CN103948638A - 一种药用真菌的干燥方法 - Google Patents

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李诗标
苏静
许翠萍
牛凤菊
马玉奎
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Abstract

本发明涉及一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：取新采收的药用真菌，除去杂质，蒸透，冻干。按本发明的干燥方法制备的药用真菌，主要有效成分含量高,药理活性强。

Description

一种药用真菌的干燥方法
技术领域
本发明涉及药品制法，特别涉及一种药用真菌的干燥方法，属医药技术领域。
背景技术
真菌类药物广泛，通常所说的药用真菌多限于能够形成子实体的高等真菌。常用的药用真菌有灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、冬虫夏草、猴头菇、茯苓、猪苓等。
灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganodermalucidum(Leyss.ExFr.)Karst.或紫芝GanodermasinenseZhao，XuetZhang的干燥子实体。桑黄为担子菌亚门(Basidiomycotina)层菌纲(Hymenomycetes)多孔菌目(Polyporales)多层孔菌科(Hymenochaetacae)针层孔菌属(Phellinus ) 的干燥子实体。树舌为担子菌多孔菌纲目树舌科树舌属真菌(Ganodermaapplanatum(Pers.)Pat) 的干燥子实体。桦褐孔菌属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目、多孔菌科、褐卧孔菌属(Fuscoporia obliqua(Pers.Fr.)Aosh或Inonotus obliquus(Fr.)Pilat) 的干燥子实体。金芝为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb茎基部寄生的锈革孔菌科叶状层菌属真菌茶藨子叶孔菌[Phylloporia ribis (Schumach.:Fr.) Ryvarden]的干燥子实体。猴头菇又叫猴头菌，猴蘑，猴头，猴菇为Hericium erinaceus的干燥子实体。
中医以真菌作为药材治疗人类疾病有着悠久的历史。药用真菌干燥是一个必不可少的采收加工过程，经干燥可保持一定的药用成分以及不易腐败变质，干燥方法将直接影响产品的质量。提高药用真菌的药理活性是医药工作者的重要任务。
发明内容
本发明的目的是提供一种药用真菌的干燥方法，该方法干燥的药用真菌，主要有效成分含量高，药理活性强。
本发明是这样实现的：
一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：取新采收的药用真菌，除去杂质，蒸透，冻干。
本发明的一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：冻干是冷冻至-20℃以下，抽真空至干燥室压力30Pa以下，加热升华，升华的温度控制在40℃以下，解析阶段的温度应控制在45℃以下，至干。
本发明的一种药用真菌的干燥方法，药用真菌是灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、猴头菇。
灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganodermalucidum(Leyss.ExFr.)Karst.或紫芝GanodermasinenseZhao，XuetZhang的干燥子实体。桑黄为担子菌亚门(Basidiomycotina)层菌纲(Hymenomycetes)多孔菌目(Polyporales)多层孔菌科(Hymenochaetacae)针层孔菌属(Phellinus ) 的干燥子实体。树舌为担子菌多孔菌纲目树舌科树舌属真菌(Ganodermaapplanatum(Pers.)Pat) 的干燥子实体。桦褐孔菌属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目、多孔菌科、褐卧孔菌属(Fuscoporia obliqua(Pers.Fr.)Aosh或Inonotus obliquus(Fr.)Pilat) 的干燥子实体。金芝为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb茎基部寄生的锈革孔菌科叶状层菌属真菌茶藨子叶孔菌[Phylloporia ribis (Schumach.:Fr.) Ryvarden]的干燥子实体。猴头菇又叫猴头菌，猴蘑，猴头，猴菇为Hericium erinaceus的干燥子实体。
至此完成了本发明，按本发明的干燥方法制备的药用真菌，主要有效成分含量高，药理活性强。
下面通过试验例进一步说明本发明的有益之处，试验例旨在进一步说明本发明的有益之处，而非对本发明的限制。
一、将同一批新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、猴头菇、金芝，去除杂质，分别按以下方法进行加工。
1）晾干：阴凉通风处，摊开晾干；
2）烘干：60℃以下烘干；
3）蒸后冻干：取新采收的药用真菌，除去杂质，蒸15分钟,经察看已蒸透,取出，置冷冻机内，冷冻至-20℃，抽真空至干燥室压力30Pa，加热升华，升华的温度控制在40℃，解析阶段的温度应控制在45℃，至干。
一、不同方法干燥的药用真菌多糖含量比较
对照品溶液的制备：取葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
标准曲线的制备：分别精密量取对照品溶液0.2ml、0.4m1、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1g，加80％的硫酸溶液100ml使溶解，摇匀)6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放人冰浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照《中国药典》紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备：取各样品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀.精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇匀，4℃放置12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，转移至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
测定法：精密量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。
按干燥品计算，多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计，结果见表1、2、3、4、5、6。
表1 不同方法干燥灵芝多糖含量（%）
干燥方法 晾干 烘干 蒸后冻干
含量（%） 1.76 1.74 3.45
表2 不同方法干燥桑黄多糖含量（%）
干燥方法 晾干 烘干 蒸后冻干
含量（%） 3.75 3.76 6.13
表3 不同方法干燥树舌多糖含量（%）
干燥方法 晾干 烘干 蒸后冻干
含量（%） 4.26 4.25 7.08
表4 不同方法干燥桦褐孔菌多糖含量（%）
干燥方法 晾干 烘干 蒸后冻干
含量（%） 5.31 5.26 8.73
表5 不同方法干燥猴头菇多糖含量（%）
干燥方法 晾干 烘干 蒸后冻干
含量（%） 4.38 4.37 7.36
表6 不同方法干燥金芝多糖含量（%）
干燥方法 晾干 烘干 蒸后冻干
含量（%） 4.35 4.34 6.82
由以上各表看出，药用真菌“蒸后冻干”，多糖含量明显高于“晾干”和“烘干”。
二、不同方法干燥的药用真菌抗人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562试验。
1、制备药用真菌提取物  分别取不同方法干燥的药用真菌粉碎，各加水煎煮两次，第一次加水8倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并药液，药液滤过，取滤液，浓缩至相对密度为1.10（60℃）时，加入乙醇使含醇量达到75％，沉淀，静置36小时，吸取上清液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎，得不同方法干燥的药用真菌提取物。
2、肿瘤细胞株　人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562，用RPMI-1649培养液, 37℃,5%CO2，相对湿度100%培养，贴壁细胞0.25%胰蛋白酶消化传代。
3、方法  MTT比色法测定提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用。取对数生长期细胞，用新鲜的RPMI-1640培养液配制成细胞悬液，悬浮细胞1×105个/ml贴壁细胞0.8×105个/ml。悬浮细胞分别加入不同浓度实验药物后接种于96孔培养板中；贴壁细胞先接种于96孔培养板中，每孔90μl24h后分别加入不同浓度实验药物。终体积为每孔100μl且每组设3个平行孔，共设4组:受试药组T(培养液+细胞悬液+不同浓度受试药)、阴性对照组N(培养液+细胞悬液)、药物颜色对照组TC(培养液+不同浓度受试药)、空白对照组B(培养液+生理盐水)。受试药浓度依次为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml。置37℃,5%CO2培养箱中培养72h后，向每孔加入MTT溶液10μl震荡混匀后，继续培养4h，加入SDS90μl终止培养,37℃过夜，然后室温下在微量振荡器上震荡10min，酶标仪测定570nm波长处的吸光度(OD值),实验重复3次。
按以下公式计算生长抑制率：
生长抑制率(%)=(N组OD均值-B组OD均值)—(T组OD均值-TC组OD均值)/N组OD均值-B组OD均值×100%。
4、结果
1）不同方法干燥灵芝对肿瘤细胞的抑制率结果见表7、表8、表9。
表7  对SPCA-1的抑制率结果
抑制率（%） 10（μg/ml） 30（μg/ml） 50（μg/ml）
晾干  46.52 53.42 66.51
烘干  46.47 53.50 66.53
蒸后冻干 61.73 74.87 83.16
表8  对HepG2的抑制率结果
抑制率（%） 10（μg/ml） 30（μg/ml） 50（μg/ml）
晾干  43.62 54.74 58.67
烘干  43.61 54.71 58.64
蒸后冻干 58.42 71.23 87.52
表9  对K562的抑制率结果
抑制率（%） 10（μg/ml） 30（μg/ml） 50（μg/ml）
晾干  57.29 68.44 74.65
烘干  57.31 68.42 74.62
蒸后冻干 67.24 76.35 86.91
2）不同方法干燥树舌对肿瘤细胞的抑制率结果见表10、表11、表12。
表10  对SPCA-1的抑制率结果
抑制率（%） 10（μg/ml） 30（μg/ml） 50（μg/ml）
晾干  47.43 58.36 67.11
烘干  47.42 58.35 67.12
蒸后冻干 57.41 76.82 86.45
表11  对HepG2的抑制率结果
抑制率（%） 10（μg/ml） 30（μg/ml） 50（μg/ml）
晾干  46.72 56.54 65.57
烘干  46.34 56.53 65.54
蒸后冻干 60.47 76.53 79.68
表12  对K562的抑制率结果
抑制率（%） 10（μg/ml） 30（μg/ml） 50（μg/ml）
晾干  53.28 66.51 71.62
烘干  53.26 66.50 71.56
蒸后冻干 65.02 77.31 85.52
3）不同方法干燥树舌对肿瘤细胞的抑制率结果见表13、表14、表15。
表13  对SPCA-1的抑制率结果
抑制率（%） 10（μg/ml） 30（μg/ml） 50（μg/ml）
晾干  53.21 61.15 75.33
烘干  53.21 61.17 75.34
蒸后冻干 71.34 76.25 83.88
表14  对HepG2的抑制率结果
抑制率（%） 10（μg/ml） 30（μg/ml） 50（μg/ml）
晾干  43.85 54.20 60.27
烘干  43.84 54.21 60.25
蒸后冻干 61.54 68.37 84.61
表15  对K562的抑制率结果
抑制率（%） 10（μg/ml） 30（μg/ml） 50（μg/ml）
晾干  55.52 70.44 75.78
烘干  55.53 70.43 75.85
蒸后冻干 64.97 78.43 87.42
以上各表结果表明，不同方法干燥的药用真菌对SPCA-1、HepG2、K562细胞的增殖均有抑制作用，其中，蒸后冻干疗效最好。
三、不同方法干燥的金芝甾醇类含量比较
1、仪器及材料 
仪器：Agilentl 100高效液相色谱仪，G1315A/B (DAD紫外检测器)；药品：麦角甾醇对照品，甲醇，超纯水，其他试剂均为分析纯。
2、方法
 色谱条件色谱柱:Zorbax eclips  XDB C8(150mm×4.6mm);流动相:甲醇；流速:1.0 mL/ min；检测波长:282nm；柱温:30℃；进样量:20μL。在上述条件下，注入样品溶液，理论塔板数以麦角甾醇计大于10000。
对照品溶液的制备: 精密称取麦角甾醇对照品适量，用甲醇配制成0.3mg/mL的溶液，冷藏4℃备用。
供试品溶液的制备:取各样品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置于具塞三角瓶中，加甲醇40mL，称定重量，超声(400W, 40kHz)1h，放置室温，称重,加甲醇至原重量，取上清液过0.45μm滤膜，即得供试品溶液，冷藏4℃备用。
样品测定:精密吸取供试品溶液20μm，注入液相色谱仪，测得峰面积值，按干燥品计算含量。
3、结果 结果见表16。
表16 不同方法干燥金芝甾醇类含量（%）
干燥方法 晾干 烘干 蒸后冻干
含量（%） 0.11 0.12 0.41
由表16看出，金芝“堆置后干燥”，甾醇类含量明显高于“晾干”和“烘干”，可知本发明方法具有先进性。
四、不同方法干燥的桑黄黄酮含量比较
分别称取各样品粉末（60目）5g，加体积分数70% 乙醇溶液70mL，回流提取4次，合并上清液，过滤，滤液回收乙醇，真空干燥，得黄酮提取物。
取一定量干燥后的黄酮提取物，用甲醇溶解并定容至一定体积，采用NaNO2-Al(NO3)比色法测定黄酮的含量，以芦丁为标准品绘制标准曲线，以干品计，结果见表17。
表17 不同方法干燥桑黄黄酮含量（%）
干燥方法 晾干 烘干 蒸后冻干
含量（%） 2.12 2.57 6.38
由表17看出，桑黄“蒸后冻干”，黄酮含量明显高于“晾干”和“烘干”，可知本发明方法具有先进性。
五、不同方法干燥的猴头菇对乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用比较。
选取健康SD大鼠，雌雄各半，体质量180-220g，随机分为对照组、猴头菇晾干组、晒干组、烘干组、冷冻堆置烘干组，共5组，每组10 只，每日灌胃给药1次，1次2mg/kg，连续 7天，对照组给予等量蒸馏水。实验前，大鼠先禁食48 h，自由饮水，于末次给药后1h每只大鼠灌胃无水乙醇1mL/只，再过1h脱颈椎处死动物，用夹子夹闭贲门，自幽门注入1%甲醛5mL，再夹闭幽门，放入1%甲醛溶液固定10min，沿胃大弯剪开胃壁，测量损伤长度，以损伤长度(宽度大于1 mm加倍)总和作为胃黏膜损伤指数，并计算抑制率。抑制率(%)=（对照组溃疡指数一给药组溃疡指数）÷对照组溃疡指数×100%。结果见表18。
表18  不同方法干燥的猴头菇对大鼠胃黏膜保护作用结果
组别 剂量(mg/kg) 胃黏膜损伤指数（mm） 抑制率(%)
对照组   97.6±34.2  
晾干组 2 58.3±26.7 40.26
烘干组 2 58.3±25.9 40.27
蒸后冻干 2 41.25±22.3 57.74
结果表明，不同方法干燥的猴头菇对乙醇致大鼠胃黏膜损伤均有保护作用，其中，蒸后冻干保护作用最好。
具体实施方式
一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：取新采收的药用真菌，除去杂质，蒸透，冷冻至-20℃以下，抽真空至干燥室压力30Pa以下，加热升华，升华的温度控制在40℃以下，解析阶段的温度应控制在45℃以下，至干。
实施例1
分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、猴头菇，除去杂质，蒸10分钟, 经查看已蒸透，取出，置冷冻机内，冷冻至-25℃，抽真空至干燥室压力35Pa，加热升华，升华的温度控制在35℃以下，解析阶段的温度应控制在40℃，至干。
实施例2
分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、猴头菇，除去杂质，蒸15分钟, 经查看已蒸透，取出，置冷冻机内，冷冻至-32℃，抽真空至干燥室压力40Pa，加热升华，升华的温度控制在30℃以下，解析阶段的温度应控制在40℃，至干。
实施例3
分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、猴头菇，除去杂质，蒸20分钟, 经查看已蒸透，取出，置冷冻机内，冷冻至-28℃，抽真空至干燥室压力50Pa，加热升华，升华的温度控制在40℃以下，解析阶段的温度应控制在45℃，至干。
实施例4
分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、猴头菇，除去杂质，蒸20分钟, 经查看已蒸透，取出，置冷冻机内，置冻干机内，冻结温度控制在-30℃；达到控制温度后，立即开启真空泵抽真空至干燥室压力 50Pa 以下，然后启动加热开关，促进升华；升华的温度应控制在40℃以下；解析阶段的温度应控制在45℃以下，至干。

Claims (3)

1.一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：取新采收的药用真菌，除去杂质，蒸透，冻干。
2.根据权利要求1的一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：冻干是冷冻至-20℃以下，抽真空至干燥室压力30Pa以下，加热升华，升华的温度控制在40℃以下，解析阶段的温度应控制在45℃以下，至干。
3.根据权利要求1的一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：药用真菌是灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、猴头菇。
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