CN104244718A - 抗体-药物缀合物以及相关化合物、组合物和方法 - Google Patents

抗体-药物缀合物以及相关化合物、组合物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104244718A
CN104244718A CN201280067454.XA CN201280067454A CN104244718A CN 104244718 A CN104244718 A CN 104244718A CN 201280067454 A CN201280067454 A CN 201280067454A CN 104244718 A CN104244718 A CN 104244718A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
joint
joints
formula
drug conjugates
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201280067454.XA
Other languages
English (en)
Inventor
大卫·Y·杰克逊
爱德华·哈
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Igenica Inc
Original Assignee
Igenica Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Igenica Inc filed Critical Igenica Inc
Publication of CN104244718A publication Critical patent/CN104244718A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered

Abstract

抗体-细胞毒素抗体-药物缀合物和相关化合物，如接头-细胞毒素缀合物和用于制备其的接头、微管溶素类似物和在其合成中的中间体；组合物；和方法，包括治疗癌症的方法。

Description

抗体-药物缀合物以及相关化合物、组合物和方法
发明背景
发明领域
本发明涉及抗体-药物缀合物(ADC)以及相关化合物，如用于制备它们的接头、微管溶素(tubulysin)类似物和在其合成中的中间体；组合物；和方法，包括治疗癌症的方法。
相关领域的描述
癌症是美国第二常见的死亡原因，而除了手术切除以外几乎没有有效的治疗方案。在癌症的医学治疗中，使用靶向存在于癌细胞上的抗原的单克隆抗体已经变得普遍。已批准用于在美国治疗应用的抗癌抗体包括阿仑单抗其是一种用于治疗慢性淋巴细胞性白血病的人源化抗CD52抗体；贝伐单抗其是一种用于结肠直肠癌的人源化抗VEGF抗体；西妥昔单抗其是一种用于结肠直肠癌、头颈癌和鳞状细胞癌的嵌合抗表皮生长因子抗体；伊匹单抗其是一种用于黑色素瘤的人抗CTLA-4抗体；奥法木单抗其是一种用于慢性淋巴细胞性白血病的人抗CD20抗体；帕尼单抗其是一种用于结肠直肠癌的人抗表皮生长因子受体抗体；利妥昔单抗其是一种用于非霍奇金淋巴瘤的嵌合抗CD20抗体；托西莫单抗其是一种用于非霍奇金淋巴瘤的鼠抗CD20抗体；和曲妥珠单抗其是一种用于乳腺癌的人源化抗HER2抗体。虽然这些抗体已被证明在其适用的癌症的治疗中有用，但是其很少作为单一药剂有疗效，而是一般地与癌症的标准化疗组合使用。
作为一个实例，曲妥珠单抗是重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，其以高亲和力选择性地结合于人表皮生长因子受体2蛋白(HER2(ErbB2))的胞外域(Coussens等人,Science1985,230,1132-9；Salmon等人,Science1989,244,707-12)，从而抑制HER2-阳性癌细胞的生长。虽然HERCEPTIN在对之前已接受过广泛抗癌治疗的患有HER2-过表达乳腺癌的患者进行治疗是有用的，但在该群体中的一些患者未能响应或仅较差地响应HERCEPTIN治疗。因此，对于进一步开发针对未能响应或仅较差地响应HERCEPTIN治疗的患有HER2-过表达肿瘤或与HER2表达相关的其他疾病的患者的HER2定向癌症疗法具有显著的临床需求。
抗体药物缀合物(ADC)是迅速增长的一类靶向疗法，其代表了对改善癌症药物的选择性和细胞毒活性的有希望的新方法。参见例如，Trail等人,“Monoclonal antibody drug immunoconjugates for targeted treatment ofcancer”,Cancer Immunol.Immunother.2003,52,328-337；和Chari,“TargetedCancer Therapy:Conferring Specificity to Cytotoxic Drugs”,Acc.Chem.Res.,2008,41(1),98-107。这些ADC具有三个组分：(1)单克隆抗体，其通过(2)接头缀合于(3)细胞毒素。细胞毒素通过与赖氨酸上的伯胺或与半胱氨酸上的巯基选择性反应的接头与抗体上的赖氨酸或半胱氨酸侧链连接。能够缀合的接头/药物的最大数量取决于存在于抗体上的反应性氨基或巯基的数目。典型的抗体含有高达90个赖氨酸作为潜在的缀合位点；然而，由于ADC与较高数目的细胞毒素发生聚集，因此对于大多数ADC，每个抗体的细胞毒素的最佳数目通常为2至4。因此，常规的赖氨酸连接的ADC目前在临床开发中是含有每个抗体0至10个细胞毒素的异质混合物，所述细胞毒素缀合于抗体上的不同氨基。ADC成功的关键因素包括：单克隆抗体是癌症抗原特异性的、非免疫原性、低毒性和被癌细胞内化；细胞毒素是高效的并且适用于接头连接；并且接头可以对半胱氨酸(S)或赖氨酸(N)结合具有特异性、在循环中稳定、可以是蛋白酶可切割的和/或pH敏感的且适用于连接于细胞毒素。
在美国被批准用于治疗应用的抗癌ADC包括贝伦妥单抗-维多汀(brentuximab vedotin)一种用于间变性大细胞淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤的缀合到一甲基奥里斯他汀E(monomethylauristatin E)的嵌合抗CD30抗体；和吉妥珠单抗奥佐米星一种用于急性骨髓性白血病的缀合到卡里奇霉素γ的人源化抗CD33抗体–但是在2010年由于缺乏有效性而被撤销。
虽然若干ADC已证实了近来的临床成功，但是目前开发中的大多数ADC的效用可能受限于繁琐的合成工艺导致产品成本高，与有限的细胞效力相关的抗肿瘤活性不足，以及由于接头的不稳定性和ADC异质性导致的可疑的安全性。参见例如，Ducry等人,“Antibody-Drug Conjugates:LinkingCytotoxic Payloads to Monoclonal Antibodies”,Bioconjugate Chem.2010,21,5-13；Chari,“Targeted Cancer Therapy:Conferring Specificity to CytotoxicDrugs”,Acc.Chem.Res.2008,41,98-107；和Senter,“Recent advancements inthe use of antibody drug conjugates for cancer therapy”,Biotechnol.:Pharma.Aspects,2010,11,309-322。
作为一个实例，已将曲妥珠单抗缀合到美登木素生物碱(maytansinoid)药物美登素(mertansine)，以形成ADC曲妥珠单抗艾坦辛(trastuzumabemtansine)，也称为曲妥珠单抗-DM1或曲妥珠单抗-MC-DM1，缩写为T-DM1(LoRusso等人,“Trastuzumab Emtansine:A Unique Antibody-DrugConjugate in Development for Human Epidermal Growth Factor Receptor2-Positive Cancer”,Clin.Cancer Res.2011,17,6437-6447；Burris等人,“Trastuzumab emtansine:a novel antibody-drug conjugate for HER2-positivebreast cancer”,Expert Opin.Biol.Ther.2011,11,807-819)。目前其在美国处于针对该适应症的III期研究阶段。美登素通过马来酰亚胺己酰基(MC)接头缀合于曲妥珠单抗，所述接头在马来酰亚胺处结合于美登素侧链的4-硫戊酸末端，并在接头的羧基和曲妥珠单抗的赖氨酸碱性胺之间形成酰胺键。曲妥珠单抗具有88个赖氨酸(和32个半胱氨酸)。因此，曲妥珠单抗艾坦辛是高度异质的，含有每个曲妥珠单抗包含0至8个美登素单元的数十种不同的分子，平均美登素/曲妥珠单抗比为3.4。
抗体半胱氨酸也可以用于通过含有马来酰亚胺或其他硫醇特异性官能团的接头缀合于细胞毒素。典型的抗体含有4个或有时含有5个链间二硫键(2个在重链之间以及2个在轻链之间)，其将重链和轻链共价地键合在一起并有助于抗体在体内的稳定性。可以选择性地使用二硫苏糖醇、三(2-羧乙基)膦或其他温和的还原剂来还原这些链间二硫键，以得到8个用于缀合的反应性巯基。由于半胱氨酸连接的ADC具有更少的潜在缀合位点，因此半胱氨酸连接的ADC比赖氨酸连接的ADC异质性更低；然而，由于目前的半胱氨酸接头仅键合于一个硫原子，因此其也由于在缀合过程中的链间二硫键部分丧失而倾向于不太稳定。对于半胱氨酸连接的ADC，每个抗体的细胞毒素的最佳数量也为2至4。例如，ADCETRIS是每个通过半胱氨酸缀合的抗体含有0至8个一甲基奥里斯他汀E残基的异质混合物。
微管溶素首先由研究小组从粘细菌培养物中分离(Sasse等人,J.Antibiot.2000,53,879-885)，是非常有效的细胞生长抑制剂，其通过抑制微管蛋白聚合并从而诱导细胞凋亡而起作用(Khalil等人,Chem.Biochem.2006,7,678-683；和Kaur等人,Biochem.J.2006,396,235-242)。微管溶素中的微管溶素D是最有效的，具有超过大多数其他微管蛋白调节剂(包括埃博霉素、长春碱和紫杉醇)10至100倍的活性(Steinmetz等人,Angew.Chem.2004,116,4996-5000；Steinmetz等人,Angew.Chem.Int.Ed.2004,43,4888-4892；和等人,Pure App.Chem.2003,75,167-178)。紫杉醇和长春碱目前用于多种癌症的治疗，而埃博霉素衍生物正在临床试验中进行活性评价。微管溶素D的合成衍生物将提供与抑制和关键结合相互作用有关的必要信息，并且作为抗癌剂可以具有优越的性质，所述抗癌剂作为分离的实体或作为靶向抗体或配体上的化学弹头。
微管溶素D是复杂的四肽，其可以分为四个区域，Mep(D-N-甲基哌啶甲酸)、Ile(异亮氨酸)、Tuv(管式缬氨酸，tubuvaline)和Tup(管式苯丙氨酸，tubuphenylalanine)，如下式所示：
大多数微管溶素的更有效的衍生物，包括微管溶素D，还掺入了令人关注的O-酰基N,O-缩醛官能团，其在天然产物中很少能观察到。该反应性官能团在酸性和碱性反应条件中均不稳定，因此可在微管溶素的功能中起到关键作用(Iley等人,Pharm.Res.1997,14,1634-1639)。最近，报道了微管溶素D的全合成，这代表着掺入O-酰基N,O-缩醛官能团的微管溶素家族的任意成员的首次合成。(Peltier等人,J.Am.Chem.Soc.2006,128,16018-16019)。其他微管溶素，包括微管溶素U和V，已由等人合成，“Total Synthesis of Tubulysins U and V”,Angew.Chem.Int.Ed.2006,45,7235-7239。
美国专利申请公开第US 2011/0021568 A1号(Ellman等人)公开了许多微管溶素类似物的合成和活性，包括化合物(40)和(10)，此处分别称为T1和T2：
Schumacher等人,“In Situ Maleimide Bridging of Disulfides and a NewApproach to Protein PEGylation”,Bioconjugate Chem.2011,22,132-136公开了3,4-二取代的马来酰亚胺，如3,4-双(2-羟乙基磺酰基)吡咯-2,5-二酮[Schumacher等人称其为“二巯基乙醇马来酰亚胺”]和3,4-二(苯基磺酰基)吡咯-2,5-二酮[“二苯硫酚马来酰亚胺”]，以及其N-PEG化的衍生物，如生长抑素的PEG化剂的合成，其中所述经取代的马来酰亚胺键合于开放的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键的两个硫原子。
开发有效的均质ADC、含有其的组合物和用于其在治疗癌症中的使用的方法以及在其制备中的方法和中间体是合乎需要的。
发明概述
在第一个方面中，本发明为下式所示的抗体-细胞毒素抗体-药物缀合物(ADC)：
其中：
A为抗体，
PD为吡咯-2,5-二酮或吡咯烷-2,5-二酮，
双键代表从吡咯-2,5-二酮或吡咯烷-2,5-二酮的3位和4位到抗体中的开放半胱氨酸-半胱氨酸二硫键的两个硫原子的键，
L为–(CH2)m–或–(CH2CH2O)mCH2CH2–，
CTX为通过酰胺键键合于L的细胞毒素，
n为1至4的整数，和
m为1至12的整数。
由于PD与抗体中的开放半胱氨酸-半胱氨酸二硫键的两个硫原子的二齿结合(bidentate binding)，因此这些ADC是均质的并比含有单齿接头的ADC具有强的稳定性。因此它们将具有增长的体内半衰期，减少全身性释放的细胞毒素的量，并且比具有单齿接头的ADC更加安全。
在第二个方面中，本发明是含有本发明的第一个方面的ADC的药物组合物；并且在第三个方面中，本发明是通过给予本发明的第一个方面的ADC或本发明的第二个方面的药物组合物来治疗相关抗体靶向的癌症的方法。
在第四个方面中，本发明是式A、式B或式C所示的接头-细胞毒素缀合物：
其中，R为C1-6烷基，其可选地被卤素或羟基取代；苯基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代；萘基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代；或2-吡啶基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代，
L为–(CH2)m–或–(CH2CH2O)mCH2CH2–，
CTX为通过酰胺键键合于L的细胞毒素，和
m为1至12的整数。
这些二齿接头-细胞毒素缀合物用于制备本发明的第一个方面的抗体-药物缀合物。
在第五个方面中，本发明为式AA、BB或CC所示的接头：
其中，R为C1-6烷基，其可选地被卤素或羟基取代；苯基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代；萘基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代；或2-吡啶基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代，
L为–(CH2)m–或–(CH2CH2O)mCH2CH2–，
Z为羧基、C1-6烷氧羰基或氨基，和
m为1至12的整数。
这些二齿接头用于制备本发明的第四个方面的接头-细胞毒素缀合物。
在第六个方面中，本发明为式AAA、BBB或CCC所示的接头：
其中，R'为氯、溴、碘、C1-6烷基磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基、苯磺酰氧基或4-甲苯磺酰氧基，
L为–(CH2)m–或–(CH2CH2O)mCH2CH2–，
Z为羧基、C1-6烷氧羰基或氨基，和
m为1至12的整数。
这些二齿接头也用于制备本发明的第四个方面的接头-细胞毒素缀合物，并且用于制备本发明的第五个方面的接头。
在第七个方面中，本发明为式T3和T4所示的微管溶素：
这些新的微管溶素是先前提及的已知微管溶素T1和T2的类似物，但是由于末端N-甲基哌啶被未被取代的哌啶替代，因此这些新的化合物能够通过在哌啶氮原子和接头羧基的羰基之间形成酰胺键而与含有羧基的接头形成微管溶素-接头缀合物。
通过说明书和通过所提交的本申请的权利要求1-47的特征来表征本发明以及具有相应的药物组合物、方法和这些化合物的用途的优选实施方式。
发明详述
定义
“抗体”，也称为免疫球蛋白，是免疫系统用来识别并中和外来物(如细菌和病毒)的大的Y形蛋白。抗体识别外来靶标的独特部分(称为抗原)，这是由于抗体的“Y”的每个尖端含有对抗原特异性的位点，允许这两个结构精确地结合。抗体由四条多肽链组成，通过半胱氨酸二硫键连接的两条相同的重链和两条相同的轻链。“单克隆抗体”是单一特异性抗体，其中由于所有抗体分子均由均作为唯一亲代细胞的克隆的相同免疫细胞组成，因此所有抗体分子是相同的。最初，通常通过将骨髓瘤细胞与用所需抗原免疫的小鼠的脾细胞(或用所需抗原免疫的兔的B细胞)融合，然后通过注入亲和纯化的技术纯化所产生的杂交瘤来制备单克隆抗体。通过称为谱系克隆(repertoire cloning)或噬菌体展示/酵母展示的技术在病毒或酵母细胞中而不是在小鼠中制备重组单克隆抗体，可以获得免疫球蛋白基因片段的克隆以建立抗体库，所述抗体库的氨基酸序列与具有所需特异性的抗体略有不同。所产生的抗体可以通过发酵而大规模制备。“嵌合”或“人源化”抗体是含有在重组过程中使用的原始(通常是小鼠)和人DNA序列的组合的抗体，如其中编码单克隆抗体的结合部分的小鼠DNA与产生人抗体的DNA融合以产生部分小鼠、部分人单克隆抗体的那些抗体。全人源化抗体是使用转基因小鼠(进行基因工程改造以产生人抗体)或噬菌体展示库产生的。在本发明中特别关注的抗体是对癌症抗原具有特异性、非免疫原性、具有低毒性、且容易被癌细胞内化的那些抗体；并且适合的抗体包括阿仑单抗、贝伐单抗、布妥昔单抗、西妥昔单抗、吉妥珠单抗、伊匹单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗和曲妥珠单抗。
“细胞毒素”是当在癌细胞中释放时对该细胞有毒性的分子。在本发明中特别关注的细胞毒素是微管溶素(如式T3和T4所示的微管溶素)、奥里斯他汀(如一甲基奥里斯他汀E和一甲基奥里斯他汀F)、美登木素生物碱(如美登素)、卡里奇霉素(如卡里奇霉素γ)；并且尤其是那些能够通过与接头的酰胺键来配位，如通过具有碱性胺基或羧基来配位的细胞毒素，例如式T3和T4所示的微管溶素。
“接头”是具有两个反应性末端的分子，一个末端用于缀合于抗体，另一个用于缀合于细胞毒素。接头的抗体缀合反应性末端通常为能够通过抗体上的半胱氨酸巯基或赖氨酸胺基缀合于抗体的位点，因此其通常为巯基反应性基团，如双键(如在马来酰亚胺中)；或离去基团，如氯、溴或碘或R-磺酰基；或胺基反应性基团，如羧基；而接头的抗体缀合反应性末端通常为能够通过与细胞毒素上的碱性胺基或羧基形成酰胺键而缀合于细胞毒素的位点，因此通常为羧基或碱性胺基。当术语“接头”用于描述缀合形式的接头时，由于在接头和/或细胞毒素之间形成键，因此一个或两个反应性末端将不存在(如巯基反应性基团的离去基团)或不完整(如仅为羧酸的羰基)。
“抗体-药物缀合物”或“ADC”是各自通过接头缀合于一个或多个(通常为1至4个)细胞毒素的抗体。抗体通常为对癌症抗原具有特异性的单克隆抗体。
“微管溶素(tubulysin)”包括如由Sasse等人和在相关领域的描述中提及的其他作者描述为微管溶素的天然产物，和在第US 2011/0021568 A1号美国专利申请公开中描述的微管溶素类似物两者。在本发明中特别关注的微管溶素是式T3和T4所示的微管溶素，以及其中末端N-甲基哌啶被未被取代的哌啶替代从而允许与接头形成酰胺键的其他微管溶素。
“碱性胺”，例如形成式T3和T4所示的微管溶素的末端哌啶基团的部分的胺，为非酰胺的部分的伯胺或仲胺。
“治疗有效量”是指当给予患有癌症的人类时，足以达到治疗癌症的目的的本发明的第一个方面的ADC或本发明的第二个方面的组合物的量。癌症的“治疗(treating)”或“处理(treatment)”包括以下一种或多种：
(1)限制/抑制癌症的生长，即限制其发展；
(2)降低/预防癌症的扩散，即降低降低/预防转移；
(3)缓解癌症，即引起癌症的消退；
(4)降低/预防癌症的复发；和
(5)减轻癌症的症状。
所治疗的关注的癌症包括但不限于，癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。这样的癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)；肺癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌和肺的鳞癌；腹膜癌；肝癌；胃癌(gastric cancer)或胃癌(stomach cancer)，包括胃肠癌；胰腺癌；胶质母细胞瘤；宫颈癌；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；尿道癌；肝细胞瘤；乳腺癌，包括例如HER2阳性乳腺癌；结肠癌；直肠癌；结肠直肠癌；子宫内膜或子宫癌；唾液腺癌；肾癌(kidney cancer)或肾癌(renal cancer)；前列腺癌；外阴癌；甲状腺癌；肝癌；肛门癌；阴茎癌；黑色素瘤；多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤；脑癌；头颈癌和相关转移瘤。
缩写/缩略语
ADC：抗体-药物缀合物；DEA：二乙胺；DCC：1,3-二环己基碳二亚胺；DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯；DIPC：1,3-二异丙基碳二亚胺；DIPEA：二异丙基乙胺；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；DPBS：杜氏磷酸盐缓冲盐水(Dulbecco’s phosphate-buffered saline)；DTPA：二乙烯三胺五乙酸；DTT：二硫苏糖醇；EDC：乙基3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺；HATU：O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐；HOBT：N-羟基苯并三唑；NHS：N-羟基琥珀酰亚胺；NMM：N-甲基吗啉；MMAE：一甲基奥里斯他汀E；MMAF：一甲基奥里斯他汀F、一甲基奥里斯他汀苯丙氨酸；MC：马来酰亚胺己酰基、6-(2,5-二氧吡咯基)己酰基；PBS：磷酸缓冲盐水；PEG：聚乙二醇；TBTU：2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐；TCEP：三(2--羧乙基)膦；TGI：肿瘤生长抑制。
本发明的ADC
如在相关领域的描述中提及的，与抗体的半胱氨酸巯基配位的现有技术的ADC采用了单官能接头，其中实例为MC接头。还原和开放半胱氨酸-半胱氨酸二硫键以得到用于缀合的游离巯基降低了抗体的稳定性，并且通过经还原的巯基的反应形成ADC未重新形成键，如以下方案所说明：
然而，本发明的基于双官能吡咯-2,5-二酮和吡咯烷-2,5-二酮的接头含有两个反应性官能团(在以下方案中的X)，其与开放的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键的两个硫原子反应。双官能接头与两个半胱氨酸的反应得到“钉住的(stapled)”二硫琥珀酰亚胺或二硫马来酰亚胺抗体缀合物，所述缀合物的每个二硫键具有通过两个硫醚键连接的一个接头，如以下方案所示(双键不存在于环中：式AA和AAA所示的琥珀酰亚胺接头；双键存在于环中：式BB和BBB所示的马来酰亚胺接头)：
与用于半胱氨酸缀合的常规方法不同，该反应在2个半胱氨酸硫原子之间重新形成共价键合结构，因此没有损害抗体的整体稳定性。由于使用了所有反应性半胱氨酸，该方法还使得最佳的每个抗体4个药物的缀合成为可能，以得到均质ADC。总体结果是相对不稳定的二硫键被半胱氨酸之间的稳定的“钉(staple)”替代。由于马来酰亚胺的双键能够缀合于一个半胱氨酸硫原子而X基团与另一个缀合缀合，因此单取代的马来酰亚胺接头(式CC和CCC)在于抗体缀合时也是有效地双官能的。
本发明的化合物的制备
本发明的化合物，如ADC、接头-细胞毒素缀合物、接头和微管溶素，是通过有机和生物有机化学的常规方法制备的。参见例如，Larock,“Comprehensive Organic Transformations”,Wiley-VCH,New York,N.Y.,U.S.A.。在适当情况下，适合的保护基及其添加和除去描述于Greene等人,“Protective Groups in Organic Synthesis”,第2版,1991,John Wiley and Sons,New York,NY,US中。还可以参照本申请中别处提及的文献，如针对接头的合成较早提及的Schumacher等人的论文、针对微管溶素的制备的第US2011/0021568 A1号美国专利申请公开等。
微管溶素的制备
通过与Peltie等人和第US 2011/0021568 A1号美国专利申请公开类似的方法，通过用D-哌啶甲酸取代D-N--甲基哌啶甲酸，在适当情况下保护和脱保护来制备微管溶素T3和T4。
接头的制备
比较物(comparator)MC接头是通过其制备领域已知的方法制备的。
通过与Schumacher等人的方法类似的方法如下制备本发明的接头(在该反应方案中，R、L和Z具有在以上的本发明的第五个和第六个方面的讨论中给出的含义)：
将1当量2,3-二溴马来酰亚胺和约5当量碱(如碳酸氢钠)溶于甲醇中，并加入稍多于1当量的2-巯基吡啶的甲醇溶液。反应在环境温度下搅拌15分钟。在真空下除去溶剂并纯化残余物，如通过快速色谱在硅胶上纯化(石油醚:乙酸乙酯，从9:1到7:3梯度洗脱)，得到3,4-双(2-吡啶基磺酰基)吡咯-2,5-二酮。
3,4-双(2-吡啶基磺酰基)吡咯-2,5-二酮与侧链的偶联是在严格的干燥条件下进行的。在-78℃下，向在四氢呋喃和二氯甲烷的混合物中的1当量3,4-双(2-吡啶基磺酰基)吡咯-2,5-二酮和1当量三苯基膦中滴加1当量DIAD。搅拌反应5分钟并滴加在二氯甲烷中的0.5当量的侧链。搅拌5分钟后，加入在四氢呋喃和二氯甲烷中的1当量新戊醇，并再搅拌5分钟，然后加入1当量3,4-双(2-吡啶基磺酰基)吡咯-2,5-二酮并再搅拌5分钟。在搅拌的同时允许反应升温至环境温度20小时，然后在真空下除去溶剂。纯化残余物，如通过快速色谱在硅胶上纯化(甲醇:二氯甲烷，从0–10％甲醇梯度洗脱)，得到接头。侧链可以经保护的形式使用，并且随后在适当情况下通过Mitsunobu反应脱保护。
可替代地，可选地在适当情况下经保护的侧链，可以通过Mitsunobu偶联来偶联到3,4-二溴马来酰亚胺；在碱的存在下通过与R-硫醇的反应活化所产生的化合物以用于二硫键交换；在之前两段中描述了逆合成。
类似方法可以用于含有吡咯烷-2,5-二酮部分而不是以上显示的吡咯-2,5-二酮部分的接头，通过以2,3-二溴琥珀酰亚胺开始；但是更通常地，这些接头是这样制备的：用未经取代的马来酰亚胺制备接头，然后在与侧链偶联后溴化该接头，以得到二溴琥珀酰亚胺部分，然后最后一步是使用R-硫醇“活化”接头。
通过在碱性条件下对二溴琥珀酰亚胺接头脱溴化氢，以及通过相关方法常规制备单取代的马来酰亚胺接头。
接头-细胞毒素缀合物的制备
可以通过与Doronina等人,Bioconjugate Chem.2006,17,114-124和类似文献相似的方法制备接头-细胞毒素缀合物。将1当量接头和1当量HATU溶于无水DMF中，接着加入2当量DIPEA。将所产生的溶液加入溶于DMF的0.5当量细胞毒素中，并且在环境温度下搅拌反应3小时。通过反相HPLC在C-18柱上纯化接头-细胞毒素缀合物。
ADC的制备
针对具体的癌症靶标(抗原)培育抗体(通常是单克隆抗体)并纯化和表征。含有该抗体的治疗ADC通过用于半胱氨酸缀合的标准方法制备，如通过类似于以下的方法制备：Hamblett等人,“Effects of Drug Loading onthe Antitumor Activity of a Monoclonal Antibody Drug Conjugate”,Clin.Cancer Res.2004,10,7063-7070；Doronina等人,“Development of potent andhighly efficacious monoclonal antibody auristatin conjugates for cancer therapy”,Nat.Biotechnol.,2003,21(7),778-784；和Francisco等人,“cAC10-vcMMAE,an anti-CD30-monomethylauristatin E conjugate with potent and selectiveantitumor activity”,Blood,2003,102,1458-1465。通过使用过量的还原剂如DTT或TCEP在37℃下部分还原抗体30分钟来制备具有每个抗体四个药物的抗体-药物缀合物，然后通过G-25树脂，使用1mM DTPA的DPBS溶液洗脱来交换缓冲液。使用另外的DPBS稀释洗脱液，并且可以使用5,5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)[Ellman试剂]测量抗体的巯基浓度。在4℃下加入过量的(例如5倍)接头-细胞毒素缀合物1小时，可以通过加入大量过量的(例如20倍)半胱氨酸来淬灭缀合反应。可以在PBS平衡的SEPHADEX G-25上纯化所产生的ADC混合物，以去除未反应的接头-细胞毒素缀合物，如果需要进行脱盐，并通过尺寸排阻色谱纯化。然后可以无菌过滤(例如通过0.2μM滤器)所产生的ADC，如果需要冻干用于储存。
本发明的ADC的形成通过以下反应方案来说明，其中“Y”形结构表示抗体，仅显示了一个二硫键，并且在显示ADC的概念时，出于简明的目的省略了接头-细胞毒素缀合物的细节：
通常地，n为4，其中所有链间半胱氨酸二硫键被接头-药物缀合物替代。Schumacher等人在其缀合到生长抑素时向生长抑素和PEG化的接头的混合物中加入还原剂，因此这也可能是使用抗体和接头-细胞毒素缀合物并且不排除作为合成方法。
分析
可以通过惯常用于分析抗体的任何方法来分析本发明的ADC对希望的抗原的结合亲和力和特异性；并且可以通过惯常用于分析细胞抑制/细胞毒素剂的任意方法来分子其作为抗癌剂的功效，所述分析如用于针对细胞培养物的效力的分析、异种移植物分析等。考虑到可获得的技术和文献，本领域普通技术人员将没有困难地确定适合的分析技术；由那些分析的结果来确定作为抗癌剂在人体测试的适合剂量，并且由那些测试的结果来确定用于治疗人体癌症的适合剂量。
制剂和给予
本发明的第一个方面的ADC将通常被配制为用于静脉内给予的溶液或配制为用于复溶的冻干浓缩物以制备静脉内溶液(例如，使用生理盐水、5％葡萄糖或类似的等渗溶液来复溶)。其通常将通过静脉内注射或输注给予。考虑到可获得的技术和文献，药物制剂领域，尤其是抗癌抗体制剂领域的普通技术人员，将无困难地开发适合的制剂。
实施例
接头的合成
实施例1-3,4-双(2-吡啶基磺酰基)吡咯-2,5-二酮的合成
将1g的3,4-二溴吡咯-2,5-二酮[2,3-二溴马来酰亚胺]加入到具有橡胶塞和鼓泡器的干净的100mL圆底烧瓶中，并溶于50mL HPLC级甲醇。将2当量2-巯基吡啶加入20mL闪烁管中，并溶于10mL甲醇。在氮气和搅拌下，通过配有16号针头的20mL注射器将2-巯基吡啶/甲醇溶液滴加到3,4-二溴吡咯-2,5-二酮中，并且再搅拌反应混合物3-4小时。蒸发甲醇并将粗产物溶于乙酸乙酯中并装载到约2g硅胶上。使用9:1到0:1的己烷:乙酸乙酯梯度通过12g硅胶筒洗脱硅胶装载的粗产物超过25个柱体积。鉴定富集的馏分，合并并冻干至干燥。用乙酸乙酯和乙醚结晶终产物以得到黄色针晶，通过过滤收集所述针晶。
对于其他3,4-二(R-磺酰基)吡咯-2,5-二酮，可以使用Schumacher等人的方法进行类似合成(参见第S17-S18页的补充材料)。还可以进行类似的合成，以(3,4-二溴-2,5-二氧吡咯基)-封端的接头[即，侧链已添加到吡咯氮的化合物]开始以得到相应的(2,5-二氧-3,4-二(R-磺酰基)吡咯基)-封端的接头；和/或以其他硫醇(如Schumacher等人的苯硫酚和2-羟基乙硫醇)开始以得到相应的接头；和/或以其他吡咯二酮或吡咯烷二酮(如3,4-二氯吡咯-2,5-二酮或3,4-二溴吡咯烷-2,5-二酮)开始或基于其，以得到相应的3,4-二(R-磺酰基)吡咯-2,5-二酮或3,4-二(R-磺酰基)吡咯烷-2,5-二酮或基于其的接头。
实施例2-39-(3,4-二溴-2,5-二氧吡咯基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九烷酸的合成：
将100mL双颈圆底烧瓶火焰干燥并在氮气下冷却。向经冷却的烧瓶中加入200mg(0.296mmol)39-羟基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九烷酸叔丁酯。将106mg三苯基膦溶于约小瓶中的5mL无水四氢呋喃中，并在氮气下将该溶液通过套管通入到100mL烧瓶中。在冰-水浴中冷却100mL烧瓶15分钟。搅拌下向经冷却的溶液中加入55mg(0.217mmol)3,4-二溴吡咯-2,5-二酮，直到观察到澄清溶液。将58.3μL的DIAD加入冷却的反应混合物中，在冰浴中再搅拌10分钟。搅拌反应混合物并允许达到室温超过约20小时，然后在旋转蒸发仪上浓缩至干，得到黄色粘稠油状物，将其吸附到约1g硅胶上并干法上样到Reveleris正相色谱单元。使用1:0到9:1的甲醇:二氯甲烷梯度在12g硅胶筒上洗脱油状物超过28个柱体积。合并含有所需产物的馏分并浓缩至干。将经纯化的产物悬浮于50:50乙腈:水中并冻干过夜，以提供澄清的浅黄色粘稠油状物。通过LC-MS分析，叔丁基保护的羧酸产物已在后处理中部分脱保护。为了使材料完全脱保护成为游离酸，使用5％三氟乙酸的二氯甲烷溶液处理冻干的材料，浓缩至干并在乙腈:水(50:50)中冻干过夜。
可以进行类似的合成，以3,4-双(2-吡啶基磺酰基)吡咯-2,5-二酮开始以得到39-(2,5-二氧-3,4-双(2-吡啶基磺酰基)吡咯基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九烷酸，或以其他的3,4-二(R-磺酰基)吡咯-2,5-二酮开始以得到相应的接头；和/或以其他羟基-封端的侧链(例如，使用6-羟基己酸叔丁酯)开始以得到6-(3,4-二溴-2,5-二氧吡咯基)己酸等。以马来酰亚胺而不是2,3-二溴马来酰亚胺开始的类似合成得到现有技术的比较物接头，如6-(2,5-二氧吡咯基)己酸，MC接头。
实施例3：39-(3,4-二溴-2,5-二氧吡咯烷基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九烷酸[dBrPEG接头]的合成：
以与实施例2的39-(3,4-二溴-2,5-二氧吡咯基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九烷酸相同的方法制备39-(2,5-二氧吡咯基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九烷酸，但是从马来酰亚胺而不是2,3-二溴马来酰亚胺开始。使用0.5当量的溴的氯仿溶液处理酸，接着回流过夜，在硅胶上快速纯化之后得到39-(3,4-二溴-2,5-二氧吡咯烷基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九烷酸。
可以使用其他羟基-封端的侧链(例如使用6-羟基己酸叔丁酯)进行类似合成，以得到6-(3,4-二溴-2,5-二氧吡咯烷基)己酸等。作为该合成的产物的二溴化的接头可以在另外的步骤中使用碱脱氢溴酸以得到(3-溴-2,5-二氧吡咯基)-封端的接头，如6-(3-溴-2,5-二氧吡咯基)己酸。
接头-细胞毒素缀合物的合成
实施例4：T4的合成
通过在EDC和碳酸氢钠的存在下将Fmoc-D-2-哌啶羧酸偶联于异亮氨酸来制备Fmoc-T4，然后通过与1当量的HOBT和DIPC的DMF溶液混合接着加入2.5当量的NMM将所产生的Fmoc-D-Pip-Ile-OH偶联于N-甲基缬氨酸中间体1(购自Concortis)。搅拌混合物过夜，并使用己烷和乙酸乙酯的梯度在硅胶上通过快速色谱纯化。蒸发溶剂得到Fmoc-T4，为黄色油状物。然后通过使用20％DEA的二氯甲烷溶液处理30分钟使Fmoc-T4脱保护以得到T4，使用乙腈/水洗脱，通过制备HPLC在C18反相柱上纯化T4。
实施例5：6-(2,5-二氧吡咯基)己酰基-T4[MC-T4]和39-(3,4-二溴-2,5-二氧吡咯烷基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九酰基-T4[dBrPEG-T4]的合成：
分别在实施例2和3中描述的将T4偶联于MC或dBrPEG接头通过以下方式进行：在2当量DIPEA的DMF溶液的存在下使用1当量TBTU活化接头，然后在室温下与T4偶联72小时。通过制备C18HPLC(乙腈-水梯度)纯化得到适合于缀合于抗体的MC-T4或dBrPEG-T4。
使用其他接头的类似合成得到相应的接头-T4缀合物。使用T3、MMAF或具有碱性胺的细胞毒素的类似合成得到相应的接头-细胞毒素缀合物。使用胺封端的接头和具有羧基的细胞毒素、以与以上实施例中活化接头的相同方式活化细胞毒素的类似合成得到其他接头-细胞毒素缀合物。
实施例6.39-(2,5-二氧-3,4-双(2-吡啶基磺酰基)吡咯基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九酰基-MMAF[dPSPEG-MMAF]的合成：
将39-(2,5-二氧-3,4-双(吡啶-2-基硫代)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧杂三十九烷酸加入干净的火焰干燥的50mL圆底烧瓶中，并在DCC的存在下使用NHS在3mL DMF中的溶液活化羧酸。将MMAF预溶于约1mL DMF中并通过22号针头转移到NHS-活化的酸中。将DIPEA加入到反应混合物中并搅拌过夜。在21.2mm×50mm Agilent PREP-C18柱上以35mL/min的流速通过反相HPLC纯化粗制反应混合物超过20个柱体积(约30分钟的梯度时间)。鉴定富集馏分，合并并冻干以得到dPSPEG-MMAF缀合物，为白色半固体。
使用其他接头的类似合成得到相应的接头-MMAF缀合物。使用T3、T4或具有碱性胺的其他细胞毒素的类似合成得到相应的接头-细胞毒素缀合物，如dPSPEG-T4。使用胺封端的接头和具有羧基的细胞毒素、以与以上实施例中活化接头的相同方式活化细胞毒素的类似合成得到其他接头-细胞毒素缀合物。
抗体-药物缀合物的合成
实施例7：曲妥珠单抗-dTSPEG-MMAF ADC的合成
将1mL20mg/mL的曲妥珠单抗在pH7.4PBS(Gibco，无Mg和Ca)中的溶液与1mM DTPA装载到无菌的1.7mL Eppendorf管中，然后加入2.75当量的TCEP盐酸盐(Sigma安瓿，浓度0.5M)并在37℃下孵育混合物1小时，得到平均每个曲妥珠单抗4个游离巯基对(这可以通过Ellman比色分析来证实-参见Ellman,“Tissue sulfhydryl groups”,Arch.Biochem.Biophys,1959,82,70-77或提及该分析的之后的论文)。在约0℃的冰浴中冷却经还原的抗体15分钟；然后加入约4当量的dPSPEG-MMAF在二甲亚砜中的溶液，并在37℃下孵育混合物2小时(或在4℃下孵育20小时)。通过尺寸排阻色谱法(GE纯色谱系统)或PD10脱盐柱来纯化所产生的曲妥珠单抗-dTSPEG-MMAF ADC。
使用其他接头-细胞毒素缀合物(如dPSPEG-T4)和/或其他抗体(如18-2A(鼠IgG2a抗体))的类似合成得到相应的ADC。
分析
通过在所关注的癌细胞系中测定本发明的ADC的细胞毒性来测试其体外效力和选择性，所述癌细胞系如表达与ADC的抗体部分对应的抗原的那些癌细胞系和缺乏抗原的类似癌细胞系。在癌症研究领域的技术人员熟知的动物模型中测试其体内效力和安全性，所述动物模型如小鼠皮下癌症异种移植物模型和小鼠原位癌症异种移植物模型。
实施例8：曲妥珠单抗ADC与曲妥珠单抗相比的细胞毒性
在HER2-阳性和HER2-阴性肿瘤细胞中将通过MC接头[曲妥珠单抗-MC-MMAF]将曲妥珠单抗缀合于目前使用的细胞毒素MMAF的两种ADC的细胞毒性与单独的曲妥珠单抗的细胞毒性进行比较。在HER2-阴性肿瘤细胞中，两种ADC和曲妥珠单抗本身的IC50为>500nM；然而，在HER2-阳性肿瘤细胞中，虽然曲妥珠单抗本身的IC50仍然>500nM，但是两种曲妥珠单抗-MC-MMAF ADC的IC50为0.009nM和0.018nM。这些结果表明ADC比其亲代抗体显著更加有效。
实施例9：T1和T2与MMAF相比的细胞毒性
在标准细胞毒性分析中，使用BT474(HER2+)细胞系将微管溶素T1和T2的细胞毒性与MMAF的细胞毒性进行比较。在这些细胞中，MMAF的IC50为93nM，T1的IC50为11nM，并且T2的IC50为<0.1nM，显示这些微管溶素比MMAF显著更加有效。这些结果表明，N-可缀合的微管溶素T3和T4与N-不可缀合的微管溶素T1和T2具有相似的效力，并且比MMAF显著更加有效。这些结果和实施例8的结果表明，微管溶素ADC比MMAFADC显著更加有效，并且将成为有效的抗癌剂。
实施例10：ADC对抗原表达细胞的结合亲和力
使用细胞ELISA测量抗体和ADC与抗原表达细胞的结合。经转导以表达靶标(F279细胞表达HER2，F244细胞表达CD98)的肉瘤细胞在384孔板中以5000个细胞每孔进行平板培养。次日，在不同的板中连续稀释抗体，然后转移到之前已通过抽吸去除介质的细胞板中。室温下孵育2小时后，使用缓冲液(具有0.1％牛血清白蛋白的pH7.4的DPBS)洗涤板，随后加入在介质中稀释的25μL辣根过氧化物酶标记的二抗，并在室温下孵育30分钟。然后洗涤板并加入15μL化学发光底物(Pierce目录编号37069)；并且在基于板的发光读数器中读取板。曲妥珠单抗和曲妥珠单抗ADC(曲妥珠单抗-MC-MMAF、曲妥珠单抗-MC-T4、曲妥珠单抗-dTSPEG-MMAF和曲妥珠单抗-dTSPEG-T4)显示对F277细胞相当的亲和力；且18-2A和18-2A ADC(18-2A-MC-MMAF、18-2A-MC-T4、18-2A-dTSPEG-MMAF和18-2A-dTSPEG-T4)显示对F244细胞相当的亲和力，表明药物有效载荷的缀合物不影响抗体结合。
实施例11：ADC针对抗体表达细胞的效力
在细胞增殖分析中测试了ADC对肿瘤细胞生长抑制的效力。在药物处理前将Ramos(B细胞淋巴瘤)和BT474(HER2+人乳腺癌)细胞系分别以3000和5000个细胞每孔接种于96孔半区板。在主板中连续稀释ADC和对照，然后转移到细胞板中，在37摄氏度和5％CO2下孵育3天。如制造商所描述的，使用ATPLite 1Step试剂盒(Perkin Elmer目录编号50-904-9883)通过测量孔中的ATP水平对细胞进行定量。18-2A ADC(18-2A-MC-MMAF、18-2A-MC-T4、18-2A-dTSPEG-MMAF和18-2A-dTSPEG-T4)大致等效并比Ramos细胞中的亲代18-2A抗体显著更加有效，并且曲妥珠单抗ADC(曲妥珠单抗-MC-MMAF、曲妥珠单抗-MC-T4、曲妥珠单抗-dTSPEG-MMAF和曲妥珠单抗-dTSPEG-T4)大致等效并比BT474细胞中的亲代曲妥珠单抗抗体显著更加有效。
实施例12：鼠异种移植物模型中的ADC的效力
Ramos细胞异种移植物模型
Ramos细胞系获得自ATCC并根据供应商的方案进行培养。在4-6周龄免疫缺陷雌性小鼠(Taconic C.B-17scid)的右侧腹部皮下注射在PBS(无镁或钙)和BD基质胶(BD Biosciences)1:1的混合物中的1×107个活细胞。每只小鼠注射的总体积为200μL，其中50％为基质胶。一旦肿瘤达到65-200mm3的尺寸，则使小鼠随机化。在PBS中配制ADC并且以1mg/Kg的剂量静脉内一次给予到侧尾静脉内，并每周两次测量体重和肿瘤。如vander Horst等人,“Discovery of Fully Human Anti-MET Monoclonal Antibodieswith Antitumor Activity against Colon Cancer Tumor Models In Vivo”,Neoplasia,2009,11,355-364所述计算肿瘤体积。实验在每个实验点8只动物的组中进行。阴性对照组根据情况接受HB121(IgG2a阴性抗体)和游离MMAF或T4，其浓度与ADC将释放的浓度是等摩尔的，而阳性对照组接受18-2A。具有本发明的接头的18-2A ADC(18-2A-dTSPEG-MMAF和18-2A-dTSPEG-T4)显示比比较物ADC(分别为18-2A-MC-MMAF和18-2A-MC-T4)略高但相当的TGI，比亲代18-2A抗体更高的TGI，而所有均显示比对照显著的TGI。基于动物重量测量未观察到毒性。
BT474细胞异种移植物模型
BT474细胞系获得自ATCC并根据供应商的方案进行培养。在4-6周龄免疫缺陷雌性小鼠(Taconic C.B-17scid)中植入β-雌二醇颗粒(pellet)，3天后在右侧腹部皮下注射在PBS(无镁或钙)和BD基质胶(BDBiosciences)1:1的混合物中的1×107个活细胞。每只小鼠注射的总体积为200μL，其中50％为基质胶。一旦肿瘤达到100-150mm3的尺寸，则使小鼠随机化。在PBS中配制ADC并且以1mg/Kg的剂量静脉内一次给予到侧尾静脉内，并每周两次测量体重和肿瘤。如以上引用的van der Horst等人所述计算肿瘤体积。实验在每个实验点8只动物的组中进行。阴性对照组根据情况接受HB121和游离MMAF或T4，其浓度与ADC将释放的浓度是等摩尔的，而阳性对照组接受1mg/Kg的曲妥珠单抗。具有本发明的接头的曲妥珠单抗ADC(曲妥珠单抗-dTSPEG-MMAF和曲妥珠单抗-dTSPEG-T4)显示与比较物ADC(分别为曲妥珠单抗-MC-MMAF和曲妥珠单抗-MC-T4)相当的TGI，比亲代曲妥珠单抗略高的TGI，而所有均显示比对照显著的TGI。基于动物重量测量未观察到毒性。
使用其他癌症(表达不同抗原的那些)和其中抗体与癌症表达的抗原相对应的ADC进行类似的测试。

Claims (47)

1.下式所示的抗体-药物缀合物：
其中：
A为抗体，
PD为吡咯-2,5-二酮或吡咯烷-2,5-二酮，
双键代表从吡咯-2,5-二酮或吡咯烷-2,5-二酮的3位和4位到所述抗体中的开放半胱氨酸-半胱氨酸二硫键的两个硫原子的键，
L为–(CH2)m–或–(CH2CH2O)mCH2CH2–，
CTX为通过酰胺键键合于L的细胞毒素，
n为1至4的整数，和
m为1至12的整数。
2.如权利要求1所述的抗体-药物缀合物，其中，A为单克隆抗体。
3.如权利要求1或2所述的抗体-药物缀合物，其中，A为人或人源化抗体。
4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，A为对癌抗原具有特异性的抗体。
5.如权利要求1所述的抗体-药物缀合物，其中，A为阿仑单抗、贝伐单抗、布妥昔单抗、西妥昔单抗、吉妥珠单抗、伊匹单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗或曲妥珠单抗。
6.如权利要求1所述的抗体-药物缀合物，其中，A为曲妥珠单抗。
7.如权利要求1-6中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，CTX为奥里斯他汀、卡里奇霉素、美登木素生物碱或微管溶素。
8.如权利要求7所述的抗体-药物缀合物，其中，CTX为一甲基奥里斯他汀E、一甲基奥里斯他汀F、卡里奇霉素γ、美登素、微管溶素T3或微管溶素T4。
9.如权利要求1-8中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，PD为吡咯烷-2,5-二酮。
10.如权利要求1-8中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，PD为吡咯-2,5-二酮。
11.如权利要求1-10中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，L为–(CH2)m–。
12.如权利要求1-10中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，L为–(CH2CH2O)mCH2CH2–。
13.一种药物组合物，其含有如权利要求1-12中任一项所述的抗体-药物缀合物。
14.一种通过向患有癌症的人类给予有效量的如权利要求1-12中任一项所述的抗体-药物缀合物或如权利要求13所述的药物组合物来治疗癌症的方法。
15.式A、B或C所示的接头-细胞毒素缀合物：
其中，R为C1-6烷基，其可选地被卤素或羟基取代；苯基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代；萘基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代；或2-吡啶基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代，
L为–(CH2)m–或–(CH2CH2O)mCH2CH2–，
CTX为通过酰胺键键合于L的细胞毒素，和
m为1至12的整数。
16.如权利要求15所述的接头-细胞毒素缀合物，其中，所述缀合物具有式A。
17.如权利要求15所述的接头-细胞毒素缀合物，其中，所述缀合物具有式B。
18.如权利要求15所述的接头-细胞毒素缀合物，其中，所述缀合物具有式C。
19.如权利要求15-18中任一项所述的接头-细胞毒素缀合物，其中，R为2-吡啶基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代。
20.如权利要求19所述的接头-细胞毒素缀合物，其中，R为2-吡啶基。
21.如权利要求15-20中任一项所述的接头-细胞毒素缀合物，其中，CTX为奥里斯他汀、卡里奇霉素、美登木素生物碱或微管溶素。
22.如权利要求21所述的接头-细胞毒素缀合物，其中，CTX为一甲基奥里斯他汀E、一甲基奥里斯他汀F、卡里奇霉素γ、美登素、微管溶素T3或微管溶素T4。
23.如权利要求15-21中任一项所述的接头-细胞毒素缀合物，其中，L为–(CH2)m–。
24.如权利要求15-21中任一项所述的接头-细胞毒素缀合物，其中，L为–(CH2CH2O)mCH2CH2–。
25.式AA、BB或CC所示的接头：
其中，R为C1-6烷基，其可选地被卤素或羟基取代；苯基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代；萘基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代；或2-吡啶基，其可选地被卤素、羟基、羧基、C1-3烷氧羰基或C1-3烷基取代，
L为–(CH2)m–或–(CH2CH2O)mCH2CH2–，
Z为羧基、C1-6烷氧羰基或氨基，和
m为1至12的整数。
26.如权利要求25所述的接头，其中，所述接头具有式AA。
27.如权利要求25所述的接头，其中，所述接头具有式BB。
28.如权利要求25所述的接头，其中，所述接头具有式CC。
29.如权利要求25-28中任一项所述的接头，其中，R为2-吡啶基。
30.如权利要求25-29中任一项所述的接头，其中，L为–(CH2)m–。
31.如权利要求25-29中任一项所述的接头，其中，L为–(CH2CH2O)mCH2CH2–。
32.如权利要求25-31中任一项所述的接头，其中，Z为羧基。
33.如权利要求25-31中任一项所述的接头，其中，Z为C1-6烷氧羰基。
34.如权利要求25-31中任一项所述的接头，其中，Z为氨基。
35.式AAA、BBB或CCC所示的接头：
其中，R'为氯、溴、碘、C1-6烷基磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基、苯磺酰氧基或4-甲苯磺酰氧基，
L为–(CH2)m–或–(CH2CH2O)mCH2CH2–，
Z为羧基、C1-6烷氧羰基或氨基，和
m为1至12的整数。
36.如权利要求35所述的接头，其中，所述接头具有式AAA。
37.如权利要求35所述的接头，其中，所述接头具有式BBB。
38.如权利要求35所述的接头，其中，所述接头具有式CCC。
39.如权利要求35-38中任一项所述的接头，其中，L为–(CH2)m–。
40.如权利要求35-38中任一项所述的接头，其中，L为–(CH2CH2O)mCH2CH2–。
41.如权利要求35-40中任一项所述的接头，其中，Z为羧基。
42.如权利要求35-40中任一项所述的接头，其中，Z为C1-6烷氧羰基。
43.如权利要求35-40中任一项所述的接头，其中，Z为氨基。
44.如权利要求35-43中任一项所述的接头，其中，R'为氯、溴或碘。
45.如权利要求44所述的接头，其中，R'为溴。
46.一种如式T3所示的微管溶素化合物：
47.一种如式T4所示的微管溶素化合物：
CN201280067454.XA 2011-12-05 2012-12-04 抗体-药物缀合物以及相关化合物、组合物和方法 Pending CN104244718A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161566909P 2011-12-05 2011-12-05
US61/566,909 2011-12-05
PCT/US2012/067803 WO2013085925A1 (en) 2011-12-05 2012-12-04 Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104244718A true CN104244718A (zh) 2014-12-24

Family

ID=48574809

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280067454.XA Pending CN104244718A (zh) 2011-12-05 2012-12-04 抗体-药物缀合物以及相关化合物、组合物和方法

Country Status (17)

Country Link
US (3) US20130224228A1 (zh)
EP (1) EP2793585A4 (zh)
JP (1) JP2015500287A (zh)
KR (1) KR20140139480A (zh)
CN (1) CN104244718A (zh)
AU (1) AU2012348017A1 (zh)
BR (1) BR112014013526A8 (zh)
CA (1) CA2857398A1 (zh)
HK (1) HK1203309A1 (zh)
IL (1) IL232936A0 (zh)
IN (1) IN2014CN04961A (zh)
MX (1) MX2014006739A (zh)
PH (1) PH12014501229A1 (zh)
RU (1) RU2014124984A (zh)
SG (1) SG11201402686UA (zh)
WO (1) WO2013085925A1 (zh)
ZA (1) ZA201403946B (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107406496A (zh) * 2015-03-10 2017-11-28 百时美施贵宝公司 可通过转谷氨酰胺酶缀合的抗体和由其制备的缀合物
CN107667118A (zh) * 2015-04-15 2018-02-06 加尼梅德药物有限公司 包含针对密封蛋白18.2之抗体的药物缀合物
WO2018185526A1 (en) * 2017-04-06 2018-10-11 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Conjugation of a cytotoxic drug with bis-linkage
CN109562152A (zh) * 2016-08-09 2019-04-02 西雅图基因公司 含有具有改善的生理化学性质的自稳定性接头的药物缀合物
CN109810039A (zh) * 2017-11-22 2019-05-28 上海青润医药科技有限公司 一种用于抗体-药物偶联的双取代马来酰胺类连接子及其制备方法和用途
CN111788208A (zh) * 2017-09-20 2020-10-16 Ph制药有限公司 泰兰他汀类似物
CN112220933A (zh) * 2018-07-03 2021-01-15 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 抗体-t2毒素缀合物及其用途

Families Citing this family (110)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8288557B2 (en) 2004-07-23 2012-10-16 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
EP2481427A1 (en) 2007-03-14 2012-08-01 Endocyte, Inc. Folate-Tubulysin conjugates
RU2523909C2 (ru) 2007-06-25 2014-07-27 Эндосайт, Инк. Конъюгаты, содержащие гидрофильные спейсеры линкеров
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
WO2013121175A1 (en) 2012-02-16 2013-08-22 Ucl Business Plc Lysosome-cleavable linker
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
US9801951B2 (en) * 2012-05-15 2017-10-31 Concortis Biosystems, Corp. Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
PT2872157T (pt) 2012-07-12 2020-04-30 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Conjugados de moléculas de ligação celular com agentes citotóxicos
US11873281B2 (en) 2012-07-12 2024-01-16 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Conjugates of cell binding molecules with cytotoxic agents
CA2887727A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Endocyte, Inc. Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
DK2956173T3 (en) 2013-02-14 2017-07-17 Bristol Myers Squibb Co TUBULYSIS RELATIONSHIPS, METHODS OF PRODUCING AND USING THEREOF
WO2014145090A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses
US20140363454A1 (en) * 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Antibody-Drug Conjugates, Compositions and Methods of Use
US10781259B2 (en) 2013-06-06 2020-09-22 Magenta Therapeutics, Inc. Modified antibodies and related compounds, compositions, and methods of use
FR3008408B1 (fr) 2013-07-11 2018-03-09 Mc Saf Nouveaux conjugues anticorps-medicament et leur utilisation en therapie
CA2921412A1 (en) 2013-08-26 2015-03-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
AU2014318545A1 (en) 2013-09-12 2016-03-24 Halozyme, Inc. Modified anti-epidermal growth factor receptor antibodies and methods of use thereof
US10836821B2 (en) * 2013-10-15 2020-11-17 Sorrento Therapeutics, Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
CN106255513B (zh) 2013-12-27 2022-01-14 酵活有限公司 用于药物偶联物的含磺酰胺连接系统
ES2843537T3 (es) * 2014-01-28 2021-07-19 Tube Pharmaceuticals Gmbh Compuestos citotóxicos de tubulisina y conjugados de los mismos
RU2685728C2 (ru) * 2014-01-29 2019-04-23 Шанхай Хэнжуй Фармасьютикал Ко., Лтд. Конъюгат лиганд - цитотоксическое лекарственное средство, способ его получения и его применения
GB201402006D0 (en) 2014-02-06 2014-03-26 Oncomatryx Biopharma S L Antibody-drug conjugates and immunotoxins
GB201402009D0 (en) 2014-02-06 2014-03-26 Oncomatryx Biopharma S L Antibody-drug conjugates and immunotoxins
WO2015123687A1 (en) 2014-02-14 2015-08-20 Centrose, Llc Extracellular targeted drug conjugates
SG11201606979TA (en) 2014-03-11 2016-09-29 Regeneron Pharma Anti-egfrviii antibodies and uses thereof
MA39862A (fr) * 2014-04-11 2017-02-15 Lakshmaiah Gingipalli Dérivés de tubulysine
WO2015187596A2 (en) * 2014-06-02 2015-12-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Biologically active molecule conjugates, reagents and methods of manufacture, and therapeutic uses
RU2764981C1 (ru) 2014-06-03 2022-01-24 ИксБиотеч Инк. Композиции и способы лечения и предупреждения инфекций, вызванных Staphylococcus aureus
SG11201701311YA (en) 2014-09-11 2017-03-30 Seattle Genetics Inc Targeted delivery of tertiary amine-containing drug substances
ES2753391T3 (es) 2014-10-14 2020-04-08 Halozyme Inc Composiciones de adenosina desaminasa 2 (ADA2), variantes de la misma y métodos de uso de las mismas
EP3209334A2 (en) * 2014-10-20 2017-08-30 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use
ES2832711T3 (es) 2014-10-31 2021-06-11 Abbvie Biotherapeutics Inc Anticuerpos anti-CS1 y conjugados anticuerpo fármaco
EP3215538A4 (en) * 2014-11-07 2018-07-04 Igenica Biotherapeutics, Inc. Anti-cd39 antibodies and uses thereof
US10077287B2 (en) 2014-11-10 2018-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Tubulysin analogs and methods of making and use
CN113209306A (zh) 2014-12-09 2021-08-06 艾伯维公司 具有细胞渗透性的bcl-xl抑制剂的抗体药物缀合物
JP2018508463A (ja) 2014-12-09 2018-03-29 アッヴィ・インコーポレイテッド 低細胞透過性を有するＢｃｌ−ｘＬ阻害性化合物およびこれを含む抗体薬物コンジュゲート
CA2970161A1 (en) 2014-12-09 2016-06-16 Abbvie Inc. Bcl-xl inhibitory compounds and antibody drug conjugates including the same
PE20171185A1 (es) 2015-01-14 2017-08-22 Bristol Myers Squibb Co Dimeros de benzodiazepina unidos con puentes de heteroarileno, conjugados de estos, y sus metodos de preparacion y uso
CN107849090A (zh) 2015-01-28 2018-03-27 索伦托医疗有限公司 抗体药物偶联物
BR112017020149A8 (pt) 2015-03-27 2023-05-02 Regeneron Pharma Derivados de maitansinoide, conjugados dos mesmos e métodos de uso
CN106279352B (zh) 2015-05-29 2020-05-22 上海新理念生物医药科技有限公司 海兔毒素10的衍生物及其应用
CN106267225B (zh) 2015-05-29 2020-03-06 上海新理念生物医药科技有限公司 三马来酰亚胺型连接子及其应用
IL296285A (en) 2015-07-06 2022-11-01 Regeneron Pharma Multispecific antigen binding molecules and their uses
WO2015155753A2 (en) * 2015-08-10 2015-10-15 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd Novel linkers and their uses in specific conjugation of drugs to a biological molecule
CA2994853C (en) 2015-08-14 2023-06-27 Rc Biotechnologies, Inc. Covalent linkers in antibody-drug conjugates and methods of making and using the same
WO2017095808A1 (en) 2015-11-30 2017-06-08 Abbvie Inc. ANTI-huLRRC15 ANTIBODY DRUG CONJUGATES AND METHODS FOR THEIR USE
ES2810755T3 (es) 2015-11-30 2021-03-09 Abbvie Inc Conjugados fármaco-anticuerpo anti-lrrc15 humano y métodos para su uso
CA3006000A1 (en) * 2015-12-04 2017-06-08 Seattle Genetics, Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
CN108368143B (zh) 2015-12-09 2022-02-01 维也纳医科大学 用于癌症疗法的单马来酰亚胺官能化的铂化合物
EP3387017A1 (en) 2015-12-11 2018-10-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing or preventing growth of tumors resistant to egfr and/or erbb3 blockade
MX2018008987A (es) 2016-01-25 2018-11-19 Regeneron Pharma Derivados de maitansinoide, conjugados de los mismos y metodos de uso.
US20190365913A1 (en) * 2016-02-04 2019-12-05 Tarveda Therapeutics, Inc. Stapled peptide conjugates and particles
WO2017161206A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Halozyme, Inc. Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
WO2017190079A1 (en) 2016-04-28 2017-11-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making multispecific antigen-binding molecules
LT3458102T (lt) 2016-05-17 2020-08-25 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-cmet antikūnų vaisto konjugatai ir jų naudojimo būdai
BR112018075651A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados anticorpo fármaco
CA3027033A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
MX2018015272A (es) 2016-06-08 2019-08-12 Abbvie Inc Anticuerpos anti-cd98 y conjugados de anticuerpo y farmaco.
JP2019521975A (ja) 2016-06-08 2019-08-08 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
BR112018075653A2 (pt) 2016-06-08 2019-08-27 Abbvie Inc anticorpos anti-b7-h3 e conjugados anticorpo fármaco
PE20190512A1 (es) 2016-06-08 2019-04-10 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo anti-egfr y farmaco
JP2019521973A (ja) 2016-06-08 2019-08-08 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂｈ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
WO2017214233A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
LT3458479T (lt) 2016-06-08 2021-02-25 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antikūnai ir antikūnų vaisto konjugatai
EP3478324A1 (en) 2016-07-01 2019-05-08 GlaxoSmithKline Intellectual Property (No.2) Limited Antibody-drug conjugates and therapeutic methods using the same
CN110088138B (zh) 2016-09-23 2023-08-25 瑞泽恩制药公司 抗steap2抗体、抗体药物偶联物和结合steap2和cd3的双特异性抗原结合分子以及其用途
FI3515487T3 (fi) 2016-09-23 2023-08-15 Regeneron Pharma Bispesifisiä anti-MUC16-CD3-vasta-aineita ja anti-MUC16-lääkekonjugaatteja
MX2019005330A (es) 2016-11-08 2019-09-11 Regeneron Pharma Esteroides y conjugados de proteinas de los mismos.
TWI782930B (zh) 2016-11-16 2022-11-11 美商再生元醫藥公司 抗ｍｅｔ抗體，結合ｍｅｔ之雙特異性抗原結合分子及其使用方法
US10864279B2 (en) 2016-12-16 2020-12-15 Industrial Technology Research Institute Linker-drug and antibody-drug conjugate (ADC) employing the same
EP3624894A1 (en) 2017-05-18 2020-03-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cyclodextrin protein drug conjugates
CN107652219B (zh) 2017-08-14 2021-06-08 上海新理念生物医药科技有限公司 四马来酰亚胺型连接子及其应用
MX2020006994A (es) 2018-01-08 2020-11-06 Regeneron Pharma Esteroides y conjugados de anticuerpos de los mismos.
WO2019212965A1 (en) 2018-04-30 2019-11-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibodies, and bispecific antigen-binding molecules that bind her2 and/or aplp2, conjugates, and uses thereof
CN112533951A (zh) 2018-05-09 2021-03-19 里珍纳龙药品有限公司 抗msr1抗体及其使用方法
MA52626A (fr) 2018-05-17 2021-03-24 Regeneron Pharma Anticorps anti-cd63, conjugués et leurs utilisations
EP3802611A2 (en) 2018-06-01 2021-04-14 Novartis AG Binding molecules against bcma and uses thereof
CA3106570A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Frame Pharmaceuticals B.V. Cancer vaccines for uterine cancer
CA3106564A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Frame Pharmaceuticals B.V. Cancer vaccines for breast cancer
EP3827263A1 (en) 2018-07-26 2021-06-02 Frame Pharmaceuticals B.V. Cancer vaccines for colorectal cancer
WO2020022903A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Frame Pharmaceuticals B.V. ARID1A, CDKN2A, KMT2B, KMT2D, TP53 and PTEN VACCINES FOR CANCER
WO2020022900A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Frame Pharmaceuticals B.V. Cancer vaccines for kidney cancer
CN116920115A (zh) * 2018-12-17 2023-10-24 荣昌生物制药(烟台)股份有限公司 一种用于抗体药物偶联物的连接子及其应用
JP2022513482A (ja) 2018-12-21 2022-02-08 アビディティー バイオサイエンシーズ，インク． 抗トランスフェリン受容体抗体およびその使用
US11666658B2 (en) 2018-12-21 2023-06-06 Regeneran Pharmaceuticals, Inc. Rifamycin analogs and antibody-drug conjugates thereof
EP3927435A1 (en) 2019-02-21 2021-12-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating ocular cancer using anti-met antibodies and bispecific antigen binding molecules that bind met
CN114786729B (zh) 2019-07-19 2023-12-19 免疫传感器治疗股份有限公司 抗体-sting激动剂缀合物及其在免疫疗法中的用途
WO2021022678A1 (zh) 2019-08-07 2021-02-11 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 一种抗体药物偶联物及其应用
CA3146933A1 (en) 2019-09-16 2021-03-25 Marcus KELLY Radiolabeled met binding proteins for immuno-pet imaging
US11814428B2 (en) 2019-09-19 2023-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PTCRA antibody-drug conjugates and uses thereof
US11958910B2 (en) 2020-02-28 2024-04-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bispecific antigen binding molecules that bind HER2, and methods of use thereof
AU2021231890A1 (en) 2020-03-06 2022-09-29 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-CD44 antibodies and their uses
CN115666589A (zh) 2020-03-19 2023-01-31 艾维迪提生物科学公司 治疗面肩肱型肌营养不良的组合物和方法
CN115697418A (zh) 2020-03-27 2023-02-03 艾维迪提生物科学公司 治疗肌营养不良的组合物和方法
CN115968304A (zh) 2020-04-16 2023-04-14 瑞泽恩制药公司 狄尔斯-阿尔德缀合方法
MX2023000544A (es) 2020-07-13 2023-02-13 Regeneron Pharma Conjugados de proteina-farmaco que comprenden analogos de camptotecina y metodos de uso de los mismos.
WO2022056494A1 (en) 2020-09-14 2022-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibody-drug conjugates comprising glp1 peptidomimetics and uses thereof
IL301702A (en) 2020-10-22 2023-05-01 Regeneron Pharma Anti-FGFR2 antibodies and methods of using them
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
WO2022187591A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
WO2023014863A1 (en) 2021-08-05 2023-02-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses
US11807685B2 (en) * 2021-08-05 2023-11-07 The Uab Research Foundation Anti-CD47 antibody and uses thereof
AU2022339667A1 (en) 2021-09-03 2024-04-11 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cmet antibodies and their uses
WO2023034571A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-lamp1 antibodies and their uses
CA3231330A1 (en) 2021-09-16 2023-03-23 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US20230287138A1 (en) 2022-01-12 2023-09-14 Regneron Pharmaceuticals, Inc. Protein-drug conjugates comprising camptothecin analogs and methods of use thereof
WO2023173132A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-glp1r antibody-drug conjugates comprising glp1 peptidomimetics and uses thereof
WO2024020164A2 (en) 2022-07-21 2024-01-25 Firefly Bio, Inc. Glucocorticoid receptor agonists and conjugates thereof

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1900116A (zh) * 1995-01-26 2007-01-24 拜奥根Idec马萨诸塞公司 抗－LT－β－R抗体、含有该抗体的药用组合物及其制药应用
CN101001615A (zh) * 2004-06-16 2007-07-18 加里·R·奥斯特罗夫 药物输送产品和方法
US20090175865A1 (en) * 2004-09-23 2009-07-09 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
US7851437B2 (en) * 2002-07-31 2010-12-14 Seattle Genetics Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
WO2011018613A1 (en) * 2009-08-10 2011-02-17 Ucl Business Plc Functionalisation of solid substrates

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10254439A1 (de) * 2002-11-21 2004-06-03 GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) Tubulysine, Herstellungsverfahren und Tubulysin-Mittel
ZA200603619B (en) * 2003-11-06 2008-10-29 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
US20080267876A1 (en) * 2005-09-20 2008-10-30 Yissum Research Development Company Nanoparticles for Targeted Delivery of Active Agent
KR20100093578A (ko) * 2007-11-30 2010-08-25 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-비7에이취4 단일클론 항체-약물 접합체 및 그 사용 방법
US8563700B2 (en) * 2008-06-16 2013-10-22 Immunogen, Inc. Synergistic effects
PE20110571A1 (es) * 2008-07-15 2011-08-29 Genentech Inc Conjugados derivados de antraciclina, como compuestos antitumorales
WO2013132268A1 (en) * 2012-03-09 2013-09-12 Ucl Business Plc Chemical modification of antibodies

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1900116A (zh) * 1995-01-26 2007-01-24 拜奥根Idec马萨诸塞公司 抗－LT－β－R抗体、含有该抗体的药用组合物及其制药应用
US7851437B2 (en) * 2002-07-31 2010-12-14 Seattle Genetics Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
CN101001615A (zh) * 2004-06-16 2007-07-18 加里·R·奥斯特罗夫 药物输送产品和方法
US20090175865A1 (en) * 2004-09-23 2009-07-09 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2011018613A1 (en) * 2009-08-10 2011-02-17 Ucl Business Plc Functionalisation of solid substrates

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
H.DALTON KING,GENE M.DUBOWCHIK AND MICHAEL A. WALKER: "《Facile synthesis of maleimide bifunctional linkers》", 《TETRAHEDRON LETTERS》 *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107406496A (zh) * 2015-03-10 2017-11-28 百时美施贵宝公司 可通过转谷氨酰胺酶缀合的抗体和由其制备的缀合物
CN107667118A (zh) * 2015-04-15 2018-02-06 加尼梅德药物有限公司 包含针对密封蛋白18.2之抗体的药物缀合物
CN109562152A (zh) * 2016-08-09 2019-04-02 西雅图基因公司 含有具有改善的生理化学性质的自稳定性接头的药物缀合物
CN109562152B (zh) * 2016-08-09 2024-04-02 西雅图基因公司 含有具有改善的生理化学性质的自稳定性接头的药物缀合物
US11944689B2 (en) 2016-08-09 2024-04-02 Seagen Inc. Drug conjugates with self-stabilizing linkers having improved physiochemical properties
WO2018185526A1 (en) * 2017-04-06 2018-10-11 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Conjugation of a cytotoxic drug with bis-linkage
CN110621673A (zh) * 2017-04-06 2019-12-27 杭州多禧生物科技有限公司 双链连接的细胞毒性药物偶联物
CN111788208A (zh) * 2017-09-20 2020-10-16 Ph制药有限公司 泰兰他汀类似物
CN111788208B (zh) * 2017-09-20 2023-11-24 Ph制药有限公司 泰兰他汀类似物
CN109810039A (zh) * 2017-11-22 2019-05-28 上海青润医药科技有限公司 一种用于抗体-药物偶联的双取代马来酰胺类连接子及其制备方法和用途
CN109810039B (zh) * 2017-11-22 2021-11-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种用于抗体-药物偶联的双取代马来酰胺类连接子及其制备方法和用途
CN112220933A (zh) * 2018-07-03 2021-01-15 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 抗体-t2毒素缀合物及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
HK1203309A1 (zh) 2015-10-30
BR112014013526A2 (pt) 2017-06-13
SG11201402686UA (en) 2014-06-27
JP2015500287A (ja) 2015-01-05
US20130224228A1 (en) 2013-08-29
US20200392108A1 (en) 2020-12-17
US20160303247A1 (en) 2016-10-20
ZA201403946B (en) 2015-09-30
WO2013085925A1 (en) 2013-06-13
MX2014006739A (es) 2015-06-05
EP2793585A4 (en) 2015-12-09
IL232936A0 (en) 2014-07-31
PH12014501229A1 (en) 2014-09-08
KR20140139480A (ko) 2014-12-05
EP2793585A1 (en) 2014-10-29
RU2014124984A (ru) 2016-01-27
BR112014013526A8 (pt) 2017-06-13
CA2857398A1 (en) 2013-06-13
AU2012348017A1 (en) 2014-07-03
IN2014CN04961A (zh) 2015-09-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104244718A (zh) 抗体-药物缀合物以及相关化合物、组合物和方法
CN106029083B (zh) 亲水性抗体-药物偶联物
JP7430643B2 (ja) カンプトテシンペプチドコンジュゲート
JP2021185176A (ja) エリブリンをベースとする抗体−薬物コンジュゲート及び使用方法
US20180147294A1 (en) Antibody-drug conjugates, compositions and methods of use
CN105813653A (zh) 与目标-药物偶联物并用的亚甲基氨基甲酸酯连接物
CN107108694A (zh) 含叔胺药物物质的靶向递送
CN110099698A (zh) 鹅膏蕈碱抗体缀合物
JP2018529646A (ja) 抗体薬物複合体における共有結合リンカー、並びにその製造方法及び使用方法
JP2020528069A (ja) 高いインビボ忍容性を有するアントラサイクリン系の抗体薬物複合体
TW202203978A (zh) 電荷可變連接子
CN112601522A (zh) 抗体-alk5抑制剂偶联物及其用途
JP2022533854A (ja) 抗体－薬物コンジュゲート、及び、治療におけるその使用
JP2022126826A (ja) ヘテロアリールスルホンをベースとするコンジュゲーションハンドル、これらの調製のための方法、および抗体薬物コンジュゲートの合成におけるこれらの使用
TWI726217B (zh) 含有抗globo h抗體之抗體－藥物共軛物及其用途
CN114269388A (zh) 抗体-alk5抑制剂缀合物及其用途
CN115052663A (zh) Alk5抑制剂缀合物及其用途
NZ722252B2 (en) Hydrophilic antibody-drug conjugates
EA040940B1 (ru) Гидрофильные конъюгаты антитело-лекарственное средство
NZ761642B2 (en) Hydrophilic antibody-drug conjugates
NZ761646B2 (en) Hydrophilic antibody-drug conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20141224