CN103977034A - 一种药用真菌的干燥方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药用真菌的干燥方法，取新采收的药用真菌，在阴湿处堆置2-5天，干燥，制备的药用真菌，主要有效成分含量高，药理活性强。

Description

一种药用真菌的干燥方法

发明领域

本发明涉及药品制法，特别涉及一种药用真菌的干燥方法，属医药技术领域。 

背景技术

真菌类药物广泛，通常所说的药用真菌多限于能够形成子实体的高等真菌。常用的药用真菌有灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、冬虫夏草、猴头菇、茯苓、猪苓等。 

灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganodermalucidum(Leyss.ExFr.)Karst.或紫芝GanodermasinenseZhao，XuetZhang的干燥子实体。桑黄为担子菌亚门(Basidiomycotina)层菌纲(Hymenomycetes)多孔菌目(Polyporales)多层孔菌科(Hymenochaetacae)针层孔菌属(Phellinus ) 的干燥子实体。树舌为担子菌多孔菌纲目树舌科树舌属真菌(Ganodermaapplanatum(Pers.)Pat) 的干燥子实体。桦褐孔菌属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目、多孔菌科、褐卧孔菌属(Fuscoporia obliqua(Pers.Fr.)Aosh或Inonotus obliquus(Fr.)Pilat) 的干燥子实体。金芝为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb茎基部寄生的锈革孔菌科叶状层菌属真菌茶藨子叶孔菌[Phylloporia ribis (Schumach.:Fr.) Ryvarden]的干燥子实体。猴头菇又叫猴头菌，猴蘑，猴头，猴菇为Hericium erinaceus的干燥子实体。 

中医以真菌作为药材治疗人类疾病有着悠久的历史。药用真菌干燥是一个必不可少的采收加工过程，经干燥可保持一定的药用成分以及不易腐败变质，干燥方法将直接影响产品的质量。提高药用真菌的药理活性是医药工作者的重要任务。 

发明内容

本发明的目的是提供一种药用的真菌干燥方法，该方法干燥的药用真菌，主要有效成分含量高，药理活性强。 

本发明是这样实现的： 

一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：取新采收的药用真菌，堆置2-5天，干燥。

本发明的一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：干燥是堆置后晾干或晒干或烘干或冻干。 

本发明的冷冻技术在药用真菌干燥中的应用，其特征在于：药用真菌是灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、猴头菇。 

至此完成了本发明，按本发明的干燥方法制备的药用真菌，主要有效成分含量高，药理活性强。 

下面通过试验例进一步说明本发明的有益之处，试验例旨在进一步说明本发明的有益之处，而非对本发明的限制。 

将同一批新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、猴头菇、金芝，去除杂质，分别按以下方法进行加工。 

1）晾干：阴凉通风处，摊开晾干； 

2）烘干：50℃以下烘干；

3）堆置烘干：堆置3天，50℃以下烘干。

一、不同方法干燥的药用真菌多糖含量比较 

对照品溶液的制备：取葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

标准曲线的制备：分别精密量取对照品溶液0.2ml、0.4m1、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1g，加80％的硫酸溶液100ml使溶解，摇匀)6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放人冰浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照《中国药典》紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 

供试品溶液的制备：取各样品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀.精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇匀，4℃放置12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，转移至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。 

测定法：精密量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。 

按干燥品计算，含多糖以无水葡萄糖(C₆H₁₂O₆)计，结果见表1、2、3、4、5、6。 

表1 不同方法干燥灵芝多糖含量（%） 

干燥方法	晾干	烘干	堆置烘干
				含量（%）	1.76	1.74	3.21

表2 不同方法干燥桑黄多糖含量（%）

干燥方法	晾干	烘干	堆置烘干
				含量（%）	3.75	3.76	4.59

表3 不同方法干燥树舌多糖含量（%）

干燥方法	晾干	烘干	堆置烘干
				含量（%）	4.26	4.25	5.89

表4 不同方法干燥桦褐孔菌多糖含量（%）

干燥方法	晾干	烘干	堆置烘干
				含量（%）	5.31	5.26	7.62

表5 不同方法干燥猴头菇多糖含量（%）

干燥方法	晾干	烘干	堆置烘干
				含量（%）	4.38	4.37	6.25

表6 不同方法干燥金芝多糖含量（%）

干燥方法	晾干	烘干	堆置烘干
				含量（%）	4.35	4.34	6.75

由以上各表看出，药用真菌“堆置后干燥”，多糖含量明显高于“晾干”和“烘干”。

二、不同方法干燥的药用真菌抗人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562试验。 

1、制备药用真菌提取物  分别取不同方法干燥的药用真菌粉碎，各加水煎煮两次，第一次加水8倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并药液，药液滤过，取滤液，浓缩至相对密度为1.10（60℃）时，加入乙醇使含醇量达到75％，沉淀，静置36小时，吸取上清液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎，得不同方法干燥的药用真菌提取物。 

2、肿瘤细胞株　人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562，用RPMI-1649培养液, 37℃,5%CO2，相对湿度100%培养，贴壁细胞0.25%胰蛋白酶消化传代。 

3、方法  MTT比色法测定提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用。取对数生长期细胞，用新鲜的RPMI-1640培养液配制成细胞悬液，悬浮细胞1×105个/ml贴壁细胞0.8×105个/ml。悬浮细胞分别加入不同浓度实验药物后接种于96孔培养板中；贴壁细胞先接种于96孔培养板中，每孔90μl24h后分别加入不同浓度实验药物。终体积为每孔100μl且每组设3个平行孔，共设4组:受试药组T(培养液+细胞悬液+不同浓度受试药)、阴性对照组N(培养液+细胞悬液)、药物颜色对照组TC(培养液+不同浓度受试药)、空白对照组B(培养液+生理盐水)。受试药浓度依次为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml。置37℃,5%CO2培养箱中培养72h后，向每孔加入MTT溶液10μl震荡混匀后，继续培养4h，加入SDS90μl终止培养,37℃过夜，然后室温下在微量振荡器上震荡10min，酶标仪测定570nm波长处的吸光度(OD值),实验重复3次。 

按以下公式计算生长抑制率： 

生长抑制率(%)=(N组OD均值-B组OD均值)—(T组OD均值-TC组OD均值)/N组OD均值-B组OD均值×100%。

4、结果 不同干燥方法，不同药用真菌提取物对人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562的抑制率结果见以下各表。 

1）不同干燥方法灵芝对肿瘤细胞的抑制率结果见表7、表8、表9。 

表7  对SPCA-1的抑制率结果 

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	46.52	53.42	66.51
烘干	46.47	53.50	66.53
				堆置烘干	57.13	71.24	79.37

表8  对HepG2的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	43.62	54.74	58.67
烘干	43.61	54.71	58.64
				堆置烘干	56.24	67.10	83.11

表9  对K562的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	57.29	68.44	74.65
烘干	57.31	68.42	74.62
				堆置烘干	64.27	73.53	82.61

结果表明，不同方法干燥的灵芝对SPCA-1、HepG2、K562细胞的增殖均有抑制作用，其中，堆置烘干疗效最好。

2）不同干燥方法树舌对肿瘤细胞的抑制率结果见表10、表11、表12。 

表10  对SPCA-1的抑制率结果 

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	47.43	58.36	67.11
烘干	47.42	58.35	67.12
				堆置烘干	53.27	73.42	81.44

表11  对HepG2的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	46.72	56.54	65.57
烘干	46.34	56.53	65.54
				堆置烘干	57.61	73.37	86.18

表12  对K562的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	53.28	66.51	71.62
烘干	53.26	66.50	71.56
				堆置烘干	59.64	75.35	82.63

3）不同干燥方法桦褐孔菌对肿瘤细胞的抑制率结果见表13、表14、表15。

表13  对SPCA-1的抑制率结果 

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	53.21	61.15	75.33
烘干	53.21	61.17	75.34
				堆置后烘干	62.45	72.41	81.57

表14  对HepG2的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	43.85	54.20	60.27
烘干	43.84	54.21	60.25
				堆置后烘干	54.82	61.57	81.47

表15  对K562的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				晾干	55.52	70.44	75.78
烘干	55.53	70.43	75.85
				堆置后烘干	63.58	75.32	81.35

由以上各表看出，药用真菌“堆置后干燥”，黄酮含量明显高于“晾干”和“烘干”。

三、不同方法干燥的桑黄黄酮含量比较 

分别称取各样品粉末（60目）5g，加体积分数70% 乙醇溶液70mL，回流提取4次，合并上清液，过滤，滤液回收乙醇，真空干燥，得黄酮提取物。

取一定量干燥后的黄酮提取物，用甲醇溶解并定容至一定体积，采用NaNO2-Al(NO3)比色法测定黄酮的含量，以芦丁为标准品绘制标准曲线，以干品计，结果见表16。 

表16 不同方法干燥桑黄黄酮含量（%） 

干燥方法	晾干	烘干	堆置烘干
				含量（%）	2.12	2.57	4.87

由表16看出，桑黄“堆置后干燥”，黄酮含量明显高于“晾干”和“烘干”，可知本发明方法具有先进性。

四、不同方法干燥的猴头菇对乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用比较。 

选取健康SD大鼠，雌雄各半，体质量180-220g，随机分为对照组、猴头菇晾干组、晒干组、烘干组、冷冻堆置烘干组，共5组，每组10 只，每日灌胃给药1次，1次2mg/kg，连续 7天，对照组给予等量蒸馏水。实验前，大鼠先禁食48 h，自由饮水，于末次给药后1h每只大鼠灌胃无水乙醇1mL/只，再过1h脱颈椎处死动物，用夹子夹闭贲门，自幽门注入1%甲醛5mL，再夹闭幽门，放入1%甲醛溶液固定10min，沿胃大弯剪开胃壁，测量损伤长度，以损伤长度(宽度大于1 mm加倍)总和作为胃黏膜损伤指数，并计算抑制率。结果见表17。 

表17  不同方法干燥的猴头菇对胃黏膜损伤的保护作用结果 

组别	剂量(mg/kg)	胃黏膜损伤指数（mm）	抑制率(%)
				对照组		97.6±34.2
晾干组	2	58.3±26.7	40.26
				烘干组	2	58.3±25.9	40.27
堆置烘干组	2	49.7±24.6	49.08

注：抑制率(%)=（对照组溃疡指数一给药组溃疡指数）÷对照组溃疡指数×100%

结果表明，不同方法干燥的猴头菇对乙醇致大鼠胃黏膜损伤均有保护作用，其中，堆置烘干保护作用最好。

具体实施方式

一种药用真菌的干燥方法，其特征在于： 取新采收的药用真菌，堆置2-5天，晾干或晒干或烘干或冻干。 

实施例1

分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、猴头菇、金芝，在阴凉处堆置2天，晾干。

实施例2

分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、猴头菇、金芝，在室外堆置3天，晒干。

实施例3

分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、猴头菇、金芝，在阴湿处堆置4天，烘干。

实施例4

分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、猴头菇、金芝，在阴湿处堆置5天，置冻干机内，冻结温度控制在-30℃；达到控制温度后，立即开启真空泵抽真空至干燥室压力 50Pa 以下，然后启动加热开关，促进升华；升华的温度应控制在40℃以下；解析阶段的温度应控制在45℃以下，至干。

实施例5

分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、猴头菇、金芝，在阴湿处堆置3天，烘干。

实施例6

分别取新采收的灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、猴头菇、金芝，在阴湿处堆置5天，晒干。

Claims (3)

1.一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：取新采收的药用真菌，堆置2-5天，干燥。

2.根据权利要求1的一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：干燥是堆置后晾干或晒干或烘干或冻干。

3.根据权利要求1的一种药用真菌的干燥方法，其特征在于：药用真菌是灵芝、桑黄、树舌、桦褐孔菌、金芝、猴头菇。