CN102631441B - 地榆总皂苷的分离纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了地榆总皂苷的分离纯化方法。本发明还公开了该方法制备的地榆总皂苷。本发明采用现有方法碱水分离后的废弃物，纯化得到了皂苷含量在90％以上的地榆总皂苷，避免了地榆药材资源的浪费，同时，该方法中不需要采用柱纯化等工序复杂、成本高的纯化方法，就能够使皂苷含量达到90％以上，使得生产成本大幅降低，有利于实现地榆总皂苷的工业化大生产。

Description

地榆总皂苷的分离纯化方法

技术领域

本发明涉及一种地榆总皂苷的分离纯化方法，属药物领域。

背景技术

白细胞又称为免疫细胞，其能吞噬异物产生抗体，在机体损伤自愈、抗御病原的入侵和对疾病的免疫方面起着非常重要的作用。白细胞减少症是常见的血液病，由多种原因导致的外周血白细胞总数持续低于4×109/L的一种综合征。白细胞减少可有遗传性、家族性、获得性等。其中获得性占多数。药物、放射线、感染、毒素等均可使粒细胞减少，药物引起者最常见，如：抗生素、抗肿瘤药物、磺胺类药物、解热镇痛药、抗癫痫药、抗组胺药、抗结核药，其次尚见有因肝炎、抗甲状腺功能亢进等引起的。白减的典型表现为精神萎靡，乏力，头晕耳鸣，抵抗力下降，在中医学中属于“虚劳”、“血虚”或“内伤发热”等病症范畴。

地榆，主要化学成分包括鞣质、皂苷以及黄酮等，近年来的研究发现，以地榆为原料制备的地榆升白片经实验研究和临床验证有明显的升白作用，且副作用少，疗效较为明显。用地榆皂苷来治疗白细胞减少症，已有相关专利和文献报道，如专利号200610152370.2，发明名称：地榆总皂苷提取物的新用途。该专利公开了地榆总皂苷提取物在治疗和预防人体白细胞减少症的药物制剂中的新用途。该专利中也报道了其升白作用的主要成分是含量为10％-90％皂苷提取物，提取物的制备过程中，需要柱层析，操作步骤繁复，不适于工业化大生产。申请号：200910082470.6，发明名称：地榆总皂苷及地榆皂苷I的制备方法，该专利申请公开了用碱性药液通过大孔树脂分离纯化地榆总皂苷及地榆皂苷I的方法，该方法中是将地榆的水或乙醇提取液，经碱处理调pH至10-15，弃去沉淀，其滤液再经大孔吸附树脂分离纯化，得到的地榆总皂苷的纯度为53％-87％，总皂苷的收率为3.37％-3.63％。该方法同样只能纯化得到纯度在90％以下的地榆总皂苷，并且，该方法也需要通过大孔吸附树脂进行分离纯化，成本较高，不利于工业生产。

目前，还未见不使用柱纯化就能制备高含量地榆皂苷的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种地榆总皂苷的分离纯化方法。本发明还提供了该方法制备的地榆总皂苷。

本发明提供了地榆总皂苷的分离纯化方法，它是按照如下步骤实施的：

(1)取地榆药材，加水或有机溶剂提取、或用水和有机溶剂混合提取，提取液备用；

(2)取步骤(1)制得的提取液，回收溶剂后，加有机溶剂溶解，并调pH至10-14，取沉淀部分，再用有机溶剂提取，回收溶剂、干燥，即得地榆总皂苷。

其中，具体操作步骤如下：

(1)取地榆药材，用50-95％V/V乙醇提取，合并提取液，备用；

(2)取步骤(1)制得的提取液，回收溶剂，脱脂后，再用水-正丁醇系统萃取，取正丁醇层萃取液，回收溶剂后，加乙醇将固形物溶解，调pH至10-14，待沉淀完全，取沉淀，加入有机溶剂提取，提取液回收溶剂，干燥，即得地榆总皂苷。

进一步地，步骤(1)中，用65-75％V/V乙醇提取；步骤(2)中，以乙醚或石油醚脱脂，所述有机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、80-100％V/V乙醇或80-100％V/V甲醇。采用上述中极性有机溶剂或高浓度含水醇进行提取，可有效避免水溶性杂质的提出，降低提取物中杂质含量。

更进一步地，步骤(1)中，用70％V/V乙醇提取。

更进一步地，步骤(2)中，所述乙醇的浓度为95-100％V/V；甲醇的浓度为95-100％V/V。

进一步优选地，所述乙醇为无水乙醇。

本发明还提供了上述分离纯化方法制备得到的地榆总皂苷。

进一步地，所述地榆总皂苷中，皂苷含量以地榆皂苷I计为：90％＜皂苷含量＜100％。

其中，所述的地榆总皂苷是从地榆Sanguisorba officinalis L.或长叶地榆Sanguisorba officinalis L.var.Longifolia(Bettol.)Yüet Li中提取获得。

本发明采用现有方法碱水分离后的废弃物，纯化得到了皂苷含量在90％以上的地榆总皂苷，避免了地榆药材资源的浪费，同时，该方法中不需要采用柱纯化等工序复杂、成本高的纯化方法，就能够使皂苷含量达到90％以上，使得生产成本大幅降低，有利于实现地榆总皂苷的工业化大生产。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1本发明地榆总皂苷的分离纯化方法

取地榆药材粉碎成粗粉，70％乙醇回流提取3次，每次1.5h，70℃减压浓缩药液至适量(无乙醇味道)，转移至分液漏斗，先用水饱和的乙醚脱脂2次，母液70℃减压回收混入的乙醚，然后加水定溶至，再用水饱和的正丁醇萃取2次，萃取液80℃减压浓缩，加一定浓度的乙醇将固形物溶解，转移至烧杯中，加水适量，调pH至10-14，放置，离心，取出沉淀，70℃真空干燥2h，转移至具塞三角瓶中，加无水乙醇超声提取(也可以采用甲醇，乙酸乙酯，正丁醇等提取)，滤过，滤液70℃减压回收乙醇至刚有固形物析出，转移至蒸发皿中，80℃水浴挥干乙醇，70℃真空干燥12h，取出，研磨，即得地榆总皂苷。经含量测定，本品地榆总皂苷含量高达96.18％。

地榆药材中含皂苷为3-4％，本发明方法中，投100g药材，得到地榆总皂苷1.8g，皂苷转移率为45％，收率为1.8％。

本发明中地榆皂苷的含量测定方法如下：

对照品溶液制备取10mg地榆皂苷I于10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含1mg)。

标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0，200，300，400，500，600，800，1000μl分别置于10ml具塞中试管中，精密加入新配制的8％香草醛乙醇溶液1ml，72％硫酸10ml，摇匀，密塞，置60℃水浴15min，冷却2min，摇匀，以未加对照品的比色液为空白，照分光光度法(附录VIB)，在530nm波长处测定吸收度，以吸收度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液制备取地榆总皂苷约50mg，研细，精密称定，加无水乙醇约200ml，超声提取30min，滤过，收集滤液于250ml容量瓶中，用无水乙醇定容至250ml，即得。

测定精密吸取供试品溶液1ml，置于10ml具塞中试管中，照标准曲线项下的方法依法测定吸收度，代入回归方程计算，即得。实施例2本发明地榆总皂苷的分离纯化方法

取地榆药材粉碎成粗粉，70％乙醇闪式提取3次，每次1min，70℃减压浓缩药液至适量(无乙醇味道)，转移至分液漏斗，先用水饱和的乙醚脱脂2次，母液70℃减压回收混入的乙醚，然后加水定溶至，再用水饱和的正丁醇萃取2次，萃取液80℃减压浓缩，加一定浓度的乙醇将固形物溶解，转移至烧杯中，加水适量，调pH至10-14，放置，离心，取出沉淀，70℃真空干燥2h，转移至具塞三角瓶中，加无水乙醇超声提取，滤过，滤液70℃减压回收乙醇至刚有固形物析出，转移至蒸发皿中，80℃水浴挥干乙醇，70℃真空干燥12h，取出，研磨，即得地榆总皂苷。照上述含量测定方法测定，本品地榆皂苷含量高达94.36％。

实施例3本发明地榆总皂苷的分离纯化方法

取地榆药材粉碎成粗粉，70％乙醇超声提取3次，每次1h，70℃减压浓缩药液至适量(无乙醇味道)，转移至分液漏斗，先用水饱和的乙醚脱脂2次，母液70℃减压回收混入的乙醚，然后加水定溶至，再用水饱和的正丁醇萃取2次，萃取液80℃减压浓缩，加一定浓度的乙醇将固形物溶解，转移至烧杯中，加水适量，调pH至10-14，放置，离心，取出沉淀，70℃真空干燥2h，转移至具塞三角瓶中，加无水乙醇超声提取，滤过，滤液70℃减压回收乙醇至刚有固形物析出，转移至蒸发皿中，80℃水浴挥干乙醇，70℃真空干燥12h，取出，研磨，即得地榆总皂苷。照上述含量测定方法测定，本品地榆皂苷含量高达93.01％。

综上所述，本发明采用现有方法碱水分离后的废弃物，纯化得到了皂苷含量在90％以上的地榆总皂苷，避免了地榆药材资源的浪费，同时，该方法中不需要采用柱纯化等工序复杂、成本高的纯化方法，就能够使皂苷含量达到90％以上，使得生产成本大幅降低，有利于实现地榆总皂苷的工业化大生产。

Claims (4)

1.地榆总皂苷的分离纯化方法，其特征在于：它是按照如下步骤实施的：

（1）取地榆药材，用65-75%V/V乙醇提取，合并提取液，备用；

（2）取步骤（1）制得的提取液，回收溶剂，脱脂后，再用水-正丁醇系统萃取，取正丁醇层萃取液，回收溶剂后，加乙醇将固形物溶解，调pH至10-14，待沉淀完全，取沉淀，加入有机溶剂提取，提取液回收溶剂，干燥，即得地榆总皂苷；

步骤（2）中，以乙醚脱脂，所述有机溶剂为80-100%V/V乙醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，用70%V/V乙醇提取。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述有机溶剂为浓度95-100%V/V的乙醇。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述所述有机溶剂为无水乙醇。