CN104267114A

CN104267114A - 一种睡莲花的检测方法

Info

Publication number: CN104267114A
Application number: CN201410456354.7A
Authority: CN
Inventors: 周晓英; 季志红; 陈金成; 李洁; 李柯翱; 丁文欢
Original assignee: Xinjiang Qikang Kazakhstan Bowei Pharmaceutical Research Institute (limited)
Current assignee: XINJIANG QIMU PHARMACEUTICAL RESEARCH INSTITUTE (Co.,Ltd.)
Priority date: 2014-09-10
Filing date: 2014-09-10
Publication date: 2015-01-07
Anticipated expiration: 2034-09-10
Also published as: CN104267114B

Abstract

本发明公开一种睡莲花的检测方法，包括睡莲花样品上C18色谱柱，采用甲醇-水进行梯度洗脱，得到色谱图，其中，水的体积百分数随时间变化为：0～10min，由95%降至90%；10～20min，由90%降至75%；20～40min，由75%降至55%；40～50min，由55%降至15%；50～60min，由15%降至0%；再将从色谱图上得到没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的色谱峰面积，标准曲线，得出睡莲花样品中没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的含量。本发明方法可以定量检测睡莲花中的没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素，且具有良好的准确度和重复性，从而实现睡莲花质量的有效控制。

Description

一种睡莲花的检测方法

技术领域

本发明属于药物检测领域，具体涉及一种睡莲花的检测方法。

背景技术

睡莲花为睡莲科雪白睡莲（Nymphaea candida Presl.）的干燥花蕾，分布于我国新疆的南部地区，具有降热止咳、益心护脑、安神止痛功效，临床主要用于感冒发热、头痛咳嗽、咽痛等表症，是维吾尔医常用的单方或复方抗病毒药中的主要药物。对睡莲花质量的有效控制是保证药物获得稳定、可靠的疗效的前提。

发明内容

本发明的目的是提供一种睡莲花的检测方法，以提高现有睡莲花的质量控制水平。

本发明实现上述目的所采用的技术方案如下：

一种睡莲花的检测方法，步骤包括：

（1）睡莲花样品上C18色谱柱，采用甲醇-水进行梯度洗脱，得到色谱图，其中，水的体积百分数随时间变化为：0～10 min，由95%降至90%；10～20 min，由90%降至75%；20～40 min，由75%降至55%；40～50 min，由55%降至15%；50～60 min，由15%降至0%；

（2）用没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的标准溶液绘制浓度-色谱峰面积的标准曲线；

（3）从步骤（1）的色谱图上得到没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的色谱峰面积，再代入步骤（2）的标准曲线，得出睡莲花样品中没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的含量。

进一步，步骤（1）中，用甲醇将睡莲花样品配制成甲醇溶液。

本发明方法可以定量检测睡莲花中的没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素，且具有良好的准确度和重复性，从而可以实现对睡莲花质量的有效控制。

附图说明

图1.供试样品溶液的色谱图；

图2.标准溶液的色谱图；

图3.供试样品溶液中没食子酸的一级质谱图；

图4.标准溶液中没食子酸的一级质谱图；

图5.供试样品溶液中没食子酸甲酯的一级质谱图；

图6.标准溶液中没食子酸甲酯的一级质谱图；

图7.供试样品溶液中烟花苷的一级质谱图；

图8.标准溶液中烟花苷的一级质谱图；

图9.供试样品溶液中槲皮素的一级质谱图；

图10.标准溶液中槲皮素的一级质谱图；

图11.供试样品溶液中没食子酸的二级质谱图；

图12. 标准溶液中没食子酸的二级质谱图；

图13.供试样品溶液中没食子酸甲酯的二级质谱图；

图14.标准溶液中没食子酸甲酯的二级质谱图；

图15.供试样品溶液中烟花苷的二级质谱图；

图16.标准溶液中烟花苷的二级质谱图；

图17.供试样品溶液中槲皮素的二级质谱图；

图18.标准溶液中槲皮素的二级质谱图。

具体实施方式

以下结合实施例及附图对本发明做进一步详细说明。

6批睡莲花药材分别采购于新疆奇康哈博维药有限公司、维吾尔药业、维吾尔医院，经鉴定为睡莲科雪白睡莲Nymphaea candida Presl.的干燥花蕾。没食子酸对照品（批号：110831-2012054，中国食品药品检定研究院）、没食子酸甲酯对照品、烟花苷对照品（新疆药物研究所)、槲皮素对照品（批号：20111013，上海源叶生物科技有限公司）

液相色谱-质谱联用仪：包括Agilent 1200高效液相色谱仪，1100型紫外检测器，6310 ion trap 液质联用系统，美国Agilent公司。

检测过程如下：

1、供试样品溶液的制备：将6批睡莲花药材分别粉碎，分别精确称取1 g睡莲花药材粉末，置于100 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL甲醇，称重，超声处理30 min(功率80 W，频率100 Hz)，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的质量，过滤，取滤液，用0.45μm微孔滤膜过滤，备用。

2、标准溶液的制备：精确称取没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素，混合，用甲醇溶解，得到一系列不同浓度的标准溶液。

3、供试样品溶液用液相色谱-质谱联用仪进行测定，色谱条件：采用C18色谱柱，以甲醇为流动相A、水为流动相B进行梯度洗脱，流速：1mL/min；进样量：20μL；柱温：30℃，梯度洗脱时，流动相B（水）体积百分数随时间变化为：0～10 min，由95%线性降至90%；10～20 min，由90%线性降至75%；20～40 min，由75%线性降至55%；40～50 min，由55%线性降至15%；50～60 min，由15%线性降至0%。得到的色谱图如图1所示。

4、将一系列不同浓度的标准溶液在相同的色谱条件进行测定。以浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标绘制相应没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的浓度-色谱峰面积标准曲线。得到没食子酸的线性回归方程为Y＝16065X－462 (r＝0.9991)，没食子酸甲酯的线性回归方程为Y＝74059X－110.43 (r＝0.9991)，烟花苷线的性回归方程为Y＝8558.6X－360.59 (r＝0.9997)，槲皮素的线性回归方程为Y＝17285X－76.10 (r＝0.9991)。结果表明，没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素分别在0.818～6.428μg、0.152～1.68μg、1.182～13.000μg和0.124～1.02μg范围内具有良好的线性关系。得到的色谱图如图2所示。

如图1和图2的色谱图可以看出，供试样品出现与标准溶液保留时间一致的色谱峰。

相应联用的质谱分析可进一步明确其中的A即为没食子酸、B即为没食子酸甲酯、C即为烟花苷、D即为槲皮素。具体如下：质谱条件为：电喷雾负离子扫描模式(ESI+)；雾化气（氮气）压力为30 psi；离子喷雾电压为3500 V；干燥气（氮气）温度为350℃；干燥气流速为12 L/min；一级质谱扫描范围为m/z 100～650；二级质谱扫描范围为m/z 100～650。在全扫描一级质谱中，标准溶液中没食子酸出现m/z168.7分子离子峰，供试样品出现的分子离子峰与之一致（图3～4）；标准溶液中没食子酸甲酯出现m/z182.7分子离子峰，供试样品出现的分子离子峰与之一致（图5～6）；标准溶液中烟花苷出现m/z593.3分子离子峰，供试样品出现的分子离子峰与之一致（图7～8）；标准溶液中槲皮素出现m/z300.8分子离子峰，供试样品出现的分子离子峰与之一致（图9～10）。在全扫描二级质谱中，以m/z168.7作为母离子，破碎电压0.4 V，标准溶液中没食子酸出现显著的离子碎片m/z124.7，供试样品同样出现相应的离子碎片（图11～12）；以m/z182.7作为母离子，破碎电压0.4V，标准溶液中没食子酸甲酯出现显著的离子碎片m/z123.7、m/z167.6，供试样品同样出现相应的离子碎片（图13～14）；以m/z593.3作为母离子，破碎电压1 V，标准溶液中烟花苷出现显著的离子碎片m/z284.7，供试样品同样出现相应的离子碎片（图15～16）；以m/z300.8作为母离子，破碎电压0.6 V，标准溶液中槲皮素出现显著的离子碎片m/z106.7、m/z150.6、m/z178.6，供试样品同样出现相应的离子碎片（图17～18）。

由从步骤3得到的色谱图上分别测出没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的色谱峰面积，并将得到的色谱峰面积代入步骤4相应的标准曲线或回归线性方程，分别得到6批睡莲花药材中没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的含量如下：

。

精确吸取标准溶液20μL，连续进样6次，结果没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷及槲皮素峰面积相对标准偏差（RSD）均小于2.50%，表明检测仪器精密度良好。

称取同一睡莲花样品6份，分别按上述1-4步骤进行测定。结果样品中没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷及槲皮素含量的RSD均小于1.80%，表明本方法的重复性较好。

精密称取睡莲花样品粉末0.5g，分别加入已知的一定量的没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷及槲皮素的混合对照品，按上述1-4步骤，进行测定计算待测物质的平均加样回收率，其中，没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷及槲皮素的回收率分别是98.87%、100.34%、103.25%、101.56%，RSD分别是0.45%、0.68%、0.52%、1.32%，表明本方法的准确度良好。

Claims

1.一种睡莲花的检测方法，步骤包括：

2.根据权利要求1所述睡莲花的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，用甲醇将睡莲花样品配制成甲醇溶液。