CN104922587A - 消肿止痛膏的制备方法及其质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种消肿止痛膏的制备方法及其质量检测方法。本发明对现有的消肿止痛膏的制备工艺进行改良，使消肿止痛膏中的有效成分含量更高，并且解决了目前消肿止痛膏缺乏规范的质量标准的问题，为产品建立了科学、规范、可行的质量标准。本发明方法简单，成本低廉，使用效果好。

Description

消肿止痛膏的制备方法及其质量检测方法

技术领域

本发明涉及制药领域，特别是一种消肿止痛膏的制备方法及其质量检测方法。

背景技术

消肿止痛膏由当归、姜黄、白芷、细辛等十味中药组成，具有活血化瘀、止痛散结、舒筋通络、消炎消肿、解毒化痰之功效；临床主治软组织损伤、挫伤、跌仆闪挫伤、骨折、脱臼、瘀血肿痛、闪腰岔气等病症，也适用于疔疮肿毒证。但是，目前《消肿止痛膏》在医院制剂的生产、临床应用已有十多年，疗效确切、不良反应小，每年均产生一定的经济效益，并随着其知名度的提高，该制剂的也逐年增加，而不仅仅局限在骨科病房，现在在医院门诊及皮肤科、针灸科等科室也在使用。但是，过去普遍认为“丸散膏丹，神仙难辨”的复方，一直缺乏一个标准的质量控制方法，一直以来，消肿止痛膏在质量检验方面仅限于显微鉴别，远不足以对其质量进行控制。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种消肿止痛膏的制备方法及其质量检测方法，它将提高了消肿止痛膏的有效成分，并对其生产中的质量检验标准提供了一套可行方案。

本发明是这样实现的：消肿止痛膏的制备方法，按质量份数计算，将15-20份黄连与48-52份黄柏混合，并采用质量百分比为70%的乙醇将其浸泡0.8-1.5小时，再将浸液渗漉48小时后，收集渗漉液；将120-140份当归、30-35份细辛、48-53份白芷、48-53份姜黄、48-53份栀子以及48-53份生大黄混合，加入该混合物总质量8-12倍量的质量百分比为80%的乙醇进行回流提取0.8-1.5小时，自然冷却后进行过滤获得续滤液；将渗漉液与续滤液合并，并浓缩成浸膏；再将1000份凡士林加热熔化，并加入上述浸膏中，充分搅匀均匀后加入48-53份天花粉粉和7-9份生半夏，混匀即得成品。

消肿止痛膏的制备方法的质量检测方法，在进行生产前，先将白芷、当归、细辛及姜黄分别进行TLC鉴别（鉴别的目的是对原料进行质量控制）；在生产完成后，将成品取样，采用HPLC法测定了欧前胡素的含量。

为了验证本发明的技术效果效果，进行了如下实验。

一、消肿止痛膏的制备工艺

发明人采用正交实验法，以白芷的主要成分欧前胡素的转移率为评价指标，对影响欧前胡素提取效率的主要因素（提取次数、乙醇用量、乙醇浓度、回流时间）进行考察，优选出最佳提取工艺参数。

仪器与材料

G1313A高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；WFA-203B三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；SK1200H科导斯超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；MA110分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）；101-1AB电热鼓风干燥箱（天津泰斯特仪器有限公司）；色谱柱（Agilent ZORBAX SB-C18 4.6×150mm安捷伦科技有限公司）。甲醇为色谱纯；水为纯净水；其余试剂均为分析纯。当归、姜黄、白芷、黄连、花粉、生半夏皆购于贵阳市济仁堂；欧前胡素对照品（批号：110826-201013中国药品生物制品检定所）。

方法与结果

以欧前胡素的转移率为评价指标，对药材乙醇用量（A）、乙醇浓度（B）、回流时间（C）及提取次数（D）四种影响因素进行考察。

含量测定

1.2.1.1  色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（55：45）为流动相；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：300nm。

对照品溶液的制备

取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备

称取1/20处方量的药材（当归4g，白芷、栀子、姜黄、生大黄各1.5g，细辛1g）进行混合，按L₉（3⁴）正交表进行试验，因素水平见表1、表2。过滤，置于蒸发皿（已恒重），挥干，得到干浸膏。称取0.5g干浸膏置于25mL容量瓶中，加入甲醇溶解，甲醇定容之刻度，即得。

法测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

由表2可知：极差R的大小为B>D>A>C，即四因素对欧前胡素转移率的影响的主次顺序为B>D>A>C，在因素B中，B₂>B₁>B₃，表明B₂比B₁、B₃好，同理，D₃比D₂、D₁好，A₃比A₁、A₂好，C₁比C₂、C₃好。因此，最佳提取工艺为B₂D₃A₃C₁。由表3可知：因素B、D显著；因素C极不显著，对试验没有影响；因素A不显著，从经济利益考虑选择A₁。故最终提取工艺为A₁B₂C₁D₃。

验证试验

为了验证实验结果提供的最终提取工艺的可行性，按正交试验确定的工艺条件进行验证试验，见表4。

讨论

本实验在预试验阶段，欧前胡素的转移率都未超过50%。但用正交实验优选提取工艺时，欧前胡素的转移率均超过50%，转移率也最高，说明优选的最佳提取工艺条件合理、可行。另外，根据正交实验结果得到最佳提取工艺为：A₃B₂C₁D₃，而在A因素不显著，且在乙醇8倍量和12倍量下所测得的欧前胡素转移率相差不大，考虑到消肿止痛膏为医院制剂需大批量生产，出于成本考虑而选择乙醇8倍量。故本实验最终确定的提取工艺为：A₁B₂C₁D₃，即处方药材加8倍量80%的乙醇回流3次，每次1小时。

二、消肿止痛膏质量标准的建立

2.1 仪器与材料

G1313A高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；WFA-203B三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；SK1200H科导斯超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；MA110分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）；101-1AB电热鼓风干燥箱（天津泰斯特仪器有限公司）；色谱柱（Agilent ZORBAX SB-C₁₈ 150mm×4.6mm安捷伦科技有限公司）。甲醇为色谱纯；水为纯净水；其余试剂均为分析纯。当归、姜黄、白芷、细辛均购于贵阳市济仁堂药业有限公司，并经贵阳中医学院生药实验室周汉华教授准确鉴定；白芷对照药材（中国药品生物制品检定所，120945-200406），细辛对照药材（中国药品生物制品检定所，121204-200803），当归对照药材（中国药品生物制品检定所，120927-201014），姜黄对照药材（中国药品生物制品检定所，121188-200502），欧前胡素对照品（中国药品生物制品检定所，110826-201013），阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，110773-201012），姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所，110823-201004），异欧前胡素对照品（中国食品药品检定研究院，110827-201109），细辛脂素对照品（中国食品药品检定研究院，111889-201102）。

定性鉴别

2.2.2.1  白芷的TLC鉴别

取干膏粉末0.5g，加乙醚10ml，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺白芷的干膏粉末、白芷药材和白芷对照药材各0.5g，同法制成阴性对照溶液、药材溶液和对照药材溶液。再取欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述六种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（3：2）为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与两个对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液则无相应斑点。色谱见图1。

当归的TLC鉴别

（1）取当归药材粉末0.5g，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为药材溶液。另取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。当归药材溶液在当归对照药材溶液斑点的相同位置均有相同斑点（见图2a）。

（2）取干膏粉末3g，加1％碳酸氢钠溶液50ml，超声处理10分钟，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺当归的干膏粉末和当归药材各3g，同法制成阴性对照溶液和药材溶液，再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4：1：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与阿魏酸对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照品溶液也有相应斑点，表明有阴性干扰（见图2b）。

细辛的TLC鉴别

取干膏粉末0.5g，加甲醇20ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取缺细辛的干膏粉末、细辛药材和细辛对照药材各0.5g，同法制成阴性对照溶液、药材溶液和对照药材溶液。再取细辛脂素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述五种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与细辛脂素对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液则无相应斑点（见图3）。

姜黄的TLC鉴别

取干膏粉末0.2g，加无水乙醇20ml，振摇，放置30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺姜黄的干膏粉末、姜黄药材和姜黄对照药材各0.2g，同法制成阴性对照溶液、药材溶液和对照药材溶液。再取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述五种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（96：4：0.7）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与姜黄素对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液则无相应斑点（见图4）。

含量测定（HPLC法）

2.2.3.1　色谱条件及系统适应性试验

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C₁₈柱（150mm×4.6mm）；流动相：甲醇-水（55：45）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：300nm；进样量：10μL。理论塔板数按欧前胡素峰计算应不低于3000。精密吸取对照品溶液 、供试品溶液和阴性对照品溶液各 10μL，注入高效液相色谱仪。结果表明，阴性对照溶液在欧前胡素色谱峰处无相应色谱峰出现。欧前胡素对照品、供试品溶液及阴性对照溶液的HPLC图谱见图5。

　溶液的制备

2.2.3.2.1　对照品溶液的制备　取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3.2.2　供试品溶液的制备　取消肿止痛膏用8倍量80%的乙醇回流三次，每次1h，过滤，置于蒸发皿（已恒重），挥干，得到干浸膏。称取1g干浸膏置于25mL容量瓶中，加入甲醇溶解，定容至刻度，作为供试品溶液。

2.2.3.2.3　阴性对照溶液的制备　精密称取按处方及制备工艺制备的不含白芷的阴性样品1.0g，按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

　标准曲线的绘制

分别精密吸取欧前胡素对照品溶液（0.1mg/mL）0.5、1、2、5、10、15μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，欧前胡素进样量（X）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=1785.13362X-0.79161213，r=0.99996。结果，欧前胡素进样量在0.05～1.5μg范围内与峰面积线性关系良好。

　精密度试验

分别精密吸取欧前胡素对照品溶液（0.1mg/mL）10μL，重复进样6次，测定峰面积，结果，RSD=1.37%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验

分别精密吸取供试品溶液10μL，于0、2、4、8、12、24小时分别进样，计算欧前胡素峰面积值。结果，RSD=2.47%，表明欧前胡素在24小时内稳定。

2.2.3.6　重复性试验

取消肿止痛膏1.0g，精密称定6份，按供试品溶液的制备方法制成供试液，分别进样10μL。记录色谱图，并记录欧前胡素峰面积值，结果，RSD=1.9%，表明重复性试验良好。

　加样回收率试验

精密称取已知含量的样品6份，分别精密加入欧前胡素对照品溶液，按上述色谱条件进行测定，进样量10μL，计算加样回收率，结果见表5。

　样品含量测定

取3个批号消肿止痛膏，按“2.2.3.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10，按上述色谱条件测定，计算欧前胡素含量。结果，3批样品的含量分别为0.2547mg.g^-1、0.2531mg.g^-1、0.2541mg.g^-1，平均含量为0.2540mg.g^-1。

讨论

2.2.4.1  消肿止痛膏为医院制剂，对其建立质量标准，可以更好地保证药品的质量，保障人民群众用药安全有效，从而在临床上得到大规模的运用。

2.2.4.2　在含量测定制备供试液过程中，笔者对乙醇用量、乙醇浓度、提取次数、回流时间做了正交试验，结果，选用8倍量80%乙醇回流3次，每次1小时，提取得到的欧前胡素含量最佳。

2.2.4.3　由于本品中主药当归有效成分阿魏酸在薄层色谱中有阴性干扰，笔者在制定其质量标准时选择白芷有效成分欧前胡素为考察指标，结果，在薄层色谱中无阴性干扰，斑点清晰，不受样品中其他药味干扰，专属性强；在高效液相色谱法中，重现性、精密度好，各项试验结果满意，可作为本品定性、定量检测指标。

本发明对现有的消肿止痛膏的制备工艺进行改良，使消肿止痛膏中的有效成分含量更高，并且解决了目前消肿止痛膏缺乏规范的质量标准的问题，为产品建立了科学、规范、可行的质量标准，将为此药在临床上更安全、有效的应用奠定基础。本发明方法简单，成本低廉，使用效果好。

附图说明

附图1为白芷的薄层色谱图；

附图1中，1为欧前胡素对照品溶液、2为异欧前胡素对照品溶液、3为供试品溶液、4为阴性对照溶液、5为白芷对照药材溶液、6为白芷药材溶液；

附图2为当归薄层色谱图；

附图2（a）中，1为当归药材溶液、2为当归对照药材溶液；附图2（b）中，1为阴性对照溶液、2为供试品溶液、3为当归药材溶液、4为阿魏酸对照品溶液；

附图3为细辛薄层色谱图；

附图3中，1为阴性对照溶液、2为供试品溶液、3为细辛脂素对照品溶液、4为细辛药材溶液、5为细辛对照药材溶液；

附图4为姜黄薄层色谱图；

附图4中，1为供试品溶液、2为阴性对照品溶液、3为姜黄素对照品溶液、4为姜黄药材溶液、5为姜黄对照药材溶液；

附图5为高效液相色谱图。

具体实施方式

本发明的实施例1：消肿止痛膏的制备方法，按质量份数计算，将17份黄连与50.9份黄柏混合，并采用质量百分比为70%的乙醇将其浸泡1小时，再将浸液渗漉48小时后，收集渗漉液；将135.6份当归、33.9份细辛、50.9份白芷、50.8份姜黄、50.8份栀子以及50.8份生大黄混合，加入该混合物总质量8倍量的质量百分比为80%的乙醇进行回流提取1小时，自然冷却后进行过滤获得续滤液；将渗漉液与续滤液合并，并浓缩成浸膏；再将1000份凡士林加热熔化，并加入上述浸膏中，充分搅匀均匀后加入50.8份天花粉粉和8.5份生半夏，混匀即得成品。成品为黄棕色软膏，厚薄均匀，气芳香。

消肿止痛膏的制备方法的质量检测方法，在进行生产前，先将白芷、当归、细辛及姜黄分别进行TLC鉴别；在生产完成后，将成品取样，采用HPLC法测定了欧前胡素的含量。

本发明的实施例2：消肿止痛膏的制备方法的质量控制方法，（1）取装量差异下的干膏粉末0.5g，加乙醚10ml，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺白芷的干膏粉末、白芷药材和白芷对照药材各0.5g，同法制成阴性对照溶液、药材溶液和对照药材溶液。再取欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述六种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（3：2）为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与两个对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液则无相应斑点。

（2）a、取当归药材粉末0.5g，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为药材溶液。另取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。当归药材溶液在当归对照药材溶液斑点的相同位置均有相同斑点。

b、取装量差异下的干膏粉末3g，加1％碳酸氢钠溶液50ml，超声处理10分钟，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺当归的干膏粉末和当归药材各3g，同法制成阴性对照溶液和药材溶液，再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4：1：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与阿魏酸对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照品溶液也有相应斑点，表明有阴性干扰。

（3）取装量差异下的干膏粉末0.5g，加甲醇20ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取缺细辛的干膏粉末、细辛药材和细辛对照药材各0.5g，同法制成阴性对照溶液、药材溶液和对照药材溶液。再取细辛脂素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述五种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与细辛脂素对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液则无相应斑点。

（4）取装量差异下的干膏粉末0.2g，加无水乙醇20ml，振摇，放置30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺姜黄的干膏粉末、姜黄药材和姜黄对照药材各0.2g，同法制成阴性对照溶液、药材溶液和对照药材溶液。再取姜黄素对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述五种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（96：4：0.7）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与姜黄素对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液则无相应斑点。

检查：应符合软膏剂项下有关的各项规定（中国药典2010年版一部附录12页）。

含量测定：照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。

色谱条件及系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(55：45)为流动相；检测波长为300nm。理论板数按欧前胡素峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备：取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取装量差异下的干膏粉末用8倍量80%的乙醇回流三次，每次1h，过滤，置于蒸发皿（已恒重），挥干，得到干浸膏。称取1g干浸膏置于25mL容量瓶中，加入甲醇溶解，定容至刻度，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

Claims (2)

1.一种消肿止痛膏的制备方法，其特征在于：按质量份数计算，将15-20份黄连与48-52份黄柏混合，并采用质量百分比为70%的乙醇将其浸泡0.8-1.5小时，再将浸液渗漉48小时后，收集渗漉液；将120-140份当归、30-35份细辛、48-53份白芷、48-53份姜黄、48-53份栀子以及48-53份生大黄混合，加入该混合物总质量8-12倍量的质量百分比为80%的乙醇进行回流提取0.8-1.5小时，自然冷却后进行过滤获得续滤液；将渗漉液与续滤液合并，并浓缩成浸膏；再将1000份凡士林加热熔化，并加入上述浸膏中，充分搅匀均匀后加入48-53份天花粉粉和7-9份生半夏，混匀即得成品。

2.一种如权利要求1所述的制备方法的质量检测方法，其特征在于：在进行生产前，先将白芷、当归、细辛及姜黄分别进行TLC鉴别；在生产完成后，将成品取样，采用HPLC法测定了欧前胡素的含量。