TWI472614B - 以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法 - Google Patents

Description

以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法

本發明係有關於一種以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，尤其是指一種可供大量的培養出北冬蟲夏草，並能獲得較高的蟲草素之北冬蟲夏草培養方法。

按，冬蟲夏草〔Cordyceps sinensis〕又名中華蟲草，屬於中國傳統的名貴中藥材，真正的冬蟲夏草均為野生，生長在高海拔的高山草地灌木帶上面的雪線附近的草坡上，它是由冬蟲夏草菌寄生於一種蝠蛾幼蟲並使幼蟲僵化後，即可在夏季之適宜條件下，由僵蟲之頭端抽生出長棒狀的子座而長出地面，外觀像是一根小草，亦即是冬蟲夏草菌的子實體與僵蟲菌核〔幼蟲屍體〕所構成的複合體。

其中有一種與冬蟲夏草同屬真菌之北冬蟲夏草〔Cordyceps militaris〕，又稱蛹蟲草，其於藥理學現代研究結果中証實內含有蟲草素、脂肪、蛋白質與碳水化合物等多種營養成分，而脂肪多為不飽和脂肪酸，此外，尚含有維生素B12、麥角脂醇、六碳糖醇、生物鹼等，不僅能滋補強身、養顏美容，又能調整體質、延年益壽，且北冬蟲夏草比人蔘、鹿茸更加平穩，所以食用上不受體質、季節及年齡的限制，是極為稀有、藥食兩用的滋補營養品，且研究人員不斷發現其新的藥理作用，所以眾多國家之市場需求倍增。

然而，由於野生之北冬蟲夏草分布地區狹窄、自然寄生率低，對生長環境之條件要求又苛刻，所以野生資源比較有限，再加上近年來北冬蟲夏草產地之生態環境遭到人為之嚴重破壞以及盲目之大量採挖，更使得北冬蟲夏草之資源日趨減少，年產量也逐步下降，在在都顯示出，必須透過有效的北冬蟲夏草人工培養技術，始能滿足全球市場的需求。

因此，即有如公告第I325890號一種添加甘蔗纖維之北冬蟲夏草之改良培養方法，其包含：(a)將北冬蟲夏草菌液接種入含有甘蔗纖維與米之填充培養基中，其中該甘蔗纖維與米之比例為0.2~0.75：8，(b)將培養物置於18℃至24℃之暗室中培養6至8天，(c)將培養物轉移至光照下培養6至8週，及(d)採收蟲草子實體。或公開第200819061號一種穀類固態發酵冬蟲夏草和靈芝產品的製造方法，主要係包括有下列步驟：a、先對做為培養基質之含水分的穀物(為薏仁、米、小麥、燕麥)或飼料進行滅菌處理。b、將 定量的冬蟲夏草菌液或靈芝菌液植入上述已滅菌的穀物，在合適的溫度下，進行固態發酵培養，以獲得含有高多醣的發酵產物。c、將上述冬蟲夏草或靈芝的發酵產物進行滅菌處理。d、將經過滅菌處理的發酵產物進行熱風乾燥。e、再將乾燥後的發酵產物磨成粉狀。f、可再加入既定比例的穀粉以及調味劑，並且加以混合、調味之後即可製成具有冬蟲夏草或靈芝發酵成份之穀粉或飼料。

緣此，本發明人本著求進步之精神及理念，並藉助多年所累積的專業知識、技術、經驗的輔佐下，不斷致力於改良與開發，而本案發明人經研究後發現，採用超臨界萃取的糙米來製成培養基，能夠使經由本發明方法進行培養之北冬蟲夏草生長更快速，並且保有更優越的有效成份含量，進而完成本發明。

本發明一種以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，培養出的北冬蟲夏草子實體不論在質、量及高度方面皆可達到極為優越，並能獲得較高的蟲草素，以作為藥食兩用的營養品而達到所需之滋補功效。

本發明之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法的目的與功效係由以下之技術所實現：其主要經由以PDA培養基進行暗培養的製備蟲草菌原液步驟，於獲得蟲草菌原液後，經以PDB培養基進行暗培養的製備蟲 草菌液步驟培養獲得蟲草菌液，再將其接菌於糙米培養基，然後施以光培養步驟所需之光照之照度值、溫度、溼度等條件培養數天，而可獲得培養量多的蟲草子實體者。

根據本發明之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法較佳實施例，該「接菌於糙米培養基」之步驟係將蟲草菌液接菌於糙米與水所形成之培養基，具有便於取得、成本低廉之特點，極具產業上之利用性。

第一圖：本發明之步驟流程圖

為令本發明所運用之技術內容、發明目的及其達成之功效有更完整且清楚的揭露，茲於下詳細說明之，並請一併參閱所揭之圖式及圖號：首先，糙米具有基本的蛋白質維生素，而所含的穀維素及生育醇更是其他穀類無法比擬的，可惜農藥以及重金屬的不確定因素卻讓它可能成為人體的負擔，現在，經過超臨界流體技術，能有效去除農藥，重金屬以及不好的雜質跟油脂，還原了最天然的糙米營養。

而超臨界二氧化碳是一種介於氣體與液體之間的流體，具有高擴散性、低黏性、無汙染、不燃性及高選擇性等優點，且利用溫 度與壓力的變化來調整流體的性質，使加工萃取技術更具彈性。基本上，超臨界二氧化碳技術操作程序是將二氧化碳加溫及加壓到超臨界狀態以上，利用其具有類似液體的溶解度與氣體的擴散速度、黏度及表面張力，以加速萃取的速度。也就是在超臨界狀態下的二氧化碳能像氣體一般的進入米粒中，像液體般將米粒中的雜質溶出，達到淨米的效果。

請參照第一圖所示，本發明之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法係包括下列步驟：a.製備蟲草菌原液：其係取馬鈴薯葡萄糖及洋菜〔Agar〕調配於R.O.水中而成馬鈴薯葡萄糖洋菜培養基〔potato dextrose agar，PDA〕後，取PDA培養基於高壓殺菌釜進行滅菌，之後配置於培養皿中令其冷卻至室溫而固化，並置於無菌操作台上，以UV光照射15~20分鐘，再加入已培養完成之新鮮北冬蟲夏草〔Cordyceps Militaris〕固體菌種，且於21~26℃下暗培養二至三週，即得蟲草菌原液；b.製備蟲草菌液：其係取之馬鈴薯葡萄糖調配於R.O.水中而成馬鈴薯葡萄糖培養基〔potato dextrose broth，PDB〕後，取PDB培養基於高壓殺菌釜進行滅菌，製得蟲草菌種培養液，並將「製備蟲草菌原液」步驟中所製得之蟲草菌原液加至所得之蟲草菌種培養液中，並於21~26℃下暗培養1~5天，即得蟲草菌液；c.接菌於糙米培養基：其係於玻璃瓶中充填經超臨界萃取的 糙米，再加入水作為培養基，蓋上鐵蓋後放置於殺菌釜中滅菌，之後令其冷卻至室溫，並置於無菌操作台上以UV光照射1小時，再取「製備蟲草菌液」步驟中所製得之蟲草菌液，接種入已經UV光照射後之培養基中，於21~26℃下，於暗室中培養10~14天；d.光培養：「接菌於糙米培養基」之步驟結束後，即轉換至光照1500~2000LUX之照度值、溫度17~21℃、溼度80%RH，培養5天〔每天以13小時之光培養與11小時之暗培養交替進行〕；e.採收蟲草子實體：待「光培養」之步驟結束而蟲草子實體長成後，即可採收蟲草子實體。

本發明之北冬蟲夏草培養方法於施作時，首先，需由製備蟲草菌原液步驟，係取24g之馬鈴薯葡萄糖及15g之洋菜調配於一公升之R.O.水中而成PDA培養基後，取500毫升之PDA培養基於高壓殺菌釜內以壓力1.2kg/cm 2，溫度121℃，滅菌時間15~20分鐘進行滅菌，之後，配置於培養皿中令其冷卻至室溫而固化，並置於無菌操作台上，以UV光照射15~20分鐘，再加入已培養完成之新鮮北冬蟲夏草〔Cordyceps Militaris〕固體菌種約1CM2，且於21~26℃下暗培養二至三週，即得蟲草菌原液。

接續，進行製備蟲草菌液步驟，係取24g之馬鈴薯葡萄糖調配於一公升R.O.水中而成PDB培養基後，取50~100毫升之PDB培養基於高壓殺菌釜內以壓力1.2kg/cm 2，溫度121℃，滅菌時間15~20分鐘進行滅菌，製得蟲草菌種培養液，並將5~20毫升「製 備蟲草菌原液」步驟中所製得之蟲草菌原液加至所得之蟲草菌種培養液中，並於21~26℃下暗培養1~5天，即得蟲草菌液。請參附表一，如下：

於附表一中顯示可看到培養天數1~5天中，於第1天得到最佳的蟲草素、蟲草酸、腺苷等數值。

接續，再施以接菌於糙米培養基步驟，以其於玻璃瓶中充填30g之經超臨界萃取的糙米與40~50毫升之水作為培養基，蓋上鐵蓋後放置於殺菌釜中滅菌，之後令其冷卻至室溫，並置於無菌操作台上以UV光照射1小時，再取5~10毫升「製備蟲草菌液」步驟中所製得之蟲草菌液，接種入已經UV光照射後之培養基中，於21~26℃下，於暗室中培養10~14天。請參附表二~四，如下：

於附表二中顯示可看到水量由40~55毫升中，於50毫升得到最佳的蟲草素、蟲草酸、腺苷等數值。

於附表三中顯示可看到接種量由2~10毫升中，於4毫升得到最佳的蟲草素、蟲草酸、腺苷等數值。

於附表四中顯示可看到在暗室培養8~10天中，於第10天得到最佳的蟲草素、蟲草酸、腺苷等數值。

接著，進行光培養步驟，係於「接菌於糙米培養基」步驟結束後，即轉換至光照1500~2000LUX之照度值、溫度17~21℃、溼度80%RH，培養5天，而其每天以13小時之光培養與11小時之暗培養交替進行；最後，採收蟲草子實體步驟，即為「光培養」之步驟結束而蟲草子實體長成後，即可採收蟲草子實體。請參附表五，如下：

於附表五中顯示可看到溫度控制在18度與20度天中，其18度得到最佳的蟲草素、蟲草酸、腺苷等數值。

綜上可知，於採收後進行北冬蟲夏草子實體之成份分析，其代表性組成物質有蟲草素〔Cordycepic〕、蟲草酸〔Cordycepic acid〕、蟲草多醣〔Cordycepic polysacchride〕、超歧氧酶活性SOD〔Superoxide Dismutase〕，由附表可知，以超臨界萃取的糙米來培 養北冬蟲夏草，其該北冬蟲夏草子實體不論在質、量及高度方面皆可達到極為優越，並能獲得較高的蟲草素，以作為藥食兩用的營養品而達到所需之滋補功效。

然而前述之實施例或圖式並非限定本發明之培養基成分或滅菌方式等，任何所屬技術領域中具有通常知識者之適當變化或修飾，皆應視為不脫離本發明之專利範疇。

由上述之實施說明可知，本發明與現有方法相較之下，本發明具有以下之優點：

1.本發明以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，所培養出的北冬蟲夏草子實體不論在質、量及高度方面皆可達到極為優越，並能獲得較高的蟲草素，以作為藥食兩用的營養品而達到所需之滋補功效。

2.本發明以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，係將蟲草菌液接菌於糙米與水所形成之培養基，具有便於取得、成本低廉之特點，極具產業上之利用性。

綜上所述，本發明實施例確能達到所預期之使用功效，又其所揭露之具體方法，不僅未曾見諸於同類技術中，亦未曾公開於申請前，誠已完全符合專利法之規定與要求，爰依法提出發明專利之申請，懇請惠予審查，並賜准專利，則實感德便。

Claims (9)

1. 一種以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，係包含下列步驟：(a)製備蟲草菌原液：係將PDA培養基高壓滅菌後冷卻至室溫而固化，再以UV光照射15~20分鐘，再加入新鮮北冬蟲夏草〔Cordyceps Militaris〕固體菌種，且於溫度控制在21~26℃之間進行暗培養二至三週，即得蟲草菌原液；(b)製備蟲草菌液：其係取PDB培養基經高壓滅菌後作為蟲草菌種培養液，並將蟲草菌原液加至蟲草菌種培養液中，並於溫度控制在21~26℃之間進行暗培養1~5天，即得蟲草菌液；(c)接菌於糙米培養基：其係取經超臨界萃取的糙米與水作為糙米培養基，且經高壓滅菌後冷卻至室溫，再以UV光照射1小時，再取蟲草菌液接種入已經UV光照射後之糙米培養基中，於溫度控制在21~26℃之間，在暗室中培養10~14天；(d)光培養：於接菌於糙米培養基步驟之暗室培養結束後，即轉換至光照1500~2000LUX之照度值、溫度17~21℃、溼度80%RH，培養5天；(e)採收蟲草子實體：待光培養步驟結束而蟲草子實體長成後， 即可採收蟲草子實體。
2. 如申請專利範圍第1項所述之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，其中，該光培養之步驟係採13小時之光培養與11小時之暗培養交替進行者。
3. 如申請專利範圍第1或2項所述之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，其中，該製備蟲草菌原液步驟中的蟲草菌原液為採用500毫升之PDA培養基加入1CM2已培養完成的新鮮北冬蟲夏草固體菌種者。
4. 如申請專利範圍第1或2項所述之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，其中，該製備蟲草菌液步驟係以5~20毫升之蟲草菌原液加入PDB培養基中來製備蟲草菌液者。
5. 如申請專利範圍第1或2項所述之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，其中，該接菌於糙米培養基步驟係取30g經超臨界萃取的糙米與40~50毫升的水作為糙米培養基者。
6. 如申請專利範圍第1或2或項所述之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，其中，該接菌於糙米培養基步驟以5~10毫升之蟲草菌液接種入已經UV光照射後的糙米培養基中。
7. 如申請專利範圍第3項所述之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，其中，該製備蟲草菌液步驟係以5~20毫升之蟲 草菌原液加入PDB培養基中來製備蟲草菌液者。
8. 如申請專利範圍第7項所述之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，其中，該接菌於糙米培養基步驟係取30g經超臨界萃取的糙米與40~50毫升的水作為糙米培養基者。
9. 如申請專利範圍第8或項所述之以超臨界萃取的糙米培養北冬蟲夏草之方法，其中，該接菌於糙米培養基步驟以5~10毫升之蟲草菌液接種入已經UV光照射後的糙米培養基中。