CN104388330B - 一种l‑色氨酸发酵菌株及其发酵生产l‑色氨酸的方法 - Google Patents

一种l‑色氨酸发酵菌株及其发酵生产l‑色氨酸的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物领域，公开L‑色氨酸发酵菌株及其发酵生产L‑色氨酸的方法。本发明所述保藏编号为CGMCC No.7941的L‑色氨酸发酵菌株具有邻氨基苯甲酸耐受性。同出发菌株相比，该菌株具有更好的邻氨基苯甲酸耐受性，能够将更多的邻氨基苯甲酸转化为色氨酸，以使色氨酸能够高浓度积累，提高L‑色氨酸的产量和生产效率，满足L‑色氨酸的大规模工业化生产。

Description

一种L-色氨酸发酵菌株及其发酵生产L-色氨酸的方法
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体的说是涉及一种L-色氨酸发酵菌株及其发酵生产L-色氨酸的方法。
背景技术
L-色氨酸是人体和动物生命活动必需的氨基酸之一，对人和动物的生长发育、新陈代谢起着重要的作用，广泛应用于医药、食品和饲料等方面。在医药领域，色氨酸是氨基酸输液的重要组分和重要的医药中间体。在食品应用领域，色氨酸可用于强化食品，提高风味，也可用于面包促进发酵。在饲料添加领域，当赖氨酸和蛋氨酸得以满足之后，色氨酸成为日粮重要限制性氨基酸，补充外源色氨酸可以提高畜、禽、鱼类日粮内色氨酸的含量，改善日粮氨基酸组成和比例，提高日粮蛋白质的价值和利用效率。
L-色氨酸可由化学合成法、蛋白质水解法，酶促转化法、直接发酵法、添加前体发酵法进行生产。
早期，研究人员使用葡萄糖作为碳源，同时添加合成L-色氨酸所需的前体物(如邻氨基苯甲酸、吲哚、L-丝氨酸等)，利用微生物的色氨酸合成酶系转化前体来合成L-色氨酸，这种方法同直接发酵法一样，需要解除生物合成途径中大部分酶所受到的反馈调节，以使L-色氨酸能够高浓度积累。1987年，Kenzo Yokozkei等以DL-5吲哚-甲基乙内酰脲为原料，利用黄杆菌Flavobacteruim-T523将其分解为L-色氨酸，可产L-色氨酸7.lg/L(KenzoYokozeki et al.，Enzymatic Productionof L-tryptophan from DL-5-Indolylmethylhydantoin by Mutants of Flavo bacrerium sp.T-523+.Agric.Biol.Chem.1987,51(2):363-369)。1993年，北京的张素珍等研究报道，通过对北京棒杆菌ASI.299的诱变选育获得一株能转化吲哚、L-丝氨酸生产L-色氨酸能力较强的突变株E298-63，当底物浓度为15-30g/L，在适宜条件下转化24h即可产L-色氨酸20-30g/L，最高可达42.8g/L，对底物的转化率为80-90％(张素珍、刘英昊，用北京棒状杆菌细胞转化生产L-色氨酸，微生物学报，1993，33(l):69-73)。
目前工业上较常用以葡萄糖、甘蔗糖蜜等廉价原料为碳源，利用优良的L-色氨酸生产菌种来生产L-色氨酸。Berry A在大肠杆菌中高表达去除反馈抑制的aroG，TrpEDCBA基因，发酵50小时，产色氨酸40-45g/L，对葡萄糖的过程转化率超过22％(Barry A,Improvingproduction of aromatic compounds in Escherichia coli by metabolicengineering.Trends Biotechnol,14:250–256,1996)。Ikeda M等在产色氨酸的谷氨酸棒杆菌pIK9960中过表达tktA，增加色氨酸合成前体E4P的含量，从而提高色氨酸的合成产率，发酵80小时，色氨酸产量最高可达到58g/L(Ikead M等，Hyperproduction of tryptophanby corynebacterium glutamicum with the modified pentose phosphate pathway,Applied and environmental microbiology,1999,51:201-206)。
尽管L-色氨酸的产量已有很大的提高，但仍存在发酵周期长、糖酸转化率低导致生产成本高等问题。主要原因是从葡萄糖到L-色氨酸的生物合成途径长，需要多种来自不同代谢流路的前体物(如PEP，E4P，L-丝氨酸，谷氨酰胺，PRPP等)，尤其是PEP与L-丝氨酸来源于EMP途径，E4P与PRPP来源于HMP途径，在强化代谢流路的同时，不易实现代谢平衡。另外，L-色氨酸生物合成途径中的代谢调控机制也比较复杂，存在多种反馈抑制和反馈阻遏。细菌由葡萄糖合成色氨酸的理论转化率仅为23％左右，经过基因工程改造的色氨酸生产菌的理论转化率也不超过35％。现有生产菌对葡萄糖的糖酸转化率在13-20％之间(SprengerGA(2007)Aromatic amino acids.Amino acid biosynthesis-pathways,regulation andmetabolic engineering(VF Wendisch,ed).In:Steinbüchel A(ed)Microbiologymonographs.Springer,Berlin)。
邻氨基苯甲酸是色氨酸合成的中间产物。在以葡萄糖为碳源的培养过程中，细菌利用中央代谢产物PEP与E4P合成DAHP，DAHP经莽草酸途径生成分支酸(CHA)，分支酸经特定的六步酶化学反应合成色氨酸。其中第一步酶促反应即由分支酸与谷氨酰胺生成邻氨基苯甲酸(ANTA)、丙酮酸及谷氨酸(图1)。由邻氨基苯甲酸出发合成色氨酸避免了合成芳香环的高能耗，同时大大缩短了色氨酸合成路径，所需底物少，不易代谢失衡生成其他副产物，细菌由邻氨基苯甲酸合成色氨酸的理论转化率大于100％。同时邻氨基苯甲酸可由石油化工产品化学合成，成本低廉(0.8-2.5万元/吨)。因此在粮食短缺，玉米价格上涨，玉米淀粉来源的葡萄糖成本逐步上升的预期下，由邻氨基苯甲酸起始合成色氨酸具有经济可行性。
申请号为CN201010579428.8的中国专利采用低流量添加邻氨基苯甲酸的方式提高L-色氨酸的产量，初始流加速度为0.1-0.3g/L/h，最大流加速度为0.6-0.8g/L/h，总添加量6-8g/L，总产酸47g/L，按等摩尔比计算，来源于所添加的邻氨基苯甲酸的色氨酸占总产酸的25％。然而邻氨基苯甲酸的流加量必须掌握在与色氨酸的转化率基本平衡或略有剩余的情况下，稍有流加不当，就会影响发酵进行。因此，提高色氨酸基因工程菌对于邻氨基苯甲酸的耐受性，获得邻氨基苯甲酸的耐受菌，将有利于发酵生产控制，进一步增加邻氨基苯甲酸添加量，提高色氨酸的产量和生产效率。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供L-色氨酸发酵菌株及其发酵生产L-色氨酸的方法，以提高L-色氨酸的产量和生产效率，满足L-色氨酸的大规模工业化生产。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种L-色氨酸发酵菌株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7941
本发明同时提供了保藏编号为CGMCC No.7941L-色氨酸发酵菌株在生产L-色氨酸中的应用。
本发明还提供了一种L-色氨酸的生产方法，将保藏编号为CGMCC No.7941的L-色氨酸发酵菌株接种于种子培养基进行扩繁，然后将扩繁后的培养物转入发酵培养基发酵，发酵期间添加邻氨基苯甲酸并维持pH值为4-8。
作为优选，所述邻氨基苯甲酸添加量为至终浓度2g/L～5g/L。
作为优选，所述发酵期间的pH值为6.5-7.0。
作为优选，所述种子培养基由20g/L葡萄糖、10g/L酵母提取物、9.5g/L KH2PO4、5.0g/L(NH4)2SO4、2.0g/L MgSO4·7H2O组成，pH值为7.0-7.2。
作为优选，所述发酵培养基由60g/L葡萄糖、1.0g/L酵母提取物、5.0g/L KH2PO4、2.0g/L柠檬酸钠、5.0g/L(NH4)2SO4、2.0g/L MgSO4·7H2O、0.1g/L MnSO4·H2O、0.1g/LFeSO4·7H2O、0.1g/L ZnSO4·H2O、0.1g/L CoCl2·6H2O、0.03g/L CuSO4·5H2O、20g/L碳酸钙组成，pH值为7.0-7.2。
由以上技术方案可知，本发明所述保藏编号为CGMCC No.7941的L-色氨酸发酵菌株具有邻氨基苯甲酸耐受性。同出发菌株相比，该菌株具有更好的邻氨基苯甲酸耐受性，能够将更多的邻氨基苯甲酸转化为色氨酸，以使色氨酸能够高浓度积累，提高L-色氨酸的产量和生产效率，满足L-色氨酸的大规模工业化生产。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示大肠杆菌中芳香族氨基酸生物合成途径及其调控(Bongaerts J等,Metabolic engineering for microbial production of aromatic amino acids andderived compounds.Metabolic Engineering 3:289-300,2001)；
图2示实施例2出发菌株和诱变菌株的生长曲线图，其中示出发菌株SA01于M9培养基中培养的生长曲线图，示出发菌株SA01于含有邻氨基苯甲酸(ANTN)的M9培养基中培养的生长曲线图，示诱变菌株SA16于M9培养基中培养的生长曲线图，示出发菌株SA16于含有邻氨基苯甲酸(ANTN)的M9培养基中培养的生长曲线图。
生物保藏信息说明
菌株MHZ-0830：分类命名：大肠埃希氏菌，Escherichia coli于2013年7月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.7941。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明以色氨酸生产菌MHZ-0800为出发菌株，以亚硝基胍(NTG)为诱变剂对其进行化学诱变，然后将经诱变后的色氨酸生产菌MHZ-0800的悬浮菌液在LB培养基平板上划线。挑取单菌落，LB培养基培养后分别涂布在含5g/L邻氨基苯甲酸的M9培养基平板筛选出邻氨基苯甲酸耐受性较好的菌株，命名为菌株MHZ-0830(pMG43/SA16)。
其中，所述色氨酸生产菌MHZ-0800为根据专利WO 87/01130及Mascarenhas D等所描述的方法(Mascarenhas D等，Deletion of pgi alters tryptophan biosynthesis ina genetically engineered strain of escherichia coli.Applied and EnvironmentalMicrobiology,57:2995-2999，1991)构建的色氨酸生产菌(CGMCC NO.6863)，其宿主菌SA01为E.coli K-12(CICC 10303)衍生的E.coli K-12CICC 10303tnaA serA，包含质粒pMG43，为pBR322来源的，包含有serA，及反馈抑制去除aroG和trpEDCBA操纵子的质粒。
本发明所述的亚硝基胍(nitrosoguanidin，NTG)属烷化剂，是一类相当有效的化学诱变剂，具有一个或多个活性烷基，易取代DNA分子中活泼的氢原子，使DNA分子中的碱基及磷酸部分被烷基化，DNA复制时导致碱基配对错误而引起突变。
对于上述L-色氨酸发酵菌株MHZ-0830，本发明申请人已于2013年7月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，其保藏编号为CGMCCNo.7941。
本发明所述L-色氨酸发酵菌株MHZ-0830在含有葡萄糖的发酵培养基中发酵培养，较出发菌株能够更有效的收集L-色氨酸。
本发明所述L-色氨酸发酵菌株MHZ-0830与出发菌株MHZ-0800相比具有更好的邻氨基苯甲酸耐受性，在含2-5g/L的邻氨基苯甲酸的M9培养基中震荡培养，该菌株具有明显的生长优势，发酵周期缩短，能够更有效的收集L-色氨酸。表明本发明所述L-色氨酸发酵菌株MHZ-0830能够应用于生产L-色氨酸中，L-色氨酸产量和生产效率提高。因此，本发明提供了L-色氨酸发酵菌株MHZ-0830在生产L-色氨酸中的应用，即保藏编号为CGMCC No.7941的L-色氨酸发酵菌株在生产L-色氨酸中的应用。
此外，本发明还提供了一种L-色氨酸生产方法，将保藏编号为CGMCC No.7941的L-色氨酸发酵菌株接种于种子培养基进行扩繁，然后将扩繁后的培养物转入发酵培养基发酵，添加邻氨基苯甲酸并维持pH值为4-8。
其中，作为优选，所述发酵期间邻氨基苯甲酸在发酵6hr后添加。
作为优选，所述发酵期间邻氨基苯甲酸添加量为至终浓度2g/L～5g/L。在一些实施例为2g/L。在一些实施例为5g/L。
作为优选，发酵期间的pH值为6.5-7.0。
本发明所述生产方法可以一直进行到不再产生L-色氨酸为止，然后可根据本领域常规方法对L-色氨酸进行分离。
对于扩繁用的种子培养基以及发酵用的发酵培养基为本领域公知，本领域技术人员均可采用合适的培养基进行L-色氨酸的发酵。
作为优选，本发明所述种子培养基由20g/L葡萄糖、10g/L酵母提取物、9.5g/LKH2PO4、5.0g/L(NH4)2SO4、2.0g/L MgSO4·7H2O组成，pH值为7.0-7.2。
作为优选，本发明所述发酵培养基由60g/L葡萄糖、1.0g/L酵母提取物、5.0g/LKH2PO4、2.0g/L柠檬酸钠、5.0g/L(NH4)2SO4、2.0g/L MgSO4·7H2O、0.1g/L MnSO4·H2O、0.1g/L FeSO4·7H2O、0.1g/L ZnSO4·H2O、0.1g/L CoCl2·6H2O、0.03g/L CuSO4·5H2O、20g/L碳酸钙组成，pH值为7.0-7.2。
在一些实施方案中，所述L-色氨酸生产方法为从冻存管中取L-色氨酸发酵菌株MHZ-0830在LB平板上活化，37℃培养18-24hr，将菌体从平板上刮下一环，接种到装有50mL种子培养基的500mL锥形瓶中，37℃，150-240rpm震荡培养培养5-10小时，OD600控制在6-10；将2mL种子液转接到装有20mL发酵培养基的500mL锥形瓶中，往复摇床37℃，100-180rpm发酵培养，培养过程中流加稀氨水，控制发酵液pH值至6.5-7.0。在发酵培养10hr后，补加邻氨基苯甲酸至终浓度2g/L或5g/L，直至残糖耗尽或发酵36hr。
在另一些实施方案中，所述LB平板和种子培养基均含有四环素，所述四环素的添加浓度优选为10μg/mL。
由以上技术方案可知，本发明所述保藏编号为CGMCC No.7941的L-色氨酸发酵菌株具有邻氨基苯甲酸耐受性。同出发菌株相比，该菌株具有更好的邻氨基苯甲酸耐受性，能够将更多的邻氨基苯甲酸转化为色氨酸，以使色氨酸能够高浓度积累，提高L-色氨酸的产量和生产效率，满足L-色氨酸的大规模工业化生产。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1：NTG诱变获得邻氨基苯甲酸耐受菌株
出发菌株为根据专利WO 87/01130及Mascarenhas D等所描述的方法(Mascarenhas D等，Deletion of pgi alters tryptophan biosynthesis in agenetically engineered strain of escherichia coli.Applied and EnvironmentalMicrobiology,57:2995-2999，1991)构建的色氨酸生产菌MHZ-0800(CGMCC NO.6863)，其宿主菌SA01为E.coli K-12(CICC 10303)衍生的E.coli K-12 CICC 10303 tnaAserA，包含质粒pMG43，为pBR322来源的，包含有serA，及反馈抑制去除aroG和trpEDCBA操纵子的质粒。
将出发菌株SA01在LB平板上划线，37℃培养16-24hr，从平板上挑取单菌落，接种到装有5mL LB培养基的的三角瓶中，37℃，150-240rpm震荡培养2-6hr，至OD600值在0.1-0.8之间，6000rpm离心5-10min，弃上清，0.9％生理盐水重悬洗涤两次，6000rpm离心5-10min，弃上清，终浓度0.1-1mg/ml NTG室温处理30min，6000rpm离心5-10min，弃上清，0.9％生理盐水重悬洗涤一次，6000rpm离心5-10min，弃上清，0.9％生理盐水重悬，取100μl在含5g/L邻氨基苯甲酸的M9平板上涂布，37℃生长16-30hr后，挑取有生长优势的单菌落保存，共获得数百株耐受性菌株。
LB培养基组分及抗生素添加量为标准浓度，LB液体培养基与LB固体平板的差别在于琼脂是否添加。M9培养基组分为标准浓度。详见《Molecular Cloning A laboratoryManual》(Sambrook,J.,and Russell D.“Molecular Cloning A laboratory Manual,Third Edition”,Cold Spring Harbor Laboratory Press，2001)。
实施例2：NTG诱变菌株的邻氨基苯甲酸耐受性筛选
对所获得的诱变菌株在含5g/L邻氨基苯甲酸的M9液体培养基中培养，进一步验证其耐受性。将其在LB平板上活化，37℃培养16-24hr，挑取单菌落分别接种到装有5mL LB培养基的的三角瓶中，37℃，150-240rpm震荡培养过夜，1:50转接到含5g/L邻氨基苯甲酸的M9培养基中，37℃，150-240rpm震荡培养，每4hr测其OD600值，根据OD600值绘制各菌株的生长曲线。筛选获得数十株有显著生长优势的诱变菌，其中耐受性较好菌株SA16，其生长曲线如图2所示。
由图2可见，诱变获得的菌株SA16较出发菌株SA01，在含有5g/L邻氨基苯甲酸的培养基内具有明显的生长优势。生长相同时间后，诱变获得的菌株SA16 OD600值明显高于出发菌株SA01，约是SA01的3倍。
实施例3：邻氨基苯甲酸耐受性菌株摇瓶发酵生产L-色氨酸
从冻存管中取邻氨基苯甲酸耐受性菌株菌株SA16在LB平板上活化，制作感受态细胞，将质粒pMG43转化邻氨基苯甲酸耐受性菌株SA16中，获得数十株色氨酸生产菌。感受态细胞的制备和转化方法参考《分子克隆实验指南Ⅲ》第1章96页。
其中工程菌株MHZ-0830(pMG43/SA16)被保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No.7941。
通过摇瓶发酵方法验证其色氨酸生产能力。从冻存管中取E.coli菌株MHZ-0800和邻氨基苯甲酸耐受性工程菌株MHZ-0830在LB平板(10μg/mL四环素)上活化，37℃培养18-24hr，将菌体从平板上刮下一环，接种到装有50mL种子培养基(10μg/mL四环素)的500mL锥形瓶中，37℃，150-240rpm震荡培养培养5-10小时，OD600控制在6-10；将2mL种子液转接到装有20mL发酵培养基的500mL锥形瓶中，往复摇床37℃，100-180rpm发酵培养，每菌株3个重复。培养过程中流加稀氨水，控制发酵液pH值至6.5-7.0。直至残糖耗尽或发酵36hr，发酵终了还原发酵液体积至25mL，记录过程参数，测样品OD600，并用HPLC的方法测定发酵液色氨酸含量，用生物传感仪测定发酵液葡萄糖含量。结果见表1。其中发酵的种子培养基和发酵培养基的组分如下。
种子培养基组分：
名称 用量(g/L)
葡萄糖 20
酵母提取物 10
KH2PO4 9.5
(NH4)2SO4 5.0
MgSO4·7H2O 2.0
pH 7.0
发酵培养基组分：
名称 用量(g/L)
葡萄糖 60
酵母提取物 1.0
KH2PO4 5.0
柠檬酸钠 2.0
MgSO4·7H2O 2.0
(NH4)2SO4 5.0
MnSO4·H2O 0.1
FeSO4·7H2O 0.1
ZnSO4·H2O 0.1
CoCl2·6H2O 0.1
CuSO4·5H2O 0.03
CaCO3 20
pH 7.0
表1色氨酸菌株摇瓶实验结果
从表1中可以看出，以葡萄糖为碳源摇瓶发酵生产L-色氨酸，同出发菌株MHZ-0800相比，邻氨基苯甲酸耐受性工程菌株MHZ-0830 L-色氨酸性能生产并无降低，反而提高，转化率提高22％。
实施例4：发酵生产L-色氨酸
从冻存管中取E.coli菌株MHZ-0800和L-色氨酸发酵菌株MHZ-0830在LB平板(10μg/mL四环素)上活化，37℃培养18-24hr，将菌体从平板上刮下一环，接种到装有50mL种子培养基(10μg/mL四环素)的500mL锥形瓶中，37℃，150-240rpm震荡培养培养5-10小时，OD600控制在6-10；将2mL种子液转接到装有20mL发酵培养基的500mL锥形瓶中，往复摇床37℃，100-180rpm发酵培养，每菌株3个重复。培养过程中流加稀氨水，控制发酵液pH值至6.5-7.0。在发酵培养10hr后，补加邻氨基苯甲酸至终浓度2g/L或5g/L，直至残糖耗尽或发酵36hr，发酵终了还原发酵液体积至25mL，记录过程参数，测样品OD600，并用HPLC的方法测定发酵液色氨酸及邻氨基苯甲酸的含量，用生物传感仪测定发酵液葡萄糖含量。测定结果见表2。
色氨酸及邻氨基苯甲酸HPLC检测：流动相A(20mmol/LNaAc，0.02％三乙胺)：流动相B(甲醇)＝85:15；色谱柱：XDB-C18；柱温箱：40℃；检测器：VWD；检测波长：280nm；流速：1mL/min；进样量：2μL。
表2色氨酸菌株摇瓶实验结果
从表2中可以看出，直接添加2g/L终浓度邻氨基苯甲酸，以葡萄糖为碳源摇瓶发酵生产色氨酸，同出发菌株MHZ-0800相比，耐受性菌株MHZ-0830发酵周期缩短13％，L-色氨酸产量提高42％，转化率提高42％。直接添加5g/L终浓度邻氨基苯甲酸，同出发菌株相比，耐受性菌株MHZ-0830发酵周期缩短17％，L-色氨酸产量是出发菌株的4倍，转化率是出发菌株的5倍。直接添加5g/L终浓度邻氨基苯甲酸，出发菌株MHZ-0800生长明显受到抑制，OD600降低，耗糖缓慢，转化率下降，在发酵36hr后，仍存在残糖。诱变菌株MHZ-0830生长受抑制较小，由邻氨基苯甲酸来源的L-色氨酸占总L-色氨酸比例由26％提高到45％。
虽然本发明用其优选的实施方式详细描述，显然对所属领域的技术人员而言，可以进行各种变换，以及在不背离本发明的范围下的等同物的替换。每一个前述文件在此均全文引用作为参考。

Claims (7)

1.一种L-色氨酸发酵菌株，其为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)MHZ-0830，该菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7941。
2.权利要求1所述的L-色氨酸发酵菌株在生产L-色氨酸中的应用。
3.一种L-色氨酸的生产方法，其特征在于，将权利要求1所述的L-色氨酸发酵菌株接种于种子培养基进行扩繁，然后将扩繁后的培养物转入发酵培养基发酵，发酵期间添加邻氨基苯甲酸并维持pH值为4-8。
4.根据权利要求3所述生产方法，其特征在于，所述邻氨基苯甲酸添加量为至终浓度2g/L～5g/L。
5.根据权利要求3所述生产方法，其特征在于，所述发酵期间的pH值为6.5-7.0。
6.根据权利要求3所述生产方法，其特征在于，所述种子培养基由20g/L葡萄糖、10g/L酵母提取物、9.5g/L KH2PO4、5.0g/L(NH4)2SO4、2.0g/L MgSO4·7H2O组成，pH值为7.0-7.2。
7.根据权利要求3所述生产方法，其特征在于，所述发酵培养基由60g/L葡萄糖、1.0g/L酵母提取物、5.0g/L KH2PO4、2.0g/L柠檬酸钠、5.0g/L(NH4)2SO4、2.0g/L MgSO4·7H2O、0.1g/L MnSO4·H2O、0.1g/L FeSO4·7H2O、0.1g/L ZnSO4·H2O、0.1g/L CoCl2·6H2O、0.03g/LCuSO4·5H2O、20g/L碳酸钙组成，pH值为7.0-7.2。
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