CN103776945A - 罗红霉素胶囊的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了罗红霉素胶囊的质量控制方法，该方法采用超高效液相色谱法检测罗红霉素胶囊。本发明通过大量实验优选出最佳的流动相组成，流速，检测波长和色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的罗红霉素胶囊的质量控制方法，稳定性和重复性好、分析速度快，分析效率高，可在3分钟以内检测出罗红霉素的含量，并且分离度好，可以灵敏准确的定性、定量检测目标化合物，从而可以高效、客观、全面、准确的评价罗红霉素胶囊的质量，对控制罗红霉素胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物制剂的质量控制方法，具体涉及一种罗红霉素胶囊的质量控制方法。
背景技术
罗红霉素胶囊主要成份为罗红霉素，9-{O-[(2-甲氧基乙氧基)-甲基]-肟基}红霉素，分子式为C41H76N2O。罗红霉素是红霉素A的衍生物，是新一代的大环内酯类抗生素，主要作用于革兰氏阳性菌、厌氧菌、衣原体和支原体等。现有技术中一般采用HPLC法测定罗红霉素含量，但是现有技术的测量方法，操作比较繁琐，尤其是分析时间较长，对于检验时间有较高要求的生产企业，现有技术的普通HPLC方法的分析检测时间较长，并且精密度不高，检测效率不高，不能满足生产过程中，对于分析时间有较高要求的中间产品的质量控制。
因此，为了控制好罗红霉素胶囊制剂的临床安全性，维护患者的利益，满足快速分析的目的，很有必要在现有技术的基础之上，研究设计出能准确检测罗红霉素的检测方法。
发明内容
发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种检测灵敏度高，精密度高，检测速度快，检测结果准确，可以客观、全面、准确的评价罗红霉素胶囊的质量，对控制罗红霉素胶囊剂的质量和保证疗效具有重要意义。
技术方案：为了实现以上目的，本发明所提供的罗红霉素胶囊的质量控制方法，包括以下步骤：
罗红霉素胶囊的质量控制方法，其特征在于，它包括以下步骤：
(1)标准品溶液的制备：精密称取罗红霉素对照品，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液溶解，用0.22μm滤膜过滤，制成浓度为1mg/mL的罗红霉素标准品溶液；
(2)罗红霉素样品溶液的制备：取罗红霉素胶囊内容物适量，研细，精密称取适量置于量瓶中，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液，超声振荡20～30min，使罗红霉素完全溶解，放冷至室温，用0.22μm滤膜过滤，制成浓度为1mg/mL的罗红霉素供试品溶液；
(3)标准曲线的制备：取步骤(1)得到的罗红霉素标准品溶液，分别精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml对照品储备液，置10ml量瓶中，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度标准溶液，分别精密量取系列浓度标准溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪制备标准曲线；
所述的色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为45:55的乙腈：0.067mol/L磷酸二氢铵溶液组成流动相，并用三乙胺调节pH值为6.5，流速：1.5mL/min，检测波长：210nm，柱温30℃；
(4)罗红霉素样品中罗红霉素的含量测定：精密吸取步骤(2)所述的罗红霉素胶囊样品溶液2μl，注入超高效液相色谱仪分析5分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为45:55的乙腈：0.067mol·L-1磷酸二氢铵溶液组成的流动相，并用三乙胺调节pH值为6.5，流速：1.5mL/min，检测波长：210nm，柱温30℃，并按步骤(3)所述的标准曲线测量罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量。
本发明所述的罗红霉素胶囊的质量控制方法，本发明通过实验研究表明，采用常规的0.25μm滤膜过滤不能很好的过滤杂质，研究表明，采用0.22μm孔径的滤膜对罗红霉素样品或标准品进行过滤，可以有效将红霉素等杂质过滤，有利于整个分析过程，提高分析效率。
作为优选方案，本发明所述的罗红霉素胶囊的质量控制方法，步骤(3)中以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：y=261.34x+0.8224，r=0.9999，罗红霉素在0.6026～1.4060mg/mL与峰面积的线性关系良好。
作为优选方案，本发明所述的罗红霉素胶囊的质量控制方法，步骤(3)和(4)所述的反相C18柱为Poroshell 20 SB-C18。
作为优选方案，以上所述的罗红霉素胶囊的质量控制方法，步骤(3)和(4)所述的超高效液相色谱仪的检测器为DAD检测器。
常规的检测方法，灵敏度、精密度不高，尤其是分析时间长，为了严格控制好罗红霉素胶囊的质量，制定检测罗红霉素胶囊含量的方法，本发明经过大量实验对流动相组成、流速、检测波长及色谱柱等色谱条件进行筛选，得到适合分析罗红霉素的最佳色谱条件。
1、本发明通过全波长扫描和3D等高线观察，确定罗红霉素目标化合物在210nm处有较大的吸收，灵敏度高，因此本发明采用210nm作为检测波长，可以准确灵敏的检测到目标化合物。
2、为了缩短罗红霉素的分析时间，提高分析效率，提高罗红霉素的在色谱柱的分离度，本发明通过大量实验筛选流动相的组成，实验结果表明，用体积比为45:55的乙腈：0.067mol·L-1磷酸二氢铵溶液组成的流动相，并用三乙胺调节pH值为6.5作为流动相，可以有效的将罗红霉素在色谱柱上达到很好的分离，不会出现峰重叠等现象，目标化合物峰形好，从而能保证检测结果准确，并且具有分析时间短，分析速度快的优点。
3、同时本发明还对流动相的流动速度进行了考察，如流速过快，分离度不够理想，流速过慢，分析时间长，因此本发明分别考察了2.0mL/min，1.5mL/min、1mL/min、0.8mL/min、0.6mL/min、0.5mL/min、0.4mL/min和0.2mL/min不同流速，实验结果表明，当流动相的流速为1.5mL/min时，各化合物的峰形最好、分离度最好，理论塔板数最高，并且分析速度快，分析时间短，分析效率高，因此本发明采用流动相的流速为1.5mL/min。
4、同时本发明对色谱柱的柱温进行了筛选，考察了色谱柱在20℃、25℃、28℃、30℃和35℃条件下化合物的分离效果，实验结果表明，色谱柱在30℃条件下分离效果最好，分离重复性和稳定性最好。因此本发明采用色谱柱的柱温为30℃。
5、本发明采用超高效液相（UPLC）取代现有技术中普通高效液相（HPLC）的色谱分析目标化合物，选用安捷伦(Agilent)1290Infinity系统。同时本发明对多种色谱柱也进行了筛选，实验结果表明，Poroshell 20 SB-C18色谱柱的分离效果最好。因此，本发明以Poroshell 20 SB-C18柱作为分析柱。
6、本发明通过大量实验筛选，采用0.22μm孔径的滤膜对罗红霉素样品或标准品进行过滤，可有效将杂质过滤，提高分析效率。
有益效果：本发明提供的罗红霉素胶囊的质量控制方法和现有技术相比具有以下优点：
本发明首选超高效液相色谱仪（UPLC），并且根据罗红霉素胶囊中活性成分和杂质成分的结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成、流速，检测波长、色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的罗红霉素胶囊的质量控制方法可以快速，灵敏、准确的检测目标活性成分，可以在3分钟以内检测出罗红霉素的质量，相比现有技术的分析条件，具有更强的分离能力、更高分离度、更高的速度及更高的灵敏度，尤其是具有很高的分析效率，可满足罗红霉素中间产品的质量控制，可以克服现有检测方法分离速度慢，分离效果差，检测灵敏度低、准确度低、稳定性差等诸多缺点，且本发明提供的质量检测方法稳定性好、对分析成分的分离度好，可定性、定量检测分析罗红霉素。因此，本发明提供的罗红霉素胶囊的质量控制方法可以客观、全面、准确的评价罗红霉素胶囊的质量，对控制罗红霉素胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。
附图说明
图1为罗红霉素标准品的超高效液相色谱检测分析图。
图2为罗红霉素胶囊样品中罗红霉素的超高效液相色谱检测分析图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施列1罗红霉素胶囊的质量控制方法的方法学考察
1、稳定性实验
取罗红霉素胶囊内容物适量，研细，精密称取适量置于量瓶中，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液，超声振荡20～30min，使罗红霉素完全溶解，放冷至室温，用0.22μm滤膜过滤，制成浓度为1mg/mL的罗红霉素供试品溶液；然后分别于0、0.5、1、2、3h注入超高效液相色谱仪分析（色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为45:55的乙腈：0.067mol·L-1磷酸二氢铵溶液组成的流动相，并用三乙胺调节pH值为6.5，流速：1.5mL/min，检测波长：210nm，柱温30℃），并按回归方程为：y=261.34x+0.8224，r=0.9999测定罗红霉素，结果罗红霉素峰面积的RSD=1.4%，表明供试品溶液在3h内测定稳定好。
2、重复性实验
精密称定6份罗红霉素胶囊内容物，研细，精密称取适量置于量瓶中，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液，超声振荡20～30min，使罗红霉素完全溶解，放冷至室温，用0.22μm滤膜过滤，制成浓度为1mg/mL的罗红霉素供试品溶液，各取2μL分别注入超高效液相色谱仪分析（色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为45:55的乙腈：0.067mol·L-1磷酸二氢铵溶液组成的流动相，并用三乙胺调节pH值为6.5，流速：1.5mL/min，检测波长：210nm，柱温30℃），并按回归方程为：y=261.34x+0.8224，r=0.9999测定罗红霉素，结果样品中罗红霉素平均含量为97.13%，RSD=0.7%（n=6）。以上重复性实验结果表明，本发明提供的罗红霉素胶囊的检测方法的重复性好。
3、加样回收率实验
称取相当于80%，100%，120%标示量的罗红霉素加入相应辅料各3份，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并按2所述的重复性实验的色谱条件和标准曲线，计算罗红霉素回收率。结果罗红霉素的平均回收率为99.68%（RSD=0.8%，n=9）。表明本发明提供的罗红霉素胶囊的检测方法的准确度高。
实施列2罗红霉素胶囊的质量控制方法，包括以下步骤：
(1)标准品溶液的制备：精密称取罗红霉素对照品，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液溶解，制成浓度为1mg/mL的罗红霉素标准品溶液；
(2)罗红霉素样品溶液的制备：取6批罗红霉素胶囊内容物适量，研细，精密称取适量置于量瓶中，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液，超声振荡20min，使罗红霉素完全溶解，放冷至室温，用0.22μm滤膜过滤，制成浓度为1mg/mL的罗红霉素供试品溶液；
(3)标准曲线的制备：取步骤(1)得到的罗红霉素标准品溶液，分别精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml对照品储备液，置10ml量瓶中，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度标准溶液，分别精密量取系列浓度标准溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪制备标准曲线；以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：y=261.34x+0.8224，r=0.9999，罗红霉素在0.6026～1.4060mg/mL与峰面积的线性关系良好，标准品的色谱分析图如图1所示；
所述的色谱条件为：色谱柱：Poroshell20SB-C18；流动相：体积比为45:55的乙腈：0.067mol/L磷酸二氢铵溶液组成流动相，并用三乙胺调节pH值为6.5，流速：1.5mL/min，检测波长：210nm，柱温30℃；
(4)罗红霉素样品中罗红霉素的含量测定：精密吸取步骤(2)所述的罗红霉素胶囊样品溶液各2μl，注入超高效液相色谱仪分析5分钟，样品的色谱分析图如图2所示；
色谱条件为：色谱柱：Poroshell 20 SB-C18；流动相：体积比为45:55的乙腈：0.067mol·L-1磷酸二氢铵溶液组成的流动相，并用三乙胺调节pH值为6.5，流速：1.5mL/min，检测波长：210nm，柱温30℃，并按步骤(3)所述的标准曲线测量罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量。具体实验结果如表1所示。
通过以上分析，罗红霉素胶囊有效成分在本发明提供的分析条件下，能够很好的分离，峰形好，检测灵敏度高，化合物的标准曲线的线性关系良好，r值均达到0.999以上，尤其是具有分析速度快，分析效率高的优点，可满足需要在短时间内，对多个样品中罗红霉素进行含量测定的要求。
表1罗红霉素胶囊中甲钴胺的检测结果
实验结果表明，本发明提供的罗红霉素胶囊的检测方法，灵敏度高，可以检测到6批罗红霉素胶囊中目标化合物，且具有很好的分离度，从保留时间看出，各化合物和对照品具有很好的匹配度；相比现有技术，本发明提供的罗红霉素胶囊的质量控制方法稳定性和重复性好，尤其是分析时间短，可以快速，高效，客观、全面、准确的评价罗红霉素胶囊的质量，对控制罗红霉素胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.罗红霉素胶囊的质量控制方法，其特征在于，它包括以下步骤：
(1)标准品溶液的制备：精密称取罗红霉素对照品，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液溶解，制成浓度为1mg/mL的罗红霉素标准品溶液；
(2)罗红霉素样品溶液的制备：取罗红霉素胶囊内容物适量，研细，精密称取适量置于量瓶中，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液，超声振荡20~30min，使罗红霉素完全溶解，放冷至室温，用0.22μm滤膜过滤，制成浓度为1mg/mL的罗红霉素供试品溶液；
(3)标准曲线的制备：取步骤(1)得到的罗红霉素标准品溶液，分别精密量取3ml、4 ml、5 ml、6 ml、7ml对照品储备液，置10ml量瓶中，加体积比为45:55的乙腈和浓度0.067mol/L磷酸二氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度标准溶液，分别精密量取系列浓度标准溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪制备标准曲线；
所述的色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为45:55的乙腈：0.067mol/L磷酸二氢铵溶液组成流动相，并用三乙胺调节pH值为6.5，流速：1.5 mL/min，检测波长：210nm，柱温30℃；
(4)罗红霉素样品中罗红霉素的含量测定：精密吸取步骤(2)所述的罗红霉素胶囊样品溶液2μl，注入超高效液相色谱仪分析5分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱；流动相：体积比为45:55的乙腈：0.067mol·L-1磷酸二氢铵溶液组成的流动相，并用三乙胺调节pH值为6.5，流速：1.5 mL/min，检测波长：210nm，柱温30℃，并按步骤(3)所述的标准曲线测量罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量。
2.根据权利要求1所述的罗红霉素胶囊的质量控制方法，其特征在于，步骤(3)中以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：y=261.34x+0.8224，r=0.9999，罗红霉素在0.6026~1.4060 mg/mL与峰面积的线性关系良好。
3.根据权利要求1所述的罗红霉素胶囊的质量控制方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述的反相C18柱为Poroshell 20 SB-C18。
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