CN116284233A - 一种制备伊特卡肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备伊特卡肽的方法，属于多肽药物制备技术领域，具体涉及通过将磁性二氧化硅微球或修饰改性后的磁性二氧化硅微球与D301大孔树脂复配，用以吸附除去伊特卡肽粗液中的杂质，并经后续纯化处理制备得到高纯度的伊特卡肽，修饰改性后的磁性二氧化硅微球上存在甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷基团或对乙烯基苯磺酸基团或对乙烯基苄胺基团，采用了该复合填料树脂分离柱对杂质的吸附效果好。本发明对伊特卡肽具有好的纯化分离效果。
Description
技术领域
本发明属于多肽药物制备技术领域，具体涉及一种制备伊特卡肽的方法。
背景技术
伊特卡肽（etelcalcetide，曾用名维拉卡肽velcalcetide）是用于治疗慢性肾病透析患者继发性甲状旁腺机能亢进的药物，它是一种新型拟钙剂(calcimimeticagent)，结合并激活甲状旁腺上的钙敏感受体，抑制甲状旁腺激素的分泌，从而实现甲状旁腺激素水平的降低。
伊特卡肽是含有S-S键的8个氨基酸多肽，化学名为N-乙酰基-D半胱氨酰基-S-（L-半胱氨酸二硫键取代）-D-丙氨酰基-D-精氨酰基-D-精氨酰基-D-丙氨酰基-D-精氨酰胺，临床应用盐型为带有4-5个盐酸分子的盐酸盐，为高亲水的水溶性多肽。
二硫键的形成是伊特卡肽合成制备工艺的关键步骤，液相氧化合成二硫键相比于其它工艺，具有简单、经济的优势，并且能通过HPLC监测氧化产物和程度，工艺过程可控性强，是比较具有工业化生产应用前景的工艺。但由于伊特卡肽属于高亲水多肽，在常规反相C18纯化填料上的保留很弱，因此，后续的纯化是液相氧化法制备伊特卡肽的难点，主要表现在以下两个方面：（1）伊特卡肽属于高亲水多肽，其盐酸盐、醋酸盐、磷酸盐、硫酸盐等非三氟乙酸盐的盐型，在C18填料上基本没有保留，纯水相或低浓度有机相洗脱1-2柱体积即可出峰，其三氟乙酸盐，纯水相或低浓度有机相洗脱3-4个柱体积即可出峰，主成分和杂质的分离效果差，尤其是主峰前杂；（2）液相氧化要减小二硫键的错配反应就需要控制反应溶液的浓度，因此，液相氧化得到的产品一般为肽含量较低的粗肽溶液，对粗肽溶液进行纯化时，样品上样量很大，主成分在上样过程中由于其保留性能差，有洗脱的风险，导致制备失败和纯化效果降低。
因此，开发一种纯化过程可操作性强、杂质分离度好、纯化效果稳定的纯化方法，极具应用前景和经济实用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种纯化制备效果好的制备伊特卡肽的方法。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种制备伊特卡肽的方法，包括：将伊特卡粗肽溶液通过树脂分离柱吸附分离得到伊特卡肽溶液，然后采用离子交换色谱对伊特卡肽溶液进行换盐纯化，制备得到伊特卡肽；树脂分离柱中的填料为大孔树脂和磁性二氧化硅微球或修饰改性的磁性二氧化硅微球；修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷基团或对乙烯基苯磺酸基团或对乙烯基苄胺基团。
优选地，树脂分离柱中磁性二氧化硅微球的使用量为大孔树脂的5-25wt%；或，修饰改性的磁性二氧化硅微球的使用量为大孔树脂的5-25wt%。
优选地，阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有盐酸根或硫酸根或醋酸根的盐溶液。
优选地，纳滤中使用的冲洗液为盐酸溶液或硫酸溶液或醋酸溶液。
更优选地，盐酸溶液中含有体积分数为0.001%-0.01%的盐酸；或，硫酸溶液中含有体积分数为0.001%-0.01%的硫酸；或，醋酸溶液中含有体积分数为0.1%-5%的醋酸。
优选地，修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷基团，由甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷与磁性二氧化硅微球反应生成。
优选地，修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有对乙烯基苯磺酸基团，由对乙烯基苯磺酸、丙烯酸甲酯、交联剂与磁性二氧化硅微球反应生成。
优选地，修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有对乙烯基苄胺基团，由对乙烯基苄胺、丙烯酸甲酯、交联剂与磁性二氧化硅微球反应生成。
优选地，磁性二氧化硅微球的表面修饰中，将磁性二氧化硅微球分散于乙醇溶液中，加入氨水，均匀分散后加入甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷，在50-80℃下搅拌反应6-24h，反应完成后，磁铁分离产物，依次用乙醇和水洗涤，干燥，得到烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球。
更优选地，磁性二氧化硅微球的表面修饰中，乙醇溶液由乙醇和去离子水混合而成，乙醇溶液中含有70-90wt%的乙醇。
更优选地，磁性二氧化硅微球的表面修饰中，磁性二氧化硅微球的使用量为乙醇溶液的0.1-0.8wt%。
更优选地，磁性二氧化硅微球的表面修饰中，氨水的使用量为乙醇溶液的1-3wt%。
更优选地，磁性二氧化硅微球的表面修饰中，甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷的使用量为磁性二氧化硅微球的60-180wt%。
优选地，磺酸修饰磁性二氧化硅微球的制备中，将SDS和去离子水加入烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液中，氮气氛围下，加入丙烯酸甲酯和对乙烯基苯磺酸，然后加入交联剂二丙烯酸乙二醇酯，加入引发剂，在70-80℃下反应3-8h，冷却至室温，磁铁分离产物，依次用乙醇和水洗涤，干燥，得到磺酸修饰磁性二氧化硅微球。
更优选地，磺酸修饰磁性二氧化硅微球的制备中，烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液由烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球和无水乙醇分散混合，烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液中含有0.2-1.6wt%的烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球，SDS的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的1-5wt%，去离子水的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液的700-1000wt%。
更优选地，磺酸修饰磁性二氧化硅微球的制备中，丙烯酸甲酯的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的20-50wt%。
更优选地，磺酸修饰磁性二氧化硅微球的制备中，对乙烯基苯磺酸的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的20-50wt%。
更优选地，磺酸修饰磁性二氧化硅微球的制备中，交联剂二丙烯酸乙二醇酯的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的0.05-0.35wt%。
更优选地，磺酸修饰磁性二氧化硅微球的制备中，引发剂为KPS，引发剂的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的0.2-0.8wt%。
优选地，对乙烯基苄胺修饰磁性二氧化硅微球的制备中，磺酸修饰磁性二氧化硅微球的制备：将SDS和去离子水加入烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液中，氮气氛围下，加入丙烯酸甲酯和对乙烯基苄胺，然后加入交联剂二丙烯酸乙二醇酯，加入引发剂，在70-80℃下反应3-8h，冷却至室温，磁铁分离产物，依次用乙醇和水洗涤，干燥，得到磺酸修饰磁性二氧化硅微球。
更优选地，对乙烯基苄胺修饰磁性二氧化硅微球的制备中，对乙烯基苄胺的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的20-50wt%。
优选地，伊特卡肽的纯化制备中，将伊特卡粗肽溶液通过树脂分离柱吸附分离得到伊特卡肽溶液，然后采用离子交换色谱对伊特卡肽溶液进行换盐纯化，纳滤脱盐，冻干，得到伊特卡肽。
更优选地，伊特卡肽的纯化制备中，树脂分离柱中填料为D301大孔树脂和磁性二氧化硅微球，树脂分离柱中磁性二氧化硅微球的使用量为D301大孔树脂的5-25wt%。
更优选地，伊特卡肽的纯化制备中，树脂分离柱中填料为D301大孔树脂和烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球，树脂分离柱中烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的使用量为D301大孔树脂的5-25wt%。
更优选地，伊特卡肽的纯化制备中，树脂分离柱中填料为D301大孔树脂和磺酸修饰磁性二氧化硅微球，树脂分离柱中磺酸修饰磁性二氧化硅微球的使用量为D301大孔树脂的5-25wt%。
更优选地，伊特卡肽的纯化制备中，树脂分离柱中填料为D301大孔树脂和对乙烯基苄胺修饰磁性二氧化硅微球，树脂分离柱中对乙烯基苄胺修饰磁性二氧化硅微球的使用量为D301大孔树脂的5-25wt%。
更优选地，伊特卡肽的纯化制备中，冲洗液对树脂分离柱进行冲洗，冲洗后的溶液合并至伊特卡肽溶液。冲洗液为含0-5%乙腈、甲醇、乙醇的盐溶液；冲洗液为含盐酸根、硫酸根、醋酸根的盐溶液。
更优选地，伊特卡肽的纯化制备中，阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有盐酸根的盐溶液，如氯化铵、氯化钠；洗脱流动相为含有硫酸根的盐溶液，如硫酸钠、硫酸铵；洗脱流动相为含有醋酸根的盐溶液，如醋酸钠、醋酸铵；阳离子交换，洗脱流动相pH为7.0-9.5。
更优选地，伊特卡肽的纯化制备中，纳滤时的冲洗液采用体积分数为0.001%-0.01%的盐酸；伊特卡肽硫酸盐纳滤时的冲洗液采用体积分数为0.001%-0.01%的硫酸；伊特卡肽醋酸盐纳滤时的冲洗液采用体积分数为0.1%-5%的醋酸。
本发明公开了上述方法制备得到的伊特卡肽。
本发明通过将磁性二氧化硅微球或修饰改性后的磁性二氧化硅微球与D301大孔树脂复配，用以吸附除去伊特卡肽粗液中的杂质，并经后续纯化处理制备得到高纯度的伊特卡肽，修饰改性后的磁性二氧化硅微球上存在甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷基团或对乙烯基苯磺酸基团或对乙烯基苄胺基团，采用了该复合填料树脂分离柱对杂质的吸附效果好，因而具有如下有益效果：本发明对伊特卡肽具有好的纯化分离效果。因此，本发明是一种纯化制备效果好的制备伊特卡肽的方法。
附图说明
图1为红外光谱图；
图2为吸附量图；
图3为伊特卡肽纯度图。
具体实施方式
以下结合具体实施方式和附图对本发明的技术方案作进一步详细描述：
本发明以下实施方式中伊特卡粗肽溶液中含有10wt%的伊特卡粗肽。
实施例1：
一种制备伊特卡肽的方法，
伊特卡肽的纯化制备：将伊特卡粗肽溶液通过树脂分离柱吸附分离得到伊特卡肽溶液，然后采用离子交换色谱对伊特卡肽溶液进行换盐纯化，纳滤脱盐，冻干，得到伊特卡肽。树脂分离柱中填料为D301大孔树脂和磁性二氧化硅微球，树脂分离柱中磁性二氧化硅微球的使用量为D301大孔树脂的20wt%，阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有盐酸根的盐溶液，含有盐酸根的盐溶液为氯化铵溶液和氯化钠溶液，pH为8.0，纳滤时的冲洗液采用体积分数为0.006%的盐酸。
阳离子交换色谱洗脱中：
流动相A：2.0g/L的NH4Cl溶液，pH为8.0；
流动相B：在2.0g/L的NH4Cl溶液含有浓度为2M的NaCl，pH为8.0；
洗脱梯度：在60 min的时间内流动相B 的使用量从0wt%-30wt%。
实施例2：
一种制备伊特卡肽的方法，本实施例与实施例1相比，不同之处在于，伊特卡肽的纯化制备中，阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有硫酸根的盐溶液，含有硫酸根的盐溶液为硫酸钠溶液或硫酸铵溶液；伊特卡肽硫酸盐纳滤时的冲洗液采用体积分数为0.005%的硫酸；
实施例3：
一种制备伊特卡肽的方法，本实施例与实施例1相比，不同之处在于，伊特卡肽的纯化制备中，阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有醋酸根的盐溶液，含有醋酸根的盐溶液为醋酸铵溶液或醋酸钠溶液；伊特卡肽醋酸盐纳滤时的冲洗液采用体积分数为0.5%的醋酸。
实施例4：
一种制备伊特卡肽的方法，
磁性二氧化硅微球的表面修饰：将磁性二氧化硅微球分散于乙醇溶液中，加入氨水，均匀分散后加入甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷，在70℃下搅拌反应12h，反应完成后，磁铁分离产物，依次用乙醇和水洗涤，干燥，得到烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球。乙醇溶液由乙醇和去离子水混合而成，乙醇溶液中含有80wt%的乙醇，磁性二氧化硅微球的使用量为乙醇溶液的0.4wt%，氨水的使用量为乙醇溶液的2wt%，甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷的使用量为磁性二氧化硅微球的90wt%。
伊特卡肽的纯化制备：将伊特卡粗肽溶液通过树脂分离柱吸附分离得到伊特卡肽溶液，然后采用离子交换色谱对伊特卡肽溶液进行换盐纯化，纳滤脱盐，冻干，得到伊特卡肽。树脂分离柱中填料为D301大孔树脂和烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球，树脂分离柱中磁性二氧化硅微球的使用量为D301大孔树脂的20wt%，阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有盐酸根的盐溶液，含有盐酸根的盐溶液为氯化铵溶液和氯化钠溶液，pH为8.0，纳滤时的冲洗液采用体积分数为0.006%的盐酸。
阳离子交换色谱洗脱中：
流动相A：2.0g/L的NH4Cl溶液，pH为8.0；
流动相B：在2.0g/L的NH4Cl溶液含有浓度为2M的NaCl，pH为8.0；
洗脱梯度：在60 min的时间内流动相B 的使用量从0wt%-30wt%。
实施例5：
一种制备伊特卡肽的方法，
磁性二氧化硅微球的表面修饰：将磁性二氧化硅微球分散于乙醇溶液中，加入氨水，均匀分散后加入甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷，在70℃下搅拌反应12h，反应完成后，磁铁分离产物，依次用乙醇和水洗涤，干燥，得到烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球。乙醇溶液由乙醇和去离子水混合而成，乙醇溶液中含有80wt%的乙醇，磁性二氧化硅微球的使用量为乙醇溶液的0.4wt%，氨水的使用量为乙醇溶液的2wt%，甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷的使用量为磁性二氧化硅微球的90wt%。
磺酸修饰磁性二氧化硅微球的制备：将SDS和去离子水加入烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液中，氮气氛围下，加入丙烯酸甲酯和对乙烯基苯磺酸，然后加入交联剂二丙烯酸乙二醇酯，加入引发剂，在80℃下反应5h，冷却至室温，磁铁分离产物，依次用乙醇和水洗涤，干燥，得到磺酸修饰磁性二氧化硅微球。烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液由烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球和无水乙醇分散混合，烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液中含有0.8wt%的烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球，SDS的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的3wt%，去离子水的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液的900wt%，丙烯酸甲酯的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的40wt%，对乙烯基苯磺酸的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的30wt%，交联剂二丙烯酸乙二醇酯的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的0.15wt%，引发剂为KPS，引发剂的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的0.5wt%。
伊特卡肽的纯化制备：将伊特卡粗肽溶液通过树脂分离柱吸附分离得到伊特卡肽溶液，然后采用离子交换色谱对伊特卡肽溶液进行换盐纯化，纳滤脱盐，冻干，得到伊特卡肽。树脂分离柱中填料为D301大孔树脂和磺酸修饰磁性二氧化硅微球，树脂分离柱中磁性二氧化硅微球的使用量为D301大孔树脂的20wt%，阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有盐酸根的盐溶液，含有盐酸根的盐溶液为氯化铵溶液和氯化钠溶液，pH为8.0，纳滤时的冲洗液采用体积分数为0.006%的盐酸。
阳离子交换色谱洗脱中：
流动相A：2.0g/L的NH4Cl溶液，pH为8.0；
流动相B：在2.0g/L的NH4Cl溶液含有浓度为2M的NaCl，pH为8.0；
洗脱梯度：在60 min的时间内流动相B 的使用量从0wt%-30wt%。
实施例6：
一种制备伊特卡肽的方法，
磁性二氧化硅微球的表面修饰：将磁性二氧化硅微球分散于乙醇溶液中，加入氨水，均匀分散后加入甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷，在70℃下搅拌反应12h，反应完成后，磁铁分离产物，依次用乙醇和水洗涤，干燥，得到烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球。乙醇溶液由乙醇和去离子水混合而成，乙醇溶液中含有80wt%的乙醇，磁性二氧化硅微球的使用量为乙醇溶液的0.4wt%，氨水的使用量为乙醇溶液的2wt%，甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷的使用量为磁性二氧化硅微球的90wt%。
对乙烯基苄胺修饰磁性二氧化硅微球的制备：磺酸修饰磁性二氧化硅微球的制备：将SDS和去离子水加入烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液中，氮气氛围下，加入丙烯酸甲酯和对乙烯基苄胺，然后加入交联剂二丙烯酸乙二醇酯，加入引发剂，在80℃下反应5h，冷却至室温，磁铁分离产物，依次用乙醇和水洗涤，干燥，得到磺酸修饰磁性二氧化硅微球。烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液由烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球和无水乙醇分散混合，烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液中含有0.8wt%的烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球，SDS的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的3wt%，去离子水的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球分散液的900wt%，丙烯酸甲酯的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的40wt%，对乙烯基苄胺的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的30wt%，交联剂二丙烯酸乙二醇酯的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的0.15wt%，引发剂为KPS，引发剂的使用量为烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球的0.5wt%。
伊特卡肽的纯化制备：将伊特卡粗肽溶液通过树脂分离柱吸附分离得到伊特卡肽溶液，然后采用离子交换色谱对伊特卡肽溶液进行换盐纯化，纳滤脱盐，冻干，得到伊特卡肽。树脂分离柱中填料为D301大孔树脂和烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球，树脂分离柱中磁性二氧化硅微球的使用量为D301大孔树脂的20wt%，阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有盐酸根的盐溶液，含有盐酸根的盐溶液为氯化铵溶液和氯化钠溶液，pH为8.0，纳滤时的冲洗液采用体积分数为0.006%的盐酸。
阳离子交换色谱洗脱中：
流动相A：2.0g/L的NH4Cl溶液，pH为8.0；
流动相B：在2.0g/L的NH4Cl溶液含有浓度为2M的NaCl，pH为8.0；
洗脱梯度：在60 min的时间内流动相B 的使用量从0wt%-30wt%。
试验例：
1.红外光谱表征
测试样品：实施例5中制备得到的磺酸修饰磁性二氧化硅微球。
采用红外光谱对测试样品进行表征。
本发明制备得到的磺酸修饰磁性二氧化硅微球的红外光谱如图1所示，其中，在3438cm-1处存在羟基的红外吸收峰，在2932cm-1处存在烷基吸收峰，在1713cm-1处存在羰基的红外吸收峰，在1700-1450cm-1之间存在苯环的红外吸收峰，1188cm-1和1042cm-1处存在磺酸基团的红外吸收峰，表明得到磺酸修饰磁性二氧化硅微球。
2.吸附性能测试
测试样品：实施例4制备得到的烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球，实施例5制备得到的磺酸修饰磁性二氧化硅微球，实施例6制备得到的对乙烯基苄胺修饰磁性二氧化硅微球。设置对照组，对照组为未经修饰的磁性二氧化硅微球。
采用去离子水配制考马斯亮蓝R-250溶液，然后将测试样品加入考马斯亮蓝R-250溶液中，室温下振荡1h，进行吸附，磁铁分离，上清液进行检测。考马斯亮蓝R-250溶液的浓度为1mg/mL，测试样品的使用量为考马斯亮蓝R-250溶液的0.5wt%。
本发明中使用的吸附剂的吸附性能测试结果如图2所示，其中，S4为实施例4，S5为实施例5，S6为实施例6，D为对照组，本发明使用的磁性二氧化硅微球对考马斯亮蓝R-250具有好的吸附性能，可以对磁性二氧化硅微球进行改性，在使用甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷对磁性二氧化硅微球进行修饰改性得到烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球，烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球对考马斯亮蓝R-250的吸附效果更好，进一步采用丙烯酸甲酯和对乙烯基苯磺酸及交联剂二丙烯酸乙二醇酯对烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球修饰改性得到磺酸修饰磁性二氧化硅微球，进一步改性形成的磺酸修饰磁性二氧化硅微球对考马斯亮蓝R-250具有更好的吸附效果，烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球还可以采用对乙烯基苄胺进行修饰改性，得到对乙烯基苄胺修饰磁性二氧化硅微球，对考马斯亮蓝R-250的吸附效果更好。
3.伊特卡肽纯度
测试方法：各实施例制备伊特卡肽的方法。
本发明通过将吸附剂与D301大孔树脂复配，用于伊特卡肽的纯化制备中，得到的伊特卡肽纯度如图3所示，其中，S1为实施例1，S2为实施例2，S3为实施例3，S4为实施例4，S5为实施例5，S6为实施例6，本发明通过将磁性二氧化硅微球或修饰改性后的磁性二氧化硅微球与D301大孔树脂复配，用以吸附除去伊特卡肽粗液中的杂质，并经后续纯化处理制备得到高纯度的伊特卡肽，将磁性二氧化硅微球与D301大孔树脂复配的方法中，得到的伊特卡肽的纯度在90%以上，但仍有较大杂质的残留，而通过使用甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷对磁性二氧化硅微球进行修饰改性得到烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球，烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球与D301大孔树脂复配使用的方法对伊特卡肽的纯化效果更好，进一步采用丙烯酸甲酯和对乙烯基苯磺酸及交联剂二丙烯酸乙二醇酯对烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球修饰改性得到磺酸修饰磁性二氧化硅微球，进一步改性形成的磺酸修饰磁性二氧化硅微球与D301大孔树脂复配使用的方法对伊特卡肽的纯化效果更好，烯硅烷修饰磁性二氧化硅微球还可以采用对乙烯基苄胺进行修饰改性，得到对乙烯基苄胺修饰磁性二氧化硅微球与D301大孔树脂复配使用的方法对伊特卡肽的纯化效果更好。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
Claims (8)
1.一种制备伊特卡肽的方法，包括：将伊特卡粗肽溶液通过树脂分离柱吸附分离得到伊特卡肽溶液，然后采用离子交换色谱对伊特卡肽溶液进行换盐纯化，制备得到伊特卡肽；所述树脂分离柱中的填料为大孔树脂和磁性二氧化硅微球或修饰改性的磁性二氧化硅微球；所述修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷基团或对乙烯基苯磺酸基团或对乙烯基苄胺基团。
2.根据权利要求1所述的一种制备伊特卡肽的方法，其特征是：所述树脂分离柱中磁性二氧化硅微球的使用量为大孔树脂的5-25wt%；或，修饰改性的磁性二氧化硅微球的使用量为大孔树脂的5-25wt%。
3.根据权利要求1所述的一种制备伊特卡肽的方法，其特征是：所述阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有盐酸根或硫酸根或醋酸根的盐溶液。
4.根据权利要求1所述的一种制备伊特卡肽的方法，其特征是：所述纳滤中使用的冲洗液为盐酸溶液或硫酸溶液或醋酸溶液。
5.根据权利要求4所述的一种制备伊特卡肽的方法，其特征是：所述盐酸溶液中含有体积分数为0.001%-0.01%的盐酸；或，硫酸溶液中含有体积分数为0.001%-0.01%的硫酸；或，醋酸溶液中含有体积分数为0.1%-5%的醋酸。
6.根据权利要求1所述的一种制备伊特卡肽的方法，其特征是：所述修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷基团，由甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷与磁性二氧化硅微球反应生成。
7.根据权利要求1所述的一种制备伊特卡肽的方法，其特征是：所述修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有对乙烯基苯磺酸基团，由对乙烯基苯磺酸、丙烯酸甲酯、交联剂与磁性二氧化硅微球反应生成。
8.根据权利要求1所述的一种制备伊特卡肽的方法，其特征是：所述修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有对乙烯基苄胺基团，由对乙烯基苄胺、丙烯酸甲酯、交联剂与磁性二氧化硅微球反应生成。
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