CN108250274A - 米卡芬净高效分离纯化方法 - Google Patents

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张雁
张亚辉
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Abstract

本发明的目的在于提供一种米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：以硅胶或表面经过修饰的硅胶为固定相。将米卡芬净粗品溶液上样到色谱柱后，以有机溶剂和水溶液作为流动相洗脱吸附在填料上的米卡芬净，收集富含米卡芬净的溶液。该方法可使米卡芬净纯度达到98.5％以上，且过程简单，纯化效率高，适用于大规模工业化生产。

Description

米卡芬净高效分离纯化方法
技术领域
本发明属于米卡芬净的分离纯化与精制技术领域，特别提供一种米卡芬净的高效分离纯化方法。
背景技术
棘白菌素类药物是新型的半合成抗真菌药物，其通过抑制β-1,3-葡聚糖合成酶的活性从而抑制真菌细胞壁的合成，具有低毒性和良好的动力学性质。米卡芬净(Micafungin)是其中一种表现良好的棘白菌素类抗真菌药物，由日本藤泽公司开发，于2002年12月在日本上市，商品名为Fungusrd，2005年3月通过美国FDA认证，目前被批准用于治疗食道念珠菌感染、骨髓移植及ADS患者中性粒细胞减少症的预防和治疗。
米卡芬净的结构如下所示：
米卡芬净结构复杂，杂质与主峰较难分离，纯化工艺一般较为繁琐，因此开发出高效、稳定、简单的精致纯化工艺迫在眉睫。
发明内容
本发明提供一种米卡芬净的高效分离纯化方法，该方法的原理是依靠固定相表面吸附作用，混合物中的组分在固定相中、随着流动相移动的迁移速度不同，从而按一定次序由固定相中流出，依次接取目标馏分，根据馏分分析结果合并馏分即可得到目标组分。
本发明技术方案如下：
一种米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：采用液相色谱法分离纯化米卡芬净，以硅胶或表面经过修饰的硅胶为固定相，采用有机溶剂和水溶液混合为洗脱剂。
其中，用于修饰硅胶表面的基团为羟基，羧基，氨基，酰氨基，氰基，C1～C30脂肪烃中的一种、多种或多种组合。
填料表面极性基团键合相粒径5～100μm，孔径
所述有机溶剂为异丙醇，甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，正丁醇中的一种或多种。
所述水溶液中含有Na+、K+、H+、NH4 +中的一种或多种阳离子，含有Cl-、HCOO-、CH3COO-、F-、PO4 3-、ClO4 -、HCO3 -中的一种或多种阴离子。
作为优选的技术方案，有机溶剂/水溶液的体积比为5/95～95/5；洗脱液流速为0.1倍柱体积/min～0.8倍柱体积/min；分离纯化制备的馏分收集方式为从米卡芬净流出开始接到米卡芬净流完；上样量为0.1％～5％。
本发明所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于，具体步骤如下：
1)、称取适量米卡芬净粗品，用洗脱液配制成浓度为10mg/mL-1000mg/mL的上样液；
2)、采用色谱柱内径3～1000mm；所用填料是硅胶或表面经过修饰的硅胶，用于修饰硅胶表面的基团为羟基，羧基，氨基，酰氨基，氰基，C1～C30脂肪烃中的一种、多种或多种组合；填料表面极性基团键合相粒径5～100μm，孔径采用有机溶剂和缓冲盐混合液为洗脱剂；有机溶剂为异丙醇，甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，正丁醇中的一种或多种；水溶液中可含有Na+、K+、H+、NH4 +之一种或多种阳离子，可含有Cl-、HCOO-、CH3COO-、F-、PO4 3-、ClO4 -、HCO3 -之一种或多种阴离子；有机溶剂/水溶液的体积比为5/95～95/5；洗脱液流速为0.1倍柱体积/min～0.8倍柱体积/min；上样量为0.1％～5％，从米卡芬净流出开始接馏分到米卡芬净流完停止，纯化后脱酸或脱盐可以得到米卡芬净色谱纯度98％以上的产品。
本发明具有如下优点：
1.高选择性：针对当前米卡芬净纯化遇到的问题，本发明提出采用以硅胶或表面经过修饰的硅胶为固定相，很好地解决了米卡芬净化合物在其它填料上载样量不高，纯化后纯度不高的问题。
2.分离速度快：该方法纯化速度快，消耗溶剂量少，解决了大孔树脂在实验过程中，纯化速度较慢，产生废液较多，污染较大的问题，拥有很好的市场前景。
3.重复性好，操作简单可控，易实现自动化，过程稳定。
附图说明
图1纯化后米卡芬净纯品分析图。
具体实施方式
现结合实例，对本发明做进一步说明。实例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。
实施例1
米卡芬净粗品1g，溶于10mL初始流动相中，进样量10mL，上样量0.33％；使用C18链连接氰基的硅胶柱(柱规格50×250mm，粒径10μm，孔径填料质量300g)，流速80mL/min；上样结束后立即用82％甲醇-高氯酸铵溶液等度洗脱；紫外检测器，检测波长210nm，从目标峰出峰开始接馏分到峰回到基线停止，除盐后可以得到米卡芬净纯度99.1％以上。
实施例2
其它条件与实施例1相同，不同之处在于填料粒径是60μm，纯化后可以得到米卡芬净纯度98.5％以上的产品。
实施例3
其它条件与实施例1相同，不同之处在于使用表面修饰了C18链和羟基的硅胶柱(柱规格50×1000mm，粒径30μm，孔径填料质量1.2kg)，纯化后可以得到米卡芬净纯度99.1％以上的产品。
实施例4
其它条件与实施例1相同，不同之处在于使用C3硅胶柱(柱规格600×250mm，粒径15μm，孔径填料质量300g)，纯化后可以得到米卡芬净纯度98.9％以上的产品。
实施例5
其它条件与实施例1相同，不同之处在于取米卡芬净粗品3g，溶于30mL流动相中，进样量30mL，上样量1％，纯化后可以得到米卡芬净纯度98.9％以上的产品。
实施例6
米卡芬净粗品300g，溶于2.2L初始流动相中，进样量2.2L，上样量1.0％。使用C8链连接羟基的硅胶柱(柱规格500×250mm，粒径10μm，孔径填料质量30kg)，流速8L/min。上样后用83％乙腈-60mM乙酸铵等度洗脱；紫外检测器，检测波长210nm，从目标峰出峰开始接馏分到峰回到基线停止，纯化后脱盐可以得到米卡芬净纯度99.4％以上的产品。
实施例7
其它条件与实施例6相同，不同之处在于米卡芬净粗品380g，溶于10L乙醇-水中，进样量10L，上样量0.5％。使用表面修饰了C18硅胶柱(柱规格800×250mm，粒径15μm，孔径填料质量76kg)，流速18L/min。纯化后脱盐可以得到米卡芬净纯度99.1％以上的产品。
实施例8
其它条件与实施例6相同，不同之处在于使用表面修饰了C4和氨基的硅胶柱，纯化后可以得到米卡芬净纯度99％以上的产品。
实施例9
其它条件与实施例6相同，不同之处在于流速为6L/min，纯化后可以得到米卡芬净纯度99.1％以上的产品。
实施例10
其它条件与实施例6相同，不同之处在于称取米卡芬净粗品3.6g，溶于40mL初始流动相中，进样量40mL，上样量2％；使用表面修饰了C18和羧基的硅胶柱(柱规格50×150mm，粒径15μm，孔径填料质量180g)，流速80mL/min；纯化后可以得到米卡芬净色谱纯度99.3％以上的产品。
图1是纯化后米卡芬净纯品分析图，其中：
名称 保留时间 面积 ％面积
15.874 4191 0.09％
米卡芬净 16.475 4646476 99.78％
17.417 3725 0.08％
18.114 2328 0.05％
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：采用液相色谱法分离纯化米卡芬净，以硅胶或表面经过修饰的硅胶为固定相，采用有机溶剂和水溶液混合为洗脱剂。
2.按照权利要求1所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：用于修饰硅胶表面的基团为羟基，羧基，氨基，酰氨基，氰基，C1～C30脂肪烃中的一种、多种或多种组合。
3.按照权利要求1所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：填料粒径5～100μm，孔径
4.按照权利要求1所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：所述有机溶剂为异丙醇，甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，正丁醇中的一种或多种。
5.按照权利要求1所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：水溶液中含有Na+、K+、H+、NH4 +中的一种或多种阳离子，含有Cl-、HCOO-、CH3COO-、F-、PO4 3-、ClO4 -、HCO3 -中的一种或多种阴离子。
6.按照权利要求1所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：有机溶剂/水溶液的体积比为5/95～95/5。
7.按照权利要求1所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：洗脱液流速为0.1倍柱体积/min～0.8倍柱体积/min。
8.按照权利要求1所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：分离纯化制备的馏分收集方式为从米卡芬净流出开始接到米卡芬净流完。
9.按照权利要求1所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于：上样量为0.1％～5％。
10.按照权利要求1所述米卡芬净的高效分离纯化方法，其特征在于，具体步骤如下：
1)、称取适量米卡芬净粗品，用洗脱液配制成浓度为10mg/mL-1000mg/mL的上样液；
2)、采用色谱柱内径3～1000mm；所用填料是硅胶或表面经过修饰的硅胶，用于修饰硅胶表面的基团为羟基，羧基，氨基，酰氨基，氰基，C1～C30脂肪烃中的一种、多种或多种组合；填料表面极性基团键合相粒径5～100μm，孔径采用有机溶剂和水溶液混合液为洗脱剂；有机溶剂为异丙醇，甲醇，乙醇，乙腈，丙酮，正丁醇中的一种或多种；缓冲盐水溶液中含有Na+、K+、H+、NH4 +之一种或多种阳离子，含有Cl-、HCOO-、CH3COO-、F-、PO4 3-、ClO4 -、HCO3 -之一种或多种阴离子；有机溶剂/水溶液的体积比为5/95～95/5；洗脱液流速为0.1倍柱体积/min～0.8倍柱体积/min；上样量为0.1％～5％。
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