CN105566457A - 一种棘白菌素b母核的纯化方法 - Google Patents
一种棘白菌素b母核的纯化方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种棘白菌素B母核的纯化方法,具体采用C18反相制备柱分离纯化粗品,采用0.2%乙酸铵水溶液:甲醇=94:6(V/V)作为解吸液;并将收集的解吸液立即用盐酸溶液调节pH值至3.5~3.8之间;本发明提供的方法工艺简单、成本低、收率高,得到棘白菌素B母核的色谱纯度达99%,单杂小于0.1%。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学领域,具体涉及药物中间体的分离纯化方法,更进一步的涉及一种棘白菌素B母核的纯化方法。
背景技术
芬净类药物作为棘白菌素家族的重要成员,可以抑制真菌细胞壁β-(1→3)-葡聚糖合成,对于临床常见的念珠菌属及其他真菌有较强的抗菌活性。已上市的芬净类药物阿尼芬净和米卡芬净都是由各自的前体在酰基水解酶作用下得到母核,再经过化学修饰而得,因此,制备棘白菌素母核已经成为芬净类药物合成的关键步骤。
棘白菌素B母核由棘白菌素B在酰基水解酶作用下水解得到,结构式如下:
。
由于最终药物产品的效价是基于生产最终产品的中间体的纯度,因此提高生产过程中每一阶段的纯度是非常有必要的。最理想的情况是,尽可能在生产过程的最早阶段去除杂质。因此,作为阿尼芬净的合成母核,得到高纯度的棘白菌素B母核是非常有必要的。
目前制备棘白菌素B母核的方法均较难得到色谱纯度大于99%,单杂小于0.1%的高纯度棘白菌素B母核,因此,找到一种高效的、低成本的获得高纯度棘白菌素B母核的方法就很有必要。
发明内容
本发明的主要目的是为了解决阿尼芬净前体的纯化问题,为了达到上述目的,本发明提供了一种高纯度的阿尼芬净前体的分离纯化方法,该方法包括以下步骤:
将发酵液固液分离得到的粗品进行反相制备柱分离,所述的反相制备柱为C18柱,其柱料的粒径为8μm;所述反相制备柱上样方法为:用纯化水溶解样品,溶解后样品的浓度为80g/L~110g/L,优选100g/L,然后上样;收集制备液,得到色谱纯度达99%,单杂小于0.1%的高纯度棘白菌素B;
其中,所述反相制备柱的解析液为0.2%乙酸铵水溶液:甲醇=94:6(V/V);
所述收集的制备液立即用5%盐酸溶液调节pH值至3.5~3.8之间(逐滴滴加)。
本发明提供的方法工艺简单、成本低、收率高,得到棘白菌素B母核的色谱纯度达99%,单杂小于0.1%
附图说明:
图1显示棘白菌素B的HPLC谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行更进一步详细说明,但不是对本发明的限定。另外,除非另有说明,在本说明书中,一般操作均是在室温条件下进行的,室温是指25-30℃。本发明所用到的棘白菌素B母核粗品可参考“EchinocandinB微生物转化工艺优化”(中国医药工业杂志,2012.43(5):333-336)公开的方法制备获得。
实施例
C18反相柱填料(日本大曹公司)规格:Size:8μm。
C18柱规格:填料装量:200g;Size:41.4mm×250mm。
将1g棘白菌素B母核粗品溶解于10ml纯化水中,,过滤得10ml滤液,对该滤液进行HPLC分析,棘白菌素B母核的含量为0.72g,用0.2%乙酸铵水溶液:甲醇=94:6(V/V)溶液平衡柱子。上样完毕,用0.2%乙酸铵水溶液:甲醇=94:6(V/V)溶液进行洗脱,并通过UV检测器监测,当棘白菌素B母核峰峰高上升到0.6AU开始收集,当棘白菌素B母核峰峰高下降到0.8AU停止收集,将收集的制备液立即用5%盐酸溶液调节pH值至3.5~3.8之间(逐滴滴加),合并收集液,得棘白菌素B母核高纯度收集液284ml,对该收集液进行HPLC分析,棘白菌素B母核的含量为0.45g,HPLC纯度99.8%,单杂小于0.1%,收率62.5%(HPLC色谱图见附图1)。
Claims (3)
1.一种棘白菌素B的纯化方法,其特征在于包括如下步骤:
将发酵液固液分离得到的粗品进行反相制备柱分离,所述的反相制备柱为C18柱,其柱料的粒径为8μm;所述反相制备柱上样方法为:用纯化水溶解样品,溶解后样品的浓度为80g/L~110g/L,然后上样;收集制备液,得到色谱纯度达99%,单杂小于0.1%的高纯度棘白菌素B。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述反相制备柱的解析液为0.2%乙酸铵水溶液:甲醇=94:6(V/V)。
3.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,将收集的制备液立即用5%盐酸溶液调节pH值至3.5~3.8之间。
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CN107759668A (zh) * | 2017-05-25 | 2018-03-06 | 博瑞生物医药(苏州)股份有限公司 | 一种高纯度棘白菌素b母核或其盐纯化方法 |
CN108250274A (zh) * | 2016-12-28 | 2018-07-06 | 浙江华谱新创科技有限公司 | 米卡芬净高效分离纯化方法 |
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2014
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