CN104713980A - 一种没食子药材的质量评价方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种没食子药材的质量评价方法，包括薄层色谱定性鉴别和含量测定，其中，含量测定是运用薄层色谱扫描法测定没食子中鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯的含量。本发明没食子药材的质量评价方法，操作简便，精密度、重现性、稳定性及加样回收率均良好，符合含量测定的技术要求，为没食子药材的质量监测和评价提供了一种有效的新途径。
Description
技术领域
本发明涉及一种银离子与中药制剂的组合抗菌药物。
背景技术
没食子为壳斗科植物没食子树(Quercus infectoria Oliv.)幼枝上的干燥虫瘿，由没食子峰科昆虫没食子蜂(Cynips gallae-tinctoriae Oliv.)幼虫寄生而形成，又名没石子、墨石子、无食子、没石子、麻莱泽等。主要产于地中海沿岸、土耳其、阿拉伯半岛各国、希腊、伊朗、印度等地，尤以小亚细亚产量最多，新疆多由巴基斯坦进口。没食子味苦涩性温，归肺、脾、肾经。具有燥湿收敛，固牙止痛，清热消炎，祛瘀愈伤，凉血止血，止泻止痢的功效。主治湿热型或血液质性疾病，例如热性牙龈肿痛，牙齿松动，咽喉肿痛，疮疡腐烂，伤口不愈，湿性白带过多，子宫出血，泻痢不止等。
没食子最早载《海药本草》：“主肠虚冷痢，益血生精，和气安神，治阴毒痿，烧灰用。”历代本草亦有论述。《开宝本草》云：“主小儿疳虫，治阴疮，阴汗，温中和气。”《本草从新》云：“涩精固气，强阴助阳，止遗淋。”《现代实用中药》云：“治慢性支气管炎，痰多，咳嗽，咯血，咳血等症；外用于刀伤出血，慢性皮肤病等症。”其性味苦，温。功能固气，涩精，敛肺，止血。主治大肠虚滑，泻痢不止，便血，遗精，阴汗，咳嗽，咯血，齿痛，创伤出血，疮疡久不收口。内服煎汤，或人丸散，外用研末撒或调敷。凡泻痢初起，湿热内郁或有积滞者忌用。《注医典》：“乌发黑发，防腐除癣，健龈固牙，消炎止泻等。”《拜地依药书》：“消炎退肿，凉血止血，止泻止痢，燥湿止带，祛斑生辉等。”《药物之园》：“止鼻血，退肿止痒，止泪增视，消炎出脓，除癣祛斑，止汗除臭等。”
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种精密度、重现性、稳定性及加样回收率均良好的没食子药材的质量评价方法。
本发明的目的通过以下技术方案来具体实现：
一种没食子药材的质量评价方法，包括薄层色谱定性鉴别和含量测定，其中，含量测定是运用薄层色谱扫描法测定没食子中鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯的含量。
所述薄层色谱定性鉴别，包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：
取本药材，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：
取鞣花酸对照品适量，加甲醇，制成0.86mg/mL的溶液，作为对照品溶液A；
取没食子酸对照品适量，加甲醇，制成0.57mg/mL的溶液，作为对照品溶液B；
取没食子酸甲酯对照品适量，加甲醇，制成1.53mg/mL的溶液，作为对照品溶液C；
3)薄层色谱条件：
吸取对照品溶液及供试品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，105℃加热至斑点清晰，紫外灯下检识，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。
优选的，所述步骤3)中，所述展开剂为体积比是6:4.5:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸；所述紫外灯紫外线波长为254nm。
所述含量测定的方法为：
1)供试品溶液的制备：
取本药材1g，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，刮取残渣，精密称定0.15g，置5ml容量瓶中加甲醇使其溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：
取鞣花酸对照品适量，加甲醇制成1.62mg/mL的溶液，作为对照品溶液A；
取没食子酸对照品适量，加甲醇制成1.55mg/mL的溶液，作为对照品溶液B；
取没食子酸甲酯对照品适量，加甲醇制成1.52mg/mL的溶液，作为对照品溶液C；
用移液管分别吸取对照品A、B、C溶液300μL、500μL、500μL，混匀，作为混标溶液；
3)含量测定：
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2μL，对照品溶液3μL，点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，105℃加热至斑点清晰，按照色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度，计算，即得没食子中鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯的含量。
优选的，所述步骤3)中，所述展开剂为体积比是6:4.5:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸；色谱法扫描的波长为300nm。
本发明的有益效果：
本发明没食子药材的质量评价方法，操作简便，精密度、重现性、稳定性及加样回收率均良好，符合含量测定的技术要求，为没食子药材的质量监测和评价提供了一种有效的新途径。
附图说明
附图1没食子薄层色谱图(定性鉴别)；
附图2没食子薄层色谱图(定量鉴别)；
附图3没食子薄层色谱扫描图。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：
1.仪器与试药
1.1仪器
CAMAG TLC SCANNER3型薄层扫描仪(瑞士)；CAMAG LINOMAT5半自动点样仪(瑞士)；CAMAG REPROSTAR3(瑞士)；硅胶GF254高效薄层板(安徽良臣硅源材料有限公司)；XS-105型电子天平(瑞士梅勒-托利多公司)；XS105型十万分之一电子天平(瑞士梅特勒-托利公司)；KQ-200KDE型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HH-S4数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)
1.2试药
没食子药材(新疆奇康哈博维药股份有限公司，批号：120207-1、120612-1、120619-2、120724-1、120803-2、120815-1、120925-1、121017-1、130107-1、130216-1)
其余试剂均为分析纯。
2.方法
2.1没食子薄层色谱定性鉴别
2.1.1供试品溶液的制备：精密称取以上各批次药材0.1g，分别置于50mL加塞锥形瓶中，加甲醇20mL，超声处理25min，滤过，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇使溶解，即得供试品溶液(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)。
2.1.2对照品溶液的制备：精密称取鞣花酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.86mg的溶液，作为对照品溶液A；精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.57mg的溶液，作为对照品溶液B；精密称取没食子酸甲酯对照品适量，加甲醇制成每1mL含1.53mg的溶液，作为对照品溶液C。
2.1.3薄层色谱条件：吸取对照品溶液及供试品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6:4.5:2，体积比)为展开剂，展开，取出，晾干，105℃加热至斑点清晰，紫外灯(254nm)下检识，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。
2.2没食子薄层色谱扫描法定量鉴别
2.2.1供试品溶液的制备：精密称取本药材1g，分别置于50mL加塞锥形瓶中，加甲醇20mL，超声处理25min，滤过，滤液蒸干，刮取残渣，精密称定0.15g粉末，置5mL容量瓶中加甲醇使其溶解定容，即得供试品溶液(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)。
2.2.2对照品溶液的制备：精密称取鞣花酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含1.62mg的溶液，作为对照品溶液A；精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含1.55mg的溶液，作为对照品溶液B；精密称取没食子酸甲酯对照品适量，加甲醇制成每1mL含1.52mg的溶液，作为对照品溶液C。用移液管分别吸取对照品A、B、C溶液300μL、500μL、500μL，混匀，作为混标溶液。
2.2.3含量测定：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2μL，对照品溶液3μL，点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6:4.5:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，105℃加热至斑点清晰，照色谱法进行扫描，波长为300nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度，计算，即得没食子中鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯的含量。
3.结果
3.1没食子薄层色谱定性鉴别
将制备好的标准溶液及10批供试品溶液按上述薄层色谱条件点样展开并在紫外灯(254nm)下检识，获得没食子薄层色谱图，如图1。
3.2没食子薄层色谱扫描图
将制备好的混标溶液及10批供试品溶液按上述薄层色谱条件点样展开并在紫外灯(254nm)下检识，获得没食子薄层色谱图，如图2。将制备好的混标溶液及10批供试品溶液按上述薄层色谱条件点样展开扫描，获得没食子薄层色谱扫描图，如图3。
3.3方法学考察
3.3.1线性关系考察：精密称取鞣花酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含1.62mg的溶液，作为对照品溶液A；精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含1.55mg的溶液，作为对照品溶液B；精密称取没食子酸甲酯对照品适量，加甲醇制成每1mL含1.52mg的溶液，作为对照品溶液C。用移液管分别吸取对照品A、B、C溶液300μL、500μL、500μL，混匀，作为混标溶液。
3.3.1.1鞣花酸标准曲线的制备：分别精密吸取混标溶液4、5、6、7、8μL分别点于同一块GF254薄层板上，以体积比为6:4.5:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，测定，以点样体积(μL)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，制备标准曲线；鞣花酸标准品在0.5905～1.1811μg之间呈良好的线性关系。回归方程：Y＝－63.66+943.69X，r＝0.9995，结果见表1。
表1鞣花酸线性关系考察
3.3.1.2没食子酸标准曲线的制备：分别精密吸取混标溶液1、1.5、2、2.5、3μL分别点于同一块GF254薄层板上，以体积比为6:4.5:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，测定，以点样体积(μL)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，制备标准曲线；没食子酸标准品在0.6909～2.1136μg之间呈良好的线性关系。回归方程：Y＝5122.14+2134.02X，r＝0.9997，结果见表2。
表2没食子酸线性关系考察
3.3.1.3没食子酸甲酯标准曲线的制备：分别精密吸取混标溶液1、1.5、2、2.5、3μL分别点于同一块GF254薄层板上，以体积比为6:4.5:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，测定，以点样体积(μL)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，制备标准曲线；没食子酸标准品在0.6927～2.0782μg之间呈良好的线性关系。回归方程：Y＝5547.96+1912.52X，r＝0.9996，结果见表3。
表3没食子酸甲酯线性关系考察
3.3.2稳定性试验：将同批次的供试品(120803-2)3μL的斑点间隔不同的时间，按测定条件扫描，测定各点在不同的时间吸收度值偏差，结果见表4。
表4稳定性试验结果(n＝6)
3.3.3精密度试验
将混标溶液点于GF254薄层板上，按薄层条件点样、展开、取出、晾干、显色。按扫描
条件扫描测定，结果见表5、6。
表5日内精密度考察结果(n＝6)
表6日间精密度考察结果(n＝6)
3.3.3加样回收率试验：精密称取供试品(130107-1)5份，每份约0.075g，加入鞣花酸标准品1.3705mg，按照2.2.1供试品溶液制备方法操作，测定；精密称取供试品(120815-1)5份，每份约0.075g，加入没食子酸标准品1.5408mg，按照2.2.1供试品溶液制备方法操作，测定；精密称取供试品(130107-1)5份，每份约0.075g，加入鞣花酸标准品1.9724mg，按照2.2.1供试品溶液制备方法操作，测定。结果见表7。
表7没食子中鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯的回收率试验结果
3.3.4样品含量的测定：分别精密吸取十批供试品溶液，按薄层条件点样、展开、取出、晾干、显色。按扫描条件扫描测定，结果见表8。
表8样品没食子中鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯的含量测定结果
4结论
本具体实施方式完成了没食子药材的含量测定和鉴别，其中含量测定是运用薄层色谱扫描法测定没食子中鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯的含量。经方法学验证表明，该方法精密度、稳定性及加样回收率均良好，表明该方法符合含量测定的技术要求。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种没食子药材的质量评价方法，其特征在于：包括薄层色谱定性鉴别和含量测定，其中，含量测定是运用薄层色谱扫描法测定没食子中鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯的含量。
2.根据权利要求1所述的没食子药材的质量评价方法，其特征在于：所述薄层色谱定性鉴别，包括以下步骤：
1）供试品溶液的制备：
取本药材，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；
2）对照品溶液的制备：
取鞣花酸对照品适量，加甲醇，制成0.86 mg/mL的溶液，作为对照品溶液A；
取没食子酸对照品适量，加甲醇，制成0.57 mg/mL的溶液，作为对照品溶液B；
取没食子酸甲酯对照品适量，加甲醇，制成1.53 mg/mL的溶液，作为对照品溶液C；
3）薄层色谱条件：
吸取对照品溶液及供试品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，105 ℃加热至斑点清晰，紫外灯下检识，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。
3.权利要求2所述的没食子药材的质量评价方法，其特征在于：所述步骤3）中，所述展开剂为体积比是6:4.5:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸。
4.权利要求2所述的没食子药材的质量评价方法，其特征在于：所述步骤3）中，所述紫外灯紫外线波长为254nm。
5.权利要求1所述的没食子药材的质量评价方法，其特征在于：所述含量测定的方法为：
1）供试品溶液的制备：
取本药材1 g，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，刮取残渣，精密称定0.15 g，置5 mL容量瓶中加甲醇使其溶解，作为供试品溶液；
2）对照品溶液的制备：
取鞣花酸对照品适量，加甲醇制成1.62 mg/mL的溶液，作为对照品溶液A；
取没食子酸对照品适量，加甲醇制成1.55 mg/mL的溶液，作为对照品溶液B；
取没食子酸甲酯对照品适量，加甲醇制成1.52 mg/mL的溶液，作为对照品溶液C；
用移液管分别吸取对照品A、B、C溶液300 μL、500 μL、500 μL，混匀，作为混标溶液；
3）含量测定：
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μl，对照品溶液3 μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，105 ℃加热至斑点清晰，按照色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度，计算，即得没食子中鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯的含量。
6.权利要求5所述的没食子药材的质量评价方法，其特征在于：所述步骤3）中，所述展开剂为体积比是6:4.5:2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸。
7.权利要求5所述的没食子药材的质量评价方法，其特征在于：所述步骤3）中，光照色谱法扫描的波长为300 nm。
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Legal Events
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Address after: 830000 the Xinjiang Uygur Autonomous Region Urumqi hi tech Industrial Development Zone (new urban area) 1375 Patentee after: New Qikang Pharmaceutical Co.,Ltd. Address before: 830000 Yingbin Road, Urumqi, the Xinjiang Uygur Autonomous Region 625 Patentee before: XINJIANG QIKANG HABO UIGHUR MEDICINE CO.,LTD. |
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Denomination of invention: A Detection Method for Gallnut Medicinal Materials Effective date of registration: 20230324 Granted publication date: 20170111 Pledgee: China Construction Bank Corporation Urumqi Youhao North Road Branch Pledgor: New Qikang Pharmaceutical Co.,Ltd. Registration number: Y2023980036259 |