CN106265791A - 一种檀香叶抗炎有效部位及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种檀香叶抗炎有效部位，其包含牡荆苷，异牡荆苷和荭草苷三种成分，所述三种成分在该有效部位中的含量不低于80%。本发明还提供所述檀香叶抗炎有效部位的制备方法和应用。本发明所获得的檀香叶抗炎有效部位化学成分清晰，已知成分的含量超过80%；对该有效部位进行了系统的抗炎实验，证实对急性炎症具有良好治疗效果。

Description

一种檀香叶抗炎有效部位及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体而言涉及檀香叶抗炎有效部位及其制备方法和应用。
背景技术
檀香（Santalum album L.）为檀香科（Santalaceae）檀香属（Santalum）植物，在广东省有大量种植，木材有很高的应用价值，被誉为“绿色黄金”。檀香心材中挥发油的形成要在10年以上，20年以上才可采伐，檀香种植业投入大，周期长。檀香为常绿阔叶树种，叶产量大。化学成分研究显示檀香叶含有多种黄酮类成分，目前该资源未得到有效利用。
炎症是常见的基本病理过程，是机体对于刺激的一种防御反应，表现为红、肿、热、痛和功能障碍。炎症可以是感染引起的感染性炎症，也可以不是由于感染引起的非感染性炎症。体表的外伤感染和各器官的大部分常见病和多发病(如疖、痈、肺炎、肝炎、肾炎等）都属于炎症性疾病。根据持续时间不同分为急性和慢性炎症。
有报道称檀香具有抗炎作用，但尚未有研究将檀香的抗炎有效部位提取出来，并进行药效确证。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种从檀香叶中提取的具有抗炎作用的檀香叶抗炎有效部位。
为解决上述目的，本发明提供的技术方案为：
一种檀香叶抗炎有效部位，其包含牡荆苷，异牡荆苷和荭草苷三种成分，所述三种成分在该有效部位中的含量不低于80%。
优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，所述三种成分在该有效部位中的含量不低于85%。
优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，所述三种成分在该有效部位中的含量不低于90%。
上述三种成分的拉丁名称为：牡荆苷Vitexin，异牡荆苷isovitexin，荭草苷Orientin。
本发明所述的含量是指采用高效液相色谱法紫外检测器采用面积归一化法检测，牡荆苷、异牡荆苷和荭草苷峰面积之和占所有出峰物质峰面积总和的百分比，进一步地，上述检测的波长为268nm。
进一步地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其由以下步骤制备而成：
第一步，檀香叶干燥，碾碎，充分浸泡，用30~100%甲醇或乙醇回流提取，过滤，收集提取液；
第二步，第一步所得的提取液回收溶剂至无醇味后，通过大孔吸附树脂，用0~70%乙醇洗脱，收集洗脱液；
第三步，第二步所得洗脱液回收乙醇成浸膏，加水打浆，用有机溶剂萃取，分离有机相即得萃取液，其中机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇或其任意比例的混合液；
第四步，第三步所得的萃取液回收有机溶剂至原体积的20~60%，降温至0~10℃，析出沉淀，过滤分离沉淀；
第五步，第四步所得沉淀用甲醇、乙醇或乙酸乙酯洗涤，即得檀香叶抗炎有效部位。
进一步地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，第一步中，所述檀香叶与30~100%甲醇或乙醇的重量体积比为1：（5~15），单位为Kg：L。
进一步优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，第一步中，所述回流提取1~3次，每次1小时。
进一步优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，第一步中，所述干燥温度为50~60℃。
进一步优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，第一步中，所述浸泡时间为4~12h。
进一步地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，第二步中，所述大孔吸附树脂为D101或AB-8型。
优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，第二步中，所述洗脱溶剂为50~70%的乙醇。
进一步地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，第三步中，所述萃取为1~5次，合并有机相为萃取液。
进一步地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位，其中，第四步中，所述降温析出沉淀的时间为6~18h。
本发明的第二个目的是提供了一种檀香叶抗炎有效部位的制备方法。
具体技术方案为：
一种本发明所述檀香叶抗炎有效部位的制备方法，其包括以下步骤：
第一步，檀香叶干燥，碾碎，充分浸泡，用30~100%甲醇或乙醇回流提取，过滤，收集提取液；
第二步，第一步所得的提取液回收溶剂至无醇味后，通过大孔吸附树脂，用0~70%乙醇洗脱，收集洗脱液；
第三步，第二步所得洗脱液回收乙醇成浸膏，加水打浆，用有机溶剂萃取，分离有机相即得萃取液，其中机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇或其任意比例的混合液；
第四步，第三步所得的萃取液回收有机溶剂至原体积的20~60%，降温至0~10℃，析出沉淀，过滤分离沉淀；
第五步，第四步所得沉淀用甲醇、乙醇或乙酸乙酯洗涤，即得檀香叶抗炎有效部位。
需要说明，第五步中沉淀的洗涤溶剂中，甲醇或乙醇可以是含甲醇或乙醇80%以上的水溶液。
进一步地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位的制备方法，其中，第一步中，所述檀香叶与30~100%甲醇或乙醇的重量体积比为1：（5~15），单位为Kg：L。
进一步优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位的制备方法，其中，第一步中，所述回流提取1~3次，每次1小时。
进一步优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位的制备方法，其中，第一步中，所述干燥温度为50~60℃。
进一步优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位的制备方法，其中，第一步中，所述浸泡时间为4~12h。
进一步地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位的制备方法，其中，第二步中，所述大孔吸附树脂为D101或AB-8型。
优选地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位的制备方法，其中，第二步中，所述洗脱溶剂为50~70%的乙醇。
进一步地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位的制备方法，其中，第三步中，所述萃取为1~5次，合并有机相为萃取液。
进一步地，本发明所述的檀香叶抗炎有效部位的制备方法，其中，第四步中，所述降温析出沉淀的时间为6~18h。
本发明的第三个目的是提供所述檀香叶抗炎有效部位在制备抗炎药物中的应用。
本发明还提供一种药物制剂。
一种药物制剂，其包含本发明所述的檀香叶抗炎有效部位以及药学上可接受的辅料。
本发明提供的技术方案能实现的技术效果为：
1、本发明所获得的有效部位化学成分清晰，已知成分的含量超过80%；对该有效部位进行了系统的抗炎实验，证实对急性炎症具有良好治疗效果。
2、本发明通过简单的步骤，获得成分清晰，已知成分含量高的有效部位，具有良好的工业化开发前景。
附图说明
图1本发明檀香叶抗炎有效部位中各成分的液相图，
其中，1荭草苷，2牡荆苷，3异牡荆苷。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。
实施例1
将檀香叶1kg于60℃干燥，碾压至碎片，加入90%乙醇8L，浸泡12小时，加热回流1次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，回收液通过AB-8大孔吸附树脂，50%乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，浸膏用水打浆分散，再用乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液回收溶剂至原体积的20%，4℃放置12小时，过滤得到沉淀，沉淀用95%乙醇洗涤2次，即得，用液相色谱法紫外检测器268nm面积归一化法检测，牡荆苷、异牡荆苷和荭草苷占有效部位重量含量97.3%，见附图1。
实施例2
将檀香叶1kg于60℃干燥，碾压至碎片，加入90%甲醇8L，浸泡8小时，加热回流2次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，回收液通过D101大孔吸附树脂，50%乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收甲醇，浸膏用水打浆分散，再用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯液回收溶剂至原体积的40%，10℃放置12小时，过滤得到沉淀，沉淀用95%甲醇洗涤2次，即得，用液相色谱法紫外检测器268nm面积归一化法检测，牡荆苷、异牡荆苷和荭草苷占有效部位重量含量95.6%。
实施例3
将檀香叶1kg于50℃干燥，碾压至碎片，加入30%乙醇8L，浸泡4小时，加热回流3次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，回收液通过D101大孔吸附树脂，70%乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，浸膏用水打浆分散，再用正丁醇与乙酸乙酯混合液（1:1）萃取4次，回收有机溶剂至原体积的60%，0℃放置12小时，过滤得到沉淀，沉淀用乙酸乙酯洗涤2次，即得，用液相色谱法紫外检测器268nm面积归一化法检测，牡荆苷、异牡荆苷和荭草苷占有效部位重量含量95.9%以上。
实施例4
将檀香叶1kg于50℃干燥，碾压至碎片，加入60%乙醇8L，浸泡8小时，加热回流3次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，回收液通过AB-8大孔吸附树脂，50%乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，浸膏用水打浆分散，再用正丁醇萃取3次，回收有机溶剂至原体积的60%，5℃放置6小时，过滤得到沉淀，沉淀用甲醇洗涤2次，即得，用液相色谱法紫外检测器268nm面积归一化法检测，牡荆苷、异牡荆苷和荭草苷占有效部位重量含量96.3%以上。
实施例5
将檀香叶1kg于50℃干燥，碾压至碎片，加入60%乙醇5L，浸泡4小时，加热回流2次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，回收液通过AB-8大孔吸附树脂，50%乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，浸膏用水打浆分散，再用正丁醇萃取3次，回收有机溶剂至原体积的40%，5℃放置18小时，过滤得到沉淀，沉淀用甲醇洗涤2次，即得，用液相色谱法紫外检测器268nm面积归一化法检测，牡荆苷、异牡荆苷和荭草苷占有效部位重量含量94.7%以上。
实施例6
将檀香叶1kg于60℃干燥，碾压至碎片，加入60%乙醇15L，浸泡18小时，加热回流2次，每次1小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，回收液通过AB-8大孔吸附树脂，50%乙醇洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，浸膏用水打浆分散，再用乙酸乙酯萃取2次，回收有机溶剂至原体积的40%，10℃放置18小时，过滤得到沉淀，沉淀用乙酸乙酯洗涤2次，即得，用液相色谱法紫外检测器268nm面积归一化法检测，牡荆苷、异牡荆苷和荭草苷占有效部位重量含量96.5%以上。
以下为檀香叶抗炎有效部位体内抗炎活性药效实施例。
实施例7
试验目的：考察药物对巴豆油致小鼠耳肿胀的急性炎症的抑制作用
受试物：实施例1所得檀香叶抗炎有效部位、吲哚美辛
试验动物：昆明种小鼠，体重20±2g，雄性，由南方医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2011-0015
试验步骤：
取上述小鼠40只，随机平均分为4组，分别为模型组、檀香叶抗炎有效部位高剂量组、檀香叶抗炎有效部位低剂量组、吲哚美辛对照组，各给药组按照表1剂量灌胃给药，模型组给以与给药组同体积生理盐水，各分组均灌胃给药3天，末次给药30 min后，右耳涂抹巴豆油20μL， 6小时后用数显千分尺测量两耳厚度，以右耳厚度（TR）减去左耳厚度（TL）为耳肿胀度SW= TR- TL。
试验结果：
与模型组相比，各给药组均明显抑制耳肿胀，差异显著，显示檀香叶抗炎有效部位高、低剂量均对巴豆油诱导的小鼠耳肿胀有抑制作用，结果见表1：
表1 檀香叶提取物对巴豆油诱导小鼠耳肿胀的作用（）
注：均值±标准差，与模型组比较 *p<0.05， **p<0.01。
实施例8
试验目的：考察檀香叶抗炎提取物对角叉菜胶致大鼠足肿胀的抑制作用，考察檀香叶抗炎有效部位对动物急性炎症的作用。
试验仪器与试剂：大鼠足趾肿胀仪、角叉菜胶、吲哚美辛、生理盐水
受试物：实施例3檀香叶抗炎有效部位、吲哚美辛
试验动物：wistar大鼠，体重180±10g，雌雄各半，由南方医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2011-0015
试验步骤：
取大鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，分别为模型组，受试高剂量组、受试低剂量组、阳性对照组，各给药组按照表2剂量灌胃给药，模型组给以生理盐水，各处理组连续灌胃5天，末次给药前，测定各组大鼠足趾体积，末次给药30 min后，各组大鼠右后足趾注射1%的角叉菜胶溶液0.1 ml，分别于1h，2h,3h,4h测量足趾溶剂，计算肿胀度。
足肿胀度=致炎后足趾体积-致炎前足趾体积
试验结果：
与模型组相比，高剂量给药组对致炎后3h，低剂量给药组对致炎后2h、3h、4h，具有明显抑制其足肿胀，差异显著（p<0.05）。提示受试物对角叉菜胶致足肿胀具有不同程度的治疗作用。提示两种剂量对角叉菜胶致足肿胀具有不同程度的抑制作用。
表2檀香叶提取物对角叉菜胶致大鼠足肿胀的作用（）
注：均值±标准差，与模型组比较 *p<0.05。
实施例9
试验目的：考察檀香叶抗炎有效部位对醋酸致小鼠毛细血管通透性的影响
受试物：实施例5檀香叶抗炎有效部位、吲哚美辛
试验动物：昆明种小鼠，体重20±2g，雄性，由南方医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2011-0015
试验步骤：
取上述小鼠32只，随机平均分为4组，分别为空白对照组、檀香叶抗炎有效部位高剂量组、檀香叶抗炎有效部位低剂量组、吲哚美辛对照组，各给药组均按照表3剂量灌胃给药3天，空白对照组给以生理盐水，末次给药后1h，尾静脉注射0 5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1mL/10g, 同时腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1mL/10g，20min 后处死，用5mL生理盐水冲洗腹腔，洗液以1500 r/ min离心5 min，取上清液于 590 nm 处, 测定吸光度 ( A ) 值。
试验结果：
与模型组相比，低剂量给药组与空白对照组相比，依文思蓝渗出量显著下降，提示檀香叶抗炎有效部位能显著抑制醋酸致小鼠毛细血管通透性增加。
表3 檀香叶抗炎有效部位对醋酸致小鼠毛细血管通透性的作用（）
注：均值±标准差，与模型组比较 *p<0.05， **p<0.01。

Claims (10)

1.一种檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：包含牡荆苷，异牡荆苷和荭草苷三种成分，所述三种成分在该有效部位中的含量不低于80%。
2.如权利要求1所述的檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：由以下步骤制备而成：
第一步，檀香叶干燥，碾碎，充分浸泡，用30~100%甲醇或乙醇回流提取，过滤，收集提取液；
第二步，第一步所得的提取液回收溶剂至无醇味后，通过大孔吸附树脂，用0~70%乙醇洗脱，收集洗脱液；
第三步，第二步所得洗脱液回收乙醇成浸膏，加水打浆，用有机溶剂萃取，分离有机相即得萃取液，其中机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇或其任意比例的混合液；
第四步，第三步所得的萃取液回收有机溶剂至原体积的20~60%，降温至0~10℃，析出沉淀，过滤分离沉淀；
第五步，第四步所得沉淀用甲醇、乙醇或乙酸乙酯洗涤，即得檀香叶抗炎有效部位。
3.如权利要求2所述的檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：第一步中，所述檀香叶与30~100%甲醇或乙醇的重量体积比为1：（5~15），单位为Kg：L。
4.如权利要求2所述的檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：第一步中，所述回流提取1~3次，每次1小时。
5.如权利要求2所述的檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：第一步中，所述干燥温度为50~60℃。
6.如权利要求2所述的檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：第一步中，所述浸泡时间为4~12h。
7.如权利要求2所述的檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：第二步中，所述大孔吸附树脂为D101或AB-8型。
8.如权利要求2所述的檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：第二步中，所述洗脱溶剂为50~70%的乙醇。
9.如权利要求2所述的檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：第三步中，所述萃取为1~5次，合并有机相为萃取液。
10.如权利要求2所述的檀香叶抗炎有效部位，其特征在于：第四步中，所述降温析出沉淀的时间为6~18h。
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