CN103764242A - Smb方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于从进料混合物中回收多不饱和脂肪酸（PUFA）产物的色谱分离方法，该方法包括将进料混合物引入到具有多个连接的色谱柱的模拟或真实的移动床色谱设备中，所述模拟或真实的移动床色谱设备含有作为洗脱液的含水有机溶剂；其中，该设备具有包括至少第一区域和第二区域的多个区域，每个区域均具有提取物流和提余物流，可以从所述多个连接的色谱柱收集来自所述提取物流和提余物流的液体；并且其中，（a）从所述第一区域中的柱子中收集含有所述PUFA产物和极性较大的组分的提余物流，并且将所述提余物流引入到所述第二区域中的不相邻的柱子中，和/或（b）从所述第二区域中的柱子中收集含有所述PUFA产物和极性较小的组分的提取物流，并且将所述提取物流引入到所述第一区域中的不相邻的柱子中；将所述PUFA产物在每个区域中与所述进料混合物的不同组分分离开，并且其中，所述含水有机溶剂不是水性醇。

Description

SMB方法
技术领域
本发明涉及一种用于纯化多不饱和脂肪酸（PUFA）及其衍生物的改进的色谱分馏方法。本发明特别涉及一种用于纯化PUFA及其衍生物的改进的模拟或真实的移动床色谱分离方法。
背景技术
脂肪酸（特别是PUFA）及其衍生物是生物学上重要的分子的前体，它们在生物学功能（诸如血小板聚集、炎症和免疫反应）的调节中起到重要作用。因此，PUFA及其衍生物可在治疗学上用于治疗包括CNS病症的广泛的病理病症，包括糖尿病性神经病变的神经病变，心血管疾病，包括炎症性皮肤疾病的一般免疫系统和炎症性病症。
PUFA被发现在天然原材料，诸如植物油和海洋油（marine oil）中。然而，这种PUFA经常与饱和脂肪酸和许多其它杂质掺和在一起存在于这种油中。因此，在营养使用或制药物使用前，应该期望对PUFA进行纯化。
可惜的是，PUFA极其不稳定（fragile）。因此，当在氧的存在下加热时，PUFA易于发生异构化、过氧化和低聚化。因此，难以进行PUFA产物的分馏和纯化来生产纯脂肪酸。即使在真空条件下，蒸馏也可能导致不可接受的产物降解。
模拟和真实移动床色谱是本领域技术人员熟悉的已知技术。操作原理涉及液体洗脱液相和固体吸附剂相的逆流运动。此操作允许溶剂的最小用量且使得该方法经济可行。这种分离技术已经发现在包括碳氢化合物、工业化学品、油、糖和API的不同领域中的几个应用。这种分离技术也被应用于纯化PUFA及其衍生物。
众所周知，在常规的固定床色谱系统中，其组分待分离的混合物通过容器渗出。该容器典型地是圆柱形的，并且典型地被称为柱子（column）。该柱子含有对流体展示出高渗透性的多孔材料的填充（packing）（一般称为固定相）。该混合物的各组分的渗透速率取决于该组分的物理性质，以便各组分依次地且有选择地从该柱子中离去。因此，一些组分趋向于牢固地固定到固定相，并从而将缓慢地渗出，然而其它组分趋向于弱固定并从柱子中更迅速地离去。许多不同的固定床色谱系统已被提出，并均被用于分析和工业生产的目的。
与此相反，模拟移动床系统由含有串联联接在一起的吸附剂的几个单独（individual）的柱子组成。在第一方向上洗脱液通过柱子。在系统中，原料（feedstock）和洗脱液的注入点，以及已分离组分的收集点依靠一系列阀门而周期性地转变。整体效应将模拟含有固体吸附剂的移动床的单个柱子的操作。因此，如在常规的固定床系统中，模拟移动床系统由含有固体吸附剂（洗脱液通过该固体吸附剂）的固定床的柱子组成；但在模拟移动床系统中，该操作像这样以模拟连续逆流移动床。
在几项专利中描述了用于模拟移动床色谱的方法和装置，包括：US2985589、US3696107、US3706812、US3761533、FR-A-2103302、FR-A-2651148和FR-A-2651149，以上全部通过引用而被并入本文。该主题还涉及由Ganetsos和Barker（Marcel Dekker公司，纽约，1993年）所编辑的“制备规模和生产规模色谱法（Preparative and Production Scale Chromatography）”的范围，以上全部通过引用而被并入本文。
真实移动床系统在操作上类似于模拟移动床系统。但不是借助于阀门系统来变换进料混合物和洗脱液的注入点与被分离开的组分收集点，而是使一系列吸附单元（即，柱子）相对于进料点和抽取点进行物理移动。再次，像这样操作以模拟连续逆流移动床。
在几项专利中描述了真实移动床色谱的方法和装置，包括：US6979402、US5069883和US4764276，以上全部通过引用而被并入本文。
模拟和真实移动床技术一般仅适合于分离二元混合物。因此，极性较大的组分将随洗脱液移动，并被收集为提余物流（raffinate stream）；而且极性较小的组分将随吸附剂移动，并被收集为提取物流。因此，难以使用模拟或真实移动床技术来将所期望的产物与含有极性和非极性杂质的粗混合物分离开。这限制了这种技术在从例如鱼油中纯化PUFA产物中的适用性。
相应地，过去当使用模拟或真实移动床技术来将PUFA与天然油分离开时，一般需要在纯化使用模拟或真实移动床技术（参见，例如，EP-A-0697034）所获得的中间产物之前，首先使天然油经过初步分离步骤（例如固定柱色谱）。典型地，最初的纯化步骤移出极性或非极性的组分，从而产生基本上二元混合物，然后使该基本上二元混合物经过移动床色谱。
参照图1来说明这种分离二元混合物的方法。通过考虑含有固定相S的垂直色谱柱来解释模拟或真实连续逆流色谱分离方法的概念，其中，该含有固定相S的垂直色谱柱从柱的底部到顶部被分成多个区间（section），更精确地被分成四个重叠的子区域I、II、III和IV。在底部在IE处依靠泵P来引入洗脱液。在子区域II和子区域III之间的IA+B处引入待分离的组分A和B的混合物。在子区域I和子区域II之间的SB处收集主要含有B的提取物（extract），并且在子区域III和子区域IV之间的SA处收集主要含有A的提余物（raffinate）。
在模拟移动床系统的情况下，通过引入点和收集点相对于固体相的移动来引起固定相S的模拟向下移动。在真实移动床系统的情况下，通过各种色谱柱相对于引入点和收集点的移动来引起固定相S的向下移动。在图1中，洗脱液向上流动，并且在子区域II和子区域III之间注入混合物A+B。各组分将根据它们与固定相的色谱相互作用（chromatographic interaction）（例如在多孔介质上的吸附）进行移动。对固定相展示出较强亲合性的组分B（运动较慢的组分）将被洗脱液较慢地冲走（entrain）并且将延迟地跟随该洗脱液。对固定相展示出较弱亲合性的组分A（运动较快的组分）将容易被该洗脱液冲走。如果正确地估计和控制正确的一组参数（the right set of parameter），特别是在每个区域中的流速，那么将在子区域III和子区域IV之间收集对固定相展示出较弱亲合性的组分A作为提余物，并且在子区域I和子区域II之间收集对固定相展示出较强亲合性的组分B作为提取物。
因此，应当理解的是，图1所示意性说明的常规的移动床系统仅限于二元分馏。
相应地，需要一种可以将PUFA或其衍生物与运动较快和较慢组分（即，极性较大和极性较小的杂质）分离开的单个模拟或真实移动床色谱分离方法，以产生基本上纯的PUFA或其衍生物。进一步期望的是，该方法应该涉及在标准温度和压力条件下操作的低廉洗脱液。
发明内容
现在已经惊奇地发现，可以使用含水有机溶剂洗脱液的单个模拟或真实移动床装置来有效地纯化PUFA产物。因此，本发明提供了一种用于从进料混合物中回收多不饱和脂肪酸（PUFA）产物的色谱分离方法，所述方法包括将所述进料混合物引入到具有多个连接的色谱柱的模拟或真实的移动床色谱设备中，所述模拟或真实的移动床色谱设备含有作为洗脱液的含水有机溶剂；其中，所述设备具有包括至少第一区域和第二区域的多个区域，每个区域均具有提取物流和提余物流，可以从所述多个连接的色谱柱收集来自所述提取物流和提余物流的液体；并且其中，（a）从所述第一区域中的柱子中收集含有所述PUFA产物和极性较大的组分的提余物流，并且将所述提余物流引入到所述第二区域中的不相邻的柱子中，和/或（b）从所述第二区域中的柱子中收集含有所述PUFA产物和极性较小的组分的提取物流，并且将所述提取物流引入到所述第一区域中的不相邻的柱子中；将所述PUFA产物在每个区域中与所述进料混合物的不同组分分离开，并且其中，所述含水有机溶剂不是水性醇。
本发明还提供了一种通过本发明的方法可获得的PUFA产物。
通过本发明的方法所生产的PUFA产物以高产量生产并具有高纯度。另外，典型地由PUFA的蒸馏而产生的特有的杂质的含量非常低。如本文所用的，术语“同分异构杂质”用来表示典型地在含PUFA的天然油的蒸馏过程中所产生的那些杂质。这包括PUFA同分异构体、过氧化反应产物和低聚反应产物。
附图说明
图1示出用于分离二元混合物的模拟或真实移动床方法的基本原理。
图2示出适合于将EPA与运动较快和较慢的组分（即，极性较大和极性较小的杂质）分离开的本发明的第一优选实施方式。
图3示出适合于DHA与运动较快和较慢的组分（即，极性较大和极性较小的杂质）分离开的本发明的第二优选实施方式。
图4更详细地示出适合于将EPA与运动较快和较慢的组分（即，极性较大和极性较小的杂质）分离开的本发明的第一优选实施方式。
图5更详细地示出适合于DHA与运动较快和较慢的组分（即，极性较大和极性较小的杂质）分离开的本发明的第二优选实施方式。
图6更详细地示出适合于从运动较快和较慢的组分（即，极性较大和极性较小的杂质）分离EPA的本发明的第一优选实施方式的替代方法。
图7更详细地示出适合于DHA与运动较快和较慢的组分（即，极性较大和极性较小的杂质）分离开的本发明的第二优选实施方式的替代方法。
图8示出用于从运动较快和较慢的组分（即，极性较大和极性较小的杂质）纯化EPA的本发明的特别优选的实施方式。
图9示出用于从运动较快和较慢的组分（即，极性较大和极性较小的杂质）纯化EPA的本发明的特别优选的实施方式的替代方法。
图10示出用于从运动较快和较慢的组分（即，极性较大和极性较小的杂质）纯化EPA的本发明的特别优选的实施方式。
图11显示通过SMB所生产的EPA产物的GC分析。
图12显示SMB方法中所获得的第一提取物流和第一提余物流的GC FAMES迹线（traces）。
图13显示SMB方法中所获得的第二提取物流和第二提余物流的GC FAMES迹线。
图14显示通过SMB所生产的DHA产物的GC FAMES迹线。
图15显示通过蒸馏所生产的DHA产物的GC FAMES迹线。
图16显示使用其中洗脱液为水性乙腈的色谱技术所生产的EPA产物的GC迹线。
具体实施方式
术语“多不饱和脂肪酸”（PUFA）是指含有一个以上的双键的脂肪酸。这种PUFA为本领域技术人员所众所周知。如本文所用的，PUFA衍生物是甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯、酯、磷脂、酰胺、内酯或盐的形式的PUFA。甘油三酯和酯是优选的。酯是更优选的。酯典型地是烷基酯，优选C1～C6烷基酯，更优选C1～C4烷基酯。酯的实例包括甲酯和乙酯。乙酯是最优选的。
如本文所用的，术语“PUFA产物”是指包含一种或多种多不饱和脂肪酸（PUFA）和/或其衍生物，典型地具有营养或制药重要性的产物。典型地，PUFA产物是单种PUFA或其衍生物。可替代地，PUFA产物是两种或更多种PUFA或其衍生物，例如两种PUFA或其衍生物的混合物。
如本文所用的，术语“区域”是指多个连接的色谱柱，该多个连接的色谱柱含有作为洗脱液的含水有机溶剂，并且具有一个或多个进料混合物流的注入点、一个或多个水和/或有机溶剂的注入点、提余物输出流（take-off stream）（从该提余物输出流中可以从所述多个连接的色谱柱收集液体）以及提取物输出流（从该提取物输出流中可以从所述多个连接的色谱柱收集液体）。典型地，每个区域仅具有一个进料混合物的注入点。在一个实施方式中，每个区域仅具有一个含水有机溶剂洗脱液的注入点。在另一个实施方式中，每个区域具有两个或更多个水和/或有机溶剂的注入点。
术语“提余物”为本领域技术人员所众所周知。在真实和模拟移动床色谱的上下文中，提余物是指与固体吸附剂相相比随液体洗脱液相移动更迅速的组分的流。因此，与进料流相比，提余物流典型地富含极性较大的组分并缺乏极性较小的组分。
术语“提取物”为本领域技术人员所众所周知。在真实和模拟移动床色谱的上下文中，提取物是指与液体洗脱液相相比随固体吸附剂相移动更迅速的组分的流。因此，与进料流相比，提取物流典型地富含极性较小的组分并缺乏极性较大的组分。
当应用于相同设备中的柱子时，如本文中所用的术语“不相邻”是指被一个或多个柱子、优选3个或更多个柱子、更优选5个或更多个柱子、最优选约5个柱子分离的柱子。
因此，（a）当从第一区域中的柱子中收集含有PUFA产物和极性较大的组分的提余物流，并将该提余物流引入到第二区域中的不相邻的柱子中时，从第一区域收集的该提余物流是第二区域的进料混合物。（b）当从第二区域中的柱子中收集含有PUFA产物和极性较小的组分的提取物流，并将该提取物流引入到第一区域中的不相邻的柱子中时，从第二区域收集的该提取物流是第一区域的进料混合物。
典型地，PUFA产物含有至少一种ω-3或ω-6PUFA，优选至少一种ω-3PUFA。ω-3PUFA的实例包括α-亚麻酸（ALA）、十八碳四烯酸（SDA）、二十碳三烯酸（ETE）、二十碳四烯酸（ETA）、二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳五烯酸（DPA）和二十二碳六烯酸（DHA）。优选SDA、EPA、DPA和DHA。更优选EPA和DHA。ω-6PUFA的实例包括亚麻酸（LA）、γ-亚麻酸（GLA）、二十碳二烯酸，二高-γ-亚麻酸（DGLA）、花生四烯酸（ARA）、二十二碳二烯酸、肾上腺酸以及二十二碳五（ω-6）烯酸。优选LA、ARA、GLA和DGLA。
在一个实施方式中，PUFA产物是EPA和/或EPA乙酯（EE）。
在另一个实施方式中，PUFA产物是DHA和/或EPA乙酯（EE）。
在又一实施方式中，PUFA产物是EPA和DHA和/或EPA EE和DHA EE的混合物。
通过本发明的方法分馏的合适的进料混合物可以从包括植物油和动物油及植物脂肪和动物脂肪的天然来源中，和从包括基因修饰的植物、动物和包括酵母的微生物的合成来源中获得。实例包括鱼油、藻油和微藻油以及植物油，例如琉璃苣油、蓝蓟油和月见草油。在一个实施方式中，进料混合物是鱼油。在另一个实施方式，进料混合物是藻油。当期望的PUFA产物是EPA和/或DHA时，藻油特别合适。当期望的PUFA产物是GLA时，基因修饰的红花油特别合适。当期望的PUFA产物是EPA时，基因修饰的酵母特别合适。
在通过本发明的方法进行分馏之前，进料混合物可经历化学处理。例如，进料混合物可以经历甘油酯的酯交换作用或甘油酯的水解，在某些情况下，接着经历选择性处理，诸如结晶、分子蒸馏、尿素分馏、使用硝酸银或其它金属盐溶液的提取、碘内酯化反应或超临界流体分馏。
进料混合物典型地含有PUFA产物以及至少一种极性较大的组分和至少一种极性较小的组分。与PUFA产物相比，极性较小的组分对本发明的方法中使用的吸附剂具有更强的吸附力。在操作期间，这种极性较小的组分典型地随着固体吸附剂相移动优先于随着液体洗脱液相移动。与PUFA产物相比，极性较大的组分对本发明的方法中使用的吸附剂具有更弱的吸附力。在操作期间，这种极性较大的组分典型地随着液体洗脱液相移动优先于随着固体吸附剂相移动。一般而言，极性较大的组分将被分离进入提余物流，而极性较小的组分将分离进入提取物流。
极性较大的组分和极性较小的组分的实例包括：（1）存在于天然油（例如，海洋油或植物油）中的其它组分，（2）在贮藏、精炼和在先前浓缩步骤期间形成的副产物，以及（3）来自在先前浓缩或纯化步骤期间利用的溶剂或试剂的污染物。
（1）的实例包括：其它不需要的PUFA；饱和脂肪酸；固醇，例如胆固醇；维生素；以及环境致污物，诸如多氯联苯（PCB）、聚芳烃（PAH）杀虫剂、含氯的杀虫剂、二噁英和重金属。PCB、PAH、二噁英和含氯的杀虫剂都是非极性极高的组分。
（2）的实例包括来自PUFA产物的同分异构体以及氧化产物或分解产物，例如，脂肪酸及其衍生物的自氧化聚合产物。
（3）的实例包括尿素，可以加入尿素以从进料混合物中移出饱和或单不饱和脂肪酸。
优选地，进料混合物是含PUFA的海洋油，更优选的是包含EPA和/或DHA的海洋油。
用于通过本发明的方法制备浓缩的EPA的典型的进料混合物包括：50～75%的EPA、0～10%的DHA以及包括其它必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其它组分。
用于通过本发明的方法制备浓缩的EPA的优选的进料混合物包括：55%的EPA、5%的DHA以及包括其它必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其它组分。DHA比EPA的极性更小。
用于通过本发明的方法制备浓缩的DHA的典型的进料混合物包括：50～75%的DHA、0～10%的EPA以及包括其它必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其它组分。
用于通过本发明的方法制备浓缩的DHA的优选的进料混合物包括：75%的DHA、7%的EPA以及包括其它必要的ω-3和ω-6脂肪酸的其它组分。EPA比DHA的极性更大。
用于通过本发明的方法制备EPA和DHA的浓缩混合物的典型的进料混合物包括：大于33%的EPA和大于22%的DHA。
本发明的方法需要在所述色谱设备中有多个区域。典型地，使用两个或更多个区。虽然对区域的数量没有特别地限制，但是一般有2～5个区域。优选地，有两个或三个区域，更优选地有两个区域。
典型地，在本发明的方法中使用的设备的每个区域中分离的组分均具有不同的极性。
典型地，（a）存在于每个区域中的含水有机溶剂洗脱液具有不同的水:有机溶剂的比例；和/或
（b）调节经由每个区域中的提取物流和提余物流所收集的液体循环回到相同区域的速率，使得PUFA产物可以与每个区域中的进料混合物的不同组分分离开。
当在本发明的方法中使用的设备具有两个区域时，本发明典型地提供了一种用于从进料混合物中回收多不饱和脂肪酸（PUFA）产物的色谱分离方法，该方法包括将进料混合物引入到具有多个连接的色谱柱的模拟或真实的移动床色谱设备中，该多个连接的色谱柱包括作为洗脱液的含水有机溶剂；其中，该设备具有第一区域和第二区域，每个区域均具有来自所述多个连接的色谱柱的提取物流和提余物流，从该提取物流和提余物流中可以收集液体；并且其中，（a）从第一区域中的柱子中收集含有PUFA产物和极性较大的组分的提余物流，并且将该提余物流引入到第二区域中的不相邻的柱中，和/或（b）从第二区域中的柱子中收集含有PUFA产物和极性较小的组分的提取物流，并且将该提取物流引入到第一区域中的不相邻的柱中，将所述PUFA产物与第一区域中的进料混合物的极性较小的组分分离开，且将所述PUFA产物与第二区域中的进料混合物的极性较大的组分分离开，并且其中，含水有机溶剂不是水性醇。
典型地，当在本发明的方法中使用的设备含有两个区域时，第一区域中的洗脱液比第二区域中的洗脱液含有更多的有机溶剂，而且相对于系统中洗脱液的流动，第二区域是第一区域的下游。因此，系统中的洗脱液典型地从第一区域移动到第二区域。与此相反地，固体吸附剂相典型地从第二区域移动到第一区域。典型地，这两个区域不重叠，即，没有同时在两个区域中的色谱柱。
在本发明的进一步的实施方式中，该设备具有第一区域、第二区域和第三区域。典型地，存在于第一区域、第二区域和第三区域中的含水有机溶剂洗脱液的水:有机溶剂比例不同。如对本领域技术人员来说显而易见的，这样具有可以在在每个区域中移出具有不同极性的杂质的结果。
优选地，当设备具有三个区域时，第一区域中的洗脱液比第二区域和第三区域中的洗脱液含有更多的有机溶剂，而且相对于系统中的洗脱液的流动，第一区域是第二区域和第三区域的上游。典型地，第二区域中的洗脱液比第三区域中的洗脱液含有更多的有机溶剂，而且相对于系统中的洗脱液的流动，第二区域是第三区域的上游。典型地，在第一区域中，所述PUFA产物与进料混合物中比PUFA产物极性小的组分分离开。典型地，在第二区域中，所述PUFA产物与进料混合物中比PUFA产物极性小但比第一区域中分离开的组分极性大的组分分离开。典型地，在第三区域中，所述PUFA产物与进料混合物中比PUFA产物极性大的组分分离开。
在进一步的实施方式中，在第一区域中，所述PUFA产物与进料混合物中比PUFA产物极性小的组分分离开；在第二区域中，所述PUFA产物与进料混合物中比PUFA产物极性大的组分分离开；以及在第三区域中，所述PUFA与进料混合物中比PUFA产物极性大又比第二区域中所分离的组分极性大的组分分离开。
这种具有三个区域的设置适合于将EPA和DHA与含有比DHA和EPA极性小的杂质且也含有比EPA极性大的杂质的混合物分离开。在第一区域中，移出比DHA和EPA极性小的组分作为提取物流，并且收集包含DHA、EPA和比EPA极性大的组分的提余物流，并将该提余物流引入第二区域中。在第二区域中，移出DHA作为提取物流，并且收集包含EPA和比EPA极性大的组分的提余物流，并将该提余物流引入第三区域。在第三区域中，移出比EPA极性大的组分作为提余物流，并且收集已纯化的EPA作为提取物流。在此实施方式中，已纯化的EPA是已纯化的PUFA产物。这种设置具有也可以回收次要PUFA的优势。在这种情况下，次要PUFA是作为来自第二区域的提取物流所收集的DHA。
典型地，除了所述PUFA产物，在本发明的色谱分离方法中还收集另外的次要PUFA产物。优选地，PUFA产物是EPA，并且另外的次要PUFA产物是DHA。
在本发明的进一步的实施方式中，配置该设备以收集PUFA产物，该PUFA产物是EPA和DHA的浓缩混合物。因此，使用含有EPA、DHA、比EPA和DHA极性大的组分以及比EPA和DHA极性小的组分的进料混合物。在第一区域中，移出比EPA和DHA极性小的材料。在第二区域中，移出比EPA和DHA极性更的材料，并且收集EPA和DHA的浓缩混合物作为PUFA产物。
只要设备配置有多个（特别是两个）代表本发明的方法的特征的区域，任何已知的模拟或真实运动床色谱设备均可以用于本发明的方法的目的。如果依照本发明的方法进行配置，US2985589、US3696107、US3706812、US3761533、FR-A-2103302、FR-A-2651148、FR-A-2651149、US6979402、US5069883和US4764276中描述的这些设备都可以使用。
设备中使用的柱子的数量并不受到特别的限制。技术人员将能够容易地确定要使用的柱子的适当的数量。柱子的数量典型地是8个或更多个，优选是15个或更多个。在更优选的实施方式中，使用15个或16个柱子。在另一个更优选的实施方式中，使用19个或20个柱子。在其它更优选的实施方式中，使用30个或更多个柱子。典型地，有不多于50个的柱子，优选不多于40个的柱子。
每个区域由柱子总数量的大约相同份额的柱子组成。因此，在配置有两个区域的设备的情况下，在系统中每个区域典型地由色谱柱总数量的大约一半的色谱柱组成。因此，第一区域典型地包含4个或更多个柱子，优选8个或更多个柱子，更优选约8个柱子。第二区域典型地包含4个或更多个柱子，优选7个或更多个柱子，更优选7个或8个柱子。
设备中使用的柱子的尺寸不特别受限制，并且取决于待纯化的进料混合物的体积。技术人员将能够容易地确定要使用的适当大小的柱子。每个柱子的直径典型地为10～500mm，优选25～250mm，更优选50～100mm，并且最优选70～80mm。每个柱的长度典型地为10～200cm，优选25～150cm，更优选70～110cm，并且最优选80～100cm。
每个区域中的柱子典型地具有相同尺寸，但对于某些应用，可以具有不同尺寸。
柱子的流速受限于跨越一系列柱子中的最大压力，并且柱子的流速取决于柱子的尺寸和固体相的颗粒大小。本领域技术人员将能够容易地建立每个柱子尺寸所需的流速以确保充分解吸。较大直径的柱子一般将需要较高的流动以保持穿过柱子的线性流动。
对于上面所概述的典型的柱子大小，以及对于具有两个区域的设备，典型地，进入第一区域的洗脱液的流速为1～4.5L/min，优选为1.5～2.5L/min。典型地，来自第一区域的提取物的流速为0.1～2.5L/min，优选为0.5～2.25L/min。在来自第一区域的提取物的一部分循环回到第一区域的实施方式中，循环的流速典型地为0.7～1.4L/min，优选为约1L/min。典型地，来自第一区域的提余物的流速为0.2～2.5L/min，优选为0.3～2.0L/min。在来自第一区域的提余物的一部分循环回到第一区域的实施方式中，循环的流速典型地为0.3～1.0L/min，优选为约0.5L/min。典型地，进料混合物引入第一区域的流速为5～150mL/min，优选为10～100mL/min，更优选为20～60mL/min。
对于上面所概述的典型的柱子大小，以及对于具有两个区域的设备，典型地，进入第二区域的洗脱液的流速为1～4L/min，优选为1.5～3.5L/min。典型地，来自第二区域的提取物的流速为0.5～2L/min，优选为0.7～1.9L/min。在来自第二区域的提取物的一部分循环回到第二区域的实施方式中，循环的流速典型地为0.6～1.4L/min，优选为约0.7～1.1L/min，更优选为约0.9L/min。典型地，来自第二区域的提余物的流速为0.5～2.5L/min，优选为0.7～1.8L/min，更优选为约1.4L/min。
如技术人员应理解的，当提及经由各种提取物流和提余物流来收集或移出液体的速率时是指一段时间内移出的液体的体积，典型地为L/min。相似地，当提及液体循环回到相同区域、典型地回到相同区域中的相邻柱子的速率时是指一段时间内循环的液体的体积，典型地为L/min。
典型地，来自第一区域的提取物流、来自第一区域的提余物流、来自第二区域的提取物流和来自第二区域的提余物流中的一个或多个的一部分循环回到相同区域中，典型地回到相同区域的相邻柱子中。
此循环不同于提取物流或提余物流进入另一个区域中的不相邻的柱子的进料。更确切地，该循环涉及流出区域的提取物流或提余物流的一部分回到相同区域中、典型地回到相同区域的相邻柱子中的进料。
经由来自第一或第二区域的提取物流或提余物流所收集的液体循环回到相同区域的速率是经由该流所收集的液体被进料回到相同区域、典型地回到相同区域中的相邻柱子的速率。这可以参照图9看出。第一区域中的提取物的循环速率是从柱子2的底部收集的提取物进料到柱子3的顶部的速率，即，将液体进入柱子3的顶部的流速。第二区域中的提取物的循环速率是在柱子10的底部收集的提取物进料到柱子11的顶部的速率，即，将液体进料到柱子11的顶部的流速。
典型地，通过将经由该流所收集的液体进料到容器中，并随后用泵将来自该容器的一定量的该液体抽回到相同区域中来影响提取物流和/或提余物流的循环。在这种情况下，经由特定的提取物流或提余物流所收集的液体的循环的速率（典型地循环回到相同区域中的相邻柱子的速率）是用泵将液体从容器外抽回到相同区域中，典型地抽回到相邻柱子中的速率。
如技术人员应理解的，经由洗脱液和给料流引入区域中的液体的量与从区域中移出并循环回到相同区域中的液体的量相平衡。因此，参照图9，对于提取物流，进入第一或第二区域的洗脱液（解吸剂）的流速（D）等于经由来自该区域的提取物流所收集的液体积聚到容器中的速率（E1/E2）加上提取物循环回到相同区域中的速率（D-E1/D-E2）。对于区域中的提余物流，提取物循环回到区域中的速率（D-E1/D-E2）加上进料被引入区域中的速率（F/R1）等于经由来自该区域的提余物流所收集的液体积聚到容器中的速率（R1/R2）加上提余物循环回到相同区域中的速率（D+F-E1-R1/D+R1-E2-R2）
从来自区域的特定提取物流或提余物流所收集的液体积聚到容器中的速率可能也被认为等于移出来自该区域的提取物流或提余物流的净速率。
典型地，经由流出第一区域的提取物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率不同于经由流出第二区域的提取物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率，和/或经由流出第一区域的提余物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率不同于经由流出第二区域的提余物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率。
改变经由每个区域中的提取物流和/或提余物流所收集的液体循环回到相同区域中的速率对改变存在于其它提取物流和提余物流中的极性较大和较小的组分的量具有影响。因此，例如，较低的提取物循环速率导致该区域中较少的极性较小的组分被该区域中的提余物流携带。较高的提取物循环速率导致该区域中较多的极性较小的组分被该区域中的提余物流携带。这个可以从例如，图6中所示的本发明的具体实施方式中看出来。经由第一区域中的提取物流所收集的液体循环回到相同区域中的速率（D-E1）将影响被第一区域中的提余物流携带的任何组分A的程度（R1）如何。
典型地，经由来自第一区域的提取物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率比经由来自第二区域的提取物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率更快。优选地，从第一区域中的柱子收集含有PUFA产物与极性更大的组分的提余物流，并将该提余物流引入到第二区域中的不相邻的柱子中，并且经由来自第一区域的提取物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率比经由来自第二区域的提取物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率更快。
或者，经由来自第一区域的提取物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率比经由来自第二区域的提取物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率更慢。
典型地，经由来自第二区域的提余物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率比经由来自第一区域的提余物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率更快。优选地，从第二区域中的柱子收集含有PUFA产物与极性较小的组分的提取物流，并将该提取物流引入到第一区域中的不相邻的柱子中，并且经由来自第二区域的提余物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率比经由第一区域的提余物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率更快。
或者，经由来自第二区域的提余物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率比经由来自第一区域的提余物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率更慢。
步进时间（step time）（即转变进料混合物和洗脱液的注入点与所收集的馏分（fraction）的各输出点（take off point）之间的时间）不特别受限制，并且将取决于所使用的柱子的数量和尺寸以及通过设备的流速。技术人员将能够容易地确定在本发明的方法中使用的合适的步进时间。步进时间典型地为100～1000秒，优选为200～800秒，更优选为约250～约750秒。在一些实施方式中，合适的步进时间为100～400秒，优选为200～300秒，更有优选为约250秒。在其它实施方式中，合适的步进时间为600～900秒，优选为700～800秒，更优选为约750秒。
在本发明的方法中，优选真实移动床色谱。
对于真实和模拟移动床系统，本领域中已知的常规的吸附剂可以用于本发明的方法。每个色谱柱均可以含有相同的或不同的吸附剂。典型地，每个柱子均含有相同的吸附剂。这种通常使用的材料的实例是聚合物珠粒，优选用DVB（二乙烯基苯）成网的聚苯乙烯；和硅胶，优选具有C8或C18烷烃，特别是C18烷烃的反相键合的硅胶。优选地是C18键合的反相硅胶。在本发明的方法中所使用的吸附剂优选是非极性的。
吸附剂固定相材料的形状可以是，例如，球形的或非球形的珠粒，优选为基本上球形的珠粒。这种珠粒的直径典型地具有5～500微米，优选为10～500微米，更优选为15～500微米，更优选为40～500微米，更优选为100～500微米，更优选为250～500微米，甚至更优选为250～400微米，最优选为250～350微米的直径。在一些实施方式中，可以使用直径为5～35微米的珠粒，典型地为10～30微米，优选为15～25微米。一些优选的颗粒大小比过去在模拟和真实移动床方法中使用的珠粒的颗粒大小更大一些。较大颗粒的应用使较低压力的洗脱液能够用于该系统。而且，这在设备的成本节约、效率和寿命方面上具有优势。已惊奇地发现大颗粒大小的吸附剂珠粒可以用于本发明的方法（具有它们相关的优势）中，且在分辨率上没有损失。
吸附剂典型地具有为10～50nm，优选为15～45nm，更优选为20～40nm，最优选为25～35nm的孔大小。
本发明的方法中使用的洗脱液是除水性醇外的含水有机溶剂。
含水有机溶剂典型地包括水和一种或多种醚、酯、酮或腈或它们的混合物。
醚溶剂为本领域技术人员所众所周知。醚典型地为短链醚。醚典型地具有化学式R-O-R'，其中R和R'相同或不同，并且代表直链或支链的C1～C6烷基。C1～C6烷基优选为未取代的。优选的醚包括二乙醚、二异丙醚和甲基叔丁基醚（MTBE）。
酯溶剂为本领域技术人员所众所周知。酯典型地为短链酯。酯典型地具有化学式R-(C=O)-O-R'，其中R和R'相同或不同，并且代表直链或支链的C1～C6烷基。优选的酯包括乙酸甲酯和乙酸乙酯。
酮溶剂为本领域技术人员所众所周知。酮典型地为短链酮。酮典型地具有化学式R-(C=O)-R'，其中R和R'相同或不同，并且代表直链或支链的C1～C6烷基。C1～C6烷基优选为未取代的。优选的酮包括丙酮、甲乙酮和甲基异丁基酮（MIBK）。
腈溶剂为本领域技术人员所众所周知。腈典型地为短链腈。腈典型地具有化学式R-CN，其中R代表直链或支链的C1～C6烷基。C1～C6烷基优选为未取代的。优选的腈包括乙腈。
含水有机溶剂优选为水性乙腈。
当含水有机溶剂是水性乙腈时，洗脱液典型地含有高达30wt%的水，余量为乙腈。优选地，洗脱液含有5～25wt%的水，余量为乙腈。更优选地，洗脱液含有10～20wt%的水，余量为乙腈。甚至更优选地，洗脱液含有15～25wt%的水，余量为乙腈。
水性醇典型地包含水和一种或多种短链醇。短链醇典型地具有1～6个碳原子。醇的实例包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇和叔丁醇。
典型地，洗脱液不是超临界状态。典型地，洗脱液为液体。
典型地，整个设备中的洗脱液的平均水:有机溶剂比例为0.1:99.9～30:70体积份，优选为0.1:99.9～9:91体积份，更优选为0.25:99.75～7:93体积份，甚至更优选为0.5:99.5～6:94体积份。
每个区域中的洗脱液的洗脱能力典型不同。优选地，第一区域中的洗脱液的洗脱能力比第二区域和后续区域中的洗脱液的洗脱能力更大。在实践中，这个通过变化每个区域中的水和有机溶剂的相对量来获得。取决于有机溶剂的选择，它们可以是比水更强的解吸剂，或者，它们可以是比水更弱的解吸剂。例如，乙腈是比水更强的解吸剂。因此，当含水有机溶剂是乙腈时，第一区域中的洗脱液中的乙腈的量典型地比第二区域和后续区域中的洗脱液中的乙腈的量更大。
在存在于每个区域中的含水有机溶剂具有不同的水有机溶剂含量的实施方式中，第一区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例典型地为5:95～25:75体积份，优选为10:90～15:85体积份。或者，第一区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例可为0:100～5:95体积份，优选为0.1:99.9～2.5:97.5体积份，更优选为0.25:99.75～2:98体积份，且最优选为0.5:99.5～1.5:98.5体积份。
在这些实施方式中，第二区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例典型地为10：90～30:70体积份，优选为15:85～20:80体积份。或者，第二区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例可为3:97～7:93体积份，优选为4:96～6:94体积份，更优选为4.5:95.5～5.5:94.5体积份。
在存在于每个区域中的含水有机溶剂具有不同的水有机溶剂含量的特别优选的实施方式中，第一区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例为0.5:99.5～1.5:98.5体积份，并且第二区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例为4.5:95:5～5.5:94.5体积份。
在调节经由每个区域中的提取物流和提余物流所收集的液体循环回到相同区域中的速率以使得PUFA产物可以与每个区域中的进料混合物的不同组分分开的实施方式中，每个区域中的洗脱液的水:有机溶剂的比例可以相同或不同。典型地，每个区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例为0.5:99.5～5.5:94.5体积份。在一个实施方式中，在第一区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例比第二区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例更低。在另一个实施方式中，在第一区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例比第二区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例更高。在进一步的实施方式中，在第一区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例与第二区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例相同。
应理解的是，上面所指的每个区域中的水与有机溶剂的比例是该整体区域范围中的平均比例。
典型地，通过将水和/或有机溶剂引入到区域中的一个或多个柱子中来控制每个区域中的洗脱液的水:有机溶剂的比例。因此，例如，为了获得第一区域中的水:有机溶剂比例低于在第二区域中的水:有机溶剂比例，引入第一区域的水典型地比引入第二区域的水更慢。在一些实施方式中，基本上纯的有机溶剂和基本上纯的水可以在不同的点处被引入每个区域中。这两个流的相对流速将确定跨越该区域的整体溶剂的组成分布（profile）。在其它实施方式中，不同的有机溶剂/水混合物可以在不同的点处被引入每个区域中。这将涉及将两种或更多种不同的有机溶剂/水混合物引入到该区域中，每种有机溶剂/水混合物具有不同的有机溶剂:水的比例。在此实施方式中，有机溶剂/水混合物的相对流速和相对浓度将确定跨越该区域的整体溶剂的组成分布。在每个区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例相同的其它实施方式中，相同有机溶剂/水混合物被引入到每个区域中。
典型地，在15～55℃下，优选在20～40℃下，更优选在约30℃下进行本发明的方法。因此，该方法典型地在室温下进行，但也可以在高温下进行。
本发明的方法涉及：将进料流引入到一个区域（例如第一区域）中，收集富含PUFA产物的第一中间流，以及将第一中间流引入到另一个区域（例如第二区域）中。因此，当该设备具有两个区域时，该方法涉及（a）收集来自第一区域的第一中间流并将它引入到第二区域中，或者（b）收集来自第二区域的第一中间流并引入它到第一区域中。以此方式，在单一方法中PUFA产物可以与极性较大和极性较小的组分分离开。
（a）从第一区域中的柱子收集含有PUFA产物和极性较大的组分的提余物流并将该提余物流引入到第二区域中的不相邻的柱子中，或者（b）从第二区域中的柱子收集含有PUFA产物和极性较小的组分的提取物流并将该提取物流引入到第一区域中的不相邻的柱子中。
在特别优选的实施方式中，该设备具有两个区域，并且本发明的方法包括：
（i）将进料混合物引入到第一区域中，并且移出富含PUFA产物的第一提余物流和缺乏PUFA产物的第一提取物流，以及
（ii）将第一提余物流引入到第二区域中，移出缺乏PUFA产物的第二提余物流，并且收集第二提取物流以获得PUFA产物。
此特别优选的实施方式适合于从进料混合物纯化EPA。
此特别优选的实施方式示于图2中。包含PUFA产物（B）和极性较大（C）和极性较小（A）的组分的进料混合物F被引入到第一区域中。在第一区域中，移出极性较小的组分（A）作为提取物流E1。移出PUFA产物（B）和极性较大的组分（C）作为提余物流R1。然后，提余物流R1被引入到第二区域中。在第二区域中，移出极性较大的组分（C）作为提余物流R2。收集PUFA产物（B）作为提取物流E2。
此实施方式更详细地示于图4中。除了示出有机溶剂解吸剂（D）和水（W）引入到每个区域中的点之外，图4和图2相同。有机溶剂解吸剂（D）和水（W）一起组成洗脱液。（D）相典型地是基本上纯的有机溶剂；但在某些实施方式中，（D）相可以是主要包含有机溶剂的有机溶剂/水混合物。（W）相典型地是基本上纯的水；但在某些实施方式中，（W）相可以是主要包含水的有机溶剂/水混合物，例如98%的水/2%的乙腈的混合物。
此特别优选的实施方式的进一步图解示于图6中。这里没有分开的水注入点，而代替地，在（D）处注入有机溶剂解吸剂。
可以通过改变每个区域中的洗脱液的解吸能力来辅助分离成提余物流和提取物流。这个可以通过在不同点处将洗脱液的有机溶剂（或有机溶剂丰富）的组分和水（或水丰富）的组分引入每个区域中来获得。因此，典型地，相对于该系统中洗脱液的流动，在提取物输出点的上游处引入有机溶剂，并且在提取物输出点和将原料引入到该区域的点之间引入水。这示于图4。
或者，可以通过改变经由来自两个区域的提取物流和提余物流所收集的液体循环回到相同区域中的速率来辅助分离。
典型地，在此特别优选的实施方式中，经由来自第一区域的提取物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率比经由来自第二区域的提取物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率更快；或者第一区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例比在第二区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例更低。
在此特别优选的实施方式中，相对于第一区域中的洗脱液的流动，典型地在将进料混合物引入到第一区域中的点的下游处，移出第一区域中的第一提余物流。
在此特别优选的实施方式中，相对于第一区域中的洗脱液的流动，典型地在将进料混合物引入到第一区域中的点的上游处，移出第一区域中的第一提取物流。
在此特别优选的实施方式中，相对于第二区域中的洗脱液的流动，典型地在将第一提余物流引入到第二区域中的点的下游处，移出第二区域中的第二提余物流。
在此特别优选的实施方式中，相对于第二区域中的洗脱液的流动，典型地在将第一提余物流引入到第二区域中的点的上游处，收集第二区域中的第二提取物流。
典型地，在此特别优选的实施方式中，相对于第一区域中的洗脱液的流动，在移出第一提取物流的点的上游处，将有机溶剂或含水有机溶剂引入到第一区域中。
典型地，在此特别优选的实施方式中，当将水引入到第一区域中时，相对于第一区域中的洗脱液的流动，在引入进料混合物的点的上游处但在移出第一提取物流的点的下游处，将水引入到第一区域中。
典型地，在此特别优选的实施方式中，相对于第二区域中的洗脱液的流动，在移出第二提取物流的点的上游处，将有机溶剂或含水有机溶剂引入到第二区域中。
典型地，在此特别优选的实施方式中，当将水引入到第二区域时，相对于第二区域中的洗脱液的流动，在引入第一提余物流的点的上游处但在移出第二提取物流的点的下游处，将水引入到第二区域中。
在另一个特别优选的实施方式中，该设备具有两个区域，而且该方法包括：
（i）将进料混合物引入到第二区域中，并且移出缺乏PUFA产物的第一提余物流和富含PUFA产物的第一提取物流，以及
（ii）将第一提取物流引入到第一区域中，移出缺乏PUFA产物的第二提取物流，并且收集第二提余物流以获得PUFA产物。
此特别优选的实施方式适合于从进料混合物纯化DHA。
此特别优选的实施方式示于图3中。将包含PUFA产物（B）和极性较大（C）和极性较小（A）的组分的进料混合物F引入到第二区域中。在第二区域中，移出极性较大的组分（C）作为提余物流R1。收集PUFA产物（B）和极性较小的组分（A）作为提取物流E1。然后，将提取物流E1引入到第一区域中。在第一区域中，移出极性较小的组分（A）作为提取物流E2。收集PUFA产物（B）作为提余物流R2。
此实施方式更详细地示于图5中。除了示出有机溶剂解吸剂（D）和水（W）引入到每个区域中的点之外，图5和图3相同。如上所述，（D）相典型地是基本上纯的有机溶剂；但在某些实施方式中，（D）相可以是主要包含有机溶剂的有机溶剂/水混合物。（W）相典型地是基本上纯的水；但在某些实施方式中，（W）相可以是主要包含水的有机溶剂/水混合物，例如98%的水/2%的乙腈的混合物。
此特别优选的实施方式的进一步图解示于图7中。这里没有分开的水注入点，而代替地，在（D）处注入有机溶剂解吸剂。
典型地，在此实施方式中，将经由来自第二区域的提余物流所收集的液体再次引入到第二区域中的速率比经由来自第一区域的提余物流所收集的液体再次引入到第一区域中的速率更快；或者第一区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例比在第二区域中的洗脱液的水:有机溶剂比例更低。
在此第二特别优选的实施方式中，相对于第二区域中的洗脱液的流动，典型地在将进料混合物引入到第二区域中的点的下游处，移出第二区域中的第一提余物流。
在此第二特别优选的实施方式中，相对于第二区域中的洗脱液的流动，典型地在将进料混合物引入到第二区域中的点的上游处，收集第二区域中的第一提取物流。
在此第二特别优选的实施方式中，相对于第一区域中的洗脱液的流动，典型地在将第一提取物流引入到第一区域中的点的下游处，收集第一区域中的第二提余物流。
在此第二特别优选的实施方式中，相对于第一区域中的洗脱液的流动，典型地在将第一提取物流引入到第一区域中的点的上游处，移出第一区域中的第二提取物流。
典型地，在此第二特别优选的实施方式中，相对于第二区域中的洗脱液的流动，在移出第一提取物流的点的上游处，将有机溶剂或含水有机溶剂引入到第二区域中。
典型地，在此第二特别优选的实施方式中，当将水引入到第二区域中时，相对于第二区域中的洗脱液的流动，在引入进料混合物的点的上游处但在移出第一提取物流的点的下游处，将水引入到第二区域中。
典型地，在此第二特别优选的实施方式中，相对于第一区域中的洗脱液的流动，在移出第二提取物流的点的上游处，将有机溶剂或含水有机溶剂引入到第一区域中。
典型地，在此第二特别优选的实施方式中，当将水引入到第一区域中时，相对于第一区域中的洗脱液的流动，在引入第一提余物流的点的上游处但在移出第二提取物流的点的下游处，将水引入到第一区域中。
在本发明的优选的实施方式中，模拟或真实的移动床色谱设备由十五个色谱柱组成。这些色谱柱被称作柱子1～15。十五个柱子串联排列，使得柱子1的底部连接至柱子2的顶部，柱子2的底部连接至柱子3的顶部，等等。这可以可选择地经由保持（holding）容器，随着循环流进入下一个柱子。洗脱液通过该系统的流动是从柱子1到柱子2到柱子3等等。吸附剂通过该系统的流动从柱子15到柱子14到柱子13等等。
在最优选的实施方式中，第一区域典型地由如上所讨论的联接起来的八个相邻的柱子（柱子1～8）组成。在此最优选的实施方式中，第二区域典型地由如上所讨论的联接起来的七个相邻的柱子（柱子9～15）组成。为了避免疑惑，第一区域中的柱子8的底部连接到第二区域中的柱子9的顶部。
最优选的实施方式示于图8中。将包含PUFA产物（B）和极性较大（C）和极性较小（A）的组分的进料混合物F引入到第一区域中的柱子5的顶部。将有机溶剂解吸剂引入到第一区域中的柱子1的顶部。将水引入到第一区域中的柱子4的顶部。在第一区域中，从柱子2的底部移出极性较小的组分（A）作为提取物流E1。从柱子7的底部移出PUFA产物（B）和极性较大的组分（C）作为提余物流R1。然后，在柱子13的顶部处，将提余物流R1引入到第二区域中。将有机溶剂解吸剂引入到第二区域中的柱子9的顶部。将水引入到第二区域中的柱子12的顶部。在第二区域内，在柱子15的底部处，移出极性较大的组分（C）作为提余物流R2。在柱子10的底部处，收集PUFA产物（B）作为提取物流E2。
在此最优选的实施方式中，将有机溶剂典型地引入到第一区域中的柱子1的顶部。
在此最优选的实施方式中，将水典型地引入到第一区域中的柱子4的顶部。
在此最优选的实施方式中，将有机溶剂典型地引入到第二区域中的柱子9的顶部。
在此最优选的实施方式中，将有机溶剂典型地引入到第二区域中的柱子12的顶部。
在此最优选的实施方式中，将进料流典型地引入到第一区域中的柱子5的顶部。
在此最优选的实施方式中，典型地从第一区域中的柱子7的底部收集第一提余物流，并将第一提余物流引入到第二区域中的柱子13的顶部。第一提余物流在被引入到柱子13之前可以可选地被收集在容器中。
在此最优选的实施方式中，典型地从第一区域中的柱子2的底部处移出第一提取物流。第一提取物流可以可选地被收集在容器中，并再次被引入到第一区域中的柱子3的顶部。
在此最优选的实施方式中，典型地从第二区域中的柱子15的底部处移出第二提余物流。
在此最优选的实施方式中，典型地从第二区域中的柱子10的底部处收集第二提取物流。此第二提取物流典型地含有已纯化的PUFA产物。第二提取物流可以可选地被收集在容器中，并再次被引入到第二区域中的柱子11的顶部。
典型地，在此最优选的实施方式中，第一区域中的水:有机溶剂的比例比第二区域中的水:有机溶剂的比例更低。
进一步最优选的实施方式示于图9中。将含有PUFA产物（B）和极性较大（C）和极性较小（A）的组分的进料混合物F引入到第一区域中的柱子5的顶部。将含水有机溶剂解吸剂引入到第一区域中的柱子1的顶部。在第一区域中，从柱子2的底部移出极性较小的组分（A）作为提取物流E1。从柱子7的底部移出PUFA产物（B）和极性较大的组分（C）作为提余物流R1。然后，在柱子12的顶部处，将提余物流R1引入到第二区域中。将含水有机溶剂解吸剂引入到第二区域中的柱子9的顶部。在第二区域中，在柱子14的底部处，移出极性较大的组分（C）作为提余物流R2。在柱子10的底部处，收集PUFA产物（B）作为提取物流E2。
在此最优选的实施方式中，将含水有机溶剂典型地引入到第一区域中的柱子1的顶部。
在此最优选的实施方式中，将含水有机溶剂典型地引入到第二区域中的柱子9的顶部。
在此最优选的实施方式中，将进料流典型地引入到第一区域中的柱子5的顶部。
在此最优选的实施方式中，典型地从第一区域中的柱子7的底部收集第一提余物流，并将该第一提余物流引入到第二区域中的柱子12的顶部。第一提余物流在被引入到柱子12之前可以可选地被收集到容器中。
在此最优选的实施方式中，典型地从第一区域中的柱子2的底部移出第一提取物流。第一提取物流可以可选地被收集到容器中，并且一部分被再次引入到第一区域中的柱子3的顶部。经由来自第一区域的提取物流所收集的液体循环回到第一区域中的速率是用泵将液体从此容器抽到柱子3的顶部的速率。
在此最优选的实施方式中，典型地从第二区域中的柱子14的底部移出第二提余物流。
在此最优选的实施方式中，从第二区域中的柱子10的底部收集第二提取物流。此第二提取物流典型地含有已纯化的PUFA产物。第二提取物流可以可选地被收集到容器中，并且一部分再次被引入到第二区域中的柱子11的顶部。经由来自第二区域的提取物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率是用泵将液体从此容器抽到柱子11的顶部的速率。
在此最优选的实施方式中，经由来自第一区域的提取物所收集的液体循环回到第一区域中的速率典型地比经由来自第二区域中的提取物流所收集的液体循环回到第二区域中的速率更快。
在此最优选的实施方式中，每个区域中的含水有机溶剂洗脱液基本相同。
在本发明的进一步优选的实施方式中，模拟或真实的移动床色谱设备由十九个色谱柱组成。这些色谱柱被称为柱子1～19。十五个柱子串联排列，使得柱子1的底部连接到柱子2的顶部，柱子2的底部连接到柱子3的顶部，等等。洗脱液通过该系统的流动从柱子1到柱子2到柱子3等。吸附剂通过该系统的流动从柱子19到柱子18到柱子17等。
在此实施方式中，第一区域典型地由如上面所讨论的联接起来的十个相邻的柱子（柱子1～10）组成。第二区域典型地由如上面所讨论的联接起来的八个相邻的柱子（柱子11～19）组成。
此进一步优选的实施方式示于图10中。将包含PUFA产物（B）和极性较大（C）和极性较小（A和A'）的组分的进料混合物引入到第一区域中的柱子7的顶部。将包含100%的有机溶剂的第一解吸剂（D1）引入到第一区域中的柱子1的顶部。将包含水/有机溶剂混合物（优选2%的乙腈和98%的水）的第二解吸剂（D2）引入到第一区域中的柱子5的顶部。在第一区域中，分别从柱子1和4的底部移出极性较小的组分（A'）和（A）作为提取物流E1'和E1。从柱子10的底部移出PUFA产物（B）和极性较大的组分（C）作为提余物流R1。然后，将提余物流R1在柱17的顶部处引入到第二区域中。将包含水/有机溶剂混合物（优选2%的乙腈和98%的水）的第二解吸剂（D2）引入到第二区域中的柱子11的顶部。在第二区域中，在柱子19的底部处移出极性较大的组分（C）作为提余物流R2。在柱14的底部处收集PUFA产物（B）作为提取物流E2。
在此优选的实施方式中，将有机溶剂典型地引入到第一区域中的柱子1的顶部。
在此优选的实施方式中，将2%的MeCN/98%的水的混合物典型地引入到第一区域中的柱子5的顶部。
在此优选的实施方式中，将2%的MeCN/98%的水的混合物典型地引入到第二区域中的柱子11的顶部。
在此优选的实施方式中，将进料流典型地引入到第一区域中的柱子7的顶部。
在此优选的实施方式中，典型地从第一区域中的柱子10的底部收集第一提余物流，并将该第一提余物流引入到第二区域中的柱子17的顶部。第一提余物流在被引入到柱子17中之前可以可选地被收集到容器中。
在此优选的实施方式中，典型地从第一区域中的柱子1和4的底部移出提取物流。从顶部或柱子4收集到的提取物流可以可选被收集到容器中并再次被引入到第一区域中的柱子5的顶部。
在此优选的实施方式中，优选地从第二区域中的柱子19的底部移出第二提余物流。
在此优选的实施方式中，典型地从第二区域中的柱子14的底部收集第二提取物流。此第二提取物流典型地含有已纯化的PUFA产物。第二提取物流可以可选地被收集到容器内并再次被引入到第二区域中的柱子15的顶部。
典型地，在此最优选的实施方式中，第一区域中的水:有机溶剂的比例比第二区域中的水:有机溶剂的比例更低。
本发明的方法使得待取得的PUFA产物的纯度远高于使用传统色谱技术可能的取得的纯度。通过本发明的方法生产的PUFA产物也具有特别有利的杂质组成分布，非常不同于通过已知技术所制备的油中所观测到的那些。因此，本发明也涉及含有PUFA产物的组合物，例如通过本发明的方法获得的一种含有PUFA产物的组合物。
在实践中，本发明的方法一般将通过计算机控制。因此，本发明也提供了一种用于控制如本文所定义的色谱设备的计算机程序，该计算机程序含有代码模块（code means），当执行时命令设备进行本发明的方法。
下面的实例解释本发明。
实施例
参考实施例1
根据图8示意性所示的系统，使用真实移动床色谱系统分馏源于鱼油的原料（55重量%的EPA EE，5重量%的DHA EE），该真实移动床色谱系统使用键合的C18硅胶（颗粒大小300μm）作为固定相并使用水性甲醇作为洗脱液。15个柱（直径：76.29mm，长度：914.40mm）如图8所示串联联接。
操作参数和流速是如下八种不同的情况。对于下面的条件，以高水平的纯度（由GC FAMES测定为85～98%）生产EPA EE。区域1提取物和提余物的GC FAMES迹线和区域2提取物和提余物的GC FAMES迹线分别如图11和12所示。
参考实施例1a
步进时间：750秒
周期时间：200分钟
原料（F）进料速率：70ml/min
解吸剂（D）进料速率：850ml/min
提取物速率：425ml/min
提余物速率：495ml/min
参考实施例1b
步进时间：250秒
周期时间：66.67分钟
原料（F）进料速率：210ml/min
解吸剂（D）进料速率：2550ml/min
提取物速率：1275ml/min
提余物速率：1485ml/min
参考实施例1c
步进时间：500秒
周期时间：133.33分钟
原料（F）进料速率：25ml/min
第一区域中的解吸剂进料速率（D1）：2050ml/min
第一区域中的提取物容器积累速率（E1）：1125ml/min
第一区域中的提取物循环速率（D1-E1）：925ml/min
第一区域中的提余物速率（R1）：950ml/min
第二区域中的解吸剂进料速率（D2）：1700ml/min
第二区域中的提取物容器积累速率（E2）：900ml/min
第二区域中的提取物循环速率（D2-E2）：800ml/min
第二区域中的提余物速率（R2）：800ml/min
参考实施例1d
步进时间：250秒
周期时间：66.67分钟
原料（F）进料速率：50ml/min
第一区域中的解吸剂进料速率（D1）：4125ml/min
第一区域中的提取物容器积累速率（E1）：2250ml/min
第一区域中的提取物循环速率（D1-E1）：1875ml/min
第一区域中的提余物速率（R1）：1925ml/min
第二区域中的解吸剂进料速率（D2）：3375ml/min
第二区域中的提取物容器积累速率（E2）：1800ml/min
第二区域中的提取物循环速率（D2-E2）：1575ml/min
第二区域中的提余物速率（R2）：1575ml/min
参考实施例1e
步进时间：500秒
周期时间：133.33分钟
原料（F）进料速率：50ml/min
第一区域中的解吸剂进料速率（D1）：4000ml/min
第一区域中的提取物容器积累速率（E1）：2250ml/min
第一区域中的提取物循环速率（D1-E1）：1750ml/min
第一区域中的提余物速率（R1）：1800ml/min
第二区域中的解吸剂进料速率（D2）：3200ml/min
第二区域中的提取物净积累速率（E2）：1750ml/min
第二区域中的提取物循环速率（D2-E2）：1450ml/min
第二区域中的提余物速率（R2）：1450ml/min
参考实施例1f
步进时间：250秒
周期时间：66.67分钟
原料（F）进料速率：100ml/min
第一区域中的解吸剂进料速率（D1）：4050ml/min
第一区域中的提取物容器积累速率（E1）：2100ml/min
第一区域中的提取物循环速率（D1-E1）：1950ml/min
第一区域中的提余物速率（R1）：2050ml/min
第二区域中的解吸剂进料速率（D2）：3300ml/min
第二区域中的提取物净积累速率（E2）：1700ml/min
第二区域中的提取物循环速率（D2-E2）：1600ml/min
第二区域中的提余物速率（R2）：1600ml/min
参考实施例1g
步进时间：500秒
周期时间：133.33分钟
原料（F）进料速率：25ml/min
第一区域中的解吸剂进料速率（D1）：1275ml/min
第一区域中的提取物容器积累速率（E1）：750ml/min
第一区域中的提取物循环速率（D1-E1）：550ml/min
第一区域中的提余物速率（R1）：575ml/min
第二区域中的解吸剂进料速率（D2）：1275ml/min
第二区域中的提取物净积累速率（E2）：950ml/min
第二区域中的提取物循环速率（D2-E2）：325ml/min
第二区域中的提余物速率（R2）：325ml/min
参考实施例1h
步进时间：250秒
周期时间：66.67分钟
原料（F）进料速率：50ml/min
第一区域中的解吸剂进料速率（D1）：2550ml/min
第一区域中的提取物容器积累速率（E1）：1500ml/min
第一区域中的提取物循环速率（D1-E1）：950ml/min
第一区域中的提余物速率（R1）：1000ml/min
第二区域中的解吸剂进料速率（D2）：2000ml/min
第二区域中的提取物净积累速率（E2）：900ml/min
第二区域中的提取物循环速率（D2-E2）：600ml/min
第二区域中的提余物速率（R2）：600ml/min
参考实施例2
根据图10示意性所示的系统，使用真实移动床色谱系统分馏包含二十碳四烯酸乙酯（ETA EE）、EPA EE及它们的同分异构体以及DHA EE的源于鱼油的原料，该真实移动床色谱系统使用键合的C18硅胶（颗粒大小40～60mm）作为固定相并使用水性甲醇作为洗脱液。19个柱子（直径：10mm，长度：250mm）如图10所示串联联接。
操作参数和流速如下。
周期时间：600秒
原料（F）进料速率：0.5ml/min
进入第一区域的解吸剂（D1，100%的甲醇）进料速率：6ml/min
进入第一区域的解吸剂（D2，99%的甲醇/1%的水）进料速率：6ml/min
来自第一区域中的提取物（E1'）速率：3ml/min
来自第一区域中的提取物（E1）速率：1.9ml/min
来自第一区域的提余物（R1）速率：4.6ml/min
进入第二区域的解吸剂（D2，97%的甲醇/3%的水）进料速率：6ml/min
来自第二区域的提取物（E2）速率：2.4ml/min
来自第二区域的提余物（R2）速率：4.6ml/min
再次，以高水平的纯度的生产EPA EE（大于90重量%，大于95重量%，大于98重量%）。
参考实施例3
根据图8示意性所示的系统，使用真实移动床色谱系统分馏源于鱼油的原料（55重量%的EPA EE，5重量%的DHA EE），该真实移动床色谱系统使用键合的C18硅胶（颗粒大小300μm，颗粒孔隙度150埃）作为固定相并使用水性甲醇作为洗脱液。15个柱子（直径：10mm，长度：250mm）如图8所示串联联接。
操作参数和流速如下。
周期时间：380秒
原料（F）进料速率：0.5ml/min
进入第一区域的解吸剂（D，98.5%的甲醇/1.5%的水）进料速率：9ml/min
进入第一区域的富水相（W，85%的甲醇/15%的水）进料速率：3.1ml/min
来自第一区域的提取物（E1）速率：4ml/min
来自第一区域的提余物（R1）速率：8.6ml/min
进入第二区域的解吸剂（D，97%的甲醇/3%的水）进料速率：10.8ml/min
进入第二区域的富水相（W，85%的甲醇/15%的水）进料速率：3.1ml/min
来自第二区域的提取物（E2）速率：4.1ml/min
来自第二区域的提余物（R2）速率：10.3ml/min
以高水平的纯度（>95%的纯度）生产EPA EE。产物的GC迹线如图13所示。
参考实施例4
根据图8示意性所示的系统，使用真实移动床色谱系统分馏源于鱼油的原料（70重量%的DHA EE，7重量%的EPA EE），该真实移动床色谱系统使用键合的C18硅胶（颗粒大小300μm）作为固定相并使用水性甲醇作为洗脱液。15个柱子（直径：76.29mm，长度：914.40mm）如图8所示串联联接。
操作参数和流速如下。
步进时间：600秒
周期时间：160分钟
原料（F）进料速率：25ml/min
第一区域中的解吸剂（D1）进料速率：2062.5ml/min
第一区域中的提取物（E1）速率：900ml/min
第一区域中的提余物（R1）速率：1187.5ml/min
第二区域中的解吸剂（D2）进料速率：1500ml/min
第二区域中的提取物速率（E2）：450ml/min
第二区域中的提余物速率（R2）：1050ml/min
以高水平的纯度（GC FAMES测量>97%）生产DHA EE。区域2提取物的GC FAMES迹线如图14所示。
参考实施例5
根据图8示意性所示的系统，使用真实移动床色谱系统分馏源于鱼油的原料（33重量%的EPA EE，22重量%的DHA EE），该真实移动床色谱系统使用键合的C18硅胶（颗粒大小300μm）作为固定相并使用水性甲醇作为洗脱液。15个柱子（直径：76.29mm，长度：914.40mm）如图8所示串联联接。
操作参数和流速如下。
步进时间：380秒
周期时间：101.33分钟
原料（F）进料速率：40ml/min
第一区域中的解吸剂（D1）进料速率：1950ml/min
第一区域中的提取物速率（E1）：825ml/min
第一区域中的提余物速率（R1）：1165ml/min
第二区域中的解吸剂进料速率（D2）：1425ml/min
第二区域中的提取物速率（E2）：787.5ml/min
第二区域中的提余物速率（R2）：637.5ml/min
以高水平的纯度（>80%的总EPA EE和DHA EE）生产EPA EE和DHA EE的混合物。
参考实施例6
进行实验以对比在通过由蒸馏而制备的与SMB类似的油所生产的两种PUFA产物中存在的环境致污物的量。该油的致污物组成分布示于下面的表1中。
表1
Figure BDA0000453769190000351
1)二噁英限度（limit）包括多氯二桥亚苯基对二噁英（PCDD）和多氯二苯并呋喃（PCDF）并使用世界健康组织（WHO）毒性当量因子（TEF）在WHO毒性当量所表示的总和。这意味着涉及毒理学关注的17种单独的二噁英同类物的分析结果以一个可量化的单位表示：TCDD毒性当量浓度或TEQ
2)二噁英和呋喃的最大值保持在2pg/g
参照实施例7
进行实验以确定与通过蒸馏制备的相等的油相比，存在于通过SMB制备的油中的同分异构杂质的量。
通过SMB制备的富含DHA的油的GC迹线如图14所示。在GC迹线中没有同分异构杂质的证据。
通过蒸馏制备的油的GC迹线如图15所示。具有比DHA峰的洗脱时间长的四个峰对应于DHA同分异构体。从GC迹线可以看出，通过蒸馏制备的油含有约1.5wt%的同分异构杂质。
参照实施例8
通过SMB生产的两种富含EPA的产物与通过蒸馏制备的富含EPA的油进行对比。它们的组分PUFA的wt%分析示于下面。
Figure BDA0000453769190000361
参考实施例9
通过SMB生产的富含EPA/DHA的产物与通过蒸馏制备的富含EPA/DHA的油进行对比。它们的组分PUFA的wt%分析示于下面。
参考实施例10
使用固定床色谱系统分馏源于鱼油的原料（55重量%的EPA EE，5重量%的DHA EE），该固定床色谱系统在充满C18硅胶（颗粒大小20微米，颗粒孔隙度60埃）作为固定相并充满水性乙腈（19重量%的水，81wt%的乙腈）作为洗脱液的单一色谱柱（直径：30cm，长度：60cm）上。使用22L的洗脱液纯化900ml的原料，洗脱液以2200ml/min的流速通过该柱子。
所收集的EPA馏分的GC FAMES迹线如图16所示。
实施例1
根据图8示意性所示的系统，使用真实移动床色谱系统分馏源于鱼油的原料（55重量%的EPA EE，5重量%的DHA EE），该真实移动床色谱系统使用键合的C18硅胶（颗粒大小300微米，颗粒孔隙度150埃）作为固定相并使用水性甲醇作为洗脱液。15个柱子（直径：76.29mm，长度：914.40mm）如图8所示串联联接。
操作参数和流速如下。
步进时间：600秒
周期时间：160分钟
原料（F）进料速率：55ml/min
第一区域中的解吸剂进料速率（D1）：3000ml/min
第一区域中的提取物速率（E1）：1800ml/min
第一区域中的提余物速率（R1）：1455ml/min
第二区域中的解吸剂进料速率（D2）：1400ml/min
第二区域中的提取物速率（E2）：600ml/min
第二区域中的提余物速率（R2）：945ml/min

Claims (28)

1.一种用于从进料混合物中回收多不饱和脂肪酸（PUFA）产物的色谱分离方法，所述方法包括将所述进料混合物引入到具有多个连接的色谱柱的模拟或真实的移动床色谱设备中，所述模拟或真实的移动床色谱设备含有作为洗脱液的含水有机溶剂；其中，所述设备具有包括至少第一区域和第二区域的多个区域，每个区域均具有提取物流和提余物流，由所述提取物流和提余物流能从所述多个连接的色谱柱收集液体；并且其中，（a）从所述第一区域中的柱子收集含有所述PUFA产物和极性较大的组分的提余物流，并且将该提余物流引入到所述第二区域中的不相邻的柱子中，和/或（b）从所述第二区域中的柱子收集含有所述PUFA产物和极性较小的组分的提取物流，并且将该提取物流引入到所述第一区域中的不相邻的柱子中；将所述PUFA产物在每个区域中与所述进料混合物的不同组分分离开，并且其中，所述含水有机溶剂不是水性醇。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，将来自所述第一区域的提取物流、来自所述第一区域的提余物流、来自所述第二区域的提取物流和来自所述第二区域的提余物流中的一个或多个流中的一部分循环回到同一区域中，典型地循环回到同一区域中的相邻的柱子中。
3.根据权利要求1或2所述的色谱分离方法，其中，（a）存在于每个区域中的含水有机溶剂洗脱液具有不同的水:有机溶剂的比例；和/或
（b）调节经由每个区域中的提取物流和提余物流所收集的液体循环回到同一区域中的速率，使得所述PUFA产物在每个区域中能与所述进料混合物的不同组分分离开。
4.根据权利要求3所述的色谱分离方法，其中，经由流出所述第一区域的提取物流所收集的液体循环回到所述第一区域中的速率不同于经由流出所述第二区域的提取物流所收集的液体循环回到所述第二区域中的速率，和/或经由流出所述第一区域的提余物流所收集的液体循环回到所述第一区域中的速率不同于经由流出所述第二区域的提余物流所收集的液体循环回到所述第二区域中的速率。
5.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述设备具有第一区域和第二区域，所述PUFA产物在所述第一区域中与所述进料混合物的极性较小的组分分离开，并且所述PUFA产物在所述第二区域中与所述进料混合物的极性较大的组分分离开。
6.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述PUFA产物包括至少一种ω-3PUFA。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述PUFA产物包括EPA和/或DHA。
8.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，除了所述PUFA产物之外，还在所述色谱分离方法中回收额外的次要PUFA产物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述PUFA产物是EPA，而所述额外的次要PUFA产物是DHA。
10.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述色谱柱含有作为吸附剂的基本上球形的珠粒。
11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述珠粒由C18键合的硅胶形成。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中，所述基本上球形的珠粒具有250～500μm的直径。
13.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述洗脱液是水与醚、酯、酮或腈的混合物。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述洗脱液是水与乙腈的混合物。
15.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述第一区域中的所述洗脱液比所述第二区域中的所述洗脱液含有更多的有机溶剂，并且其中，相对于系统中的洗脱液的流动，所述第二区域是所述第一区域的下游。
16.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述第一区域中的所述洗脱液的水:有机溶剂的比例为10:90体积份～15:85体积份，并且所述第二区域中的所述洗脱液的水:有机溶剂的比例为15:85体积份～20:80体积份。
17.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，通过将水和/或有机溶剂引入到所述第一区域和所述第二区域中的一个或多个柱子中，来控制在所述第一区域和所述第二区域中的所述洗脱液的水:有机溶剂的比例。
18.根据权利要求2～17中任意一项所述的方法，其中，经由来自所述第一区域的提取物流所收集的液体循环回到所述第一区域中的速率比经由来自所述第二区域的提取物流所收集的液体循环回到所述第二区域中的速率快。
19.根据权利要求5～18中任意一项所述的方法，包括：
（i）将所述进料混合物引入到所述第一区域中，并且移出富含所述PUFA产物的第一提余物流和缺乏所述PUFA产物的第一提取物流，以及
（ii）将所述第一提余物流引入到所述第二区域中，移出缺乏所述PUFA产物的第二提余物流，并收集第二提取物流以获得所述PUFA产物。
20.根据权利要求5～18中任意一项所述的方法，包括：
（i）将所述进料混合物引入到所述第二区域中，并且移出缺乏所述PUFA产物的第一提余物流和富含所述PUFA产物的第一提取物流，以及
（ii）将所述第一提取物流引入到所述第一区域中，移出缺乏所述PUFA产物的第二提取物流并且收集第二提余物流以获得所述PUFA产物。
21.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述模拟或真实的移动床色谱设备具有十五个色谱柱1～色谱柱15。
22.根据权利要求5～21中任意一项所述的方法，其中，所述第一区域由八个相邻的柱子1～柱子8组成。
23.根据权利要求5～22中任意一项所述的方法，其中，所述第二区域由七个相邻的柱子9～柱子15组成。
24.根据权利要求21～23中任意一项所述的方法，其中，（a）有机溶剂被引入到柱子1中，和/或（b）有机溶剂被引入到柱子9中，和/或（c）水被引入到柱子4中，和/或（d）水到被引入柱子12中。
25.根据权利要求21～23中任意一项所述的方法，其中，含水有机溶剂被引入到柱子1和/或柱子9中。
26.根据权利要求21～25中任意一项所述的方法，其中，从柱子7收集第一提取物流，并且该第一提取物流被引入到柱子13中。
27.根据权利要求1所述的方法，其中，所述设备具有第一区域、第二区域和第三区域；并且
其中，（a）所述第一区域中的洗脱液比所述第二区域和所述第三区域中的洗脱液含有更多的有机溶剂，而且，相对于系统中的洗脱液的流动，所述第一区域是所述第二区域和第三区域的上游，并且，
（b）所述第二区域中的洗脱液比所述第三区域中的洗脱液含有更多的有机溶剂，而且，相对于系统中的洗脱液的流动，所述第二区域是所述第三区域的上游；
所述PUFA产物在所述第一区域中与所述进料混合物的比所述PUFA产物极性小的组分分离开，所述PUFA产物在所述第二区域中与所述进料混合物的比所述PUFA产物极性小但比在所述第一区域中已分离开的组分极性大的组分分离开，并且所述PUFA产物在所述第三区域中与所述进料混合物的比所述PUFA产物极性大的组分分离开。
28.一种用于控制如权利要求1～27中任意一项中所定义的色谱设备的计算机程序，所述计算机程序含有代码模块，当执行所述计算机程序时，所述计算机程序指示所述设备进行根据权利要求1～27中任意一项所述的方法。
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