CN104322278A - 一种牛樟芝菌丝体培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种牛樟芝菌丝体培养方法，该菌丝体培养法方法具体如下：以高压灭菌为主，对固态培养瓶进行灭菌；将麦芽粒、蔗糖和酵母抽出物抽出物放入已经消毒之后的固态培养瓶中，接种时将生长于培养瓶表面的菌丝切下，将捣碎的菌体放入固态培养瓶中，将步骤4中的固态培养瓶放入培养室内进行培养，培养室内空气湿度应保持在70-75%RH，待菌体长满培养瓶之后，进行熟成培养，熟成培养是在提高培养室内受35°C温度压力刺激下完成的。本发明的有益效果是可以产生更多的次级代谢物，在适宜的环境下菌体生长速度快；本方案中的三萜类化合物含量丰富，其作用及功效：促进癌细胞死亡，抑制肝癌细胞增殖，修复肝脏。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，尤其是涉及一种牛樟芝菌丝体培养方法。
背景技术
牛樟芝又称牛樟芝、牛樟菇、红樟菇，系多孔菌科薄孔菌属真菌，是一种原产于我国台湾省的珍稀药用菌，它主要分布在我国台湾省的桃园、苗栗、南投、高雄及屏东等地海拔1000 m 以上的深山密林中，腐生于台湾保育树种牛樟树干腐朽的中空内部或倒伏树干的潮湿表面，生长极为缓慢, 自然产量稀少。近年来, 因樟芝对肝病的神奇疗效及抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗炎症、降血糖等作用。牛樟芝因此得到了人们越来越多的关注和重视，关于其子实体的形成、深层发酵培养、生理活性、药理学作用等成为研究的热点。
目前，对于樟芝人工培育大致可以分为椴木栽培法、固体培养法、液体发酵法三种，其中的椴木栽培法为利用牛樟芝樟芝原有宿主牛樟树椴木为培养基栽培牛樟芝；能获得与野生樟芝相同之成分，功效相同，避免野生牛樟树被盗伐；但培养时间长达二至三年，培养成本高。对于液体发酵法，液体深层发酵产生的大量发酵废水、通气和机械搅拌的高动力耗能及剪切力造成菌体损害等，成为液体深层发酵发展的障碍。
发明内容
本发明的目的是提供一种培养时间短、培养出的三萜类化合物丰富和菌体生长速度快的牛樟芝菌丝体培养方法。
本发明的技术方案是：一种牛樟芝菌丝体培养方法，该菌丝体培养法方法具体如下：
1)以高压灭菌为主，对固态培养瓶进行灭菌，其中高压灭菌是使用1.3公斤/平方公分的高压蒸汽灭菌；
2)将麦芽粒、蔗糖和酵母抽出物抽出物放入已经消毒之后的固态培养瓶中，其中每种物质的重量百分比为：
麦芽粒 80-90%
蔗糖 4-6%
酵母抽出物 4-6%；
3)接种时将生长于培养瓶表面的菌丝切下，且用已经消毒后的解剖刀将菌体捣碎；
4)将捣碎的菌体放入固态培养瓶中；
5)将步骤4中的固态培养瓶放入温度控制在20-30°C的培养室内进行培养，培养室内空气湿度应保持在70-75%RH；
6)待菌体长满培养瓶之后，进行熟成培养，以便一级代谢物输出次级代谢物；
7)熟成培养是在提高培养室内受35°C温度压力刺激下完成的。
进一步，所述固态培养瓶进行灭菌2h。
进一步，所述解剖刀需先紫外等照射30min以上，并用75%乙醇的纱布擦拭。
进一步，所述培养室温度控制在25°C。
进一步，所述培养室内空气湿度应保持在72%RH。
本发明具有的优点和积极效果是：此方法，可以产生更多的次级代谢物，在适宜的环境下菌体生长速度快；本方案中的三萜类化合物含量丰富，其作用及功效：促进癌细胞死亡，抑制肝癌细胞增殖，修复肝脏，提升肝脏机能，降低血压，防中风，抗发炎，双向调节免疫功能，调整血压，降血脂。
具体实施例1
本发明的技术方案为：一种牛樟芝菌丝体培养方法，该菌丝体培养法方法具体如下：
1）以高压灭菌为主，对固态培养瓶进行灭菌，其中高压灭菌是使用1.3公斤/平方公分的高压蒸汽灭菌，固态培养瓶进行灭菌2h；
2）将麦芽粒、蔗糖和酵母抽出物抽出物放入已经消毒之后的固态培养瓶中，其中每种物质的重量百分比为：
麦芽粒 85%
蔗糖 5%
酵母抽出物 5%；
3）接种时将生长于培养瓶表面的菌丝切下，且用已经消毒后的解剖刀将菌体捣碎，所述解剖刀需先紫外等照射30min以上，并用75%乙醇的纱布擦拭；
4）将捣碎的菌体放入固态培养瓶中；
5）将步骤4中的固态培养瓶放入温度控制在25°C的培养室内进行培养，培养室内空气湿度应保持在72%RH；
6）待菌体长满培养瓶之后，进行熟成培养，以便一级代谢物输出次级代谢物；
7）熟成培养是在提高培养室内受35°C温度压力刺激下完成的。
具体实施例2
本发明的技术方案为：一种牛樟芝菌丝体培养方法，该菌丝体培养法方法具体如下：
1）以高压灭菌为主，对固态培养瓶进行灭菌，其中高压灭菌是使用1.3公斤/平方公分的高压蒸汽灭菌，固态培养瓶进行灭菌2h；
2）将麦芽粒、蔗糖和酵母抽出物抽出物放入已经消毒之后的固态培养瓶中，其中每种物质的重量百分比为：
麦芽粒 89%
蔗糖 5%
酵母抽出物 6%；
3）接种时将生长于培养瓶表面的菌丝切下，且用已经消毒后的解剖刀将菌体捣碎，所述解剖刀需先紫外等照射30min以上，并用75%乙醇的纱布擦拭；
4）将捣碎的菌体放入固态培养瓶中；
5）将步骤4中的固态培养瓶放入温度控制在20°C的培养室内进行培养内，培养室内空气湿度应保持在70%RH；
6）待菌体长满培养瓶之后，进行熟成培养，以便一级代谢物输出次级代谢物；
7）熟成培养是在提高培养室内受35°C温度压力刺激下完成的。
具体实施例3
本发明的技术方案为：一种牛樟芝菌丝体培养方法，该菌丝体培养法方法具体如下：
1）以高压灭菌为主，对固态培养瓶进行灭菌，其中高压灭菌是使用1.3公斤/平方公分的高压蒸汽灭菌，固态培养瓶进行灭菌2h；
2）将麦芽粒、蔗糖和酵母抽出物抽出物放入已经消毒之后的固态培养瓶中，其中每种物质的重量百分比为：
麦芽粒 90%
蔗糖 6%
酵母抽出物 4%；
3）接种时将生长于培养瓶表面的菌丝切下，且用已经消毒后的解剖刀将菌体捣碎，所述解剖刀需先紫外等照射30min以上，并用75%乙醇的纱布擦拭；
4）将捣碎的菌体放入固态培养瓶中；
5）将步骤4中的固态培养瓶放入温度控制在30°C的培养室内进行培养内，培养室内空气湿度应保持在75%RH；
6）待菌体长满培养瓶之后，进行熟成培养，以便一级代谢物输出次级代谢物；
7）熟成培养是在提高培养室内受35°C温度压力刺激下完成的。
通过上述培养方法得出的牛樟芝菌丝体中各个成分如下：
| 物质名称 | 物质特性 |
| 水份 | 7.0% 以下 |
| 三萜类 | 36.42mg/g 以上 |
| 核苷 | 1.4 mg/g 以上 |
| 麦角甾醇 | 1.0 mg/g以上 |
| 总重金属 | 25 ppm 以下 |
| 总生菌数 | 5,000 CFU/g 以下 |
| 大肠杆菌 | 阴性 |
以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
Claims (5)
1.一种牛樟芝菌丝体培养方法，其特征在于：该菌丝体培养法方法具体如下：
以高压灭菌为主，对固态培养瓶进行灭菌，其中高压灭菌是使用1.3公斤/平方公分的高压蒸汽灭菌；
将麦芽粒、蔗糖和酵母抽出物抽出物放入已经消毒之后的固态培养瓶中，其中每种物质的重量百分比为：
麦芽粒 80-90%
蔗糖 4-6%
酵母抽出物 4-6%；
接种时将生长于培养瓶表面的菌丝切下，且用已经消毒后的解剖刀将菌体捣碎；
将捣碎的菌体放入固态培养瓶中；
将步骤4中的固态培养瓶放入温度控制在20-30°C的培养室内进行培养，培养室内空气湿度应保持在70-75%RH；
待菌体长满培养瓶之后，进行熟成培养，以便一级代谢物输出次级代谢物；
熟成培养是在提高培养室内受35°C温度压力刺激下完成的。
2.根据权利要求1所述的一种牛樟芝菌丝体培养方法，其特征在于：所述固态培养瓶进行灭菌2h。
3.根据权利要求1所述的一种牛樟芝菌丝体培养方法，其特征在于：所述解剖刀需先紫外等照射30min以上，并用75%乙醇的纱布擦拭。
4.根据权利要求1所述的一种牛樟芝菌丝体培养方法，其特征在于：所述培养室温度控制在25°C。
5.根据权利要求1所述的一种牛樟芝菌丝体培养方法，其特征在于：所述培养室内空气湿度应保持在72%RH。
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