CN109232548A - 一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，所述方法包括：将干燥粉碎的檀香叶用乙醇或者甲醇重复提取2～3次，合并滤液，脱色剂脱色，减压浓缩，浓缩液依次使用石油醚、乙酸乙酯萃取2～3次；合并乙酸乙酯萃取液浓缩后冻干，水浴使其充分溶解，离心分为沉淀和上清；沉淀用75～85℃水浴后离心，得沉淀后冷冻干燥即为牡荆素；上清浓缩后，采用冷却结晶的方式即得异牡荆素。本发明得到的牡荆素和异牡荆素的纯度高于98％，且方法简单，操作简便，成本低，提取效率高，得到的产品纯度高，能实现大规模生产。

Description

一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法
技术领域
本发明属于植物提取领域，更具体地，涉及一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法。
背景技术
檀香(SantaLum aLbum L.)又名真檀，白旃檀，震檀等，是檀香科檀香属的一种半寄生常绿小乔木。原产于印度南部、印度尼西亚等地，是一种集药用、香料、佛教用品、精细工艺品和优良雕刻材料于一体的重要经济树种。牡荆素和异牡荆素是檀香叶含量较高的两种黄酮类物质，属于碳苷类黄酮，结构稳定，不易降解。具有抗肿瘤、降血压、止痉挛、抗菌等生理活性，主要用于治疗心血管疾病，也可用于制备抗癌，预防肿瘤的药物、食品或保健品。其中，已有牡荆素成药注射针剂用于临床医疗心血管疾病的治疗。
专利名为“一种从山楂叶中同时提取牡荆素和槲皮素的方法”的“CN102040593A”中国专利公开了一种牡荆素的提取方法，工艺方法是把原料粉碎，超声醇提，再加入大孔树脂柱吸附，取沉淀物加水回流溶解，趁热过滤，固体物和母液分别结晶纯化，真空干燥得槲皮素和牡荆素。该方法需过柱分离，工艺复杂繁琐，不利于规模化生产。专利名为“从广金钱草中提取分离异牡荆素的方法和系统”的“CN105085498A”专利公开了一种异牡荆素的提取方法，利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；利用醇体系对提取物进行3次色谱分离，得到异牡荆素。该方法利用色谱分离，存在成本高、难大规模生产、操作复杂等问题。专利名为“一种从天然产物中提取分离牡荆素和异牡荆素的方法”的“CN102219782A”专利公开了用醇类溶剂结合超声浸提，然后萃取，再分别通过柱层析和制备液相的分离方法得到异牡荆素和牡荆素。该方法存在实验成本高，操作复杂，回收率较低等问题。
综上可知，现有的提取牡荆素和异牡荆素的工艺方法较多，但总体而言，现有方法均存在相对陈旧，生产周期长，成本高，产品得率低和纯度不高的问题。
发明内容
为克服上述缺点，本发明提供了一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，该方法具有提取步骤简单，耗费成本低，产品得率和纯度高等优点，所述方法包括如下步骤：
S1.将檀香叶烘干，粉碎，用40％～80％体积分数的乙醇或甲醇提取，料液比为1∶10～1∶30，提取时间为0.5～2h；过滤得到滤液，重复提取2～3次，合并滤液；
S2.用脱色剂对提取液进行脱色，脱色温度为20～55℃，脱色时间为0.5～2h，得到脱色液；
S3.将脱色液减压浓缩至原体积的1/8～1/12，依次使用0.3～1倍的石油醚、1.5～4倍的乙酸乙酯萃取2～5次，得到乙酸乙酯萃取液；
S4.将乙酸乙酯萃取液浓缩冻干，加入50～100倍的水，在50℃～70℃温度下水浴使其溶解，然后离心分为沉淀以及上清液；
S5.在步骤S4的沉淀中加入15～30倍的水，75～85℃水浴，离心弃上清液，洗涤沉淀后，减压抽滤、冷冻干燥即得牡荆素；
S6.将步骤S4中的上清液浓缩至有固体析出，冷却，析出晶体，过滤，冷冻干燥即得异牡荆素。
优选的，所述的一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法步骤S1中，最佳的提取溶剂是50％乙醇，料液比为1∶10～1∶20，提取时间为1～2h，重复提取2～3次。
优选的，所述的一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法步骤S2中，所用的脱色剂是活性炭、氧化铝、硅藻土或活性白土中的一种或多种。脱色温度为25～50℃，脱色时间为1～2h。
优选的，步骤S4中，将乙酸乙酯萃取液浓缩冻干，加入60～90倍的蒸馏水，55～65℃水浴使其充分溶解。
优选的，步骤S5中，在沉淀中加入20倍蒸馏水，75～83℃水浴。
优选的，步骤S2中，用檀香叶重量1％～3％的脱色剂对提取液进行脱色。
优选的，步骤S1中，在30～40℃温度下将檀香叶烘干至水分含量为8～12％。
优选的，步骤S3中，将脱色液减压浓缩至原体积的1/10。
与现有技术相比，本发明得到高纯牡荆素和异牡荆素的制备方法有以下优点：
1、檀香种植主要经济产物檀香木具有周期长的缺点，檀香叶作为其副产物具有产量高、成本低、容易得到的特点，本发明为檀香产业副产物开辟了新用途。
2、本发明得到的牡荆素和异牡荆素颜色呈现淡黄色或黄色，制备方法的脱色效果好，杂质含量少。
3、与传统的柱层析法或液相色谱法制备等方式不同，本发明利用两个目标物的溶解性差异，采用溶剂萃取以及反复溶解结晶的方式，制备方法更为简单，且成本较低，生产周期短，有利于实现规模化生产。
4、采用本发明的方法提取，牡荆素得率达到1.9％以上，异牡荆素得率达到3.5％以上。
5、采用本发明的方法提取，牡荆素和异牡荆素得率可分别达到投料中牡荆素和异牡荆素理论含量的85％以上，提取效率较高，成分损失小。纯化后的牡荆素和异牡荆素的纯度达到98％以上，有广阔的应用前景。
6、本发明得到的牡荆素和异牡荆素是从天然产物檀香叶中分离而来，因此具有安全性高、来源丰富的特点。
附图说明
图1牡荆素标准品液相色谱图。
图2异牡荆素标准品液相色谱图。
图3本发明实施例3中第(1)步中牡荆素和异牡荆素提取液液相色谱图。
图4本发明最终制备得到的牡荆素样品的液相色谱图。
图5本发明最终制备得到的异牡荆素样品的液相色谱图。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、材料、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
实施例1：
一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，具体包括以下步骤：
(1)提取：在30℃将檀香叶烘干至水分含量为8.9％，粉碎，按料液比1∶12加入体积分数为45％甲醇搅拌提取，提取时间为1h；过滤得到滤液，重复提取3次，合并滤液；
(2)脱色：用檀香叶重量1.5％的活性炭对提取液进行脱色，脱色温度为35℃，脱色时间为2h；
(3)萃取：将上述醇提脱色液减压浓缩至原体积的十分之一，依次使用0.3倍体积的石油醚萃取2次去除部分脂溶性成分和1.5倍体积的乙酸乙酯萃取3次，最终收集所得乙酸乙酯萃取液；
(4)浓缩离心：将步骤(3)得到的乙酸乙酯萃取液浓缩冻干，得到牡荆素和异牡荆素的混合物，向步骤混合物中加入65倍的蒸馏水，55℃水浴条件下使其充分溶解，然后离心分为沉淀以及上清液两层；
(5)分离：其中沉淀部分大多为牡荆素，将步骤(4)所得沉淀中加入18倍蒸馏水，75℃水浴，离心弃上清，用蒸馏水将沉淀洗涤数次，减压抽滤、冷冻干燥即得牡荆素，得率是1.93％，高效液相色谱检测纯度为98.8％；
(6)结晶：将(4)中的上清液浓缩至有固体析出，然后置于室温冷却，不断会有结晶析出，减压抽滤、冷冻干燥即得异牡荆素，得率是3.54％，高效液相色谱检测纯度为98.2％。
其中，HPLC检测的条件：采用Venusil MP C18(2)(5μm，220mm)色谱柱，流动相为水(A)-甲醇(B)，等度洗脱(B：35％)，波长220nm、330nm，流速为1mL/min，进样量为20μL。
实施例2：
一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，包括以下步骤：
(1)醇提：在35℃将檀香叶烘干至水分含量为11.2％，粉碎，用50％乙醇搅拌提取，料液比为1∶15，提取时间为1.5h；过滤得到滤液，重复提取2次，合并滤液；
(2)脱色：用檀香叶重量2.5％的硅藻土对提取液进行脱色，脱色温度为45℃，脱色时间为2h；
(3)萃取：将步骤(2)所得醇提脱色液减压浓缩至原体积的十分之一，依次使用0.5倍的石油醚萃取1次和3倍体积的乙酸乙酯萃取4次，最终得到乙酸乙酯萃取液；
(4)浓缩离心：收集步骤(3)所得的乙酸乙酯萃取液，进行60℃减压浓缩并冻干，得到牡荆素和异牡荆素的混合物，向混合物中加入70倍体积的蒸馏水，58℃水浴使其充分溶解，然后离心分为沉淀以及上清液两层；
(5)分离：将步骤(4)所得沉淀加入20倍蒸馏水，80℃水浴，离心弃上清，用蒸馏水将沉淀反复洗涤数次，减压抽滤、冷冻干燥即得牡荆素，得率是1.96％，经高效液相色谱测定纯度，其纯度为98.3％；
(6)结晶：将(4)中的上清液浓缩至有固体析出，然后室温冷却，不断结晶析出物质，减压抽滤、冷冻干燥即得异牡荆素，得率是3.64％，高效液相色谱检测纯度为99.0％。
其中，HPLC检测的条件：采用Venusil MP C18(2)(5μm，220mm)色谱柱，流动相为水(A)-甲醇(B)，等度洗脱(B：35％)，波长220nm、330nm，流速为1mL/min，进样量为20μL。
实施例3：
一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，包括以下步骤：
(1)醇提：在37℃下将檀香叶烘干至水分含量为10.3％，粉碎，用55％乙醇搅拌提取，料液比为1∶20，提取时间为1.5h；过滤得到滤液，重复提取3次，合并滤液；
(2)脱色：用檀香叶重量1.8％的脱色剂对提取液进行脱色，脱色温度为45℃，脱色时间为1.5h；
(3)萃取：将醇提脱色液减压浓缩至原体积的十分之一，依次使用1倍的石油醚萃取2次和3.5倍的乙酸乙酯萃取3次，最终得到乙酸乙酯萃取液。
(4)浓缩离心：将所得乙酸乙酯萃取液60℃减压浓缩冻干，得到牡荆素和异牡荆素的混合物，向混合物中加入90倍的蒸馏水，70℃水浴使其充分溶解；然后离心分为沉淀以及上清液；
(5)分离：在步骤(4)所得沉淀中加入18倍蒸馏水，85℃水浴，离心弃上清，用蒸馏水将沉淀反复洗涤数次，减压抽滤、冷冻干燥即得牡荆素，得率是2.04％，高效液相色谱检测纯度为98.9％；
(6)结晶：将(4)中的上清液浓缩至有固体析出，然后室温冷却，不断会有结晶析出，减压抽滤、冷冻干燥即得异牡荆素。如图1～图5所示，将本发明制备得到的牡荆素和异牡荆素分别与标准品进行比对，牡荆素得率是2.04％，高效液相色谱检测纯度为98.9％；异牡荆素得率是3.62％，高效液相色谱检测纯度为98.4％。
其中，HPLC检测的条件：采用Venusil MP C18(2)(5μm，220mm)色谱柱，流动相为水(A)-甲醇(B)，等度洗脱(B：35％)，波长220nm、330nm，流速为1mL/min，进样量为20μL。

Claims (8)

1.一种从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.将檀香叶烘干，粉碎，用40％～80％体积分数的乙醇或甲醇提取，料液比为1∶10～1∶30，提取时间为0.5～2h；过滤得到滤液，重复提取2～3次，合并滤液；
S2.用脱色剂对提取液进行脱色，脱色温度为20～55℃，脱色时间为0.5～2h，得到脱色液；
S3.将脱色液减压浓缩至原体积的1/8～1/12，依次使用0.3～1倍的石油醚、1.5～4倍的乙酸乙酯萃取2～5次，得到乙酸乙酯萃取液；
S4.将乙酸乙酯萃取液浓缩冻干，加入50～100倍的水，在50℃～70℃温度下水浴使其溶解，然后离心分为沉淀以及上清液；
S5.在步骤S4的沉淀中加入15～30倍的水，75～85℃水浴，离心弃上清液，洗涤沉淀后，减压抽滤、冷冻干燥即得牡荆素；
S6.将步骤S4中的上清液浓缩至有固体析出，冷却，析出晶体，过滤，冷冻干燥即得异牡荆素。
2.根据权利要求1所述从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤S1中，采用50％体积分数的乙醇进行提取，料液比为1∶10～1∶20，提取时间为1～2h，重复提取2～3次。
3.根据权利要求1所述从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤S2中，所用的脱色剂为活性炭、氧化铝、硅藻土或活性白土中的一种或多种；脱色温度为25～50℃，脱色时间为1～2h。
4.根据权利要求1所述从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤S4中，将乙酸乙酯萃取液浓缩冻干，加入60～90倍的蒸馏水，55～65℃水浴使其充分溶解。
5.根据权利要求1所述从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤S5中，在沉淀中加入20倍蒸馏水，75～83℃温度下水浴。
6.根据权利要求1所述从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤S2中，用檀香叶重量1％～3％的脱色剂对提取液进行脱色。
7.根据权利要求1所述从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤S1中，在30～40℃温度下将檀香叶烘干至水分含量为8～12％。
8.根据权利要求1所述从檀香叶中提取高纯牡荆素和异牡荆素的方法，其特征在于，步骤S3中，将脱色液减压浓缩至原体积的1/10。
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