CN103665278A - 一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球及其制备方法 - Google Patents
一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103665278A CN103665278A CN201210345930.1A CN201210345930A CN103665278A CN 103665278 A CN103665278 A CN 103665278A CN 201210345930 A CN201210345930 A CN 201210345930A CN 103665278 A CN103665278 A CN 103665278A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- magnetic
- core
- preparation
- composite microsphere
- shell type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Soft Magnetic Materials (AREA)
Abstract
本发明属于纳米功能材料技术领域,具体涉及一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球及其制备方法。本发明核壳式磁性复合微球的核为磁性四氧化三铁纳米粒子团簇,壳为交联的含环氧基团的聚合物网络,通过下述方法制备:首先制备柠檬酸钠稳定的磁性纳米粒子团簇,接着采用溶胶凝胶法,使磁簇表面修饰上活性的乙烯基官能团,然后通过蒸馏-沉淀聚合制得高磁响应性单分散的表面富含环氧基团的核壳式磁性聚合物复合微球,再用亚氨基二乙酸与环氧基团进行开环反应,络合镍离子,最后进行组氨酸标记蛋白的分离纯化。该核壳结构复合微球制备方法简单,过程可控,分离纯化重组蛋白的效率较高。本发明方法可精确控制聚合物壳层的厚度、交联度以及表面官能团的密度,应用前景良好。
Description
技术领域
本发明属于纳米功能材料技术领域,涉及磁性复合微球,具体涉及一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球及其制备方法。
背景技术
近年来,有机-无机杂化复合微球,尤其是磁性复合微球正受到人们的广泛关注。由于磁性高分子微球同时具有无机磁性材料的磁响应性和有机高分子的表面可修饰性,可以在外加磁场下方便、快速、高效的分离目标生物分子。因此,在蛋白纯化、细胞分离、磁共振检测和磁靶向载药等生物医学领域具有广泛的应用前景。
现有技术公开了,通过乳液聚合方法(包括传统的乳液聚合、无皂乳液聚合、微乳液聚合和细乳液聚合)可以制备出不同结构的磁性聚合物复合微球。但是乳液聚合对于结构以及磁含量的控制相对较差。通常需要借助过渡层(如二氧化硅)获得结构较好、磁含量可控的复合微球,但是实践显示,包覆中间层二氧化硅层会降低整个微球的磁饱和强度。另外由于乳液聚合大多采用过硫酸钾等带电水溶性引发剂,反应结束后往往使微球带有相应的电荷,在一定程度上影响后续的应用;并且上述方法常常需要共聚疏水性单体,这会使得表面官能团密度下降。为了解决这一问题,有研究采用蒸馏沉淀聚合,其中不需借助过渡层,可直接在磁性纳米粒子表面包覆聚合物壳层,可采用不带电的油溶性引发剂,并且无需共聚其他单体,表面官能团密度较大,但近年来其主要被报道用于亲水聚合物的包覆。迄今,尚未见有采用蒸馏沉淀包覆疏水性单体的报道,而开发利用蒸馏沉淀法直接包覆疏水性单体对复合微球材料的制备是十分必要的。
据研究公开,磁性载体固定金属离子亲和色谱分离法是从生物混合体系中分离高纯度的目标生物分子的方法,它将亲和配基偶联在磁性分离载体表面,在磁场定向控制下,通过亲和吸附、清洗和解吸等操作步骤,实现蛋白质的分离纯化。实践证实,该方法具有分离速度快、选择性好、载体不易污染、回收率高等显著优势,在生物产品大规模分离纯化方面具有重要的发展潜力。但近年氨三乙酸配体用的较多,其价格较为昂贵,且目前磁性复合微球尚存在粒径分布不均一、磁含量低、表面缺乏足够的活性官能团等问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷,提出一种核壳式磁性复合微球,该复合微球磁含量高,能高效、较大量特异性富集组氨酸标记蛋白。
本发明的核壳式磁性复合微球以无机磁性纳米晶团簇(简称磁簇)为核,以含环氧聚合物交联网络为壳,所述的含环氧基团的聚合物交联壳层通过蒸馏沉淀聚合的方法包覆在无机磁性纳米晶团簇表面层,聚合物壳层经亚氨基二乙酸开环反应后,络合金属离子Ni2+、Cu2+或和Zn2+,进行分离纯化组氨酸标记蛋白。
本发明的进一步目的是提供一种核壳式磁性复合微球的制备方法,本方法中无需过渡层直接制备以无机磁性纳米晶团簇为核,聚甲基丙烯酸缩水甘油酯壳层的核壳式磁性复合微球,进一步进行开环改性,络合金属离子,进行组氨酸标记蛋白的分离纯化。该制备方法简单,过程可控,分离纯化重组蛋白的效率较高。本发明方法可精确控制聚合物壳层的厚度、交联度以及表面官能团的密度,应用前景良好。
更具体的,本发明的核壳式磁性复合微球的制备方法,其特征在于,其包括步骤:
1)首先,以六水合三氯化铁、醋酸盐和柠檬酸盐为原料制备柠檬酸钠稳定的磁性纳米粒子团簇(简称磁簇);
2)接着,采用溶胶凝胶法对磁簇表面进行修饰,使其表面带上活性的乙烯基官能团;
3)然后,以表面含有乙烯基的磁簇为种子,通过蒸馏沉淀聚合的方法在磁簇表面包覆一层致密的含环氧聚合物的交联网络壳层,制得以磁簇为核、含环氧聚合物网络为壳的磁性聚合物复合微球;
4)再用亚氨基二乙酸与上述带有环氧基团的壳层进行开环反应,使其核壳微球带有二乙酸基团,从而能进一步螯合金属离子;
5)最后用表面带有二乙酸基团的核壳微球络合金属离子(主要是Ni2+、Cu2+和Zn2+),进行分离纯化组氨酸标记蛋白;所述金属离子(主要是Ni2+、Cu2+或Zn2+)。
本发明上述步骤1中,将0.6-6g六水合三氯化铁、1.8-20g醋酸盐和0.2-2.4g柠檬酸盐溶解在20-80ml乙二醇中,在140-180℃下机械搅拌0.5--2h,然后置于含有聚四氟乙烯内衬的不锈钢高压反应釜中,将反应釜放置于180-220℃的烘箱中14-36h,取出,用自来水使其冷却至室温;用磁分离分离出产物磁簇,并用无水乙醇洗涤除去未反应的反应物,最后将产物磁簇分散在无水乙醇中,备用。
本发明上述步骤2中,将以上得到的磁簇、20-300ml无水乙醇、5-75ml去离子水、0.5-7.5ml氨水以及0.2-3g带双键的硅烷偶联剂(如KH 570)加入三口烧瓶中,在反应温度为50-90℃下机械搅拌20--30h,使磁簇表面修饰上活性的乙烯基官能团;反应结束后,用磁分离得到产物表面修饰有乙烯基的磁簇,并用无水乙醇除去过量的硅烷偶联剂;然后放入真空烘箱进行干燥。
本发明上述步骤3中,将25-500mg得到的表面修饰有乙烯基的磁簇、50μL-4mL侧链带环氧的烯类单体、2.5mg-4gN,N’-亚甲基双丙烯酰胺、1-80mg 2,2-偶氮二异丁腈以及溶剂20-400ml乙腈加入50-1000ml单口烧瓶中,超声使其混合均匀;将烧瓶连接到装有精馏柱、直形冷凝管以及接收器的蒸馏装置上;从室温升温到沸腾状态,然后控制在1-3h内蒸出20-70wt%溶剂;反应结束后用磁分离,并用无水乙醇和去离子水进行洗涤,分散在水中备用。
本发明上述步骤4中,将0.3-5g亚氨基二乙酸溶于10-200ml水中,然后加入0.2-4g氢氧化物,配置成溶液,用1-5mol/L的碳酸盐调节体系pH为10-11,取之前制备的表面带环氧的磁性复合微球加入到该溶液中,超声分散,于50-100℃反应8-24h,反应结束后用磁分离,并用去离子水进行洗涤。
本发明上述步骤5中,将上述经亚氨基二乙酸改性的磁性复合微球,加入到浓度为10-100mg/mL的10-200mL镍盐溶液中,超声分散,在室温下搅拌反应1-24h;反应结束后,用去离子水反复清洗颗粒,将颗粒保存在去离子水中备用。
本发明中,所述的醋酸盐选自醋酸钠、醋酸钾、醋酸锂、醋酸镁和醋酸铵中的一种。
本发明中,所述的柠檬酸盐选自柠檬酸和柠檬酸钠中的一种,也可以是聚丙烯酸,聚丙烯酸钠,聚谷氨酸及琼脂糖等亲水性高分子中的一种。
本发明中,所述的侧链带环氧的烯类单体选自甲基丙烯酸缩水甘油酯、烯丙基缩水甘油醚等含有环氧的烯类单体中的一种或其中的几种。
本发明中,所述的聚合反应体系(侧链带羧基的烯类单体及N,N’-亚甲基双丙烯酰胺的浓度之和)的浓度为0.001wt%到10wt%之间。
本发明中,所述的交联剂N,N’-亚甲基双丙烯酰胺的用量与N,N’-亚甲基双丙烯酰胺用量和侧链带羧基的烯类单体用量总和的百分比值为大于等于30wt%。
本发明制得的磁性聚合物复合微球,粒径分布均一,结构规整,并且具有高磁响应性以及表面可修饰的特性。所述的复合微球表面经过进一步的修饰以后,能络合金属离子,然后利用固定金属离子亲和色谱特异性分离纯化组氨酸标记的蛋白,分离能力良好(103μg蛋白/mg磁珠)。
本发明的优点有:
(1)通过蒸馏沉淀聚合制备得到的具有核壳结构的磁性复合微球,粒径分布均一,结构规整;
(2)磁性复合微球的磁含量高;
(3)核壳式磁性复合微球的表面富含功能的环氧基团,并可进一步修饰;
(4)核壳式磁性复合微球的制备过程简单、高效;
(5)该微球利用的亲和配体价格低廉,分离纯化标记蛋白效果优良,有利于工业化生产。
为了便于理解,以下将通过具体的附图和实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是,具体实例和附图仅是为了说明,显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明,在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变,这些修正和改变也纳入本发明的范围内。
附图说明
图1:壳层厚度为50nm,交联度为50%的 核壳式Fe3O4/PMG/IDA-Ni2+微球透射电镜图。
图2:磁性材料富集标记蛋白前后跑出的电泳图,其中泳道1为富集前的纯组氨酸标记蛋白,2为标准分子量的条带,3为富集后的上清液,4为洗脱液。
图3:磁性粒子循环用于组氨酸标记蛋白的分离纯化实验,
(a)为磁性粒子循环利用5次跑的电泳图,泳道1为标准分子量条带,2为富集前的纯组氨酸标记蛋白,3、4、5、6、7为磁性粒子循环利用5次分别对应的洗脱液;(b)为磁性粒子循环利用5次分别对应的蛋白回收率。
图4:磁性粒子从复杂细胞裂解液体系中分离纯化组氨酸标记蛋白电泳图,
(a)样品Fe3O4/PMG/IDA-Ni2+富集前后的电泳图;
(b)为商用琼脂糖磁珠富集前后电泳图,其中MW为标准分子量条带,L为富集前的细胞裂解液,S为上清液,5、20、30、40、80、120、160、200、250、300和500分别为用的洗脱液中咪唑浓度(mM)。
具体实施方式
实施例1:制层厚度为50nm左右,交联度为75%的核壳式Fe3O4/PMG/IDA-Ni2+微球
1、制备柠檬酸钠稳定的磁簇
将1.3g六水合三氯化铁(FeCl3·6H2O),3.8g醋酸铵(NH4Ac),0.4g柠檬酸钠溶解在70mL乙二醇中后,加入150mL三口烧瓶中,然后升温到160℃,保温反应1h后,将烧瓶中液体转入容量为100mL的含有聚四氟乙烯内衬的高压反应釜中,再将反应釜放入200℃的烘箱反应16h后取出,用自来水使其冷却至室温。用磁分离分离出产物,并用无水乙醇洗涤除去未反应的反应物,最后将产物分散在无水乙醇中备用;
2、对磁簇表面进行活性乙烯基修饰
将以上得到的磁簇、40ml无水乙醇、10ml去离子水、1.5ml氨水以及0.6g硅烷偶联剂KH 570加入150ml三口烧瓶中,升温到70℃,保温反应24h后,磁分离得到产物并用无水乙醇除去过量的硅烷偶联剂。然后放入真空烘箱进行干燥;
3、制备核壳式Fe3O4/PMG
将以上干燥后的产物取约100mg和80ml乙腈加入200ml单口烧瓶中分散,再加入100μL甲基丙烯酸缩水甘油酯、300mgN,N,N’-亚甲基双丙烯酰胺、8mg 2,2-偶氮二异丁腈,使其溶解在反应体系中,然后将烧瓶连接到装有精馏柱、直形冷凝管以及接收器的蒸馏装置上,从室温升温到到沸腾状态,控制使1.5h蒸出约50%溶剂,反应结束后磁分离得到产物,并用无水乙醇进行洗涤,最终得到壳层厚度为50nm左右的Fe3O4/PMG微球;
4、亚氨基二乙酸开环反应
将1g亚氨基二乙酸溶于60ml水中,然后加入0.8g氢氧化物,配置成溶液,接着用2mol/L的碳酸钠调节体系pH为11,取制备的表面带环氧的磁性复合微球100mg加入到该溶液中,超声分散,于80℃反应16h,反应结束后用磁分离,并用去离子水进行洗涤;
5、络合Ni2+
将上述经亚氨基二乙酸改性的磁性复合微球,加入到浓度为50mg/mL的20mLNiCl2·6H2O溶液中,超声分散,在室温下搅拌反应12h,反应结束后,用去离子水反复清洗颗粒,将颗粒保存在去离子水中备用。
实施例2:制备壳层厚度为50nm左右,交联度为60%的核壳式Fe3O4/PMG/IDA-Ni2+微球
1、柠檬酸钠稳定的磁簇的制备同实施例1-1中所述;
2、对磁簇表面进行活性乙烯基修饰同实施例1-2中所述;
3、核壳式Fe3O4/PMG的制备同实施例1-3中所述,本实施例中的甲基丙烯酸缩水甘油酯、2,2-偶氮二异丁腈的用量分别为200μL、10mg;
4、亚氨基二乙酸开环反应同实施例1-4中所述;
5、络合Ni2+反应同实施例1-5中所述。
实施例3:制备壳层厚度为50nm左右,交联度为50%的核壳式Fe3O4/PMG/IDA-Ni2+微球(如图1所示)
1、柠檬酸钠稳定的磁簇的制备同实施例1-1中所述;
2、对磁簇表面进行活性乙烯基修饰同实施例1-2中所述;
3、核壳式Fe3O4/PMG的制备同实施例1-3中所述;本实施例中采用甲基丙烯酸缩水甘油酯、2,2-偶氮二异丁腈的用量分别为300μL、12mg;
4、亚氨基二乙酸开环反应同实施例1-4中所述;
5、络合Ni2+反应同实施例1-5中所述。
实施例4:制备壳层厚度为20nm左右,交联度为50%的核壳式Fe3O4/PMG/IDA-Ni2+微球
1、柠檬酸钠稳定的磁簇的制备同实施例1-1中所述;
2、对磁簇表面进行活性乙烯基修饰同实施例1-2中所述;
3、核壳式Fe3O4/PMG的制备同实施例1-3中所述;本实施例中采用的甲基丙烯酸缩水甘油酯、N, N’-亚甲基双丙烯酰胺、2,2-偶氮二异丁腈的用量分别为200μL、200mg、8mg;
4、亚氨基二乙酸开环反应同实施例1-4中所述;
5、络合Ni2+反应同实施例1-5中所述。
实施例5:制备壳层厚度为80nm左右,交联度为50%的核壳式Fe3O4/PMG/DIA-Ni2+微球
1、柠檬酸钠稳定的磁簇的制备同实施例1-1中所述;
2、对磁簇表面进行活性乙烯基修饰同实施例1-2中所述;
3、核壳式Fe3O4/PMG的制备同实施例1-3中所述。本实施例中采用的甲基丙烯酸缩水甘油酯、N,N’-亚甲基双丙烯酰胺、2,2-偶氮二异丁腈的用量分别为400μL、400mg、16mg;
4、亚氨基二乙酸开环反应同实施例1-4中所述;
5、络合Ni2+反应同实施例1-5中所述。
实施例6:用壳层厚度为50nm交联度为75%的磁性复合微球络合镍以后进行分离组氨酸标记蛋白的实验
1、首先取100μL Fe3O4/PMG/IDA-Ni2+磁性粒子,磁分离后用100μL缓冲溶液I(50mMTris pH 8.0,300mM NaCl,5mM imidazole)洗涤两次,
2、接着加入100μL标记蛋白,在室温下富集30分钟,
3、然后磁分离除去上清液,加入100μL缓冲溶液I洗涤两次,
4、最后用50μL缓冲溶液II(50mM Tris pH 8.0,300mM NaCl,5mM imidazole)进行洗脱,跑电泳,测标记蛋白的回收率。结果显示,磁性复合微球络合镍离子(52μgNi2+/mg磁珠)以后分离纯化组氨酸标记的蛋白,分离能力良好(如图2所示),具体数值为99μg蛋白/mg磁珠。
实施例7:磁性粒子循环用于组氨酸标记蛋白的分离纯化实验
1、经实例6中步骤4洗脱以后的磁性粒子加入100μL缓冲溶液I洗涤三次,洗去多余的咪唑,使得其表面恢复富集前的状态,
2、对于磁性粒子重复实例6中的步骤4次,分别用洗脱液跑电泳(如图3a所示),测得标记蛋白的回收率(如图3b所示),
结果显示:所述的复合微球表面经过修饰以后,能有效络合金属Ni2+离子(55μgNi2+/mg磁珠),然后利用固定金属离子亲和色谱特异性分离纯化组氨酸标记的蛋白,经多次循环使用后分离能力保持良好,第一次为103μg蛋白/mg磁珠,4次循环后为83μg蛋白/mg磁珠。
实施例8:磁性粒子在复杂的细胞裂解液体系中分离纯化组氨酸标记蛋白
1、取100μL商用琼脂糖磁珠(5wt%)或500μL我们合成的Fe3O4/PMG/IDA-Ni2+磁性粒子(10mg/mL),用缓冲溶液I洗涤两次,
2、接着分别加入1mL细胞裂解液,富集30分钟,
3、然后磁分离除去上清液,加入1mL缓冲溶液I洗涤两次,
4、最后分别用含咪唑5、20、30、40、80、120、160、200、250、300和500mM的用缓冲溶液II连续洗脱,分别对洗脱液跑电泳(如图4所示)。其中MW为标准分子量条带,L为富集前的细胞裂解液,S为上清液,5、20、30、40、80、120、160、200、250、300和500分别为用的洗脱液中咪唑浓度(mM)。结果显示,Fe3O4/PMG/IDA-Ni2+样品的富集量远大于商用琼脂糖磁珠富集的量,且在洗咪唑脱液浓度为500mM时,仍然有结合蛋白洗脱,实验证实,本发明制备的微球不但结合量大,而且结合能力更强。
Claims (13)
1.一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球,其特征在于,该复合微球以无机磁性纳米晶团簇为核,以含环氧聚合物交联网络为壳,经亚氨基二乙酸开环反应后,络合金属离子,分离纯化组氨酸标记蛋白;所述的含环氧基团的聚合物交联网络通过蒸馏沉淀聚合的方法包覆在无机磁性纳米晶团簇表面。
2.按权利要求1所述的核壳式磁性复合微球,其特征在于,所述的金属离子是Ni2+、Cu2+或Zn2+。
3.一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球的制备方法,其特征在于,其包括步骤:
(1)以六水合三氯化铁、醋酸盐和柠檬酸盐为原料,制备柠檬酸盐稳定的磁性纳米粒子团簇;
(2)用溶胶凝胶法对磁簇表面进行修饰,使其表面带上活性的乙烯基官能团;
(3)以表面含有乙烯基的磁性纳米粒子团簇为种子,通过蒸馏沉淀聚合的方法在磁簇表面包覆一层致密的含环氧基团的聚合物交联网络,制得以无机磁性纳米晶团簇为核,以含环氧聚合物交联网络为壳的磁性聚合物复合微球;
(4)用亚氨基二乙酸与合成的带有环氧基团的核壳式复合微球开环反应,使其表面的二乙酸基团络合金属离子;
(5)用经亚氨基二乙酸改性的微球络合金属离子分离纯化组氨酸标记蛋白。
4.按权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)或(5)中的金属离子是Ni2+、Cu2+或Zn2+。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤(1)中:将0.6-6g六水合三氯化铁、1.8-20g醋酸盐和0.2-2.4g柠檬酸盐溶解在20-80mL乙二醇中,在140-180℃下机械搅拌0.5--2h,然后置于含有聚四氟乙烯内衬的不锈钢高压反应釜中,将反应釜放置于180-220℃的烘箱中14-36h,取出,用自来水使其冷却至室温;用磁分离分离出产物磁簇,并用无水乙醇洗涤除去未反应的反应物,最后将产物磁簇分散在无水乙醇中,备用。
6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤(2)中:将得到的磁簇、20-300mL无水乙醇、5-75mL去离子水、0.5-7.5mL氨水以及0.2-3g带双键的硅烷偶联剂加入三口烧瓶中,在50-90℃反应温度下机械搅拌20--30h,使磁簇表面修饰上活性的乙烯基官能团;反应结束后,用磁分离得到产物表面修饰有乙烯基的磁簇,并用无水乙醇除去过量的硅烷偶联剂;然后放入真空烘箱干燥。
7.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤(3)中:将25-500mg得到的表面修饰有乙烯基的磁簇、50μL-4mL侧链带环氧的烯类单体、2.5mg-4gN,N’-亚甲基双丙烯酰胺、1-80mg 2,2-偶氮二异丁腈以及溶剂20-400ml乙腈加入50-1000ml单口烧瓶中,超声使其混合均匀;将烧瓶连接到装有精馏柱、直形冷凝管以及接收器的蒸馏装置上;从室温升温到沸腾状态,然后控制在1-3h内蒸出20-70wt%溶剂;反应结束后用磁分离,并用无水乙醇洗涤。
8.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤(4)中:将0.3-5g亚氨基二乙酸溶于10-200mL水中,然后加入0.2-4g氢氧化物,配置成溶液,接着用1-5mol/L的碳酸盐调节体系pH为10-11,取制备的表面带环氧的磁性复合微球加入到所述溶液中,超声分散,于50-100℃反应8-24h,反应结束后用磁分离,并用去离子水洗涤。
9.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述的步骤(5)中,将经亚氨基二乙酸改性的磁性复合微球,加入到浓度为10-100mg/mL的10-200mL镍盐溶液中,超声分散,在室温下搅拌反应1-24h,反应结束后,用去离子水反复清洗颗粒,将颗粒保存在去离子水中,备用。
10.根据权利要求3—7任一所述的制备方法,其特征在于:所述的醋酸盐选自醋酸钠、醋酸钾、醋酸锂、醋酸镁或醋酸铵中的一种;所述的柠檬酸盐选自柠檬酸或柠檬酸钠;所述的氢氧化物选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化镁、氢氧化锂或氨水中的一种;所述的碳酸盐选自碳酸钠或碳酸钾;所述的镍盐选自氯化镍、硝酸镍、醋酸镍或硫酸镍中的一种。
11.根据权利要求3—7任一所述的制备方法,其特征在于:所述的侧链带环氧的烯类单体为甲基丙烯酸缩水甘油酯或烯丙基缩水甘油醚及其混合物。
12.根据权利要求3-7任一所述的制备方法,其特征在于:所述的聚合反应体系中,侧链带环氧的烯类单体及N,N’-亚甲基双丙烯酰胺的浓度之和为0.001wt%到10wt%之间。
13.根据权利要求3-7任一所述的制备方法,其特征在于:所述的交联剂N,N’-亚甲基双丙烯酰胺的用量与N,N’-亚甲基双丙烯酰胺用量和侧链带羧基的烯类单体用量总和的百分比值为大于等于40wt%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210345930.1A CN103665278A (zh) | 2012-09-16 | 2012-09-16 | 一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210345930.1A CN103665278A (zh) | 2012-09-16 | 2012-09-16 | 一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球及其制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103665278A true CN103665278A (zh) | 2014-03-26 |
Family
ID=50304130
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201210345930.1A Pending CN103665278A (zh) | 2012-09-16 | 2012-09-16 | 一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103665278A (zh) |
Cited By (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104607143A (zh) * | 2015-02-06 | 2015-05-13 | 大连民族学院 | 一种铁镍磁性微球、其制备方法及在蛋白质纯化中的应用 |
CN104667899A (zh) * | 2015-02-02 | 2015-06-03 | 华东理工大学 | 一种金属离子固定化亲和磁球的制备方法及应用 |
CN105111390A (zh) * | 2015-09-16 | 2015-12-02 | 天津大学 | 一种金属螯合纳米介质及制备方法和应用于强化包涵体蛋白复性与集成纯化的方法 |
CN105597657A (zh) * | 2015-09-23 | 2016-05-25 | 北京大学 | 一种功能化复合金属氧化物材料及其制备方法和应用 |
CN105754602A (zh) * | 2015-05-19 | 2016-07-13 | 刘海鹏 | 一种保护量子点的提纯方法 |
CN107112105A (zh) * | 2014-10-23 | 2017-08-29 | 康宁股份有限公司 | 聚合物包封的磁性纳米颗粒 |
CN107189023A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-09-22 | 江苏大学 | 一种核壳式磁性复合微球及其制备方法和应用 |
CN108057427A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-22 | 湖南科技大学 | 一种固体磁性重金属离子分离材料及其制备方法 |
CN109758989A (zh) * | 2019-03-08 | 2019-05-17 | 南京青柠生物科技有限公司 | 一种用于纯化组氨酸标记蛋白质的纳米磁珠的制备方法 |
CN111072874A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-28 | 苏州为度生物技术有限公司 | 磁性微球表面羧基高度有序排列的构筑方法 |
CN111135804A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-05-12 | 苏州为度生物技术有限公司 | 一种亲和纯化用多羧基磁性微球的制备方法 |
CN116284233A (zh) * | 2023-01-31 | 2023-06-23 | 浙江湃肽生物股份有限公司 | 一种制备伊特卡肽的方法 |
-
2012
- 2012-09-16 CN CN201210345930.1A patent/CN103665278A/zh active Pending
Cited By (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10319502B2 (en) | 2014-10-23 | 2019-06-11 | Corning Incorporated | Polymer-encapsulated magnetic nanoparticles |
CN107112105A (zh) * | 2014-10-23 | 2017-08-29 | 康宁股份有限公司 | 聚合物包封的磁性纳米颗粒 |
CN104667899A (zh) * | 2015-02-02 | 2015-06-03 | 华东理工大学 | 一种金属离子固定化亲和磁球的制备方法及应用 |
CN104607143A (zh) * | 2015-02-06 | 2015-05-13 | 大连民族学院 | 一种铁镍磁性微球、其制备方法及在蛋白质纯化中的应用 |
CN105754602A (zh) * | 2015-05-19 | 2016-07-13 | 刘海鹏 | 一种保护量子点的提纯方法 |
CN105111390A (zh) * | 2015-09-16 | 2015-12-02 | 天津大学 | 一种金属螯合纳米介质及制备方法和应用于强化包涵体蛋白复性与集成纯化的方法 |
CN105111390B (zh) * | 2015-09-16 | 2017-09-29 | 天津大学 | 一种金属螯合纳米介质及制备方法和应用于强化包涵体蛋白复性与集成纯化的方法 |
CN105597657A (zh) * | 2015-09-23 | 2016-05-25 | 北京大学 | 一种功能化复合金属氧化物材料及其制备方法和应用 |
CN107189023A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-09-22 | 江苏大学 | 一种核壳式磁性复合微球及其制备方法和应用 |
CN108057427A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-22 | 湖南科技大学 | 一种固体磁性重金属离子分离材料及其制备方法 |
CN108057427B (zh) * | 2017-12-14 | 2020-05-26 | 湖南科技大学 | 一种固体磁性重金属离子分离材料及其制备方法 |
CN109758989A (zh) * | 2019-03-08 | 2019-05-17 | 南京青柠生物科技有限公司 | 一种用于纯化组氨酸标记蛋白质的纳米磁珠的制备方法 |
CN109758989B (zh) * | 2019-03-08 | 2021-08-17 | 南京青柠生物科技有限公司 | 一种用于纯化组氨酸标记蛋白质的纳米磁珠的制备方法 |
CN111072874A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-28 | 苏州为度生物技术有限公司 | 磁性微球表面羧基高度有序排列的构筑方法 |
CN111135804A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-05-12 | 苏州为度生物技术有限公司 | 一种亲和纯化用多羧基磁性微球的制备方法 |
CN116284233A (zh) * | 2023-01-31 | 2023-06-23 | 浙江湃肽生物股份有限公司 | 一种制备伊特卡肽的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103665278A (zh) | 一种分离纯化重组蛋白的核壳式磁性复合微球及其制备方法 | |
CN103897123B (zh) | 一种表面富含镍离子的核壳式磁性复合微球的制备方法及其应用 | |
CN110961085B (zh) | 一种利用co2为乳液模板制备偕胺肟功能化中空多孔聚合物微球的方法 | |
CN103285838B (zh) | 一种用于工业废水处理的功能磁性吸附剂的制备方法 | |
CN104801262A (zh) | 一种磁性复合铀吸附剂的制备方法及其应用 | |
CN102432780B (zh) | 一种表面羧基功能化的核壳式磁性复合微球及其制备方法 | |
Cao et al. | Facile synthesis of a Ni (ii)-immobilized core–shell magnetic nanocomposite as an efficient affinity adsorbent for the depletion of abundant proteins from bovine blood | |
CN103435762A (zh) | 一种富含硼酯的核壳式磁性复合微球的制备方法及其应用 | |
CN103304753A (zh) | 一种环氧功能化核壳结构磁性聚合物微球的制备方法 | |
CN103691937B (zh) | 一种制备镍包石墨复合粒子的方法 | |
CN106745317A (zh) | 一步法制备多孔四氧化三铁磁性纳米微球的方法及其应用 | |
CN109174060B (zh) | 一种含膦酸基螯合树脂及在高酸度下分离与富集钍的方法 | |
CN108190855A (zh) | 用于水中离子脱除的掺杂三维多孔碳及其制备方法 | |
Gao et al. | Engineering a MOF–magnetic graphene oxide nanocomposite for enantioselective capture | |
CN108404867A (zh) | 一种木质素基碳磁性纳米材料及制备方法和在吸附甲基橙中的应用 | |
CN103638907A (zh) | 一种针对水中阴离子型染料的磁性生物吸附剂 | |
CN108822312B (zh) | 一种高比表面积羧基化球形木质素的制备方法及应用 | |
CN102174195A (zh) | 一种核-壳式磁性导电聚合物微球的制备方法及其应用 | |
CN110339818A (zh) | 一种改性磁性壳聚糖吸附剂的制备方法 | |
CN108671899A (zh) | 一种基于碱木质素的磁性纳米颗粒及其制备方法和在吸附铜离子中的应用 | |
CN107774227A (zh) | 一种铁锰复合氧化物/四氧化三铁核壳纳米材料的制备方法 | |
CN115518621B (zh) | 一种玉米棒状金属有机骨架材料镶嵌金属氧化物碳材料的制备及应用 | |
CN104383891B (zh) | 一种壳聚糖-拟态薄水铝掺杂磁性吸附剂及其制备方法 | |
CN104324693B (zh) | 具有选择性吸水性能的层状复合材料及其制备方法和应用 | |
CN110575823B (zh) | 羧甲基化的聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米材料及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140326 |