CN103827108B - 丙型肝炎病毒抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及下式(I)的用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、组合物和方法。亦公开含有此类化合物的药物组合物和使用这些化合物治疗HCV感染的方法。

Description

丙型肝炎病毒抑制剂
相关申请的交叉引用
本申请主张2011年5月12日提交的美国临时申请序列号61/485,224的权益。
本发明总体上涉及抗病毒化合物，且更具体而言涉及可抑制由丙型肝炎病毒(HCV)编码的NS5A蛋白质的功能的化合物、包含这些化合物的组合物及抑制NS5A蛋白质的功能的方法。
HCV为一种主要的人类病原体，其在世界范围内感染估计1.7亿人-大致为受1型人类免疫缺陷病毒感染的数目的五倍。相当大部分的这些HCV感染个体发展为严重的进行性肝病，包括肝硬化及肝细胞癌。
目前采用聚乙二醇化干扰素与利巴韦林(ribavirin)的组合的HCV护理标准在获得持续病毒反应方面成功率并非最佳且导致许多副作用。因此，显而易见且盼望已久，需要开发可解决该尚未满足的医学需求的有效疗法。
HCV为一种正链RNA病毒。基于所推定的氨基酸序列的比较及5'非翻译区的广泛类似性，已将HCV分类为黄病毒(Flaviviridae)科中的独立属。所有黄病毒科成员均具有包膜病毒粒子，这些病毒粒子含有经由翻译单个、不间断的开放阅读框而编码所有已知病毒特异性蛋白质的正链RNA基因组。
由于所编码的缺乏校正(proof-reading)能力的RNA依赖性RNA聚合酶的高错误率，因此在整个HCV基因组中在核苷酸及所编码的氨基酸序列内发现显著的异质性。已表征至少六种主要基因型，且已描述多于50种亚型，其分布在世界范围内。HCV遗传异质性的临床意义已表明，在单一疗法治疗期间，易发生突变，因此，需要使用其它治疗选项。基因型对发病机制及疗法的可能的调节作用仍难以捉摸。
单链HCV RNA基因组的长度为约9500个核苷酸且具有编码具有约3000个氨基酸的单个大聚合蛋白质的单个开放阅读框(ORF)。在受感染细胞中，该聚合蛋白质在多个位点处被细胞及病毒蛋白酶裂解而产生结构蛋白质及非结构(NS)蛋白质。在HCV的情况下，成熟非结构蛋白质(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B)的产生通过两种病毒蛋白酶来实现。认为第一种为金属蛋白酶，其在NS2-NS3连接处裂解；第二种为在NS3的N末端区域内含有的丝氨酸蛋白酶(在本文中亦称为NS3蛋白酶)且其介导NS3下游的所有后续的顺式(在NS3-NS4A裂解位点处)与反式(对于剩余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点)裂解。NS4A蛋白质似乎通过充当NS3蛋白酶的辅因子以及辅助NS3和其它病毒复制酶组分的膜定位而发挥多种功能。NS3-NS4A复合物的形成对于导致裂解事件的蛋白质水解效率提高的恰当蛋白酶活性是必需的。NS3蛋白质亦展现核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B(在本文中亦称为HCV聚合酶)为复制酶复合物中的RNA依赖性RNA聚合酶，其涉及HCV及其它HCV蛋白质(包括NS5A)的复制。
需要选择性抑制HCV病毒复制的可用于治疗HCV感染患者的化合物。具体而言，需要有效抑制NS5A蛋白质的功能的化合物。HCV NS5A蛋白质例如描述于以下参考文献中：S.L. Tan等人，Virology, 284:1-12 (2001)；K.-J. Park等人，J. Biol. Chem., 30711-30718 (2003)；T. L. Tellinghuisen等人，Nature, 435, 374 (2005)；R. A. Love等人，J. Virol, 83, 4395 (2009)；N. Appel等人，J. Biol. Chem., 281, 9833 (2006)；L.Huang, J. Biol. Chem., 280, 36417 (2005)；C. Rice等人，WO 2006093867。
在第一方面，本发明提供一种式(I)化合物
(I)，
或其药学上可接受的盐，其中
L选自键、、和；
A和A'独立地选自
、、、和
；
条件是A和A'中的至少一个不为；
其中“”表示连接至X和X'的连接点且“”表示连接至L的连接点；且其中：
Z为任选含有一个、两个或三个氮原子的6元芳环；
R2选自氢、烷基和卤素；且
R3选自氢、烷氧基、烷基、氰基、卤素和卤烷氧基；
X和X'独立地选自
和；
其中各基团被绘制为碳原子连接于A或A'且氮原子连接于羰基，且其中：
n为0、1或2；
s为0、1、2、3或4；
Y选自Si(R4)2、NR4、O、S、S(O)、SO2、CH2、CHR4和C(R4)2；条件是当n为0时，Y选自CH2、CHR4和C(R4)2；和
各R4独立地选自烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基、羟基、-NRaRb和硫代烷基，其中烷基可任选与环上的另一碳原子形成稠合三元至六元环或桥联四元或五元环；或可任选与其所连接的碳形成螺环三元至六元环，其中所形成的各个环体系任选含有一个或两个氧原子，且其中所形成的各个环体系任选经一个或两个独立地选自烷基和卤素的基团取代；条件是当Y为NR4时，R4不为卤素、羟基或-NRaRb；
R为(NRcRd)烷基，其中(NRcRd)烷基的烷基部分经双环烷基、稠合双环杂环基、环烷基取代的杂环基、乙烯基环烷基、杂环基乙烯基、氧代基环烷基或螺环杂环基取代，其中双环烷基、双环杂环基、氧代基环烷基和螺环杂环基任选经一个或两个独立地选自烷基、卤素和卤烷基的基团取代；
R'为(NRcRd)烷基，其中(NRcRd)烷基的烷基部分任选经双环烷基、稠合双环杂环基、环烷基取代的杂环基、乙烯基环烷基、杂环基乙烯基、氧代基环烷基或螺环杂环基取代，其中双环烷基、双环杂环基、氧代基环烷基和螺环杂环基任选经一个或两个独立地选自烷基、卤素和卤烷基的基团取代；
Ra和Rb独立地选自氢和烷基；
Rc和Rd独立地选自氢、烯氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR''和-C(NCN)NRxRy，其中R''选自烷基和未取代的苯基，且其中芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基的烷基部分进一步任选经一个-NReRf基团取代；且其中芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和芳基磺酰基的芳基部分、杂环基和杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基的杂环基部分进一步任选经一个、两个或三个独立地选自烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基和硝基的取代基取代；
Re和Rf独立地选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基；和
Rx和Ry独立地选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx'Ry')羰基，其中Rx'和Ry'独立地选自氢和烷基。
在第一方面的第一实施方案中，本发明提供一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中L为。
在第一方面的第二实施方案中，本发明提供一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中L选自和。
在第一方面的第三实施方案中，本发明提供一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中L为键。
在第一方面的第四实施方案中，本发明提供一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中L为键且A和A'各为；其中Z为任选含有一个氮原子的6元芳环。
在第一方面的第五实施方案中，本发明提供一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中L为键；A和A'各为；其中Z为任选含有一个氮原子的6元芳环；且X和X'各为；其中n、s和Y如关于式(I)所描述。
在第一方面的第六实施方案中，本发明提供一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中L为键；A和A'各为；其中Z为任选含有一个氮原子的6元芳环；且X和X'各为；其中n为1或2；s为1、2或3；且Y选自O、CH2、CHR4和C(R4)2。
在第一方面的第七实施方案中，本发明提供一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中L为键；A和A'各为；其中Z为任选含有一个氮原子的6元芳环；且X和X'各为；其中n为1；s为1、2或3；且Y选自CH2、CHR4和C(R4)2。在第一方面的第八实施方案中，R和R'各为(NRcRd)烷基，其中各(NRcRd)烷基的烷基部分经双环烷基、稠合双环杂环基、环烷基取代的杂环基或螺环杂环基取代，其中双环烷基和双环杂环基任选经一个或两个卤素基团取代。在第一方面的第九实施方案中，各(NRcRd)烷基的烷基部分经螺环杂环基取代，其中螺环杂环基为经由一个单一碳原子邻接至3元饱和碳环的含有一个氧原子的6元饱和环。
在第二方面，本发明提供一种式(II)的化合物：
(II)，
或其药学上可接受的盐，其中
L选自键、、和；
A和A'独立地选自
、、和
，
其中各基团被绘制为咪唑环连接于X，且六元环连接于L，且其中：
Z为任选含有一个、两个或三个氮原子的6元芳环；
R2选自氢、烷基和卤素；且
R3选自氢、烷氧基、烷基、氰基、卤素和卤烷氧基；
X和X'独立地选自
和；
其中各基团被绘制为碳原子连接于A或A'且氮原子连接于羰基，且其中：
n为0、1或2；
s为0、1、2、3或4；
Y选自NH、NR4、O、S、S(O)、SO2、CH2、CHR4和C(R4)2；条件是当n为0时，Y选自CH2、CHR4和C(R4)2；和
各R4独立地选自烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基、羟基和-NRaRb，其中烷基可任选与环上的另一碳原子形成稠合三元至六元环或桥联四元或五元环；或可任选与其所连接的碳形成螺环三元至六元环，其中所形成的环体系任选经一个或两个独立地选自烷基和卤素的基团取代；条件是当Y为NR4时，R4不为卤素、羟基或-NRaRb；
R为(NRcRd)烷基，其中(NRcRd)烷基的烷基部分经双环烷基、稠合双环杂环基、氧代基环烷基或螺环杂环基取代，其中双环烷基、双环杂环基、氧代基环烷基和螺环杂环基任选经一个或两个独立地选自烷基、卤素和卤烷基的基团取代；
R'为(NRcRd)烷基，其中(NRcRd)烷基的烷基部分任选经双环烷基、稠合双环杂环基、氧代基环烷基或螺环杂环基取代，其中双环烷基、双环杂环基、氧代基环烷基和螺环杂环基任选经一个或两个独立地选自烷基、卤素和卤烷基的基团取代；
Ra和Rb独立地选自氢和烷基；
Rc和Rd独立地选自氢、烯氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR''和-C(NCN)NRxRy，其中R''选自烷基和未取代的苯基，且其中芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基的烷基部分进一步任选经一个-NReRf基团取代；且其中芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和芳基磺酰基的芳基部分、杂环基和杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基的杂环基部分进一步任选经一个、两个或三个独立地选自烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基和硝基的取代基取代；
Re和Rf独立地选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基；和
Rx和Ry独立地选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx'Ry')羰基，其中Rx'和Ry'独立地选自氢和烷基。
在第三方面，本发明提供一种包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的组合物。在第三方面的第一实施方案中，该组合物进一步包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在第三方面的第二实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第三方面的第三实施方案中，干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、聚乙二醇化干扰素λ、复合干扰素(consensus interferon)、干扰素α2A和淋巴母细胞样干扰素τ。
在第三方面的第四实施方案中，本发明提供一种包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体和至少一种具有抗HCV活性的其它化合物的组合物，其中所述其它化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助性T细胞反应的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特(Imiquimod)、利巴韦林(ribavirin)、肌苷5'-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺(amantadine)和金刚乙胺(rimantadine)。
在第三方面的第五实施方案中，本发明提供一种包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体和至少一种具有抗HCV活性的其它化合物的组合物，其中所述其它化合物中的至少一种有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白质、HCV进入(HCV entry)、HCV组装、HCV释放(HCV egress)、HCV NS5A蛋白质和IMPDH。
在第四方面，本发明提供一种治疗患者的HCV感染的方法，其包括给予患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在第四方面的第一实施方案中，所述方法进一步包括在式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。在第四方面的第二实施方案中，所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。在第四方面的第三实施方案中，干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合干扰素、干扰素α2A和淋巴母细胞样干扰素τ。
在第四方面的第四实施方案中，本发明提供一种治疗患者的HCV感染的方法，其包括给予患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，且在式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助性T细胞反应的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5'-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第四方面的第五实施方案中，本发明提供一种治疗患者的HCV感染的方法，其包括给予患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，且在式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予至少一种具有抗HCV活性的其它化合物，其中所述其它化合物中的至少一种有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释放、HCVNS5A蛋白质和IMPDH。
本发明的其它方面可包括本文中所公开的实施方案的合适组合。
其它方面和实施方案可见于本文所提供的说明中。
本发明的说明在本文应理解为符合化学键合的规则和原理。在一些情况下，可能必需除去氢原子以在任何给定的位置上容纳取代基。
应了解，本发明所涵盖的化合物为对于用作药剂而言适当稳定的那些化合物。
预期在某一分子中特定位置处的任何取代基或变量的定义独立于其在该分子中其它位置处的定义。例如，当s为2时，两个R4基团可相同或不同。
本说明书中所引用的所有专利、专利申请和参考文献通过引用以其整体并入本文中。在不一致的情况下，以本发明(包括定义)为准。
如本说明书中所用，以下术语具有指定的含义：
除非上下文明确另作规定，否则本文所用的单数形式“a”、“an”和“the”包括复数对象。
除非另作说明，否则本发明的所有芳基、环烷基和杂环基均可如其各自定义中的每一个中所述被取代。例如，芳基烷基的芳基部分可如术语“芳基”的定义中所述被取代。
本文所用术语“烯基”指含有至少一个碳-碳双键的具有二至六个碳原子的直链或支链基团。
本文所用术语“烯氧基”指经由氧原子与母分子部分连接的烯基。
本文所用术语“烯氧基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的烯氧基。
本文所用术语“烷氧基”指经由氧原子与母分子部分连接的烷基。
本文所用术语“烷氧基烷基”指被一个、两个或三个烷氧基取代的烷基。
本文所用术语“烷氧基烷基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的烷氧基烷基。
本文所用术语“烷氧基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的烷氧基。
本文所用术语“烷基”指源自含有1至6个碳原子的直链或支链饱和烃的基团。在本发明的化合物中，当R4为烷基时，该烷基可任选与相邻碳原子一起形成稠合三元至六元环以提供如下所示的结构：
，
其中m选自1、2、3和4，其中z为0、1或2，且其中各Rs独立地选自烷基、卤素和卤烷基；
或其中烷基可任选与环上的另一碳原子一起形成桥联四元或五元环以提供如下所示的结构：
，
其中m选自0或1，其中z为0、1或2，且其中各Rs独立地选自烷基、卤素和卤烷基；
或其中烷基可任选与其所连接的碳原子一起形成螺环三元至六元环以提供如下所示的结构：
，
其中m选自1、2、3和4，其中z为0、1或2，且其中各Rs独立地选自烷基、卤素和卤烷基。
本文所用术语“烷基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的烷基。
本文所用术语“烷基羰基氧基”指经由氧原子与母分子部分连接的烷基羰基。
本文所用术语“烷硫基”指经由硫原子与母分子部分连接的烷基。
本文所用术语“烷基磺酰基”指经由磺酰基与母分子部分连接的烷基。
本文所用术语“芳基”指苯基或双环稠环体系(其中所述环中的一个或两个为苯基)。双环稠环体系由与四至六元芳族或非芳族碳环稠合的苯基组成。本发明的芳基可经由基团中的任何可取代碳原子与母分子部分连接。芳基的代表性实例包括(但不限于)茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。本发明的芳基任选经一个、两个、三个、四个或五个独立地选自以下的取代基取代：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基、氧代基和-P(O)OR2，其中各R独立地选自氢和烷基；且其中芳基烷基和杂环基烷基的烷基部分未经取代，且其中第二芳基、芳基烷基的芳基部分、芳基羰基的芳基部分、杂环基以及杂环基烷基与杂环基羰基的杂环基部分进一步任选经一个、两个或三个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基和硝基。
本文所用术语“芳基烷氧基”指经由烷氧基与母分子部分连接的芳基。
本文所用术语“芳基烷氧基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的芳基烷氧基。
本文所用术语“芳基烷基”指经一个、两个或三个芳基取代的烷基。该芳基烷基的烷基部分进一步任选经一个或两个独立地选自以下的其它基团取代：烷氧基、烷基羰基氧基、卤素、卤烷氧基、卤烷基、杂环基、羟基和-NRcRd，其中杂环基进一步任选经一个或两个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤素烷氧基、卤素烷基、羟基、-NRxRy和氧代基。
本文所用术语“芳基烷基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的芳基烷基。
本文所用术语“芳基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的芳基。
本文所用术语“芳基氧基”指经由氧原子与母分子部分连接的芳基。
本文所用术语“芳基氧基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的芳基氧基。
本文所用术语“芳基磺酰基”指经由磺酰基与母分子部分连接的芳基。
本文所用术语“双环烷基”指具有五至十二个碳原子和零个杂原子的饱和、稠合、桥联或螺环双环烃环体系。本发明的双环烷基任选经一个或两个独立地选自烷基、卤素和卤烷基的基团取代。
本文所用术语“羰基”指-C(O)-。
本文所用术语“羧基”指-CO2H。
本文所用术语“氰基”指-CN。
本文所用术语“环烷基”指具有三至七个碳原子和零个杂原子的饱和单环烃环体系。环烷基的代表性实例包括(但不限于)环丙基、环丁基、环戊基和环己基。本发明的环烷基任选经一个、两个、三个、四个或五个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基和-NRxRy，其中芳基和杂环基进一步任选经一个、两个或三个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基、羟基和硝基。
本文所用术语“(环烷基)烷基”指经一个、两个或三个环烷基取代的烷基。
本文所用术语“环烷基氧基”指经由氧原子与母分子部分连接的环烷基。
本文所用术语“环烷基氧基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的环烷基氧基。
本文所用术语“环烷基磺酰基”指经由磺酰基与母分子部分连接的环烷基。
本文所用术语“环烷基取代的杂环基”指经一个或两个环烷基取代的饱和单环杂环基。
本文所用术语“乙烯基环烷基”指：
；
其中m为1、2或3。
本文所用术语“甲酰基”指-CHO。
本文所用术语“稠合双环杂环基”指与三元至五元饱和碳环稠合的含有一个、两个或三个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的四元、五元、六元或七元饱和或不饱和环。本发明的杂环基可经由基团中的任何碳原子或氮原子连接至母分子部分。本发明的双环杂环基任选经一个或两个独立地选自烷基、螺环基、卤素和卤烷基的基团取代。
本文所用术语“卤素”指Cl、Br、F或I。
本文所用术语“卤烷氧基”指经由氧原子与母分子部分连接的卤烷基。
本文所用术语“卤烷氧基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的卤烷氧基。
本文所用术语“卤烷基”指经一个、两个、三个或四个卤原子取代的烷基。
本文所用术语“杂环基”指含有一个、两个、三个或四个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的四元、五元、六元或七元环。四元环具有零个双键，五元环具有零至两个双键，六元和七元环具有零个至三个双键。术语“杂环基”亦包括如下双环基团，其中杂环基环与另一单环杂环基或四至六元芳族或非芳族碳环稠合；以及桥接双环基团，诸如7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基、2-氮杂双环[2.2.2]辛-2-基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基和2-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基。本发明的杂环基可经由基团中的任何碳原子或氮原子与母分子部分连接。杂环基的实例包括(但不限于)苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、氧杂环丁基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻唑基、噻吩基和硫代吗啉基。本发明的杂环基任选经一个、两个、三个、四个或五个独立地选自以下的取代基取代：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基、第二杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基和氧代基，其中芳基烷基和杂环基烷基的烷基部分未经取代，且其中芳基、芳基烷基的芳基部分、芳基羰基的芳基部分、第二杂环基、杂环基烷基和杂环基羰基的杂环基部分进一步任选经一个、两个或三个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基和硝基。
本文所用术语“杂环基烷氧基”指经由烷氧基与母分子部分连接的杂环基。
本文所用术语“杂环基烷氧基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的杂环基烷氧基。
本文所用术语“杂环基烷基”指经一个、两个或三个杂环基取代的烷基。杂环基烷基的烷基部分进一步任选经一个或两个独立地选自以下的其它基团取代：烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、卤素、卤烷氧基、卤烷基、羟基和-NRcRd，其中芳基进一步任选经一个或两个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基、羟基和-NRxRy。
本文所用术语“杂环基烷基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的杂环基烷基。
本文所用术语“杂环基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的杂环基。
本文所用术语“杂环基乙烯基”指：
；
其中A为不含有其它双键的五元至七元单环杂环，且其中“”和“”表示连接至-NRcRd基团和母分子部分的连接点。
本文所用术语“杂环基氧基”指经由氧原子与母分子部分连接的杂环基。
本文所用术语“杂环基氧基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的杂环基氧基。
本文所用术语“羟基”指-OH。
本文所用术语“羟基烷基”指经一个、两个或三个羟基取代的烷基。
本文所用术语“羟基烷基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的羟基烷基。
本文所用术语“硝基”指-NO2。
本文所用术语“-NRcRd”指经由氮原子与母分子部分连接的两个基团Rc和Rd。Rc和Rd独立地选自氢、烯氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基氧基、环烷基氧基羰基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺酰基、-C(NCN)OR'和-C(NCN)NRxRy，其中R'选自烷基和未取代的苯基，且其中芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基的烷基部分进一步任选经一个-NReRf基团取代；且其中芳基和芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和该芳基磺酰基的芳基部分、杂环基以及杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基的杂环基部分进一步任选经一个、两个或三个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基和硝基。
本文所用术语“(NRcRd)烯基”指
；
其中Rc和Rd如本文中所定义，且各Rq独立地为氢或C1-3烷基。
本文所用术语“(NRcRd)烷基”指经一个、两个或三个-NRcRd基团取代的烷基。(NRcRd)烷基的烷基部分进一步任选经一个或两个选自以下的其它基团取代：烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷硫基、芳基烷氧基羰基、羧基、环烷基、杂环基、杂环基羰基、羟基和(NReRf)羰基；其中该杂环基进一步任选经一个、两个、三个、四个或五个独立地选自以下的取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤烷氧基、卤烷基和硝基。
本文所用术语“-NReRf”指经由氮原子与母分子部分连接的两个基团Re和Rf。Re和Rf独立地选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的(环烷基)烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy)烷基和(NRxRy)羰基。
本文所用术语“(NReRf)烷基”指经一个、两个或三个-NReRf基团取代的烷基。
本文所用术语“(NReRf)烷基羰基”指经由羰基与母分子部分连接的(NReRf)烷基。
本文所用术语“(NReRf)羰基”指经由羰基与母分子部分连接的-NReRf基团。
本文所用术语“(NReRf)磺酰基”指经由磺酰基与母分子部分连接的-NReRf基团。
本文所用术语“-NRxRy”指经由氮原子与母分子部分连接的两个基团Rx和Ry。Rx和Ry独立地选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和(NRx'Ry')羰基，其中Rx'和Ry'独立地选自氢和烷基。
本文所用术语“(NRxRy)烷基”指经一个、两个或三个-NRxRy基团取代的烷基。
本文所用术语“(NRxRy)羰基”指经由羰基与母分子部分连接的-NRxRy基团。
本文所用术语“(NRx'Ry')羰基”指经由羰基与母分子部分连接的-NRx'Ry'基团。
本文所用术语“氧代基”指=O。
本文所用术语“氧代基环烷基”指经氧代基取代的环烷基。
本文所用术语“螺环杂环基”指分别经由一个或两个单一碳原子邻接至一个或两个三元至五元饱和环(任选含有一个氧原子)的含有一个、两个或三个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的四元、五元、六元或七元饱和或不饱和环。本发明的杂环基可经由基团中的任何碳原子或氮原子连接至母分子部分。本发明的螺环杂环基任选经一个或两个独立地选自烷基、卤素和卤烷基的基团取代。
本文所用术语“螺环基”指经由单个碳原子邻接至母分子部分的三元、四元或五元饱和环。
本文所用术语“磺酰基”指-SO2-。
本文所用术语“硫烷基”表示经由硫原子连接至母分子部分的烷基。
在本发明的化合物中存在不对称中心。这些中心用符号“R”或“S”表示，取决于手性碳原子周围的取代基的构型。应了解，本发明涵盖具有抑制NS5A的能力的所有立体化学异构形式或其混合物。化合物的各个立体异构体可由含有手性中心的市售原料以合成方式制备，或通过制备对映异构产物的混合物随后分离(诸如转化为非对映异构体的混合物随后分离或再结晶、色谱技术或在手性色谱柱上直接分离对映异构体)来制备。特定立体化学的起始化合物可市购获得或可通过本领域中已知的技术来制备和解析。
本发明的某些化合物亦可以可分离的不同的稳定构象形式存在。由于围绕不对称单键的限制性旋转(例如由于位阻或环应力)所致的扭转不对称性可允许分离不同构象异构体。本发明包括这些化合物的各构象异构体及其混合物。
本发明的化合物亦以互变异构体形式存在；因此，本发明亦涵盖所有的互变异构形式。
术语“本发明的化合物”和等效表述意旨涵盖式(I)的化合物及其药学上可接受的对映异构体、非对映异构体和盐。类似地，若上下文许可，则对中间体的提及意旨涵盖其盐。
本发明意旨包括存在于本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但具有不同质量数的原子。一般举例而言且非限制性地，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。本发明的同位素标记的化合物一般可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文描述类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替其它情况下采用的未标记的试剂来制备。这样的化合物可具有多种潜在用途，例如在生物活性测定中作为标准品和试剂。在稳定同位素的情况下，这样的化合物可具有有利地改变生物学、药理学或药物代谢动力学性质的潜能。
本发明的化合物可以药学上可接受的盐存在。本文所用术语“药学上可接受的盐”表示本发明的化合物盐或两性离子形式，其为水溶性的或油溶性的或可分散的，其在正确的医学判断的范围内适于与患者组织接触使用而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的效益/风险比相符，且对于其预期的用途而言为有效的。这些盐可在化合物的最终分离和纯化期间制备或独立地通过使适合的氮原子与适合的酸反应来制备。代表性酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、亚萘磺酸盐、烟碱酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用于形成药学上可接受的加成盐的酸的实例包括诸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸等无机酸和诸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸等有机酸。
碱加成盐可在化合物的最终分离和纯化期间，通过使羧基与适合的碱(诸如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备。药学上可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝以及无毒胺阳离子，诸如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己基胺、普鲁卡因(procaine)、二苄基胺、N,N-二苄基苯乙胺和N,N'-二苄基乙二胺。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
当有可能可以将治疗有效量的式(I)化合物以及其药学上可接受的盐以化学原料的形式给予用于疗法时，有可能以药物组合物形式提供活性成分。因此，本发明另外提供药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本文所用术语“治疗有效量”指足以显示有意义的患者益处(例如病毒负载持续减少)的各活性组分的总量。当应用于单独给予的各个活性成分时，该术语指单独的成分。当应用于组合时，该术语指无论组合、连续或同时给予，产生治疗作用的活性成分的组合量。式(I)化合物及其药学上可接受的盐如上所述。载体、稀释剂或赋形剂必须在与制剂的其它成分相容的意义上为可接受的且对其接受者无害。根据本发明的另一方面，亦提供一种用于制备药物制剂的方法，其包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。本文所用术语“药学上可接受”指这样的化合物、材料、组合物和/或剂型，其在正确的医学判断的范围内适于与患者组织接触使用而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，具有合理的效益/风险比，且对于其预期的用途而言为有效的。
药物制剂可以每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂型来提供。在用于预防和治疗HCV介导性疾病的单一疗法中典型的是，剂量水平为每日约0.01至约250毫克/千克(“mg/kg”)体重之间、优选为每日约0.05 至约100 mg/kg体重之间的本发明的化合物。通常，本发明的药物组合物将每日给予约1次至约5次，或者以连续输注形式给予。这样的给药可用作慢性或急性疗法。可与载体物质组合以产生单一剂型的活性成分的量将视以下因素而变化：所治疗的病况、病况的严重性、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、治疗持续时间和患者的年龄、性别、重量和状况。优选单位剂量制剂为含有上文所述的日剂量或亚剂量或其适当部分的活性成分的制剂。一般，治疗始于显著小于化合物的最佳剂量的小剂量。此后，以小幅增量增加剂量直至在该情况下达到最佳效应。一般而言，化合物最期需以通常不会造成任何有害或不利副作用的情况下提供抗病毒有效结果的浓度水平来给予。
当本发明的组合物包含本发明的化合物与一种或多种其它治疗剂或预防剂的组合时，所述化合物与所述其它药剂两者通常均以单一疗法方案中通常所给予的剂量的约10%至150%之间且更优选为约10%与80%之间的剂量水平存在。
药物制剂可适合于通过任何适合的途径来给予，例如通过经口(包括含服或舌下)、经直肠、经鼻、局部(包括含服、舌下或经皮)、经阴道或肠胃外(包括皮下、皮内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或真皮内注射或输注)途径来给予。这样的制剂可通过药学领域中已知的任何方法(例如通过使活性成分与载体或赋形剂缔合)来制备。经口给药或通过注射来给药为优选的。
适合于经口给予的药物制剂可以离散单位形式来提供，这些离散单位诸如胶囊剂或片剂；粉剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫剂或起泡剂(whip)；或水包油型液体乳剂或油包水型乳剂。
例如，对于以片剂或胶囊剂的形式经口给予，可将活性药物组分与口服、无毒、药学上可接受的惰性载体(诸如乙醇、甘油、水等)组合。通过将化合物粉碎至适合的精细尺寸且与同样粉碎的药物载体(诸如可食性碳水化合物，例如淀粉或甘露糖醇)混合来制备粉剂。矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂亦可存在。
通过制备上述粉末混合物且填充成型明胶外壳来制备胶囊剂。在填充操作之前可将助流剂和润滑剂(例如胶态二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇)添加至粉末混合物中。当吞咽胶囊时亦可添加崩解剂或增溶剂(例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠)以改进药物的可利用度。
此外，在期需或必需时亦可将适合的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。适合的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然树胶和合成树胶(诸如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。这些剂型中所用的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括(但不限于)淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂例如通过制备粉末混合物、进行粒化或压片(slugging)、添加润滑剂和崩解剂且压制成片剂来配制。粉末混合物通过将适当粉碎的化合物与上述稀释剂或基料(base)混合，且任选与粘合剂(例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、胶凝剂或聚乙烯基吡咯烷酮)、溶解延迟剂(例如石蜡)、再吸收促进剂(例如季盐)和/或吸收剂(例如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合来制备。粉末混合物可通过用粘合剂(例如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚粘浆(acadia mucilage)或纤维素或聚合材料的溶液)湿润且迫使其通过筛网来粒化。作为粒化的备选，可使粉末混合物通过压片机且结果为断裂成颗粒的不完全成型的小块。可借助于添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油来润滑颗粒以防止粘着于片剂成型模具。随后将润滑的混合物压制成片剂。本发明的化合物亦可与自由流动性惰性载体组合且直接被压制成片剂而无需经受粒化或压片步骤。可提供由虫胶的密封涂层、糖或聚合材料的涂层和蜡的抛光涂层组成的透明或不透明的保护涂层。可将染料添加至这些涂层中以区别不同单位剂量。
可以剂量单位形式制备口服流体(例如溶液剂、糖浆剂和酏剂)使得给定数量含有预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶解于适当调味的水溶液中来制备，而酏剂经由使用无毒溶媒来制备。亦可添加增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐剂、调味添加剂(例如薄荷油或天然甜味剂，或糖精或其它人工甜味剂)等。
若适当时，可将用于经口给予的剂量单位制剂微胶囊化。亦可例如通过将颗粒材料涂布或包埋在聚合物、蜡等中来制备制剂以延长或维持释放。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐亦可以脂质体递送系统(例如小的单层囊泡、大的单层囊泡和多层囊泡)的形式给予。脂质体可由各种磷脂(例如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱)形成。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐亦可通过使用单克隆抗体作为各自的载体来递送，其中化合物分子与单克隆抗体偶合。化合物亦可与作为可靶向的药物载体的可溶性聚合物偶合。这样的聚合物可包括聚乙烯基吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰基(palitoyl)残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，可使化合物与一类可用于实现药物的受控释放的可生物降解聚合物(例如聚乳酸、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两性嵌段共聚物)偶合。
适合于经皮给予的药物制剂可作为意旨与接受者表皮保持长时间段的紧密接触的离散贴剂来提供。例如，可通常如Pharmaceutical Research1986, 3(6), 318所述，通过离子电渗疗法由贴剂递送活性成分。
适合于局部给予的药物制剂可配制为软膏、乳膏、混悬剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
对于眼睛或其它外部组织(例如口和皮肤)的治疗，制剂优选以局部软膏或乳膏形式施用。当配制于软膏中时，活性成分可与石蜡或水混溶性软膏基料一起使用。或者，活性成分可与水包油乳膏基料或油包水基料一起配制于乳膏中。
适于局部给予眼睛的药物制剂包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮于适合的载体、尤其是水性溶剂中。
适于在口中局部给予的药物制剂包括锭剂、软锭剂和漱口剂。
适合于经直肠给予的药物制剂可以栓剂或灌肠剂来提供。
适合于经鼻给予的药物制剂(其中载体为固体)包括粒度例如在20-500微米范围内的粗粉(course powder)，其以采用嗅剂的方式(即经由鼻孔自保持紧靠鼻的粉末容器快速吸入)来给予。用于作为喷鼻剂或滴鼻剂给予的适合制剂(其中载体为液体)包括活性成分的水溶液剂或油溶液剂。
适合于通过吸入给予的药物制剂包括细颗粒粉状物或雾状物，其可借助于各种类型的计量的剂量加压喷雾器(aerosol)、雾化器或吹入器来产生。
适合于经阴道给予的药物制剂可作为阴道栓剂、止血塞、乳膏、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂提供。
适合于肠胃外给予的药物制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质(soute)；和可包括助悬剂和增稠剂的水性和非水性无菌混悬液。制剂可在单位剂量或多剂量容器(例如密封安瓿和小瓶)中提供，且可储存于冷冻干燥(冻干)条件下，其仅需在临用前添加无菌液体载体(例如注射用水)。可自无菌粉剂、颗粒剂和片剂制备临时的注射溶液和混悬液。
应了解，除上文特别提及的成分以外，考虑到所讨论的制剂类型，制剂还可包括本领域常规的其它药剂，例如适合于经口给予的那些制剂可包括矫味剂。
术语“患者”包括人类和其它哺乳动物两者。
术语“治疗”指：(i)在可能易患某种疾病、病症和/或病况但尚未被诊断为患有该疾病、病症和/或病况的患者中防止该疾病、病症或病况出现；(ii)抑制该疾病、病症或病况，即，阻止其进展；和(iii)缓解该疾病、病症或病况，即，使该疾病、病症和/或病况消退。
本发明的化合物亦可与环孢菌素(cyclosporin)(例如环孢菌素A)一起给予。已在临床试验中显示环孢菌素A具有抗HCV活性(Hepatology 2003, 38, 1282; Biochem. Biophys. Res. Commun.2004, 313, 42; J. Gastroenterol.2003, 38, 567)。
以下表1列出可与本发明的化合物一起给予的化合物的一些说明性实例。在组合疗法中，本发明的化合物可与其它抗HCV活性化合物联合或分别给予，或将化合物组合为组合物来给予。
表1
本发明的化合物亦可用作实验室试剂。化合物可能有助于为设计病毒复制测定、验证动物测定系统和结构生物学研究提供研究工具以进一步增强对HCV疾病机制的认识。此外，本发明的化合物可用于例如通过竞争性抑制来确定或测定其它抗病毒化合物的结合位点。
本发明的化合物亦可用于处理或预防材料的病毒污染，且因此降低与所述材料(例如血液、组织、手术器械和手术服、实验室仪器和实验服、采血或输液设备和材料)接触的实验室或医务人员或患者的病毒感染风险。
本发明意旨涵盖具有式(I)的化合物，其通过合成过程或通过代谢过程来制备，所述代谢过程包括发生在人或动物体内(体内)的过程或发生在体外的过程。
本申请中所用的缩写，特别包括下文说明性实施例中的缩写，为本领域技术人员所熟知。所用缩写中的一些如下：ca.表示约；ACN或MECN表示乙腈；TFA表示三氟乙酸；min或mins表示分钟；EtOAc或EtOAc或EA表示乙酸乙酯；DCM表示二氯甲烷；Hex表示己烷；THF表示四氢呋喃；DMSO表示二甲亚砜；Et3N或TEA表示三乙胺；TBS-Cl表示叔丁基二甲基硅烷基氯；Et2O表示乙醚；MeOH表示甲醇；EtOH表示乙醇；rt或RT表示室温或保留时间(上下文将指定)；Rt表示保留时间；Ts表示对甲苯磺酰；Ph表示苯基；LiHMDS表示六甲基二硅烷胺基锂；Me表示甲基；iPr2EtN、DIEA或DiPEA表示二异丙基乙胺；h或hr或hrs表示小时；ON表示过夜；TBS表示叔丁基二甲基硅烷基；DMF表示N,N-二甲基甲酰胺；pTsOH表示对甲苯磺酸；AcOH表示乙酸；HATU表示六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲脲；BOC表示叔丁氧羰基；DME表示1,2-二甲氧基乙烷；DMAP表示N,N-二甲基氨基吡啶；HOBT表示1-羟基苯并三唑；EDC表示1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺。
现在将结合某些实施方案描述本发明，这些实施方案不意旨限制本发明的范围。相反，本发明涵盖权利要求书范围内可包括的所有备选、修改和等效物。因此，包括特定实施方案的以下实施例将说明本发明的一种实施，应了解，这些实施例出于说明某些实施方案的目的，且呈现这些实施例以提供认为是对本发明的程序和概念方面的最有用且最容易理解的描述。
原料可自市售来源获得，或通过本领域普通技术人员已知的充分确立的文献方法制备。
条件1
起始% B=0
最终% B=100
梯度时间=2 min
停止时间=3 min
流速=1 mL/min
波长=220 nm
溶剂A=10% ACN/90% H2O/0.1% TFA
溶剂B=90% ACN/10% H2O/0.1% TFA
柱=Phenomenex-Luna C18, 30×2, 3 u
条件2
起始% B=0
最终% B=100
梯度时间=2 min
停止时间=3 min
流速=4 mL/min
波长=220 nm
溶剂A=含0.1% TFA的10%甲醇/90%水
溶剂B=含0.1% TFA的90%甲醇/10%水
柱=Phenomenex-Luna 3.0×50 mm S10
条件3
起始% B=0
最终% B=100
梯度时间=4 min
停止时间=5 min
流速=0.8 mL/min
波长=220 nm
溶剂A=10% ACN/90% H2O/0.1% TFA
溶剂B=90% ACN/10% H2O/0.1% TFA
柱=Phenomenex-Luna C18, 50×2, 3 u
条件4
起始% B=2
最终% B=98
梯度时间=1 min
停止时间=1.5 min
流速=0.8 mL/min
波长=220 nm
溶剂A=100% H2O/0.05% TFA
溶剂B=100% ACN/0.05% TFA
柱=Waters Acquity SDS
条件5
起始% B=0
最终% B=100
梯度时间=2 min
停止时间=3 min
流速=1 mL/min
波长=220 nm
溶剂A=含0.1% TFA的10%甲醇/90%水
溶剂B=含0.1% TFA的90%甲醇/10%水
柱=Phenomenex-Luna 2.0×30 mm 3 um
条件6
起始% B=10
最终% B=100
梯度时间=30 min
停止时间=33 min
流速=1 mL/min
波长=220 nm
溶剂A=10 mM碳酸氢铵(pH=9.5)/95%水/5%甲醇
溶剂B=10 mM碳酸氢铵(pH=9.5)/5%水/95%甲醇
柱=Xbridge Phenyl 3.5 um, 3.0×150 mm
条件7
起始% B=10
最终% B=100
梯度时间=15 min
停止时间=18 min
流速=1 mL/min
波长=220 nm
溶剂A=0.1%TFA/95%水/5%乙腈
溶剂B=0.1%TFA/5%水/95%乙腈
柱=Xbridge C18 3.5 um, 3.0×150 mm
条件8
起始% B=0
最终% B=100
梯度时间=4 min
停止时间=5 min
流速=0.8 mL/min
波长=220 nm
溶剂A=10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA
溶剂B=90% MeOH/10% H2O/0.1% TFA
柱=Phenomenex-Luna C18, 50×2, 3 u
炉温=40℃
条件9
起始% B=10
最终% B=50
梯度时间=20 min
停止时间=25 min
流速=1 mL/min
波长1=220 nm
波长2=254 nm
溶剂A=5% ACN/95% H2O/0.1% TFA
溶剂B=95% ACN/5% H2O/0.1% TFA
柱=Waters Sunfire C18, 150×4.6, 3.5 u (低pH)
Cap-1
Cap-1步骤a
通过注射泵经5小时将重氮乙酸叔丁酯(1.832 mL，13.22 mmol)在50 mL CH2Cl2中的溶液逐滴添加至2,5-二氢呋喃(9.76 mL，132 mmol)、乙酸铑(II)二聚体(0.058 g，0.132mmol)在40 mL CH2Cl2中的混合物中。接着在室温下搅拌所得混合物过夜。在真空下除去溶剂。通过色谱(硅胶，0%-15% EtOAc/Hex)纯化残余物，得到呈澄清油状的Cap-1步骤a (反式异构体)(720 mg)和Cap-1步骤a (顺式异构体)(360 mg)。Cap-1步骤a (反式异构体)：1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 3.88 (2H, d, J=8.55 Hz), 3.70 (2H, d, J=8.55 Hz),2.03-2.07 (2H, m), 1.47 (1H, t, J=3.20 Hz), 1.41 (9H, s)；Cap-1步骤a (顺式异构体)：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4.06 (2H, d, J=8.53 Hz), 3.73 (2H, d, J=8.03Hz), 1.81-1.86 (2H, m), 1.65-1.71 (1H, m), 1.43-1.47 (9H, m)。
Cap-1步骤b
在-10℃下，经1小时向(Cap-1步骤a (反式异构体)) (700 mg，3.80 mmol)在15mL乙醚中的溶液中逐滴添加LiAlH4 (7.60 mL，7.60 mmol) (1 M在THF中)。在-10℃下搅拌所得混合物1小时，接着在室温下搅拌1小时。接着冷却混合物至-5℃。逐滴添加10 mL罗谢尔盐(酒石酸钾钠)水溶液以淬灭反应。在室温下搅拌混合物30分钟，接着用EtOAc (3×)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈淡黄色油状的Cap-1步骤b (380 mg)。产物不经纯化即用于下一步骤中。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.85 (2H, d, J=8.28Hz), 3.68 (2H, d, J=8.53 Hz), 3.45-3.55 (2H, m), 1.50-1.56 (2H, m), 1.02-1.11(1H, m)。
Cap-1步骤c
在-78℃下，向DMSO(4.82 mL，67.9 mmol)在CH2Cl2(70 mL)中的溶液中缓慢逐滴添加乙二酰氯(3.14 mL，35.8 mmol)。在-78℃下搅拌所得混合物15分钟。添加Cap-1步骤b (3.10 g，27.2 mmol)在35 mL CH2Cl2中的溶液且在-78℃下搅拌混合物1小时。接着逐滴添加Et3N (18.93 mL，136 mmol)。30分钟之后，除去冷却浴且用冷的20% K2HPO4水溶液(10mL)和水淬灭反应。在室温下搅拌混合物15分钟，接着用Et2O稀释。分离各层。用Et2O (2×)萃取水层。用盐水洗涤所合并的有机层，用MgSO4干燥且浓缩。通过快速色谱(硅胶，100%CH2Cl2)纯化残余物，得到呈淡黄色油状的Cap-1步骤c (2.71 g)。1H NMR (500 MHz,CDCl3) δ ppm 9.41 (1H, d, J=4.27 Hz), 3.96 (2H, d, J=8.85 Hz), 3.80 (2H, d, J=8.55 Hz), 2.27-2.33 (2H, m), 1.93 (1H, m)。
Cap-1步骤d
在0℃下，向Cap-1步骤c (2.7 g，24.08 mmol)在50 mL水中的混合物中添加亚硫酸氢钠(2.506 g，24.08 mmol)和KCN (1.631 g，25.04 mmol)，随后添加(R)-2-氨基-2-苯乙醇(3.30 g，24.08 mmol)在18 mL MeOH中的溶液。在室温下搅拌所得混合物2小时且随后加热至回流过夜。将混合物冷却至室温。添加100 mL EtOAc。在混合15分钟后，分离各层。用EtOAc (2×)萃取水层。用盐水洗涤所合并的有机层，用MgSO4干燥且浓缩。通过反相HPLC(柱：Water Sunfire 30×150 mm，乙腈/水/NH4OAc)纯化粗制的非对映异构体混合物，得到Cap-1步骤d的两种非对映异构体。未测定各异构体的绝对立体化学。非对映异构体1 (后面的级分) (570 mg)：LC (条件1)：RT=0.97 min；LC/MS：[M+H]+ C15H19N2O2的分析计算值259.14；实测值259.2。
Cap-1步骤e
在0℃下，向Cap-1步骤d (非对映异构体1) (570 mg，2.207 mmol)在20 mL CH2Cl2和20 mL MeOH中的溶液中添加四乙酸铅(1174 mg，2.65 mmol)。在0℃下搅拌所得橙色混合物10分钟。接着添加水(20 mL)至混合物中并将混合物过滤通过硅藻土(Celite)。浓缩滤液且用25 mL 6 N HCl水溶液稀释。使所得混合物回流4小时。滤出混合物且用CH2Cl2洗涤。浓缩水层，得到Cap-1步骤e (HCl盐)。粗产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500 MHz, MeOD) δ ppm 3.87-3.91 (2H, m), 3.73 (2H, dd, J=8.70, 2.90 Hz), 3.55(1H, d, J=10.07 Hz), 2.02-2.07 (1H, m), 1.94-1.99 (1H, m), 1.03-1.10 (1H, m)。
Cap-1
向上述粗Cap-1步骤e在1 N NaOH水溶液(10 mL)中的混合物中添加碳酸氢钠(371mg，4.42 mmol)。接着逐滴添加氯甲酸甲酯(0.342 mL，4.42 mmol)。在室温下搅拌所得混合物3小时。用1 N HCl水溶液中和混合物，接着用EtOAc (3×)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈淡黄色油状的Cap-1 (100 mg，经两个步骤21.1%)。LC (条件1)：RT=0.54 min；LC/MS：[M+H]+ C9H14NO5的分析计算值216.09；实测值216.1；1H NMR (500 MHz,CDCl3) δ ppm 5.29 (1H, br. s.), 3.53-4.02 (8H, m), 1.66-1.92 (2H, m), 1.08(1H, br. s.)。
Cap-2
外消旋混合物
Cap-2步骤a
在室温下搅拌环戊-3-烯醇(5 g，59.4 mmol)和Et3N (9.94 mL，71.3 mmol)在50mL CH2Cl2中的溶液15分钟。接着逐滴添加苯甲酰氯(8.28 mL，71.3 mmol)且在室温下搅拌混合物过夜。接着用水洗涤混合物。用MgSO4干燥有机层且浓缩。通过快速色谱(硅胶，EtOAc/Hex 0-10%)纯化残余物，得到呈澄清油状的Cap-2步骤a (9.25 g)。LC (条件1)：RT=1.77 min；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.01-8.07 (2H, m), 7.55 (1H, t, J=7.40Hz), 7.43 (2H, t, J=7.65 Hz), 5.79 (2H, s), 5.64 (1H, tt, J=6.93, 2.60 Hz),2.87 (2H, dd, J=16.56, 6.78 Hz), 2.52-2.63 (2H, m)。
向具有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加纯氟化钠(5.02 mg，0.120 mmol)和Cap-2步 骤a (2.25 g，11.95 mmol)。加热烧瓶至100℃且通过注射泵经5小时缓慢添加纯2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸三甲基硅烷基酯(5.89 mL，29.9 mmol)。在100℃下搅拌混合物过夜。接着用CH2Cl2稀释混合物，用水、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥且浓缩。通过快速色谱(硅胶，0-5% EtOAc/Hex)纯化粗产物，得到呈澄清油状的Cap-2步骤b (异构体1)(750 mg)和Cap-2步骤b (异构体2) (480 mg)。通过NOE研究进行相对立体化学分配(Relative stereochemical assignment)。Cap-2步骤b (异构体1)：LC(条件1)：RT=1.83min；LC/MS：[M+H]+ C13H13F2O2的分析计算值239.09；实测值239.2；1H NMR (500 MHz,CDCl3) δ ppm 7.99-8.04 (2H, m), 7.56 (1H, t, J=7.32 Hz), 7.43 (2H, t, J=7.63Hz), 5.25-5.33 (1H, m), 2.50 (2H, dd, J=14.04, 6.71 Hz), 2.14-2.22 (2H, m),2.08-2.14 (2H, m)；Cap-2步骤b (异构体2)：LC (条件1)：RT=1.79 min；LC/MS：[M+H]+C13H13F2O2的分析计算值239.09；实测值239.2；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.98-8.08(2H, m), 7.53-7.59 (1H, m), 7.41-7.48 (2H, m), 5.53-5.62 (1H, m), 2.59-2.70(2H, m), 2.01-2.11 (4H, m)。
Cap-2步骤c
向Cap-2步骤b (异构体2) (480 mg，2.015 mmol)在4 mL MeOH中的溶液中添加KOH (4 mL，2.015 mmol) (10%水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。接着用CH2Cl2 (3×)萃取混合物。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈淡黄色固体状的Cap-2步骤c (220 mg)。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 4.41-4.54 (1H, m), 2.38-2.50 (2H, m),1.89-1.99 (2H, m), 1.81 (2H, dd, J=14.50, 5.04 Hz)。
Cap-2步骤d
将甲苯磺酰氯(625 mg，3.28 mmol)添加至Cap-2步骤c (220 mg，1.640 mmol)和吡啶(0.531 mL，6.56 mmol)在7 mL CH2Cl2中的溶液中。在室温下搅拌混合物过夜且随后用CH2Cl2稀释，用水和1 N HCl水溶液洗涤。干燥(MgSO4)有机层且浓缩。通过快速色谱(硅胶，0-15% EtOAc/己烷)纯化残余物，得到呈澄清油状的Cap-2步骤d (325 mg)。LC (条件1)：RT=1.72 min；LC/MS：[M+Na]+ C13H14F2NaO3S的分析计算值311.05；实测值311.2；1H NMR (500MHz, CDCl3) δ ppm 7.76 (2H, d, J=8.24 Hz), 7.34 (2H, d, J=8.24 Hz), 4.99-5.08(1H, m), 2.45 (3H, s), 2.31-2.41 (2H, m), 1.84-1.94 (4H, m)。
Cap-2步骤e
外消旋混合物
向微波管中添加含N-(二苯亚甲基)甘氨酸乙酯(241 mg，0.902 mmol)和Cap-2步 骤d (260 mg，0.902 mmol)的2 mL甲苯。密封该管且在N2下逐滴添加LiHMDS (1.082 mL，1.082 mmol) (1 N在THF中)。在100℃下微波加热所得深棕色溶液5小时。接着用水淬灭混合物且用EtOAc (3×)萃取。用水洗涤所合并的有机层，用MgSO4干燥且浓缩。通过快速色谱(硅胶，0-5% EtOAc/Hex)纯化粗产物，得到呈淡黄色油状的Cap-2步骤e的外消旋混合物(240 mg)。混合物未经分离即进行下一步骤。LC (条件2)：RT=1.91 min；LC/MS：[M+Na]+C23H24F2NO2的分析计算值384.18，实测值384.35。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 7.63-7.70 (2H, m), 7.43-7.51 (3H, m), 7.38-7.43 (1H, m), 7.31-7.38 (2H, m), 7.13-7.22 (2H, m), 4.13-4.22 (2H, m), 3.95 (1H, d, J=6.41 Hz), 2.67-2.79 (1H, m),2.07-2.16 (1H, m), 1.97-2.07 (2H, m), 1.90 (2H, m), 1.65-1.76 (1H, m), 1.25(3H, t, J=7.17 Hz)。
Cap-2步骤f
外消旋混合物
向Cap-2步骤e (240 mg，0.626 mmol)在4 mL THF中的溶液中添加HCl (1 mL，2.0mmol) (2 N水溶液)。在室温下搅拌所得混合物2小时。接着用EtOAc洗涤混合物，用饱和NaHCO3水溶液中和，接着用EtOAc (3×)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈澄清油状的Cap-2步骤f (120 mg)。LC (条件2)：RT=0.85 min；LC/MS：[M+H]+ C10H16F2NO2的分析计算值220.11；实测值220.26；1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 4.14-4.25 (2H, m),3.26 (1H, d, J=6.71 Hz), 2.22-2.35 (1H, m), 1.90-2.11 (5H, m), 1.79-1.90 (1H,m), 1.22-1.34 (3H, m)。
Cap-2步骤g
外消旋混合物
向Cap-2步骤f (120 mg，0.547 mmol)在2 mL CH2Cl2中的溶液中添加氯甲酸甲酯(0.085 mL，1.095 mmol)。在室温下搅拌所得混合物1小时。用CH2Cl2稀释混合物且用水洗涤。用Na2SO4干燥有机层且浓缩，得到呈白色固体状的Cap-2步骤g (150 mg)。LC (条件1)：RT=1.45 min；LC/MS：[M+H]+ C12H18F2NO4的分析计算值278.12；实测值278.2；1H NMR (500MHz, CDCl3) δ ppm 5.23 (1H, d, J=8.24 Hz), 4.29 (1H, t, J=7.48 Hz), 4.15-4.23(2H, m), 3.68 (3H, s), 2.37 (1H, br. s.), 2.02-2.10 (1H, m), 1.85-2.00 (4H,m), 1.75-1.84 (1H, m), 1.27 (3H, t, J=7.02 Hz)。
Cap-2
外消旋混合物
向Cap-2步骤g (150 mg，0.541 mmol)在2 mL THF和1 mL水中的混合物中添加LiOH (0.811 mL，1.623 mmol) (2 N水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。用1 N HCl水溶液中和混合物，且用EtOAc (3×)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈白色固体状的Cap-2 (133 mg)。LC (条件2): RT=1.07 min；LC/MS：[M+H]+ C10H14F2NO4的分析计算值250.09；实测值250.13；1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 5.18-5.36 (1H, m), 4.28-4.44 (1H, m), 3.70 (3H, s), 2.37-2.56 (1H, m), 1.74-2.31 (6H, m)。
Cap-3
外消旋混合物
根据关于Cap-2所描述的程序，由Cap-2步骤b (异构体1)合成Cap-3。LC(条件2)：RT=1.08 min；LC/MS：[M+H]+ C10H14F2NO4的分析计算值250.09，实测值249.86。1H NMR (500MHz, CDCl3) δ ppm 5.15 (1H, d, J=8.24 Hz), 4.32 (1H, t, J=7.48 Hz), 3.69 (3H,s), 2.83-2.99 (1H, m), 1.96-2.26 (4H, m), 1.70 (1H, t, J=11.75 Hz), 1.59 (1H,t, J=12.05 Hz)。
Cap-4
外消旋混合物
Cap-4步骤a
外消旋混合物
在室温下搅拌2-氨基-2-((1R,3r,5S)-双环[3.1.0]己-3-基)乙酸乙酯(通过采用关于制备Cap-2所描述的相同程序由市购获得的(1R,3r,5S)-双环[3.1.0]己-3-醇制备；350 mg，1.910 mmol)、DiPEA (0.667 mL，3.82 mmol)、氯甲酸甲酯(0.296 mL，3.82 mmol)在5 mL CH2Cl2中的混合物1小时。接着用CH2Cl2稀释混合物且用水洗涤。用MgSO4干燥有机层且浓缩，得到呈黄色油状的Cap-4步骤a (461 mg)。LC (条件1)：RT=1.43 min；LC/MS：[M+H]+ C12H20NO4的分析计算值242.14；实测值242.2；1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 5.04(1H, d, J=7.63 Hz), 4.09-4.20 (2H, m), 4.05 (1H, t, J=8.39 Hz), 3.63 (3H, s),2.55-2.70 (1H, m), 1.96-2.09 (2H, m), 1.37-1.60 (4H, m), 1.24 (3H, t, J=7.17Hz), 0.66-0.76 (1H, m), -0.03-0.06 (1H, m)。
Cap-4
外消旋混合物
向乙酯Cap-4步骤a (461 mg，1.911 mmol)在5 mL THF和2 mL水中的混合物中添加LiOH (2.87 mL，5.73 mmol) (2 N水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。接着用1 NHCl水溶液中和混合物，且用EtOAc (3×)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈澄清油状的Cap-4 (350 mg)。LC (条件1)：RT=1.04 min；LC/MS：[2M+Na]+ C20H30N2NaO8的分析计算值449.19；实测值449.3；1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 5.07 (1H, d, J=8.85Hz), 4.13 (1H, t, J=8.24 Hz), 3.68 (3H, s), 2.64-2.79 (1H, m), 2.04-2.21 (2H,m), 1.23-1.49 (4H, m), 0.71-0.81 (1H, m), 0.03-0.12 (1H, m)。
Cap 5.1和Cap 5.2
Cap 5步骤a
在80℃下加热3,3-二甲氧基丙酸甲酯(10 g，68 mmol)和LiOH (8.08 g，337mmol)在MeOH (40 mL)、THF (40 mL)和水(40 mL)中的混合物2小时。接着将混合物冷却至室温且用1 N HCl水溶液(pH>3)酸化。接着用CH2Cl2 (3×)萃取混合物。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈澄清油状的Cap 5步骤a (6.3 g)。产物未经进一步纯化即用于下一反应。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.82 (t, J=5.8 Hz, 1H), 3.36 (s, 6H), 2.69(d, J=5.8 Hz, 2H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 175.22, 101.09, 53.68, 38.76。
Cap 5步骤b
向Cap 5步骤a (4.55 g，33.9 mmol)在THF (40 mL)中的溶液中逐滴添加N,N'-羰基二咪唑(6.60 g，40.7 mmol)在THF (40 mL)中的悬浮液。溶液变黄且观察到气体逸出。在室温下搅拌混合物2小时。同时，在室温下搅拌含丙二酸单甲酯单钾(7.95 g，50.9 mmol)和氯化镁(3.55 g，37.3 mmol) (在THF (80 mL)中)的另一烧瓶2小时。接着通过注射器将咪唑化物(imidazolide)溶液转移至Mg(OOCCH2COOMe)2溶液中且在室温下搅拌所得混合物16小时。接着用2 M NaHSO4 (60 mL)酸化混合物且用EtOAc (3×)萃取。用饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤所合并的有机层，用MgSO4干燥且浓缩，得到呈浅紫色油状的Cap 5步骤b (4.9g)。该油无需进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.75 (t, J=5.5Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.50 (s, 2H), 3.35 (s, 6H), 2.84 (d, J=5.5 Hz, 2H)。
Cap 5步骤c
向Cap 5步骤b (4.9 g，26 mmol)在MeOH (70 mL)中的溶液中缓慢添加硼氢化钠(1.07 g，28.3 mmol)。在室温下搅拌所得混合物3小时且随后用1 N HCl (15 mL)淬灭。用EtOAc (3×)萃取混合物。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈淡黄色油状的Cap 5 步骤c (4.4 g)。该产物无需进一步纯化即用于下一步骤中。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ4.60 (t, J=5.5 Hz, 1H), 4.25-4.16 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.37(s, 3H), 2.52-2.48 (m, 2H), 1.83-1.77 (m, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ172.21, 102.73, 64.61, 53.22, 52.95, 51.30, 41.00, 38.65。
Cap 5步骤d
向Cap 5步骤c (4.4 g，22.89 mmol)在DMF (50 mL)中的溶液中添加咪唑(3.12g，45.8 mmol)和TBS-Cl (5.52 g，36.6 mmol)。在室温下搅拌所得混合物3天。接着用CH2Cl2稀释反应物且用水洗涤。用盐水洗涤有机相，用MgSO4干燥且浓缩。通过快速色谱(硅胶，0-15% EtOAc/Hex)纯化粗产物，得到呈澄清油状的Cap 5步骤d (5.0 g)。1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 4.55-4.50 (m, 1H), 4.30-4.21 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.32 (s, 3H),3.31 (s, 3H), 2.51 (d, J=6.3 Hz, 2H), 1.89-1.77 (m, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.08(s, 3H), 0.06 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 171.41, 101.24, 65.85,52.35, 52.09, 51.04, 42.40, 39.92, 25.37, 25.27, 17.55, -3.95, -5.15。
Cap 5步骤e
向冰/水浴中Cap 5步骤d (5.0 g，16 mmol)在乙醚(50 mL)中的溶液中添加钛酸四异丙酯(0.971 mL，3.26 mmol)在乙醚(10 mL)中的溶液。接着通过注射泵经1小时逐滴添加溴化乙基镁(48.9 mL，48.9 mmol) (1 M在THF中)。接着在冰/水浴中搅拌混合物2小时。用乙醚稀释混合物且用饱和NH4Cl水溶液缓慢淬灭。滤出所得白色沈淀。用Et2O (3×)萃取滤液。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩。接着通过快速色谱(硅胶，0-20% EtOAc/Hex)纯化粗产物，得到呈澄清油状的Cap 5步骤e (4.02 g)。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.47(t, J=5.6 Hz, 1H), 4.21-4.14 (m, 1H), 3.71 (s, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.31 (s,3H), 2.05-1.88 (m, 3H), 1.66-1.58 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.83-0.76 (m, 1H),0.71-0.65 (m, 1H), 0.47 (m, 1H), 0.40-0.34 (m, 1H), 0.14 (s, 3H), 0.11 (s,3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 102.09, 69.97, 54.44, 52.97, 52.84, 43.27,40.00, 25.92, 17.96, 14.04, 12.06, -4.32, -4.61。
Cap 5步骤f
在室温下搅拌Cap 5步骤e (4.02 g，13.2 mmol)和对甲苯磺酸单水合物(3.01 g，15.8 mmol)在MeOH (120 mL)中的溶液过夜。向混合物中添加饱和NaHCO3水溶液(100 mL)且用CH2Cl2 (3×)萃取混合物。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩。粗产物通过使其经过硅胶床用70% EtOAc/Hex来纯化，得到作为非对映异构体混合物的Cap 5步骤f (1.7 g；澄清油状物)。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.79 (t, J=3.7 Hz, 1H), 4.59 (dd, J=5.3,2.9 Hz, 1H), 4.30-4.22 (m, 1H), 4.03 (br. s., 1H), 3.37 (s, 3H), 3.31 (s,3H), 2.09-2.03 (m, 1H), 2.00 (dtd, J=13.1, 4.0, 1.5 Hz, 1H), 1.86 (dd, J=13.1, 3.7 Hz, 1H), 1.81-1.61 (m, 7H), 0.94-0.87 (m, 1H), 0.83-0.77 (m, 1H),0.74-0.69 (m, 1H), 0.65-0.56 (m, 2H), 0.48-0.40 (m, 2H), 0.37-0.30 (m, 1H);13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 100.86, 100.27, 65.75, 64.35, 56.24, 55.92, 53.80,52.35, 40.86, 39.92, 39.28, 38.05, 12.10, 12.06, 9.91, 9.37。
Cap 5步骤g
向Cap 5步骤f (1.7 g，11 mmol)在CH2Cl2 (20 mL)中的溶液中添加双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(2.14 mL，8.06 mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。接着冷却混合物至-10℃且逐滴添加三乙基硅烷(6.87 mL，43.0 mmol)，且随后逐滴添加三氟化硼乙醚复合物(3.40 mL，26.9 mmol)。接着使混合物缓慢温热至0℃且在0℃下搅拌30分钟。接着用水淬灭反应物且用EtOAc (3×)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩。粗产物通过使其经过硅胶床用70% EtOAc/Hex纯化，得到呈澄清油状的Cap 5步骤g (1.5 g)。1H NMR (500 MHz,CDCl3) δ 6.43 (br. s., 1H), 3.96 (tt, J=9.5, 4.7 Hz, 1H), 3.86 (dt, J=11.5,4.0 Hz, 1H), 3.51 (td, J=11.1, 2.7 Hz, 1H), 1.98-1.84 (m, 2H), 1.66-1.50 (m,2H), 0.86-0.79 (m, 1H), 0.66-0.59 (m, 1H), 0.53-0.46 (m, 1H), 0.34 (m, 1H);13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 67.41, 64.37, 57.99, 41.28, 35.22, 11.74, 11.32。
Cap 5步骤h
在-78℃下，向乙二酰氯(1.090 mL，12.45 mmol)在CH2Cl2 (30 mL)中的溶液中逐滴添加DMSO (1.767 mL，24.90 mmol)在CH2Cl2 (20 mL)中的溶液。搅拌混合物20分钟，且逐滴添加含Cap 5步骤g (1.33 g，10.4 mmol)的CH2Cl2 (20 mL)。在-78℃下搅拌混合物20分钟。接着添加Et3N (7.52 mL，54.0 mmol)且经30分钟使混合物缓慢温热至室温。接着用水淬灭混合物且用CH2Cl2 (3×)萃取。合并有机层且用MgSO4干燥并浓缩，得到呈澄清油状的Cap 5步骤h (1.3 g)。粗产物不经纯化即用于下一步骤中。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ3.95 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.55-2.50 (m, 2H), 2.46 (s, 2H), 0.84 (m, 2H), 0.50(m, 2H)。
Cap 5步骤i
在-20℃下，向2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(3.41 g，10.3 mmol)在THF (20 mL)中的溶液中添加1,1,3,3-四甲基胍(2.85 mL，22.7 mmol)。在-20℃下搅拌所得混合物1小时。接着添加含Cap 5步骤h (1.3 g，10.30 mmol)的THF (10mL)。在室温下搅拌所得棕色混合物6天。接着浓缩反应物且通过快速色谱(硅胶，0-25%EtOAc/Hex)纯化粗产物，得到呈白色固体状的Cap 5步骤i (异构体的混合物) (850 mg)。LC (条件2)：RT=1.88 min；LC/MS：[M+H]+ C18H22NO5的分析计算值332.15；实测值332.14；1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.29 (m, 5H), 6.09-5.81 (m, 1H), 5.18-5.08 (m,2H), 3.88-3.49 (m, 5H), 3.06-2.82 (m, 2H), 2.52-2.36 (m, 2H), 0.82-0.64 (m,2H), 0.58-0.32 (m, 2H)。
Cap 5.1和Cap 5.2步骤j
用N2鼓泡500 mL氢化压力瓶中Cap 5步骤i (异构体的混合物) (730 mg，2.20mmol)在MeOH (5 mL)中的溶液30分钟。向混合物中添加(-)-1,2-双((2S,5S)-2,5-二甲基phospholano)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I) (24.5 mg，0.044 mmol)，且接着将该瓶放置在帕尔(Parr)振荡器上且在60 psi下氢化3天。浓缩混合物且通过手性HPLC (ChiralpakAD柱，21×250 mm，10 μm，用85% 0.1%二乙胺/庚烷-15% EtOH以15 mL/min洗脱)分离粗产物，得到呈澄清油状的Cap 5.1步骤j (220 mg) (第一洗脱级分)和Cap 5.2步骤j (290mg) (第二洗脱级分)。未测定异构体的绝对立体化学。
Cap 5.1步骤j：LC (条件2)：RT=1.89 min；LC/MS：[M+Na]+ C18H23NNaO5的分析计算值356.15；实测值356.16；1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.41-7.28 (m, 5H), 5.34 (d, J=8.9 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.37 (dd, J=9.0, 5.0 Hz, 1H), 3.89-3.82 (m, 1H),3.75 (s, 3H), 3.48 (td, J=11.1, 3.1 Hz, 1H), 2.29-2.17 (m, 1H), 1.96 (t, J=12.7 Hz, 1H), 1.57-1.43 (m, 2H), 1.07-0.98 (m, 1H), 0.87-0.78 (m, 1H), 0.66-0.56 (m, 1H), 0.56-0.47 (m, 1H), 0.37-0.27 (m, 1H)；
Cap 5.2步骤j：LC (条件2)：RT=1.90 min；LC/MS：[M+Na]+ C18H23NNaO5的分析计算值356.15；实测值356.17；1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.40-7.28 (m, 5H), 5.33 (d, J=8.5 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.36 (dd, J=8.9, 5.8 Hz, 1H), 3.86 (dd, J=11.0,3.1 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.53-3.43 (m, 1H), 2.25-2.14 (m, 1H), 1.94 (t, J=12.5 Hz, 1H), 1.67-1.44 (m, 2H), 0.97-0.90 (m, 1H), 0.86-0.79 (m, 1H), 0.66-0.57 (m, 1H), 0.53-0.44 (m, 1H), 0.33-0.24 (m, 1H)。
[注意：绝对立体化学分配参见下文]
Cap 5.1步骤k
向氢化烧瓶中Cap 5.1步骤j (210 mg，0.630 mmol)在MeOH (10 mL)中的溶液中添加二碳酸二甲基酯(0.135 mL，1.26 mmol)和10% Pd/C (33.5 mg，0.031 mmol)。将烧瓶放置在帕尔振荡器上且在50 psi下氢化混合物4小时。接着将混合物过滤通过硅藻土(Celite)且浓缩滤液，得到呈澄清油状的Cap 5.1步骤k (165 mg)。LC (条件2)：RT=1.56min；LC/MS：[M+H]+ C12H20NO5的分析计算值258.13；实测值258.16；1H NMR (500 MHz,CDCl3) δ 5.39 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.30 (dd, J=8.9, 5.2 Hz, 1H), 3.84-3.78 (m,1H), 3.70 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.47-3.39 (m, 1H), 2.23-2.12 (m, 1H), 1.91(t, J=12.5 Hz, 1H), 1.49-1.39 (m, 2H), 0.97 (dd, J=13.1, 2.4 Hz, 1H), 0.81-0.74 (m, 1H), 0.61-0.52 (m, 1H), 0.46 (dt, J=10.1, 6.0 Hz, 1H), 0.32-0.24 (m,1H)。
Cap 5.1
向Cap 5.1步骤k (165 mg，0.641 mmol)在THF (2 mL)和水(1 mL)中的混合物中添加2 M LiOH (1 mL，2.0 mmol) (水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。接着用乙醚(1mL)洗涤混合物。用1 N HCl水溶液酸化水相且用乙醚(6×)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈白色固体状的Cap 5.1 (150 mg)。LC (条件2)：RT=1.10 min；LC/MS：[M+H]+ C11H18NO5的分析计算值244.12；实测值244.09；1H NMR (500 MHz, CDCl3 -d) δ5.27(d, J=8.9 Hz, 1H), 4.39 (dd, J=8.5, 4.9 Hz, 1H), 3.94-3.86 (m, 1H), 3.70 (s,3H), 3.56-3.46 (m, 1H), 2.36-2.24 (m, 1H), 2.01 (t, J=12.7 Hz, 1H), 1.63-1.48(m, 2H), 1.14-1.05 (m, 1H), 0.92-0.80 (m, 1H), 0.69-0.60 (m, 1H), 0.58-0.49(m, 1H), 0.40-0.31 (m, 1H)。
注意：Cap 5.1经由HATU偶合与(S)-1-(萘-2-基)乙胺偶合且使所得酰胺结晶。此类似物的X射线晶体分析确定如所示的Cap 5.1的相对和绝对立体化学。
Cap 5.2
根据关于Cap 5.1所描述的程序由Cap 5.2步骤j制备Cap 5.2。LC (条件2)：RT=1.12 min；LC/MS：[M+H]+ C11H18NO5的分析计算值244.12；实测值244.09；1H NMR (500 MHz,CDCl3) δ 5.27 (d, J=8.9 Hz, 1H), 4.38 (dd, J=8.2, 4.9 Hz, 1H), 3.91 (dd, J=11.1, 3.2 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.52 (t, J=11.0 Hz, 1H), 2.34-2.23 (m, 1H),2.07-1.97 (m, 1H), 1.72-1.61 (m, 1H), 1.54 (qd, J=12.6, 4.7 Hz, 1H), 1.04-0.96 (m, 1H), 0.90-0.82 (m, 1H), 0.68-0.61 (m, 1H), 0.56-0.49 (m, 1H), 0.39-0.30 (m, 1H)。
Cap-6
Cap-6步骤a
将1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(15 g，96 mmol)在EtOAc (150 mL)中的溶液添加至2-(苄氧羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(21.21 g，64.0 mmol)在1,1,3,3-四甲基胍(10.45 mL，83 mmol)和EtOAc (150 mL)中的溶液中。在环境温度下搅拌所得溶液72小时且随后将其用EtOAc (25 mL)稀释。用1 N HCl (75 mL)、H2O (100 mL)和盐水(100mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。经由Biotage (5%至25% EtOAc/己烷；300 g柱)纯化残余物。接着真空浓缩所合并的含有产物的级分，且由己烷/EtOAc再结晶残余物，得到对应于2-(苄氧羰基氨基)-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-亚基)乙酸甲酯的白色晶体(6.2g)。1H NMR (400 MHz, CDCl3 -d) δppm 7.30-7.44 (5H, m), 6.02 (1H, br. s.), 5.15(2H, s), 3.97 (4H, s), 3.76 (3H, br. s.), 2.84-2.92 (2H, m), 2.47 (2H, t, J=6.40 Hz), 1.74-1.83 (4H, m)。LC (条件OL1)：Rt=2.89 min。LC/MS：[M+Na]+ C19H23NNaO6的分析计算值：745.21；实测值：745.47。
Cap-6步骤b
根据Burk, M. J.; Gross, M. F.和Martinez J. P. (J. Am. Chem. Soc.,1995, 117, 9375-9376和其中的参考文献)的方法由烯烃Cap-176步骤a制备酯Cap-176步 骤b：在N2层下，用含烯烃Cap-176步骤a(3.5 g，9.68 mmol)的经脱气MeOH (200 mL)填充500 mL高压瓶。接着用(-)-1,2-双((2S,5S)-2,5-二甲基phospholano)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I) (0.108 g，0.194 mmol)填充该溶液，用N2 (3×)冲洗所得混合物并用H2 (3×)填充。在环境温度下，在70 psi H2下剧烈振荡溶液72小时。减压除去溶剂且将剩余残余物溶解在EtOAc中。接着经由硅胶塞过滤褐色溶液且用EtOAc洗脱。真空浓缩溶剂，得到对应于酯Cap-176步骤b的澄清油状物(3.4 g)。1H NMR (500 MHz, CDCl3 -d) δppm 7.28-7.43(5H, m), 5.32 (1H, d, J=9.16 Hz), 5.06-5.16 (2H, m), 4.37 (1H, dd, J=9.00,5.04 Hz), 3.92 (4H, t, J=3.05 Hz), 3.75 (3H, s), 1.64-1.92 (4H, m), 1.37-1.60(5H, m)。LC (条件OL1)：Rt=1.95 min。LC/MS：[M+H]+ C19H26NO6的分析计算值：364.18；实测值：364.27。
Cap-6步骤c
将Cap-6步骤b (6.68 g，18.38 mmol)溶解在MeOH (150 mL)中且用Pd/C (0.039g，0.368 mmol)填充，并将悬浮液放置在1 atm H2下。在室温下搅拌反应混合物6小时且经由硅藻土(Celite)塞过滤并减压除去挥发物。回收对应于Cap-6步骤c的琥珀色油状物(3.8 g，16.57 mmol，90%产率)且无需进一步纯化即可使用。1H NMR (400 MHz, CDCl3 -d) δ3.92 (br. s., 4H), 3.71 (s, 3H), 3.31 (d, J=4.0 Hz, 1H), 1.87-1.44 (m, 9H)。13CNMR (101 MHz, CDCl3 -d) δ176.1, 108.7, 64.5 (2C), 59.1 , 52.0, 41.1, 34.7,34.6 , 27.2, 25.4。
Cap-6步骤d
将氯甲酸甲酯(2.57 mL，33.1 mmol)添加至Cap 6步骤c (3.8 g，16.57 mmol)和DIEA (23.16 mL，133 mmol)在CH2Cl2 (200 mL)中的溶液中。在室温下搅拌所得溶液3小时且减压除去挥发物。经由Biotage (30% EtOAc/Hex；160 g柱)纯化残余物。回收对应于Cap- 6步骤d的琥珀色油状物(3 g，10.44 mmol，63.0%产率)。1H NMR (500 MHz, CDCl3 -d) δ5.24(d, J=8.5 Hz, 1H), 4.34 (dd, J=8.9, 4.9 Hz, 1H), 3.92 (s, 4H), 3.74 (s, 3H),3.67 (s, 3H), 1.89-1.73 (m, 3H), 1.67 (d, J=12.5 Hz, 1H), 1.62-1.33 (m, 5H)。13C NMR (126 MHz, CDCl3 -d) 172.4, 156.7, 108.1, 64.2, 64.2, 57.7, 52.3, 52.2,39.6, 34.2 (2C), 26.5, 25.0。
Cap-6步骤e
将Cap-6步骤d (1.15 g，4.00 mmol)溶解在THF (50 mL)中，随后相继添加水(30mL)、冰AcOH (8.02 mL，140 mmol)和二氯乙酸(1.985 mL，24.02 mmol)。在室温下搅拌混合物过夜且通过在剧烈搅拌下缓慢添加固体碳酸钠直至不再观察到气体释放为止来淬灭反应。将粗产物萃取至10%乙酸乙酯-二氯甲烷中且合并有机层，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。经由Biotage (0至30% EtOAc/Hex；40 g柱)纯化残余物，且回收对应于Cap-6步骤e的澄清油状物(0.72 g，2.96 mmol，73.9%产率)。1H NMR (500 MHz, CDCl3 -d) δ5.36 (d, J=8.2 Hz,1H), 4.46 (dd, J=8.4, 5.0 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 2.46-2.39 (m,2H), 2.38-2.29 (m, 2H), 2.09-2.03 (m, 1H), 1.96-1.88 (m, 1H), 1.64-1.51 (m,2H)。13C NMR (126 MHz, CDCl3 -d) δ210.1, 171.9, 156.7, 57.2, 52.5 (2C), 40.2,40.2, 39.4, 28.7, 27.6。
Cap-6
将Cap-6步骤e (0.68 g，2.80 mmol)在THF (7.5 mL)和MeOH (7.50 mL)中的溶液冷却至0℃。逐滴添加2 N NaOH水溶液(1.9 mL，3.80 mmol)且在室温下搅拌所得溶液2小时。添加己烷：Et2O的1:1混合物(20 mL)且弃去有机层。接着用10% KHSO4水溶液酸化水层至pH值约为1且用EtOAc (2×)萃取混合物。干燥(MgSO4)所合并的有机层，过滤且浓缩。回收对应于Cap-6的白色泡沫(0.55 g)且无需进一步纯化即可使用。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ12.70 (br. s., 1H), 7.49 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.01 (dd, J=8.2, 6.7 Hz,1H), 3.54 (s, 3H), 2.45-2.30 (m, 2H), 2.23-2.13 (m, 3H), 1.94-1.79 (m, 3H),1.57 (qd, J=12.7, 4.1 Hz, 1H), 1.47 (qd, J=12.7, 4.4 Hz, 1H)。13C NMR (126 MHz,DMSO-d6) 210.2, 173.0, 156.8, 57.6, 51.5, 39.7 (2C), 36.9, 28.6, 27.5。
Cap-7
在0℃下，向(S)-2-氨基-2-(3-(三氟甲基)双环[1.1.1]戊-1-基)乙酸(自商业化来源获得；0.5151 g，2.463 mmol)和碳酸钠(0.131 g，1.231 mmol)在1 M氢氧化钠水溶液(2.4 ml，2.400 mmol)中的混合物中逐滴添加氯甲酸甲酯(0.2 ml，2.59 mmol)。接着在室温下搅拌反应物4小时。接着使其在冰/水浴中冷却，且添加乙醚(25 mL)且搅拌并分离各层。用乙醚(2×25 mL)洗涤水层。用冰-水浴冷却水层且用12 N HCl酸化至1-2的pH值范围。将其用CH2Cl2 (3×50 mL)萃取，经MgSO4干燥且真空浓缩，得到呈灰白色固体状的Cap-7 (480.7 mg)且无需进一步纯化即可使用。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12.86 (br s,1H), 7.61 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 4.16 (d, J=8.0 Hz, 1H), 3.57 (s, 3H), 2.00(d, J=8.3 Hz, 3H), 1.93 (d, J=9.3, 3H)。
Cap 8.1和Cap 8.2 (两种立体异构体)
Cap 8步骤a
在回流温度下搅拌4-氧代基戊酸甲酯(6 g，46.1 mmol)、二硒二苯(14.39 g，46.1mmol)和过硫酸铵(15.92 mL，138 mmol)在MeOH (200 mL)中的混合物3小时。接着将混合物倾入水中且用CH2Cl2 (3×75 mL)萃取。用盐水洗涤所合并的有机层，用MgSO4干燥且浓缩。通过快速色谱(硅胶，0-15% EtOAc/Hex)纯化粗产物，得到呈黄色油状的Cap 8步骤a (7.1g)。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.53 (s, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.42 (s, 6H), 2.89(t, J=6.6 Hz, 2H), 2.60 (t, J=6.6 Hz, 2H)。
Cap 8步骤b
向Cap 8步骤a (7.1 g，37.3 mmol)在MeOH (100 mL)中的溶液中缓慢添加硼氢化钠(1.554 g，41.1 mmol)。在室温下搅拌所得混合物2小时。向混合物中添加1 N HCl水溶液直至呈酸性为止且随后用CH2Cl2 (3×50 mL)萃取。用盐水洗涤所合并的有机层，用MgSO4干燥且浓缩，得到呈橙色油状的Cap 8步骤b (7.1 g)，其以1:1.7的比率被相应环化副产物5-(二甲氧基甲基)二氢呋喃-2(3H)-酮污染。混合物无需进一步纯化即可使用。
Cap 8步骤c
向Cap 8步骤b (7.1 g，36.9 mmol)在DMF (50 mL)中的溶液中添加咪唑(5.03 g，73.9 mmol)和TBS-Cl (8.91 g，59.1 mmol)。在室温下搅拌所得混合物16小时。接着用CH2Cl2稀释反应物，用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥且浓缩。通过快速色谱(硅胶，0-5%随后10% EtOAc/Hex)纯化粗产物，得到呈澄清油状的Cap 8步骤c。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ4.07 (d, J=5.5 Hz, 1H), 3.72-3.67 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.40 (s, 3H), 3.39(s, 3H), 2.48-2.35 (m, 2H), 1.92 (dddd, J=13.8, 9.3, 6.9, 4.1 Hz, 1H), 1.82-1.71 (m, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.07 (s, 3H), 0.05 (s, 3H)。
Cap 8步骤d
向水浴中Cap 8步骤c (4.4 g，14.36 mmol)在Et2O (50 mL)中的溶液中添加含钛酸四异丙酯(0.855 mL，2.87 mmol)的乙醚(10 mL)且溶液变黄。随后经1小时通过注射泵逐滴添加溴化乙基镁(14.36 mL，43.1 mmol，1 M在THF中)。溶液变成深棕色且有一些沉淀。接着在水浴中搅拌混合物2小时。用乙醚稀释混合物且通过缓慢添加饱和NH4Cl水溶液来淬灭。过滤混合物以除去所形成的白色沉淀。分离两层且用Et2O (3×50 mL)萃取水层。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩。接着通过快速色谱(硅胶，0-20% EtOAc/ Hex)纯化粗产物，得到呈澄清油状的Cap 8步骤d (2.9 g)。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.26 (d, J=6.1Hz, 1H), 3.81-3.72 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 1.90-1.75 (m, 3H),1.52-1.43 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.82-0.74 (m, 1H), 0.73-0.67 (m, 1H), 0.47-0.40 (m, 2H), 0.11-0.10 (m, 6H)。
Cap 8步骤e
在室温下搅拌Cap 8步骤d (2.9 g，9.52 mmol)和p-TsOH.H2O (2.174 g，11.43mmol)在MeOH (40 mL)中的溶液16小时。向混合物中添加200 mL饱和NaHCO3溶液且用CH2Cl2 (3×50 mL)萃取混合物。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩。经由硅胶塞(用70%EtOAc/Hex洗脱)过滤粗产物，得到呈澄清油状的Cap 8步骤e (1 g)，其由非对映异构体的混合物组成且并未分离。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.16 (d, J=7.3 Hz, 1H), 3.55-3.46 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 2H), 2.50-2.22 (m, 1H), 2.13-2.00 (m, 1H), 1.71-1.59 (m, 1H), 1.22-1.14 (m, 1H), 0.99-0.77 (m, 1H), 0.70-0.59 (m, 1H), 0.57-0.46 (m, 1H), 0.45-0.30 (m, 1H)。
Cap 8步骤f
向Cap 8步骤e (1 g，6.32 mmol)在CH2Cl2 (15 mL)中的溶液中添加双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(1.26 mL，4.74 mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，在这段时间内混合物变成橙色。接着将混合物冷却至-10℃且逐滴添加三乙基硅烷(4.04 mL，25.3 mmol)，随后逐滴添加三氟化硼乙醚复合物(2.00 mL，15.80 mmol)。在添加三氟化硼乙醚复合物后，混合物立刻变成浅紫色。接着使混合物缓慢温热至0℃且在0℃下搅拌30分钟。接着用水淬灭反应物且用EtOAc (3×20 mL)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩。经由硅胶塞(用70% EtOAc/Hex洗脱)过滤粗产物且浓缩滤液，得到呈澄清油状的Cap 8步骤f (0.8 g)。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.19 (d, J=6.8 Hz, 1H), 3.77 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1H),3.55 (d, J=6.0 Hz, 1H), 2.14-2.06 (m, 2H), 1.75-1.62 (m, 1H), 1.44 (dd, J=12.4, 7.2 Hz, 1H), 0.97-0.88 (m, 2H), 0.65 (dddd, J=10.8, 6.2, 4.8, 1.5 Hz,1H), 0.59-0.51 (m, 1H), 0.48-0.40 (m, 2H)。
Cap 8步骤g
在-78℃下，向乙二酰氯(0.664 mL，7.58 mmol)在CH2Cl2 (10 mL)中的溶液中逐滴添加含DMSO (1.076 mL，15.17 mmol)的CH2Cl2 (7 mL)。搅拌混合物20分钟，且逐滴添加含Cap 8步骤f (810 mg，6.32 mmol)的CH2Cl2 (7 mL)。在-78℃下搅拌混合物20分钟。接着添加Et3N (4.58 mL，32.9 mmol)且经30分钟使混合物缓慢温热至室温。接着用水淬灭混合物且用CH2Cl2 (3×10 mL)萃取。合并有机层且用MgSO4干燥并浓缩，得到呈澄清油状的Cap 8 步骤g (0.8 g)。产物无需进一步纯化即可使用。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.56 (s,1H), 4.00 (s, 1H), 2.53-2.46 (m, 1H), 2.40-2.32 (m, 1H), 2.08 (t, J=6.9 Hz,1H), 1.82 (dt, J=13.5, 5.8 Hz, 1H), 1.09-0.99 (m, 1H), 0.89-0.82 (m, 1H),0.70 (ddd, J=10.2, 6.9, 5.8 Hz, 1H), 0.54 (ddd, J=10.2, 6.7, 5.6 Hz, 1H)。
Cap 8步骤h
在-20℃下，向2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(3.19 g，9.63 mmol)在THF(10 mL)中的溶液中添加1,1,3,3-四甲基胍(2.42 mL，19.26 mmol)。在-20℃下搅拌所得混合物1小时且混合物变成乳白色。添加Cap 8步骤g (810 mg，6.42 mmol)在THF (5 mL)中的溶液且接着在室温下搅拌所得棕色混合物2天。接着浓缩反应物且通过快速色谱(硅胶，0-5% EtOAc/CH2Cl2)纯化粗产物，得到呈澄清油状的Cap 8步骤h (顺式-反式异构体的混合物) (400 mg)。LC (条件3)：RT=1.74 min；LC/MS：[M+Na]+ C18H21NNaO5的分析计算值354.13；实测值354.04。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.42-7.31 (m, 10H),5.19-5.10 (m, 4H), 4.66 (br. s., 1H), 4.23 (s, 1H), 3.84-3.70 (m, 5H), 3.39(s, 3H), 2.68-2.53 (m, 2H), 1.81-1.74 (m, 2H), 1.30-1.21 (m, 2H), 0.96-0.80(m, 4H), 0.76 (dt, J=11.1, 5.7 Hz, 1H), 0.56-0.39 (m, 4H)。
Cap 8步骤i
用N2鼓泡500 mL氢化压力管中Cap 8步骤h (异构体的混合物) (400 mg，1.207mmol)在MeOH (10 mL)中的溶液30分钟。向混合物中添加(-)-1,2-双((2S,5S)-2,5-二甲基phospholano)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I) (13.43 mg，0.024 mmol)，且接着将混合物放置在帕尔振荡器上且在60 psi下氢化3天。接着浓缩混合物。接着通过手性HPLC(Chiralpak OJ柱，21×250 mm，10 μm)用90% 0.1%二乙胺/庚烷-10% EtOH以15 mL/min洗脱来分离粗产物，得到呈澄清油状的Cap 8步骤i.1 (55 mg；第一洗脱级分)和Cap 8步骤 i.2 (65 mg；第二洗脱级分)。未测定异构体的绝对立体化学。
Cap 8步骤i.1：LC (条件3)：RT=1.93 min；LC/MS：[M+Na]+ C18H23NNaO5的分析计算值356.15；实测值356.04；1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.30 (m, 5H), 5.38-5.30(m, 1H), 5.18-5.06 (m, 2H), 4.41 (dd, J=8.9, 5.8 Hz, 1H), 3.83 (d, J=11.0 Hz,1H), 3.77 (s, 3H), 3.35 (t, J=10.8 Hz, 1H), 2.21-2.09 (m, 1H), 2.07-1.98 (m,1H), 1.70 (d, J=11.0 Hz, 2H), 1.54 (qd, J=12.1, 4.1 Hz, 1H), 1.19 (dt, J=13.6, 3.4 Hz, 1H), 0.83 (dt, J=11.1, 5.7 Hz, 1H), 0.63 (dt, J=10.5, 5.1 Hz,1H), 0.49 (dt, J=10.1, 6.0 Hz, 1H), 0.36-0.29 (m, 1H)。
Cap 8步骤i.2：LC (条件5)：RT=1.55 min；LC/MS：[M+Na]+ C18H23NNaO5的分析计算值356.15；实测值356.06；1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.40-7.32 (m, 5H), 5.31 (d, J=8.5 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.39-4.33 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.74 (d, J=2.1Hz, 1H), 3.39 (t, J=10.5 Hz, 1H), 2.07 (d, J=4.0 Hz, 1H), 2.04-1.95 (m, 1H),1.82 (d, J=10.7 Hz, 1H), 1.34-1.21 (m, 2H), 0.82 (dt, J=11.0, 5.8 Hz, 1H),0.68-0.61 (m, 1H), 0.49 (dt, J=9.9, 5.9 Hz, 1H), 0.34 (ddd, J=10.1, 6.4, 4.9Hz, 1H)。
Cap 8步骤j.1
向氢化烧瓶中Cap 8步骤i.1 (55 mg，0.165 mmol)在10 mL MeOH中的溶液中添加二碳酸二甲基酯(0.035 mL，0.33 mmol)和Pd/C (8.78 mg，08.25 μmol)。将烧瓶放置在帕尔振荡器上且在50 psi下氢化混合物4小时。接着经由硅藻土(Celite)过滤混合物且浓缩滤液，得到呈澄清油状的Cap 8步骤j.1 (50 mg)。LC (条件1)：RT=1.09 min；LC/MS：[M+H]+C12H20NO5的分析计算值258.13；实测值258.05；1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.39 (dd, J=8.7, 6.0 Hz, 1H), 3.85-3.80 (m, 1H), 3.79-3.76 (m, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.36(t, J=10.8 Hz, 1H), 2.14 (d, J=4.9 Hz, 1H), 2.03 (t, J=13.0 Hz, 1H), 1.71(ddd, J=12.7, 3.7, 2.0 Hz, 1H), 1.55 (td, J=12.1, 4.1 Hz, 1H), 1.20 (d, J=13.4 Hz, 1H), 0.83 (dt, J=11.0, 5.8 Hz, 1H), 0.67-0.60 (m, 1H), 0.49 (dt, J=9.9, 6.0 Hz, 1H), 0.37-0.29 (m, 1H)。氨基甲酸苄基酯Cap 8步骤i.2类似于其氨基甲酸甲酯Cap 8步骤j.2精制。
Cap 8.1和Cap 8.2
向Cap 8步骤j.1 (50 mg，0.194 mmol)在THF (1 mL)和水(0.5 mL)中的混合物中添加LiOH (0.292 mL，0.583 mmol) (2 M水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。用Et2O(5 mL)萃取混合物。用1 N HCl水溶液酸化水相且用Et2O (6×)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈白色固体状的Cap 8.1 (35 mg)。LC (条件1)：RT=0.95 min；LC/MS：[M+H]+ C11H18NO5的分析计算值244.12；实测值244.02；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.24(d, J=7.5 Hz, 1H), 4.43 (br. s., 1H), 3.89 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H),3.41 (t, J=10.8 Hz, 1H), 2.22 (d, J=4.3 Hz, 1H), 2.11-2.00 (m, 1H), 1.78 (dt,J=12.6, 1.9 Hz, 1H), 1.65-1.54 (m, 1H), 1.30-1.18 (m, 2H), 0.85 (dt, J=11.1,5.9 Hz, 1H), 0.70-0.61 (m, 1H), 0.50 (dt, J=10.0, 5.9 Hz, 1H), 0.40-0.31 (m,1H)。
根据关于Cap-8.1所描述的程序，由Cap 8步骤j.2合成Cap 8.2。LC (条件1)：RT=0.96 min；LC/MS：[M+H]+ C11H18NO5的分析计算值244.12；实测值244.02；1H NMR (500 MHz,CDCl3) δ 5.44 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.35 (t, J=7.6 Hz, 1H), 3.81 (d, J=8.9 Hz,1H), 3.71 (s, 3H), 3.49-3.41 (m, 1H), 2.14 (br. s., 1H), 2.04-1.86 (m, 2H),1.69-1.55 (m, 1H), 1.34-1.25 (m, 2H), 0.83 (dt, J=11.0, 5.8 Hz, 1H), 0.67(dt, J=10.5, 5.1 Hz, 1H), 0.54-0.45 (m, 1H), 0.40-0.34 (m, 1H)。
Cap 9.1至Cap 9.4(四种立体异构体)
Cap 9步骤a
将甲磺酸(3.89 mL，59.9 mmol)添加至丁-3-烯-1-醇(2.06 g，28.5 mmol)和环丁酮(2.00 g，28.5 mmol)在DCM (20 mL)中的搅拌溶液中，且搅拌反应混合物过夜。用饱和NaHCO3(水溶液)缓慢淬灭反应物(直至呈碱性)，分离各层且用DCM (20 mL)萃取水层。干燥(MgSO4)所合并的有机物且浓缩为粗制的黄色油状物。用Biotage Horizon (90 g SiO2，0-40% EtOAc/己烷)纯化粗制油状物，得到呈橙色油状的Cap 9步骤a (5.3 g)。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 4.93-4.81 (m, 1H), 3.84 (dt, J=12.1, 4.1 Hz, 1H), 3.50 (ddd, J=12.1, 10.9, 2.6 Hz, 1H), 3.05 (s, 3H), 2.28 (ddd, J=12.7, 4.4, 1.8 Hz, 1H),2.22-2.12 (m, 1H), 2.09-1.96 (m, 4H), 1.90-1.64 (m, 4H)。
Cap 9步骤b
在35 mL压力容器中，将2-((二苯亚甲基)氨基)乙酸苄酯(972 mg，2.95 mmol)和Cap 9步骤a (500 mg，2.270 mmol)溶解在甲苯(10 mL)和THF (2 mL)中，且在氮气下搅拌该澄清无色溶液5分钟。接着添加1 M LiHMDS/THF (2.95 mL，2.95 mmol)且密封容器并接着在100℃下加热9小时。使反应物冷却且倾入1/2饱和NH4Cl (水溶液) (约40 mL)中且随后用EtOAc (约40 mL)萃取。用盐水(约40 mL)洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。用Biotage Horizon (0-30% EtOAc/hex，40 g SiO2)纯化粗制的橙色油状物，得到呈橙黄色油状的Cap 9步骤b (四种立体异构体的混合物) (350 mg)。LC-MS保留时间1.920 min; m/z 454.32 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2 min的梯度时间、1 min的保持时间和3 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。
Cap 9步骤c
用1.5 M HCl (3.04 mL，4.56 mmol) (水溶液)处理含Cap 9步骤b (345 mg，0.761 mmol)的THF (8 mL)且搅拌1.5小时。接着在高真空下浓缩反应混合物。将残余物溶解在DCM (4 mL)中，用DIPEA (0.531 mL，3.04 mmol)和氯甲酸甲酯(0.088 mL，1.14 mmol)处理且在室温下搅拌过夜。用水(约10 mL)和DCM (10 mL)稀释反应物，分离且用DCM (10mL)萃取水层。干燥(MgSO4)所合并的有机层，过滤且浓缩。通过制备型HPLC (水/ACN和TFA缓冲液)纯化残余物，得到呈橙色玻璃状的Cap 9步骤c (四种立体异构体的混合物；108mg)。LC-MS保留时间2.833 min; m/z 348.3 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4 min的梯度时间、1 min的保持时间和5 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。
通过手性制备型SFC纯化分离立体异构体的混合物：
Chiralpak AD-H制备型柱，30×250 mm，5 μm
流动相：在150巴下CO2中的15% 2:1庚烷：EtOH
温度：35℃
流速：70.0 mL/min维持14 min
在220 nm下监测的UV
注射：0.35 mL约27 mg/mL在EtOH中(经由叠层注射总计约108 mg)
得到：
Cap 9步骤c.1：第一洗脱峰：22.3 mg；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.47-7.32(m, 5H), 5.37-5.21 (m, 2H), 5.10 (d, J=12.0 Hz, 1H), 4.42 (dd, J=9.0, 4.8 Hz,1H), 3.79-3.65 (m, 4H), 3.38 (td, J=11.5, 3.3 Hz, 1H), 2.15-2.01 (m, 2H),1.98-1.65 (m, 4H), 1.56-1.14 (m, 5H)。
Cap 9步骤c.2：第二洗脱峰：20.6 mg；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.32(m, 5H), 5.26 (d, J=9.0 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.37 (dd, J=9.0, 5.0 Hz, 1H),3.77-3.67 (m, 4H), 3.41-3.29 (m, 1H), 2.16-1.99 (m, 2H), 1.96-1.68 (m, 4H),1.58-1.19 (m, 5H)。
Cap 9步骤c.3：第三洗脱峰：25.0 mg；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.44-7.31(m, 5H), 5.27 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.37 (dd, J=9.0, 5.0 Hz, 1H),3.77-3.66 (m, 4H), 3.40-3.28 (m, 1H), 2.14-2.00 (m, 2H), 1.97-1.69 (m, 4H),1.62-1.23 (m, 5H)。
Cap 9步骤c.4：第四洗脱峰：22.4 mg；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.32(m,5H), 5.37-5.21 (m, 2H), 5.10 (d, J=12.0 Hz, 1H), 4.42 (dd, J=9.0, 4.8 Hz,1H), 3.78-3.66 (m, 4H), 3.38 (td, J=11.5, 3.3 Hz, 1H), 2.06 (q, J=10.1 Hz,2H), 1.96-1.67 (m, 4H), 1.56-1.14 (m, 5H)。
根据1H NMR分析，Cap 9步骤c.1和Cap 9步骤c.4为对映异构体，Cap 9步骤c.2和Cap 9步骤c.3亦如此。各单个立体异构体独立地精制。
Cap 9.1至Cap 9.4
将Cap 9步骤c.1 (22.3 mg，0.064 mmol)溶解在MeOH (3 mL)中且添加至10% Pd/C (5.46 mg，5.14 μmol)中。用氮气(4×)且随后用氢气(4×)真空冲洗反应物，且使反应物在氢气球下搅拌过夜。用硅藻土(Celite)处理反应物且随后经由硅藻土(Celite)过滤并浓缩，得到呈无色玻璃状的Cap 9.1 (16.8 mg)。LC-MS保留时间1.008 min; m/z 258.2(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2 min的梯度时间、1 min的保持时间和3 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。其它相关立体异构体Cap 9步骤c.2至c.4均使用上述程序独立地脱苄基化(debenylated)。
Cap 9.2：LC-MS保留时间1.011 min; m/z 258.15 (MH+)。
Cap 9.3：LC-MS保留时间1.054 min; m/z 258.2 (MH+)。
Cap 9.4：LC-MS保留时间1.045 min; m/z 258.2 (MH+)。
Cap 10.1至10.4 (四种立体异构体)
Cap 10步骤a
将甲磺酸(3.89 mL，59.9 mmol)添加至丁-3-烯-1-醇(2.058 g，28.5 mmol)和环戊酮(2.40 g，28.5 mmol)在DCM (20 mL)中的搅拌溶液中，且搅拌反应混合物过夜。用饱和NaHCO3(水溶液)缓慢淬灭反应物(直至呈碱性)，分离各层且用DCM (20 mL)萃取水层。干燥(MgSO4)所合并的有机物，过滤并浓缩为粗制的橙色油状物。用Biotage Horizon (90 gSiO2，0-40% EtOAc/己烷)纯化该粗制油状物，得到呈橙色油状的Cap 10步骤a (4.68 g)。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.02-4.82 (m, 1H), 3.85 (dt, J=12.4, 4.2 Hz, 1H), 3.60(ddd, J=12.4, 10.7, 3.0 Hz, 1H), 3.04 (s, 3H), 2.11-1.97 (m, 2H), 1.95-1.54(m, 9H), 1.52-1.40 (m, 1H)。
Cap 10步骤b
在48 mL压力容器中，将2-((二苯亚甲基)氨基)乙酸苄酯(1.46，4.44 mmol)和Cap 10步骤a (800 mg，3.41 mmol)溶解在甲苯(15 mL)和THF (3 mL)中，且在氮气下搅拌该澄清无色溶液5分钟。接着添加含1 M LiHMDS (4.44 mL，4.44 mmol)的THF且密封容器，随后在100℃下加热9小时。使反应物冷却，接着倾入1/2饱和NH4Cl (水溶液) (约60 mL)中并用EtOAc (约60 mL)萃取。用盐水(约40 mL)洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。用Biotage Horizon (0-40% EtOAc/hex，90 g SiO2)纯化粗制的橙色油状物，得到呈粘性橙色油状的Cap 10步骤b (四种立体异构体的混合物) (480 mg)。LC-MS保留时间1.991 min;m/z 468.4 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2 min的梯度时间、1 min的保持时间和3 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。
Cap 10步骤c
将Cap 10步骤b (475 mg，1.02 mmol)溶解在THF (12 mL)中且随后用1.5 M HCl(4.06 mL，6.09 mmol) (水溶液)处理并搅拌1.5小时。在高真空下浓缩反应物。接着将残余物溶解在DCM (6 mL)中且用DIPEA (0.710 mL，4.06 mmol)和氯甲酸甲酯(0.118 mL，1.52mmol)处理并在室温下搅拌1.5天。用水(约10 mL)和DCM (10 mL)稀释反应物，分离且用DCM(10 mL)进一步萃取水层。干燥(MgSO4)所合并的有机物，过滤且浓缩。用Biotage Horizon(12g SiO2，0-25% EtOAc/hex)纯化残余物，得到284 mg橙色油状物。通过制备型HPLC (水/ACN和TFA缓冲液)进一步纯化此物质，得到呈澄清几乎无色玻璃状的Cap 10步骤c (四种立体异构体的混合物) (200 mg)。LC-MS保留时间3.025 min; m/z 362.3 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×50mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4 min的梯度时间、1 min的保持时间和5min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。
通过手性半制备型纯化分离立体异构体的混合物：
Chiralpak AD-H制备型柱，30×250 mm，5 μm
流动相：8% EtOH/庚烷和0.1% Et2NH
在220 nm下监测的UV
注射：0.5 mL约30 mg/mL在EtOH中(总计约200 mg)
得到：
Cap 10步骤c.1：第一洗脱峰：30.5 mg；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.31(m, 5H), 5.34-5.19 (m, 2H), 5.10 (d, J=12.0 Hz, 1H), 4.39 (dd, J=9.0, 4.8 Hz,1H), 3.78-3.66 (m, 4H), 3.51 (td, J=12.0, 2.6 Hz, 1H), 2.20-2.06 (m, 1H),1.92-1.79 (m, 1H), 1.76-1.11 (m, 11H)。
Cap 10步骤c.2：第二洗脱峰：29.6 mg；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.43-7.31(m, 5H), 5.28-5.15 (m, 3H), 4.34 (dd, J=9.0, 5.3 Hz, 1H), 3.78-3.66 (m, 4H),3.53-3.40 (m, 1H), 2.10 (td, J=10.6, 5.4 Hz, 1H), 1.94-1.82 (m, 1H), 1.76-1.62 (m, 3H), 1.59-1.24 (m, 8H)。
Cap 10步骤c.3：第三洗脱峰：27.8 mg；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.46-7.31(m, 5H), 5.30-5.14 (m, 3H), 4.34 (dd, J=8.9, 5.1 Hz, 1H), 3.79-3.63 (m, 4H),3.53-3.40 (m, 1H), 2.10 (td, J=10.4, 5.5 Hz, 1H), 1.95-1.82 (m, 1H), 1.76-1.63 (m, 3H), 1.60-1.22 (m, 8H)。
Cap 10步骤c.4：第四洗脱峰：21.7 mg；1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.32(m, 5H), 5.36-5.18 (m, 2H), 5.10 (d, J=12.0 Hz, 1H), 4.39 (dd, J=9.0, 4.8 Hz,1H), 3.79-3.67 (m, 4H), 3.51 (td, J=12.0, 2.6 Hz, 1H), 2.19-2.06 (m, 1H),1.92-1.79 (m, 1H), 1.77-1.10 (m, 11H)。
根据1H NMR，Cap 10步骤c.1和Cap 10步骤c.4为对映异构体对，Cap 10步骤c.2和Cap 10步骤c.3亦如此。各单个立体异构体独立地进入后续操作。
Cap 10.1-10.4
将Cap 10步骤c.1 (24.4 mg，0.068 mmol)溶解在MeOH (3 mL)中且添加至10%Pd/C (5.8 mg，5.40 μmol)中。用氮气(4×)且随后用氢气(4×)真空冲洗反应物，且使反应物在氢气球下搅拌过夜。用硅藻土(Celite)处理反应物且随后经由硅藻土(Celite)过滤并浓缩，得到呈无色玻璃状的Cap 10.1 (16.3 mg)。LC-MS保留时间1.139 min; m/z 272.2(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2 min的梯度时间、1 min的保持时间和3 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。1HNMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 4.11-4.03 (m, 1H), 3.77-3.70 (m, 1H), 3.66 (s, 3H),3.65-3.56 (m, 1H), 3.37-3.34 (m, 1H), 2.22-2.08 (m, 1H), 2.02-1.93 (m, 1H),1.77-1.28 (m, 11H)。
其它三种立体异构体Cap 10步骤c.2至c.4均使用上述程序独立地脱苄基化：
Cap 10.2 (无色玻璃状)：LC-MS保留时间1.018 min; m/z 272.2 (MH+)。1H NMR(400 MHz, MeOH -d4) δ 4.10-4.03 (m, 1H), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.66 (s, 3H),3.59 (td, J=12.1, 2.4 Hz, 1H), 3.38-3.34 (m, 1H), 2.22-2.09 (m, 1H), 2.06-1.96 (m, 1H), 1.79-1.27 (m, 11H)。
Cap 10.3 (无色玻璃状)：1H NMR (400 MHz, MeOH -d4) δ 4.10-4.03 (m, 1H),3.78-3.70 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.59 (td, J=12.1, 2.4 Hz, 1H), 3.38-3.35 (m,1H), 2.23-2.09 (m, 1H), 2.05-1.94 (m, 1H), 1.79-1.26 (m, 11H)。
Cap 10.4 (无色玻璃状)：1H NMR (400 MHz, MeOH -d4) δ 4.06 (d, J=6.0 Hz,1H), 3.77-3.70 (m, 1H), 3.69-3.57 (m, 4H), 3.36 (s, 1H), 2.22-2.06 (m, 1H),2.02-1.92 (m, 1H), 1.79-1.26 (m, 11H)。
Cap-11 (外消旋混合物)
Cap-11步骤a
在0℃下，在氮气下，向3-(苄氧基)环丁酮(5 g，28.4 mmol)在CH2Cl2 (200 ml)中的溶液中添加2-(二甲氧基磷酰基)-2-(甲氧羰基氨基)乙酸甲酯(14.48 g，56.7 mmol)，接着添加1,1,3,3-四甲基胍(7.33 ml，62.4 mmol)。自冷却浴中移出反应物且使其在约25℃下在氮气下搅拌24.5小时。用饱和NH4Cl (水溶液，100 mL)处理反应物。分离各层且用CH2Cl2 (2×100 mL)萃取水层。用盐水(50 mL)洗涤所合并的有机层，经MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。用氯仿(5 mL)稀释粘性油状物且装载在汤姆森硅胶柱(Thomson's silica gelcartridge)上，用25%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到呈淡黄色粘性油状的Cap-11步骤a (6.84g)。LC/MS：[M+Na]+ C16H19NNaO5的分析计算值328.12；实测值328.00。1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ 8.49 (br. s., 1H), 7.41-7.26 (m, 5H), 4.43 (s, 2H), 4.20-4.10 (m,1H), 3.65 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.35-3.24 (m, 1H), 3.01 (ddt, J=17.4, 6.8,3.5 Hz, 1H), 2.96-2.84 (m, 1H), 2.72-2.62 (m, 1H)。
Cap-11步骤b
在氮气下，向Cap-11步骤a (6.84 g，22.40 mmol)在MeOH (100 mL)中的溶液中添加披钯碳10% (2.384 g，2.240 mmol)在MeOH (20 mL)中的悬浮液。接着，在气球下，使混合物暴露于氢气26小时。经硅藻土(Celite)过滤反应物且真空浓缩，得到呈淡黄色粘性油状的Cap-11步骤b (4.84 g)。LC/MS：[M+Na]+ C9H15NNaO5的分析计算值240.08；实测值240.01。1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 7.40-7.25 (m, 1H), 4.91 (s, 2H), 4.19-3.99 (m,2H), 3.72 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 2.42-2.25 (m, 2H), 2.24-2.02 (m, 1H), 1.91-1.61 (m, 1H)。
Cap-11步骤c
在-78℃下，在氮气下，向DMSO (4.0 ml，56.4 mmol)在CH2Cl2 (70 ml)中的溶液中逐滴添加2 M乙二酰氯在CH2Cl2中的溶液(15.3 ml，30.6 mmol)。搅拌反应物1小时。在-78℃下，在氮气下，将Cap-11步骤b (4.814 g，22.16 mmol)在CH2Cl2 (35.0 ml)中的溶液添加至反应物中，维持搅拌。搅拌反应混合物1.5小时。在-78℃下，在氮气下，将三乙胺(15.5 ml，111 mmol)逐滴添加至反应物中，同时维持搅拌反应物。搅拌反应物16小时。用冷的20%K2HPO4 (水溶液) (50 mL)和水(50 mL)淬灭反应物。在约25℃下搅拌混合物15分钟。用乙酸乙酯(50 mL)稀释反应物且分离各层。用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取水层。用盐水洗涤所合并的有机层，经MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。将残余物装载在汤姆森硅胶柱上，用40%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到呈淡黄色粘性油状的Cap-11步骤c (3.71 g)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.86 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.27 (t, J=8.4 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.57 (s,3H), 3.16, 2.86 (m, 4H), 2.82-2.61 (m, 1H)。
Cap-11步骤d
在氮气下，在40℃下加热甲基三苯基溴化(3 g，8.40 mmol)和叔丁醇钾(1 g，8.91 mmol)在1,4-二噁烷(35 mL)中的混合物3小时。将反应物自热源移开且在冷却浴中冷却至10℃。逐滴添加Cap-11步骤c (1.48 g，6.88 mmol)在1,4-二噁烷(7 mL)中的溶液，且在10℃下在氮气下继续搅拌反应物45小时。真空除去所有溶剂。将残余物溶解在乙酸乙酯(50 mL)和饱和NH4Cl (水溶液，50 mL)中。分离各层且进一步用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取水层。用饱和NaCl(水溶液，50 mL)洗涤所合并的有机层，经MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。将残余物溶解在CHCl3 (1 mL)中且装载在汤姆森硅胶柱上，用超过约4 L的5%至15%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到呈无色粘性油状的Cap-11步骤d (533 mg)，其在静置后固化为白色固体。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.21 (d, J=7.8 Hz, 1H), 4.83-4.74 (m, 2H), 4.41 (t, J=7.7 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 2.82-2.52 (m, 5H)。
Cap-11步骤e
在0℃下，在氮气下，经10分钟向CH2Cl2 (2.5 ml)中逐滴添加含1 M二乙基锌的己烷(6.69 ml，6.69 mmol)，接着添加三氟乙酸(在1 mL CH2Cl2中) (0.516 ml，6.69 mmol)。在1小时后，经10分钟逐滴添加二碘甲烷(在1 mL CH2Cl2中) (0.540 ml，6.69 mmol)，随后逐滴添加Cap-11步骤d (在1 mL CH2Cl2中) (0.2378 g，1.115 mmol)。在添加后，自冷却浴中移出反应物且使其在约25℃下在氮气下搅拌12.5小时。用0.1 N HCl (水溶液，50 mL)淬灭反应物。用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取产物。经MgSO4干燥所合并的有机层，过滤且真空浓缩。将残余物装载在汤姆森硅胶柱上，用15%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到呈白色固体状的Cap- 11步骤e (206.1 mg，81%产率)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.65 (d, J=7.8 Hz, 1H),4.08 (dd, J=9.5, 8.0 Hz, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 2.76-2.57 (m, 1H),2.11-2.00 (m, 3H), 2.00-1.90 (m, 1H), 0.48-0.28 (m, 4H)。
Cap-11 (外消旋混合物)
在约25℃下，向Cap-11步骤e (0.2804 g，1.234 mmol)在MeOH (4 mL)中的溶液中添加氢氧化锂(0.035 g，1.481 mmol)在水(2 mL)中的溶液。搅拌反应物4小时，真空除去所有挥发性组分。用水(25 mL)稀释残余物且用6 N盐酸酸化至pH约1-2。用乙酸乙酯(3×25mL)萃取产物，经MgSO4干燥，过滤且真空浓缩，得到呈白色固体状的Cap-11 (258.1 mg)。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 7.48 (d, J=8.3 Hz, 1H), 3.99 (dd, J=9.3, 8.3 Hz, 1H), 3.55 (s, 3H), 2.74-2.57 (m, 1H), 2.17-1.89 (m, 4H), 0.49-0.25 (m, 4H)。
Cap-12 (外消旋混合物)
向Cap-11步骤d (0.200 g，0.938 mmol)在MeOH (3 mL)中的溶液中逐滴添加氢氧化锂(0.027 g，1.126 mmol)在水(1.5 mL)中的溶液。在约25℃下搅拌反应物6小时。真空除去所有挥发性组分。用水(10 mL)稀释残余物且用6 N HCl酸化至pH约1-2。用乙酸乙酯(3×25 mL)萃取产物。经MgSO4干燥所合并的有机层，过滤且真空浓缩，得到呈白色固体状的Cap-12 (178 mg)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.59 (s, 1H), 7.54 (d, J=8.0 Hz,1H), 4.75 (br. s., 2H), 3.95 (t, J=8.2 Hz, 1H), 3.55 (s, 3H), 2.76-2.51 (m,4H), 2.51-2.42 (m, 1H)。
Cap 13.1和13.2
Cap 13步骤a
在氮气下，将(二乙基氧)三氟硼酸酯(3.64 mL，29.0 mmol) (经10分钟)逐滴添加至已冷却至-78℃的环丙烷甲醛(4.25 mL，56.9 mmol)和(E)-((4-甲氧基丁-1,3-二烯-2-基)氧基)三甲基硅烷(4.90 g，28.4 mmol)在Et2O (100 mL)中的溶液中。在-78℃下搅拌反应物2.5小时且随后添加饱和NaHCO3 (水溶液) (50 mL)，且使反应物缓慢升至室温并搅拌过夜。分离各层，用Et2O (100 mL)萃取水层且用盐水(约50 mL)洗涤所合并的有机层，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩成粗制的橙色油状物。用Biotage Horizon (80 g SiO2，0-30%EtOAc/己烷)纯化该粗制油状物，得到呈黄色油状的Cap 13步骤a (2.826 g)。该物质无需进一步纯化即可使用。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (d, J=6.0 Hz, 1H), 5.40 (dd,J=6.0, 1.0 Hz, 1H), 3.70 (ddd, J=13.1, 8.8, 3.8 Hz, 1H), 2.74-2.63 (m, 1H),2.60-2.52 (m, 1H), 1.24-1.14 (m, 1H), 0.75-0.61 (m, 2H), 0.54-0.46 (m, 1H),0.35-0.28 (m, 1H)。
Cap 13步骤b
将Cap 13步骤a (800 mg，5.79 mmol)溶解在甲醇(50 mL)中且随后用10% Pd/C(185 mg，0.174 mmol)处理。搅拌反应混合物且用氮气(4×)、随后用氢气(4×)真空冲洗。接着使反应物在氢气球下搅拌2小时。将硅藻土(Celite)添加至反应混合物中且搅拌，且随后经由硅藻土(Celite)过滤反应物并浓缩成粗制油状物。用Biotage Horizon (25 gSiO2，0-50% EtOAc/己烷)纯化该粗制油状物，得到呈无色无粘性油状的Cap 13步骤b (650mg，被25% w/w EtOAc污染)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.92 (ddd, J=11.5, 5.1, 1.8Hz, 1H), 3.56-3.45 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.16 (s, 3H), 2.70 (ddd, J=11.2,8.7, 2.1 Hz, 1H), 2.10 (dt, J=13.4, 2.6 Hz, 1H), 1.93-1.84 (m, 1H), 1.68-1.57(m, 1H), 1.46 (dd, J=13.3, 11.5 Hz, 1H), 0.96-0.85 (m, 1H), 0.63-0.45 (m,2H), 0.37 (dq, J=9.4, 4.8 Hz, 1H), 0.19 (dq, J=9.5, 4.8 Hz, 1H)。
Cap 13步骤c
将Cap 13步骤b (650 mg，2.65 mmol，被25% w/w EtOAc污染)溶解在THF (7 mL)中，且随后用1.5 M HCl (水溶液) (7.07 mL，10.61 mmol)处理并搅拌30分钟。用盐水(约30 mL)稀释反应物，用DCM (3×25 mL)萃取且干燥(MgSO4)所合并的有机物，过滤且浓缩，得到呈澄清无色油状的Cap 13步骤c (543 mg，被12% w/w THF和其它较少杂质污染)。该物质未经进一步纯化即可使用。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.31 (ddd, J=11.5, 7.4, 1.6Hz, 1H), 3.67-3.57 (m, 1H), 2.98-2.88 (m, 1H), 2.68-2.42 (m, 3H), 2.37-2.28(m, 1H), 1.03 (qt, J=8.1, 4.8 Hz, 1H), 0.69-0.52 (m, 2H), 0.49-0.40 (m, 1H),0.30-0.21 (m, 1H)。
Cap 13步骤d.1和d.2
用Et2O (15 mL)稀释2-异氰基乙酸乙酯(390 mg，3.45 mmol)且随后用氧化亚铜(76 mg，0.530 mmol)处理。搅拌浆液10分钟且随后添加含Cap 13步骤c (371 mg，2.65mmol)的Et2O (10 mL)，且在室温下搅拌反应物3小时。接着冷却反应物至0℃，用含1 M叔丁醇钾(3.45 mL，3.45 mmol)的THF逐滴处理且在0℃下搅拌1小时。添加含乙酸(0.197 mL，3.45 mmol)的DCM (2 mL)且使反应物温热至室温并搅拌过夜。用水(约20 mL)稀释粗制的反应混合物且用EtOAc (3×25 mL)萃取。干燥(MgSO4)所合并的有机物，过滤且浓缩成暗红色油状物。用Biotage Horizon (25 g SiO2，50-75% EtOAc，己烷)纯化该油状物，得到各呈灰白色固体状的外消旋Cap 13步骤d.1 ((Z)-异构体；250 mg)和Cap 13步骤d.2 ((E)-异构体；243 mg)。E/Z分配基于nOe研究。Cap 13步骤d.1：LC-MS保留时间1.007 min; m/z254.2 (MH+)。1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.10 (s, 1H), 4.20 (q, J=7.0 Hz, 2H),4.08 (ddd, J=11.2, 5.6, 1.8 Hz, 1H), 3.45-3.36 (m, 1H), 3.35-3.29 (m, 1H),2.75-2.67 (m, 2H), 2.30 (ddd, J=13.9, 12.4, 5.5 Hz, 1H), 2.07 (dd, J=14.1,11.0 Hz, 1H), 1.34-1.22 (m, 3H), 0.95 (qt, J=8.1, 4.8 Hz, 1H), 0.57-0.47 (m,2H), 0.40-0.23 (m, 2H)。Cap 13步骤d.2：LC-MS保留时间1.067 min; m/z 254.2 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C182.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2 min的梯度时间、1 min的保持时间和3 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。1H NMR (400MHz, METHANOL-d4) δ 8.08 (s, 1H), 4.21 (q, J=7.0 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J=11.1,5.6, 1.9 Hz, 1H), 3.51 (dt, J=14.0, 2.0 Hz, 1H), 3.42 (td, J=11.5, 2.5 Hz,1H), 2.70 (ddd, J=10.6, 8.2, 2.3 Hz, 1H), 2.49 (dq, J=14.1, 2.2 Hz, 1H),2.26-2.12 (m, 2H), 1.34-1.24 (m, 3H), 0.96 (qt, J=8.1, 4.9 Hz, 1H), 0.58-0.49(m, 2H), 0.37 (dddd, J=7.8, 6.3, 3.0, 1.3 Hz, 1H), 0.26 (dddd, J=5.2, 4.0,2.9, 1.4 Hz, 1H)。
Cap 13步骤e.1和e.2
将外消旋Cap 13步骤d.1 (625 mg)溶解在16 mL EtOH中且通过制备型手性HPLC(ChiralPak AS柱，10% EtOH/庚烷0.1%二乙胺)以多次注射分离，得到各呈灰白色固体状的Cap 13步骤e.1 (450 mg，第一洗脱峰)和Cap 13步骤e.2 (360 mg，第二洗脱峰)。彻底分离对映异构体，且虽然各样品通过LC/MS和手性分析型HPLC提纯，但根据1H NMR仍存在未确认的污染物。各物质无需进一步纯化即可使用。1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.08 (s,1H), 4.21 (q, J=7.0 Hz, 2H), 4.08 (ddd, J=11.1, 5.6, 1.9 Hz, 1H), 3.51 (dt, J=13.9, 2.1 Hz, 1H), 3.46-3.38 (m, 1H), 2.70 (ddd, J=10.7, 8.2, 2.3 Hz, 1H),2.49 (dq, J=14.1, 2.2 Hz, 1H), 2.26-2.12 (m, 2H), 1.34-1.22 (m, 3H), 0.96(qt, J=8.2, 5.0 Hz, 1H), 0.58-0.48 (m, 2H), 0.37 (dddd, J=7.7, 6.3, 2.9, 1.4Hz, 1H), 0.28-0.22 (m, 1H)。
Cap 13步骤f.1和f.2
在帕尔振荡器500 mL反应容器中，将Cap 13步骤e.1 (310 mg，被未知杂质污染)溶解在MeOH (20 mL)中且随后添加(-)-1,2-双((2S,5S)-2,5-二甲基phospholano)乙烷(环辛二烯)四氟硼酸铑(I) (17.0 mg，0.031 mmol)。使氮气鼓泡通过反应混合物10分钟，且随后用氮气(4×)且随后用氢气(4×)真空冲洗反应物。接着在60 psi氢气下振荡反应物2.5天。将反应物浓缩成棕黄色油状物，且随后用Biotage Horizon (12 g SiO2，60-80%EtOAc/hex)纯化，得到呈澄清无色油状的Cap 13步骤f.1 (201 mg)。LC-MS保留时间1.681min; m/z 256.25 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4 min的梯度时间、1 min的保持时间和5 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。根据1H NMR，该物质以酰胺旋转异构体的12:1混合物形式存在。关于主要旋转异构体：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.26 (s, 1H), 6.09 (d, J=7.8 Hz, 1H), 4.88(t, J=8.7 Hz, 1H), 4.25 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.89-3.72 (m, 2H), 2.89 (ddd, J=9.5, 6.2, 3.9 Hz, 1H), 2.32-2.20 (m, 1H), 1.80-1.70 (m, 1H), 1.69-1.58 (m,2H), 1.50 (dt, J=6.8, 3.4 Hz, 1H), 1.33 (t, J=7.2 Hz, 3H), 1.13-1.03 (m, 1H),0.63-0.49 (m, 2H), 0.44-0.35 (m, 1H), 0.18-0.10 (m, 1H)。
根据上述程序由Cap 13步骤e.2制备Cap 13步骤f.2 (无色油状物)。LC-MS保留时间1.753 min; m/z 256.25 (MH+)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.28 (s, 1H), 6.16 (d,J=8.8 Hz, 1H), 4.72 (dd, J=8.9, 4.6 Hz, 1H), 4.25 (q, J=7.1 Hz, 2H), 4.09-4.02 (m, 1H), 3.41-3.29 (m, 1H), 2.54 (ddd, J=10.9, 8.5, 2.0 Hz, 1H), 2.15-2.04 (m, 1H), 1.80 (dd, J=13.2, 1.9 Hz, 1H), 1.49-1.42 (m, 2H), 1.32 (t, J=7.2 Hz, 3H), 0.94-0.82 (m, 1H), 0.60-0.45 (m, 2H), 0.39-0.31 (m, 1H), 0.21-0.13 (m, 1H)。根据关于所选THP质子的1H NMR偶合量值进行反式立体异构体(Cap 13步骤 f.1)和顺式立体异构体(Cap 13步骤f.2)的推测分配。
Cap 13步骤g
将Cap 13步骤f.1 (213 mg，0.834 mmol)溶解在MeOH (5 mL)中且随后添加1.5 MHCl (1.11 mL，1.67 mmol)，并用隔膜密封反应物，接着用针刺穿隔膜并保留与空气连通。接着在50℃下加热反应物过夜。将反应物浓缩，溶解在DCM (5 mL)中且随后用DIPEA(0.583 mL，3.34 mmol)和氯甲酸甲酯(0.13 mL，1.7 mmol)处理并在室温下搅拌3小时。用水(约5 mL)淬灭反应物，搅拌，分离且用DCM (3x5 mL)进一步萃取水层。干燥(MgSO4)所合并的有机物，过滤且浓缩。用Biotage Horizon (12 g SiO2，25-25% EtOAc/己烷)纯化粗制的浅棕色油状物，得到Cap 13步骤g.1 (131 mg)。LC-MS保留时间2.020 min; m/z 286.2(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4 min的梯度时间、1 min的保持时间和5 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.17 (d, J=9.3 Hz, 1H), 4.49 (t, J=8.7 Hz, 1H), 4.30-4.18 (m, 2H), 3.89-3.80 (m, 1H), 3.79-3.67 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.94-2.83(m, 1H), 2.26-2.16 (m, 1H), 1.78-1.47 (m, 4H), 1.33 (t, J=7.2 Hz, 3H), 1.08(dt, J=8.6, 4.4 Hz, 1H), 0.63-0.47 (m, 2H), 0.44-0.36 (m, 1H), 0.18-0.09 (m,1H)。
根据上述程序由Cap 13步骤f.2制备Cap 13步骤g.2。LC-MS保留时间2.053 min;m/z 286.25 (MH+)。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.27 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.34 (dd,J=9.0, 4.8 Hz, 1H), 4.23 (q, J=7.3 Hz, 2H), 4.05 (dt, J=11.2, 3.2 Hz, 1H),3.71 (s, 3H), 3.41-3.30 (m, 1H), 2.55 (ddd, J=10.7, 8.5, 1.9 Hz, 1H), 2.09-1.96 (m, 1H), 1.77 (d, J=12.8 Hz, 1H), 1.48-1.38 (m, 2H), 1.35-1.22 (m, 1H),1.31 (t, J=7.3 Hz, 3H), 0.89 (qt, J=8.2, 4.9 Hz, 1H), 0.61-0.44 (m, 2H),0.39-0.30 (m, 1H), 0.17 (dq, J=9.4, 4.7 Hz, 1H)。
Cap 13.1和13.2
将Cap 13步骤g.1 (131 mg，0.459 mmol)溶解在THF (5.5 mL)中且随后用0.5 MLiOH水溶液(3.67 mL，1.836 mmol)处理并搅拌5小时。用1 N HCl (1.9 mL)淬灭反应物且随后在氮气流下浓缩。用水(约4 mL)稀释该物质且随后用DCM:MeOH (约5:1，3X3 mL)萃取。浓缩所合并的有机物，得到呈无色玻璃状的Cap 13.1 (117 mg)。该物质无需进一步纯化即可使用。LC-MS保留时间2.441 min; m/z 258.2 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4 min的梯度时间、1 min的保持时间和5 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/ 90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。
使用上述程序由Cap 13步骤g.2制备Cap 13.2。LC-MS保留时间2.553 min; m/z258.2 (MH+)。
Cap 14
Cap 14步骤a
用N2鼓泡500 mL氢化压力管中2-(苄氧羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(300 mg，0.906 mmol)在MeOH (10 mL)中的溶液30分钟。向混合物中添加二碳酸二甲酯(0.146 mL，1.358 mmol)和Pd/C (48.2 mg，0.045 mmol) (10%)，且随后放置在帕尔振荡器上并在60 psi下氢化5小时。经由硅藻土(Celite)垫过滤混合物且浓缩滤液，得到呈淡黄色油状的Cap 14步骤a (230 mg)，其无需进一步纯化即可使用。LC (条件1)：RT=1.60 min；LC/MS：[M+H]+ C7H15NO7P的分析计算值256.06；实测值256.20。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ5.54 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.00-4.86 (m, 1H), 3.87-3.82 (m, 9H), 3.73 (s, 3H)。
Cap 14步骤b
在-20℃下，向Cap 14步骤a (230 mg，0.901 mmol)在THF (1 mL)中的溶液中添加1,1,3,3-四甲基胍(0.125 mL，0.992 mmol)。在-20℃下搅拌所得淡黄色混合物1小时。接着添加含二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(99 mg，0.992 mmol)的THF (0.5 mL)且在室温下搅拌所得混合物16小时。用EtOAc (5 mL)稀释反应混合物且用0.1 N HCl溶液洗涤。用EtOAc (2×10mL)萃取水层，且用MgSO4干燥所合并的有机层并浓缩。通过快速色谱(硅胶，50% EtOAc/Hex)纯化粗产物，得到呈白色固体状的Cap 14步骤b。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 5.93(br. s., 1H), 3.81-3.75 (m, 7H), 3.73 (s, 3H), 2.95 (t, J=5.5 Hz, 2H), 2.44(t, J=5.2 Hz, 2H)。
Cap 14
向Cap 14步骤b (150 mg，0.654 mmol)在THF (2 mL)和水(1 mL)中的混合物中添加LiOH (0.982 mL，1.963 mmol) (2 M水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。用Et2O (5mL)萃取混合物。用1 N HCl水溶液酸化水相且用EtOAc (6×)萃取。用MgSO4干燥所合并的有机层且浓缩，得到呈白色固体状的Cap 14 (100 mg)。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.34(br. s., 1H), 3.73-3.67 (m, 4H), 3.65 (s, 3H), 3.29 (dt, J=3.3, 1.7 Hz, 2H),2.38 (t, J=5.3 Hz, 2H)。
实施例QC-1.1、QC-1.2和QC-1.3
向4,4'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)联苯,4 HCl (50 mg，0.084 mmol)和Cap-2 (外消旋混合物) (41.9 mg，0.168 mmol)在2 mL DMF中的溶液中添加DiPEA (0.088 ml，0.505 mmol)。向所得混合物中添加HATU (64.0 mg，0.168 mmol)且在室温下搅拌混合物2小时。接着除去溶剂，得到3种非对映异构体的粗制混合物，当在LC (条件3)下分析时，该3种非对映异构体的比率为约1:2:1。接着通过反相HPLC(柱：Water Sunfire 30×150 mm；乙腈/水/NH4OAc)纯化混合物，得到呈白色固体状的三种非对映异构体的游离碱(实施例QC-1.1、QC-1.2和QC-1.3)。实施例QC-1.1 (9.1 mg)：LC(条件1)：RT=1.15 min; >95%；LC/MS：[M+H]+ C48H51F4N8O6的分析计算值911.39；实测值456.5 (M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H51F4N8O6的分析计算值911.3862；实测值911.3869；1H NMR(500 MHz, CD3OD) δ ppm 7.61-7.88 (8H, m), 7.36 (2H, br. s.), 5.09-5.21 (2H,m), 4.66-4.77 (2H, m), 3.69 (6H, s), 2.36-2.62 (6H, m), 1.86-2.14 (16H, m),1.03-1.17 (2H, m), 0.70-0.84 (2H, m)。实施例QC-1.2 (24.5 mg,)：LC (条件1): RT=1.19 min; >97%纯度。LC/MS：[M+H]+ C48H51F4N8O6的分析计算值911.39；实测值456.5 (M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H51F4N8O6的分析计算值911.3862；实测值911.3865；1H NMR (500 MHz,CD3OD) δ ppm 7.59-7.89 (8H, m), 7.36 (2H, d, J=4.88 Hz), 5.08-5.24 (2H, m),4.60-4.76 (2H, m), 3.69 (6H, s), 2.36-2.71 (6H, m), 1.82-2.20 (16H, m), 1.16-1.25 (1H, m), 1.03-1.14 (1H, m), 0.66-0.83 (2H, m)。实施例QC-1.3 (14.7 mg)：LC(条件1)：RT=1.22 min; >99%纯度。LC/MS：[M+H]+ C48H51F4N8O6的分析计算值911.39；实测值456.5 (M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H51F4N8O6的分析计算值911.3862；实测值911.3864。1H NMR(500 MHz, CD3OD) δ ppm 7.61-7.88 (8H, m), 7.36 (2H, br. s.), 5.09-5.21 (2H,m), 4.66-4.77 (2H, m), 3.69 (6H, s), 2.36-2.62 (6H, m), 1.86-2.14 (16H, m),1.03-1.17 (2H, m), 0.70-0.84 (2H, m)。
实施例QC-2.1至QC-4.3
根据关于实施例QC-1所描述的程序，通过使用合适cap制备实施例QC-2.1至QC- 3.3。亦类似地制备实施例QC-4.1至QC-4.3，不同之处在于采用MeOH/水/TFA溶剂系统(柱：WATERS Atlantis OBD 30×100 mm 5u)进行反相HPLC纯化。尽管当使用Cap-1时仅一种化合物为所期望的，但获得3种不同的非对映异构体，表明外消旋化可能在Cap-1合成期间存在。
实施例QC-5.1、QC-5.2和QC-5.3
(关于未指定立体发生中心(stereogenic center)的三种非对映异构体)
实施例QC-5步骤a
外消旋混合物
2-((1R,3s,5S)-双环[3.1.0]己-3-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酸(实施例QC-5 步骤a)由市售的(顺式)-双环[3.1.0]己-3-醇制备，后者首先使用标准Mitsubobu方案被转化为其(反式)-双环[3.1.0]己-3-醇异构体，且随后根据自Cap-2步骤d至Cap-2步骤f所述的反应顺序精制成2-氨基-2-((1R,3s,5S)-双环[3.1.0]己-3-基)乙酸乙酯。接着，将胺以其BOC衍生物形式保护，随后在标准方案下水解乙酯，得到酸实施例QC-5步骤a。
实施例QC-5步骤b
非对映异构体混合物
向4,4'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)联苯,4 HCl (50 mg，0.084 mmol)和酸实施例QC-5步骤a (43.0 mg，0.168 mmol)在2 mL DMF中的溶液中添加DiPEA (0.088 ml，0.505 mmol)和HATU (64.0 mg，0.168 mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。接着真空除去溶剂且通过反相HPLC (柱：WATERS Atlantis OBD 30×100mm 5u，MeOH/水/THF)纯化粗产物，得到呈白色固体状的实施例QC-5步骤b的TFA盐(97 mg)。LC (条件1)：RT=1.47 min；LC/MS：[M+H]+ C54H67N8O6的分析计算值923.52；实测值462.8(M/2+1)；1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 7.82-7.91 (10H, m), 5.08-5.18 (2H, m),4.57 (1H, d, J=7.63 Hz), 4.48 (1H, d, J=8.24 Hz), 4.06-4.12 (1H, m), 3.79-3.86 (1H, m), 3.02 (3H, s), 2.88 (3H, s), 2.66-2.75 (2H, m), 2.43-2.54 (2H,m), 2.01-2.16 (4H, m), 1.88-1.97 (2H, m), 1.68-1.82 (4H, m), 1.57-1.68 (2H,m), 1.47 (9H, s), 1.41 (9H, s), 1.25-1.36 (6H, m), 1.16-1.24 (1H, m), 1.04-1.11 (1H, m), 0.81-0.93 (2H, m), 0.29-0.39 (2H, m), 0.19-0.27 (2H, m)。
实施例QC-5步骤c
非对映异构体混合物
向实施例QC-5步骤b (97 mg，0.084 mmol)在1 mL CH2Cl2中的混合物中添加HCl(2 mL，4.00 mmol) (2 N在乙醚中)。在室温下搅拌所得混合物2小时。接着除去溶剂，得到呈黄色固体状的实施例QC-5步骤c的HCl盐(73 mg)。LC (条件1)：RT=0.84 min；LC/MS：[M+H]+ C44H51N8O2的分析计算值723.41；实测值723.6。
实施例QC-5.1、QC-5.2和QC-5.3
向实施例QC-5步骤b的HCl盐(73 mg，0.084 mmol)在2 mL CH2Cl2中的混合物中添加DiPEA (0.117 mL，0.672 mmol)和氯甲酸甲酯(0.026 mL，0.336 mmol)。在室温下搅拌所得混合物1小时。添加氨(2 mL，4.00 mmol) (2 N在甲醇中)，且搅拌所得混合物2小时。接着真空除去溶剂且通过反相HPLC (柱：Water Sunfire 30×150 mm，乙腈/水/NH4OAc)纯化粗物质，得到呈白色至淡黄色固体状的三种非对映异构体的游离碱(实施例QC-5.1、QC-5.2和 QC-5.3)。实施例QC-5.1 (8.5 mg)：LC (条件3)：RT=2.05 min，>95%纯度；LC/MS：[M+H]+C48H55N8O6的分析计算值839.42；实测值839.7。HRMS：[M+H]+ C48H55N8O6的分析计算值839.4239；实测值839.4243。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 7.64-7.87 (8H, m), 7.37(2H, br. s.), 5.10-5.22 (2H, m), 4.57-4.72 (2H, m), 3.68 (6H, s), 2.38-2.58(4H, m), 1.90-2.31 (6H, m), 1.55-1.87 (6H, m), 1.20-1.38 (6H, m), 1.04-1.19(2H, m), 0.72-0.85 (2H, m), 0.28-0.37 (2H, m), 0.22-0.28 (2H, m)。实施例QC-5.2 (18 mg)：LC (条件3)：RT=2.14 min；>99%纯度；LC/MS：[M+H]+ C48H55N8O6的分析计算值839.42；实测值839.7；HRMS：[M+H]+ C48H55N8O6的分析计算值839.4239；实测值839.4243；1HNMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 7.63-7.86 (8H, m), 7.37 (2H, d), 5.11-5.22 (2H,m), 4.51-4.70 (2H, m), 3.68 (6H, d), 2.38-2.59 (4H, m), 1.90-2.15 (6H, m),1.57-1.84 (6H, m), 1.18-1.38 (6H, m), 1.03-1.16 (2H, m), 0.72-0.83 (2H, m),0.28-0.39 (2H, m), 0.22-0.28 (2H, m)。实施例QC-5.3 (9.1 mg)：LC (条件3)：RT=2.23min；>95%纯度。LC/MS：[M+H]+ C48H55N8O6的分析计算值839.42；实测值839.7；HRMS：[M+H]+ C48H55N8O6的分析计算值839.4239；实测值839.4242。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm7.63-7.93 (8H, m), 7.36 (2H, s), 5.17-5.29 (2H, m), 4.55 (2H, d, J=8.5 Hz),3.69 (6H, s), 2.39-2.64 (4H, m), 1.92-2.20 (6H, m), 1.58-1.86 (6H, m), 1.27-1.45 (6H, m), 1.17-1.27 (2H, m), 0.70-0.84 (2H, m), 0.31-0.45 (2H, m), 0.20-0.30 (2H, m)。
实施例QC-6至QC-7
向实施例QC-2.1 (50 mg，0.044 mmol)在1 mL DMF中的混合物中添加NCS (7.03mg，0.053 mmol)。在50℃下搅拌所得混合物过夜。接着除去溶剂且通过反相HPLC (柱：WATERS Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5u，MeOH/水/TFA)纯化粗产物，得到分别呈白色固体和淡黄色固体状的实施例QC-6的TFA盐和实施例CQ-7的TFA盐。实施例QC-6 (20 mg)：LC(条件2)：RT=1.72 min，>99%纯度；LC/MS：[M+H]+ C48H50ClF4N8O6的分析计算值945.35；实测值473.16 (M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H50ClF4N8O6的分析计算值945.3472；实测值945.3440；1H NMR (500 MHz, CD4OD) δ ppm 7.77-7.92 (9H, m), 5.06-5.13 (1H, m), 4.97-5.04(1H, m), 4.61-4.70 (2H, m), 3.78-3.85 (1H, m), 3.71-3.75 (1H, m), 3.69 (6H,d), 2.63-2.74 (1H, m), 2.39-2.55 (5H, m), 1.83-2.14 (14H, m), 1.00-1.12 (2H,m), 0.81-0.89 (1H, m), 0.72-0.79 (1H, m)。实施例QC-7 (19 mg)：LC (条件2)：RT=2.03 min，>96%纯度；LC/MS：[M+H]+ C48H49Cl2F4N8O6的分析计算值979.31；实测值490.17(M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H49Cl2F4N8O6的分析计算值979.3083；实测值979.3043；1H NMR(500 MHz, CD3OD) δ ppm 7.74-7.88 (8H, m), 4.97-5.05 (2H, m), 4.63-4.71 (2H,m), 3.71-3.78 (2H, m), 3.69 (6H, s), 2.39-2.55 (6H, m), 1.87-2.11 (14H, m),1.01-1.11 (2H, m), 0.73-0.81 (2H, m)。
实施例QC-8.1
向4,4'-双(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)-1,1'-联苯，4 HCl(25 mg，0.042 mmol)和Cap 5.1 (20.32 mg，0.084 mmol)在2 mL DMF中的溶液中添加DiPEA (0.044 mL，0.251 mmol)。向所得混合物中添加HATU (31.8 mg，0.084 mmol)且在室温下搅拌混合物2小时。真空除去溶剂。通过反相HPLC (柱：WATERS Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5u，甲醇/水/TFA)纯化粗产物，得到呈白色固体状的实施例QC-8.1的TFA盐(32 mg，64.3%)。LC (条件1)：RT=1.04 min；LC/MS：[M+H]+ C50H63N8O8的分析计算值903.48；实测值903.7；HRMS：[M+H]+ C50H63N8O8的分析计算值903.4763；实测值903.4753；1H NMR (500 MHz,CD3OD) δ 8.03-7.78 (m, 10H), 5.16 (dd, J=10.5, 7.2 Hz, 2H), 4.84-4.73 (m,2H), 4.33-4.18 (m, 2H), 3.92-3.78 (m, 2H), 3.74-3.63 (m, 6H), 3.61-3.43 (m,2H), 2.69-2.47 (m, 2H), 2.43-2.07 (m, 6H), 2.06-1.95 (m, 2H), 1.95-1.74 (m,4H), 1.56 (d, J=6.4 Hz, 6H), 1.42 (m, 2H), 0.83-0.70 (m, 2H), 0.67-0.49 (m,4H), 0.45-0.33 (m, 2H), 0.21-0.10 (m, 2H)。
实施例QC-8.2
使用与实施例QC-8.1所述相同的程序，由Cap 5.2替代Cap 5.1来制备实施例QC- 8.2的TFA盐。LC (条件1)：RT=1.01 min；LC/MS：[M+H]+ C50H63N8O8的分析计算值903.48；实测值：903.7；HRMS：[M+H]+ C50H63N8O8的分析计算值903.4763；实测值：903.4761；1H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.05-7.78 (m, 10H), 5.16 (dd, J=10.4, 7.0 Hz, 2H), 4.83-4.75(m, 2H), 4.36-4.18 (m, 2H), 3.92-3.75 (m, 2H), 3.74-3.61 (m, 6H), 3.57-3.37(m, 2H), 2.72-2.47 (m, 2H), 2.44-2.24 (m, 4H), 2.24-2.07 (m, 2H), 1.99 (m,2H), 1.95-1.77 (m, 2H), 1.58 (d, J=6.4 Hz, 6H), 1.52-1.40 (m, 2H), 1.39-1.19(m, 4H), 0.76 (m, 2H), 0.67-0.44 (m, 4H), 0.38 (m, 2H)。
使用关于实施例QC-1.1所述的相同程序，使相应核心(参见表内的参考文献)与Cap 5.1或Cap 5.2组合来制备实施例QC-9至QC16和实施例OL1至OL10，且在反相HPLC条件下纯化产物且以TFA盐形式获得。通过使用标准EDC/CH2Cl2偶合条件由合适核心和Cap 6制备实施例OL10，且在反相HPLC条件下纯化产物且以游离碱形式获得。通过使用标准HATU/DIEA/DMF偶合条件由合适核心和Cap 7制备实施例OL11至OL12，且在反相HPLC条件下纯化产物且以TFA盐形式获得。
*实施例QC14的次末前体根据WO 2008/021927中所述的三步骤方案(酰胺偶合、酮酰胺环化成咪唑和Boc去保护)，由1,1'-(1,4-亚苯基)双(2-氨基乙酮)二盐酸盐(参见TL,1986, 第5759页的制备程序)和Boc-L-脯氨酸开始制备。
实施例QC-17.1
实施例QC-17.1步骤a
在室温下，向4-溴-2-甲基苯甲酸(10 g，46.5 mmol)在DMF (150 mL)中的溶液中添加N,O-二甲基羟胺盐酸盐(5.44 g，55.8 mmol)，随后添加HOBT (8.55 g，55.8 mmol)。接着添加EDC (10.7 g，55.8 mmol)，随后添加DIPEA (24.4 mL，140 mmol)，且在室温下搅拌反应混合物12小时。接着用EtOAc (150 mL)稀释反应混合物，用水(3×250 mL)和盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩，得到粗的QC-17.1步骤a (9.5 g)，其原样送至下一步骤。1H NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 400 MHz)：δ 7.37 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.34 (dd,J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J=8.0 Hz, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.30 (s, 3H), 2.31(s, 3H)。LC/MS：[M+H]+ C10H13 81BrNO2的分析计算值：260.01；实测值260.0。
实施例QC-17.1步骤b
将QC-17.1步骤a (9.5 g，36.8 mmol)溶解在乙醚(150 mL)中且冷却至0℃。接着经10分钟逐滴添加甲基碘化镁(3.0 M在乙醚中，24.54 mL，73.6 mmol)。在40℃下搅拌反应物6小时且随后恢复至室温且搅拌12小时。将反应混合物冷却至0℃，用冰且随后用1.5 NHCl (50 mL)淬灭。分离有机层且用甲基叔丁基醚(2×100 mL)萃取水层，经Na2SO4干燥且减压浓缩。通过快速色谱(硅胶，60-120，EtOAc:石油醚，2:98)纯化粗品，得到呈浅黄色液体状的QC-17.1步骤b (6.25 g)。1H NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 400 MHz): δ 7.55 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.40 (d, J=8.0 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.50 (s, 3H)。
实施例QC-17.1步骤c
将4-乙酰基苯基硼酸(5.39 g，32.9 mmol)添加至含有MeOH (75.0 mL)中的QC- 17.1步骤b (7.0 g，32.9 mmol)的密封管中且用氮气净化反应混合物10分钟。接着添加K2CO3 (9.08 g，65.7 mmol)，随后添加Pd(Ph3P)4 (1.139 g，0.986 mmol)，且再用氮气净化反应混合物10分钟。加热反应混合物至75℃后维持12小时。接着减压浓缩反应混合物且用EtOAc (100 mL)稀释残余物，并用水(2×100 mL)、盐水(50 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且减压浓缩。通过combiflash (Silicycle，SiO2，10-15% EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈白色固体状的QC-17.1步骤c (6.5 g)。1H NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 400 MHz): δ 8.06-8.04 (m, 2H), 7.81 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.72-7.70 (m, 2H), 7.54-7.49 (m, 2H),2.65 (s, 3H), 2.63 (s, 6H)。
实施例QC-17.1步骤d
在10℃下，将溴(1.12 mL，21.8 mmol) (稀释在10 mL二噁烷中)缓慢(经10分钟)添加至QC-17.1步骤c (2.75 g，10.90 mmol)在二噁烷(50 mL)中的溶液中，且在室温下搅拌混合物2小时。用10% NaHCO3 (25 mL)淬灭反应物且用DCM (50 mL)萃取。经Na2SO4干燥有机相且减压浓缩，得到粗制的QC-17.1步骤d (5.0 g)，其未经纯化原样用于下一步骤。LC/MS：[M+H]+ C17H15 79/81Br2O2的分析计算值：410.94；实测值411.0。
实施例QC-17.1步骤e
在0℃下，向粗制的QC-17.1步骤d (5.1 g，12 mmol)在乙腈(75 mL)中的溶液中添加QC-17.1步骤a (5.70 g，24.9 mmol)，随后添加DIPEA (8.69 mL，49.7 mmol)。10分钟后，使温度升至室温且搅拌2小时。接着用EtOAc (100 mL)稀释反应混合物且用10% NaHCO3 (50mL)、盐水(50 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且减压浓缩。通过combiflash (Silicycle，SiO2，25-30% EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈浅黄色油状的QC-17.1步骤e (5.8 g)。1HNMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 400 MHz): δ 8.00 (app bd, 2H), 7.71 (app d, 3H), 7.53-7.51 (m, 2H), 5.61-5.34 (m, 2H), 5.29-5.04 (m, 2H), 4.51-4.36 (m, 2H), 4.09-3.91 (m, 2H), 2.59 (s, 3H), 2.35-2.21 (m, 4H), 2.15-2.04 (m, 2H), 1.80-1.63(m, 2H), 1.47/1.44 (s, 18H), 1.35-1.27 (m, 6H)。LC/MS：[M-H]- C39H49N2O10的分析计算值：705.35；实测值705.30。
实施例QC-17.1步骤f
向QC-17.1步骤e (5.6 g，7.92 mmol)在二甲苯(75 mL)中的溶液中添加NH4OAc(12.21 g，158 mmol)，且用氮气净化反应混合物10分钟。在130℃下加热18小时后，将反应混合物冷却至室温且减压除去挥发性组分。接着用EtOAc (100 mL)稀释反应混合物且用10% NaHCO3 (50 mL)、盐水(50 mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且减压浓缩。通过combiflash(Redi Sep, C-18柱，30-40%乙腈:10 mM碳酸氢铵)纯化残余物，得到呈浅黄色固体状的QC- 17.1步骤f (2.3 g)。1H NMR (DMSO-d6, δ=2.50 ppm, 400 MHz): δ 12.27/12.0/11.77/11.71 (s, 2H), 7.92-7.63 (m, 5H), 7.58-7.47 (m, 3H), 7.24 (br s, 1H), 4.90-4.75 (m, 2H), 3.92-3.84 (m, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.20-2.01 (m, 6H), 1.73-1.65(m, 2H), 1.48-1.12 (m, 24H)。LC/MS：[M-H]- C39H49N6O4的分析计算值：665.39；实测值665.4。
实施例QC-17.1步骤g
向QC-17.1步骤f (1.55 g，2.32 mmol)在MeOH (10 mL)中的溶液中添加HCl/MeOH(4 N，58.1 mL)且在室温下搅拌2小时。真空除去挥发性组分，且使残余物与无水DCM (3×25 mL)一起共蒸发。使所得固体暴露于高真空，得到呈浅黄色固体状的QC-17.1步骤e的HCl盐(1.3 g)。1H NMR (MeOD, δ=3.34 ppm, 400 MHz): δ 8.06 (br s, 1H), 7.98 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.90 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.86 (br s, 1H), 7.78 (br s, 1H), 7.74(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J=8.4 Hz, 1H), 5.27-5.20 (m, 2H), 4.04-4.00 (m,2H), 2.80-2.67 (m, 4H), 2.59 (s, 3H), 2.55-2.46 (m, 2H), 2.15-2.06 (m, 2H),1.60 (d, J=6.4, 6H)。LC/MS：[[M+H]+ C29H35N6的分析计算值：467.28；实测值467.2。
实施例QC-17.1
将HATU (37.2 mg，0.098 mmol)添加至Cap 5.2 (26.2 mg，0.108 mmol)和实施例 QC-17.1步骤g (30 mg，0.049 mmol)在DMF (2 mL)和DIPEA (0.051 ml，0.294 mmol)中的搅拌溶液中。在室温下搅拌反应混合物2小时且真空浓缩。用MeOH稀释残余物，过滤且通过制备型HPLC (Waters Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5u；MeOH/水/TFA缓冲液)纯化，得到呈灰白色固体状的实施例QC-17.1的TFA盐(34 mg)。LC/MS (条件1)：RT=1.743 min；LC/MS：[M+H]+ C51H65N8O8的分析计算值917.12；实测值917.9；HPLC (条件6)：RT=26.27；97%均质性。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.05-7.92 (m, 1H), 7.90-7.83 (m, 4H), 7.75 (s,1H), 7.72-7.65 (m, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.56 (d, J=8.2 Hz, 1H), 5.25-5.10 (m,2H), 4.84-4.78 (m, 2H), 4.27-4.15 (m, 2H), 3.79 (d, J=7.9 Hz, 2H), 3.65 (s,4H), 3.49-3.38 (m, 2H), 2.59-2.51 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.42-2.33 (m, 2H),2.33-2.23 (m, 2H), 2.16 (d, J=17.7 Hz, 2H), 2.04-1.95 (m, 2H), 1.82 (t, J=12.2 Hz, 2H), 1.67-1.52 (m, 6H), 1.51-1.38 (m, 2H), 1.36-1.21 (m, 5H), 0.83-0.72 (m, 2H), 0.63-0.45 (m, 4H), 0.43-0.30 (m, 2H)。
实施例QC-17.2
通过用Cap 5.1替代Cap 5.2且使用与关于实施例QC-17.1所述的相同程序制备实 施例QC-17.2的TFA盐。LC/MS (条件1)：RT=1.710 min；LC/MS：[M+H]+ C51H65N8O8的分析计算值917.12；实测值917.6；HPLC (条件6)：RT=26.05；98%均质性。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ8.01-7.95 (m, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.88-7.80 (m, 5H), 7.75 (s, 1H), 7.72-7.66(m, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.54 (d, J=7.9 Hz, 1H), 5.16 (dd, J=10.1, 7.3 Hz, 2H),4.82-4.74 (m, 2H), 4.22 (d, J=8.9 Hz, 2H), 3.89-3.81 (m, 2H), 3.67 (s, 6H),3.53-3.45 (m, 2H), 2.58-2.50 (m, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.42-2.33 (m, 3H), 2.27(br. s., 2H), 2.15 (dd, J=19.5, 10.1 Hz, 2H), 1.98 (dd, J=11.7, 5.3 Hz, 2H),1.89 (t, J=12.4 Hz, 2H), 1.79 (d, J=12.2 Hz, 2H), 1.55 (t, J=6.7 Hz, 6H),1.46-1.38 (m, 2H), 1.35-1.27 (m, 3H), 0.76 (dt, J=11.1, 5.3 Hz, 2H), 0.69-0.50 (m, 5H), 0.38 (d, J=5.5 Hz, 2H), 0.25-0.12 (m, 2H)。
实施例QC-18.1
实施例QC-18.1步骤a
向0℃下冰-水浴中的1-(4-溴-2-氟苯基)乙酮(5.0 g，23 mmol)在二噁烷(150mL)和乙醚(150 mL)中的溶液中逐滴添加溴(1.18 mL，23.0 mmol)。搅拌反应物1小时，使其温热至室温且搅拌16小时。使混合物在EtOAc (50 mL)与饱和NaHCO3 (50 mL)之间分配，且用水洗涤有机层并经Na2SO4干燥。真空蒸发挥发性组分且真空干燥固体过夜，得到呈白色固体状的实施例18.1步骤a (6.94 g)。1H NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 7.87-7.79(m, 2H), 7.62-7.60 (m, 1H), 4.84 (s, 2H)。
实施例QC-18.1步骤b
向实施例18.1步骤a (2.58 g，8.72 mmol)和(2S,5S)-1-(叔丁氧羰基l)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(2.00 g，8.72 mmol)在乙腈(50 mL)中的溶液中添加DIEA (2.285 mL，13.08 mmol)，且在室温下搅拌混合物64小时。真空除去溶剂且使残余物在EtOAc (40 mL)与水(30 mL)之间分配。用饱和NaHCO3和盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥且真空蒸发，得到呈黄色固体状的实施例18.1步骤b (3.8 g)。1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 7.87 (m, 1H),7.44 (m, 2H), 5.42-5.09 (m, 2H), 4.53-4.40 (m, 1H), 4.10-3.95 (m, 1H), 2.31(m, 2H), 2.09 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.49-1.46 (两个单峰, 9H), 1.33 (m, 3H)。LC/MS：[M+Na]+ C19H24 BrNNaO5的分析计算值：466.06；实测值：466.03。
实施例QC-18.1步骤c
向含有实施例18.1步骤b (3.8 g，8.6 mmol)在二甲苯(40 mL)中的溶液的压力管中添加乙酸铵(6.59 g，86 mmol)，盖上反应容器且在140℃下加热6小时。真空蒸发挥发性组分且使残余物在DCM (80 mL)与水(50 mL)之间分配。分离有机层且用饱和NaHCO3洗涤，并用Na2SO4干燥。真空除去溶剂产生红色油状物，其通过快速色谱(0-40% EtOAc/己烷)纯化，得到呈棕色固体状的实施例18.1步骤c (2.3 g)。1H NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400MHz): 7.98 (app. t, J=8.4 Hz, 1H), 7.65 (dd, J=11, 1.9 Hz, 1H), 7.45 (dd, J=8.3, 2, 1H), 7.36 (m, 1H), 4.85 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 3H),1.73 (m, 1H), 1.40-1.17 (m, 12H)。LC/MS：[M+Na]+ C19H23 79BrFN3NaO2的分析计算值：446.09；实测值：446.00。
实施例QC-18.1步骤d
向2-溴-1-(4-溴苯基)乙酮(2.425 g，8.72 mmol)和(2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(2 g，8.72 mmol)在乙腈(50 mL)中的溶液中添加DIEA (1.524 mL，8.72 mmol)，在室温下搅拌混合物16小时。真空除去溶剂且使残余物在EtOAc (40 mL)与水(30 mL)之间分配。用饱和NaHCO3和盐水洗涤有机相且用Na2SO4干燥。真空除去挥发性组分，得到呈淡黄色固体状的实施例18.1步骤d (1.74 g)，其无需进一步纯化即可使用。1H NMR(DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 7.95-7.90 (m, 2H), 7.81 (m, 1H), 7.79 (m, 1H),5.63-5.44 (m, 2H), 4.36 (m, 1H), 3.99 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.09 (m, 2H),1.63 (m, 1H), 1.41-1.37 (两个单峰, 9H), 1.19 (m, 3H)。LC/MS：[M+Na]+C19H24BrNNaO5的分析计算值：448.07；实测值：448.06。
实施例QC-18.1步骤e
向含有实施例18.1步骤d (3.4 g，8.0 mmol)在二甲苯(40 mL)中的溶液的压力管中添加乙酸铵(6.15 g，80 mmol)，在140℃下加热混合物6小时。真空除去挥发性组分，小心地使残余物在DCM (60 mL)与饱和NaHCO3 (30 mL)之间分配，分离有机层并用Na2SO4干燥。真空除去溶剂得到红色固体，其通过快速色谱(5-50% EtOAc/己烷)纯化，得到呈浅棕色固体状的实施例18.1步骤e (2.65 g)。1H NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 7.73-7.71(m, 2H), 7.59-7.50 (m, 3H), 4.80 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 2.10 (m, 3H), 1.71(m, 1H), 1.40-1.17 (m, 12H)。LC/MS：[M+Na]+ C19H24BrN3NaO2的分析计算值：428.09；实测值：428.07。
实施例QC-18.1步骤f
向实施例18.1步骤e (2.64 g，6.50 mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷) (3.30 g，13.0 mmol)在二噁烷(40 mL)中的溶液中添加乙酸钾(1.594 g，16.24 mmol)。通过鼓泡氮气10分钟使混合物脱气，添加Pd(Ph3P)4 (0.375g，0.325 mmol)且再继续脱气15分钟。接着密封反应容器且在80℃下加热16小时。真空蒸发挥发性组分且使残余物在DCM (100 mL)与半饱和NaHCO3 (50 mL)之间分配。分离有机层，用Na2SO4干燥且真空蒸发，得到粗制红色油状物，其通过快速色谱(10-90% EtOAc/己烷)纯化。获得呈黄色泡沫状的实施例18.1步骤f (2.7 g)。1H NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400MHz): 7.77 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.64-7.53 (m, 3H), 4.80 (m, 1H), 3.88 (m, 1H),2.09 (m, 3H), 1.73 (m, 1H), 1.43-1.08 (m, 24H)。LC/MS：[M+H]+ C25H37BrBN3O4的分析计算值：454.29；实测值：454.23。
实施例QC-18.1步骤g
向含有实施例18.1步骤f (2.70 g，5.96 mmol)和实施例4步骤c (2.30 g，5.42mmol)在DME (70 mL)中的溶液的压力管中添加水(17.50 mL)和碳酸氢钠(2.27 g，27.1mmol)。通过鼓泡氮气15分钟使混合物脱气，添加Pd(Ph3P)4 (0.313 g，0.271 mmol)且再继续脱气15分钟。密封反应容器且在80℃下加热15小时。真空蒸发溶剂且使残余物在DCM(100 mL)与水(50 mL)之间分配。分离有机层，用Na2SO4干燥且真空除去挥发性组分，并通过快速色谱(30-100% EtOAc/己烷)纯化所得红色粗制固体。获得呈黄色固体状的实施例18.1 步骤g (1.95 g)。1H NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 8.10 (m, 1H), 7.87-7.71(m, 4H), 7.61-7.55 (m, 3H), 7.37 (m, 1H), 4.85 (m, 2H), 3.91 (m, 2H), 2.11(m, 6H), 1.76 (m, 2H), 1.42-1.08 (m, 24H)。LC/MS：[M+H]+ C35H48FN6O4的分析计算值：671.37；实测值：671.35。
实施例QC-18.1步骤h
向实施例18.1步骤g (1.95 g，2.91 mmol)在二噁烷(10 mL)中的悬浮液中添加含4 N HCl的二噁烷(9.72 mL，320 mmol)，在室温下搅拌混合物6小时。添加甲醇(1 mL)且继续搅拌1小时。真空除去挥发性组分且真空干燥残余物过夜。回收呈黄色固体状的实施例 18.1步骤h的HCl盐(1.7 g)。1H NMR (DMSO-d6), δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.34/ 10.29/9.43/9.08 (四个宽S, ~4H), 8.16 (t, J=8.3 Hz, 1H), 8.10 (br s, 1H), 8.00 (d, J =8.3 Hz, 2H), 7.92 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.78-7.72 (m, 3H), 4.99-4.89 (m, 2H),3.80 (m, 2H), 2.53-2.42 (m, 4H), 2.25 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.44 (d, J=6.5,3H), 1.43 (d, J=6.5, 3H)。LC/MS：[M+H]+ C28H32FN6的分析计算值：471.27；实测值：471.17。
实施例QC-18.1
将HATU (37.0 mg，0.097 mmol)添加至Cap 5.2 (26.0 mg，0.107 mmol)和实施例 QC-18.1步骤f (30 mg，0.049 mmol)在DMF (2 mL)和DIPEA (0.051 ml，0.294 mmol)中的搅拌溶液中。在室温下搅拌反应混合物2小时且真空浓缩。用MeOH稀释残余物，过滤且通过制备型HPLC (Waters Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5u；MeOH/水/TFA缓冲液)纯化，得到呈灰白色固体状的实施例QC-17.1的TFA盐(34 mg)。LC/MS (条件1)：RT=1.77 min；LC/MS：[M+H]+ C50H62FN8O8的分析计算值921.47；实测值：921.11；HPLC (条件6)：RT=26.39；99%均质性。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.13-7.98 (m, 1H), 7.95-7.84 (m, 5H), 7.82 (s,1H), 7.75-7.67 (m, 2H), 5.24-5.12 (m, 2H), 4.82-4.76 (m, 2H), 4.28-4.17 (m,2H), 3.87-3.75 (m, 2H), 3.72-3.61 (m, 6H), 3.42 (t, J=11.6 Hz, 2H), 2.52 (d,J=3.4 Hz, 2H), 2.44-2.23 (m, 4H), 2.18-2.08 (m, 2H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.82(t, J=12.2 Hz, 2H), 1.58 (d, J=6.7 Hz, 6H), 1.47 (td, J=12.1, 8.2 Hz, 2H),1.33-1.18 (m, 5H), 0.84-0.74 (m, 2H), 0.57 (br. s., 2H), 0.50 (br. s., 2H),0.37 (d, J=4.0 Hz, 2H)。
实施例QC-18.2
使用关于实施例QC-18.1所述的相同程序，通过用Cap 5.1替代Cap 5.2来制备实 施例QC-18.2的TFA盐。LC/MS (条件1)：RT=1.75 min；LC/MS：[M+H]+ C50H62FN8O8的分析计算值921.47；实测值921.25；HPLC (条件6)：RT=26.02；98%均质性。1H NMR (400 MHz, CD3OD)δ 7.96 (d, J=9.3 Hz, 1H), 7.92-7.80 (m, 6H), 7.79-7.64 (m, 4H), 5.26-5.12 (m,2H), 4.22 (d, J=6.5 Hz, 3H), 3.84 (d, J=7.8 Hz, 3H), 3.73-3.64 (m, 7H), 3.48(t, J=11.8 Hz, 3H), 2.56-2.48 (m, 2H), 2.45-2.23 (m, 5H), 2.18-2.09 (m, 2H),2.04-1.94 (m, 3H), 1.94-1.74 (m, 5H), 1.55 (d, J=6.3 Hz, 6H), 1.47-1.35 (m,3H), 1.29 (br. s., 4H), 1.03-0.84 (m, 3H), 0.81-0.70 (m, 3H), 0.63 (t, J=13.6Hz, 3H), 0.54 (d, J=4.8 Hz, 2H), 0.38 (d, J=5.3 Hz, 2H), 0.24-0.08 (m, 2H)。
实施例QC-19
实施例QC-19步骤a
根据Tetrahedon Letters, 2003, 3203-3205中所述的程序，由(S)-5-氧代基吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯制备呈非对映异构体混合物形式的上述酯。
实施例QC-19步骤b
经10分钟向实施例QC-19步骤a的冷却(-50℃)甲苯(45 mL)溶液中逐滴添加Superhydride (19.20 mL 1 M/THF，19.20 mmol)。添加许尼希碱(Hunig's base，13.6 mL，78 mmol)且搅拌10分钟；添加呈固体状的DMAP (0.122 g，0.997 mmol)，搅拌15分钟；且经15分钟逐滴添加三氟乙酸酐(2.98 mL，21.1 mmol)，除去冷却浴，继续搅拌4小时，同时使其温热至室温。用水(50 mL)、饱和NaCl (30 mL)洗涤反应混合物，且真空浓缩有机相。用快速色谱(8-60% EtOAc/己烷)纯化所得粗制物质，得到呈黄色油状的实施例QC-19步骤b (2.85g)。1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 6.36 (s, 0.5H), 6.25 (s, 0.5H), 4.70-4.57 (m, 1H),3.78 (s, 3H), 2.96 (m, 1H), 2.54 (m, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.50 (s, 4.5H), 1.44(s, 4.5H)。
实施例QC-19步骤c
实施例QC-19步骤c.1 实施例QC-19步骤c.2
经20分钟将二乙基锌(1.1 M在甲苯中，59.1 mL，65.0 mmol)逐滴添加至实施例 QC-19步骤b (5.23 g，21.7 mmol)的冷却(-23℃)甲苯(60 mL)溶液中，且搅拌10分钟。经10分钟逐滴添加氯碘甲烷(9.44 mL，130 mmol)，且在-21℃下搅拌反应混合物16小时。将饱和NaHCO3 (60 mL)添加至反应混合物中，除去冷却浴，搅拌混合物10分钟。接着将其过滤，且用甲苯(50 mL)洗涤滤饼。分配滤液，用Na2SO4干燥有机层并真空浓缩。用快速色谱(2-10%EtOAc/己烷)纯化所得粗制物质，得到实施例QC-19步骤c.1 (第一洗出液；无色油状物；2.88 g)和实施例QC-19步骤c.2 (第二洗出液；无色油状物；1.01 g)。基于NOE研究进行相对立体化学分配。实施例QC-19步骤c.1：1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 4.65-4.52 (m, 1H),3.72 (s, 3H), 3.28-3.17 (m, 1H), 2.44-2.32 (m, 1H), 2.16-2.10 (m, 1H), 1.51-1.42 (两个s, 9H), 1.24 (s, 3H), 1.07 (m, 1H), 0.69-0.60 (m, 1H)。实施例QC-19步 骤c.2：1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 4.0 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.32-3.16 (m, 1H),2.43 (m, 1H), 2.01 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.35 (s, 3H), 0.76-0.66 (m, 2H)。
实施例QC-19步骤d
实施例QC-19步骤d.1 实施例QC-19步骤d.2
向实施例QC-19步骤c.1 (2.88 g，11.3 mmol)在乙醇(20 mL)中的溶液中添加LiOH (0.324 g，13.5 mmol)在水(10.00 mL)中的溶液，且在室温下搅拌反应混合物6小时。真空除去大部分挥发性组分，且使残余物在水(20 mL)与乙醚(20 mL)之间分配。在冰-水浴中冷却水层，用1 N HCl酸化至2的pH范围且用EtOAc (30 mL，4X)萃取。用Na2SO4干燥所合并的有机相且真空蒸发，得到呈粘稠固体状的实施例QC-19步骤d.1 (2.55 g)。1H NMR(CDCl3, 400 MHz): 4.64 (m, 1H), 3.25 (appt s, 1H), 2.70-2.40 (m, 1H), 2.14(m, 1H), 1.54-1.44 (m, 9H), 1.27 (s, 3H), 1.10-0.80 (m, 1H), 0.67 (m, 1H)。由实施例QC-19步骤c.2以类似方式制备实施例QC-19步骤d.2。1H NMR (CDCl3, 400 MHz):4.13 (app br s, 1H), 3.06 (app br s, 1H), 2.55/2.41 (重叠app br s, 2H), 1.51(s, 9H), 1.27 (s, 3H), 0.76 (app t, J=5.6 Hz, 1H), 0.60 (app br s, 1H)。
实施例QC-19步骤e
向实施例QC-19步骤d.2 (1.09 g，4.52 mmol)和1,1'-(联苯-4,4'-二基)双(2-溴乙酮) (0.869 g，2.19 mmol)在乙腈(40 mL)中的悬浮液中添加DIEA (0.789 mL，4.52mmol)，在室温下搅拌混合物4小时。真空除去挥发性组分且使残余物在EtOAc (70 mL)与水(50 mL)之间分配。用饱和NaHCO3 (50 mL)洗涤有机层，用Na2SO4干燥，真空蒸发且真空干燥，得到呈白色泡沫状的实施例QC-19步骤e (1.54 g)。1H NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400MHz): 8.13 (d, J=8.3 Hz, 4H), 7.99 (d, J=8.5 Hz, 4H), 5.70-5.54 (m, 4H), 4.17(m, 2H), 3.13-3.11 (m, 2H), 2.58-2.46 (m, 2H), 2.19 (m, 2H), 1.42-1.37(两个s,18H), 1.24 (s, 6H), 0.76-0.70 (m, 4H)。LC/MS：[M+Na]+ C40H48N2NaO10的分析计算值：739.32；实测值：739.52。
实施例QC-19步骤f
向含有实施例QC-19步骤e (1.54 g，2.15 mmol)在二甲苯(40 mL)中的溶液的压力管中添加乙酸铵(1.656 g，21.48 mmol)，盖上容器并在140℃下加热5小时。真空除去挥发性组分且小心地使残余物在DCM (50 mL)与水(50 mL)之间分配，同时添加充足的饱和NaHCO3溶液，以便在分配结束时，水相为中性或碱性。用Na2SO4干燥有机层，真空蒸发且通过快速色谱(10-100% EtOAc/己烷)纯化所得粗制物质，得到呈棕色固体状的实施例QC-19步 骤f (0.65 g)。1H NMR (DMSO-d6, δ=2.5 ppm, 400 MHz): 7.84-7.65 (m, 8H), 7.55-7.54 (m, 1.7H), 7.32-7.30 (m, 0.3H), 4.60 (m, 2H), 3.20 (m, 2H), 2.48-2.43(m, 2H), 2.12 (m, 2H), 1.45-1.07 (m, 24H), 0.77 (m, 2H), 0.69 (m, 2H)。LC/MS：[M+H]+ C40H49N6O4的分析计算值：677.38；实测值：677.45。
实施例QC-19步骤g
向实施例QC-19步骤f (0.65 g，0.960 mmol)在二噁烷(5 mL)中的溶液中添加含4N HCl的二噁烷(5.84 mL，192 mmol)，在室温下搅拌混合物6小时。真空除去挥发性组分且真空干燥过夜，得到呈棕色固体状的实施例QC-19步骤g的HCl盐(0.6 g)。1H NMR (DMSO-d6,δ=2.5 ppm, 400 MHz): 10.5-10 (br s, ~3.2H), 7.99 (br s, 2H), 7.95 (d, J=8.5,4H), 7.85 (d, J=8.5 Hz, 4H), 4.76 (m, 2H), 3.18 (m, 2H), 2.61-2.46 (m, 4H; 与溶剂信号重叠), 1.35 (s, 6H), 1.30 (m, 2H), 0.82 (app br t, J=7.1, 2H)。LC/MS：[M+H]+ C30H33N6的分析计算值：477.28；实测值：477.22。
实施例QC-19
将HATU (37.0 mg，0.097 mmol)添加至Cap 5.2 (23.5 mg，0.096 mmol)和实施例 QC-19步骤g (30 mg，0.048 mmol)在DMF (2 mL)和DIPEA (0.051 ml，0.294 mmol)中的搅拌溶液中。在室温下搅拌反应混合物2小时且真空浓缩。用MeOH稀释残余物，过滤且通过制备型HPLC (Waters Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5u；MeOH/水/TFA缓冲液)纯化，得到呈灰白色固体状的实施例QC-191的TFA盐(31 mg)。LC/MS (条件1)：RT=1.72 min；LC/MS：[M+H]+ C52H63N8O8的分析计算值927.48；实测值927.05；HPLC (条件6)：RT=26.32；100%均质性。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.96-7.74 (m, 10H), 5.02 (t, J=8.5 Hz, 2H), 4.56 (d,J=7.9 Hz, 2H), 3.82 (d, J=10.7 Hz, 2H), 3.66 (s, 5H), 3.60 (d, J=3.4 Hz, 2H),3.54-3.44 (m, 2H), 2.77 (dd, J=13.3, 9.3 Hz, 2H), 2.32-2.15 (m, 4H), 1.88 (t,J=12.5 Hz, 2H), 1.53 (br. s., 4H), 1.41 (s, 6H), 1.11 (d, J=11.9 Hz, 2H),1.00 (d, J=5.5 Hz, 2H), 0.95 (d, J=5.5 Hz, 2H), 0.76 (dt, J=10.8, 5.5 Hz,2H), 0.64-0.58 (m, 2H), 0.52-0.45 (m, 2H), 0.42-0.32 (m, 2H)。
实施例1.1和1.2
根据关于实施例QC-8.1所述的程序，由Cap 8.2制备实施例1.1的TFA盐。LC (条件1)：RT=1.15 min；LC/MS：[M+H]+ C50H63N8O8的分析计算值903.48；实测值：903.50；HRMS：[M+H]+ C50H63N8O8的分析计算值903.4763；实测值：903.4755；1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ7.89 (br. s., 8H), 7.73 (d, J=7.9 Hz, 2H), 5.02 (t, J=8.5 Hz, 2H), 4.71-4.61(m, 2H), 4.11 (t, J=8.7 Hz, 2H), 3.78-3.67 (m, 3H), 3.55 (s, 6H), 3.24 (t, J=10.5 Hz, 2H), 2.36 (br. s., 2H), 2.30-2.06 (m, 4H), 1.98 (d, J=9.8 Hz, 2H),1.89-1.72 (m, 3H), 1.49 (d, J=6.4 Hz, 6H), 1.23 (d, J=5.8 Hz, 1H), 1.09 (d, J=13.4 Hz, 2H), 0.68 (dt, J=10.6, 5.2 Hz, 2H), 0.56-0.40 (m, 4H), 0.36-0.27(m, 2H)。
根据关于实施例QC-8.1所述的程序，通过使用Cap 8.1制备实施例1.2的TFA盐。LC(条件1)：RT=1.19 min；LC/MS：[M+H]+ C50H63N8O8的分析计算值903.48；实测值：903.50；1HNMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.02-7.87 (m, 8H), 7.71 (d, J=8.5 Hz, 2H), 5.09-4.97(m, 2H), 4.62 (t, J=6.7 Hz, 2H), 4.30 (t, J=9.0 Hz, 2H), 3.56 (s, 6H), 3.38(d, J=8.9 Hz, 2H), 3.17 (dd, J=10.8, 8.1 Hz, 2H), 2.36 (br. s., 2H), 2.29-2.08 (m, 4H), 1.99 (d, J=3.4 Hz, 2H), 1.86-1.75 (m, 3H), 1.54 (d, J=9.2 Hz,2H), 1.47 (d, J=6.7 Hz, 6H), 1.42 (br. s., 2H), 1.26 (d, J=6.1 Hz, 1H), 0.68-0.59 (m, 2H), 0.57-0.48 (m, 2H), 0.45-0.31 (m, 4H)。
实施例2.1至2.4
将HATU (24.38 mg，0.064 mmol)添加至4,4'-双(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-联苯, 4 HCl (18.3 mg，0.031 mmol)和Cap 9.1 (16.5 mg，0.064 mmol)在DMF (0.8 mL)和DIPEA (0.037 mL，0.21 mmol)中的搅拌溶液中。用氮气冲洗反应物，密封且随后在室温下搅拌2小时。在氮气流下部分浓缩反应物，且随后通过制备型HPLC (ACN/水和TFA缓冲液)纯化，得到呈灰白色固体状的实施例2.1的TFA盐(23.1 mg)。LC-MS保留时间2.205 min; ½ m/z 466.55 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4 min的梯度时间、1 min的保持时间和5 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。
除非另作说明，否则以与关于实施例2.1所述的程序类似的方式制备和表征实施例2.2至2.4的TFA盐。
实施例编号 起始酸 保留时间 ½ m/z (MH+)
实施例2.2 Cap 9.2 2.183 466.55
实施例2.3 Cap 9.3 1.145* 466.55
实施例2.4 Cap 9.4 1.183* 466.55
* 2 min的梯度时间、1 min的保持时间和3 min的分析时间
实施例3.1至3.4
将HATU (22.8 mg，0.060 mmol)添加至4,4'-双(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-联苯, 4 HCl (17.1 mg，0.029 mmol)和Cap 10.1 (16.3 mg，0.060 mmol)在DMF (0.8 mL)和DIPEA (0.035 mL，0.200 mmol)中的搅拌澄清溶液中。用氮气冲洗反应物，密封且随后在室温下搅拌2小时。在氮气流下部分浓缩反应物，且随后通过制备型HPLC (ACN/水和TFA缓冲液)纯化，得到呈白色固体状的实施例3.1的TFA盐(23.4mg)。LC-MS保留时间2.425 min; ½ m/z 480.55 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4 min的梯度时间、1 min的保持时间和5 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 7.96-7.83 (m,10H), 5.32 (t, J=8.4 Hz, 2H), 4.56 (t, J=6.4 Hz, 2H), 4.34 (d, J=8.3 Hz, 2H),3.81-3.53 (m, 10H), 2.70-2.59 (m, 2H), 2.42-2.21 (m, 4H), 2.12-1.91 (m, 6H),1.81-1.42 (m, 28H)。
除非另作说明，否则以与关于实施例10.1所述的程序类似的方式制备和表征实施例3.2至3.4的TFA盐。
实施例编号 起始酸 保留时间 ½ m/z (MH+)
实施例3.2 Cap 10步骤d.2 1.332* 480.5
实施例3.3 Cap 10步骤d.3 2.126 480.6
实施例3.4 Cap 10步骤d.4 2.273 480.6
* 2 min的梯度时间、1 min的保持时间和3 min的分析时间
实施例4.1和4.2 (两种对称非对映异构体)
向4,4'-双(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-联苯四盐酸盐(0.134 g，0.224 mmol)、Cap-12 (0.1034 g，0.519 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.313mL，1.791 mmol)在DMF(1.5 mL)中的溶液中添加HATU (0.179 g，0.470 mmol)。在约25℃下搅拌反应物3.5小时。用MeOH (3.5 mL)稀释反应物且通过制备型HPLC (注射体积：2000 μL；梯度时间：15 min；起始% B：30，最终% B：100；流速：30 mL/min；停止时间：15 min；溶剂A：10% MeOH-90% H2O-0.1% TFA，溶剂B：90% MeOH-10% H2O-0.1% TFA；柱：XTERRA 30×100mm S5；由UV收集：220 nm)纯化产物，得到非对映异构体的混合物。通过制备型HPLC (注射体积：2000 μL；梯度时间：30 min；起始% B：10，最终% B：50；流速：30 mL/min；停止时间：30min；溶剂A：10%乙腈-90% H2O-0.1% TFA，溶剂B：90%乙腈-10% H2O-0.1% TFA；柱：Waters-SunFire 30×100 mm S5；由UV收集：220 nm)进一步分离非对映异构体的混合物以分离两种对称非对映异构体：呈灰白色泡沫状的实施例4.1 (第一洗出液) (35.5 mg)。LC (条件1)：RT=13.696 min。LC/MS：[M+H]+ C46H55N8O6的分析计算值815.42；实测值815.49；呈灰白色泡沫状的实施例4.2 (最后的洗出液) (38.3 mg)。LC (条件1)：RT=14.492 min。LC/MS：[M+H]+ C46H55N8O6的分析计算值815.42；实测值815.49。
实施例5.1和5.2 (两种对称非对映异构体)
根据关于实施例4.1和4.2所述的程序，由4,4'-双(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-联苯四盐酸盐和Cap-11制备实施例5.1和5.2。呈淡黄色泡沫状的实施例5.1 (第一洗出液) (56.4 mg)：LC (条件1)：RT=15.124 min。LC/MS：[M+H]+C48H59N8O6的分析计算值843.46；实测值843.40；和呈白色泡沫状的实施例5.2 (最后的洗出液) (50.7 mg)。LC (条件1)：RT=16.559 min。LC/MS：[M+H]+ C48H59N8O6的分析计算值843.46；实测值843.40。
实施例6
将HATU (173 mg，0.455 mmol)添加至4,4'-双(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-联苯, 4 HCl (109 mg，0.182 mmol)和Cap 13.1 (117 mg，0.455 mmol)在DMF (2.0 mL)和DIPEA (0.222 mL，1.27 mmol)中的搅拌澄清溶液中。用氮气冲洗反应物，密封且随后在室温下搅拌过夜。在氮气流下部分浓缩反应物，且随后通过制备型HPLC (ACN/水和TFA缓冲液)纯化，得到呈灰白色固体状的实施例6的TFA盐(135 mg)。LC-MS保留时间2.196 min; m/z 931.7 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis检测器在220 nM的检测器波长下在配备有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱仪上记录LC数据。洗脱条件采用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4 min的梯度时间、1 min的保持时间和5 min的分析时间，其中溶剂A为10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC的Micromass平台以电喷雾模式测定MS数据。1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 7.96 (s, 2H), 7.88 (s,8H), 5.20 (dd, J=10.7, 7.2 Hz, 2H), 4.79 (t, J=6.8 Hz, 2H), 4.31-4.24 (m,2H), 3.85-3.76 (m, 2H), 3.74-3.69 (m, 2H), 3.67 (s, 6H), 2.91-2.83 (m, 2H),2.55 (dt, J=12.8, 6.7 Hz, 2H), 2.47-2.23 (m, 6H), 2.00 (dd, J=12.3, 5.8 Hz,2H), 1.79 (d, J=12.3 Hz, 2H), 1.69-1.27 (m, 12H), 1.15 (dd, J=8.3, 4.3 Hz,2H), 0.47 (td, J=8.5, 3.9 Hz, 2H), 0.34-0.21 (m, 4H), -0.01 - -0.09 (m, 2H)。
实施例7
以与关于实施例6所述的程序类似的方式由Cap 13.2制备实施例7的TFA盐并表征。LC-MS保留时间2.208 min; m/z 931.7 (MH+)。
实施例8
实施例8步骤a
向0℃下冰-水浴中的(R)-5-(羟甲基)吡咯烷-2-酮(5 g，43.4 mmol)和三苯基膦(17.09 g，65.1 mmol)在乙腈(300 mL)中的悬浮液中逐滴添加四溴化碳(21.60 g，65.1mmol)在乙腈(80 mL)中的溶液。悬浮液在1小时内逐渐变成澄清溶液，除去水浴，并在室温下搅拌23小时。真空除去溶剂，对所得粗物质进行快速色谱(30-100% EtOAc/己烷，10-20%MeOH/EtOAc)，得到呈棕色油状的实施例8步骤a (6.3 g)。LC (条件II)：RT=1.29 min；LC/MS：[M+H]+ C5H9BrNO的分析计算值：179.99；实测值：178.11。1H NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm,400 MHz) δ 6.09 (br. s., 1H), 4.07-3.92 (m, 1H), 3.46 (dd, J=10.3, 4.8 Hz,1H), 3.36 (dd, J=10.3, 7.5 Hz, 1H), 2.55-2.30 (m, 3H), 1.99-1.81 (m, 1H)。
实施例8步骤b
当反应烧瓶用铝箔覆盖时，通过注射器向实施例8步骤a (6.33 g，35.6 mmol)和氟化银(I) (14.21 g，112 mmol)的混合物固体中缓慢添加乙腈(500 mL)。在室温下搅拌反应混合物40小时。使其经由硅藻土(Celite)过滤且真空除去溶剂。对所得粗物质进行快速色谱(50-100% EtOAc/Hex，EtOAc，10-20% MeOH/EtOAc)，得到呈无色油状的实施例8步骤b (1.96 g)。LC (条件II)：RT=0.78 min；LC/MS：[M+H]+ C5H9FNO的分析计算值：118.07；实测值：118.0。1H NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 400 MHz) δ6.07 (br. s., 1H), 4.51 (dd, J=9.5, 3.5 Hz, 0.5H), 4.43-4.31 (m, 1H), 4.23 (dd, J=9.5, 7.3 Hz, 0.5H), 4.06-3.91 (m, 1H), 2.48-2.34 (m, 2H), 2.32-2.18 (m, 1H), 1.84 (m, 1H)。
实施例8步骤c
在0℃下冰-水浴中，在10分钟内将二碳酸二叔丁酯(5.11 g，23.40 mmol)分三份添加至实施例8步骤b (2.61 g，22.28 mmol)和DMAP (0.109 g，0.891 mmol)在DCM (110mL)中的溶液中。除去水浴，在室温下将其搅拌20小时。添加50%饱和NaHCO3 (30 mL)且搅拌10分钟。分离有机层且用Na2SO4干燥。真空蒸发溶剂，得到呈黄色油状的粗产物。对所得粗物质进行快速色谱(0-80% EtOAc/己烷)，得到呈无色油状的实施例8步骤c (3.87 g)。LC (条件II)：RT=2.64 min；LC/MS：[M+Na]+ C10H16FNNaO3的分析计算值：240.10；实测值：240.14。1H NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 500 MHz) δ4.68 (ddd, J=48.2, 9.8, 3.5 Hz, 1 H),4.50 (ddd, J=45.7, 9.8, 2.5 Hz, 1H), 4.31 (ddm, J=27.7, 8.8 Hz, 1H), 2.69(dtd, J=17.7, 9.8, 1.9 Hz, 1H), 2.44 (ddq, J=17.7, 9.8, 1.1 Hz, 1 H), 2.20(m, 1H), 2.06 (m, 1H), 1.51 (s, 9H)。
实施例8步骤d
在-78℃下干冰-丙酮浴中，向实施例8步骤c (2.67 g，12.29 mmol)在THF (50mL)中的溶液中逐滴添加Superhydride (14.75 mL，14.75 mmol)。在-78℃下搅拌反应混合物40分钟。添加饱和NaHCO3水溶液(15 mL)，除去干冰-丙酮浴，使温度升至室温。逐滴添加20滴50% H2O2且将其搅拌20分钟。分离有机层且用乙醚(2×40 mL)萃取水层，用Na2SO4干燥所合并的有机层，真空蒸发溶剂，得到呈澄清油状的粗中间体(2.34 g)。将该粗中间体溶于甲醇(30 mL)中且添加对甲苯磺酸单水合物(0.223 g，1.174 mmol)，将其在室温下搅拌16小时。添加饱和NaHCO3水溶液(5 mL)，用乙醚(3×35 mL)萃取，用Na2SO4干燥，真空蒸发，得到呈澄清油状的粗产物。对所得粗物质进行快速色谱(0-40% EtOAc/己烷)，得到呈无色油状的实施例8步骤d (1.97 g)。LC (条件II)：RT=3.43 min；LC/MS：[M+Na]+ C11H20FNNaO3的分析计算值：256.13；实测值：256.19。1H NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 400 MHz) δ5.27-5.16(m, 1H), 4.59-4.26 (m, 2H), 4.03 (br. s., 1H), 3.29 (br. s., 3H), 2.17-1.96(m, 2H), 1.96-1.85 (m, 1H), 1.85-1.70 (m, 1H), 1.55-1.39 (m, 9H)。
实施例8步骤e
向在-78℃干冰-丙酮浴中冷却的实施例8步骤d (1.97 g，8.44 mmol)在DCM (50mL)中的溶液中添加三甲基硅烷基氰化物(1.698 mL，12.67 mmol)，随后添加三氟化硼乙醚复合物(1.605 mL，12.67 mmol)。将其搅拌1小时。添加饱和NaHCO3 (20 mL)且除去该浴，并在室温下将其搅拌2小时。分离有机层且用DCM (40 mL×2)萃取，用Na2SO4干燥，真空蒸发。对所得粗物质进行快速色谱(0-40%，40-55% EtOAc/己烷)，得到呈白色固体状的第一洗出液实施例8步骤e.1 (反式；1.12 g)和第二洗出液实施例8步骤e.2 (顺式；0.63 g)。LC (条件II)：RT=3.04 min；LC/MS：[M+Na]+ C11H17FN2NaO2的分析计算值：251.12；实测值：251.16。1H NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 400 MHz): d 4.67-4.44 (m, 3H), 4.12-4.06 (m, 1H),2.32 (br s, 2H), 2.18 ( br s, 2H), 1.52 (s, 9H)。
实施例8步骤f
向8e-顺式(0.51 g，2.234 mmol)在二噁烷(3 mL)中的溶液中添加HCl (12 M，3mL，99 mmol)。将其加热至80℃后维持8小时。真空蒸发溶剂且真空干燥16小时，得到呈黄色固体状的粗中间体(0.55 g)。将该粗中间体(0.55 g)溶于THF (4 mL)中，添加NaOH (2 M，3.44 mL，6.89 mmol)和二碳酸二叔丁酯(0.719 g，3.30 mmol)且在室温下将其搅拌17小时。真空蒸发溶剂且添加水(5 mL)和乙醚(5 mL)。分离水层且在冰-水浴中用10% HCl酸化至pH 3，用EtOAc (15 mL，3×)萃取且用Na2SO4干燥，真空蒸发溶剂，得到呈黄色固体状的实 施例8步骤f (0.50 g)。1H NMR (CDCl3, δ=7.26 ppm, 400 MHz): δ4.69-4.14 (m, 4H),2.29-2.07 (m, 4H), 1.50-1.48 (两个s, 9H)。
实施例8
根据关于合成实施例QC17.1所述的程序，通过使用指定前体和其它合适前体，将实施例8步骤f精制为实施例8。LC/MS：[M+H]+ C50H61F2N8O8的分析计算值：939.46；实测值：939.77。在以下LC条件下，RT=15.99 min：起始% B=10；最终% B=98；梯度时间=35 min；停止时间=35 min；流速=0.35 mL/min；波长=306 nm；溶剂A=水和0.05% TFA；溶剂B=乙腈和0.05% TFA；柱=Waters Acquity BEH C18; 1.7 um; 150×2.1 mm ID；(在35℃下)。
生物活性
在本发明中利用HCV复制子测定，并且如在共同拥有的PCT/US2006/022197中和在O'Boyle等人Antimicrob Agents Chemother. 2005年4月；49(4):1346-53中所述准备、进行和验证该测定。亦如所述(Apath.com)已使用并入萤光素酶报告物的测定方法。
使用HCV-neo复制子细胞和在NS5A区域内含有抗性取代的复制子细胞来测试目前所述的化合物家族。相较于针对野生型细胞的相应抑制性效能，经测定这些化合物对含有突变的细胞具有不同程度的减小抑制活性。因此，本发明的化合物可有效抑制HCV NS5A蛋白质的功能且被理解为如先前在申请PCT/US2006/022197和共同拥有的WO/04014852中所述在组合中有效。应了解，本发明的化合物可抑制HCV的多个基因型。表2显示本发明的代表性化合物针对HCV 1b基因型的EC50(50%有效抑制浓度)值。
本发明化合物可通过除了NS5A抑制以外的额外机制，或非NS5A抑制机制来抑制HCV。在一个实施方案中，本发明的化合物抑制HCV复制子，而在另一实施方案中，本发明的化合物抑制NS5A。本发明的化合物可抑制HCV的多个基因型。针对HCV 1b的EC50范围如下：A(900.01 pM-140 nM)；B (100.01 pM-900 pM)；C (5.01 pM-100 pM)；D (0.5 pM-5 pM)。
表2
本领域技术人员将显而易见，本发明并不限于上述说明性实施例，且其可在不背离其基本属性的情况下以其它特定形式来实施。因此期望，在各方面应视为说明性而非限制性的这些实施例、对所附权利要求书而非上述实施例的参照、以及在权利要求书等效性含义和范围内的所有变化由此意旨涵盖在其中。

Claims (14)

1.一种化合物，其选自：
(2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4'-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-(((1R,3s,5S)-6,6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-1-((1R,3s,5S)-6,6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)-2-氧代基乙基)氨基甲酸甲酯；
(4,4'-联苯二基双((4-氯-1H-咪唑-5,2-二基)(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基(1-((1R,3s,5S)-6,6-二氟双环[3.1.0]己-3-基)-2-氧代基-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯；
；
；
；
；
；和
；
或其药学上可接受的盐。
2.一种化合物，其为
，
；
或其药学上可接受的盐。
3.一种组合物，其包含权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
4.权利要求3的组合物，其进一步包含至少一种具有抗HCV活性的其它化合物。
5.权利要求4的组合物，其中所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。
6.权利要求5的组合物，其中所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、聚乙二醇化干扰素λ、复合干扰素、干扰素α2A和淋巴母细胞样干扰素τ。
7.权利要求4的组合物，其中所述其它化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助T细胞反应的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5'-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
8.权利要求4的组合物，其中所述其它化合物中的至少一种有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCVNS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释放、HCV NS5A蛋白质和IMPDH。
9.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的HCV感染的药物中的用途。
10.权利要求9的用途，其中该药物进一步包括至少一种具有抗HCV活性的其它化合物或其药学上可接受的盐。
11.权利要求10的用途，其中所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。
12.权利要求11的用途，其中所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、聚乙二醇化干扰素λ、复合干扰素、干扰素α2A和淋巴母细胞样干扰素τ。
13.权利要求10的用途，其中所述其它化合物中的至少一种选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助T细胞反应的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5'-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
14.权利要求10的用途，其中所述其它化合物中的至少一种有效抑制选自以下的靶标的功能以治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCVNS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释放、HCV NS5A蛋白质和IMPDH。
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