α(2→8) bien definidas eran un buen modelo para el estudio de la vacunación. Los autores de la invención utilizaron la estrategia [4 + 4] convenida para construir ácido octasiálico α(2→9). El
5 donante de ácido tetrasiálico 52 y el aceptor 53 pueden sintetizarse de forma similar a la utilizada para construir el donante de ácido disiálico 50 y el aceptor 48. Los procedimientos detallados y el rendimiento se muestran en el Esquema 6.
Para la conjugación de ácido polisiálico a la proteína portadora objetivo, los autores de la invención conjugaron un grupo azido alquil-pentilo en el extremo reductor, y luego alargaron la longitud del ácido siálico utilizando los
10 métodos mencionados anteriores. Los autores de la invención han sintetizado compuestos de ácido di-, tri-, tetra-, hexa-, octa-siálico con un grupo azido alquil-pentilo en el extremo reductor (Esquema 7).
Síntesis de ácidos polisiálicos α(2→8)/α(2→9) alternativos.
En comparación con ácidos polisiálicos α(2→9), la síntesis química de ácidos polisiálicos α(2→8)/α(2→9) alternativos era más desafiante, ya que es muy difícil purificar este tipo de glicanos de la naturaleza. Los autores de 15 la invención utilizaron la síntesis química para abordar este problema. En primer lugar, los autores de la invención utilizaron el mismo donante de sialil-fosfato 45 y el mismo aceptor 63 para sintetizar ácido disiálico 64 α(2→8) en el 83% con α/β = 13:1. El producto α puede ser purificado por cromatografía en gel de sílice. De manera similar a los métodos mencionados anteriores. El compuesto 64 se puede cambiar a donante de fosfato 65 y aceptor de ácido disiálico 66 en un rendimiento de 78% y 84%, respectivamente. Mediante el uso de procesos de glicosilación
20 similares, se puede obtener ácido tetra-, hexa-y octasiálico α(2→8)/α(2→9) alternativo en un sólo producto. Su proceso detallado, la condición y los rendimientos se muestran en el Esquema 8.
Asignación de Configuración Anomérica.
La configuración anomérica de los sialósidos resultantes se determinó mediante análisis de espectros de 1H RMN basados en el desplazamiento químico del grupo H-3 eq (los α-glicósidos están más campo abajo que los ß
25 glicósidos), las señales H-4 (los ß-glicósidos están más campo abajo que los α-glicósidos), la constante de acoplamiento J7,8 (los α-glicósidos son más grandes que los ß-glicósidos), el valor de Δδ(H-9' -H-9) (α-glicósidos: ~ 0,2 ppm Δδ , ß-glicósidos: Δδ > 0,3) (Tabla 8)14a, 35a, 57 y las constantes de acoplamiento 3JC1-H3ax (α-glicósidos > 5 Hz, ß-glicósidos <1 Hz) (Tabla 4)27a, 58.
Tabla 8. Análisis Parcial por 1H RMN para la Determinación de la Configuración Anomérica
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