CN104193840A - 一种灵芝孢子粉多糖及其制备方法 - Google Patents

一种灵芝孢子粉多糖及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种灵芝孢子粉多糖及其制备方法，该灵芝孢子粉多糖是由如下方法制备得到的：灵芝孢子粉用无水乙醇提取，收集沉淀再用沸水提取，收集上清液；上清液减压浓缩后进行醇沉，即得到灵芝孢子粉多糖。本发明得到的灵芝孢子粉多糖具有很好的保湿效果。

Description

一种灵芝孢子粉多糖及其制备方法
技术领域
本发明涉及食用菌提取领域，具体的说涉及一种灵芝孢子粉多糖及其制备方法。
背景技术
灵芝(Ganoderma lucidum)为多孔菌科灵芝属真菌，是一种具有扶正固本的传统珍贵药材。灵芝孢子粉是灵芝生长成熟期，从灵芝菌褶中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞。随着灵芝栽培技术的发展，灵芝孢子粉的产量越来越高，甚至超过子实体的产量。多糖是孢子粉中的主要活性成分之一，近十几年对灵芝孢子粉的功效也进行了大量的研究，发现具有多种生物活性，如提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射等。
发明内容
本发明首先提供了一种灵芝孢子粉多糖的制备方法，该方法包括如下步骤：
灵芝孢子粉用无水乙醇提取，收集沉淀再用沸水提取，收集上清液；上清液减压浓缩后进行醇沉，即得到灵芝孢子粉多糖。
具体的说，本发明的一种灵芝孢子粉多糖的制备方法，包括如下步骤：
1)灵芝孢子粉粗多糖的提取：灵芝孢子粉中加入8-12倍重量的无水乙醇中，煮沸并保持微沸1-3h，离心收集沉淀；沉淀加入8-12倍重量的蒸馏水，煮沸并保持微沸1-3h，离心，收集上清液；
2)多糖粗提液的浓缩：上清液减压浓缩至料液比(质量/体积)为1:0.5-1.5；
3)乙醇沉淀：向浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇与浓缩液体积比达到56％-57％，室温静置1小时，离心，收集沉淀，加蒸馏水溶解冻干，即得粗多糖。
本发明还提供了由上述方法制备得到的灵芝孢子粉多糖。
本发明制备得到的粗多糖得率约为1.5％，多糖含量达到79％以上，蛋白质含量低。HPSEC-MALLS-RI分析显示粗多糖主要有一个糖峰，单糖分析结果显示粗多糖主要由葡萄糖组成。制备得到的灵芝孢子粉多糖具有高的保湿活性，具体可用于保湿的化妆品类和改善老年人体质的保健品类等。本发明的灵芝孢子粉多糖的制备方法是一种简便、高效、成本低、多糖得率及含量高、适合规模化生产的方法。
附图说明
图1 HPSEC-MALLS-RI分析图谱
图2 高效阴离子色谱检测结果
图3 保湿率测定效果(其GLW1代表实施1制备得到的灵芝孢子粉多糖；GLW2代表实施2制备得到的灵芝孢子粉多糖；HyaluronateAcid代表透明质酸。)
具体实施方式：
灵芝孢子粉来源：浙江龙泉基地的沪农灵芝1号采收的孢子粉。
实施例1：
1、灵芝孢子粉多糖的提取：称取200.9g灵芝孢子粉，加入2000mL无水乙醇，加热至沸腾，保持微沸120分钟，9700g离心20min。沉淀重复上述步骤，再提取1次，9700g离心20min。沉淀加入2000mL蒸馏水，加热至沸腾，保持微沸120分钟，9700g离心20min，沉淀重复上述步骤，再提取1次，9700g离心20min，合并上清液。
2、多糖粗提液的浓缩：上清液浓缩至220mL。
3、乙醇沉淀：向浓缩液中缓慢加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇含量达到56％，室温静置1小时，离心去除醇沉上清，收集沉淀，蒸馏水溶解后放入冷冻干燥机中冷冻干燥，即得多糖干品。
制备所得多糖得率为1.51％，多糖含量为79.79％。
分析天平称量多糖干品的重量。按以下公式计算粗多糖得率。
多糖含量的检测：
多糖含量测定：用苯酚－硫酸法测定，精密称取本品5mg置2ml离心管中，加蒸馏水1ml，溶解后，离心。上清液稀释50倍，精密吸取样品1.0m1，置15ml试管中，分别加入苯酚、硫酸试剂，充分反应后在490nm处测定吸光度值，以葡聚糖为标准品计算样品的多糖含量。本工艺所得灵芝破壁孢子粉多糖含量达到79％以上。
实施例2：
1、灵芝孢子粉多糖的提取：称取90.17g灵芝孢子粉，加入900mL无水乙醇，加热至沸腾，保持微沸120分钟，9700g离心20min。沉淀重复上述步骤，再提取1次，9700g离心20min。沉淀加入2000mL蒸馏水，加热至沸腾，保持微沸120分钟，9700g离心20min，沉淀重复上述步骤，再提取1次，9700g离心20min，合并上清液。
2、多糖粗提液的浓缩：上清液浓缩至65mL。
3、乙醇沉淀：向浓缩液中缓慢加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇含量达到56％，室温静置1小时，离心去除醇沉上清，收集沉淀，蒸馏水溶解后放入冷冻干燥机中冷冻干燥，即得多糖干品。
制备所得多糖得率为1.56％，多糖含量为79.67％。
实施例3
1、样品制备：称取实施例2中多糖2mg，加入1mLHPLC流动相，充分溶解，13200r/min离心15min，上清液经0.25μm的水相微孔膜过滤后进行HPSEC-MALLS-RI分析。
2、色谱分析条件：分析柱选日本东洋曹达TOSOH TSK PWXL6000和TSKPWXL3000凝胶色谱柱串联后分析，流动相为含0.05mol/L的NaH2PO4和0.15mol/L的NaNO3溶液(pH＝7，0.02％叠氮钠)，流速为0.5mL/min，色谱柱温用柱温箱恒定在35℃；激光检测器光源波长选用623.8nm。多糖在溶液中的折光指数增量(dn/dc)按照0.146mL/g计算。
3、分子量计算：使用Astra(version6.1.1,Wyatt Technology,Santa Barbara,CA)数据分析软件对光散射数据进行采集和分析，计算分子量和其他多糖分子特性。
HPSEC-MALLS-RI分析图谱如图1所示，实施例1的灵芝孢子粉多糖组分主要含有1个大峰，这个峰的重均分子量7.312×105Da。
实施例4:
1、样品制备：称取实施2中的孢子粉多糖2mg加入带盖玻璃瓶，加入3mL 2mol/L的三氟乙酸，110℃油浴4h，冷却至室温，50℃氮吹仪吹干，再加甲醇吹干，重复两次至无酸味，用2mL超纯水冲洗玻璃瓶于离心管中，13200r/min离心10min，对上清液上高效阴离子色谱(HPAEC)分析。
2、色谱条件：Dionex公司色谱柱CarboPacTMPA20(3×150nm)；流动相0.8％NaOH溶液(pH＝12)；时间30min；柱温30℃；流速0.45mL/min；进样量25ul。
经高效阴离子色谱检测所得单糖组成如图2所示。多糖组分由海藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖四种单糖组成，其中葡萄糖所占比例最高，百分摩尔比为94.53％，而海藻糖、半乳糖和甘露糖糖比例很低。
实施例5：
体外保湿功效测定:通过测定物质的保湿效果来测定实施例1和实施例2的灵芝破壁孢子粉多糖的保湿效果，以透明质酸为对照。将由饱和(NH4)2SO4水溶液作为相对湿度(R.H.)为81％的干燥器和由饱和K2CO3水溶液作为R.H.＝43％的干燥器置于20℃恒温环境中，精确称取1.0g各种提取物干燥试样置于直径为3cm的结晶皿中，放在81％的干燥器内，48h后吸湿后的试样继续放置43％的干燥器中24h，测定放置前后试样的重量差，由式(1)求出保湿率，H0为试样含水重量，Hn为放置后试样含水重量。
保湿率(％)＝100Hn/H0         (1)
结果显示实施例1和实施例2的灵芝破壁孢子粉多糖均具有较好的保湿效果。

Claims (3)

1.一种灵芝孢子粉多糖的制备方法，该方法包括如下步骤：
灵芝孢子粉用无水乙醇提取，收集沉淀再用沸水提取，收集上清液；上清液减压浓缩后进行醇沉，即得到灵芝孢子粉多糖。
2.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子粉多糖的制备方法，包括如下步骤：
1)灵芝孢子粉粗多糖的提取：灵芝孢子粉中加入8-12倍重量的无水乙醇中，煮沸并保持微沸1-3h，离心收集沉淀；沉淀加入8-12倍重量的蒸馏水，煮沸并保持微沸1-3h，离心，收集上清液；
2)多糖粗提液的浓缩：上清液减压浓缩至料液比为1：0.5-1.5；
3)乙醇沉淀：向浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇与浓缩液体积比达到56％-57％，室温静置1小时，离心，收集沉淀，加蒸馏水溶解冻干，即得粗多糖。
3.根据权利要求1或2的制备方法制备得到的灵芝孢子粉多糖。
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